CN104186322B - 一种千年健的组织培养基及其增殖方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种千年健的组织培养基以及其增殖方法，包括不同培养时期的四种培养基：（1）诱导培养基，（2）成苗培养基，（3）叶片培养基，（4）叶柄培养基，这四种培养基均以MS为基本培养基，附加蔗糖、琼脂等物质，pH5.8。经过上述四种培养基的接种即可实现试管苗快速大量的增殖效果，为快速而优质地培养出千年健苗打好坚实的基础。应用本培养基组培，再生植株能保持母本优良性状，提高幼苗繁殖速度，扩大繁殖数量，并能有效利用种子、缩短育苗周期，满足社会需求。
Description
技术领域
本发明涉及以千年健块茎为外植体，进行组织培养的培养基及增殖方法。
背景技术
千年健喜温暖、湿润、郁闭，怕寒冷、干旱和强光直射，是比较典型的喜阴植物。千年健生长缓慢，在生长期间随地上茎的增高，根茎也增长和增粗，并不断从根茎节上抽出新芽，长出新的分株，形成植株丛。
正是由于千年健需要的自然生长环境较为苛刻，而且生长速度又比较缓慢，明显限制了千年健的开发利用。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种千年健的组培培养基及其增殖方法。
本发明所要解决的技术问题通过以下技术方案予以实现：
一种千年健的组织培养基，根据其增值需要包括了四种培养基，各种培养基的原料及其附加量分别是：（一）诱导培养基：以MS为基本培养基，附加蔗糖20～30g/L、琼脂6.5～8.5g/L、6-BA0.5～2.0mg/L、2,4-D0.05～0.1mg/L，调节培养基的pH值至5.8；（二）成苗培养基：以MS为基本培养基，稀释一倍，然后附加蔗糖20～30g/L、琼脂6.5～8.5g/L、6-BA0.5～2.0mg/L、2,4-D0.05～0.1mg/L、质量分数为0.2%—0.3%的符合HG/T3491规定的活性炭粉，调节培养基的pH值至5.8；（三）叶片培养基：以MS为基本培养基，附加蔗糖20～30g/L、琼脂6.5～8.5g/L、6-BA0.3～1.5mg/L、NAA0.1～0.2mg/L，调节培养基的pH值至5.8；（四）叶柄培养基：以MS为基本培养基，附加蔗糖20～30g/L，琼脂6.5～8.0g/L、NAA0.2～1.0mg/L，调节培养基的pH值至5.8。其中，2,4—D、NAA等不溶于水的药品先用少量95%乙醇溶解，如溶解不完全应加热促进溶解然后加水定容，6—BA先溶于少量1mol/L的盐酸中，再加水定容。所用水应符合GB/T6682标准。关于培养基的配制方法均为实验室常见操作。
结合以上组织培养基的使用，配合以下步骤，即可实现快速增殖的效果：
块茎期：将外植体在无菌条件下接种到MS培养基后，置于25℃±2℃，光照强度1500~2000Lx、光照时间为10h/d的环境中；
牙尖期：块茎顶芽长到1cm时，切下芽尖接种到诱导培养基培养，芽尖可以反复切取直至不能长出新芽尖或已经污染，再将接种好的培养瓶放置在条件适宜的培养架上培养45—55d，形成丛生芽和愈伤组织；
丛生芽+愈伤组织期：丛生芽和愈伤组织转接到成苗培养基上培养25—30天，形成试管苗；
试管苗增殖期：将试管苗浓绿厚大的叶片切成0.5cm×0.5cm的切片，叶面朝上接种于叶片培养基上培养25—30d，回到步骤，将试管苗生长健壮的叶柄切成1cm长小段接种于叶柄培养基上培养45—55d，回到步骤，再将剪掉叶片和叶柄的无菌小块茎转接到成苗培养基上培养27—33d；回到步骤；
炼苗移栽期：经过数次、步骤的循环增殖，将获得的大量试管苗打开瓶盖在自然光室温下炼苗；
驯化移栽期：将经过炼苗过程的组培苗用自来水洗净后，用遮阳率为75%的遮阳网遮阳，在温度25℃左右，相对湿度85%条件下移栽至土壤种植，用与MS浓度相当的大量元素配制营养液稀释10倍进行喷施。
本发明的有益效果是：
克服了千年健自然生长速度缓慢，限制性因子较多的劣势。可以快速大量的增殖，人工培育，给予适合的生长环境，快速生长，克服自然限制，增加千年健的产量。
具体实施方式：
本发明下面结合实施例作进一步详细阐述：一种千年健的组织培养基，根据其增值需要包括了四种培养基，各种培养基的原料及其附加量分别是：（一）诱导培养基：以MS为基本培养基，附加蔗糖25g/L、琼脂7.5g/L、6-BA1.2mg/L、2,4-D0.07mg/L，调节培养基的pH值至5.8；（二）成苗培养基：以MS为基本培养基，稀释一倍，然后附加蔗糖25g/L、琼脂7g/L、6-BA1.3mg/L、2,4-D0.06mg/L、质量分数为0.2%—0.3%的符合HG/T3491规定的活性炭粉，调节培养基的pH值至5.8；（三）叶片培养基：以MS为基本培养基，附加蔗糖25g/L、琼脂7g/L、6-BA0.8mg/L、NAA0.15mg/L，调节培养基的pH值至5.8；（四）叶柄培养基：以MS为基本培养基，附加蔗糖27g/L，琼脂7g/L、NAA0.6mg/L，调节培养基的pH值至5.8。其中，2,4—D、NAA等不溶于水的药品先用少量95%乙醇溶解，如溶解不完全应加热促进溶解然后加水定容，6—BA先溶于少量1mol/L的盐酸中，再加水定容。所用水应符合GB/T6682标准pH的调节使用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCl,关于培养基的配制方法均为实验室常见操作。
结合以上组织培养基的使用，配合以下步骤，即可实现快速增殖的效果：
块茎期：将外植体在无菌条件下接种到MS培养基后，置于25℃±2℃，光照强度1500~2000Lx、光照时间为10h/d的环境中；
牙尖期：块茎顶芽长到1cm时，切下芽尖接种到诱导培养基培养，芽尖可以反复切取直至不能长出新芽尖或已经污染，再将接种好的培养瓶放置在条件适宜的培养架上培养45—55d，形成丛生芽和愈伤组织；
丛生芽+愈伤组织期：丛生芽和愈伤组织转接到成苗培养基上培养25—30天，形成试管苗；
试管苗增殖期：将试管苗浓绿厚大的叶片切成0.5cm×0.5cm的切片，叶面朝上接种于叶片培养基上培养25—30d，回到步骤，将试管苗生长健壮的叶柄切成1cm长小段接种于叶柄培养基上培养45—55d，回到步骤，再将剪掉叶片和叶柄的无菌小块茎转接到成苗培养基上培养27—33d；回到步骤；
炼苗移栽期：经过数次、步骤的循环增殖，将获得的大量试管苗打开瓶盖在自然光室温下炼苗；
驯化移栽期：将经过炼苗过程的组培苗用自来水洗净后，用遮阳率为75%的遮阳网遮阳，在温度25℃左右，相对湿度85%条件下移栽至土壤种植，用与MS浓度相当的大量元素配制营养液稀释10倍进行喷施。
有关于组织培养过程中的一些操作和注意事项均属于普通实验操作，故不做赘叙。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本发明的实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解，可在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。
Claims (2)
1.一种千年健的组织培养基，其特征在于根据其增值需要包括了四种培养基，各种培养基的原料及其附加量分别是：诱导培养基：以MS为基本培养基，附加蔗糖20～30g/L、琼脂6.5～8.5g/L、6-BA0.5～2.0mg/L、2,4-D0.05～0.1mg/L，调节培养基的pH值至5.8；成苗培养基：以MS为基本培养基，稀释一倍，然后附加蔗糖20～30g/L、琼脂6.5～8.5g/L、6-BA0.5～2.0mg/L、2,4-D0.05～0.1mg/L、质量分数为0.2%—0.3%的符合HG/T3491规定的活性炭粉，调节培养基的pH值至5.8；叶片培养基：以MS为基本培养基，附加蔗糖20～30g/L、琼脂6.5～8.5g/L、6-BA0.3～1.5mg/L、NAA0.1～0.2mg/L，调节培养基的pH值至5.8；叶柄培养基：以MS为基本培养基，附加蔗糖20～30g/L，琼脂6.5～8.0g/L、NAA0.2～1.0mg/L，调节培养基的pH值至5.8。
2.一种采用权利要求1所述的千年健的组织培养基进行的增殖方法，其特征是经过以下步骤：
①块茎期：将外植体在无菌条件下接种到MS培养基后，置于25℃±2℃，光照强度1500~2000Lx、光照时间为10h/d的环境中；
②牙尖期：块茎顶芽长到1cm时，切下芽尖接种到诱导培养基培养，芽尖反复切取直至不能长出新芽尖或已经污染，再将接种好的培养瓶放置在条件适宜的培养架上培养45—55d，形成丛生芽和愈伤组织；
③丛生芽+愈伤组织期：丛生芽和愈伤组织转接到成苗培养基上培养25—30天，形成试管苗；
④试管苗增殖期：将试管苗浓绿厚大的叶片切成0.5cm×0.5cm的切片，叶面朝上接种于叶片培养基上培养25—30d，回到步骤③，将试管苗生长健壮的叶柄切成1cm长小段接种于叶柄培养基上培养45—55d，回到步骤③，再将剪掉叶片和叶柄的无菌小块茎转接到成苗培养基上培养27—33d；回到步骤③；
⑤炼苗移栽期：经过数次③、④步骤的循环增殖，将获得的大量试管苗打开瓶盖在自然光室温下炼苗；
⑥驯化移栽期：将经过炼苗过程的组培苗用自来水洗净后，用遮阳率为75%的遮阳网遮阳，在温度25℃，相对湿度85%条件下移栽至土壤种植，用与MS浓度相当的大量元素配制营养液稀释10倍进行喷施。
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