CN104186919A

CN104186919A - 一种来源火龙果的多肽及其应用、制备方法

Info

Publication number: CN104186919A
Application number: CN201410425577.7A
Authority: CN
Inventors: 叶亚东; 霍世元; 张娟; 全利; 陶露
Original assignee: CHANGZHOU ADAM BIOTECH Inc
Current assignee: CHANGZHOU ADAM BIOTECH Inc
Priority date: 2014-08-26
Filing date: 2014-08-26
Publication date: 2014-12-10
Anticipated expiration: 2034-08-26
Also published as: CN104186919B

Abstract

本发明涉及火龙果再加工领域，具体涉及一种多肽及其从火龙果中提取植物性白蛋白的方法；一种多肽ATCRTPTTLKLGGEERRRADTTGKLAA。所述的多肽在制备抗动脉硬化药物中的应用。本发明首次采用新提取工艺获得火龙果的提取白蛋白，在白蛋白混合物中分离得到多肽。该多肽具有抑制动脉硬化功能。拓宽了火龙果深加工，为进一步开发保健品或药品提供原料。

Description

一种来源火龙果的多肽及其应用、制备方法

技术领域

本发明涉及火龙果再加工领域，具体涉及一种多肽及其从火龙果中提取植物性白蛋白的方法

背景技术

火龙果是一种低能量的水果，富含水溶性膳食纤维，具有减肥、降低胆固醇、预防便秘、大肠癌等功效，还有丰富的纤维，能够预防便秘。火龙果中含有一般蔬果中较少有的植物性白蛋白，这种白蛋白会与人体内的重金属离子结合而起到解毒的作用。它富含抗氧化剂维生素C，能美白皮肤防黑斑。除此之外，火龙果中铁的含量也非常丰富。

它含有一般植物少有的植物性白蛋白及花青素、丰富的维生素和水溶性膳食纤维。白蛋白是具黏性、胶质性的物质，对重金属中毒具有解毒的功效。由于工业废水、废弃物处理回收未获重视，以致各种水资源受到了严重重金属污染，除了直接饮用水中毒外，人类摄人食品重金属含量超标也易中毒。而白蛋白在人体内遇到重金属离子时，会自动与重金属离子结合，由排泄系统排除体外，起到解毒的作用。因此，食用含白蛋白丰富的火龙果，可避免重金属离子的吸收而中毒。白蛋白对胃壁还有保护作用。而且火龙果花、果、茎中的白蛋白十分优良，稳定性极佳。

发明内容

发明目的

本发明提供一种来源于火龙果的多肽，该多肽是从白蛋白中分离得到，该多肽具有增加免疫力，促进胃肠蠕动，有望开发成保健品或药物。

技术方案

一种多肽ATCRTPTTLKLGGEERRRADTTGKLAA。

一种多肽在制备抗动脉硬化药物中的应用。

本发明提供一种制备火龙果白蛋白，及纯化工艺：

将火龙果的皮和果肉分离，然后用滤网过滤果肉溶液中的果籽。果籽用低温粉碎器破碎，然后提取总蛋白。在低温条件下，利用金属螯合原理，从总蛋白中提取白蛋白，然后纯化。

具体方法如下：

1、在环境温度为16℃的空间进行。在将火龙果剥皮之后，果肉用低温搅拌器破碎，按照1:10加水；将火龙果脱皮，火龙果皮用来提取花青素。火龙果的果肉捣烂，然后用滤网将火龙果的籽从果肉中分离出来。去籽的果肉，拿去做果浆，然后生产火龙果饮料。火龙果的籽，在低温下破碎，分离，加水提取总蛋白。

2、总蛋白溶液用4倍体积乙酸-乙酸钠缓冲液稀释，0.1mol/L NaOH调整蛋白稀释液pH至4.5。

3、室温下用电磁搅拌器边搅拌边缓慢滴加辛酸(加入量为1L蛋白稀释液加25ml)，滴加完后继续搅拌30min。

4、离心(10000转/分，20分钟),收集上清液，弃去沉淀，上清液用滤纸过滤除去悬浮物，量体积。

5、按照10％体积加入10×磷酸盐-NaCl缓冲液，用5mol/LNaOH调pH至7.4。

6、上清液4℃预冷10min，测量溶液总体积，在4℃按277g/L缓慢加入硫酸铵粉末(终浓度达到45％饱和度)，边加边搅拌，加完后继续搅拌30min。

7、离心(5000转/分，15分钟),弃去上清液，收集沉淀。

8、沉淀用少量透析液溶解(为原蛋白体积的1/10)，透析并更换两次透析液。

9、透析后的蛋白溶液离心(5000转/分，20分钟),上清液于-20℃保存。

10、白蛋白从蛋白中的分离-固定金属亲和色谱制备；利用磷酸盐与金属离子柱中的金属离子螯合，然后与总蛋白中的白蛋白结合，然后利用洗脱液将白蛋白洗脱，(离子柱可以重复使用)。洗脱后的白蛋白进行纯化。半制备RP-HPLC分离纯化，乙腈:水(20:80)得到的产物冻干后，即为多肽。应用上述方法提取的多肽，经过质谱鉴定，序列为ATCRTPTTLKLGGEERRRADTTGKLAA，该序列为全新序列。

有益效果：

1、本发明首次采用新提取工艺获得火龙果的提取白蛋白，在白蛋白混合物中分离得到多肽。该多肽具有抑制动脉硬化功能。拓宽了火龙果深加工，为进一步开发保健品或药品提供原料。

2、丰产的火龙果每亩产量在1吨-2吨之间，有20％左右为小果和次果，这些次果，销路很差，如何解决这些次果的销路，提高产品附加值，一直困扰果农。如果对这些次果，首先提取植物性白蛋白，然后分离果肉和果皮。果皮可以提取花青素和天然色素，果肉可以制备果酱和饮料。这样综合利用，将大大提高红心火龙果的价值，增加农民收入。

具体实施方式

实施例1

7、离心(5000转/分，15分钟),弃去上清液，收集沉淀。

本发明涉及多肽也可以委托公司合成。

实施例2

多肽对小鼠动脉粥样硬化模型的影响

建立小鼠动脉粥样硬化模型。雄性8周龄的C57BL/6J小鼠40只，随机分为4组，分别为：A组为空白对照组：普通饲料喂养；B组为模型对照组：造模+高脂饲料喂养；C组为药物干预组：造模+高脂饲料+多肽(10mg/kg/d)；D为阳性药干预组：造模+高脂饲料+瑞舒伐他汀片(10mg/kg/d)。连续12周。A组小鼠饲料为普通饲料，B、C、D组小鼠用高脂高胆固醇饲料(含15％猪油+0.25％胆固醇)喂养，以加速动脉粥样硬化模型的形成。12周后，记录小鼠体重，检测多肽对血清胆固醇的影响：血清总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(tryglyeride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,HDL-C)的水平；，检测小鼠主动脉粥样硬化形成情况：对小鼠主动脉大体和主动脉根部冰冻切片行油红O染色，对动脉粥样斑块面积进行定量。

结果：各组实验小鼠实验期间体重都有增长趋势。随着喂养时间的变化，高脂饮食喂养组的体重增长较正常饮食组快(P<0.05，见表1)。多肽组小鼠体重增长与正常饮食组相当(P>0.05)，与模型组相比体重较轻(P<0.05)。多肽组与高脂高胆固醇喂养的模型小鼠组相比，TG、TC、HDL-C、LDL-C水平显著降低(P<0.01，见表2)，动脉粥样斑块面积显著性减小(P<0.01，见表3)，与模型对照组比较差异均有统计学意义。

表1 多肽对小鼠动脉粥样硬化模型小鼠体重的影响

*p<0.05，**p<0.01与模型组相比

表2 多肽对小鼠动脉粥样硬化模型小鼠胆固醇的影响

*p<0.05，**p<0.01与模型组相比

表3 凝血酶抑制多肽对小鼠动脉粥样硬化模型小鼠动脉粥样硬化面积的影响

*p<0.05，**p<0.01与模型组相比

结论：多肽对小鼠动脉粥样硬化具有治疗作用。

SEQUENCE LISTING

<110> 常州亚当生物技术有限公司

<120> 一种来源火龙果的多肽及其应用、制备方法

<130>

<160> 1

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 27

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 1

Ala Thr Cys Arg Thr Pro Thr Thr Leu Lys Leu Gly Gly Glu Glu Arg

1 5 10 15

Arg Arg Ala Asp Thr Thr Gly Lys Leu Ala Ala

20 25

Claims

1.一种多肽，其特征在于其氨基酸序列为ATCRTPTTLKLGGEERRRADTTGKLAA。

2.一种如权利要1所述的多肽在制备抗动脉硬化药物中的应用。

3.如权利要求1所述的多肽与药学药用辅料形成制剂。

4.如权利要求3所述的多肽与药学药用辅料形成制剂，其特征在于所述的辅料有蔗糖，谷氨酸，甘露醇。