CN103583372B - 杜仲离体快速繁殖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种杜仲离体快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：将外植体放置于含有生长素或者类生长素的MS培养基上培养形成不定根；将不定根切成切段，接种在含有植物生长调节剂的MS培养基上形成不定芽；将形成成熟叶片的不定芽培养在含有类生长素的1/2MS培养基上诱导生根形成具有根及功能叶片的试管苗；驯化试管苗；移栽定植。本发明的有益之处在于：利用植物离体培养技术，以杜仲离体培养的子叶、愈伤组织等多种外植体所形成的不定根为材料，经过诱导高效获得不定芽，生根后形成试管苗移栽大田获得无性繁殖系；该方法提供了一种杜仲离体快速繁殖的新途径，不仅繁殖速度快、效率高，而且杜仲离体材料利用效率得到了提高。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物种苗的繁殖方法，具体涉及一种杜仲离体快速繁殖的方法，属于无性繁殖技术领域。
背景技术
杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)是我国特有的第三纪孑遗珍贵药用树种，其树皮即为我国传统的名贵中药——杜仲，为国家二级保护植物。目前杜仲以种子繁殖为主，但种子发芽率不高，且其实生后代个体间差异较大，有效药用成分和杜仲胶含量变化显著，不利于新选育出杜仲优系的推广。
植物离体培养技术、组织培养技术、离体快速繁殖，既可以缩短育种时间，又可用于保存材料，并可在短时间内获得大量遗传性状一致的试管苗，不仅有利于优良品种的推广，保证药用及工业原料供应，还对保护野生种质资源具有重要意义。
杜仲离体快速繁殖方法主要是利用各种外植体，先诱导形成不定芽，再诱导形成不定根，最后形成试管苗，所使用的外植体有叶片、叶柄、腋芽、胚轴、带芽茎段、茎尖、子叶。
然而，现有的方法存在着：离体材料利用效率不高和离体繁殖速度慢、效率低的问题。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种杜仲离体快速繁殖的方法，该方法以不定根为材料，诱导形成不定芽，从而获得试管苗，其不仅繁殖速度快、效率高，而且离体材料利用效率高。
为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
一种杜仲离体快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)、获取不定根：将外植体放置于含有生长素或者类生长素的MS培养基上进行培养，形成不定根，培养直至不定根的长度达到6-10cm；
(2)、诱导生成不定芽：将形成的不定根切成长1㎝的切段，接种在含有植物生长调节剂的MS培养基上，培养至切段形成不定芽；
(3)、诱导生根获得试管苗：将形成2-3枚成熟叶片的不定芽培养在含有类生长素的1/2MS培养基上，诱导生根，形成具有根及功能叶片的试管苗；
(4)、移栽定植：试管苗形成新叶新根达到移栽要求后，进行移栽定植。
前述的杜仲离体快速繁殖的方法，其特征在于，还包括驯化试管苗的步骤：当试管苗的根长达到2-5cm时，将瓶口打开炼苗，幼苗叶色变深后，将试管苗移栽到培养基质中培养，温度保持在25℃-30℃，湿度保持在80％-100％，当试管苗形成新叶新根达到移栽要求时，进行移栽定植。
前述的杜仲离体快速繁殖的方法，其特征在于，前述培养基质为沙子、蛭石、土按照质量比1∶2∶1的比例混合而成。
前述的杜仲离体快速繁殖的方法，其特征在于，在步骤(2)中，前述植物生长调节剂为TDZ。
前述的杜仲离体快速繁殖的方法，其特征在于，在步骤(2)中，前述MS培养基中还添加有萘乙酸。
本发明的有益之处在于：利用植物离体培养技术，以杜仲离体培养的子叶、愈伤组织等多种外植体所形成的不定根为材料，经过诱导高效获得不定芽，生根后形成试管苗移栽大田获得无性繁殖系；该方法提供了一种杜仲离体快速繁殖的新途径，不仅繁殖速度快、效率高，而且杜仲离体材料利用效率得到了提高，可以用于杜仲新品系选育及优良品种推广。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作具体的介绍。
实施例1以子叶形成的不定根为材料
1、获取不定根：杜仲果实在流动的水中冲泡48小时，剥掉果皮，清洗干净后在超净工作台中进行常规消毒，然后剥取种胚，接种在MS基本培养基上，培养两周后得到无菌籽苗。切取籽苗的子叶，将子叶切成5mm左右的切段；子叶切段水平放置在MS+萘乙酸(缩写为NAA，是类生长素的一种)培养基的表面，每升MS培养基中含有0.2mg NAA，轻轻按压使子叶与培养基充分接触；2周后开始形成不定根，8周左右，白色的不定根最长可达6-10㎝。
2、诱导生成不定芽：将形成的不定根切成长1㎝的切段，接种在含有植物生长调节剂的MS培养基上。植物生长调节剂为TDZ，每升MS培养基中含有1mg TDZ，其是一种新型的植物生长调节剂，具有很强的细胞分裂素活性(CTK)，它的CTK活性要比一般CTK高几十倍至几百倍，研究表明：它可以促进植物芽的再生和繁殖，打破芽的休眠，促进种子萌发，促进愈伤组织生长，延缓植物衰老等，并且可以通过对其他的植物激素和生理活性物质的作用来调节植物的生长发育过程，是一个作用力很强的植物生长调节剂。切段培养至30天左右时，形成了不定芽。
3、诱导生根获得试管苗：将形成2-3枚成熟叶片的不定芽培养在1/2MS+吲哚丁酸(缩写为IBA，是类生长素的一种)的培养基上，每升培养基中含有1.5mg IBA，诱导生根，形成具有根及功能叶片的试管苗。
4、驯化试管苗：当试管苗的根长达到2-5cm时，将瓶口打开炼苗，幼苗叶色变深后，将试管苗移栽到培养基质中培养，培养基质为沙子、蛭石、土按照质量比1∶2∶1的比例混合而成，温度保持在25℃-30℃，湿度保持在80％-100％。根据光照情况利用遮荫网进行遮荫。
5、移栽定植：两个月后，试管苗形成的新叶新根达到了移栽要求，移栽定植。
实施例2以愈伤组织形成的不定根为材料
1、获取不定根：将愈伤组织接种在1/2MS+吲哚乙酸(缩写为IAA，是生长素的一种)的培养基的表面，每升培养基中含有1mg IAA，轻轻按压使愈伤组织与培养基充分接触；1周后开始形成不定根，7周左右，不定根最长可达6-8㎝。
2、诱导生成不定芽：将形成的不定根切成长1㎝的切段，接种在含有植物生长调节剂的MS培养基上。植物生长调节剂为TDZ，每升MS培养基中含有2mg TDZ。同时，每升MS培养基中还添加有0.1mg的NAA。培养10天左右，切段两端开始形成愈伤组织，逐渐向中间扩展。30天左右，切段形成了不定芽。
3、诱导生根获得试管苗：将形成2-3枚成熟叶片的不定芽培养在1/2MS+NAA的培养基上，每升培养基中含有0.2mg NAA，诱导生根，形成具有根及功能叶片的试管苗。
4、驯化试管苗：当试管苗的根长达到2-5cm时，将瓶口打开炼苗，幼苗叶色变深后，将试管苗移栽到培养基质中培养，培养基质为沙子、蛭石、土按照质量比1∶2∶1的比例混合而成，温度保持在25℃-30℃，湿度保持在80％-100％。根据光照情况利用遮荫网进行遮荫。
5、移栽定植：一个月后，试管苗形成的新叶新根达到了移栽要求，移栽定植。
需要说明的是，培养基中所添加的生长素、类生长素、植物生长调节剂并不局限于实施例中给出的具体物质，其他种类的生长素、类生长素、植物生长调节剂均可实现本发明，只不过是效果上可能会稍有差别。
综上所述，本发明的杜仲离体快速繁殖的方法，利用植物离体培养技术，以杜仲离体培养的子叶、愈伤组织等多种外植体所形成的不定根为材料，经过诱导高效获得不定芽，生根后形成试管苗移栽大田获得无性繁殖系。
该方法提供了一种杜仲离体快速繁殖的新途径，不仅繁殖速度快、效率高，而且杜仲离体材料利用效率得到了提高。
需要说明的是，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。
Claims (4)
1.杜仲离体快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)、获取不定根：将子叶放置于含有0.2mg/L NAA的MS培养基上进行培养，或者将愈伤组织放置于含有1mg/L IAA的1/2MS培养基上进行培养，形成不定根，培养直至不定根的长度达到6-10cm；
(2)、诱导生成不定芽：将形成的不定根切成长1㎝的切段，接种在含有植物生长调节剂TDZ的MS培养基上，每升MS培养基中含有1-2mg TDZ，培养至切段形成不定芽；
(3)、诱导生根获得试管苗：将形成2-3枚成熟叶片的不定芽培养在含有NAA或IBA的1/2MS培养基上，诱导生根，形成具有根及功能叶片的试管苗；
(4)、移栽定植：试管苗形成新叶新根达到移栽要求后，进行移栽定植。
2.根据权利要求1所述的杜仲离体快速繁殖的方法，其特征在于，还包括驯化试管苗的步骤：当试管苗的根长达到2-5cm时，将瓶口打开炼苗，幼苗叶色变深后，将试管苗移栽到培养基质中培养，温度保持在25℃-30℃，湿度保持在80％-100％，当试管苗形成新叶新根达到移栽要求时，进行移栽定植。
3.根据权利要求2所述的杜仲离体快速繁殖的方法，其特征在于，所述培养基质为沙子、蛭石、土按照质量比1∶2∶1的比例混合而成。
4.根据权利要求1所述的杜仲离体快速繁殖的方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述MS培养基中还添加有萘乙酸，每升MS培养基中含有2mg TDZ、0.1mg NAA。
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