CN104169416A

CN104169416A - 脂肪酸的酶促ω氧化和ω胺化

Info

Publication number: CN104169416A
Application number: CN201380015945.4A
Authority: CN
Inventors: S.沙费尔; M.豪贝格; M.韦泽尔; H-G.亨内曼; J.C.普费弗; T.哈斯; H.赫格
Original assignee: 赢创工业集团股份有限公司
Current assignee: Evonik Operations GmbH
Priority date: 2012-03-12
Filing date: 2013-03-12
Publication date: 2014-11-26
Also published as: SG11201405689TA; EP2639308A1; CA2866215A1; BR112014022460A2; US20150111253A1; HK1201870A1; WO2013135650A1; US9611489B2; JP2015509730A; SG10201607565QA

Abstract

本发明涉及用于氧化式（I）H₃C–(CH₂)_n–COOR的脂肪酸或其酯的方法，其中R选自H、甲基、乙基、丙基和丁基，其中n是0-30，优选6-24，所述方法包括通过在分子氧和NAD(P)H和全细胞催化剂存在的情况下与CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶接触来氧化所述脂肪酸或其酯的步骤，所述全细胞催化剂表达重组的CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶、重组的醇脱氢酶、重组的氨基转移酶和任选一种或多于一种选自以下的重组酶：丙氨酸脱氢酶、铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶，还涉及所述全细胞催化剂用于氧化脂肪酸或其酯的用途。

Description

脂肪酸的酶促ω氧化和ω胺化

本发明涉及氧化脂肪酸或其酯的方法，

包括通过在分子氧和NAD(P)H和全细胞催化剂存在的情况下通过与CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶接触来氧化脂肪酸或其酯的步骤，所述全细胞催化剂表达CYP153家族的重组细胞色素P450单加氧酶、重组醇脱氢酶、重组氨基转移酶和任选一种或多于一种选自丙氨酸脱氢酶、铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶的重组酶，并涉及该全细胞催化剂用于氧化脂肪酸或其酯的用途，

其中所述脂肪酸或其酯优选具有式（I）

其中R选自H、甲基、乙基、丙基和丁基，

其中n是0-30，优选6-24。

聚酰胺是一类特征在于重复的酰胺基的聚合物。与化学相关的蛋白不同，术语“聚酰胺”通常涉及合成的、可商购的、热塑性聚合物。聚酰胺衍生自在烃的裂化过程中通常获得的伯胺或仲胺。然而，还可以使用衍生物，更准确地为氨基羧酸、内酰胺和二胺，来产生聚合物。作为起始材料还关注的是短链的、气态烷，其可以使用生物技术方法从可再生原材料开始来获得。

许多高度需要的商品化聚酰胺从内酰胺开始生产。例如，“聚酰胺6”可以通过ε-己内酰胺的聚合来获得，并且“聚酰胺12”可以通过十二内酰胺的聚合来获得。其他商业关注的产品包括内酰胺的共聚物，例如ε-己内酰胺和十二内酰胺的共聚物。

常规化学技术生产胺依赖于化石原材料的供应，效率低，并且其中产生大量不期望的副产物，在合成的一些步骤中高达80％。此类方法的一个实例是生产十二内酰胺，其常规通过丁二烯的三聚化来获得。三聚化产物环十二碳三烯被氢化，并且从中产生的环十二烷氧化为环十二酮，其随后与羟胺反应来产生环十二烷肟，其经Beckmann重排最后转化为十二内酰胺。

考虑到所述的缺点，已经开发了方法来使用生物催化剂从可再生原材料开始来获得胺。合适的可再生原材料尤其是脂肪酸来源，其可以以油菜籽油、球蓟油、棕榈仁油、椰子油、葵花籽仁油和来自大量生物来源（尤其是来自植物）的类似的天然产物的形式获得。

PCT/EP 2008/067447描述了使用具有一系列合适的酶促活性并能够转化羧酸为对应的ω-氨基羧酸的细胞来生产化学相关产物（更准确地为ω-氨基羧酸）的生物系统。

然而，其中使用的来自恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）GPO1的AlkBGT氧化酶系统的已知缺点是，它不能实现脂族烷向伯醇的选择性氧化。相反，出现了许多氧化产物；尤其是，更高程度的氧化产物级分诸如对应的醛、酮或对应的羧酸，随反应时间增加而增加(C. Grant, J. M. Woodley 和F. Baganz (2011), Enzyme and Microbial Technology 48, 480-486)，这相应降低了期望的胺的产量。

相对非选择性氧化的问题由产生的氧化产物结构上非常相似这一事实而严重。这意味着将它们从期望的氧化产物中有效分离且无产量上的显著损失是非常困难的。

因此，存在对其中酶促催化反应更具选择性地进行并且将形成不可逆产生的副产物降到最低的方法的需要。

针对这一背景，本发明的目的是提供使用生物催化剂用于脂肪酸的氧化和胺化的改进方法。

本发明的进一步目的是改进方法，从而使得基于脂肪酸底物或其他底物的量的产率增加用于生物技术合成的细胞的碳底物的量，和/或使副产物的浓度或副产物与期望产物的比例降低。

本发明的进一步目的是改进方法，从而使得使用的生物催化剂（尤其是脂肪酸氧化酶）的选择性在反应开始时（即在产物浓度随时间达到平稳之前）或在调整平衡之后（即在达到平稳之后）增加和/或扩展。

本发明的进一步目的是改进在脂肪酸的生物技术氧化和/或胺化过程中形成的反应混合物的可加工性，尤其是关于亲水性和疏水性物质的相分离的效率和速率。

这些和其他目的通过本申请的主题和尤其还通过所附的独立权利要求的主题来实现，其中具体实施方案由从属权利要求得到。

本发明的目的在第一方面通过氧化脂肪酸或其酯的方法来实现，

所述方法包括以下步骤：

a）通过在分子氧和NAD(P)H存在的情况下与CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶接触来氧化脂肪酸或其酯，

其中所述脂肪酸或其酯优选具有式（I）

其中R选自H、甲基、乙基、丙基和丁基，

其中n是0-30，优选6-24。

在第一方面的第一个实施方案中，所述目的通过这样的方法来实现，所述方法进一步包括以下步骤：

b）通过与醇脱氢酶接触进一步氧化来自步骤a）的氧化的脂肪酸或其酯，

c）通过在胺供体（优选为丙氨酸）存在的情况下与氨基转移酶接触将来自步骤b）的进一步氧化的脂肪酸或其酯胺化，

其中步骤c）任选在丙氨酸脱氢酶、铵和NAD(P)H存在的情况下进行。

在第二个实施方案中，其也是第一个实施方案的一个实施方案，所述目的通过这样的方法来实现，其中CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶具有肽序列LL(I/L)(V/I)GGNDTTRN，并优选为来自泊库岛食烷菌（Alcanivorax borkumensis）SK2的CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶（数据库编号YP_691921）或其变体。

本文中所用的该数据库编号及所有其他数据库编号均来源于NCBI的Genbank Protein数据库在2012年3月9日在线可用的版本。

在第三个实施方案中，其也是第一个至第二个实施方案的一个实施方案，所述目的通过这样的方法来实现，其中醇脱氢酶是NAD(P)⁺-依赖的醇脱氢酶，优选来自大肠杆菌（Escherichia coli）MS 187-1的NAD依赖的醇脱氢酶（数据库编号ZP_07145023）或其变体，或来自嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus）的醇脱氢酶（数据库编号P42328）或其变体，或葡萄糖-甲醇-胆碱-氧化还原酶家族的氧化还原酶，优选来自恶臭假单胞菌的氧化还原酶（数据库编号CAB54054.1）或其变体，或含黄素的醇脱氢酶，优选来自热带念珠菌（Candida tropicalis）的含黄素的醇脱氢酶（数据库编号AAS46878.1）或其变体。

在第四个实施方案中，其也是第一个至第三个实施方案的一个实施方案，所述目的通过这样的方法实现，其中，在步骤a）中，存在另外的铁氧还蛋白还原酶，优选来自泊库岛食烷菌（Alcanivorax borkumensis）SK2的铁氧还蛋白还原酶(数据库编号YP_691923)或其变体，和/或铁氧还蛋白，优选来自泊库岛食烷菌（Alcanivorax borkumensis）SK2的铁氧还蛋白(数据库编号YP_691920)或其变体。

在第五个实施方案中，其也是第一个至第四个实施方案的一个实施方案，所述目的通过这样的方法实现，其中步骤c）在丙氨酸脱氢酶、铵和NADH存在的情况下进行，并且丙氨酸脱氢酶是来自枯草芽孢杆菌枯草亚种168株（Bacillus subtilis subsp. subtilis str. 168）的丙氨酸脱氢酶(数据库编号NP_391071)或其变体。

在第六个实施方案中，其也是第一个至第五个实施方案的一个实施方案，所述目的通过这样的方法实现，其中以全细胞催化剂的形式重组提供至少一种选自以下的酶：CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶、醇脱氢酶、氨基转移酶、丙氨酸脱氢酶、铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶。

在第七个实施方案中，其也是第六个实施方案的一个实施方案，所述目的通过这样的方法实现，其中以一种或多于一种的全细胞催化剂的形式重组提供在步骤a）、b）或c）的至少一个中存在的或与脂肪酸或其酯、来自步骤b）的进一步氧化的脂肪酸或其酯或者来自步骤c）的胺化的进一步氧化的脂肪酸或其酯接触的选自CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶、醇脱氢酶、氨基转移酶、丙氨酸脱氢酶、铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶的所有酶。

在第八个实施方案中，其也是第六个至第七个实施方案的一个实施方案，所述目的通过这样的方法实现，其中全细胞催化剂另外表达AlkL家族的多肽，优选选自以下的AlkL：来自恶臭假单胞菌的AlkL（数据库编号CAB69081）、来自水油海杆菌（Marinobacter aquaeolei） VT8的AlkL (数据库编号YP_957722)、来自亚历山大海洋柄菌（Oceanicaulis alexandrii） HTCC2633的AlkL (数据库编号ZP_00953584)、来自Marinobacter manganoxydans MnI7-9的AlkL (数据库编号ZP_09158756)、来自柄杆菌属种（Caulobacter sp.） K31的AlkL (数据库编号YP_001672217)、来自食油假单胞菌（Pseudomonas oleovorans）的AlkL(数据库编号Q00595)或其变体。

在第九个实施方案中，其也是第一个至第八个实施方案的一个实施方案，所述目的通过这样的方法实现，其中全细胞催化剂是具有相比于其野生型至少一种催化脂肪酸的β-氧化反应之一的酶降低的活性的细胞，其中所述酶优选选自脂肪酸输入蛋白、脂肪酸-CoA连接酶、酰基-CoA脱氢酶、2,4-二烯酰基-CoA还原酶、烯酰基-CoA水合酶和3-酮酰基-CoA硫解酶。

在第十个实施方案中，其也是第一个至第九个实施方案的一个实施方案，所述目的通过这样的方法实现，其中选择步骤c）中的丙氨酸脱氢酶，使得其还原步骤b）中由醇脱氢酶氧化的氧化还原辅因子，优选NAD⁺或NADP⁺。

在第二方面，所述目的通过全细胞催化剂实现，所述全细胞催化剂表达重组的CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶、重组的醇脱氢酶、重组的氨基转移酶和任选一种或多于一种选自以下的重组酶：丙氨酸脱氢酶、铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶。

在第二方面的第一个实施方案中，所述目的通过全细胞催化剂实现，其中全细胞催化剂另外表达AlkL家族的多肽，优选选自以下的AlkL：来自恶臭假单胞菌的AlkL（数据库编号CAB69081）、来自水油海杆菌（Marinobacter aquaeolei） VT8的AlkL (数据库编号YP_957722)、来自亚历山大海洋柄菌（Oceanicaulis alexandrii） HTCC2633的AlkL (数据库编号ZP_00953584)、来自Marinobacter manganoxydans MnI7-9的AlkL (数据库编号ZP_09158756)、来自柄杆菌属种（Caulobacter sp.） K31的AlkL (数据库编号YP_001672217)、来自食油假单胞菌（Pseudomonas oleovorans）的AlkL(数据库编号Q00595)或其变体。

在第二个实施方案中，其也是第一个实施方案的一个实施方案，所述目的通过全细胞催化剂实现，其中所述全细胞催化剂是具有相比于其野生型至少一种催化脂肪酸的β-氧化反应之一的酶降低的活性的细胞，其中所述酶优选选自脂肪酸输入蛋白、脂肪酸-CoA连接酶、酰基-CoA脱氢酶、2,4-二烯酰基-CoA还原酶、烯酰基-CoA水合酶和3-酮酰基-CoA硫解酶。

在第三个实施方案中，其也是第一个至第二个实施方案的一个实施方案，所述目的通过全细胞催化剂实现，其中所述全细胞催化剂表达铁氧还蛋白还原酶和铁氧还蛋白。

在第四个实施方案中，其也是第一个至第三个实施方案的一个实施方案，所述目的通过全细胞催化剂实现，其中所述全细胞催化剂表达丙氨酸脱氢酶，并且其中所述丙氨酸脱氢酶是来自枯草芽孢杆菌枯草亚种168株（Bacillus subtilis subsp. subtilis str. 168）(数据库编号NP_391071)或其变体。

在第五个实施方案中，其也是第一个至第四个实施方案的一个实施方案，所述目的通过全细胞催化剂实现，其中CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶具有肽序列LL(I/L)(V/I)GGNDTTRN和/或它是来自泊库岛食烷菌SK2的CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶(数据库编号YP_691921)或其变体，并且所述铁氧还蛋白还原酶是来自泊库岛食烷菌SK2的铁氧还蛋白还原酶(数据库编号YP_691923)或其变体，并且所述铁氧还蛋白是来自泊库岛食烷菌SK2的铁氧还蛋白(数据库编号YP_691920)或其变体。

在第六个实施方案中，其也是第一个至第五个实施方案的一个实施方案，所述目的通过全细胞催化剂实现，其中醇脱氢酶是NAD(P)⁺依赖的醇脱氢酶、葡萄糖-甲醇-胆碱-氧化还原酶家族的氧化还原酶或者含黄素的醇氧化酶，优选NAD(P)⁺依赖的醇脱氢酶，最优选来自大肠杆菌MS 187-1的NAD依赖的醇脱氢酶(数据库编号ZP_07145023)或其变体。

在第七个实施方案中，其也是第一或第二方面及其实施方案的进一步的实施方案，所述目的通过根据第二方面或第二方面的实施方案的全细胞催化剂或根据第一方面或第一方面的实施方案的方法实现，其中所述氨基转移酶是来自恶臭假单胞菌GB-1的氨基转移酶(数据库编号YP_001668026.1)或其变体。

在第八个实施方案中，其也是第一或第二方面的进一步的实施方案，脂肪酸或其酯是不饱和的或支化的脂肪酸或其酯。

在第九个实施方案中，其也是第一或第二方面的进一步的实施方案，所述目的通过这样的方法实现，其中以全细胞催化剂的形式重组提供选自CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶、醇脱氢酶、氨基转移酶、丙氨酸脱氢酶、铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶的至少一种酶，或者所述目的通过全细胞催化剂实现，其中所述全细胞催化剂是相对于细胞的野生型具有至少一种内源醛脱氢酶降低的活性的细胞。

在第三方面，本发明的目的通过根据本发明的第二方面或其实施方案之一的全细胞催化剂用于氧化和/或胺化脂肪酸或其酯的用途来实现，其中所述脂肪酸或其酯优选具有式（I）

其中R选自H、甲基、乙基、丙基和丁基，

其中n是0-30，优选6-24。

在第三方面的第一个实施方案中，所述问题通过这样的用途解决，其中所述氧化产生氧化产物的混合物，基于反应的脂肪酸或其酯的物质的量，所述混合物包含至少90％的对应的醇、少于1％的对应的醛和少于10％的对应的酸。

在第三方面的第二个实施方案中，其也是第三方面的实施方案的进一步的实施方案，所述脂肪酸是不饱和的或支化的脂肪酸或其酯。

本发明基于由本发明的发现，即使用特定的单加氧酶或表达此类单加氧酶（更准确地为CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶）的全细胞催化剂，令人惊奇地导致脂肪酸的氧化和/或胺化，以更高的选择性和更好的相对产率形成期望的产物。

不希望受任何理论的束缚，本发明人认为这些单加氧酶的活性催化中心如此地形成，从而相比于从现有技术中已知的可比较的单加氧酶的情况，使得已经羟基化的产物，不是首先氧化成醛或完全氧化成酸的产物，以较低的亲和性相连并进一步氧化。

根据本发明的方法在步骤a）中考虑通过CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶氧化脂肪酸。在一个实施方案中，术语“脂肪酸或其酯”是指式H₃C–(CH₂)_x–COOR的化合物，其中x是4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30，且R是氢、甲基、乙基或丙基，优选氢。在尤其优选的实施方案中，x是6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24，且R是氢。在最优选的实施方案中，它是月桂酸或月桂酸甲酯。在优选的实施方案中，它是不饱和的脂肪酸，其选自肉豆蔻酸、棕榈油酸、岩芹酸、油酸、反油酸、十八碳烯酸、顺式9-二十碳烯酸、二十碳烯酸或芥酸。同样可以的是不同脂肪酸的混合物，例如通过水解和任选酯化球蓟油、椰子油、萼距花（Cuphea）油或棕榈仁油获得的脂肪酸或脂肪酸酯的混合物。由于并非所有脂肪酸在室温下是以显著程度可溶的，因此可能需要诉诸其他措施，例如提高温度或优选地，添加有机溶剂，以使其能进入水相。在尤其优选的实施方案中，将脂肪酸或其酯，最优选月桂酸甲酯或油酸，用作此类其他溶剂。

当在本申请中说明的所有化合物的情况下，脂肪酸不仅包括脂肪酸的质子化形式，还包括离解于水溶液中的所有形式、制剂或盐。例如，术语月桂酸还包括月桂酸酯或月桂酸钠。作为进一步的实例，氨基酸丙氨酸包括在水中羧基上去质子化的或质子化的形式和在氨基上去质子化的或质子化的形式。

本发明的方法不仅提供氢化脂肪酸的氧化，还允许脂肪酸有效反应为对应的ω-氨基羧酸，其借助于包含CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶、醇脱氢酶、氨基转移酶和任选氨基酸脱氢酶的酶系统。此类酶的使用在与它们的酶促活性相容的条件下进行。这些包括首选选择合适的含水缓冲系统，其包含至少一种pH稳定缓冲剂，例如磷酸钠，任选额外至少一种盐，例如氯化钠，并在合适的pH下。在最优选的实施方案中，pH是5、5.5、6、6.5、7、7.5、8、8.5、9或10，优选2.5-7.5，尤其优选5.5-7.5。温度必须也符合待使用的一种或多种酶的活性。在优选的实施方案中，温度为1-45℃，更优选20-45℃，最优选28-42℃。选择合适的缓冲系统和稳定活性可以由本领域技术人员使用标准方法来进行，参见例如A Cornish-Bowden (1995), Fundamentals of Enzyme Kinetics, Portland Press Limited, 1995。CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶（不具有或组合有铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶）的活性可以通过这样的测定法来测定，所述测定描述于Scheps, D., Malca, H., Hoffmann, B., Nestl, B. M和Hauer, B. (2011) Org. Biomol. Chem., 9, 6727。铁氧还蛋白和/或铁氧还蛋白还原酶是否有活性对于本领域技术人员而言，从在两种活性酶存在的情况下相比于它们不存在的情况下所述单加氧酶活性的显著增加中是显而易见。氨基转移酶活性的酶测试由Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, (“Alanine Transaminase Activity Assay Kit, 产品号700260”)销售。氨基酸脱氢酶的活性可以通过Germano, H. J.和Anderson, K. E. (1968), J. Bact. 96 (1), pages 55-60来测定。

酶的使用进一步需要所有必需底物的存在。因此，除了根据本发明待反应的脂肪酸或其酯，氧和电子供体的存在对于CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶活性是必需的。优选地，氧可以通过将包含一种或多种酶或细胞和底物的反应混合物与大气空气或者与纯氧或与富含氧的大气空气接触而使其可得，尤其优选通过当其与大气空气或者与纯氧或与富含氧的大气空气接触时搅拌反应混合物。

为了向CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶最佳提供来自还原剂（优选NADH）的电子，优选所述单加氧酶和与其功能性相互作用的铁氧还蛋白还原酶和与其功能性相互作用的铁氧还蛋白一同使用。这些可以是分离的多肽，或在使用全细胞催化剂的情况下，是共表达多肽或是在N或C末端与CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶融合的多肽。铁氧还蛋白还原酶或铁氧还蛋白与给定的CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶彼此是否功能性相互作用可以由本领域技术人员通过在烷底物和所述三种多肽存在的情况下还原剂是否被氧化来容易地确定。或者，可以使用由Scheps, D., Malca, H., Hoffmann, B., Nestl, B. M和Hauer, B. (2011) Org. Biomol. Chem., 9, 6727描述的酶测试，其在功能性相互作用的多肽的情况下，展示出反应速率中的显著增加。在尤其优选的实施方案中，CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶、铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶来源于同一生物。在尤其优选的实施方案中，它是来自泊库岛食烷菌SK2的铁氧还蛋白还原酶(数据库编号YP_691923)或其变体、来自泊库岛食烷菌SK2的铁氧还蛋白(数据库编号YP_691920)或其变体、和来自泊库岛食烷菌SK2的CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶(数据库编号YP_691921)或其变体。

对于根据本发明使用的所有酶，它们可以是包含对应的酶促活性的多肽的细胞或其溶胞产物或以所有纯化状态的多肽制备物（从粗溶胞产物直至纯的多肽）或全细胞催化剂。多种方法对于本领域技术人员是已知的，使用所述方法可以在合适细胞中过表达酶促活性多肽并可以纯化或分离。为了表达多肽，可以使用本领域技术人员可用的所有表达系统。层析方法适合于纯化，例如在组氨酸标签的情况下使用固定的配体（例如镍离子），在与目的蛋白融合的谷胱甘肽S转移酶的情况下使用固定的谷胱甘肽，或在含麦芽糖结合蛋白的标签的情况下使用固定的麦芽糖，来亲和性层析纯化提供有标签的重组蛋白。对于大量生物技术上重要的细胞类型，例如大肠杆菌，可用于表达或过表达核酸分子的合适方法和载体是已知的，例如pET或pGEX型的载体和适合于其表达的细胞(B A Moffatt和F W Studier (1986) J. Mol. Biol. 189, 113–130, A H Rosenberg, B N Lade, D Chui, S Lin, J J Dunn和F W Studier (1987) Gene 56, 125–135以及F W Studier, A H Rosenberg, J J Dunn和J W Dubendorff (1990) Meth. Enzymol.185, 60–89)。

纯化的酶可以以可溶形式或固定化形式使用。合适的方法对于本领域技术人员是已知的，通过所述方法可以将多肽共价地或非共价地固定在有机或无机固相上，例如通过巯基偶联化学（例如来自Pierce的试剂盒）。细胞膜缔合的酶或细胞膜嵌入的酶可以以膜制备物或溶解的形式来使用。

在使用至少一种全细胞催化剂的情况下，在延长的反应时间的情况下，必须确保条件与作为全细胞催化剂使用的至少一种细胞的活力相容。本领域技术人员可以采取条件和溶液的标准操作（例如Fuchs/Schlegel (2007) Allgemeine Mikrobiologie, 2008, Georg Thieme Verlag），其允许此类细胞保持活力的状态。

在优选的实施方案中，如本文所用的术语“全细胞催化剂”理解为表示完整的、有活力的且代谢上有活性的细胞，其提供了期望的酶促活性。全细胞催化剂可以转运待代谢的底物（在本发明的情况下为醇或从其产生的氧化产物）进入细胞内部，在那它被细胞溶胶的酶所代谢，或它可以呈递目标酶在它的表面上，其中它直接暴露于培养基中的底物。本领域技术人员知晓用于产生全细胞催化剂的许多系统，例如来自DE 60216245。

当使用全细胞催化剂时，可能产生必须使底物与细胞内定位的酶接触从而使它导致期望的反应这一问题。在长链烷及其衍生物的情况下，优选全细胞催化剂具有AlkL家族的多肽。在优选的实施方案中，如本文所用的“AlkL家族的多肽”是这样的多肽，其在长度为230个连续氨基酸上与来自恶臭假单胞菌的AlkL (数据库编号CAB69081)具有至少80，优选90，更优选90％的序列同一性，并且优选具有辅助长链烷进入细胞内部的能力。在进一步的实施方案中，如本文所用的“AlkL家族的多肽”是定位于革兰氏阴性细菌的外膜内的多肽，其具有序列基序DXWAPAXQ(V/A)GXR，其中X是产生蛋白质的氨基酸，并且优选是另外来自恶臭假单胞菌的AlkL (数据库编号CAB69081)或其变体。AlkL家族的成员的实例包括来自恶臭假单胞菌的AlkL（数据库编号CAB69081）、来自水油海杆菌（Marinobacter aquaeolei） VT8的AlkL (数据库编号YP_957722)、来自亚历山大海洋柄菌（Oceanicaulis alexandrii） HTCC2633的AlkL (数据库编号ZP_00953584)、来自Marinobacter manganoxydans MnI7-9的AlkL (数据库编号ZP_09158756)、来自柄杆菌属种（Caulobacter sp.） K31的AlkL (数据库编号YP_001672217)、来自食油假单胞菌（Pseudomonas oleovorans）的AlkL(数据库编号Q00595)及其变体。

推荐使用分离的酶用于多种应用。在优选的实施方案中，如本文所用的术语“分离的”表示酶相比于其天然来源以更纯的和/或更浓缩的形式存在。在优选的实施方案中，如果酶是多肽酶并且构成多于60、70、80、90或优选95％的对应制备物的大量蛋白级分，则将它归类为分离的。本领域技术人员知晓用于测量溶液中蛋白的质量的许多方法，例如参考SDS-聚丙烯酰胺凝胶上对应的蛋白条带的厚度的视觉评估、基于NMR光谱或质谱的方法。

根据本发明使用的酶优选是重组的酶。在优选的实施方案中，如本文所用的术语“重组的”理解为表示对应的核酸分子天然不存在和/或它是使用遗传工程方法来产生。在优选的实施方案中，如果对应的多肽由重组核酸所编码，则使用术语重组蛋白。在优选的实施方案中，如本文所用，将重组细胞理解为表示具有至少一种重组核酸或重组多肽的细胞。适合于产生重组分子或细胞的方法是本领域技术人员已知的，例如在Sambrook/Fritsch/Maniatis (1989)：Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 第2版中描述的那些。

在优选的实施方案中，用作全细胞催化剂或用作表达系统的细胞是原核细胞，优选细菌细胞。根据本发明优选的是，基于良好的遗传可及性，使用微生物；其选自细菌，尤其是优选选自以下：磁球菌属（Magnetococcus）、深海菌属（Mariprofundus）、醋酸杆菌属（Acetobacter）、嗜酸菌属（Acidiphilium）、阿菲波菌属（Afipia）、Ahrensia、不粘柄菌属（Asticcacaulis）、橙单胞菌属（Aurantimonas）、固氮根瘤菌属（Azorhizobium）、固氮螺菌属（Azospirillum）、芽孢杆菌（Bacillus）、巴尔通体（Bartonella, tribocorum）、拜叶林克氏菌属（Beijerinckia）、短根瘤菌属（Bradyrhizobium）、短波单胞菌属（Brevundimonas）、subvibrioides、布鲁菌属（Brucella）、柄杆菌属（Caulobacter）、Chelativorans、Citreicella、柠檬酸微菌属（Citromicrobium）、棒杆菌属（Corynebacterium）、Dinoroseobacter、赤杆菌属（Erythrobacter）、Fulvimarina、葡糖醋杆菌属（Gluconacetobacter）、Granulibacter、海氏菌属（Hirschia）、Hoeflea、生丝微菌属（Hyphomicrobium）、生丝单胞菌属（Hyphomonas）、Ketogulonicigenium、Labrenzia、Loktanella、磁螺菌属（Magnetospirillum）、Maricaulis、Maritimibacter、中慢生根瘤菌属(Mesorhizobium)、甲基杆菌属(Methylobacterium)、甲基孢囊菌属(Methylocystis)、甲基曲菌属 (Methylosinus)、硝化杆菌属（Nitrobacter）、新鞘脂菌属(Novosphingobium)、Oceanibulbus、Oceanicaulis、海洋生菌属(Oceanicola)、苍白杆菌属(Ochrobactrum)、Octadecabacter、寡养菌属（Oligotropha）、副球菌属（Paracoccus）、Parvibaculum、短小盒菌属(Parvularcula)、Pelagibaca、Phaeobacter、苯基杆菌属(Phenylobacterium)、Polymorphum、Pseudovibrio、红杆菌属(Rhodobacter)、红微菌属（Rhodomicrobium）、红假单胞菌属（Rhodopseudomonas）、红螺菌属（Rhodospirillum）、Roseibium、玫瑰杆菌属(Roseobacter)、玫瑰单胞菌属(Roseomonas)、Roseovarius、Ruegeria、Sagittula、Silicibacter、鞘脂菌属(Sphingobium)、鞘脂单胞菌属(Sphingomonas)、Sphingopyxis、Starkeya、Sulfitobacter、Thalassiobium、黄色杆菌属(Xanthobacter)、发酵单胞菌属(Zymomonas)、土壤杆菌属(Agrobacterium)、根瘤菌属(Rhizobium)、中华根瘤菌属(Sinorhizobium)、无形体属(Anaplasma)、埃里希体属(Ehrlichia)、新立克次体属(Neorickettsia)、Orientia、立克次体属(Rickettsia)、沃巴赫体属(Wolbachia)、博德氏菌属(Bordetella)、伯克氏菌属(Burkholderia)、贪铜菌属（Cupriavidus）、台湾贪铜菌（Cupriavidus, taiwanensis）、Lautropia、Limnobacter、Polynucleobacter、青枯菌属(Ralstonia)、色杆菌属(Chromobacterium)、艾肯氏菌属(Eikenella)、corrodens、Basfia、金氏菌属(Kingella)、鸥杆菌属(Laribacter)、Lutiella、奈瑟菌属(Neisseria)、Simonsiella、无色杆菌属(Achromobacter)、食酸菌属(Acidovorax)、Alicycliphilus、Aromatoleum、固氮弓菌属(Azoarcus)、丛毛单胞菌属(Comamonas)、Dechloromonas、代尔夫特菌属(Delftia)、嘉利翁氏菌属(Gallionella)、Herbaspirillum、Herminiimonas、Hylemonella、詹森菌属（Janthinobacterium）、纤发菌属(Leptothrix)、Methylibium、Methylobacillus、嗜甲基菌目(Methylophilales) 、Methyloversatilis、Methylovorus、亚硝化单胞菌属(Nitrosomonas)、亚硝化螺旋菌属(Nitrosospira)、草酸杆菌属(Oxalobacter)、Parasutterella、Polaromonas、Polaromonas、Pusillimonas、红育菌属(Rhodoferax)、红长命菌属(Rubrivivax)、Sideroxydans、Sutterella、wadsworthensis、泰勒氏菌属（Taylorella)、陶厄氏菌属(Thauera)、硫杆状菌属(Thiobacillus)、硫单胞菌属(Thiomonas)、贪食菌属(Variovorax)、Verminephrobacter、Anaeromyxobacter、蛭弧菌属(Bdellovibrio)、食菌蛭弧菌（Bdellovibrio, bacteriovorus）、Bilophila、脱硫盒菌属(Desulfarculus)、Desulfatibacillum、Desulfobacca、脱硫杆菌属 (Desulfobacterium) 、脱硫叶菌属(Desulfobulbus)、脱硫球菌属（Desulfococcus）、Desulfohalobium、脱亚硫酸菌属(Desulfitobacterium)、Desulfomicrobium 、Desulfonatronospira、Desulfotalea、脱硫弧菌属(Desulfovibrio)、除硫单胞菌属(Desulfuromonas)、地杆菌属(Geobacter)、Haliangium、Hippea、Lawsonia、黏球菌属(Myxococcus)、暗杆菌属(Pelobacter)、Plesiocystis、堆囊菌属(Sorangium)、标桩菌属（Stigmatella)、互营杆菌属(Syntrophobacter)、互营菌属(Syntrophus)、弓形杆菌属(Arcobacter)、Caminibacter、弯曲菌属(Campylobacter)、螺杆菌属(Helicobacter)、Nitratifractor、Nitratiruptor、Sulfuricurvum、Sulfurimonas、硫磺单胞菌属(Sulfurospirillum)、Sulfurovum、沃林氏菌属(Wolinella)、布赫纳氏菌属(Buchnera)、Blochmannia、Hamiltonella、Regiella、Riesia、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)、Cronobacter、Dickeya、爱德华氏菌属(Edwardsiella)、肠杆菌属(Enterobacter)、欧文氏菌属(Erwinia)、埃希氏菌属(Escherichia)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、泛菌属(Pantoea)、果胶杆菌属 (Pectobacterium)、变形杆菌属(Proteus)、普罗维登斯菌属(Providencia)、拉恩氏菌属（Rahnella）、沙门氏菌属(Salmonella)、沙雷氏菌属(Serratia)、志贺氏菌属(Shigella)、Sodalis、Wigglesworthia、Glossina、致病杆菌属(Xenorhabdus)、耶尔辛氏菌属(Yersinia)、酸硫杆状菌属(Acidithiobacillus)、不动杆菌属(Acinetobacter)、气单胞菌属(Aeromonas)、食碱菌属(Alcanivorax)、碱湖生菌属(Alkalilimnicola)、Allochromatium、交替单胞菌目(Alteromonadales)、交替单胞菌属(Alteromonas)、Baumannia、贝扎托菌属(Beggiatoa)、Bermanella、Carsonella、Ruthia、Vesicomyosocius、心杆菌属(Cardiobacterium)、色盐杆菌属(Chromohalobacter)、Colwellia、聚集杆菌属(Congregibacter)、柯克斯体属(Coxiella)、Dichelobacter、Endoriftia、水栖菌属 (Enhydrobacter)、高铁单胞菌属(Ferrimonas)、弗朗西丝氏菌属(Francisella)、Glaciecola、河氏菌属(Hahella)、盐单胞菌属(Halomonas)、盐红螺旋菌属(Halorhodospira)、盐硫杆状菌属(Halothiobacillus)、Idiomarina、Kangiella、军团菌属(Legionella)、海杆菌属(Marinobacter)、海单胞菌属(Marinomonas)、甲基杆菌属(Methylobacter)、甲基球菌属(Methylococcus)、甲基微菌属(Methylomicrobium)、噬甲基菌属(Methylophaga)、莫拉菌属(Moraxella)、南极嗜冷菌属(Moritella)、Neptuniibacter、硝化球菌属(Nitrococcus)、假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas)、冷杆菌属(Psychrobacter)、冷单胞菌属(Psychromonas)、Reinekea、立克次小体属(Rickettsiella)、Saccharophagus、希万氏菌属(Shewanella)、Succinatimonas、Teredinibacter、Thioalkalimicrobium、Thioalkalivibrio、石危微螺菌属（Thiomicrospira)、Tolumonas、弧菌目(Vibrionales) 、放线杆菌属(Actinobacillus)、Aggregatibacter、Gallibacterium、嗜血菌属(Haemophilus)、嗜组织菌属 (Histophilus)、默罕氏菌属 (Mannheimia)、巴斯德氏菌属(Pasteurella)、固氮菌属（Azotobacter)、纤维弧菌属(Cellvibrio)、假单胞菌属(Pseudomonas)、Aliivibrio、格里蒙菌属（Grimontia)、发光杆菌属(Photobacterium)、发光杆菌属（Phtobacterium）、弧菌属（Vibrio）、假黄色单胞菌属(Pseudoxanthomonas)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)、黄色单胞菌属(Xanthomonas)、木杆菌属(Xylella)、疏螺旋体属(Borrelia)、短螺旋体属(Brachyspira)、钩端螺旋体属(Leptospira)、螺旋体属(Spirochaeta)、密螺旋体属(Treponema)、Hodgkinia、Puniceispirillum、韧皮杆菌属(Liberibacter)、远洋杆菌属(Pelagibacter)、Odyssella、Accumulibacter，尤其是枯草芽孢杆菌（B. subtilis）、巨大芽孢杆菌（B. megaterium）、谷氨酸棒杆菌（C. glutamicum）、大肠杆菌、假单胞菌属种（Pseudomonas sp.）、荧光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens）、恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）、施氏假单胞菌（Pseudomonas stutzeri）、不动杆菌属种（Acinetobacter sp.）、伯克氏菌属种（Burkholderia sp.）、Burkholderia thailandensis、蓝细菌（Cyanobakterien）、克雷伯氏菌属种（Klebsiella sp.）、产酸克雷伯菌（Klebsiella oxytoca）、沙门氏菌属种（Salmonella sp.）、根瘤菌属种（Rhizobium sp.）和苜蓿根瘤菌（Rhizobium meliloti），并且大肠杆菌是特别优选的。

在优选的实施方案中，术语“CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶”理解为表示作为3组分系统的部分的具有烷结合位点和羟基化烷的能力的细胞溶胶氧化酶，所述3组分系统还包含铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶。在尤其优选的实施方案中，它是与来自泊库岛食烷菌SK2的CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶(数据库编号YP_691921)具有至少80，优选90，最优选95或99％的序列同一性的酶，或是包含与来自泊库岛食烷菌SK2的CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶(数据库编号YP_691921)具有至少80，优选90，最优选95或99％的序列同一性的多肽序列并此外具有烷羟化酶活性的酶。在优选的实施方案中，如本文所用的术语“烷羟化酶活性”理解为表示催化烷或包含至少5个、优选12个碳原子的未取代的直链烷基的羟基化的能力。在进一步优选的实施方案中，术语“CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶”理解为表示非膜结合的氧化酶，其包括对于烷、包含至少5个、优选12个碳原子的未取代的直链烷基或单羟基化的烷的结合位点，并且其多肽链包括基序LL(I/L)(V/I)GGNDTTRN。在优选的实施方案中，如本文所用的“CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶”是来自泊库岛食烷菌SK2的CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶(数据库编号YP_691921)或变体，其优选具有烷羟化酶活性。

CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶用于烷的羟基化的用途描述于现有技术中，如测定酶活性的酶测试和用于表达和纯化的方法(Scheps, D., Malca, H., Hoffmann, B., Nestl, B. M和Hauer, B. (2011) Org. Biomol. Chem., 9, 6727)。除了待氧化的烷或包含至少5个、优选12个碳原子的未取代的直链烷基外，参与酶反应的底物包含氧和电子，所述电子以NADH的形式优选经其他两个组分铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶转移至氧化酶。Scheps等(2011)以及Roome, P. W., Jr., Philley, J. C.和Peterson (1983) J. Biol. Chem. 258, 2593；Roome, P.W.和Peterson, J. A. (1988), Arch.Biochem.Biophys., 266, 41以及Peterson, J. A., Lorence, M. C.和Amarneh, B. (1990) J. Biol. Chem, 265, 6066还公开了获得以功能形式的铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶的方法。

根据本发明，在步骤b）中，使用醇脱氢酶来氧化步骤a）中产生的脂肪酸醇。醇脱氢酶已在几十年间在与酿造发酵方法相关的生物化学中是大量观察的且生物技术高度关注的酶类别，所述类别包括多个组的同工型。因此，存在恶臭假单胞菌GPO1 AlkJ型的膜结合的、黄素依赖性醇脱氢酶，其使用黄素辅因子(Flavocofactor)替代NAD⁺。另一组包括含铁的醇脱氢酶，其对氧敏感并且其在细菌中发现以及在酵母中以无活性形式发现。另一组包括NAD⁺依赖的醇脱氢酶，在它们中有其中活性中心具有半胱氨酸配位的锌原子（其固定醇底物）的含锌的醇脱氢酶。在优选的实施方案中，如本文所用的术语“醇脱氢酶”理解为表示氧化醛或酮为对应的伯醇或仲醇的酶。优选地，在本发明的方法中的醇脱氢酶是NAD⁺依赖的醇脱氢酶，即使用NAD⁺作为辅因子氧化醇或使用NADH用于还原对应的醛或酮的醇脱氢酶。在最优选的实施方案中，醇脱氢酶是NAD⁺依赖的含锌的醇脱氢酶。

在进一步优选的实施方案中，醇脱氢酶是葡萄糖-甲醇-胆碱-氧化还原酶家族的醇脱氢酶氧化还原酶。在进一步优选的实施方案中，如本文所用的术语“葡萄糖-甲醇-胆碱-氧化还原酶家族的氧化还原酶”理解为表示包含FAD作为辅因子的醇脱氢酶，并且优选为来自恶臭假单胞菌的酶(数据库编号CAB69081)或其变体。实例包括SEQ ID No. 26、27、28和29，并且也包括来自恶臭假单胞菌的酶(数据库编号CAB69081)。

在进一步优选的实施方案中，醇脱氢酶是含黄素的醇脱氢酶家族的醇脱氢酶。在优选的实施方案中，如本文所用的术语“含黄素的醇脱氢酶的家族”理解为表示这样的醇氧化酶的组，其构成了c型的血红素蛋白，并且包含FAD作为辅因子，且优选另外属于具有数据库编号AAS46878.1的酶及其变体的组。含黄素的醇脱氢酶的实例包括来自热带念珠菌具有数据库编号AAS46878.1、AAS46880.1的酶和来自Candida cloacae具有数据库编号CAB75351.1的酶。

根据本发明，在步骤c）中使用氨基转移酶。在优选的实施方案中，如本文所用的术语“氨基转移酶”理解为表示这样的酶，其催化α-氨基从供体（优选氨基酸）转移至受体分子，优选α-酮羧酸。在优选的实施方案中，如本文所用的术语“胺供体”理解为表示L-氨基酸，其氨基可以从氨基转移酶转移至α-酮羧酸，并形成氨基酸。在尤其优选的实施方案中，胺供体是L-丙氨酸。在优选的实施方案中，氨基转移酶选自氨基转移酶及其变体的组，其特征在于它在对应于恶臭假单胞菌GB-1的氨基转移酶(数据库编号YP_001668026.1)的Val224的氨基酸序列的位置处具有选自异亮氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸和亮氨酸的氨基酸，并且在对应于恶臭假单胞菌GB-1的氨基转移酶(数据库编号YP_001668026.1)的Gly230的氨基酸序列的位置处具有除苏氨酸之外的氨基酸，并且优选是选自丝氨酸、半胱氨酸、赖氨酸和丙氨酸的氨基酸。在尤其优选的实施方案中，氨基转移酶选自来自青紫色素杆菌（Chromobacterium violaceum）DSM30191的ω-氨基转移酶，来自恶臭假单胞菌GB-1、恶臭假单胞菌W619、来自铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）PA01、天蓝色链霉菌（Streptomyces coelicolor）A3(2)、恶臭假单胞菌(数据库编号YP_001668026)、恶臭假单胞菌(数据库编号YP_001668026.1或YP_001671460)、类球红细菌（Rhodobacter sphaeroides）(菌株ATCC 17023；数据库编号YP_353455)和阿维链霉菌（Streptomyces avermitilis）MA 4680的氨基转移酶及其变体。

在优选的实施方案中，如本文所用的术语“丙氨酸脱氢酶”理解为表示消耗水和NAD(P)⁺催化L-丙氨酸转化为丙酮酸、氨和NAD(P)H的酶。优选地，丙氨酸脱氢酶是胞内丙氨酸脱氢酶，甚至更优选细菌全细胞催化剂的重组胞内丙氨酸脱氢酶。实例包括来自以下的酶：豌豆根瘤菌（Rhizobium leguminosarum）(数据库编号YP_002975437)、巨大芽孢杆菌(数据库编号YP_003565624), 荚膜红细菌（Rhodobacter capsulatus） (数据库编号ADE84249.1)和枯草芽孢杆菌(数据库编号NP_391071)。

在步骤b）中的醇脱氢酶（如果它是NAD(P)依赖的醇脱氢酶）每个反应的底物分子消耗一分子的氧化还原辅因子NAD(P)H时，氨基脱氢酶氧化NAD(P)H。因此，使用其中醇脱氢酶和氨基酸脱氢酶转化相同氧化还原辅因子的系统是特别有优势的。NADP依赖的醇脱氢酶包括来自大肠杆菌的酶(YjgB, 数据库编号ZP_07117674)和来自大肠杆菌的其他酶(YahK, 数据库编号BAE76108.1)。NAD依赖的醇脱氢酶包括来自大肠杆菌的酶(AdhP, 数据库编号ZP_07145023)、来自枯草芽孢杆菌的酶(数据库编号NP_391071)、来自嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus）的酶(数据库编号P42328.1)和来自豌豆根瘤菌（Rhizobium leguminosarum）的酶(数据库编号YP_002975437)。NADP依赖的丙氨酸脱氢酶包括来自荚膜红细菌（Rhodobacter capsulatus）的酶(数据库编号ADE84249.1)。NAD依赖的丙氨酸脱氢酶包括来自枯草芽孢杆菌枯草亚种168株的丙氨酸脱氢酶(数据库编号NP_391071)。

本发明的教导不仅仅可以使用本文描述的生物大分子的准确的氨基酸或核酸序列来进行或应用于其上，还可以使用那些大分子的变体（其可以通过缺失、添加或取代一个或多于一个的氨基酸或核酸来获得）来进行或应用于其上。在优选的实施方案中，如本文所用的术语核酸序列或氨基酸序列的“变体”（其在下文中用术语“同源物(Homologon)”同义或可交换使用）意指另一条核酸或氨基酸序列，其相对于对应的原始野生型核酸或氨基酸序列，具有70、75、80、85、90、92、94、96、98、99%或更高百分比的同源性（本文用同一性同义使用），其中优选除形成催化活性中心的氨基酸或对于结构或折叠必需的氨基酸之外的氨基酸被缺失或取代或者此类仅保守取代，例如谷氨酸替代天冬氨酸或亮氨酸替代缬氨酸。现有技术描述了可用于计算两条序列同源性程度的算法，例如Arthur Lesk (2008), Introduction to Bioinformatics, 第3版。在本发明进一步更优选的实施方案中，氨基酸或核酸序列的变体，优选除上述序列同源性之外，具有与野生型分子或原始分子基本上相同的酶促活性。例如，有蛋白酶酶促活性的多肽的变体具有与多肽酶相同或基本上相同的蛋白水解活性，即催化肽键水解的能力。在一个具体的实施方案中，术语“基本上相同的酶促活性”表示这样的活性，其对于野生型多肽的底物而言，明确地在本底活性之上或/和在K_M和/或k_催化值上与野生型多肽对于相同底物展示出的不同，低3个、优选2个、更优选1个数量级。在进一步优选的实施方案中，术语核酸或氨基酸序列的“变体”包括核酸或氨基酸序列的至少一个活性部分/或片段。在进一步优选的实施方案中，如本文所用的术语“活性部分”表示氨基酸序列或核酸序列，其具有少于氨基酸序列全长的序列或编码少于氨基酸序列全长的序列，其中比野生型氨基酸序列长度短的氨基酸序列或编码的氨基酸序列基本上具有与野生型多肽或其变体相同的酶促活性，例如蛋白酶。在一个具体的实施方案中，术语核酸的“变体”包括其互补链的优选在严格条件下与野生型核酸结合的核酸。杂交反应的严格性可以由本领域技术人员容易地确定，并通常依赖于探针的长度、洗涤温度和盐浓度。通常，更长的探针需要更高的杂交温度，而更短的探针在更低的温度下操作。杂交是否发生通常依赖于变性DNA与其环境中存在的互补链退火的能力以及低于解链温度。杂交反应的严格性和相应的条件详细描述于F M Ausubel (1995), Current Protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons, Inc。用于通过杂交鉴定DNA序列的说明可以由本领域技术人员尤其在来自Boehringer Mannheim GmbH的手册“The DIG System Users Guide for Filter Hybridization” (Mannheim, Germany, 1993)和在Liebl等(International Journal of Systematic Bacteriology 41: 255-260 (1991))中发现。在优选的实施方案中杂交在严格条件下进行，即仅形成其中探针和目标序列（即，用探针处理的多核苷酸）为至少70％相同的杂交物。已知杂交的严格性（包括洗涤步骤）受缓冲液组成、温度及盐浓度的变化所影响和/或由其确定。相比于洗涤步骤，杂交反应通常在相对低的严格性下进行(Hybaid Hybridisation Guide, Hybaid Limited, Teddington, UK, 1996)。对于杂交反应，例如，对应于5x SSC缓冲液的缓冲液可以在约50℃ - 68℃的温度下使用。其中，探针还可以与多核苷酸（其与探针序列具有少于70％的同一性）杂交。此类杂交物是更不稳定的，并且在严格条件下通过洗涤而去除。这可以通过例如降低盐浓度至2x SSC且任选随后0.5x SSC来实现(The DIG System User′s Guide for Filter Hybridisation, Boehringer Mannheim, Mannheim, Germany, 1995)，在这种情况下建立约50℃–68℃、约52℃–68℃、约54℃–68℃、约 56℃–68℃、约58℃–68℃、约60℃–68℃、约62℃–68℃、约64℃–68℃、约66℃–68℃的温度，这是渐增的优选次序。优选约64℃–68℃或约66℃–68℃的温度范围。任选可以降低盐浓度至对应于0.2 x SSC或0.1 x SSC的浓度。借助于在步骤中杂交温度从50℃至68℃约1–2℃的逐步提高，可以分离多核苷酸片段，例如其与使用的核酸分子序列具有至少70％或至少80％或至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性，这是渐增的优选次序。关于杂交的进一步说明可以以所谓试剂盒的形式商购可得(例如来自Roche Diagnostics GmbH, Mannheim, Germany,的DIG Easy Hyb，目录号1603558)。在优选的实施方案中，如本文所用，术语核酸的“变体”包含编码与原始核酸相同的氨基酸序列的或在根据遗传密码简并性的情况下该氨基酸序列的变体的任何核酸序列。

如果根据本发明使用全细胞催化剂，则优选的是这样的细胞，其具有相比于其野生型至少一种催化脂肪酸的β-氧化反应之一的酶降低的活性，并且所述酶优选选自脂肪酸输入蛋白、脂肪酸-CoA连接酶、酰基-CoA脱氢酶、2,4-二烯酰基-CoA还原酶、烯酰基-CoA水合酶和3-酮酰基-CoA硫解酶。脂肪酸的β-氧化是广为人知的代谢途径，其同样使得原核生物和真核生物能够氧化脂肪酸并且使其中存在的化学能量可用于代谢(Y Fujita, H Matsuoka和K Hirooka (2007) Mol. Microbiology 66(4), 829-839)。在进一步的意义上，它开始于摄入脂肪酸进入细胞，在大肠杆菌的情况下为借助于转运蛋白FadL (P N Black (1991) J. Bacteriol. 173, 435-442)，其引导其穿过革兰氏阴性细菌细胞的外膜或内膜，和借助于FadD基因产物(P N Black, C C DiRusso, A K Metzger和T L Heimert (1992) J. Biol. Chem. 267, 25513-25520)，其将脂肪酸以CoA酯的形式释放入细胞溶胶中。其中，如果条件需要，则将脂肪酸首先通过酰基-CoA脱氢酶在CoA脂肪酸酯的β位处氧化，在大肠杆菌的情况下为FadE (J. W. Campbell & J. E. Cronan (200) J. Bacteriol.184, 3759-3764)。类似分子也可以可替换地从双不饱和脂肪酸通过2,4-二烯酰基-CoA还原酶还原来形成，在大肠杆菌的情况下为FadH。多功能酶烯酰基-CoA水合酶/3-羟基酰基-CoA脱氢酶（在大肠杆菌的情况下为FadB）然后催化水合以形成伯醇及其随后氧化为酮。在最后一步中，3-酮酰基-CoA硫解酶（在大肠杆菌的情况下为FadA）催化酮酰基-CoA的裂解，结果是释放乙酰-CoA和相比于起始分子少两个碳原子的脂肪酸的CoA酯。如果它并非同样也是乙酰CoA，则后者再次进入β氧化循环并经氧化缩短。还参与脂肪酸的β-氧化调节的是FadR，其是Fad操纵子的调控蛋白，所述操纵子包括降解脂肪酸所需的基因， FadR没有催化β-氧化的反应。在优选的实施方案中，术语“催化脂肪酸的β-氧化反应之一的酶”理解为表示与脂肪酸底物或在向乙酰-CoA的途径上由此产生的分子直接相互作用的任何酶，优选识别它作为底物，并且催化其转化为在该降解途径上更靠近乙酰-CoA的代谢产物，优选包括脂肪酸输入蛋白，其作用于脂肪酸摄入细胞。例如，根据前述定义，这些酶包括酰基-CoA脱氢酶，因为它与脂肪酸-CoA酯相互作用并催化它转化为烯酰-CoA，其在β-氧化的代谢途径上比脂肪酸-CoA酯更靠近乙酰-CoA。在优选的实施方案中，如本文所用的术语“催化脂肪酸的β-氧化反应之一的酶”理解为表示来自包含来自大肠杆菌的基因产物FadA、FadB、FadD、FadL和FadE和/或其变体或包含来自其他生物的同源物的任何酶。来自大肠杆菌的基因产物FadA、FadB、FadD、FadL和FadE以及变体和来自大量其他生物技术上有用的生物的同源物及其核酸和多肽序列描述于现有技术中，例如在登录号AP009048.1下的FadA、在登录号BAE77457.1下的FadB、在登录号BAA15609.1下的FadD、在登录号BAA77891.2下的FadE、在登录号BAA16205.1下的FadL。

随着现代遗传学、微生物学和分子生物学方法的发展，大量工具对于本领域技术人员是可用的，用这些方法技术人员能够常规测量并影响活细胞中存在的酶促活性。为了测定以粒珠的悬浮液形式存在的或可以以细胞培养物的处理过形式取出的酶的活性，可以使用酶标准测试并评价，如描述于教科书中，例如A Cornish-Bowden (1995), Fundamentals of Enzyme Kinetics, Portland Press Limited。现有技术公开了特别适合于测量催化脂肪酸的β-氧化反应之一的酶的活性的大量测试，例如在K Kameda & W D Nunn (1981) J. Biol. Chem. 256, 5702-5707；Hi Marrakchi, W E DeWolf, C Quinn, J West, B J Polizzi, C Y So等(2003) Biochem. J. 370, 1055-1062；S Lobo, G Florova和K A Reynolds (2001) Biochemistry 40 (39), 11955-64和X Yu, T Liu, F Zhu和C Khosla (2011) PNAS，印刷前的电子发表。用于降低细胞中酶活性的常规可用方法，例如通过暴露于放射性辐射随后富集或筛选突变体来非定向诱变细胞、通过点突变的定点插入或通过编码染色体上整合入细胞中的活性酶的基因的敲除，也描述于现有技术中，例如在Sambrook/Fritsch/Maniatis (1989): Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 第2版或在Fuchs/Schlegel (2007) Allgemeine Mikrobiologie, 2008, Georg Thieme Verlag中。在Fad基因产物的具体情况下，过表达转录阻抑蛋白，例如FadR(Y Fujita, H Matsuoka和K Hirooka (2007) Mol.Microbiology 66(4), 829-839)也适合于降低活性。基于RNA干扰的活性降低(T Tuschl (2001) ChemBioChem 2: 239-145)或使用特异性抑制剂也是可以的。在优选的实施方案中，如本文所用的措辞酶的“其中细胞具有相比于其野生型降低的活性”表示在修饰的细胞中酶活性相比于野生型细胞中相同酶的活性降低。在优选的实施方案中，相对降低为5、10、20、40、50、75、90、95、99或更高百分比的活性的降低，这是渐增的优选次序。在尤其优选的实施方案中，相比于背景的酶活性可以不再能检测到。

如果根据本发明使用全细胞催化剂，则如果全细胞催化剂是相对于细胞的野生型至少一种内源醛脱氢酶活性降低的细胞，它是更有利的。在优选的实施方案中，如本文所用的术语“内源醛脱氢酶”理解为表示能够催化醛向对应的羧酸的氧化并且天然存在于所用细胞的野生型的基因组中的酶。大肠杆菌内源的醇脱氢酶的一个实例是具有数据库编号BAA15032.1 (AldA)的酶及其变体。

本发明包括具有以下多肽（Polyp）-及核苷酸（DNA）序列的序列方案：

SEQ ID NO	类型	描述
			1	Polyp	来自食油假单胞菌的AlkL(数据库编号Q00595)
2	DNA	来自食油假单胞菌的AlkL(数据库编号Q00595)
			3	Polyp	来自恶臭假单胞菌的AlkL(数据库编号CAB69081)
4	DNA	来自恶臭假单胞菌的AlkL(数据库编号CAB69081)
			5	Polyp	来自水油海杆菌VT8的AlkL(数据库编号YP_957722)
6	DNA	来自水油海杆菌VT8的AlkL(数据库编号YP_957722)
			7	Polyp	来自亚历山大海洋柄菌HTCC2633的AlkL (数据库编号ZP_00953584)
8	DNA	来自亚历山大海洋柄菌HTCC2633的AlkL (数据库编号ZP_00953584)
			9	Polyp	来自Marinobacter manganoxydans MnI7-9的AlkL (数据库编号ZP_09158756)
10	DNA	来自Marinobacter manganoxydans MnI7-9的AlkL (数据库编号ZP_09158756)
			11	Polyp	来自柄杆菌属种（Caulobacter sp.） K31的AlkL(数据库编号YP_001672217)
12	DNA	来自柄杆菌属种（Caulobacter sp.） K31的AlkL(数据库编号YP_001672217)
			13	Polyp	来自泊库岛食烷菌SK2的铁氧还蛋白还原酶 (数据库编号YP_691923)
14	DNA	来自泊库岛食烷菌SK2的铁氧还蛋白还原酶 (数据库编号YP_691923)
			15	Polyp	来自泊库岛食烷菌SK2的铁氧还蛋白 (数据库编号YP_691920)
16	DNA	来自泊库岛食烷菌SK2的铁氧还蛋白 (数据库编号YP_691920)
			17	Polyp	来自大肠杆菌MS 187-1的NAD依赖的醇脱氢酶 (数据库编号ZP_07145023)
18	DNA	来自大肠杆菌MS 187-1的NAD依赖的醇脱氢酶 (数据库编号ZP_07145023)
			19	Polyp	来自泊库岛食烷菌SK2的CYP153家族 (数据库编号YP_691921)
20	DNA	来自泊库岛食烷菌SK2的CYP153家族 (数据库编号YP_691921)
			21	Polyp	LL(I/L)(V/I)GGNDTTRN
22	Polyp	来自枯草芽孢杆菌枯草亚种168株的丙氨酸脱氢酶(数据库编号NP_391071)
			23	DNA	来自枯草芽孢杆菌枯草亚种168株的丙氨酸脱氢酶(数据库编号NP_391071)
24	Polyp	来自青紫色素杆菌ATCC 12472的氨基转移酶 (数据库编号NP_901695)
			25	DNA	来自青紫色素杆菌ATCC 12472的氨基转移酶 (数据库编号NP_901695)
26	Polyp	葡萄糖-甲醇-胆碱-氧化还原酶家族的氧化还原酶(缺失AlkJ Q00593)
			27	DNA	葡萄糖-甲醇-胆碱-氧化还原酶家族的氧化还原酶(缺失AlkJ Q00593)
28	Polyp	葡萄糖-甲醇-胆碱-氧化还原酶家族的氧化还原酶YP_694430 (Ab_AlkJ)
			29	DNA	葡萄糖-甲醇-胆碱-氧化还原酶家族的氧化还原酶YP_694430 (Ab_AlkJ)
30	Polyp	铁氧还蛋白还原酶(YP_957889(Maqu_FdOR)
			31	DNA	铁氧还蛋白还原酶(YP_957889(Maqu_FdOR)
32	Polyp	铁氧还蛋白还原酶(BAE78453 (Ac_FdOR))
			33	DNA	铁氧还蛋白还原酶(BAE78453 (Ac_FdOR))
34	Polyp	铁氧还蛋白YP_957887 (Maqu_Fd)
			35	DNA	铁氧还蛋白YP_957887 (Maqu_Fd)
36	Polyp	铁氧还蛋白BAE78451 (Ac_Fd)
			37	DNA	铁氧还蛋白BAE78451 (Ac_Fd)
38	Polyp	来自柄杆菌属种K31的葡萄糖-甲醇-胆碱-氧化还原酶家族的氧化还原酶(数据库编号ABZ74557.1)
			39	DNA	来自柄杆菌属种K31的葡萄糖-甲醇-胆碱-氧化还原酶家族的氧化还原酶(数据库编号ABZ74557.1)
40	Polyp	来自热带念珠菌的含黄素的醇脱氢酶(数据库编号AAS46878.1)
			41	DNA	来自热带念珠菌的含黄素的醇脱氢酶(数据库编号AAS46878.1)
42	Polyp	来自水油海杆菌VT8的CYP153家族 (数据库编号YP_ YP_957888)
			43	DNA	来自水油海杆菌VT8的CYP153家族 (数据库编号YP_ YP_957888)
44	Polyp	来自不动杆菌属种OC4（Acinetobacter sp. OC4）的CYP153家族 (数据库编号YP_ YP_957888)
			45	DNA	来自不动杆菌属种OC4（Acinetobacter sp. OC4）的CYP153家族 (数据库编号YP_ YP_957888)
46	Polyp	来自恶臭假单胞菌的醇脱氢酶(数据库编号CAB54054)
			47	DNA	来自恶臭假单胞菌的醇脱氢酶(数据库编号CAB54054)
48	Polyp	来自恶臭假单胞菌的氨基转移酶(数据库编号YP_001668026)
			49	DNA	来自恶臭假单胞菌的氨基转移酶(数据库编号YP_001668026)
50	DNA	AlkB启动子
			51	DNA	引物Fd_CYP153
52	DNA	引物pHg-LL-08
			53	DNA	引物pHg-LL-09
54	DNA	引物pHg-LL-10
			55	DNA	引物pHg-LL-11
56	DNA	引物pHg-LL-06
			57	DNA	载体pCOM10
58	DNA	表达载体pCOM[Ab_Fd/CYP153-2/FdOR/alkL]
			59	Polyp	来自热带念珠菌的CYP52家族 (数据库编号AAO73952)
60	DNA	CYP52A
			61	Polyp	来自热带念珠菌的CYP52家族 (数据库编号AAO73958)
62	DNA	来自热带念珠菌的CYP52家族 (数据库编号AAO73958)
			63	Polyp	NADPH-依赖的细胞色素P450氧化还原酶 (数据库编号P37201)
64	DNA	NADPH-依赖的细胞色素P450氧化还原酶 (数据库编号P37201)
			65	DNA	pCOM10-Ct CYP52A12_co加OR_co
66	DNA	pCOM10-Ct CYP52A17_co加OR_co

本发明通过以下附图和非限定性实施例进一步说明，从中可以获得本发明的进一步的特征、实施方案、方面和优点。

实施例1

基因来自泊库岛食烷菌SK2的CYP153、Fd和FdOR和来自食油假单胞菌的alkL的表达载体的制备

为了制备来自泊库岛食烷菌的基因CYP153 (SEQ ID No. 20)、Fd (SEQ ID No. 16)和FdOR (SEQ ID No. 14)以及来自食油假单胞菌的基因alkL (SEQ ID No. 2)的大肠杆菌表达载体，将基因在alkB启动子(SEQ ID No. 50)控制下克隆到质粒pCOM10中。通过插入用于重组克隆的同源区来扩增不同的DNA片段。所用模板为各个染色体DNA。

将以下寡核苷酸用于扩增各个片段：

以下参数用于PCR：

Fd-CYP153

变性: 98℃ 30s

变性: 98℃ 10s 35x

退火: 62℃ 20s 35x

延长: 72℃ 1:10 min 35x

最后延长: 72℃ 10 min

FdOR

变性: 98 ℃ 30s

变性: 98℃ 10s 35x

退火: 53℃ 20s 35x

延长: 72℃ 55s 35x

最后延长: 72℃ 10 min

alkL

变性: 98℃ 30s

变性: 98℃ 10s 25x

退火: 65℃ 20s 25x

延长: 72℃ 18s 25x

最后延长: 72℃ 10 min。

对于扩增，按照制造商推荐，使用来自New England Biolabs (Frankfurt)的Phusion? High-Fidelity Master Mix。在每一种情况下，随后将50 μl的PCR反应产物在1%强度的TAE琼脂糖凝胶上分离。PCR、琼脂糖凝胶电泳、DNA的溴化乙啶染色和PCR片段大小的确定的执行均以本领域技术人员已知的方式进行。在所有情况下，能够扩增到预期大小的PCR片段(Fd-CYP153: 1800 bp; FdOR: 1276 bp; alkL: 745 bp)。为了分离并纯化DNA，将PCR产物用手术刀从制备凝胶中切出并使用QiaQuick凝胶提取试剂盒按照制造商说明书(Qiagen, Hilden)纯化。使用Geneart? Seamless Cloning and Assembly Kit按照制造商说明书(Life Technologies, Carlsbad, CA, USA)将纯化的PCR产物在alkB启动子(SEQ ID No. 50)后克隆入pCOM10载体(SEQ ID No. 57)，其已用EcoRI-HF和SalI切割。以本领域技术人员已知的方式进行化学感受态大肠杆菌10β细胞(New England Biolabs, Frankfurt)的转化。通过限制性分析检验目标基因的正确插入，并通过DNA测序确定插入基因的可靠性。产生的表达载体称为pCOM[Ab_Fd / CYP153-2 / FdOR / alkL] (SEQ ID No. 58)。

实施例2

基因来自热带念珠菌的CYP52A12和OR和来自食油假单胞菌的alkL表达载体的制备

为了制备来自热带念珠菌的基因CYP52A12 (SEQ ID No. 60)和OR (SEQ ID No. 64)和来自食油假单胞菌的基因alkL (SEQ ID No. 2)的大肠杆菌表达载体，将基因CYP52A12和OR在计算机上（in Silico）对在大肠杆菌中表达进行密码子优化，并与基因alkL一同合成为操纵子。在合成过程中，将AscI和SalI的切割位点插入到CYP52A12基因的上游和alkL基因的下游。用限制性内切核酸酶AscI和SalI消化合成的DNA片段CYP52A12_OR_alkL，连接入相应切割的载体pCOM10中，并将产物转化入化学感受态大肠杆菌10β细胞(New England Biolabs, Frankfurt)中。完成的载体称为pCOM10-Ct CYP52A12_co加OR_co (SEQ ID No. 65)。

实施例3

基因来自热带念珠菌的CYP52A17和OR和来自食油假单胞菌的alkL表达载体的制备

为了制备来自热带念珠菌的基因CYP52A17 (SEQ ID No. 62)和OR (SEQ ID No. 64)和来自食油假单胞菌的基因alkL (SEQ ID No. 2)的大肠杆菌表达载体，将基因CYP52A17和OR在计算机上对在大肠杆菌中表达进行密码子优化，并与基因alkL一同合成为操纵子。在合成过程中，将AscI和SalI的切割位点插入到CYP52A17基因的上游和alkL基因的下游。用限制性内切核酸酶AscI和SalI消化合成的DNA片段CYP52A12_OR_alkL，连接入相应切割的载体pCOM10中，并将产物转化入化学感受态大肠杆菌10β细胞(New England Biolabs, Frankfurt)中。完成的载体称为pCOM10-Ct CYP52A17_co加OR_co (SEQ ID No. 66)。

实施例4

通过具有基因来自泊库岛食烷菌SK2的CYP153、Fd和FdOR和来自食油假单胞菌的alkL或基因来自热带念珠菌的CYP52A17和OR和来自食油假单胞菌的alkL的表达载体的大肠杆菌菌株生产羟基月桂酸甲酯

为了产生具有表达载体pCOM[Ab_Fd / CYP153-2 / FdOR / alkL]或pCOM10-Ct CYP52A17_co加OR_co的大肠杆菌菌株，制备大肠杆菌W3110的电感受态细胞。这以本领域技术人员已知的方式进行。大肠杆菌W3110在每种情况下用两种列出的质粒之一转化并铺板到具有卡那霉素(50 μg/ml)的LB琼脂板上。通过质粒制备和分析性限制性分析来检查转化子中正确质粒的存在。以这种方式构建以下菌株：

使菌株进行补料分批发酵以研究它们从月桂酸甲酯产生羟基月桂酸甲酯、氧代月桂酸甲酯和羧基月桂酸甲酯的能力。这用来自DASGIP的8倍平行发酵系统来进行。

对于发酵，使用1L反应器，其装备有顶置式搅拌器和叶轮涡轮。为了监测过程，在线测量pH和pO₂。尤其是OTR/CTR测量用于估计细胞的代谢活性和适合性。

pH探针按照DASGIP的技术参考文献用pH 4.0和pH 7.0的测量溶液两点校准来进行校准。根据技术参考文献提供具有所需传感器和连接的反应器，并且装有搅拌器轴。随后用300 ml水装填反应器，并在121℃下高压灭菌20 min以确保无菌。连接到测量放大器后，将pO₂探针极化过夜（至少6 h）。随后在洁净台中去除水，并用高细胞密度培养基替换，所述培养基由以下组成：(NH₄)₂SO4 1.76 g/l、K₂HPO₄ 19.08 g/l、KH₂PO₄ 12.5 g/l、酵母提取物6.66 g/l、二水合柠檬酸三钠11.2 g/l、17 ml/l的滤器灭菌的1%强度的柠檬酸铁铵溶液和5 ml/l的滤器灭菌的痕量元素母液(其由HCl (37%) 36.50 g/l、MnCl₂*4H₂O 1.91 g/l、ZnSO₄*7H₂O 1.87 g/l、乙二胺四乙酸二水合物0.84 g/l、H₃BO₃0.30 g/l、Na₂MoO₄*2H₂O 0.25 g/l、CaCl₂*2H₂O 4.70 g/l、FeSO₄*7H₂O 17.80 g/l、CuCl₂*2H₂O 0.15 g/l组成)，具有15 g/l葡萄糖作为碳源(通过计量添加30 ml/l无菌补料溶液来添加，所述补料溶液由500 g/l葡萄糖、1% (w/v) MgSO₄*7H₂O和2.2% (w/v) NH₄Cl组成)，以及50 mg/l卡那霉素。

随后，将pO₂探针用单点校准（搅拌器：600 rpm / 通气: 10 sL/h空气）进行校准至100％，并且按照技术参考文献利用原地清理（Cleaning-in-Place）清理补料剂、校正剂和诱导剂部分(Strecken)。为此，将管首先用70％乙醇，随后用1 M NaOH，随后用无菌的去矿物质水冲洗，并最终用各种培养基装满。

所有前述的大肠杆菌菌株首先从冷冻培养物在具有50 mg/l卡那霉素的LB培养基(25 ml于100 ml磨口瓶(Schikanekolben)中)中在37℃和200 rpm下过夜培养约18 h。随后，将2 ml的该培养物在第二预培养阶段转移至在100 ml摇瓶中的25 ml的高细胞密度培养基中并在37℃/200 rpm下再培养6 h，所述培养基由以下组成：(NH₄)₂SO4 1.76 g/l、K₄HPO₂ 19.08 g/l、KH₂PO₄ 12.5 g/l、酵母提取物6.66 g/l、二水合柠檬酸三钠11.2 g/l、17 ml/l的滤器灭菌的1%强度的柠檬酸铁铵溶液和5 ml/l的滤器灭菌的痕量元素母液(其由HCl (37%) 36.50 g/l、MnCl₂*4H₂O 1.91 g/l、ZnSO₄*7H₂O 1.87 g/l、乙二胺四乙酸二水合物0.84 g/l、H₃BO₃0.30 g/l、Na₂MoO₄*2H₂O 0.25 g/l、CaCl₂*2H₂O 4.70 g/l、FeSO₄*7H₂O 17.80 g/l、CuCl₂*2H₂O 0.15 g/l组成)，具有15 g/l葡萄糖作为碳源(通过计量添加30 ml/l无菌补料溶液来添加，所述补料溶液由500 g/l葡萄糖、1% (w/v) MgSO₄*7H₂O和2.2% (w/v) NH₄Cl组成)，以及已描述的抗生素。

为了用0.1的光密度接种反应器，测量第二预培养阶段的OD₆₀₀，并计算接种所需的培养物的量。借助于5 ml注射器经过隔板将所需量的培养物添加入经调温的且充气的反应器中。

使用以下标准程序：

用12.5%强度的氨溶液在一侧将pH调节为pH 6.8。培养和生物转化过程中，经搅拌器速度和通气速率将培养物中的溶解氧(pO₂或DO)调解为至少30％。接种后，DO从100％降至该30％，其中它在发酵的剩余过程中保持稳定。

发酵作为补料分批进行，其中当进入补料期时，用由500 g/L葡萄糖、1% (w/v) MgSO₄*7H₂O和2.2% (w/v) NH₄Cl组成的5 g/l*h葡萄糖补料，经诱导分批期结束的DO峰引发补料开始。补料起始后，37℃的温度降低至30℃。补料起始10 h后，用0.025% (v/v) DCPK诱导氧化基因的表达。补料开始后14 h进行羟基月桂酸甲酯生产的开始（＝生物转化的开始）。为此目的，将150 ml的月桂酸甲酯和油酸（工业级90％）的混合物分批加入发酵液。

为了定量发酵样品中的LSME和HLS，在生物转化开始后1/2/4/20/22 h取样。制备这些样品用于分析。（参见产物基于LC-ESI/MS²的定量）。

产物基于LC-ESI/MS ²的定量

发酵样品中LSME和HCL的定量通过LC-ESI/MS ²参考所有分析物的外部校准(0.1–50 mg/l)并使用内标氨基十一烷酸(AUD对于HLSME)和d3-LSME (对于LSME)来进行。

在此使用以下仪器：

· 具有自动取样器(G1367E)、二元泵(G1312B)和柱加热器(G1316A)的HPLC系统1260 (Agilent; B?blingen)

· 具有ESI源的质谱仪TripelQuad 6410 (Agilent; B?blingen)

· HPLC柱：Kinetex C18, 100 x 2.1 mm, 颗粒大小: 2.6 μm, 孔径100 ? (Phenomenex; Aschaffenburg)

· 预柱：KrudKatcher Ultra HPLC串联滤器; 0.5 μm滤器深度和0.004 mm内径(Phenomenex; Aschaffenburg)。

通过移液器吸取1900 μL溶剂(80% (v/v)乙腈、20% 双蒸水(v/v)和0.1%甲酸)和100 μL样品至2 mL反应容器中来制备样品。将混合物涡旋约10秒并随后以约13 000 rpm离心5 min。使用移液器将澄清的上清液移除，并在用稀释剂(80% (v/v) ACN、20%双蒸水 (v/v)和0.1%甲酸)合适稀释后分析。用移液器将100 μL的ISTD加入到每一900 μL样品中(对于90 μL的样品体积为10 μL)。

用上述柱或预柱进行HPLC分离。注射体积为0.7 μl，柱温为50℃，流速为0.6 ml/min。流动相由洗脱液A(0.1%强度(v/v)甲酸水溶液)和洗脱液B (含0.1% (v/v)甲酸的乙腈)组成。使用以下梯度概况：

用ESI源的以下参数以正极模式进行ESI-MS²分析：

· 气体温度280℃

· 气体流速11 L/min

· 雾化器压力50 psi

· 毛细管电压4000 V。

化合物DDS、DDSME、HLS、HLSME、OLS、OLSME的检测和定量用以下MRM参数进行，在每种情况下一种产物离子用作定性物，一种用作定量物：

以SIM模式(m/z 201和215)检测分析物LSME。

能够显示大肠杆菌菌株W3110 pCOM[Ab_Fd / CYP153-2 / FdOR / alkL]能够从月桂酸甲酯形成ω-羟基月桂酸甲酯。菌株大肠杆菌W3110 pCOM10-Ct CYP52A17_co加OR_co能够转化月桂酸甲酯为ω-羟基月桂酸甲酯或进一步的氧化产物，仅以明显较低的程度。

月桂酸甲酯和ω-羟基月桂酸甲酯的浓度在22小时的发酵时间后给出。

实施例5（预知的）

通过具有基因来自泊库岛食烷菌SK2的CYP153、Fd和FdOR和来自食油假单胞菌的alkL或基因来自热带念珠菌的CYP52A12和OR和来自食油假单胞菌的alkL的表达载体的大肠杆菌菌株生产羟基月桂酸甲酯

为了产生具有表达载体pCOM[Ab_Fd / CYP153-2 / FdOR / alkL]或pCOM10-Ct CYP52A12_co加OR_co的大肠杆菌菌株，制备大肠杆菌W3110的电感受态细胞。这以本领域技术人员已知的方式进行。大肠杆菌W3110在每种情况下用两种列出的质粒之一转化并铺板到具有卡那霉素(50 μg/ml)的LB琼脂板上。通过质粒制备和分析性限制性分析来检查转化子中正确质粒的存在。以这种方式构建以下菌株：

· 大肠杆菌W3110 pCOM[Ab_Fd / CYP153-2 / FdOR / alkL]

· 大肠杆菌W3110 pCOM10-Ct CYP52A12_co加OR_co

使所述菌株进行补料分批发酵以研究它们产生HLSME的能力。这用来自DASGIP的8倍平行发酵系统来进行。

用装备有顶置式搅拌器和叶轮涡轮的1L反应器用于发酵。在线测量pH和pO₂用于监测过程。尤其是OTR/CTR测量用于估计细胞的代谢活性和适合性。

随后，将pO₂探针用单点校准（搅拌器：600 rpm / 通气: 10 sL/h空气）进行校准至100％，并且按照技术参考文献利用原地清理清理补料剂、校正剂和诱导剂部分。为此，将管首先用70％乙醇，随后用1 M NaOH，随后用无菌的去矿物质水冲洗，并最终用各种培养基装满。

所有前述的大肠杆菌菌株首先从冷冻培养物在具有50 mg/l卡那霉素的LB培养基(25 ml于100 ml磨口瓶中)中在37℃和200 rpm下过夜培养约18 h。随后，将2 ml的该培养物在第二预培养阶段转移至在100 ml摇瓶中的25 ml的高细胞密度培养基中并在37℃/200 rpm下再培养6 h，所述培养基由以下组成：(NH₄)₂SO₄ 1.76 g/l、K₄HPO₂ 19.08 g/l、KH₂PO₄ 12.5 g/l、酵母提取物6.66 g/l、二水合柠檬酸三钠11.2 g/l、17 ml/l的滤器灭菌的1%强度的柠檬酸铁铵溶液和5 ml/l的滤器灭菌的痕量元素母液(其由HCl (37%) 36.50 g/l、MnCl₂*4H₂O 1.91 g/l、ZnSO₄*7H₂O 1.87 g/l、乙二胺四乙酸二水合物0.84 g/l、H₃BO₃0.30 g/l、Na₂MoO₄*2H₂O 0.25 g/l、CaCl₂*2H₂O 4.70 g/l、FeSO₄*7H₂O 17.80 g/l、CuCl₂*2H₂O 0.15 g/l组成)，具有15 g/l葡萄糖作为碳源(通过计量添加30 ml/l无菌补料溶液来添加，所述补料溶液由500 g/l葡萄糖、1% (w/v) MgSO₄*7H₂O和2.2% (w/v) NH₄Cl组成)，以及已描述的抗生素。

使用以下标准程序：

用12.5%强度的氨溶液在一侧将pH调节为pH 6.8。培养和生物转化过程中，经搅拌器速度和通气速率将培养物中的溶解氧(pO₂或DO)调解为至少30％。接种后，DO从100％掉至该30％，其中它在发酵的剩余过程中保持稳定。

发酵作为补料分批进行，其中当进入补料期时，用由500 g/L葡萄糖、1% (w/v) MgSO4*7H₂O和2.2% (w/v) NH₄Cl组成的5 g/l*h葡萄糖，经指示分批期结束的DO峰引发补料开始。补料起始后，37℃的温度降低至30℃。补料起始后10 h，用0.025% (v/v) DCPK诱导氧化基因的表达。补料开始后14 h进行羟基月桂酸甲酯生产的开始（＝生物转化的开始）。为此目的，将150 ml的月桂酸甲酯和油酸（工业级90％）的混合物分批加入发酵液。

为了定量发酵样品中的LSME和HLSME，在生物转化开始后1/2/4/20/22 h取样。制备这些样品用于分析。（参见产物基于LC-ESI/MS²的定量）。

产物基于LC-ESI/MS²的定量

发酵样品中LSME和HLSME的定量通过LC-ESI/MS²参考所有分析物的外部校准(0.1–50 mg/l)并使用内标氨基十一烷酸(AUD对于HLSME)和d3-LSME (对于LSME)来进行。

在此采用以下设备：

· 具有ESI源的质谱仪TripelQuad 6410 (Agilent; B?blingen)

· HPLC柱：Kinetex C18, 100 x 2.1 mm, 颗粒大小:2.6 μm, 孔径100 ? (Phenomenex; Aschaffenburg)

通过移液器吸取1900 μL溶剂(80% (v/v)乙腈、20% 双蒸水(v/v)和0.1%甲酸)和100 μL样品至2 mL反应容器中来制备样品。将混合物涡旋约10秒并随后以约13 000 rpm离心5 min。使用移液器将澄清的上清液移除，并在用稀释剂(80% (v/v) ACN、20%双蒸水(v/v)和0.1%甲酸)合适稀释后分析。用移液器将100 μL的ISTD加入到每一900 μL样品中(对于90 μL的样品体积为10 μL)。

用上述柱或预柱进行HPLC分离。注射体积为0.7 μl，柱温为50℃，并且流速为0.6 ml/min。流动相由洗脱液A(0.1%强度(v/v)甲酸水溶液)和洗脱液B (含0.1% (v/v)甲酸的乙腈)组成。使用以下梯度概况：

用ESI源的以下参数以正极模式进行ESI-MS²分析：

· 气体温度280℃

· 气体流速11 L/min

· 雾化器压力50 psi

· 毛细管电压4000 V。

化合物HLSME的检测和定量用以下MRM参数进行，在每种情况下一种产物离子用作定性物，一种用作定量物：

以SIM模式检测分析物(m/z 201和215)。

发现大肠杆菌菌株W3110 pCOM[Ab_Fd / CYP153-2 / FdOR / alkL]能够从月桂酸甲酯形成ω-羟基月桂酸甲酯。菌株大肠杆菌W3110 pCOM10-Ct CYP52A12_co加OR_co能够转化月桂酸甲酯为ω-羟基月桂酸甲酯或其他氧化产物，仅以较低的程度。

事实上，在前面说明书、权利要求和实施例中公开的本发明的特征可以单独地或以任何期望的组合以其多种实施方案来实现本发明。

序列表

<110> Evonik Industries AG

<120> 脂肪酸的酶促ω氧化和ω氨基化

<130> 2012E00056 DE

<160> 66

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 230

<212> PRT

<213> 食油假单胞菌

<400> 1

Met Ser Phe Ser Asn Tyr Lys Val Ile Ala Met Pro Val Leu Val Ala

1 5 10 15

Asn Phe Val Leu Gly Ala Ala Thr Ala Trp Ala Asn Glu Asn Tyr Pro

20 25 30

Ala Lys Ser Ala Gly Tyr Asn Gln Gly Asp Trp Val Ala Ser Phe Asn

35 40 45

Phe Ser Lys Val Tyr Val Gly Glu Glu Leu Gly Asp Leu Asn Val Gly

50 55 60

Gly Gly Ala Leu Pro Asn Ala Asp Val Ser Ile Gly Asn Asp Thr Thr

65 70 75 80

Leu Thr Phe Asp Ile Ala Tyr Phe Val Ser Ser Asn Ile Ala Val Asp

85 90 95

Phe Phe Val Gly Val Pro Ala Arg Ala Lys Phe Gln Gly Glu Lys Ser

100 105 110

Ile Ser Ser Leu Gly Arg Val Ser Glu Val Asp Tyr Gly Pro Ala Ile

115 120 125

Leu Ser Leu Gln Tyr His Tyr Asp Ser Phe Glu Arg Leu Tyr Pro Tyr

130 135 140

Val Gly Val Gly Val Gly Arg Val Leu Phe Phe Asp Lys Thr Asp Gly

145 150 155 160

Ala Leu Ser Ser Phe Asp Ile Lys Asp Lys Trp Ala Pro Ala Phe Gln

165 170 175

Val Gly Leu Arg Tyr Asp Leu Gly Asn Ser Trp Met Leu Asn Ser Asp

180 185 190

Val Arg Tyr Ile Pro Phe Lys Thr Asp Val Thr Gly Thr Leu Gly Pro

195 200 205

Val Pro Val Ser Thr Lys Ile Glu Val Asp Pro Phe Ile Leu Ser Leu

210 215 220

Gly Ala Ser Tyr Val Phe

225 230

<210> 2

<211> 693

<212> DNA

<213> 食油假单胞菌

<400> 2

atgagttttt ctaattataa agtaatcgcg atgccggtgt tggttgctaa ttttgttttg 60

ggggcggcca ctgcatgggc gaatgaaaat tatccggcga aatctgctgg ctataatcag 120

ggtgactggg tcgctagctt caatttttct aaggtctatg tgggtgagga gcttggcgat 180

ctaaatgttg gagggggggc tttgccaaat gctgatgtaa gtattggtaa tgatacaaca 240

cttacgtttg atatcgccta ttttgttagc tcaaatatag cggtggattt ttttgttggg 300

gtgccagcta gggctaaatt tcaaggtgag aaatcaatct cctcgctggg aagagtcagt 360

gaagttgatt acggccctgc aattctttcg cttcaatatc attacgatag ctttgagcga 420

ctttatccat atgttggggt tggtgttggt cgggtgctat tttttgataa aaccgacggt 480

gctttgagtt cgtttgatat taaggataaa tgggcgcctg cttttcaggt tggccttaga 540

tatgaccttg gtaactcatg gatgctaaat tcagatgtgc gttatattcc tttcaaaacg 600

gacgtcacag gtactcttgg cccggttcct gtttctacta aaattgaggt tgatcctttc 660

attctcagtc ttggtgcgtc atatgttttc taa 693

<210> 3

<211> 230

<212> PRT

<213> 恶臭假单胞菌

<400> 3

Met Asn Pro Pro Ile Leu Lys Lys Leu Ala Met Ser Ile Leu Ala Thr

1 5 10 15

Ser Phe Val Leu Gly Gly Ala Ser Ala Trp Ser Gly Glu Ile Tyr Ser

20 25 30

Thr Glu Thr Ala Gly Tyr Asn Gln Gly Asp Trp Val Ala Ser Phe Asn

35 40 45

Met Ser Lys Val Tyr Val Asp Glu Thr Leu Gly Ser Leu Asn Val Gly

50 55 60

Gly Ala Thr Val Pro Asn Ala Ala Val Ser Ile Gly Asn Asp Thr Thr

65 70 75 80

Val Ser Phe Asp Ile Ser Tyr Phe Ile Ser Asn Asn Val Ala Leu Asp

85 90 95

Phe Phe Val Gly Ile Pro Ala Lys Ala Lys Phe Gln Gly Glu Lys Ser

100 105 110

Ile Ser Ala Leu Gly Arg Val Ser Glu Val Asp Tyr Gly Pro Ala Ile

115 120 125

Leu Ser Leu Gln Tyr His Phe Asp Asn Phe Glu Arg Leu Tyr Pro Tyr

130 135 140

Val Gly Leu Gly Val Gly Arg Val Phe Phe Phe Asp Lys Thr Asp Gly

145 150 155 160

Ala Leu Thr Ser Phe Asp Ile Lys Asp Lys Trp Ala Pro Ala Val Gln

165 170 175

Val Gly Leu Arg Tyr Asp Phe Gly Asn Ser Trp Met Leu Asn Ser Asp

180 185 190

Val Arg Tyr Ile Pro Phe Lys Thr Asp Val Ser Gly Thr Leu Gly Ala

195 200 205

Ala Pro Val Ser Thr Lys Ile Glu Ile Asp Pro Phe Ile Leu Ser Leu

210 215 220

Gly Ala Ser Tyr Lys Phe

225 230

<210> 4

<211> 693

<212> DNA

<213> 恶臭假单胞菌

<400> 4

atgaatccgc ctattttaaa aaaactcgct atgtcgatat tagcaactag ttttgtgttg 60

ggtggggcca gtgcgtggtc aggtgaaatc tattcgactg aaactgctgg ctacaatcag 120

ggcgactggg ttgctagctt taatatgtct aaagtttatg tagacgagac gctaggctcc 180

ctaaatgtag gtggggctac tgtacccaat gctgctgtaa gcatcggtaa tgatacaaca 240

gtttcttttg atatttccta ttttattagt aacaatgtag ctttggattt tttcgtcggg 300

attccagcta aagctaagtt tcaaggtgaa aaatccatct ctgcgctggg aagagtcagt 360

gaagttgatt atggccctgc aattttgtca cttcagtatc attttgataa ttttgagcga 420

ctttatccat atgtcggact aggtgtcggt cgagtgtttt tcttcgacaa aactgatggt 480

gccttgactt catttgatat caaagataaa tgggcgcctg ctgttcaggt cggccttaga 540

tatgattttg gtaactcatg gatgttaaat tcagatgtgc gctatattcc tttcaaaaca 600

gatgtttctg gtacacttgg ggctgcacct gtttctacca agattgagat tgatcctttc 660

attctgagtc ttggagcatc atataagttc tga 693

<210> 5

<211> 246

<212> PRT

<213> 水油海杆菌 VT8

<400> 5

Met Cys Tyr Glu Lys Leu Gln Phe Tyr Leu Lys Pro Ile Cys Phe Asn

1 5 10 15

Thr Lys Lys Asp Asn Lys Lys Met Lys Pro Lys Ile Ile Ser Lys Val

20 25 30

Ser Leu Val Ala Phe Leu Leu Leu Ser Leu Ala Ala Ser Leu Ala Asn

35 40 45

Ala Gln Ser Glu Pro Val Tyr Ser Arg Gly Asp Trp Val Val Gly Leu

50 55 60

Asn Ala Thr Arg Val Leu Thr Asp Glu Asp Leu Arg Ser Ala Ser Ala

65 70 75 80

Gly Gly Ala Pro Val Pro Asn Ser Asn Leu Ser Ile Asn Asn Asp Thr

85 90 95

Thr Val Ser Phe Asp Val Ser Tyr Phe Leu Ser Asn Gln Leu Ala Phe

100 105 110

Asn Ile Phe Gly Gly Ile Pro Ala Ser Ala Asp Leu Gln Gly Glu Glu

115 120 125

Ser Leu Ser Gly Leu Phe Leu Gly Gln Thr Asp Tyr Gly Pro Val Ile

130 135 140

Leu Ser Leu Gln Tyr His Val Leu Thr Gly Ser Asn Phe Ser Pro Tyr

145 150 155 160

Phe Gly Ala Gly Val Gly Arg Ile Leu Phe Leu Asp Glu Lys Asp Arg

165 170 175

Ala Leu Thr Asp Phe Asp Val Glu Asp Thr Trp Ala Pro Ala Ile Gln

180 185 190

Ala Gly Phe Arg Trp Arg Ile His Asn Asn Trp Ser Ala Asn Phe Asp

195 200 205

Val Arg Tyr Ala Pro Phe Lys Ala Asp Ile Thr Gly Asn Leu Gly Pro

210 215 220

Ala Pro Val Gln Ala Glu Val Glu Val Asp Pro Thr Ile Val Ser Ile

225 230 235 240

Gly Val Ala Tyr Arg Phe

245

<210> 6

<211> 741

<212> DNA

<213> 水油海杆菌

<400> 6

ttgtgttacg aaaaattgca gttttaccta aagccaattt gttttaatac caaaaaggat 60

aataaaaaaa tgaaacctaa aataattagt aaagtctcgt tagtggcgtt ccttttactt 120

tcacttgctg cgagcctggc caacgctcaa tctgagccgg tttacagtag aggcgactgg 180

gtggttggac tgaatgccac tagagtttta accgatgaag atttgcgatc agcctctgcg 240

gggggtgccc ccgttccaaa ttccaacctg tctattaaca acgatacgac cgtttcattc 300

gacgtgtcgt attttctgag taatcagctg gcatttaaca tttttggcgg cattcccgct 360

agtgcggacc tccagggcga agagtctctc tccggtcttt ttcttggtca aacagattat 420

ggtccggtaa ttctttcgct tcagtatcat gtcttaacgg gtagcaactt ctctccgtac 480

tttggagcgg gtgtaggacg gattctcttt ttagatgaga aggatcgcgc actaaccgac 540

ttcgacgtcg aagatacatg ggcccctgcg attcaggctg gttttcgctg gaggatacac 600

aataactggt cggcaaattt tgacgttaga tatgcaccct tcaaagcgga tatcaccggt 660

aacctaggcc cggcccctgt tcaggcagaa gtggaagtgg accccactat cgtgagcatc 720

ggtgtcgcat atcgctttta a 741

<210> 7

<211> 228

<212> PRT

<213> 亚历山大海洋柄菌 HTCC2633

<400> 7

Met Lys Gln Ser Asn Val Lys Ser Lys Gly Pro Phe Ala Ser Lys Phe

1 5 10 15

Val Leu Ile Thr Met Ile Gly Gly Phe Ser Ser Phe Ser Val Ala Asn

20 25 30

Ala Glu Pro Leu Tyr Ser Lys Gly Asp Trp Leu Phe Gly Leu Asn Ala

35 40 45

Ala Lys Val Phe Thr Asn Glu Thr Leu Asp Ser Ile Ser Ala Gly Gly

50 55 60

Ala Pro Ile Pro Gly Ala Gly Val Asn Ile Thr Asp Asp Thr Thr Leu

65 70 75 80

Ser Phe Asp Val Ser Tyr Phe Leu Asn Ser Ser Val Ala Leu Asn Phe

85 90 95

Phe Gly Gly Leu Pro Ala Ser Ala Asn Leu Ala Gly Ser Gly Ser Leu

100 105 110

Ala Gly Leu Pro Val Gly Glu Thr Glu Tyr Gly Pro Ala Val Leu Ser

115 120 125

Leu Gln Tyr His Phe Ser Thr Asn Ser Ser Val Ser Pro Tyr Val Gly

130 135 140

Ala Gly Ile Ala Arg Ile Leu Phe Leu Glu Glu Gln Gly Asp Ala Leu

145 150 155 160

Ala Asp Phe Asp Leu Lys Asp Ala Trp Ala Pro Ala Val Gln Val Gly

165 170 175

Met Arg Tyr Gln Met Ser Asp Asn Trp Phe Ala Asn Ala Asp Ile Arg

180 185 190

Tyr Thr Pro Phe Glu Thr Asp Ile Ser Gly Thr Leu Gly Gly Ala Pro

195 200 205

Val Arg Gly Lys Ile Ser Val Asp Pro Thr Ile Leu Asn Ile Gly Ile

210 215 220

Ala Tyr Arg Phe

225

<210> 8

<211> 741

<212> DNA

<213> 亚历山大海洋柄菌 HTCC2633

<400> 8

ttaaaagcga tatgcgacac cgatgctcac gatagtgggg tccacttcca cttctgcctg 60

aacaggggcc gggcctaggt taccggtgat atccgctttg aagggtgcat atctaacgtc 120

aaaatttgcc gaccagttat tgtgtatcct ccagcgaaaa ccagcctgaa tcgcaggggc 180

ccatgtatct tcgacgtcga agtcggttag tgcgcgatcc ttctcatcta aaaagagaat 240

ccgtcctaca cccgctccaa agtacggaga gaagttgcta cccgttaaga catgatactg 300

aagcgaaaga attaccggac cataatctgt ttgaccaaga aaaagaccgg agagagactc 360

ttcgccctgg aggtccgcac tagcgggaat gccgccaaaa atgttaaatg ccagctgatt 420

actcagaaaa tacgacacgt cgaatgaaac ggtcgtatcg ttgttaatag acaggttgga 480

atttggaacg ggggcacccc ccgcagaggc tgatcgcaaa tcttcatcgg ttaaaactct 540

agtggcattc agtccaacca cccagtcgcc tctactgtaa accggctcag attgagcgtt 600

ggccaggctc gcagcaagtg aaagtaaaag gaacgccact aacgagactt tactaattat 660

tttaggtttc atttttttat tatccttttt ggtattaaaa caaattggct ttaggtaaaa 720

ctgcaatttt tcgtaacaca a 741

<210> 9

<211> 223

<212> PRT

<213> Marinobacter manganoxydans MnI7-9

<400> 9

Met Lys Pro Lys Ile Ile Ser Lys Val Ser Leu Val Ala Phe Leu Leu

1 5 10 15

Leu Ser Leu Ala Ala Ser Leu Ala Asn Ala Gln Ser Glu Pro Val Tyr

20 25 30

Ser Arg Gly Asp Trp Val Val Gly Leu Asn Ala Thr Arg Val Leu Thr

35 40 45

Asp Glu Asp Leu Arg Ser Ala Ser Ala Gly Ser Ala Pro Val Pro Asn

50 55 60

Ser Asn Leu Ser Ile Asn Asn Asp Thr Thr Val Ser Phe Asp Val Ser

65 70 75 80

Tyr Phe Leu Ser Asn Gln Leu Ala Phe Asn Ile Phe Gly Gly Ile Pro

85 90 95

Ala Ser Ala Asp Leu Gln Gly Glu Glu Ser Leu Ser Gly Leu Phe Leu

100 105 110

Gly Gln Thr Asp Tyr Gly Pro Val Ile Leu Ser Leu Gln Tyr His Val

115 120 125

Leu Thr Gly Ser Asn Phe Ser Pro Tyr Phe Gly Ala Gly Val Gly Arg

130 135 140

Ile Leu Phe Leu Asp Glu Lys Asp Arg Ala Leu Thr Asp Phe Asp Val

145 150 155 160

Glu Asp Thr Trp Ala Pro Ala Val Gln Ala Gly Phe Arg Trp Arg Ile

165 170 175

His Asn Asn Trp Ser Ala Asn Phe Asp Val Arg Tyr Ala Pro Phe Glu

180 185 190

Ala Asp Ile Thr Gly Asn Leu Gly Pro Ala Pro Val Gln Ala Lys Val

195 200 205

Glu Val Asp Pro Thr Ile Val Ser Ile Gly Val Ala Tyr Arg Phe

210 215 220

<210> 10

<211> 687

<212> DNA

<213> Marinobacter manganoxydans MnI7-9

<400> 10

atgaaacaat ctaatgtaaa atccaagggg ccttttgcct cgaagtttgt gttaatcacg 60

atgatcggtg gcttttcgtc gttcagcgtc gcaaatgcgg aaccgcttta ctccaagggc 120

gactggcttt ttggcctgaa tgcggcgaaa gtattcacga acgaaacgtt ggattcaatc 180

agcgcgggcg gtgcgccaat acccggggct ggtgtcaata tcaccgatga caccacgctg 240

agtttcgacg tttcctattt tttgaattca tctgtagcgt tgaacttctt tggtggtttg 300

cctgccagcg ctaatcttgc agggagcggc agtttggcag gactgcctgt tggagagacg 360

gaatatggcc ctgctgtttt gtcgcttcaa tatcactttt cgactaattc atccgttagc 420

ccttatgttg gtgccggtat cgctcgaatc ttgtttctgg aagaacaagg ggatgcactc 480

gcggacttcg acttgaaaga cgcctgggcg cccgctgtcc aagttggaat gcgctatcaa 540

atgagcgata attggtttgc caatgccgat atacgttaca cgccattcga aacagatatc 600

tctgggacac tcggcggggc gccagtcaga ggcaagattt cggtggaccc aacaattctc 660

aatatcggta ttgcctaccg gttttaa 687

<210> 11

<211> 227

<212> PRT

<213> 柄杆菌属种 K31

<400> 11

Met Arg Lys Asn Gly Ala Tyr Met Tyr Ala Arg Leu Ala Gln Tyr Ala

1 5 10 15

Thr Ala Leu Ala Val Leu Ser Val Phe Pro Gln Ala Ala Leu Ala Gln

20 25 30

Asn Ser Glu Gly Phe Lys Leu Trp Ala Val Ser Leu Asn Ala Thr Arg

35 40 45

Val Phe Val Asp Glu Asp Ala Pro Asp Ile Thr Leu Ala Gly Gly Pro

50 55 60

Val Pro Gly Ser Asn Val Arg Ile Gly Asp Ala Thr Ser Ala Thr Ile

65 70 75 80

Asp Ile Gly Tyr Phe Phe Thr Pro Asn Val Ala Gly Asn Leu Phe Leu

85 90 95

Gly Val Pro Ala Thr Ala Gln Ile Asp Gly Ala Gly Ser Leu Glu Pro

100 105 110

Leu Gly Thr Leu Ala Lys Val Asn Tyr Gly Pro Ile Ile Leu Ser Ala

115 120 125

Gln Tyr His Phe Asn Asn Leu Gly Lys Val His Pro Tyr Leu Gly Val

130 135 140

Gly Val Gly Arg Ile Val Phe Leu Asn Glu Arg Asp Arg Ala Leu Leu

145 150 155 160

Asn Phe Ser Ile Asp Asp Ser Trp Ala Pro Ala Ala Gln Val Gly Val

165 170 175

Arg Tyr Glu Leu Gly Ala Glu Trp Met Leu Asn Ala Asp Val Arg Tyr

180 185 190

Val Pro Phe Ser Thr His Ala Thr Gly Ser Leu Gly Gly Ala Pro Val

195 200 205

Arg Thr Arg Leu Asp Ile Asp Pro Ile Leu Thr Ser Ala Gly Val Thr

210 215 220

Tyr Arg Phe

225

<210> 12

<211> 684

<212> DNA

<213> 柄杆菌属种 K31

<400> 12

atgagaaaaa atggagcata tatgtatgca aggcttgcgc aatacgccac cgcgctcgcc 60

gtcttgagcg tcttccccca ggctgcattg gcccagaatt cggaaggatt caagctgtgg 120

gccgtaagtc tgaatgcaac tagggtcttc gtggatgagg atgcgcccga catcaccttg 180

gctggagggc ctgttccggg ctcgaatgtg aggatcgggg atgccacgtc ggcgaccatt 240

gatatcggat atttcttcac gcccaatgtt gctggtaatt tgtttctcgg cgtgccggcg 300

accgcgcaaa ttgacggcgc tgggtcactt gagccgctcg gaactctagc caaggtcaac 360

tatggaccca tcatcttgtc ggcccagtac catttcaaca atcttggcaa ggttcatccc 420

tatctgggag tgggcgtcgg gcggatcgtc tttctgaatg agcgtgacag agctttgctt 480

aatttcagta tcgacgacag ttgggcgcct gcggctcagg tgggtgttcg gtacgagctt 540

ggcgcagaat ggatgctgaa cgctgacgtt cgatacgttc ccttctccac gcacgctacc 600

ggttcactgg gtggagcgcc tgtccggaca cgtttggaca tcgacccgat cctgacgagc 660

gccggagtga cttaccggtt ttag 684

<210> 13

<211> 410

<212> PRT

<213> 泊库岛食烷菌 SK2

<400> 13

Met Glu Asn Glu Lys Gln Asp Ala Thr Val Ile Val Gly Gly Gly His

1 5 10 15

Ala Ala Gly Ala Leu Met Thr Ala Leu Ile Gln Lys Lys Tyr Pro His

20 25 30

Glu Val Val Leu Val Gly Glu Glu Pro Tyr Pro Pro Tyr Gln Arg Pro

35 40 45

Pro Leu Ser Lys Thr Tyr Leu Ser Gly Glu Val Asn Glu Glu Ser Leu

50 55 60

Tyr Leu Lys Pro Arg Ser Val Tyr Glu Gly Ala Gly His Gln Leu Arg

65 70 75 80

Leu Gly Val Arg Val Glu Asn Ile Asp Arg Asp Asn Lys Thr Leu Thr

85 90 95

Leu Ser Asp Gln Ser Thr Leu Lys Tyr Gly Arg Leu Ile Leu Ala Thr

100 105 110

Gly Ser His Val Arg Arg Leu Asn Ala Pro Gly Ser Glu Leu Lys Gly

115 120 125

Ile His Tyr Leu His Asp Ile Ala Asp Thr Asp Thr Leu Arg Asp Gln

130 135 140

Leu Ser Pro Gly Ala Arg Leu Val Ile Val Gly Gly Gly Tyr Ile Gly

145 150 155 160

Leu Glu Val Ala Ala Ser Ala Ser Lys Lys Gly Val Asn Val Thr Val

165 170 175

Leu Glu Gly Ala Glu Arg Leu Met Gln Arg Val Thr Gly Val Glu Met

180 185 190

Ser Ser Phe Leu Tyr Ala Lys His Ser Gly Ser Gly Val Asp Val Arg

195 200 205

Leu Asn Thr Ala Val Thr Gly Phe Lys Ala Gly Asp Gln Gly Arg Val

210 215 220

Ala Gly Val Thr Leu Ala Asn Gly Glu Thr Val Asp Ala Asp Val Val

225 230 235 240

Leu Val Ser Ile Gly Val Ile Pro Glu Thr Ala Leu Ala Glu Ala Ala

245 250 255

Gly Leu Ser Cys Glu Asp Gly Ile Leu Val Asp Glu Tyr Val Arg Thr

260 265 270

Ser Asp Pro Ser Ile Leu Ala Ile Gly Asp Cys Thr Arg His Arg Asn

275 280 285

Leu Phe Phe Glu Lys Met Gln Arg Leu Glu Ser Val Ala Asn Ala Val

290 295 300

Asp Gln Ala Arg Thr Ala Ala Ala Thr Leu Met Gly Glu Asp Lys Pro

305 310 315 320

Tyr Asp Ser Ala Pro Trp Phe Trp Ser Asn Gln Tyr Asp Val Arg Leu

325 330 335

Gln Met Val Gly Leu Ser Gln Asp His Asp Glu Arg Val Met Arg Gly

340 345 350

Ser Thr Glu Asp Lys Ala Phe Ala Val Phe Tyr Leu Arg Glu Gly Cys

355 360 365

Val Ile Ala Val Asp Ala Val Asn Met Pro Ile Ala Phe Met Val Gly

370 375 380

Lys Gln Leu Val Gln His Arg Lys Ser Ile Ser Ala Asp Val Leu Ser

385 390 395 400

Asp Leu Asp Val Glu Leu Lys Ser Leu Ile

405 410

<210> 14

<211> 1233

<212> DNA

<213> 泊库岛食烷菌 SK2

<400> 14

atggaaaacg aaaaacaaga tgccactgtc atcgttggag gcgggcacgc agcaggtgcg 60

ttgatgacag ccttgataca aaagaaatat ccacacgagg tggttctggt gggcgaagag 120

ccttatccgc cctaccagcg cccgccttta tccaaaacgt atctgtcagg agaggttaac 180

gaggaatctc tctatttgaa accgcgctcg gtgtatgaag gtgcggggca tcagttgcga 240

cttggtgtgc gcgttgagaa cattgatcga gacaacaaaa cccttacatt gtcagatcag 300

agcacactga aatatggccg actgattctt gccacaggtt cacacgttag gcgtcttaat 360

gcgcctggat ctgaattaaa aggcatccat tatctgcatg acattgctga tacggataca 420

ttgcgcgatc aactgtcacc aggtgcccgt ttggttattg tcggtggcgg ctacattggc 480

cttgaggttg cagccagtgc gagcaagaaa ggcgttaatg ttacggtgct ggaaggcgct 540

gagcgtctaa tgcagcgagt tacgggcgtt gagatgtctt cgttcctgta tgctaagcac 600

agtggttctg gcgtggacgt gcgtcttaat actgctgtca ccggcttcaa agctggagat 660

caggggcgag tggctggcgt aacgttagca aatggcgaaa cggttgacgc agatgttgtg 720

cttgtctcga ttggcgttat acccgaaacg gctttggctg aggctgccgg cctatcctgt 780

gaagacggta tcctggtgga cgaatatgtc cgcacttctg acccaagcat cctggcgata 840

ggtgattgca ctcgtcaccg aaaccttttc ttcgagaaaa tgcagaggct cgagtccgtt 900

gctaacgctg tcgatcaagc acgtactgcg gcagcgacct tgatgggaga ggataagccc 960

tacgatagcg ctccatggtt ttggtcgaat caatatgatg ttcgtttgca aatggtgggg 1020

ctctcgcagg accatgatga acgagtcatg cgtggcagca cggaagacaa agcgtttgcg 1080

gtgttctatc tccgtgaggg ctgtgtgatt gccgttgatg cggtgaatat gcccattgcg 1140

tttatggttg gaaagcagtt ggttcagcac cgtaagagta ttagcgctga cgtgttgagt 1200

gatctggatg ttgaattaaa gtctttgatc tga 1233

<210> 15

<211> 106

<212> PRT

<213> 泊库岛食烷菌 SK2

<400> 15

Met Gly Lys Ile Thr Phe Ile Glu Asn Asp Lys Thr Glu His Val Thr

1 5 10 15

Glu Phe Glu Ala Gly Ile Thr Leu Met Gln Val Ala Leu Asp Asn Ala

20 25 30

Val Pro Gly Ile Asp Gly Asp Cys Gly Gly Glu Cys Ala Cys Gly Thr

35 40 45

Cys His Leu Ile Val Pro Glu Glu Trp Phe Asp Lys Thr Gly Pro Ile

50 55 60

Asn Asp Ala Glu Glu Gln Met Leu Ser Met Thr Pro Glu Arg Ala Lys

65 70 75 80

Thr Ser Arg Leu Gly Cys Gln Val Lys Ala Thr Glu Ala Met Asp Gly

85 90 95

Met Thr Val Gln Leu Pro Glu Phe Gln Met

100 105

<210> 16

<211> 321

<212> DNA

<213> 泊库岛食烷菌 SK2

<400> 16

gtgggaaaaa tcacctttat tgagaatgat aaaactgaac atgtaacaga atttgaggca 60

ggtattactt tgatgcaagt tgccttagac aacgccgttc ccggtattga tggggattgc 120

ggcggggagt gtgcctgtgg tacctgtcac ctgattgttc cagaagaatg gttcgataaa 180

accgggccga ttaatgatgc tgaagaacaa atgttgtcca tgacacctga gcgtgcaaaa 240

acctctcggt tggggtgtca ggttaaggcc actgaggcaa tggacggaat gactgttcaa 300

ttgccagaat ttcaaatgta a 321

<210> 17

<211> 336

<212> PRT

<213> 大肠杆菌

<400> 17

Met Lys Ala Ala Val Val Thr Lys Asp His His Val Asp Val Thr Tyr

1 5 10 15

Lys Thr Leu Arg Ser Leu Lys His Gly Glu Ala Leu Leu Lys Met Glu

20 25 30

Cys Cys Gly Val Cys His Thr Asp Leu His Val Lys Asn Gly Asp Phe

35 40 45

Gly Asp Lys Thr Gly Val Ile Leu Gly His Glu Gly Ile Gly Val Val

50 55 60

Ala Glu Val Gly Pro Gly Val Thr Ser Leu Lys Pro Gly Asp Arg Ala

65 70 75 80

Ser Val Ala Trp Phe Tyr Glu Gly Cys Gly His Cys Glu Tyr Cys Asn

85 90 95

Ser Gly Asn Glu Thr Leu Cys Arg Ser Val Lys Asn Ala Gly Tyr Ser

100 105 110

Val Asp Gly Gly Met Ala Glu Glu Cys Ile Val Val Ala Asp Tyr Ala

115 120 125

Val Lys Val Pro Asp Gly Leu Asp Ser Ala Ala Ala Ser Ser Ile Thr

130 135 140

Cys Ala Gly Val Thr Thr Tyr Lys Ala Val Lys Leu Ser Lys Ile Arg

145 150 155 160

Pro Gly Gln Trp Ile Ala Ile Tyr Gly Leu Gly Gly Leu Gly Asn Leu

165 170 175

Ala Leu Gln Tyr Ala Lys Asn Val Phe Asn Ala Lys Val Ile Ala Ile

180 185 190

Asp Val Asn Asp Glu Gln Leu Lys Leu Ala Thr Glu Met Gly Ala Asp

195 200 205

Leu Ala Ile Asn Ser His Thr Glu Asp Ala Ala Lys Ile Val Gln Glu

210 215 220

Lys Thr Gly Gly Ala His Ala Ala Val Val Thr Ala Val Ala Lys Ala

225 230 235 240

Ala Phe Asn Ser Ala Val Asp Ala Val Arg Ala Gly Gly Arg Val Val

245 250 255

Ala Val Gly Leu Pro Pro Glu Ser Met Ser Leu Asp Ile Pro Arg Leu

260 265 270

Val Leu Asp Gly Ile Glu Val Val Gly Ser Leu Val Gly Thr Arg Gln

275 280 285

Asp Leu Thr Glu Ala Phe Gln Phe Ala Ala Glu Gly Lys Val Val Pro

290 295 300

Lys Val Ala Leu Arg Pro Leu Ala Asp Ile Asn Thr Ile Phe Thr Glu

305 310 315 320

Met Glu Glu Gly Lys Ile Arg Gly Arg Met Val Ile Asp Phe Arg His

325 330 335

<210> 18

<211> 1011

<212> DNA

<213> 大肠杆菌

<400> 18

atgaaggctg cagttgttac gaaggatcat catgttgacg ttacgtataa aacactgcgc 60

tcactgaaac atggcgaagc cctgctgaaa atggagtgtt gtggtgtatg tcataccgat 120

cttcatgtta agaatggcga ttttggtgac aaaaccggcg taattctggg ccatgaaggc 180

atcggtgtgg tggcagaagt gggtccaggt gtcacctcat taaaaccagg cgatcgtgcc 240

agcgtggcgt ggttctacga aggatgcggt cattgcgaat actgtaacag tggtaacgaa 300

acgctctgcc gttcagttaa aaatgccgga tacagcgttg atggcgggat ggcggaagag 360

tgcatcgtgg tcgccgatta cgcggtaaaa gtgccagatg gtctggactc ggcggcggcc 420

agcagcatta cctgtgcggg agtcaccacc tacaaagccg ttaagctgtc aaaaattcgt 480

ccagggcagt ggattgctat ctacggtctt ggcggtctgg gtaacctcgc cctgcaatac 540

gcgaagaatg tctttaacgc caaagtgatc gccattgatg tcaatgatga gcagttaaaa 600

ctggcaaccg aaatgggcgc agatttagcg attaactcac acaccgaaga cgccgccaaa 660

attgtgcagg agaaaactgg tggcgctcac gctgcggtgg taacagcggt agctaaagct 720

gcgtttaact cggcagttga tgctgtccgt gcaggcggtc gtgttgtggc tgtcggtcta 780

ccgccggagt ctatgagcct ggatatccca cgtcttgtgc tggatggtat tgaagtggtc 840

ggttcgctgg tcggcacgcg ccaggattta actgaagcct tccagtttgc cgccgaaggt 900

aaagtggtgc cgaaagtcgc cctgcgtccg ttagcggaca tcaacaccat ctttactgag 960

atggaagaag gcaaaatccg tggccgcatg gtgattgatt tccgtcacta a 1011

<210> 19

<211> 470

<212> PRT

<213> 泊库岛食烷菌 SK2

<400> 19

Met Ser Thr Ser Ser Ser Thr Ser Asn Asp Ile Gln Ala Lys Ile Ile

1 5 10 15

Asn Ala Thr Ser Lys Val Val Pro Met His Leu Gln Ile Lys Ala Leu

20 25 30

Lys Asn Leu Met Lys Val Lys Arg Lys Thr Ile Gly Thr Ser Arg Pro

35 40 45

Gln Val His Phe Val Glu Thr Asp Leu Pro Asp Val Asn Asp Leu Ala

50 55 60

Ile Glu Asp Ile Asp Thr Ser Asn Pro Phe Leu Tyr Arg Gln Gly Lys

65 70 75 80

Ala Asn Ala Tyr Phe Lys Arg Leu Arg Asp Glu Ala Pro Val His Tyr

85 90 95

Gln Lys Asn Ser Ala Phe Gly Pro Phe Trp Ser Val Thr Arg Tyr Glu

100 105 110

Asp Ile Val Phe Val Asp Lys Ser His Asp Leu Phe Ser Ala Glu Pro

115 120 125

Gln Ile Ile Leu Gly Asp Pro Pro Glu Gly Leu Ser Val Glu Met Phe

130 135 140

Ile Ala Met Asp Pro Pro Lys His Asp Val Gln Arg Arg Ala Val Gln

145 150 155 160

Gly Val Val Ala Pro Lys Asn Leu Lys Glu Met Glu Gly Leu Ile Arg

165 170 175

Lys Arg Thr Gly Asp Val Leu Asp Ser Leu Pro Leu Asp Thr Pro Phe

180 185 190

Asn Trp Val Pro Val Val Ser Lys Glu Leu Thr Gly Arg Met Leu Ala

195 200 205

Ser Leu Leu Asp Phe Pro Tyr Asp Glu Arg Glu Lys Leu Val Gly Trp

210 215 220

Ser Asp Arg Leu Ser Gly Ala Ser Ser Ala Thr Gly Gly Glu Phe Thr

225 230 235 240

Asn Glu Asp Val Phe Phe Asp Asp Ala Ala Asp Met Ala Trp Ala Phe

245 250 255

Ser Lys Leu Trp Arg Asp Lys Glu Ala Arg Gln Lys Ala Gly Glu Glu

260 265 270

Pro Gly Phe Asp Leu Ile Ser Met Leu Gln Ser Asn Glu Asp Thr Lys

275 280 285

Asp Leu Ile Asn Arg Pro Leu Glu Phe Ile Gly Asn Leu Ala Leu Leu

290 295 300

Ile Val Gly Gly Asn Asp Thr Thr Arg Asn Ser Met Ser Gly Gly Val

305 310 315 320

Leu Ala Leu Asn Gln Phe Pro Glu Gln Phe Glu Lys Leu Lys Ala Asn

325 330 335

Pro Lys Leu Ile Pro Asn Met Val Ser Glu Ile Ile Arg Trp Gln Thr

340 345 350

Pro Leu Ala Tyr Met Arg Arg Val Ala Lys Gln Asp Val Glu Leu Asn

355 360 365

Gly Gln Thr Ile Lys Lys Gly Asp Arg Val Leu Met Trp Tyr Ala Ser

370 375 380

Gly Asn Gln Asp Glu Arg Lys Phe Glu Asn Pro Glu Gln Phe Ile Ile

385 390 395 400

Asp Arg Lys Asp Thr Arg Asn His Val Ser Phe Gly Tyr Gly Val His

405 410 415

Arg Cys Met Gly Asn Arg Leu Ala Glu Leu Gln Leu Arg Ile Leu Trp

420 425 430

Glu Glu Leu Leu Pro Arg Phe Glu Asn Ile Glu Val Ile Gly Glu Pro

435 440 445

Glu Arg Val Gln Ser Asn Phe Val Arg Gly Tyr Ser Lys Met Met Val

450 455 460

Lys Leu Thr Ala Lys Lys

465 470

<210> 20

<211> 1413

<212> DNA

<213> 泊库岛食烷菌 SK2

<400> 20

atgtcaacga gttcaagtac aagtaatgac atccaggcaa aaataattaa cgccacatcc 60

aaagtcgtgc caatgcatct acagatcaag gcactaaaaa acttgatgaa ggtgaagcgg 120

aagaccattg gcacttcccg ccctcaggtg cactttgttg aaaccgattt gcctgacgtc 180

aatgatttgg cgatagaaga tatcgatacg agtaaccctt ttttataccg acaaggtaag 240

gcgaatgcgt actttaagcg gttgcgtgat gaagcgccgg tgcactatca gaagaacagt 300

gctttcgggc cgttctggtc ggtaacacgc tacgaagata tcgtcttcgt ggacaagagc 360

catgatttgt tttccgccga accccaaatt atcttgggtg atcctccgga aggcctgtcg 420

gttgaaatgt tcatcgctat ggatcctccc aagcacgacg tacagcgtcg ggcagtccag 480

ggtgttgttg cgcccaagaa cctgaaagaa atggaaggac tgatccgcaa gcgcaccggg 540

gacgtactgg atagcctgcc gttggacact ccgttcaact gggtgccggt ggtgtcgaaa 600

gagctgaccg ggcgcatgct agcctcactg ttagatttcc cgtatgacga acgcgaaaaa 660

ctggttggct ggtcggatcg attgtccggc gcgtcctcgg caaccggcgg cgagtttacg 720

aatgaagatg tgttttttga tgacgcggca gatatggcgt gggctttctc caagctttgg 780

cgtgataaag aagcccgtca aaaagcaggt gaagagccgg gtttcgattt gatcagcatg 840

cttcagtcca atgaagacac aaaagatctg atcaatcgtc ctttggaatt cattggtaat 900

ctcgcgttgt tgattgttgg cggtaatgac accacgcgta actcaatgag cgggggggtg 960

ctggctttaa atcagttccc agagcaattc gagaagctaa aggcgaaccc aaagcttatc 1020

cccaatatgg tctctgaaat cattcgctgg caaacgccgc ttgcgtatat gcgccgggtt 1080

gccaagcagg atgtggagct gaacggacag accatcaaga agggtgatcg cgtgctgatg 1140

tggtatgcgt cgggcaacca ggatgagaga aaatttgaga atcctgagca attcatcatc 1200

gaccgcaaag atacgcgtaa ccatgtgtcg tttggttatg gggttcaccg ttgtatgggc 1260

aaccgccttg ccgaactgca gctgcgtatt ctgtgggaag agcttctccc tcgctttgaa 1320

aacatcgaag tgatcggtga gccggagcgc gtgcaatcga actttgtgcg gggctattcc 1380

aagatgatgg ttaagttgac ggctaaaaaa taa 1413

<210> 21

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 来自CYP153的序列基序

<220>

<221> 替代物

<222> (3)..(4)

<223> Ile3可以是亮氨酸; val4可以是异亮氨酸

<400> 21

Leu Leu Ile Ile Gly Gly Asn Asp Thr Thr Arg Asn

1 5 10

<210> 22

<211> 378

<212> PRT

<213> 枯草芽孢杆菌枯草亚种168株

<400> 22

Met Ile Ile Gly Val Pro Lys Glu Ile Lys Asn Asn Glu Asn Arg Val

1 5 10 15

Ala Leu Thr Pro Gly Gly Val Ser Gln Leu Ile Ser Asn Gly His Arg

20 25 30

Val Leu Val Glu Thr Gly Ala Gly Leu Gly Ser Gly Phe Glu Asn Glu

35 40 45

Ala Tyr Glu Ser Ala Gly Ala Glu Ile Ile Ala Asp Pro Lys Gln Val

50 55 60

Trp Asp Ala Glu Met Val Met Lys Val Lys Glu Pro Leu Pro Glu Glu

65 70 75 80

Tyr Val Tyr Phe Arg Lys Gly Leu Val Leu Phe Thr Tyr Leu His Leu

85 90 95

Ala Ala Glu Pro Glu Leu Ala Gln Ala Leu Lys Asp Lys Gly Val Thr

100 105 110

Ala Ile Ala Tyr Glu Thr Val Ser Glu Gly Arg Thr Leu Pro Leu Leu

115 120 125

Thr Pro Met Ser Glu Val Ala Gly Arg Met Ala Ala Gln Ile Gly Ala

130 135 140

Gln Phe Leu Glu Lys Pro Lys Gly Gly Lys Gly Ile Leu Leu Ala Gly

145 150 155 160

Val Pro Gly Val Ser Arg Gly Lys Val Thr Ile Ile Gly Gly Gly Val

165 170 175

Val Gly Thr Asn Ala Ala Lys Met Ala Val Gly Leu Gly Ala Asp Val

180 185 190

Thr Ile Ile Asp Leu Asn Ala Asp Arg Leu Arg Gln Leu Asp Asp Ile

195 200 205

Phe Gly His Gln Ile Lys Thr Leu Ile Ser Asn Pro Val Asn Ile Ala

210 215 220

Asp Ala Val Ala Glu Ala Asp Leu Leu Ile Cys Ala Val Leu Ile Pro

225 230 235 240

Gly Ala Lys Ala Pro Thr Leu Val Thr Glu Glu Met Val Lys Gln Met

245 250 255

Lys Pro Gly Ser Val Ile Val Asp Val Ala Ile Asp Gln Gly Gly Ile

260 265 270

Val Glu Thr Val Asp His Ile Thr Thr His Asp Gln Pro Thr Tyr Glu

275 280 285

Lys His Gly Val Val His Tyr Ala Val Ala Asn Met Pro Gly Ala Val

290 295 300

Pro Arg Thr Ser Thr Ile Ala Leu Thr Asn Val Thr Val Pro Tyr Ala

305 310 315 320

Leu Gln Ile Ala Asn Lys Gly Ala Val Lys Ala Leu Ala Asp Asn Thr

325 330 335

Ala Leu Arg Ala Gly Leu Asn Thr Ala Asn Gly His Val Thr Tyr Glu

340 345 350

Ala Val Ala Arg Asp Leu Gly Tyr Glu Tyr Val Pro Ala Glu Lys Ala

355 360 365

Leu Gln Asp Glu Ser Ser Val Ala Gly Ala

370 375

<210> 23

<211> 1137

<212> DNA

<213> 枯草芽孢杆菌枯草亚种168株

<400> 23

atgatcatcg gcgtccctaa agaaatcaaa aacaacgaaa accgcgtggc actgaccccg 60

ggtggtgtgt cccaattgat cagcaacggc caccgtgtct tggtcgaaac cggcgctggt 120

ctgggtagcg gctttgagaa cgaggcatac gagtcggcag gtgcggagat tattgccgat 180

cctaagcagg tgtgggacgc cgagatggtt atgaaagtga aagaaccgct gccggaagaa 240

tacgtttact ttcgcaaagg tctggttctg ttcacctatc tgcacttggc cgctgagccg 300

gagctggcac aagcgctgaa ggataagggc gttacggcga tcgcgtatga aacggtgtct 360

gagggccgta ccctgccgct gctgaccccg atgagcgagg ttgccggtcg tatggcagcc 420

cagatcggtg cgcagttcct ggagaaaccg aaaggtggca agggcattct gctggcgggt 480

gtcccgggtg tttctcgtgg taaggtcact atcattggcg gtggcgtggt cggtaccaac 540

gcggcgaaga tggcggttgg cctgggtgct gacgttacga ttatcgactt gaacgctgat 600

cgcctgcgtc aattggacga catctttggc caccagatca agaccttgat ctccaatccg 660

gtgaatatcg cggacgcggt ggcggaggcg gatctgctga tttgcgcagt tctgattcct 720

ggcgcgaagg cgccgaccct ggtcacggaa gaaatggtga aacaaatgaa accgggtagc 780

gtgattgttg acgtagcgat tgatcagggt ggtatcgtgg aaactgttga ccacatcacg 840

actcatgatc agccgacgta cgagaaacat ggtgttgttc actatgcagt tgcaaatatg 900

ccgggtgcgg tcccgcgtac tagcacgatt gccctgacca atgtgaccgt tccgtatgca 960

ctgcaaattg caaataaggg tgcggtgaag gctttggcgg acaacaccgc gctgcgtgct 1020

ggtctgaata ccgcgaacgg tcatgtgacc tatgaggcgg tcgcacgtga cctgggttat 1080

gagtacgtgc ctgcagagaa ggcactgcag gacgagagct ccgtggcagg tgcgtaa 1137

<210> 24

<211> 459

<212> PRT

<213> 青紫色素杆菌 ATCC 12472

<400> 24

Met Gln Lys Gln Arg Thr Thr Ser Gln Trp Arg Glu Leu Asp Ala Ala

1 5 10 15

His His Leu His Pro Phe Thr Asp Thr Ala Ser Leu Asn Gln Ala Gly

20 25 30

Ala Arg Val Met Thr Arg Gly Glu Gly Val Tyr Leu Trp Asp Ser Glu

35 40 45

Gly Asn Lys Ile Ile Asp Gly Met Ala Gly Leu Trp Cys Val Asn Val

50 55 60

Gly Tyr Gly Arg Lys Asp Phe Ala Glu Ala Ala Arg Arg Gln Met Glu

65 70 75 80

Glu Leu Pro Phe Tyr Asn Thr Phe Phe Lys Thr Thr His Pro Ala Val

85 90 95

Val Glu Leu Ser Ser Leu Leu Ala Glu Val Thr Pro Ala Gly Phe Asp

100 105 110

Arg Val Phe Tyr Thr Asn Ser Gly Ser Glu Ser Val Asp Thr Met Ile

115 120 125

Arg Met Val Arg Arg Tyr Trp Asp Val Gln Gly Lys Pro Glu Lys Lys

130 135 140

Thr Leu Ile Gly Arg Trp Asn Gly Tyr His Gly Ser Thr Ile Gly Gly

145 150 155 160

Ala Ser Leu Gly Gly Met Lys Tyr Met His Glu Gln Gly Asp Leu Pro

165 170 175

Ile Pro Gly Met Ala His Ile Glu Gln Pro Trp Trp Tyr Lys His Gly

180 185 190

Lys Asp Met Thr Pro Asp Glu Phe Gly Val Val Ala Ala Arg Trp Leu

195 200 205

Glu Glu Lys Ile Leu Glu Ile Gly Ala Asp Lys Val Ala Ala Phe Val

210 215 220

Gly Glu Pro Ile Gln Gly Ala Gly Gly Val Ile Val Pro Pro Ala Thr

225 230 235 240

Tyr Trp Pro Glu Ile Glu Arg Ile Cys Arg Lys Tyr Asp Val Leu Leu

245 250 255

Val Ala Asp Glu Val Ile Cys Gly Phe Gly Arg Thr Gly Glu Trp Phe

260 265 270

Gly His Gln His Phe Gly Phe Gln Pro Asp Leu Phe Thr Ala Ala Lys

275 280 285

Gly Leu Ser Ser Gly Tyr Leu Pro Ile Gly Ala Val Phe Val Gly Lys

290 295 300

Arg Val Ala Glu Gly Leu Ile Ala Gly Gly Asp Phe Asn His Gly Phe

305 310 315 320

Thr Tyr Ser Gly His Pro Val Cys Ala Ala Val Ala His Ala Asn Val

325 330 335

Ala Ala Leu Arg Asp Glu Gly Ile Val Gln Arg Val Lys Asp Asp Ile

340 345 350

Gly Pro Tyr Met Gln Lys Arg Trp Arg Glu Thr Phe Ser Arg Phe Glu

355 360 365

His Val Asp Asp Val Arg Gly Val Gly Met Val Gln Ala Phe Thr Leu

370 375 380

Val Lys Asn Lys Ala Lys Arg Glu Leu Phe Pro Asp Phe Gly Glu Ile

385 390 395 400

Gly Thr Leu Cys Arg Asp Ile Phe Phe Arg Asn Asn Leu Ile Met Arg

405 410 415

Ala Cys Gly Asp His Ile Val Ser Ala Pro Pro Leu Val Met Thr Arg

420 425 430

Ala Glu Val Asp Glu Met Leu Ala Val Ala Glu Arg Cys Leu Glu Glu

435 440 445

Phe Glu Gln Thr Leu Lys Ala Arg Gly Leu Ala

450 455

<210> 25

<211> 1380

<212> DNA

<213> 青紫色素杆菌 ATCC 12472

<400> 25

atgcagaaac agcgtaccac ctctcagtgg cgtgaactgg atgcggcgca tcatctgcat 60

ccgtttaccg ataccgcgag cctgaatcag gcgggtgcgc gtgtgatgac ccgtggcgaa 120

ggcgtgtatc tgtgggatag cgaaggcaac aaaattattg atggcatggc gggcctgtgg 180

tgcgtgaacg tgggctatgg ccgtaaagat tttgcggaag cggcgcgtcg tcagatggaa 240

gaactgccgt tttataacac cttctttaaa accacccatc cggcggtggt ggaactgagc 300

agcctgctgg ccgaagttac cccggcaggt tttgatcgtg tgttttatac caacagcggc 360

agcgaaagcg tggataccat gattcgtatg gtgcgtcgtt attgggatgt gcagggcaaa 420

ccggaaaaaa aaaccctgat tggccgttgg aacggctatc acggcagcac cattggcggt 480

gcgagcctgg gcggcatgaa atatatgcat gaacagggcg atctgccgat tccgggcatg 540

gcgcatattg aacagccgtg gtggtataaa catggcaaag atatgacccc ggatgaattt 600

ggcgtggttg cggcgcgttg gctggaagaa aaaattctgg aaatcggcgc ggataaagtg 660

gcggcgtttg tgggcgaacc gattcagggt gcgggcggtg tgattgttcc gccggcaacc 720

tattggccgg aaattgaacg tatttgccgc aaatatgatg tgctgctggt tgcggatgaa 780

gtgatttgcg gctttggccg taccggcgaa tggtttggcc atcagcattt tggctttcag 840

ccggacctgt ttaccgcggc gaaaggcctg agcagcggct atctgccgat tggcgcggtg 900

tttgtgggca aacgtgttgc ggaaggtctg attgcgggcg gtgattttaa ccatggcttt 960

acctatagcg gccatccggt gtgtgcggcg gtggcgcatg cgaatgttgc ggcgctgcgt 1020

gatgaaggca ttgtgcagcg tgtgaaagat gatattggcc cgtatatgca gaaacgttgg 1080

cgtgaaacct ttagccgttt tgaacatgtg gatgatgtgc gtggcgtggg catggtgcag 1140

gcgtttaccc tggtgaaaaa caaagcgaaa cgtgaactgt ttccggattt tggcgaaatt 1200

ggcaccctgt gccgcgatat tttttttcgc aacaacctga ttatgcgtgc gtgcggcgat 1260

cacattgtgt ctgcaccgcc gctggttatg acccgtgcgg aagtggatga aatgctggcc 1320

gtggcggaac gttgcctgga agaatttgaa cagaccctga aagcgcgtgg cctggcctaa 1380

<210> 26

<211> 552

<212> PRT

<213> 食油假单胞菌

<400> 26

Met Tyr Asp Tyr Ile Ile Val Gly Ala Gly Ser Ala Gly Cys Val Leu

1 5 10 15

Ala Asn Arg Leu Ser Ala Asp Pro Ser Lys Arg Val Cys Leu Leu Glu

20 25 30

Ala Gly Pro Arg Asp Thr Asn Pro Leu Ile His Met Pro Leu Gly Ile

35 40 45

Ala Leu Leu Ser Asn Ser Lys Lys Leu Asn Trp Ala Phe Gln Thr Ala

50 55 60

Pro Gln Gln Asn Leu Asn Gly Arg Ser Leu Phe Trp Pro Arg Gly Lys

65 70 75 80

Thr Leu Gly Gly Ser Ser Ser Ile Asn Ala Met Val Tyr Ile Arg Gly

85 90 95

His Glu Asp Asp Tyr His Ala Trp Glu Gln Ala Ala Gly Arg Tyr Trp

100 105 110

Gly Trp Tyr Arg Ala Leu Glu Leu Phe Lys Arg Leu Glu Cys Asn Gln

115 120 125

Arg Phe Asp Lys Ser Glu His His Gly Val Asp Gly Glu Leu Ala Val

130 135 140

Ser Asp Leu Lys Tyr Ile Asn Pro Leu Ser Lys Ala Phe Val Gln Ala

145 150 155 160

Gly Met Glu Ala Asn Ile Asn Phe Asn Gly Asp Phe Asn Gly Glu Tyr

165 170 175

Gln Asp Gly Val Gly Phe Tyr Gln Val Thr Gln Lys Asn Gly Gln Arg

180 185 190

Trp Ser Ser Ala Arg Ala Phe Leu His Gly Val Leu Ser Arg Pro Asn

195 200 205

Leu Asp Ile Ile Thr Asp Ala His Ala Ser Lys Ile Leu Phe Glu Asp

210 215 220

Arg Lys Ala Val Gly Val Ser Tyr Ile Lys Lys Asn Met His His Gln

225 230 235 240

Val Lys Thr Thr Ser Gly Gly Glu Val Leu Leu Ser Leu Gly Ala Val

245 250 255

Gly Thr Pro His Leu Leu Met Leu Ser Gly Val Gly Ala Ala Ala Glu

260 265 270

Leu Lys Glu His Gly Val Ser Leu Val His Asp Leu Pro Glu Val Gly

275 280 285

Lys Asn Leu Gln Asp His Leu Asp Ile Thr Leu Met Cys Ala Ala Asn

290 295 300

Ser Arg Glu Pro Ile Gly Val Ala Leu Ser Phe Ile Pro Arg Gly Val

305 310 315 320

Ser Gly Leu Phe Ser Tyr Val Phe Lys Arg Glu Gly Phe Leu Thr Ser

325 330 335

Asn Val Ala Glu Ser Gly Gly Phe Val Lys Ser Ser Pro Asp Arg Asp

340 345 350

Arg Pro Asn Leu Gln Phe His Phe Leu Pro Thr Tyr Leu Lys Asp His

355 360 365

Gly Arg Lys Ile Ala Gly Gly Tyr Gly Tyr Thr Leu His Ile Cys Asp

370 375 380

Leu Leu Pro Lys Ser Arg Gly Arg Ile Gly Leu Lys Ser Ala Asn Pro

385 390 395 400

Leu Gln Pro Pro Leu Ile Asp Pro Asn Tyr Leu Ser Asp His Glu Asp

405 410 415

Ile Lys Thr Met Ile Ala Gly Ile Lys Ile Gly Arg Ala Ile Leu Gln

420 425 430

Ala Pro Ser Met Ala Lys His Phe Lys His Glu Val Val Pro Gly Gln

435 440 445

Ala Val Lys Thr Asp Asp Glu Ile Ile Glu Asp Ile Arg Arg Arg Ala

450 455 460

Glu Thr Ile Tyr His Pro Val Gly Thr Cys Arg Met Gly Lys Asp Pro

465 470 475 480

Ala Ser Val Val Asp Pro Cys Leu Lys Ile Arg Gly Leu Ala Asn Ile

485 490 495

Arg Val Val Asp Ala Ser Ile Met Pro His Leu Val Ala Gly Asn Thr

500 505 510

Asn Ala Pro Thr Ile Met Ile Ala Glu Asn Ala Ala Glu Ile Ile Met

515 520 525

Arg Asn Leu Asp Val Glu Ala Leu Glu Ala Ser Ala Glu Phe Ala Arg

530 535 540

Glu Gly Ala Glu Leu Glu Leu Ala

545 550

<210> 27

<211> 1656

<212> DNA

<213> 食油假单胞菌

<400> 27

atgtacgact atataatcgt tggtgctgga tctgcaggat gtgtgcttgc taatcgtctt 60

tcggccgacc cctctaaaag agtttgttta cttgaagctg ggccgcgaga tacgaatccg 120

ctaattcata tgccgttagg tattgctttg ctttcaaata gtaaaaagtt gaattgggct 180

tttcaaactg cgccacagca aaatctcaac ggccggagcc ttttctggcc acgaggaaaa 240

acgttaggtg gttcaagctc aatcaacgca atggtctata tccgagggca tgaagacgat 300

taccacgcat gggagcaggc ggccggccgc tactggggtt ggtaccgggc tcttgagttg 360

ttcaaaaggc ttgaatgcaa ccagcgattc gataagtccg agcaccatgg ggttgacgga 420

gaattagctg ttagtgattt aaaatatatc aatccgctta gcaaagcatt cgtgcaagcc 480

ggcatggagg ccaatattaa tttcaacgga gatttcaacg gcgagtacca ggacggcgta 540

gggttctatc aagtaaccca aaaaaatgga caacgctgga gctcggcgcg tgcattcttg 600

cacggtgtac tttccagacc aaatctagac atcattactg atgcgcatgc atcaaaaatt 660

ctttttgaag accgtaaggc ggttggtgtt tcttatataa agaaaaatat gcaccatcaa 720

gtcaagacaa cgagtggtgg tgaagtactt cttagtcttg gcgcagtcgg cacgcctcac 780

cttctaatgc tttctggtgt tggggctgca gccgagctta aggaacatgg tgtttctcta 840

gtccatgatc ttcctgaggt ggggaaaaat cttcaagatc atttggacat cacattgatg 900

tgcgcagcaa attcgagaga gccgataggt gttgctcttt ctttcatccc tcgtggtgtc 960

tcgggtttgt tttcatatgt gtttaagcgc gaggggtttc tcactagtaa cgtggcagag 1020

tcgggtggtt ttgtaaaaag ttctcctgat cgtgatcggc ccaatttgca gtttcatttc 1080

cttccaactt atcttaaaga tcacggtcga aaaatagcgg gtggttatgg ttatacgcta 1140

catatatgtg atcttttgcc taagagccga ggcagaattg gcctaaaaag cgccaatcca 1200

ttacagccgc ctttaattga cccgaactat cttagcgatc atgaagatat taaaaccatg 1260

attgcgggta ttaagatagg gcgcgctatt ttgcaggccc catcgatggc gaagcatttt 1320

aagcatgaag tagtaccggg ccaggctgtt aaaactgatg atgaaataat cgaagatatt 1380

cgtaggcgag ctgagactat ataccatccg gtaggtactt gtaggatggg taaagatcca 1440

gcgtcagttg ttgatccgtg cctgaagatc cgtgggttgg caaatattag agtcgttgat 1500

gcgtcaatta tgccgcactt ggtcgcgggt aacacaaacg ctccaactat tatgattgca 1560

gaaaatgcgg cagaaataat tatgcggaat cttgatgtgg aagcattaga ggctagcgct 1620

gagtttgctc gcgagggtgc agagctagag ttggcc 1656

<210> 28

<211> 535

<212> PRT

<213> 泊库岛食烷菌菌株SK2

<400> 28

Met Tyr Asp Tyr Ile Ile Val Gly Ala Gly Ser Ala Gly Cys Val Leu

1 5 10 15

Ala Asn Arg Leu Ser Ala Asp Thr Ser Lys Arg Val Ala Leu Ile Glu

20 25 30

Ala Gly Pro Arg Asp Lys Asn Pro Leu Ile His Met Pro Ile Gly Ile

35 40 45

Ala Leu Leu Ala Asn Asn Arg Lys Leu Asn Trp Ala Leu Glu Thr Glu

50 55 60

Pro Gln Glu His Leu Lys Gly Arg Gln Leu Phe Trp Pro Arg Gly Lys

65 70 75 80

Thr Leu Gly Gly Ser Ser Ser Ile Asn Ala Met Val Tyr Ile Arg Gly

85 90 95

His Lys Ala Asp Tyr Asp His Trp Gly Gln Val Ala Gly Asn Asn Asn

100 105 110

Leu Trp Gly Trp Asp Arg Ala Leu Thr Leu Phe Arg Arg Val Glu Asp

115 120 125

Asn Gln Arg Leu Gly Ala Asp Pro Tyr His Gly Lys Asp Gly Glu Leu

130 135 140

Thr Val Ser Glu Leu Lys Ser Ile Asn Pro Leu Ser Arg Asp Phe Val

145 150 155 160

Arg Ala Ala Pro His Val Asp Leu Pro Val Asn Thr Asp Phe Asn Gly

165 170 175

Lys Ser Gln Asp Gly Leu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Gln Lys Asn Gly

180 185 190

Gln Arg Trp Ser Ser Ala Gln Ala Phe Leu Arg Ala Ala Glu Ser Arg

195 200 205

Ser Asn Leu Asp Val Leu Thr Asp Ala Arg Val Thr Arg Val Ala Met

210 215 220

Glu Gly Lys Arg Ala Val Gly Val Thr Leu Lys Gln Gly Ser Glu Tyr

225 230 235 240

Arg Gln Leu Arg Leu Asn Ala Gly Gly Glu Val Ile Leu Ser Gly Gly

245 250 255

Ala Val Asn Ser Pro Gln Leu Leu Leu Leu Ser Gly Ile Gly Asp Ser

260 265 270

Lys Glu Leu Ala Lys His Gly Ile Pro Leu Val His His Leu Pro Glu

275 280 285

Val Gly Gln Asn Leu Ala Asp His Leu Asp Ile Thr Ile Met His Thr

290 295 300

Ala Asn Ser Arg Leu Pro Ile Gly Val Ala Pro Ser Phe Leu Phe Arg

305 310 315 320

Gly Val Ser Ala Leu Phe Ser Tyr Ile Phe Ala Arg Arg Gly Phe Leu

325 330 335

Thr Ser Asn Val Ala Glu Ser Gly Gly Phe Val Lys Ser Asp Pro Ser

340 345 350

Ser Glu Arg Pro Asn Val Gln Phe His Phe Leu Pro Thr Tyr Leu Lys

355 360 365

Asp His Gly Arg Lys Val Met Ala Gly Tyr Gly Tyr Thr Leu His Ile

370 375 380

Cys Asp Leu Leu Pro Lys Ser Arg Gly Phe Ile Gly Leu Gln Ser Pro

385 390 395 400

Asp Pro Leu Ala Asn Pro Leu Ile Gln Pro Asn Tyr Leu Ser Asp Pro

405 410 415

Glu Asp Ile Lys Thr Met Ile Ser Ala Ile Lys Phe Gly Arg Arg Ile

420 425 430

Leu Gly Ala Pro Thr Met Ala Leu His Ser Lys Arg Glu Val Met Pro

435 440 445

Gly Glu Ser Val Ser Thr Asp Ala Gln Leu Ala Asp Phe Ile Arg Glu

450 455 460

Asn Ala Glu Thr Ile Tyr His Pro Val Gly Thr Cys Arg Met Gly Ala

465 470 475 480

Asp Pro Asp Ser Val Val Asp Pro Glu Leu Lys Val Arg Gly Val Glu

485 490 495

Gly Leu Arg Val Val Asp Ala Ser Ile Met Pro Ser Leu Val Ala Gly

500 505 510

Asn Thr Asn Ala Pro Thr Met Met Ile Ala Glu Asn Ala Ala Asp Ile

515 520 525

Leu Leu Gly Lys Val Gln Val

530 535

<210> 29

<211> 1608

<212> DNA

<213> 葡萄糖-甲醇-胆碱-氧化还原酶家族的氧化还原酶YP_694430 (Ab_AlkJ)

<400> 29

atgtacgatt acattattgt aggagccggg tcggctggct gtgtgttggc taaccgcctt 60

agtgcggata cttcaaaacg cgtagcgctg atcgaagccg gcccacggga taaaaatccc 120

ctaattcaca tgcctattgg catcgctctc ctcgccaaca atagaaaact caactgggcg 180

ctagaaaccg agcctcaaga acacttgaaa gggcgccaac tgttttggcc ccgcggaaag 240

acgcttggtg gctcttcttc tattaatgcc atggtgtata tcaggggcca taaagccgac 300

tacgatcatt ggggccaagt tgccggtaac aacaacctct ggggttggga tcgtgcatta 360

acattatttc gtcgggtgga agacaaccaa cgccttggcg cagacccata ccacggcaaa 420

gatggtgagc tcactgtaag cgaattaaaa tcgatcaacc cgctgagccg tgattttgtt 480

cgagcagcgc ctcacgtaga cctgcccgtg aacacagact ttaacggcaa atcacaagac 540

ggattggggc tttaccaagt aacgcagaaa aatggccagc gctggagttc agcgcaagca 600

tttttgcgtg ccgctgagag ccgctctaat cttgacgtgc taaccgatgc tcgagtaacc 660

cgcgtggcta tggagggtaa gcgagcggtt ggcgtgaccc tgaaacaggg aagtgaatat 720

cgccagctga gactcaatgc cggcggcgaa gtcatcctgt ctggtggtgc agttaattca 780

ccacagctcc tcctgctgtc tggcatcggg gatagtaaag agcttgcgaa acacggcatt 840

ccgctagttc atcaccttcc cgaagtcggc cagaatttgg ccgatcatct ggacatcacg 900

atcatgcaca cggcgaactc tcgtttgccc attggcgttg cacccagctt cttattccgt 960

ggggtgagcg cacttttctc ctatatcttt gcgcgacgtg gttttcttac cagtaatgtt 1020

gccgagtctg gcggctttgt gaaatcggac ccttcgtctg agcgacccaa tgtgcaattt 1080

cactttttgc ccacttacct gaaggatcat ggccgaaaag taatggcagg ctatggctac 1140

actttgcaca tttgcgattt gttgccgaaa agccgaggct tcattggatt gcaaagccct 1200

gacccattgg ccaatccgct gattcagcct aactatctga gcgaccccga agatatcaaa 1260

acaatgatat ccgccattaa gtttgggcga cgcattctcg gagcaccaac aatggcgctt 1320

catagtaaac gggaagttat gccgggagag tccgtatcta cggacgctca actagcagac 1380

tttatccgtg aaaatgctga aaccatctac caccctgttg gcacttgtcg tatgggggcc 1440

gaccctgatt ccgttgtcga tccggaactg aaagtcagag gcgttgaagg gctaagagtt 1500

gtcgatgcct cgataatgcc cagcttggtg gcgggtaaca cgaacgcacc cacaatgatg 1560

attgccgaaa atgcggccga catcctgctg ggaaaggtcc aagtgtaa 1608

<210> 30

<211> 416

<212> PRT

<213> 水油海杆菌 VT8

<400> 30

Met Val Ser Lys Arg Lys Glu Arg Thr Val Ile Val Gly Gly Gly His

1 5 10 15

Ala Ala Gly Ala Leu Leu Thr Ala Leu Leu Gln Lys Lys Tyr Gln His

20 25 30

Glu Val Val Leu Val Gly Asn Glu Pro His Pro Pro Tyr His Arg Pro

35 40 45

Pro Leu Ser Lys Asn Tyr Leu Thr Gly Asp Val Asp Gln Glu Ser Leu

50 55 60

Tyr Leu Lys Pro Arg Ser Val Tyr Glu Asn Ala Gly His Gln Leu Arg

65 70 75 80

Leu Gly Val Arg Val Glu Gln Ile Asp Arg Asp Ser Ser Thr Ile Ser

85 90 95

Leu Ser Asp Gln Ser Arg Leu Gln Tyr Asp Arg Leu Val Leu Ala Thr

100 105 110

Gly Ser His Leu Arg His Leu Asn Ala Pro Gly Ala Asp Leu Asn Gly

115 120 125

Ile His Tyr Leu His Asp Ile Ala Asp Ser Glu Val Leu Arg Glu Gln

130 135 140

Leu Val Ala Gly Lys Arg Leu Val Val Val Gly Gly Gly Tyr Ile Gly

145 150 155 160

Leu Glu Val Ala Ala Ser Ala Asn Lys Lys Gly Val Asn Val Thr Val

165 170 175

Leu Glu Ala Ala Glu Arg Leu Met Gln Arg Val Thr Gly Pro Glu Ile

180 185 190

Ser Ala Phe Leu Tyr Asp Lys His Arg Gly Ala Gly Val Asp Val Arg

195 200 205

Leu Asn Thr Ala Val Thr Gly Phe Glu Ala Gly Asp Gln Gly His Val

210 215 220

Ala Gly Val Thr Leu Ala Asp Gly Ser Thr Val Pro Ala Asp Ile Val

225 230 235 240

Leu Val Ser Ile Gly Ile Ile Pro Glu Thr Ala Leu Ala Lys Asp Ala

245 250 255

Gly Leu Pro Cys Asp Asn Gly Ile Ile Val Asp Glu Phe Thr Arg Thr

260 265 270

Glu Asp Pro Ala Ile Leu Ala Ile Gly Asp Cys Thr Arg His Arg Asn

275 280 285

Leu Phe Phe Glu Lys Met Gln Arg Leu Glu Ser Val Ala Asn Ala Val

290 295 300

Asp Gln Ala Arg Thr Ala Ala Ala Thr Leu Met Gly Glu Glu Lys Pro

305 310 315 320

Tyr Asp Ser Val Pro Trp Phe Trp Ser Asn Gln Tyr Asp Val Arg Leu

325 330 335

Gln Met Val Gly Leu Ser Gln Asn His Asp Gln Arg Val Val Arg Gly

340 345 350

Thr Pro Glu Asp Lys Gly Phe Ala Val Phe Tyr Leu Arg Glu Gly Cys

355 360 365

Val Ile Ala Val Asp Ala Val Asn Leu Pro Leu Ala Phe Leu Val Gly

370 375 380

Lys Thr Leu Val Gln Gln Arg Arg Thr Ile Asn Pro Glu Leu Ile Glu

385 390 395 400

Asp Pro Asp Thr Glu Leu Lys Ser Leu Val Asn Gly Arg Leu Gln Ser

405 410 415

<210> 31

<211> 1251

<212> DNA

<213> 水油海杆菌 VT8

<400> 31

atggtaagca aacgtaaaga gaggacggtc attgttggcg gtgggcacgc agcaggtgcc 60

ctcctgacag ccttactcca aaaaaaatat caacatgagg tcgttctggt ggggaatgaa 120

cctcatccgc cctaccatcg accgccgctg tccaagaatt acctgacagg agacgttgat 180

caggagtcgc tgtacctgaa accgcgctcg gtatacgaga acgcaggcca tcagttgcgg 240

ctcggtgtgc gcgtcgaaca aattgatcgg gacagtagca ccatcagctt gtcggatcag 300

agcaggctgc aatacgatcg actggtcctg gccaccgggt cacaccttcg acacctgaac 360

gcgcccgggg ctgacttaaa tggcattcat tacctgcacg acatagctga ttcagaggta 420

ctgcgtgaac agttagttgc tggaaagcgc ctggtcgtcg tgggtggtgg ttacatcggc 480

cttgaggtgg cggccagtgc caacaaaaaa ggtgttaatg tcacggtgct agaagccgcc 540

gaacgtctta tgcagcgcgt tacgggcccg gaaatatcag cgttccttta cgacaaacac 600

cgtggcgccg gcgtggacgt acgtctgaac acagcggtaa ccggcttcga agcgggcgat 660

caggggcatg tggctggcgt gacgttggcg gacggaagca ccgtaccggc cgacatcgtc 720

cttgtgtcga tcggcattat cccggaaacc gctctggcta aggacgccgg cctgccctgt 780

gataacggta ttattgttga cgaatttacc cgtaccgagg accccgccat cttggcgatc 840

ggtgactgca cccggcaccg gaatcttttc ttcgagaaga tgcaacgact cgagtctgtc 900

gccaatgctg tcgatcaggc tcgtacagcc gcggcaaccc tgatgggtga ggagaaaccc 960

tatgatagcg ttccatggtt ctggtcaaac cagtacgatg ttcgtctgca gatggtagga 1020

ttgtcgcaaa atcatgatca gcgagtggtt cgaggcaccc ccgaggataa aggatttgcc 1080

gtgttctatc tccgcgaagg ctgtgttatt gctgttgacg cggtcaacct gccccttgct 1140

tttttggtag gcaagacact cgttcaacaa cgcagaacga tcaacccgga actaatagag 1200

gatccggata ctgaactgaa atctttggtg aacggaaggc tccagagttg a 1251

<210> 32

<211> 404

<212> PRT

<213> 不动杆菌属种OC4

<400> 32

Met Gln Thr Ile Val Ile Ile Gly Ala Ser His Ala Ala Ala Gln Leu

1 5 10 15

Ala Ala Ser Leu Arg Pro Asp Gly Trp Gln Gly Glu Ile Val Val Ile

20 25 30

Gly Asp Glu Pro Tyr Leu Pro Tyr His Arg Pro Pro Leu Ser Lys Thr

35 40 45

Phe Leu Arg Gly Ala Gln Leu Val Asp Glu Leu Leu Ile Arg Pro Ala

50 55 60

Ala Phe Tyr Gln Lys Asn Gln Ile Glu Phe Arg His Gly Arg Val Val

65 70 75 80

Ala Ile Asp Arg Ala Ala Arg Ser Val Thr Leu Gln Asp Gly Ser Thr

85 90 95

Leu Ala Tyr Asp Gln Leu Ala Leu Cys Thr Gly Ala Arg Val Arg Thr

100 105 110

Val Ser Leu Ala Gly Ser Asp Leu Ala Gly Val His Tyr Leu Arg Asn

115 120 125

Ile Ser Asp Val Gln Ala Ile Gln Pro Phe Val Gln Pro Asn Gly Lys

130 135 140

Ala Val Val Ile Gly Gly Gly Tyr Ile Gly Leu Glu Thr Ala Ala Ala

145 150 155 160

Leu Thr Glu Gln Gly Met Gln Val Val Val Leu Glu Ala Ala Glu Arg

165 170 175

Ile Leu Gln Arg Val Thr Ala Pro Glu Val Ser Asp Phe Tyr Thr Arg

180 185 190

Ile His Arg Glu Gln Gly Val Thr Ile His Thr Gly Val Ser Val Thr

195 200 205

Ala Ile Thr Gly Glu Gly Arg Ala Gln Ala Val Leu Cys Ala Asp Gly

210 215 220

Ser Met Phe Asp Ala Asp Leu Val Ile Ile Gly Val Gly Val Val Pro

225 230 235 240

Asn Ile Glu Leu Ala Leu Asp Ala Gly Leu Gln Val Asp Asn Gly Ile

245 250 255

Val Ile Asp Glu Tyr Cys Arg Thr Ser Ala Pro Glu Ile Val Ala Ile

260 265 270

Gly Asp Cys Ala Asn Ala Phe Asn Pro Ile Tyr Gln Arg Arg Met Arg

275 280 285

Leu Glu Ser Val Pro Asn Ala Asn Glu Gln Ala Lys Ile Ala Ser Ala

290 295 300

Thr Leu Cys Gly Leu Gln Arg Thr Ser Lys Ser Leu Pro Trp Phe Trp

305 310 315 320

Ser Asp Gln Tyr Asp Leu Lys Leu Gln Ile Ala Gly Leu Ser Gln Gly

325 330 335

Tyr Asp Gln Ile Val Ile Arg Gly Asp Val Gln Gln Arg Arg Ser Phe

340 345 350

Ala Ala Phe Tyr Leu Gln Ala Gly Arg Leu Ile Ala Ala Asp Cys Val

355 360 365

Asn Arg Pro Gln Glu Phe Met Leu Ser Lys Lys Leu Ile Thr Ala Gly

370 375 380

Thr Ala Val Asp Pro Leu Arg Leu Ala Asp Glu Ser Ile Ala Val Gln

385 390 395 400

Ala Leu Met Gly

<210> 33

<211> 1215

<212> DNA

<213> 不动杆菌属种OC4

<400> 33

atgcagacca tcgtaatcat cggcgccagc cacgcagcag cccaactggc cgcgagcttg 60

cgtccggatg gttggcaggg tgagatcgtt gtcatcggtg atgaaccgta tctgccatac 120

caccgtccgc cgctgagcaa aaccttcctg cgtggtgcac aactggttga tgaactgctg 180

attcgtcctg ccgcttttta ccaaaagaac cagattgagt tccgtcacgg tcgtgtggtc 240

gcaattgatc gtgcagcgcg tagcgttacc ctgcaagacg gtagcaccct ggcttatgat 300

cagctggcac tgtgcactgg tgcacgtgtg cgtaccgtta gcttggctgg cagcgacctg 360

gctggtgttc actacctgcg caacattagc gatgtccaag caatccagcc gttcgtgcaa 420

ccgaatggta aagcggttgt gattggtggc ggctacatcg gtctggaaac ggctgcggcc 480

ctgacggaac aaggcatgca ggtggttgtt ttggaggcgg ctgagcgcat cctgcaacgc 540

gttacggcgc ctgaagttag cgacttttac acccgtattc accgtgaaca gggcgttacc 600

attcacacgg gtgtctcggt gacggccatt accggcgaag gtcgtgcgca ggcggtgctg 660

tgcgcggatg gtagcatgtt tgatgctgat ttggttatca ttggtgtcgg cgtcgtcccg 720

aatatcgagc tggctctgga tgcgggtctg caggtggata atggcatcgt catcgacgag 780

tactgtcgca cctctgcgcc ggagatcgtc gccattggtg actgcgcgaa tgctttcaac 840

ccgatctacc agcgtcgtat gcgcttggaa tcggtgccga acgcgaacga acaagcaaag 900

attgcaagcg caaccctgtg cggtctgcag cgtaccagca aatccctgcc gtggttttgg 960

agcgatcaat atgatctgaa actgcaaatt gctggcctga gccaaggtta tgaccaaatt 1020

gtgattcgtg gcgacgttca acaacgccgc agcttcgcgg cgttctacct gcaggcgggt 1080

cgtctgatcg cggcagattg tgtaaatcgt ccgcaggagt ttatgctgag caagaagctg 1140

attaccgctg gtacggcggt ggacccgctg cgtctggctg acgagagcat cgctgtacag 1200

gcgctgatgg gctga 1215

<210> 34

<211> 470

<212> PRT

<213> 水油海杆菌 VT8

<400> 34

Met Pro Thr Leu Pro Arg Thr Phe Asp Asp Ile Gln Ser Arg Leu Ile

1 5 10 15

Asn Ala Thr Ser Arg Val Val Pro Met Gln Arg Gln Ile Gln Gly Leu

20 25 30

Lys Phe Leu Met Ser Ala Lys Arg Lys Thr Phe Gly Pro Arg Arg Pro

35 40 45

Met Pro Glu Phe Val Glu Thr Pro Ile Pro Asp Val Asn Thr Leu Ala

50 55 60

Leu Glu Asp Ile Asp Val Ser Asn Pro Phe Leu Tyr Arg Gln Gly Gln

65 70 75 80

Trp Arg Ala Tyr Phe Lys Arg Leu Arg Asp Glu Ala Pro Val His Tyr

85 90 95

Gln Lys Asn Ser Pro Phe Gly Pro Phe Trp Ser Val Thr Arg Phe Glu

100 105 110

Asp Ile Leu Phe Val Asp Lys Ser His Asp Leu Phe Ser Ala Glu Pro

115 120 125

Gln Ile Ile Leu Gly Asp Pro Pro Glu Gly Leu Ser Val Glu Met Phe

130 135 140

Ile Ala Met Asp Pro Pro Lys His Asp Val Gln Arg Ser Ser Val Gln

145 150 155 160

Gly Val Val Ala Pro Lys Asn Leu Lys Glu Met Glu Gly Leu Ile Arg

165 170 175

Ser Arg Thr Gly Asp Val Leu Asp Ser Leu Pro Thr Asp Lys Pro Phe

180 185 190

Asn Trp Val Pro Ala Val Ser Lys Glu Leu Thr Gly Arg Met Leu Ala

195 200 205

Thr Leu Leu Asp Phe Pro Tyr Glu Glu Arg His Lys Leu Val Glu Trp

210 215 220

Ser Asp Arg Met Ala Gly Ala Ala Ser Ala Thr Gly Gly Glu Phe Ala

225 230 235 240

Asp Glu Asn Ala Met Phe Asp Asp Ala Ala Asp Met Ala Arg Ser Phe

245 250 255

Ser Arg Leu Trp Arg Asp Lys Glu Ala Arg Arg Ala Ala Gly Glu Glu

260 265 270

Pro Gly Phe Asp Leu Ile Ser Leu Leu Gln Ser Asn Lys Glu Thr Lys

275 280 285

Asp Leu Ile Asn Arg Pro Met Glu Phe Ile Gly Asn Leu Thr Leu Leu

290 295 300

Ile Val Gly Gly Asn Asp Thr Thr Arg Asn Ser Met Ser Gly Gly Leu

305 310 315 320

Val Ala Met Asn Glu Phe Pro Arg Glu Phe Glu Lys Leu Lys Ala Lys

325 330 335

Pro Glu Leu Ile Pro Asn Met Val Ser Glu Ile Ile Arg Trp Gln Thr

340 345 350

Pro Leu Ala Tyr Met Arg Arg Ile Ala Lys Gln Asp Val Glu Leu Gly

355 360 365

Gly Gln Thr Ile Lys Lys Gly Asp Arg Val Val Met Trp Tyr Ala Ser

370 375 380

Gly Asn Arg Asp Glu Arg Lys Phe Asp Asn Pro Asp Gln Phe Ile Ile

385 390 395 400

Asp Arg Lys Asp Ala Arg Asn His Met Ser Phe Gly Tyr Gly Val His

405 410 415

Arg Cys Met Gly Asn Arg Leu Ala Glu Leu Gln Leu Arg Ile Leu Trp

420 425 430

Glu Glu Ile Leu Lys Arg Phe Asp Asn Ile Glu Val Val Glu Glu Pro

435 440 445

Glu Arg Val Gln Ser Asn Phe Val Arg Gly Tyr Ser Arg Leu Met Val

450 455 460

Lys Leu Thr Pro Asn Ser

465 470

<210> 35

<211> 1413

<212> DNA

<213> 水油海杆菌 VT8

<400> 35

atgccaacac tgcccagaac atttgacgac attcagtccc gactgattaa cgccacctcc 60

agggtggtgc cgatgcagag gcaaattcag ggactgaaat tcttaatgag cgccaagagg 120

aagaccttcg gcccacgccg accgatgccc gaattcgttg aaacacccat cccggacgtt 180

aacacgctgg cccttgagga catcgatgtc agcaatccgt ttttataccg gcagggtcag 240

tggcgcgcct atttcaaacg gttgcgtgat gaggcgccgg tccattacca gaagaacagc 300

cctttcggcc ccttctggtc ggtaactcgg tttgaagaca tcctgttcgt ggataagagt 360

cacgacctgt tttccgccga gccgcaaatc attctcggtg accctccgga ggggctgtcg 420

gtggaaatgt tcatagcgat ggatccgccg aaacacgatg tgcagcgcag ctcggtgcag 480

ggagtagtgg caccgaaaaa cctgaaggag atggaggggc tgatccgatc acgcaccggc 540

gatgtgcttg acagcctgcc tacagacaaa ccctttaact gggtacctgc tgtttccaag 600

gaactcacag gccgcatgct ggcgacgctt ctggattttc cttacgagga acgccacaag 660

ctggttgagt ggtcggacag aatggcaggt gcagcatcgg ccaccggcgg ggagtttgcc 720

gatgaaaatg ccatgtttga cgacgcggca gacatggccc ggtctttctc caggctttgg 780

cgggacaagg aggcgcgccg cgcagcaggc gaggagcccg gtttcgattt gatcagcctg 840

ttgcagagca acaaagaaac gaaagacctg atcaatcggc cgatggagtt tatcggtaat 900

ttgacgctgc tcatagtcgg cggcaacgat acgacgcgca actcgatgag tggtggcctg 960

gtggccatga acgaattccc cagggaattt gaaaaattga aggcaaaacc ggagttgatt 1020

ccgaacatgg tgtcggaaat catccgctgg caaacgccgc tggcctatat gcgccgaatc 1080

gccaagcagg atgtcgaact gggcggccag accatcaaga agggtgatcg agttgtcatg 1140

tggtacgcgt cgggtaaccg ggacgagcgc aaatttgaca accccgatca gttcatcatt 1200

gatcgcaagg acgcacgaaa ccacatgtcg ttcggctatg gggttcaccg ttgcatgggc 1260

aaccgtctgg ctgaactgca actgcgcatc ctctgggaag aaatactcaa gcgttttgac 1320

aacatcgaag tcgtcgaaga gcccgagcgg gtgcagtcca acttcgtgcg gggctattcc 1380

aggttgatgg tcaaactgac accgaacagt taa 1413

<210> 36

<211> 106

<212> PRT

<213> 不动杆菌属种OC4

<400> 36

Met Gly Gln Ile Thr Phe Ile Ala His Asp Gly Ala Gln Thr Ser Val

1 5 10 15

Ala Ile Glu Ala Gly Lys Ser Leu Met Gln Leu Ala Val Glu Asn Gly

20 25 30

Val Ala Gly Ile Asp Gly Asp Cys Gly Gly Glu Cys Ala Cys Gly Thr

35 40 45

Cys His Val Ile Val Ser Ala Glu Trp Ser Asp Val Ala Gly Thr Ala

50 55 60

Gln Ala Asn Glu Gln Gln Met Leu Glu Met Thr Pro Glu Arg Ala Ala

65 70 75 80

Thr Ser Arg Leu Ala Cys Cys Ile Gln Val Thr Asp Ala Met Asp Gly

85 90 95

Met Thr Val His Leu Pro Glu Phe Gln Met

100 105

<210> 37

<211> 321

<212> DNA

<213> 不动杆菌属种OC4

<400> 37

atgggccaaa ttactttcat cgcacacgac ggcgcacaga cgagcgttgc gatcgaggcg 60

ggtaagtctt tgatgcagct ggcggtagaa aacggtgtcg ccggcatcga tggcgactgc 120

ggtggcgagt gtgcgtgtgg cacctgtcat gtcattgtct ctgcggagtg gagcgatgtg 180

gccggtaccg cgcaagccaa tgagcagcag atgctggaga tgactccgga gcgtgcggcc 240

accagccgtc tggcatgttg catccaagtg acggacgcga tggatggtat gaccgtccat 300

ctgccggaat ttcagatgta a 321

<210> 38

<211> 542

<212> PRT

<213> 柄杆菌属种 K31

<400> 38

Met Phe Asp Tyr Ile Ile Val Gly Ala Gly Ser Ala Gly Cys Leu Leu

1 5 10 15

Ala Glu Arg Leu Ser Ala Asn Pro Arg Thr Arg Val Cys Leu Leu Glu

20 25 30

Ala Gly Pro Pro Asp Arg Ser Pro Leu Ile His Met Pro Ile Gly Ile

35 40 45

Ala Leu Leu Ser Lys Ser Lys Ile Leu Asn Trp Ala Phe Glu Thr Gln

50 55 60

Pro Gln Ala Asn Leu Asp Gly Arg Arg Leu Phe Trp Pro Arg Gly Lys

65 70 75 80

Thr Leu Gly Gly Ser Ser Ser Ile Asn Ala Met Val Tyr Ile Arg Gly

85 90 95

His Arg Asp Asp Tyr Asp Ser Trp Gly Glu Ala Ala Asp Pro Ile Trp

100 105 110

Ser Tyr Asp Asn Val Leu Pro Leu Phe Lys Ala Met Glu Ser Asn Glu

115 120 125

Arg Phe Gly Thr Asp Ala Phe His Gly Gly Asp Gly Glu Leu His Val

130 135 140

Ser Asp Leu Arg Thr Arg Asn Pro Leu Ser Asp Ala Phe Val Glu Ala

145 150 155 160

Gly Gln Gln Ala Gln Phe Pro His Ala Val Asp Phe Asn Gly Lys Met

165 170 175

Gln Asp Gly Val Gly Leu Tyr Gln Val Thr Gln His Lys Gly Arg Arg

180 185 190

Trp Ser Ser Ala Arg Ala Phe Leu Ser Lys Ala Lys Gly Arg Pro Asn

195 200 205

Leu Arg Ile Val Thr Gly Ala Arg Ala Thr Arg Ile Ile Leu Glu Gly

210 215 220

Arg Lys Ala Val Gly Val Thr Tyr Ala Ala Gly Gly Lys Leu Val Asp

225 230 235 240

Val Arg Thr Arg Gly Gly Glu Val Ile Leu Ser Gly Gly Ala Val Asn

245 250 255

Ser Pro Gln Leu Leu Leu Leu Ser Gly Ile Gly Gly Ala Ala Glu Leu

260 265 270

Asn Ala Leu Gly Ile Pro Val Val Val Asp Leu Pro Ala Val Gly Lys

275 280 285

Asn Leu Gln Asp His Leu Asp Ile Thr Ile Met His Glu Ala Asn Asp

290 295 300

Arg Thr Pro Ile Gly Ile Ala Pro Ser Phe Ile Pro Arg Ala Leu Ser

305 310 315 320

Gly Ala Leu Ser Tyr Ala Phe Leu Arg Lys Gly Phe Leu Thr Ser Asn

325 330 335

Val Ala Glu Ala Gly Gly Phe Val Lys Ser Thr Pro Ser Arg Ser Arg

340 345 350

Pro Asn Leu Gln Phe His Phe Leu Pro Thr Leu Leu Lys Asp His Gly

355 360 365

Arg Glu Met Ala Phe Gly Tyr Gly Tyr Thr Leu His Val Cys Asp Leu

370 375 380

Leu Pro Lys Ser Arg Gly Arg Ile Gly Leu Thr Ser Pro Asp Pro Leu

385 390 395 400

Asp Asp Pro Leu Ile Asp Pro Asn Tyr Leu Ser Ala Pro Glu Asp Ile

405 410 415

Glu Thr Met Val Ala Ala Val Lys Ile Gly Arg Gln Ile Leu Ser Ala

420 425 430

Pro Ser Met Ala Ala Phe Ser Lys Thr Glu Leu Val Pro Gly Pro Ser

435 440 445

Val Gln Ser Lys Ala Asp Ile Met Ala Asp Ile Arg Arg Arg Ala Glu

450 455 460

Thr Ile Tyr His Pro Val Gly Thr Cys Arg Met Gly Arg Asp Pro Gln

465 470 475 480

Ser Val Val Asp Pro Ser Leu Arg Val Arg Gly Val Gln Gly Leu Arg

485 490 495

Val Val Asp Ala Ser Val Met Pro Thr Leu Val Ala Gly Asn Thr Asn

500 505 510

Ala Pro Thr Met Met Ile Ala Glu Arg Ala Ala Glu Leu Ile Leu Gly

515 520 525

Lys Thr Lys Leu Ala Leu Ser Ala Asn Ile Glu Ala Phe Arg

530 535 540

<210> 39

<211> 1629

<212> DNA

<213> 柄杆菌属种 K31

<400> 39

atgtttgact atattattgt tggagcgggg tctgccggat gcttgttggc ggagcgcttg 60

tcagccaatc ccaggacgcg ggtctgtctg cttgaggcgg gcccgcccga ccgcagcccg 120

ctgatccaca tgcccattgg gatagcgctt ctgtcaaaga gcaaaattct caattgggca 180

ttcgagacgc agccacaggc caatctcgat ggtcgacggc tgttttggcc gcgcggcaaa 240

acccttggcg gatcgagttc gatcaatgcg atggtctata tccgcgggca ccgggatgac 300

tatgactcct ggggcgaggc agccgatccg atctggtcct atgacaatgt gctcccgctg 360

ttcaaggcga tggagtccaa cgagagattt ggaaccgacg cgtttcatgg cggcgatggt 420

gagcttcacg tcagcgacct gcgaacccgc aaccccttga gcgatgcctt cgtcgaggcc 480

ggacaacagg cccagtttcc gcatgccgtc gatttcaatg ggaagatgca ggacggcgtc 540

ggcctgtacc aggtcaccca gcacaaaggc cggcgctgga gttccgcgcg cgcctttctt 600

tccaaggcca agggccggcc caatctacgg atagtcacgg gcgcgcgggc tacccggatc 660

attctggagg gccgcaaagc ggtcggcgtg acctatgccg caggcggcaa gctggtcgat 720

gtgcgaacca ggggcggcga ggtcattctt tcgggcggcg ccgtcaattc cccgcaactg 780

ctgctgcttt ccggcatcgg cggcgcggcc gagctgaacg cactcggcat tccggtggtc 840

gtcgaccttc cggcagttgg aaaaaatctg caggatcacc tcgatatcac aatcatgcat 900

gaggcgaacg atcgtacacc gatcggcatc gcaccgtcat tcatcccgcg ggcgctgtcc 960

ggagcgctat cctacgcctt ccttcgaaag ggtttcttga cgagcaacgt cgccgaggcg 1020

ggcggcttcg tcaaaagcac accttcgcgg agtcggccga atctacagtt tcatttcctc 1080

cccacgcttt tgaaggacca tgggcgcgaa atggcgttcg ggtatggcta tacattgcat 1140

gtctgcgatc ttctgcccaa gagccgaggc cgcatcgggc tcacaagccc cgacccgctc 1200

gacgatccgc tgatcgatcc aaactatctc tcggcccccg aagacattga gaccatggtc 1260

gcggcggtga agatcggccg gcaaattctg tcggcgccgt caatggcggc cttctcgaaa 1320

accgaactgg tccctgggcc atcggtccag agcaaggcgg atatcatggc ggatatccgt 1380

cggcgagcgg agacgatcta tcatccggtg ggaacatgcc ggatgggacg agaccctcag 1440

tcggttgtcg atccgtcact ccgagtgcgt ggcgtgcaag gccttcgcgt cgtcgacgcc 1500

tcggtcatgc cgacgctggt cgccggaaac accaacgccc cgacgatgat gattgcggaa 1560

agagctgccg agctcattct tgggaagacg aaactcgcac tcagcgccaa cattgaggca 1620

ttccgctaa 1629

<210> 40

<211> 704

<212> PRT

<213> 热带念珠菌

<400> 40

Met Ala Pro Phe Leu Pro Asp Gln Val Asp Tyr Lys His Val Asp Thr

1 5 10 15

Leu Met Leu Leu Cys Asp Gly Ile Ile His Glu Thr Thr Val Asp Glu

20 25 30

Ile Lys Asp Val Ile Ala Pro Asp Phe Pro Ala Asp Lys Tyr Glu Glu

35 40 45

Tyr Val Arg Thr Phe Thr Lys Pro Ser Glu Thr Pro Gly Phe Arg Glu

50 55 60

Thr Val Tyr Asn Thr Val Asn Ala Asn Thr Met Asp Ala Ile His Gln

65 70 75 80

Phe Ile Ile Leu Thr Asn Val Leu Gly Ser Arg Val Leu Ala Pro Ala

85 90 95

Leu Thr Asn Ser Leu Thr Pro Ile Lys Asp Met Ser Leu Glu Asp Arg

100 105 110

Glu Lys Leu Leu Ala Ser Trp Arg Asp Ser Pro Ile Ala Ala Lys Arg

115 120 125

Lys Leu Phe Arg Leu Val Ser Thr Leu Thr Leu Val Thr Phe Thr Arg

130 135 140

Leu Ala Asn Glu Leu His Leu Lys Ala Ile His Tyr Pro Gly Arg Glu

145 150 155 160

Asp Arg Glu Lys Ala Tyr Glu Thr Gln Glu Ile Asp Pro Phe Lys Tyr

165 170 175

Gln Phe Leu Glu Lys Pro Lys Phe Tyr Gly Ala Glu Leu Tyr Leu Pro

180 185 190

Asp Ile Asp Val Ile Ile Ile Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Val Val

195 200 205

Ala His Thr Leu Thr Asn Asp Gly Phe Lys Ser Leu Val Leu Glu Lys

210 215 220

Gly Arg Tyr Phe Ser Asn Ser Glu Leu Asn Phe Asp Asp Lys Asp Gly

225 230 235 240

Val Gln Glu Leu Tyr Gln Ser Gly Gly Thr Leu Thr Thr Val Asn Gln

245 250 255

Gln Leu Phe Val Leu Ala Gly Ser Thr Phe Gly Gly Gly Thr Thr Val

260 265 270

Asn Trp Ser Ala Cys Leu Lys Thr Pro Phe Lys Val Arg Lys Glu Trp

275 280 285

Tyr Asp Glu Phe Gly Val Asp Phe Ala Ala Asp Glu Ala Tyr Asp Lys

290 295 300

Ala Gln Asp Tyr Val Trp Gln Gln Met Gly Ala Ser Thr Glu Gly Ile

305 310 315 320

Thr His Ser Leu Ala Asn Glu Ile Ile Ile Glu Gly Gly Lys Lys Leu

325 330 335

Gly Tyr Lys Ala Lys Val Leu Asp Gln Asn Ser Gly Gly His Pro His

340 345 350

His Arg Cys Gly Phe Cys Tyr Leu Gly Cys Lys His Gly Ile Lys Gln

355 360 365

Gly Ser Val Asn Asn Trp Phe Arg Asp Ala Ala Ala His Gly Ser Gln

370 375 380

Phe Met Gln Gln Val Arg Val Leu Gln Ile Leu Asn Lys Lys Gly Ile

385 390 395 400

Ala Tyr Gly Ile Leu Cys Glu Asp Val Val Thr Gly Ala Lys Phe Thr

405 410 415

Ile Thr Gly Pro Lys Lys Phe Val Val Ala Ala Gly Ala Leu Asn Thr

420 425 430

Pro Ser Val Leu Val Asn Ser Gly Phe Lys Asn Lys Asn Ile Gly Lys

435 440 445

Asn Leu Thr Leu His Pro Val Ser Val Val Phe Gly Asp Phe Gly Lys

450 455 460

Asp Val Gln Ala Asp His Phe His Asn Ser Ile Met Thr Ala Leu Cys

465 470 475 480

Ser Glu Ala Ala Asp Leu Asp Gly Lys Gly His Gly Cys Arg Ile Glu

485 490 495

Thr Ile Leu Asn Ala Pro Phe Ile Gln Ala Ser Phe Leu Pro Trp Arg

500 505 510

Gly Ser Asn Glu Ala Arg Arg Asp Leu Leu Arg Tyr Asn Asn Met Val

515 520 525

Ala Met Leu Leu Leu Ser Arg Asp Thr Thr Ser Gly Ser Val Ser Ser

530 535 540

His Pro Thr Lys Pro Glu Ala Leu Val Val Glu Tyr Asp Val Asn Lys

545 550 555 560

Phe Asp Arg Asn Ser Ile Leu Gln Ala Leu Leu Val Thr Ala Asp Leu

565 570 575

Leu Tyr Ile Gln Gly Ala Lys Arg Ile Leu Ser Pro Gln Pro Trp Val

580 585 590

Pro Ile Phe Glu Ser Asp Lys Pro Lys Asp Lys Arg Ser Ile Lys Asp

595 600 605

Glu Asp Tyr Val Glu Trp Arg Ala Lys Val Ala Lys Ile Pro Phe Asp

610 615 620

Thr Tyr Gly Ser Pro Tyr Gly Ser Ala His Gln Met Ser Ser Cys Arg

625 630 635 640

Met Ser Gly Lys Gly Pro Lys Tyr Gly Ala Val Asp Thr Asp Gly Arg

645 650 655

Leu Phe Glu Cys Ser Asn Val Tyr Val Ala Asp Ala Ser Leu Leu Pro

660 665 670

Thr Ala Ser Gly Ala Asn Pro Met Val Thr Thr Met Thr Leu Ala Arg

675 680 685

His Val Ala Leu Gly Leu Ala Asp Ser Leu Lys Thr Lys Ala Lys Leu

690 695 700

<210> 41

<211> 2115

<212> DNA

<213> 热带念珠菌

<400> 41

atggctccat ttttgcccga ccaggtcgac tacaaacacg tcgacaccct tatgttatta 60

tgtgacggga tcatccacga aaccaccgtg gacgaaatca aagacgtcat tgcccctgac 120

ttccccgccg acaaatacga ggagtacgtc aggacattca ccaaaccctc cgaaacccca 180

gggttcaggg aaaccgtcta caacaccgtc aacgcaaaca ccatggatgc aatccaccag 240

ttcattatct tgaccaatgt tttgggatca agggtcttgg caccagcttt gaccaactcg 300

ttgactccta tcaaggacat gagcttggaa gaccgtgaaa agttgttagc ctcgtggcgt 360

gactccccta ttgctgctaa aaggaagttg ttcaggttgg tttctacgct taccttggtc 420

acgttcacga gattggccaa tgagttgcat ttgaaagcca ttcattatcc aggaagagaa 480

gaccgtgaaa aggcttatga aacccaggag attgaccctt ttaagtacca gtttttggaa 540

aaaccgaagt tttacggcgc tgagttgtac ttgccagata ttgatgtgat cattattgga 600

tctggggccg gtgctggtgt cgtggcccac actttgacca acgacggctt caagagtttg 660

gttttggaaa agggcagata ctttagcaac tccgagttga actttgatga caaggacggg 720

gttcaagaat tataccaaag tggaggtact ttgaccaccg tcaaccagca gttgtttgtt 780

cttgctggtt ccacttttgg tggtggtacc actgtcaatt ggtcggcctg tcttaaaacg 840

ccattcaagg tgcgtaagga atggtatgat gagtttggcg ttgactttgc tgccgatgaa 900

gcctacgaca aagcacagga ttatgtttgg cagcaaatgg gagcttctac cgaaggcatc 960

acccactctt tggctaacga gattattatt gaaggtggca agaaattagg ttacaaggcc 1020

aaggtattag accaaaacag cggtggtcat cctcatcaca gatgcggttt ctgttatttg 1080

ggttgtaagc acggtatcaa gcagggctct gttaataact ggtttagaga cgcagctgcc 1140

cacggttctc agttcatgca acaggttaga gttttgcaaa tccttaacaa gaagggcatc 1200

gcttatggta tcttgtgtga ggatgttgta accggtgcca agttcaccat tactggcccc 1260

aaaaagtttg ttgttgccgc cggcgcctta aacactccat ctgtgttggt caactccgga 1320

ttcaagaaca agaacatcgg taagaactta actttgcatc cagtttctgt cgtgtttggt 1380

gattttggca aagacgttca agcagatcac ttccacaact ccatcatgac tgctctttgt 1440

tcagaagccg ctgatttaga cggcaagggt catggatgca gaattgaaac catcttgaac 1500

gctccattca tccaggcttc attcttacca tggagaggta gtaacgaggc tagacgagac 1560

ttgttgcgtt acaacaacat ggtggccatg ttacttctta gtcgtgatac caccagtggt 1620

tccgtttcgt cccatccaac taaacctgaa gcattagttg tcgagtacga cgtgaacaag 1680

tttgacagaa actccatctt gcaggcattg ttggtcactg ctgacttgtt gtacattcaa 1740

ggtgccaaga gaatccttag tccccaacca tgggtgccaa tttttgaatc cgacaagcca 1800

aaggataaga gatcaatcaa ggacgaggac tatgtcgaat ggagagccaa ggttgccaag 1860

attccttttg acacctacgg ctcgccttat ggttcggcgc atcaaatgtc ttcttgtcgt 1920

atgtcaggta agggtcctaa atacggtgct gttgataccg atggtagatt gtttgaatgt 1980

tcgaatgttt atgttgctga cgctagtctt ttgccaactg ctagcggtgc taatcctatg 2040

gtcaccacca tgactcttgc aagacatgtt gcgttaggtt tggcagactc cttgaagacc 2100

aaggccaagt tgtag 2115

<210> 42

<211> 470

<212> PRT

<213> 水油海杆菌 VT8

<400> 42

Met Pro Thr Leu Pro Arg Thr Phe Asp Asp Ile Gln Ser Arg Leu Ile

1 5 10 15

Asn Ala Thr Ser Arg Val Val Pro Met Gln Arg Gln Ile Gln Gly Leu

20 25 30

Lys Phe Leu Met Ser Ala Lys Arg Lys Thr Phe Gly Pro Arg Arg Pro

35 40 45

Met Pro Glu Phe Val Glu Thr Pro Ile Pro Asp Val Asn Thr Leu Ala

50 55 60

Leu Glu Asp Ile Asp Val Ser Asn Pro Phe Leu Tyr Arg Gln Gly Gln

65 70 75 80

Trp Arg Ala Tyr Phe Lys Arg Leu Arg Asp Glu Ala Pro Val His Tyr

85 90 95

Gln Lys Asn Ser Pro Phe Gly Pro Phe Trp Ser Val Thr Arg Phe Glu

100 105 110

Asp Ile Leu Phe Val Asp Lys Ser His Asp Leu Phe Ser Ala Glu Pro

115 120 125

Gln Ile Ile Leu Gly Asp Pro Pro Glu Gly Leu Ser Val Glu Met Phe

130 135 140

Ile Ala Met Asp Pro Pro Lys His Asp Val Gln Arg Ser Ser Val Gln

145 150 155 160

Gly Val Val Ala Pro Lys Asn Leu Lys Glu Met Glu Gly Leu Ile Arg

165 170 175

Ser Arg Thr Gly Asp Val Leu Asp Ser Leu Pro Thr Asp Lys Pro Phe

180 185 190

Asn Trp Val Pro Ala Val Ser Lys Glu Leu Thr Gly Arg Met Leu Ala

195 200 205

Thr Leu Leu Asp Phe Pro Tyr Glu Glu Arg His Lys Leu Val Glu Trp

210 215 220

Ser Asp Arg Met Ala Gly Ala Ala Ser Ala Thr Gly Gly Glu Phe Ala

225 230 235 240

Asp Glu Asn Ala Met Phe Asp Asp Ala Ala Asp Met Ala Arg Ser Phe

245 250 255

Ser Arg Leu Trp Arg Asp Lys Glu Ala Arg Arg Ala Ala Gly Glu Glu

260 265 270

Pro Gly Phe Asp Leu Ile Ser Leu Leu Gln Ser Asn Lys Glu Thr Lys

275 280 285

Asp Leu Ile Asn Arg Pro Met Glu Phe Ile Gly Asn Leu Thr Leu Leu

290 295 300

Ile Val Gly Gly Asn Asp Thr Thr Arg Asn Ser Met Ser Gly Gly Leu

305 310 315 320

Val Ala Met Asn Glu Phe Pro Arg Glu Phe Glu Lys Leu Lys Ala Lys

325 330 335

Pro Glu Leu Ile Pro Asn Met Val Ser Glu Ile Ile Arg Trp Gln Thr

340 345 350

Pro Leu Ala Tyr Met Arg Arg Ile Ala Lys Gln Asp Val Glu Leu Gly

355 360 365

Gly Gln Thr Ile Lys Lys Gly Asp Arg Val Val Met Trp Tyr Ala Ser

370 375 380

Gly Asn Arg Asp Glu Arg Lys Phe Asp Asn Pro Asp Gln Phe Ile Ile

385 390 395 400

Asp Arg Lys Asp Ala Arg Asn His Met Ser Phe Gly Tyr Gly Val His

405 410 415

Arg Cys Met Gly Asn Arg Leu Ala Glu Leu Gln Leu Arg Ile Leu Trp

420 425 430

Glu Glu Ile Leu Lys Arg Phe Asp Asn Ile Glu Val Val Glu Glu Pro

435 440 445

Glu Arg Val Gln Ser Asn Phe Val Arg Gly Tyr Ser Arg Leu Met Val

450 455 460

Lys Leu Thr Pro Asn Ser

465 470

<210> 43

<211> 1413

<212> DNA

<213> 水油海杆菌 VT8

<400> 43

atgccaacac tgcccagaac atttgacgac attcagtccc gactgattaa cgccacctcc 60

agggtggtgc cgatgcagag gcaaattcag ggactgaaat tcttaatgag cgccaagagg 120

aagaccttcg gcccacgccg accgatgccc gaattcgttg aaacacccat cccggacgtt 180

aacacgctgg cccttgagga catcgatgtc agcaatccgt ttttataccg gcagggtcag 240

tggcgcgcct atttcaaacg gttgcgtgat gaggcgccgg tccattacca gaagaacagc 300

cctttcggcc ccttctggtc ggtaactcgg tttgaagaca tcctgttcgt ggataagagt 360

cacgacctgt tttccgccga gccgcaaatc attctcggtg accctccgga ggggctgtcg 420

gtggaaatgt tcatagcgat ggatccgccg aaacacgatg tgcagcgcag ctcggtgcag 480

ggagtagtgg caccgaaaaa cctgaaggag atggaggggc tgatccgatc acgcaccggc 540

gatgtgcttg acagcctgcc tacagacaaa ccctttaact gggtacctgc tgtttccaag 600

gaactcacag gccgcatgct ggcgacgctt ctggattttc cttacgagga acgccacaag 660

ctggttgagt ggtcggacag aatggcaggt gcagcatcgg ccaccggcgg ggagtttgcc 720

gatgaaaatg ccatgtttga cgacgcggca gacatggccc ggtctttctc caggctttgg 780

cgggacaagg aggcgcgccg cgcagcaggc gaggagcccg gtttcgattt gatcagcctg 840

ttgcagagca acaaagaaac gaaagacctg atcaatcggc cgatggagtt tatcggtaat 900

ttgacgctgc tcatagtcgg cggcaacgat acgacgcgca actcgatgag tggtggcctg 960

gtggccatga acgaattccc cagggaattt gaaaaattga aggcaaaacc ggagttgatt 1020

ccgaacatgg tgtcggaaat catccgctgg caaacgccgc tggcctatat gcgccgaatc 1080

gccaagcagg atgtcgaact gggcggccag accatcaaga agggtgatcg agttgtcatg 1140

tggtacgcgt cgggtaaccg ggacgagcgc aaatttgaca accccgatca gttcatcatt 1200

gatcgcaagg acgcacgaaa ccacatgtcg ttcggctatg gggttcaccg ttgcatgggc 1260

aaccgtctgg ctgaactgca actgcgcatc ctctgggaag aaatactcaa gcgttttgac 1320

aacatcgaag tcgtcgaaga gcccgagcgg gtgcagtcca acttcgtgcg gggctattcc 1380

aggttgatgg tcaaactgac accgaacagt taa 1413

<210> 44

<211> 497

<212> PRT

<213> 不动杆菌属种OC4

<400> 44

Met Asn Ser Val Ala Glu Ile Phe Glu Lys Ile Thr Gln Thr Val Thr

1 5 10 15

Ser Thr Ala Ala Asp Val Ala Thr Thr Val Thr Asp Lys Val Lys Ser

20 25 30

Asn Glu Gln Phe Gln Thr Gly Lys Gln Phe Leu His Gly Gln Val Thr

35 40 45

Arg Phe Val Pro Leu His Thr Gln Val Arg Gly Ile Gln Trp Met Gln

50 55 60

Lys Ala Lys Phe Arg Val Phe Asn Val Gln Glu Phe Pro Ala Phe Ile

65 70 75 80

Glu Gln Pro Ile Pro Glu Val Ala Thr Leu Ala Leu Ala Glu Ile Asp

85 90 95

Val Ser Asn Pro Phe Leu Tyr Lys Gln Lys Lys Trp Gln Ser Tyr Phe

100 105 110

Lys Arg Leu Arg Asp Glu Ala Pro Val His Tyr Gln Ala Asn Ser Pro

115 120 125

Phe Gly Ala Phe Trp Ser Val Thr Arg Tyr Asp Asp Ile Val Tyr Val

130 135 140

Asp Lys Asn His Glu Ile Phe Ser Ala Glu Pro Val Ile Ala Ile Gly

145 150 155 160

Asn Thr Pro Pro Gly Leu Gly Ala Glu Met Phe Ile Ala Met Asp Pro

165 170 175

Pro Lys His Asp Val Gln Arg Gln Ala Val Gln Asp Val Val Ala Pro

180 185 190

Lys Asn Leu Lys Glu Leu Glu Gly Leu Ile Arg Leu Arg Val Gln Glu

195 200 205

Val Leu Asp Gln Leu Pro Thr Asp Gln Pro Phe Asp Trp Val Gln Asn

210 215 220

Val Ser Ile Glu Leu Thr Ala Arg Met Leu Ala Thr Leu Phe Asp Phe

225 230 235 240

Pro Tyr Glu Lys Arg His Lys Leu Val Glu Trp Ser Asp Leu Met Ala

245 250 255

Gly Thr Ala Glu Ala Thr Gly Gly Thr Val Thr Asn Leu Asp Glu Ile

260 265 270

Phe Asp Ala Ala Val Asp Ala Ala Lys His Phe Ala Glu Leu Trp His

275 280 285

Arg Lys Ala Ala Gln Lys Ser Ala Gly Ala Glu Met Gly Tyr Asp Leu

290 295 300

Ile Ser Leu Met Gln Ser Asn Glu Ala Thr Lys Asp Leu Ile Tyr Arg

305 310 315 320

Pro Met Glu Phe Met Gly Asn Leu Val Leu Leu Ile Val Gly Gly Asn

325 330 335

Asp Thr Thr Arg Asn Ser Met Thr Gly Gly Val Tyr Ala Leu Asn Leu

340 345 350

Phe Pro Asn Glu Phe Val Lys Leu Lys Asn Asn Pro Ser Leu Ile Pro

355 360 365

Asn Met Val Ser Glu Ile Ile Arg Trp Gln Thr Pro Leu Ala Tyr Met

370 375 380

Arg Arg Ile Ala Lys Gln Asp Val Glu Leu Asn Gly Gln Thr Ile Lys

385 390 395 400

Lys Gly Asp Lys Val Val Met Trp Tyr Val Ser Gly Asn Arg Asp Glu

405 410 415

Arg Val Ile Glu Arg Pro Asp Glu Leu Ile Ile Asp Arg Lys Gly Ala

420 425 430

Arg Asn His Leu Ser Phe Gly Phe Gly Val His Arg Cys Met Gly Asn

435 440 445

Arg Leu Ala Glu Met Gln Leu Arg Ile Leu Trp Glu Glu Leu Leu Gln

450 455 460

Arg Phe Glu Asn Ile Glu Val Leu Gly Glu Pro Glu Ile Val Gln Ser

465 470 475 480

Asn Phe Val Arg Gly Tyr Ala Lys Met Met Val Lys Leu Thr Ala Lys

485 490 495

Ala

<210> 45

<211> 1494

<212> DNA

<213> 不动杆菌属种OC4

<400> 45

atgaacagcg tagcagaaat cttcgagaaa atcacccaga ccgtcacgag caccgcagcc 60

gacgttgcaa ccactgtcac cgacaaggtc aaatccaacg agcaattcca aacgggtaag 120

cagtttttgc acggccaggt tacgcgtttt gtgccgttgc atacgcaggt ccgtggtatt 180

cagtggatgc agaaagccaa gtttcgcgtg ttcaatgtcc aggagttccc ggcctttatt 240

gaacaaccga ttccggaagt ggcaaccctg gcgctggcgg aaattgatgt cagcaacccg 300

ttcctgtaca aacagaaaaa gtggcaaagc tacttcaaac gtctgcgtga cgaggcgcca 360

gtgcattatc aagctaacag cccgttcggt gccttttggt ctgtgacccg ttacgacgac 420

atcgtttatg ttgacaaaaa tcatgaaatc ttctccgcag aaccggtgat tgctattggt 480

aataccccgc caggcctggg tgcggaaatg ttcatcgcaa tggaccctcc gaagcacgac 540

gtccagcgcc aagcggtgca ggacgtagtt gcgccgaaga acttgaagga actggagggt 600

ctgatccgcc tgcgtgtgca ggaagtcctg gatcagctgc cgacggatca gccgtttgac 660

tgggtgcaga acgtgtcgat tgaactgacc gcacgcatgc tggcgaccct gttcgacttt 720

ccgtatgaaa aacgtcataa actggtggaa tggtccgatc tgatggcagg tacggctgag 780

gccaccggcg gtactgtgac caatctggat gagatttttg atgcggcggt tgacgcagcc 840

aagcacttcg ctgagctgtg gcaccgcaaa gcggctcaaa agagcgccgg tgcggagatg 900

ggctacgatc tgatttccct gatgcaaagc aacgaggcga cgaaagacct gatctatcgc 960

ccgatggagt tcatgggtaa cctggtcctg ctgattgttg gtggcaatga caccacccgt 1020

aatagcatga cgggcggtgt ttatgcactg aacttgtttc cgaatgagtt tgtcaaactg 1080

aagaataacc cgagcctgat ccctaacatg gttagcgaga ttatccgctg gcagacgccg 1140

ctggcttaca tgcgccgcat tgccaagcaa gacgtcgagc tgaacggtca aaccatcaaa 1200

aagggcgata aggtcgtgat gtggtacgtc agcggtaacc gcgacgaacg tgtgattgaa 1260

cgcccggacg aactgatcat tgatcgcaag ggtgcgcgta accacctgtc cttcggcttt 1320

ggcgtgcatc gctgcatggg taatcgtttg gccgagatgc aactgcgtat cctgtgggag 1380

gaactgttgc aacgcttcga gaatatcgaa gttctgggcg aaccggagat tgttcagtcc 1440

aatttcgtgc gtggctatgc gaagatgatg gttaaactga cggcgaaagc ctaa 1494

<210> 46

<211> 558

<212> PRT

<213> 恶臭假单胞菌

<400> 46

Met Tyr Asp Tyr Ile Ile Val Gly Ala Gly Ser Ala Gly Cys Val Leu

1 5 10 15

Ala Asn Arg Leu Ser Ala Asp Pro Ser Lys Arg Val Cys Leu Leu Glu

20 25 30

Ala Gly Pro Arg Asp Thr Asn Pro Leu Ile His Met Pro Leu Gly Ile

35 40 45

Ala Leu Leu Ser Asn Ser Lys Lys Leu Asn Trp Ala Phe Gln Thr Ala

50 55 60

Pro Gln Gln Asn Leu Asn Gly Arg Ser Leu Phe Trp Pro Arg Gly Lys

65 70 75 80

Thr Leu Gly Gly Ser Ser Ser Ile Asn Ala Met Val Tyr Ile Arg Gly

85 90 95

His Glu Asp Asp Tyr His Ala Trp Glu Gln Ala Ala Gly Arg Tyr Trp

100 105 110

Gly Trp Tyr Arg Ala Leu Glu Leu Phe Lys Arg Leu Glu Cys Asn Gln

115 120 125

Arg Phe Asp Lys Ser Glu His His Gly Val Asp Gly Glu Leu Ala Val

130 135 140

Ser Asp Leu Lys Tyr Ile Asn Pro Leu Ser Lys Ala Phe Val Gln Ala

145 150 155 160

Gly Met Glu Ala Asn Ile Asn Phe Asn Gly Asp Phe Asn Gly Glu Tyr

165 170 175

Gln Asp Gly Val Gly Phe Tyr Gln Val Thr Gln Lys Asn Gly Gln Arg

180 185 190

Trp Ser Ser Ala Arg Ala Phe Leu His Gly Val Leu Ser Arg Pro Asn

195 200 205

Leu Asp Ile Ile Thr Asp Ala His Ala Ser Lys Ile Leu Phe Glu Asp

210 215 220

Arg Lys Ala Val Gly Val Ser Tyr Ile Lys Lys Asn Met His His Gln

225 230 235 240

Val Lys Thr Thr Ser Gly Gly Glu Val Leu Leu Ser Leu Gly Ala Val

245 250 255

Gly Thr Pro His Leu Leu Met Leu Ser Gly Val Gly Ala Ala Ala Glu

260 265 270

Leu Lys Glu His Gly Val Ser Leu Val His Asp Leu Pro Glu Val Gly

275 280 285

Lys Asn Leu Gln Asp His Leu Asp Ile Thr Leu Met Cys Ala Ala Asn

290 295 300

Ser Arg Glu Pro Ile Gly Val Ala Leu Ser Phe Ile Pro Arg Gly Val

305 310 315 320

Ser Gly Leu Phe Ser Tyr Val Phe Lys Arg Glu Gly Phe Leu Thr Ser

325 330 335

Asn Val Ala Glu Ser Gly Gly Phe Val Lys Ser Ser Pro Asp Arg Asp

340 345 350

Arg Pro Asn Leu Gln Phe His Phe Leu Pro Thr Tyr Leu Lys Asp His

355 360 365

Gly Arg Lys Ile Ala Gly Gly Tyr Gly Tyr Thr Leu His Ile Cys Asp

370 375 380

Leu Leu Pro Lys Ser Arg Gly Arg Ile Gly Leu Lys Ser Ala Asn Pro

385 390 395 400

Leu Gln Pro Pro Leu Ile Asp Pro Asn Tyr Leu Ser Asp His Glu Asp

405 410 415

Ile Lys Thr Met Ile Ala Gly Ile Lys Ile Gly Arg Ala Ile Leu Gln

420 425 430

Ala Pro Ser Met Ala Lys His Phe Lys His Glu Val Val Pro Gly Gln

435 440 445

Ala Val Lys Thr Asp Asp Glu Ile Ile Glu Asp Ile Arg Arg Arg Ala

450 455 460

Glu Thr Ile Tyr His Pro Val Gly Thr Cys Arg Met Gly Lys Asp Pro

465 470 475 480

Ala Ser Val Val Asp Pro Cys Leu Lys Ile Arg Gly Leu Ala Asn Ile

485 490 495

Arg Val Val Asp Ala Ser Ile Met Pro His Leu Val Ala Gly Asn Thr

500 505 510

Asn Ala Pro Thr Ile Met Ile Ala Glu Asn Ala Ala Glu Ile Ile Met

515 520 525

Arg Asn Leu Asp Val Glu Ala Leu Glu Ala Ser Ala Glu Phe Ala Arg

530 535 540

Glu Gly Ala Glu Leu Glu Leu Ala Met Ile Ala Val Cys Met

545 550 555

<210> 47

<211> 1677

<212> DNA

<213> 恶臭假单胞菌

<400> 47

atgtacgact atataatcgt tggtgctgga tctgcaggat gtgtgcttgc taatcgtctt 60

tcggccgacc cctctaaaag agtttgttta cttgaagctg ggccgcgaga tacgaatccg 120

ctaattcaca tgccgttagg tattgctttg ctttcaaata gtaaaaagtt gaattgggct 180

tttcaaactg cgccacagca aaatctcaac ggccggagcc ttttctggcc acgaggaaaa 240

acgttaggtg gttcaagctc aatcaacgca atggtctata tccgagggca tgaagacgat 300

taccacgcat gggagcaggc ggccggccgc tactggggtt ggtaccgggc tcttgagttg 360

ttcaaaaggc ttgaatgcaa ccagcgattc gataagtccg agcaccatgg ggttgacgga 420

gaattagctg ttagtgattt aaaatatatc aatccgctta gcaaagcatt cgtgcaagcc 480

ggcatggagg ccaatattaa tttcaacgga gatttcaacg gcgagtacca ggacggcgta 540

gggttctatc aagtaaccca aaaaaatgga caacgctgga gctcggcgcg tgcattcttg 600

cacggtgtac tttccagacc aaatctagac atcattactg atgcgcatgc atcaaaaatt 660

ctttttgaag accgtaaggc ggttggtgtt tcttatataa agaaaaatat gcaccatcaa 720

gtcaagacaa cgagtggtgg tgaagtactt cttagtcttg gcgcagtcgg cacgcctcac 780

cttctaatgc tttctggtgt tggggctgca gccgagctta aggaacatgg tgtttctcta 840

gtccatgatc ttcctgaggt ggggaaaaat cttcaagatc atttggacat cacattgatg 900

tgcgcagcaa attcgagaga gccgataggt gttgctcttt ctttcatccc tcgtggtgtc 960

tcgggtttgt tttcgtatgt gtttaagcgc gaggggtttc tcactagtaa cgtggcagag 1020

tcgggtggtt ttgtaaaaag ttctcctgat cgtgatcggc ccaatttgca gtttcatttc 1080

cttccaactt atcttaaaga tcacggtcga aaaatagcgg gtggttatgg ttatacgcta 1140

catatatgtg atcttttgcc taagagccga ggcagaattg gcctaaaaag cgccaatcca 1200

ttacagccgc ctttaattga cccgaactat cttagcgatc atgaagatat taaaaccatg 1260

attgcgggta ttaagatagg gcgcgctatt ttgcaggccc catcgatggc gaagcatttt 1320

aagcatgaag tagtaccggg ccaggctgtt aaaactgatg atgaaataat cgaagatatt 1380

cgtaggcgag ctgagactat ataccatccg gtaggtactt gtaggatggg taaagatcca 1440

gcttcagttg ttgatccgtg cctgaagatc cgtgggttgg caaatattag agtcgttgat 1500

gcgtcaatta tgccgcactt ggtcgcgggt aacacaaacg ctccaactat tatgattgca 1560

gaaaatgcgg cagaaataat tatgcggaat cttgatgtgg aagcattaga ggctagcgct 1620

gagtttgctc gcgagggtgc agagctagag ttggccatga tagctgtctg catgtaa 1677

<210> 48

<211> 452

<212> PRT

<213> 恶臭假单胞菌

<400> 48

Met Ser Glu Gln Asn Ser Gln Thr Leu Ala Trp Gln Ser Met Ser Arg

1 5 10 15

Asp His His Leu Ala Pro Phe Ser Asp Val Lys Gln Leu Ala Glu Lys

20 25 30

Gly Pro Arg Ile Ile Thr Ser Ala Lys Gly Val Tyr Leu Trp Asp Ser

35 40 45

Glu Gly Asn Lys Ile Leu Asp Gly Met Ala Gly Leu Trp Cys Val Ala

50 55 60

Val Gly Tyr Gly Arg Asp Glu Leu Ala Glu Val Ala Ser Gln Gln Met

65 70 75 80

Lys Gln Leu Pro Tyr Tyr Asn Leu Phe Phe Gln Thr Ala His Pro Pro

85 90 95

Ala Leu Glu Leu Ala Lys Ala Ile Ala Asp Val Ala Pro Gln Gly Met

100 105 110

Asn His Val Phe Phe Thr Gly Ser Gly Ser Glu Gly Asn Asp Thr Val

115 120 125

Leu Arg Met Val Arg His Tyr Trp Ala Leu Lys Gly Lys Lys Asn Lys

130 135 140

Asn Val Ile Ile Gly Arg Ile Asn Gly Tyr His Gly Ser Thr Val Ala

145 150 155 160

Gly Ala Ala Leu Gly Gly Met Ser Gly Met His Gln Gln Gly Gly Val

165 170 175

Ile Pro Asp Ile Val His Ile Pro Gln Pro Tyr Trp Phe Gly Glu Gly

180 185 190

Gly Asp Met Thr Glu Ala Asp Phe Gly Val Trp Ala Ala Glu Gln Leu

195 200 205

Glu Lys Lys Ile Leu Glu Val Gly Val Asp Asn Val Ala Ala Phe Ile

210 215 220

Ala Glu Pro Ile Gln Gly Ala Gly Gly Val Ile Ile Pro Pro Gln Thr

225 230 235 240

Tyr Trp Pro Lys Val Lys Glu Ile Leu Ala Arg Tyr Asp Ile Leu Phe

245 250 255

Val Ala Asp Glu Val Ile Cys Gly Phe Gly Arg Thr Gly Glu Trp Phe

260 265 270

Gly Thr Asp Tyr Tyr Asp Leu Lys Pro Asp Leu Met Thr Ile Ala Lys

275 280 285

Gly Leu Thr Ser Gly Tyr Ile Pro Met Gly Gly Val Ile Val Arg Asp

290 295 300

Glu Val Ala Lys Val Ile Ser Glu Gly Gly Asp Phe Asn His Gly Phe

305 310 315 320

Thr Tyr Ser Gly His Pro Val Ala Ala Ala Val Gly Leu Glu Asn Leu

325 330 335

Arg Ile Leu Arg Asp Glu Gln Ile Ile Gln Gln Val His Asp Lys Thr

340 345 350

Ala Pro Tyr Leu Gln Gln Arg Leu Arg Glu Leu Ala Asp His Pro Leu

355 360 365

Val Gly Glu Val Arg Gly Leu Gly Met Leu Gly Ala Ile Glu Leu Val

370 375 380

Lys Asp Lys Ala Thr Arg Ala Arg Tyr Glu Gly Lys Gly Val Gly Met

385 390 395 400

Ile Cys Arg Gln His Cys Phe Asp Asn Gly Leu Ile Met Arg Ala Val

405 410 415

Gly Asp Thr Met Ile Ile Ala Pro Pro Leu Val Ile Ser Ile Glu Glu

420 425 430

Ile Asp Glu Leu Val Glu Lys Ala Arg Lys Cys Leu Asp Leu Thr Tyr

435 440 445

Glu Ala Val Arg

450

<210> 49

<211> 1359

<212> DNA

<213> 恶臭假单胞菌

<400> 49

atgagcgaac aaaactccca aaccctggcc tggcagagca tgagccgcga tcaccatctg 60

gcgccgttca gcgatgtcaa gcaattggct gaaaaaggtc cgcgcattat cacgtccgcg 120

aaaggcgtgt acctgtggga ttccgaaggt aacaaaatcc tggatggtat ggcgggtctg 180

tggtgtgtgg cggtcggtta cggtcgtgat gaactggctg aggtcgccag ccaacaaatg 240

aagcaactgc cgtactacaa cctgttcttc caaacggccc atccgccagc actggagctg 300

gcaaaagcca ttgccgacgt agctccgcaa ggtatgaacc atgttttctt caccggttct 360

ggcagcgaag gcaatgatac cgtgctgcgt atggtacgcc actattgggc cctgaaaggt 420

aagaagaaca agaatgtcat cattggtcgt atcaacggtt accacggtag caccgtcgct 480

ggtgcggcgc tgggtggcat gagcggcatg caccagcagg gtggtgtcat tccggacatt 540

gtccacattc cgcagccgta ttggtttggt gaaggcggtg acatgacgga agcggacttc 600

ggtgtgtggg ctgccgagca attggagaag aagatcctgg aggttggcgt tgataatgtt 660

gcggcgttca ttgcggaacc gatccaaggc gctggcggtg ttatcatccc gccacagacg 720

tattggccaa aggtgaaaga gatcctggcg cgctacgata tcttgttcgt tgctgacgag 780

gtgatctgcg gttttggtcg caccggcgaa tggtttggca ccgattacta cgacctgaaa 840

ccggatctga tgaccatcgc caaaggtctg accagcggct acattccgat gggtggtgtc 900

attgtccgtg atgaggttgc caaggttatc agcgagggcg gtgactttaa ccacggcttt 960

acctacagcg gccatccggt ggcggcagcg gtcggtctgg aaaatctgcg tattctgcgt 1020

gacgagcaga tcatccaaca agttcacgac aagaccgctc cgtatctgca acagcgcctg 1080

cgcgaactgg cggaccatcc gctggttggc gaagtccgtg gcttgggcat gctgggtgcg 1140

attgaactgg ttaaagacaa ggcaacccgt gcacgttatg agggtaaggg cgtgggcatg 1200

atctgccgtc agcactgttt cgacaacggt ctgattatgc gtgcggttgg cgataccatg 1260

attatcgcac cgccgttggt catcagcatc gaagaaatcg acgaattggt agagaaagcg 1320

cgtaagtgtc tggatctgac gtatgaggct gtgcgctaa 1359

<210> 50

<211> 143

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> 分离的AlkB-启动子

<400> 50

aactacccgt aggtgtagtt ggcgcaagcg tccgattagc tcaggtttaa gatgtcgaga 60

gtgagagtgg gcggcttaac tttctcagtt aggcataaaa ttacgtctta aatctcgtag 120

cgactaattt aataaaaatt gga 143

<210> 51

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> 引物

<400> 51

ttaataaaaa ttggagtaca gacttttggt aggagaatgc 40

<210> 52

<211> 32

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> 引物

<400> 52

ccttgggctt attttttagc cgtcaactta ac 32

<210> 53

<211> 32

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> 引物

<400> 53

aaaaataagc ccaaggcaca gataaagaga ga 32

<210> 54

<211> 32

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> 引物

<400> 54

tagatccttc agatcaaaga ctttaattca ac 32

<210> 55

<211> 32

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> 引物

<400> 55

tgatctgaag gatctaggaa ccaaggagag tg 32

<210> 56

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> 引物

<400> 56

cttggctgca ggtcgattag aaaacatatg acgcaccaag 40

<210> 57

<211> 7675

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> 载体

<400> 57

atcgattgga tgcccgaggc atagactgta caaaaaaaca gtcataacaa gccatgaaaa 60

ccgccactgc gccgttacca ccgctgcgtt cggtcaaggt tctggaccag ttgcgtgagc 120

gcatacgcta cttgcattac agtttacgaa ccgaacaggc ttatgtcaat tcgcctctca 180

ggcgccgctg gtgccgctgg ttggacgcca agggtgaatc cgcctcgata ccctgattac 240

tcgcttcctg cgccctctca ggcggcgata ggggactggt aaaacgggga ttgcccagac 300

gcctcccccg ccccttcagg ggcacaaatg cggccccaac ggggccacgt agtggtgcgt 360

tttttgcgtt tccacccttt tcttcctttt cccttttaaa ccttttagga cgtctacagg 420

ccacgtaatc cgtggcctgt agagtttaaa aagggacgga tttgttgcca ttaagggacg 480

gatttgttgt taagaaggga cggatttgtt gttgtaaagg gacggatttg ttgtattgtg 540

ggacgcagat acagtgtccc cttatacaca aggaatgtcg aacgtggcct cacccccaat 600

ggtttacaaa agcaatgccc tggtcgaggc cgcgtatcgc ctcagtgttc aggaacagcg 660

gatcgttctg gcctgtatta gccaggtgaa gaggagcgag cctgtcaccg atgaagtgat 720

gtattcagtg acggcggagg acatagcgac gatggcgggt gtccctatcg aatcttccta 780

caaccagctc aaagaagcgg ccctgcgcct gaaacggcgg gaagtccggt taacccaaga 840

gcccaatggc aaggggaaaa gaccgagtgt gatgattacc ggctgggtgc aaacaatcat 900

ctaccgggag ggtgagggcc gtgtagaact caggttcacc aaagacatgc tgccgtacct 960

gacggaactc accaaacagt tcaccaaata cgccttggct gacgtggcca agatggacag 1020

cacccacgcg atcaggcttt acgagctgct catgcaatgg gacagcatcg gccagcgcga 1080

aatagaaatt gaccagctgc gaaagtggtt tcaactggaa ggccggtatc cctcgatcaa 1140

ggacttcaag ttgcgagtgc ttgatccagc cgtgacgcag atcaacgagc acagcccgct 1200

acaggtggag tgggcgcagc gaaagaccgg gcgcaaggtc acacatctgt tgttcagttt 1260

tggaccgaag aagcccgcca aggcggtggg taaggcccca gcgaagcgca aggccgggaa 1320

gatttcagat gctgagatcg cgaaacaggc tcgccctggt gagacatggg aagcggcccg 1380

cgctcgacta acccagatgc cgctggatct ggcctagagg ccgtggccac cacggcccgg 1440

cctgcctttc aggctgcatt attgaagcat ttatcagggt tattgtctca tgagcggata 1500

catatttgaa tgtatttaga aaaataaaca aaagagtttg tagaaacgca aaaaggccat 1560

ccgtcaggat ggccttctgc ttaatttgat gcctggcagt ttatggcggg cgtcctgccc 1620

gccaccctcc gggccgttgc ttcgcaacgt tcaaatccgc tcccggcgga tttgtcctac 1680

tcaggagagc gttcaccgac aaacaacaga taaaacgaaa ggcccagtct ttcgactgag 1740

cctttcgttt tatttgatgc ctggcagttc cctactctcg catggggaga ccccacacta 1800

ccatcggcgc tacggcgttt cacttctgag ttcggcatgg ggtcaggtgg gaccaccgcg 1860

ctactgccgc caggcaaatt ctgttttatc agaccgcttc tgcgttctga tttaatctgt 1920

atcaggctga aaatcttctc tcatccgcca aaacagaagc ttggctgcag gtcgacggat 1980

cccgggcgcg ccaagcatat ggaattctcc aatttttatt aaattagtcg ctacgagatt 2040

taagacgtaa ttttatgcct aactgagaaa gttaagccgc ccactctcac tctcgacatc 2100

ttaaacctga gctaatcgga cgcttgcgcc aactacacct acgggtagtt tttgctccgt 2160

cgtctgctgg aaaaacacga gctggccgca agcatgccag gtaccgcgag ctactcgcga 2220

cggctgaaag caccgaaatg agcgagctat ctggtcgatt ttgacccggt gcccgtcttc 2280

aaaatcggcg aaggccgaag tcggccagaa atagcggcct acttcagacc ttccctagta 2340

aatattttgc accaccgatc atgccgacta cacttaagtg tagttttaat atttaacacc 2400

gtaacctatg gtgaaaattt ccagtcagct ggcgcgagaa tagcataatg aaaataataa 2460

taaataatga tttcccggtc gctaaggtcg gagcggatca aattacgact ctagtaagtg 2520

ccaaagttca tagttgcata tatcggccaa gattgagtat cgcggatgga gccgctccca 2580

gagtatgcct ttacagagcc ccacctggat atgggaaaac cgttgctctt gcgttcgagt 2640

ggctacgcca cagaacagcc ggacgtcctg cagtgtggct ttctttaaga gccagttctt 2700

acagtgaatt tgatatctgc gcagagatta ttgagcagct tgaaactttc gaaatggtaa 2760

aattcagccg tgtgagagag ggtgtgagca agcctgcgct cttgcgagac cttgcatcta 2820

gtctttggca gagcacctcg aataacgaga tagaaacgct agtttgtttg gataatatta 2880

atcatgactt agacttgccg ttgttgcacg cacttatgga gtttatgtta aatacaccaa 2940

aaaatatcag gtttgcagtt gcaggcaata caataaaagg gttctcgcag cttaaacttg 3000

caggcgctat gcgggagtac accgagaaag acttggcctt tagcgcagaa gaggcggtgg 3060

cgttagcgga ggcagagtct gttcttggag ttcctgaaga acagatagag accttggtgc 3120

aagaagttga ggggtggcct gctcttgtag tttttttgtt aaagcgtgag ttgccggcca 3180

agcatatttc agcagtagtt gaagtagaca attactttag ggatgaaata tttgaggcga 3240

ttcccgagcg ctatcgtgtt tttcttgcaa attcttcatt gctcgatttc gtgacgcctg 3300

atcaatacaa ttatgtattc aaatgcgtca atggggtctc atgtattaag tatttaagca 3360

ctaattacat gttgcttcgc catgtgagcg gtgagccagc gcagtttaca ctgcatccag 3420

tactgcgtaa ttttctacga gaaattactt ggactgaaaa tcctgctaaa agatcctacc 3480

tgcttaagcg tgcagctttc tggcattggc gtagaggtga ataccagtat gcaatacgaa 3540

tatccctacg ggcgaatgac tgtcgctggg cagtcagcat gtctgagaga ataattttag 3600

atttgtcatt tcgtcagggc gaaatagatg cgctgagaca gtggctgtta gagctgccga 3660

agcaggcctg gcaccaaaaa cccatagtgc ttattagtta cgcgtgggta ttgtatttca 3720

gtcagcaagg cgcgcgagca gagaagttaa ttaaagacct atcttcacaa tccgataaaa 3780

aaaataaatg gcaagaaaag gaatggctgc agcttgtgct tgcaataggt aaagcaacca 3840

aagatgaaat gctttcgagt gaggagctct gtaataagtg gattagttta tttggggatt 3900

caaacgcagt tggaaaaggg gccgcgctaa cctgtttggc ttttattttt gccagtgagt 3960

atagatttgc agagttggag aaggtgctgg ctcaggccca agccgtgaat aaatttgcaa 4020

aacaaaattt tgcttttggt tggctgtatg tcgcgaggtt tcaacaagcc ctagcaagcg 4080

gaaaaatggg ctgggcgagg cagattataa ctcaagcacg cacagacagt cgcgcgcaga 4140

tgatggaatc cgagtttact tcgaaaatgt ttgacgctct agagcttgag ttacattatg 4200

aattgcgctg cttggacacc tcagaagaaa agctctccaa aattttagag ttcatttcca 4260

atcacggggt gacagacgtg tttttttccg tatgccgtgc tgtgtcagct tggcggcttg 4320

gaaggagtga cctaaatggc tccattgaga tattggagtg ggcgaaggcg catgcggttg 4380

aaaaaaatct accaagattg gaagttatga gccaaattga gatctatcag cgcttagtct 4440

gtcaaggcat aacgggcata aataatttaa aaactcttga agatcataag attttctccg 4500

gacagcactc agccccccta aaagcacgcc tgctgcttgt tcaatcacta gtgctttccc 4560

gagatcggaa ctttcatagt gccgcgcaca gagcgttatt ggctattcag caagcccgta 4620

aaattaacgc gggccagctg gaagtccgtg gattattgtg tttggccgga gcgcaggcag 4680

gtgccggtga tttaaaaaag gctcagctta acattgttta tgcagtggag atagcaaaac 4740

agcttcaatg ctttcaaaca gttcttgatg aagtatgttt aattgagcga ataataccgg 4800

cttcatgtga agccttcaca gcagttaatt tagatcaagc gattggggct tttagtcttc 4860

cgcgaatagt tgagattgga aagtccgcag agaataaagc tgacgcttta ttgacacgga 4920

agcagattgc tgtcttgagg cttgtaaaag aggggtgctc aaacaaacaa atagcaacaa 4980

atatgcatgt caccgaagat gctataaagt ggcacatgag gaaaatattt gccaccttga 5040

atgtagtgaa tcgcacgcaa gcaacaattg aagctgagcg tcaaggaatt atctaaaata 5100

atcggcatta agtgatatag tgaaaagtat actcgagctc atagtccacg acgcccgtga 5160

ttttgtagcc ctggccgacg gccagcaggt aggccgacag gctcatgccg gccgccgccg 5220

ccttttcctc aatcgctctt cgttcgtctg gaaggcagta caccttgata ggtgggctgc 5280

ccttcctggt tggcttggtt tcatcagcca tccgcttgcc ctcatctgtt acgccggcgg 5340

tagccggcca gcctcgcaga gcaggattcc cgttgagcac cgccaggtgc gaataaggga 5400

cagtgaagaa ggaacacccg ctcgcgggtg ggcctacttc acctatcctg cccggctgac 5460

gccgttggat acaccaagga aagtctacac gaaccctttg gcaaaatcct gtatatcgtg 5520

cgaaaaagga tggatatacc gaaaaaatcg ctataatgac cccgaagcag ggttatgcag 5580

cggaaaagcg ctgcttccct gctgttttgt ggaatatcta ccgactggaa acaggcaaat 5640

gcaggaaatt actgaactga ggggacaggc gagagaggat caatggctat ctgggggacc 5700

gagggctgtc gctgcgccaa ggcacgattg gagatcccct atgcggtgtg aaataccgca 5760

cagatgcgta aggagaaaat accgcatcag gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc 5820

gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg 5880

gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa 5940

ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga 6000

cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca gaggtggcga aacccgacag gactataaag 6060

ataccaggcg tttccccctg gaagctccct cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct 6120

taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg 6180

ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc 6240

ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt 6300

aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc cactggtaac aggattagca gagcgaggta 6360

tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg gtggcctaac tacggctaca ctagaaggac 6420

agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc 6480

ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag cggtggtttt tttgtttgca agcagcagat 6540

tacgcgcaga aaaaaaggat ctcaagaaga tcctttgatc ttttctacgg ggtctgacgc 6600

tcagtggaac gaaaactcac gttaagggat tttggtcatg agattatcaa aaaggatctt 6660

cacctagatc cttttaaatt aaaaatgaag ttttaaatca atctaaagta tatatgagta 6720

aacttggtct gacagttacc aatcgattgg tcggtcattt cgaaccccag agtcccgctc 6780

agaagaactc gtcaagaagg cgatagaagg cgatgcgctg cgaatcggga gcggcgatac 6840

cgtaaagcac gaggaagcgg tcagcccatt cgccgccaag ctcttcagca atatcacggg 6900

tagccaacgc tatgtcctga tagcggtccg ccacacccag ccggccacag tcgatgaatc 6960

cagaaaagcg gccattttcc accatgatat tcggcaagca ggcatcgcca tgggtcacga 7020

cgagatcctc gccgtcgggc atgcgcgcct tgagcctggc gaacagttcg gctggcgcga 7080

gcccctgatg ctcttcgtcc agatcatcct gatcgacaag accggcttcc atccgagtac 7140

gtgctcgctc gatgcgatgt ttcgcttggt ggtcgaatgg gcaggtagcc ggatcaagcg 7200

tatgcagccg ccgcattgca tcagccatga tggatacttt ctcggcagga gcaaggtgag 7260

atgacaggag atcctgcccc ggcacttcgc ccaatagcag ccagtccctt cccgcttcag 7320

tgacaacgtc gagcacagct gcgcaaggaa cgcccgtcgt ggccagccac gatagccgcg 7380

ctgcctcgtc ctgcagttca ttcagggcac cggacaggtc ggtcttgaca aaaagaaccg 7440

ggcgcccctg cgctgacagc cggaacacgg cggcatcaga gcagccgatt gtctgttgtg 7500

cccagtcata gccgaatagc ctctccaccc aagcggccgg agaacctgcg tgcaatccat 7560

cttgttcaat catgcgaaac gatcctcatc ctgtctcttg atcagatctt gatcccctgc 7620

gccatcagat ccttggcggc aagaaagcca tccagtttac tttgcagggc ttccc 7675

<210> 58

<211> 11401

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> 表达载体

<400> 58

tgggaagccc tgcaaagtaa actggatggc tttcttgccg ccaaggatct gatggcgcag 60

gggatcaaga tctgatcaag agacaggatg aggatcgttt cgcatgattg aacaagatgg 120

attgcacgca ggttctccgg ccgcttgggt ggagaggcta ttcggctatg actgggcaca 180

acagacaatc ggctgctctg atgccgccgt gttccggctg tcagcgcagg ggcgcccggt 240

tctttttgtc aagaccgacc tgtccggtgc cctgaatgaa ctgcaggacg aggcagcgcg 300

gctatcgtgg ctggccacga cgggcgttcc ttgcgcagct gtgctcgacg ttgtcactga 360

agcgggaagg gactggctgc tattgggcga agtgccgggg caggatctcc tgtcatctca 420

ccttgctcct gccgagaaag tatccatcat ggctgatgca atgcggcggc tgcatacgct 480

tgatccggct acctgcccat tcgaccacca agcgaaacat cgcatcgagc gagcacgtac 540

tcggatggaa gccggtcttg tcgatcagga tgatctggac gaagagcatc aggggctcgc 600

gccagccgaa ctgttcgcca ggctcaaggc gcgcatgccc gacggcgagg atctcgtcgt 660

gacccatggc gatgcctgct tgccgaatat catggtggaa aatggccgct tttctggatt 720

catcgactgt ggccggctgg gtgtggcgga ccgctatcag gacatagcgt tggctacccg 780

tgatattgct gaagagcttg gcggcgaatg ggctgaccgc ttcctcgtgc tttacggtat 840

cgccgctccc gattcgcagc gcatcgcctt ctatcgcctt cttgacgagt tcttctgagc 900

gggactctgg ggttcgaaat gaccgaccaa tcgattggta actgtcagac caagtttact 960

catatatact ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga 1020

tcctttttga taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt 1080

cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct 1140

gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc 1200

taccaactct ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc gcagatacca aatactgtcc 1260

ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc 1320

tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg 1380

ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt 1440

cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga actgagatac ctacagcgtg 1500

agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg 1560

gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt 1620

atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag 1680

gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt 1740

gctggccttt tgctcacatg ttctttcctg cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta 1800

ttaccgcctt tgagtgagct gataccgctc gccgcagccg aacgaccgag cgcagcgagt 1860

cagtgagcga ggaagcggaa gagcgcctga tgcggtattt tctccttacg catctgtgcg 1920

gtatttcaca ccgcataggg gatctccaat cgtgccttgg cgcagcgaca gccctcggtc 1980

ccccagatag ccattgatcc tctctcgcct gtcccctcag ttcagtaatt tcctgcattt 2040

gcctgtttcc agtcggtaga tattccacaa aacagcaggg aagcagcgct tttccgctgc 2100

ataaccctgc ttcggggtca ttatagcgat tttttcggta tatccatcct ttttcgcacg 2160

atatacagga ttttgccaaa gggttcgtgt agactttcct tggtgtatcc aacggcgtca 2220

gccgggcagg ataggtgaag taggcccacc cgcgagcggg tgttccttct tcactgtccc 2280

ttattcgcac ctggcggtgc tcaacgggaa tcctgctctg cgaggctggc cggctaccgc 2340

cggcgtaaca gatgagggca agcggatggc tgatgaaacc aagccaacca ggaagggcag 2400

cccacctatc aaggtgtact gccttccaga cgaacgaaga gcgattgagg aaaaggcggc 2460

ggcggccggc atgagcctgt cggcctacct gctggccgtc ggccagggct acaaaatcac 2520

gggcgtcgtg gactatgagc tcgagtatac ttttcactat atcacttaat gccgattatt 2580

ttagataatt ccttgacgct cagcttcaat tgttgcttgc gtgcgattca ctacattcaa 2640

ggtggcaaat attttcctca tgtgccactt tatagcatct tcggtgacat gcatatttgt 2700

tgctatttgt ttgtttgagc acccctcttt tacaagcctc aagacagcaa tctgcttccg 2760

tgtcaataaa gcgtcagctt tattctctgc ggactttcca atctcaacta ttcgcggaag 2820

actaaaagcc ccaatcgctt gatctaaatt aactgctgtg aaggcttcac atgaagccgg 2880

tattattcgc tcaattaaac atacttcatc aagaactgtt tgaaagcatt gaagctgttt 2940

tgctatctcc actgcataaa caatgttaag ctgagccttt tttaaatcac cggcacctgc 3000

ctgcgctccg gccaaacaca ataatccacg gacttccagc tggcccgcgt taattttacg 3060

ggcttgctga atagccaata acgctctgtg cgcggcacta tgaaagttcc gatctcggga 3120

aagcactagt gattgaacaa gcagcaggcg tgcttttagg ggggctgagt gctgtccgga 3180

gaaaatctta tgatcttcaa gagtttttaa attatttatg cccgttatgc cttgacagac 3240

taagcgctga tagatctcaa tttggctcat aacttccaat cttggtagat ttttttcaac 3300

cgcatgcgcc ttcgcccact ccaatatctc aatggagcca tttaggtcac tccttccaag 3360

ccgccaagct gacacagcac ggcatacgga aaaaaacacg tctgtcaccc cgtgattgga 3420

aatgaactct aaaattttgg agagcttttc ttctgaggtg tccaagcagc gcaattcata 3480

atgtaactca agctctagag cgtcaaacat tttcgaagta aactcggatt ccatcatctg 3540

cgcgcgactg tctgtgcgtg cttgagttat aatctgcctc gcccagccca tttttccgct 3600

tgctagggct tgttgaaacc tcgcgacata cagccaacca aaagcaaaat tttgttttgc 3660

aaatttattc acggcttggg cctgagccag caccttctcc aactctgcaa atctatactc 3720

actggcaaaa ataaaagcca aacaggttag cgcggcccct tttccaactg cgtttgaatc 3780

cccaaataaa ctaatccact tattacagag ctcctcactc gaaagcattt catctttggt 3840

tgctttacct attgcaagca caagctgcag ccattccttt tcttgccatt tatttttttt 3900

atcggattgt gaagataggt ctttaattaa cttctctgct cgcgcgcctt gctgactgaa 3960

atacaatacc cacgcgtaac taataagcac tatgggtttt tggtgccagg cctgcttcgg 4020

cagctctaac agccactgtc tcagcgcatc tatttcgccc tgacgaaatg acaaatctaa 4080

aattattctc tcagacatgc tgactgccca gcgacagtca ttcgcccgta gggatattcg 4140

tattgcatac tggtattcac ctctacgcca atgccagaaa gctgcacgct taagcaggta 4200

ggatctttta gcaggatttt cagtccaagt aatttctcgt agaaaattac gcagtactgg 4260

atgcagtgta aactgcgctg gctcaccgct cacatggcga agcaacatgt aattagtgct 4320

taaatactta atacatgaga ccccattgac gcatttgaat acataattgt attgatcagg 4380

cgtcacgaaa tcgagcaatg aagaatttgc aagaaaaaca cgatagcgct cgggaatcgc 4440

ctcaaatatt tcatccctaa agtaattgtc tacttcaact actgctgaaa tatgcttggc 4500

cggcaactca cgctttaaca aaaaaactac aagagcaggc cacccctcaa cttcttgcac 4560

caaggtctct atctgttctt caggaactcc aagaacagac tctgcctccg ctaacgccac 4620

cgcctcttct gcgctaaagg ccaagtcttt ctcggtgtac tcccgcatag cgcctgcaag 4680

tttaagctgc gagaaccctt ttattgtatt gcctgcaact gcaaacctga tattttttgg 4740

tgtatttaac ataaactcca taagtgcgtg caacaacggc aagtctaagt catgattaat 4800

attatccaaa caaactagcg tttctatctc gttattcgag gtgctctgcc aaagactaga 4860

tgcaaggtct cgcaagagcg caggcttgct cacaccctct ctcacacggc tgaattttac 4920

catttcgaaa gtttcaagct gctcaataat ctctgcgcag atatcaaatt cactgtaaga 4980

actggctctt aaagaaagcc acactgcagg acgtccggct gttctgtggc gtagccactc 5040

gaacgcaaga gcaacggttt tcccatatcc aggtggggct ctgtaaaggc atactctggg 5100

agcggctcca tccgcgatac tcaatcttgg ccgatatatg caactatgaa ctttggcact 5160

tactagagtc gtaatttgat ccgctccgac cttagcgacc gggaaatcat tatttattat 5220

tattttcatt atgctattct cgcgccagct gactggaaat tttcaccata ggttacggtg 5280

ttaaatatta aaactacact taagtgtagt cggcatgatc ggtggtgcaa aatatttact 5340

agggaaggtc tgaagtaggc cgctatttct ggccgacttc ggccttcgcc gattttgaag 5400

acgggcaccg ggtcaaaatc gaccagatag ctcgctcatt tcggtgcttt cagccgtcgc 5460

gagtagctcg cggtacctgg catgcttgcg gccagctcgt gtttttccag cagacgacgg 5520

agcaaaaact acccgtaggt gtagttggcg caagcgtccg attagctcag gtttaagatg 5580

tcgagagtga gagtgggcgg cttaactttc tcagttaggc ataaaattac gtcttaaatc 5640

tcgtagcgac taatttaata aaaattggag tacagacttt tggtaggaga atgcagctgt 5700

gggaaaaatc acctttattg agaatgataa aactgaacat gtaacagaat ttgaggcagg 5760

tattactttg atgcaagttg ccttagacaa cgccgttccc ggtattgatg gggattgcgg 5820

cggggagtgt gcctgtggta cctgtcacct gattgttcca gaagaatggt tcgataaaac 5880

cgggccgatt aatgatgctg aagaacaaat gttgtccatg acacctgagc gtgcaaaaac 5940

ctctcggttg gggtgtcagg ttaaggccac tgaggcaatg gacggaatga ctgttcaatt 6000

gccagaattt caaatgtaag tgcggagagc gacatgtcaa cgagttcaag tacaagtaat 6060

gacatccagg caaaaataat taacgccaca tccaaagtcg tgccaatgca tctacagatc 6120

aaggcactaa aaaacttgat gaaggtgaag cggaagacca ttggcacttc ccgccctcag 6180

gtgcactttg ttgaaaccga tttgcctgac gtcaatgatt tggcgataga agatatcgat 6240

acgagtaacc cttttttata ccgacaaggt aaggcgaatg cgtactttaa gcggttgcgt 6300

gatgaagcgc cggtgcacta tcagaagaac agtgctttcg ggccgttctg gtcggtaaca 6360

cgctacgaag atatcgtctt cgtggacaag agccatgatt tgttttccgc cgaaccccaa 6420

attatcttgg gtgatcctcc ggaaggcctg tcggttgaaa tgttcatcgc tatggatcct 6480

cccaagcacg acgtacagcg tcgggcagtc cagggtgttg ttgcgcccaa gaacctgaaa 6540

gaaatggaag gactgatccg caagcgcacc ggggacgtac tggatagcct gccgttggac 6600

actccgttca actgggtgcc ggtggtgtcg aaagagctga ccgggcgcat gctagcctca 6660

ctgttagatt tcccgtatga cgaacgcgaa aaactggttg gctggtcgga tcgattgtcc 6720

ggcgcgtcct cggcaaccgg cggcgagttt acgaatgaag atgtgttttt tgatgacgcg 6780

gcagatatgg cgtgggcttt ctccaagctt tggcgtgata aagaagcccg tcaaaaagca 6840

ggtgaagagc cgggtttcga tttgatcagc atgcttcagt ccaatgaaga cacaaaagat 6900

ctgatcaatc gtcctttgga attcattggt aatctcgcgt tgttgattgt tggcggtaat 6960

gacaccacgc gtaactcaat gagcgggggg gtgctggctt taaatcagtt cccagagcaa 7020

ttcgagaagc taaaggcgaa cccaaagctt atccccaata tggtctctga aatcattcgc 7080

tggcaaacgc cgcttgcgta tatgcgccgg gttgccaagc aggatgtgga gctgaacgga 7140

cagaccatca agaagggtga tcgcgtgctg atgtggtatg cgtcgggcaa ccaggatgag 7200

agaaaatttg agaatcctga gcaattcatc atcgaccgca aagatacgcg taaccatgtg 7260

tcgtttggtt atggggttca ccgttgtatg ggcaaccgcc ttgccgaact gcagctgcgt 7320

attctgtggg aagagcttct ccctcgcttt gaaaacatcg aagtgatcgg tgagccggag 7380

cgcgtgcaat cgaactttgt gcggggctat tccaagatga tggttaagtt gacggctaaa 7440

aaataagccc aaggcacaga taaagagaga agcatggaaa acgaaaaaca agatgccact 7500

gtcatcgttg gaggcgggca cgcagcaggt gcgttgatga cagccttgat acaaaagaaa 7560

tatccacacg aggtggttct ggtgggcgaa gagccttatc cgccctacca gcgcccgcct 7620

ttatccaaaa cgtatctgtc aggagaggtt aacgaggaat ctctctattt gaaaccgcgc 7680

tcggtgtatg aaggtgcggg gcatcagttg cgacttggtg tgcgcgttga gaacattgat 7740

cgagacaaca aaacccttac attgtcagat cagagcacac tgaaatatgg ccgactgatt 7800

cttgccacag gttcacacgt taggcgtctt aatgcgcctg gatctgaatt aaaaggcatc 7860

cattatctgc atgacattgc tgatacggat acattgcgcg atcaactgtc accaggtgcc 7920

cgtttggtta ttgtcggtgg cggctacatt ggccttgagg ttgcagccag tgcgagcaag 7980

aaaggcgtta atgttacggt gctggaaggc gctgagcgtc taatgcagcg agttacgggc 8040

gttgagatgt cttcgttcct gtatgctaag cacagtggtt ctggcgtgga cgtgcgtctt 8100

aatactgctg tcaccggctt caaagctgga gatcaggggc gagtggctgg cgtaacgtta 8160

gcaaatggcg aaacggttga cgcagatgtt gtgcttgtct cgattggcgt tatacccgaa 8220

acggctttgg ctgaggctgc cggcctatcc tgtgaagacg gtatcctggt ggacgaatat 8280

gtccgcactt ctgacccaag catcctggcg ataggtgatt gcactcgtca ccgaaacctt 8340

ttcttcgaga aaatgcagag gctcgagtcc gttgctaacg ctgtcgatca agcacgtact 8400

gcggcagcga ccttgatggg agaggataag ccctacgata gcgctccatg gttttggtcg 8460

aatcaatatg atgttcgttt gcaaatggtg gggctctcgc aggaccatga tgaacgagtc 8520

atgcgtggca gcacggaaga caaagcgttt gcggtgttct atctccgtga gggctgtgtg 8580

attgccgttg atgcggtgaa tatgcccatt gcgtttatgg ttggaaagca gttggttcag 8640

caccgtaaga gtattagcgc tgacgtgttg agtgatctgg atgttgaatt aaagtctttg 8700

atctgaagga tctaggaacc aaggagagtg gcatatgagt ttttctaatt ataaagtaat 8760

cgcgatgccg gtgttggttg ctaattttgt tttgggggcg gccactgcat gggcgaatga 8820

aaattatccg gcgaaatctg ctggctataa tcagggtgac tgggtcgcta gcttcaattt 8880

ttctaaggtc tatgtgggtg aggagcttgg cgatctaaat gttggagggg gggctttgcc 8940

aaatgctgat gtaagtattg gtaatgatac aacacttacg tttgatatcg cctattttgt 9000

tagctcaaat atagcggtgg atttttttgt tggggtgcca gctagggcta aatttcaagg 9060

tgagaaatca atctcctcgc tgggaagagt cagtgaagtt gattacggcc ctgcaattct 9120

ttcgcttcaa tatcattacg atagctttga gcgactttat ccatatgttg gggttggtgt 9180

tggtcgggtg ctattttttg ataaaaccga cggtgctttg agttcgtttg atattaagga 9240

taaatgggcg cctgcttttc aggttggcct tagatatgac cttggtaact catggatgct 9300

aaattcagat gtgcgttata ttcctttcaa aacggacgtc acaggtactc ttggcccggt 9360

tcctgtttct actaaaattg aggttgatcc tttcattctc agtcttggtg cgtcatatgt 9420

tttctaatcg acctgcagcc aagcttctgt tttggcggat gagagaagat tttcagcctg 9480

atacagatta aatcagaacg cagaagcggt ctgataaaac agaatttgcc tggcggcagt 9540

agcgcggtgg tcccacctga ccccatgccg aactcagaag tgaaacgccg tagcgccgat 9600

ggtagtgtgg ggtctcccca tgcgagagta gggaactgcc aggcatcaaa taaaacgaaa 9660

ggctcagtcg aaagactggg cctttcgttt tatctgttgt ttgtcggtga acgctctcct 9720

gagtaggaca aatccgccgg gagcggattt gaacgttgcg aagcaacggc ccggagggtg 9780

gcgggcagga cgcccgccat aaactgccag gcatcaaatt aagcagaagg ccatcctgac 9840

ggatggcctt tttgcgtttc tacaaactct tttgtttatt tttctaaata cattcaaata 9900

tgtatccgct catgagacaa taaccctgat aaatgcttca ataatgcagc ctgaaaggca 9960

ggccgggccg tggtggccac ggcctctagg ccagatccag cggcatctgg gttagtcgag 10020

cgcgggccgc ttcccatgtc tcaccagggc gagcctgttt cgcgatctca gcatctgaaa 10080

tcttcccggc cttgcgcttc gctggggcct tacccaccgc cttggcgggc ttcttcggtc 10140

caaaactgaa caacagatgt gtgaccttgc gcccggtctt tcgctgcgcc cactccacct 10200

gtagcgggct gtgctcgttg atctgcgtca cggctggatc aagcactcgc aacttgaagt 10260

ccttgatcga gggataccgg ccttccagtt gaaaccactt tcgcagctgg tcaatttcta 10320

tttcgcgctg gccgatgctg tcccattgca tgagcagctc gtaaagcctg atcgcgtggg 10380

tgctgtccat cttggccacg tcagccaagg cgtatttggt gaactgtttg gtgagttccg 10440

tcaggtacgg cagcatgtct ttggtgaacc tgagttctac acggccctca ccctcccggt 10500

agatgattgt ttgcacccag ccggtaatca tcacactcgg tcttttcccc ttgccattgg 10560

gctcttgggt taaccggact tcccgccgtt tcaggcgcag ggccgcttct ttgagctggt 10620

tgtaggaaga ttcgataggg acacccgcca tcgtcgctat gtcctccgcc gtcactgaat 10680

acatcacttc atcggtgaca ggctcgctcc tcttcacctg gctaatacag gccagaacga 10740

tccgctgttc ctgaacactg aggcgatacg cggcctcgac cagggcattg cttttgtaaa 10800

ccattggggg tgaggccacg ttcgacattc cttgtgtata aggggacact gtatctgcgt 10860

cccacaatac aacaaatccg tccctttaca acaacaaatc cgtcccttct taacaacaaa 10920

tccgtccctt aatggcaaca aatccgtccc tttttaaact ctacaggcca cggattacgt 10980

ggcctgtaga cgtcctaaaa ggtttaaaag ggaaaaggaa gaaaagggtg gaaacgcaaa 11040

aaacgcacca ctacgtggcc ccgttggggc cgcatttgtg cccctgaagg ggcgggggag 11100

gcgtctgggc aatccccgtt ttaccagtcc cctatcgccg cctgagaggg cgcaggaagc 11160

gagtaatcag ggtatcgagg cggattcacc cttggcgtcc aaccagcggc accagcggcg 11220

cctgagaggc gaattgacat aagcctgttc ggttcgtaaa ctgtaatgca agtagcgtat 11280

gcgctcacgc aactggtcca gaaccttgac cgaacgcagc ggtggtaacg gcgcagtggc 11340

ggttttcatg gcttgttatg actgtttttt tgtacagtct atgcctcggg catccaatcg 11400

a 11401

<210> 59

<211> 523

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 多肽

<400> 59

Met Ala Thr Gln Glu Ile Ile Asp Ser Val Leu Pro Tyr Leu Thr Lys

1 5 10 15

Trp Tyr Thr Val Ile Thr Ala Ala Val Leu Val Phe Leu Ile Ser Thr

20 25 30

Asn Ile Lys Asn Tyr Val Lys Ala Lys Lys Leu Lys Cys Val Asp Pro

35 40 45

Pro Tyr Leu Lys Asp Ala Gly Leu Thr Gly Ile Ser Ser Leu Ile Ala

50 55 60

Ala Ile Lys Ala Lys Asn Asp Gly Arg Leu Ala Asn Phe Ala Asp Glu

65 70 75 80

Val Phe Asp Glu Tyr Pro Asn His Thr Phe Tyr Leu Ser Val Ala Gly

85 90 95

Ala Leu Lys Ile Val Met Thr Val Asp Pro Glu Asn Ile Lys Ala Val

100 105 110

Leu Ala Thr Gln Phe Thr Asp Phe Ser Leu Gly Thr Arg His Ala His

115 120 125

Phe Ala Pro Leu Leu Gly Asp Gly Ile Phe Thr Leu Asp Gly Glu Gly

130 135 140

Trp Lys His Ser Arg Ala Met Leu Arg Pro Gln Phe Ala Arg Asp Gln

145 150 155 160

Ile Gly His Val Lys Ala Leu Glu Pro His Ile Gln Ile Met Ala Lys

165 170 175

Gln Ile Lys Leu Asn Gln Gly Lys Thr Phe Asp Ile Gln Glu Leu Phe

180 185 190

Phe Arg Phe Thr Val Asp Thr Ala Thr Glu Phe Leu Phe Gly Glu Ser

195 200 205

Val His Ser Leu Tyr Asp Glu Lys Leu Gly Ile Pro Thr Pro Asn Glu

210 215 220

Ile Pro Gly Arg Glu Asn Phe Ala Ala Ala Phe Asn Val Ser Gln His

225 230 235 240

Tyr Leu Ala Thr Arg Ser Tyr Ser Gln Thr Phe Tyr Phe Leu Thr Asn

245 250 255

Pro Lys Glu Phe Arg Asp Cys Asn Ala Lys Val His His Leu Ala Lys

260 265 270

Tyr Phe Val Asn Lys Ala Leu Asn Phe Thr Pro Glu Glu Leu Glu Glu

275 280 285

Lys Ser Lys Ser Gly Tyr Val Phe Leu Tyr Glu Leu Val Lys Gln Thr

290 295 300

Arg Asp Pro Lys Val Leu Gln Asp Gln Leu Leu Asn Ile Met Val Ala

305 310 315 320

Gly Arg Asp Thr Thr Ala Gly Leu Leu Ser Phe Ala Leu Phe Glu Leu

325 330 335

Ala Arg His Pro Glu Met Trp Ser Lys Leu Arg Glu Glu Ile Glu Val

340 345 350

Asn Phe Gly Val Gly Glu Asp Ser Arg Val Glu Glu Ile Thr Phe Glu

355 360 365

Ala Leu Lys Arg Cys Glu Tyr Leu Lys Ala Ile Leu Asn Glu Thr Leu

370 375 380

Arg Met Tyr Pro Ser Val Pro Val Asn Phe Arg Thr Ala Thr Arg Asp

385 390 395 400

Thr Thr Leu Pro Arg Gly Gly Gly Ala Asn Gly Thr Asp Pro Ile Tyr

405 410 415

Ile Pro Lys Gly Ser Thr Val Ala Tyr Val Val Tyr Lys Thr His Arg

420 425 430

Leu Glu Glu Tyr Tyr Gly Lys Asp Ala Asn Asp Phe Arg Pro Glu Arg

435 440 445

Trp Phe Glu Pro Ser Thr Lys Lys Leu Gly Trp Ala Tyr Val Pro Phe

450 455 460

Asn Gly Gly Pro Arg Val Cys Leu Gly Gln Gln Phe Ala Leu Thr Glu

465 470 475 480

Ala Ser Tyr Val Ile Thr Arg Leu Ala Gln Met Phe Glu Thr Val Ser

485 490 495

Ser Asp Pro Gly Leu Glu Tyr Pro Pro Pro Lys Cys Ile His Leu Thr

500 505 510

Met Ser His Asn Asp Gly Val Phe Val Lys Met

515 520

<210> 60

<211> 1572

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> 用于在大肠杆菌中表达的人工多肽

<400> 60

atggcgaccc aagaaatcat tgactctgtg ctgccatacc tgacgaagtg gtatactgtc 60

attaccgcgg ctgttctggt cttcctgatc tccactaaca tcaaaaacta cgttaaggct 120

aaaaagctga agtgcgttga tccgccttac ctgaaggacg ctggcctgac cggtatttct 180

tctctgattg cggcaatcaa agccaaaaat gacggccgcc tggccaactt cgccgatgag 240

gtctttgacg agtatccgaa tcacaccttc tacctgtctg ttgccggtgc actgaagatc 300

gttatgactg ttgaccctga aaatatcaag gccgttctgg caactcaatt cacggacttc 360

tctctgggca cgcgtcacgc ccatttcgct ccgctgctgg gtgacggtat ctttacgctg 420

gacggtgagg gctggaaaca ctctcgcgca atgctgcgcc cacaatttgc tcgtgaccag 480

attggtcatg taaaggcgct ggagccgcat atccagatta tggcaaaaca aatcaagctg 540

aatcagggta agaccttcga tattcaagaa ctgttttttc gctttacggt tgataccgcc 600

accgagtttc tgtttggtga atctgttcat tctctgtacg acgagaaact gggcattccg 660

actcctaatg aaatcccagg ccgtgaaaac tttgctgcgg cattcaatgt ctctcaacac 720

tacctggcaa cccgttctta ctctcagacg ttctattttc tgaccaaccc gaaggagttc 780

cgtgattgca acgctaaggt tcatcatctg gcgaaatact ttgtgaacaa agctctgaat 840

ttcaccccgg aggaactgga ggaaaaatct aaaagcggct acgttttcct gtatgagctg 900

gtgaaacaaa cccgtgatcc aaaagttctg caggaccagc tgctgaatat catggtggct 960

ggtcgtgaca ctactgcggg tctgctgtct tttgcgctgt ttgaactggc gcgtcatccg 1020

gaaatgtggt ctaaactgcg tgaggaaatc gaggttaact tcggtgttgg cgaggattct 1080

cgtgtggaag agatcacctt tgaagcgctg aaacgctgtg agtatctgaa agcgatcctg 1140

aacgaaacgc tgcgtatgta cccaagcgtt cctgttaatt tccgtaccgc gacgcgcgac 1200

accaccctgc cgcgtggtgg tggcgcgaat ggcacggacc caatctacat tcctaaaggc 1260

tctaccgttg cttacgttgt ttacaagacg caccgtctgg aagaatatta cggtaaagac 1320

gccaacgact ttcgtccgga acgttggttc gagccttcta ccaagaagct gggttgggcg 1380

tacgtgccgt tcaacggtgg tccgcgtgtt tgcctgggcc agcagttcgc tctgacggaa 1440

gcctcctacg tcatcactcg tctggcgcag atgttcgaaa ccgttagctc cgaccctggt 1500

ctggagtacc cgcctccgaa atgcatccac ctgactatgt ctcacaacga tggtgttttc 1560

gtgaagatgt aa 1572

<210> 61

<211> 517

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 分离的多肽

<400> 61

Met Ile Glu Gln Leu Leu Glu Tyr Trp Tyr Val Val Val Pro Val Leu

1 5 10 15

Tyr Ile Ile Lys Gln Leu Leu Ala Tyr Thr Lys Thr Arg Val Leu Met

20 25 30

Lys Lys Leu Gly Ala Ala Pro Val Thr Asn Lys Leu Tyr Asp Asn Ala

35 40 45

Phe Gly Ile Val Asn Gly Trp Lys Ala Leu Gln Phe Lys Lys Glu Gly

50 55 60

Arg Ala Gln Glu Tyr Asn Asp Tyr Lys Phe Asp His Ser Lys Asn Pro

65 70 75 80

Ser Val Gly Thr Tyr Val Ser Ile Leu Phe Gly Thr Arg Ile Val Val

85 90 95

Thr Lys Asp Pro Glu Asn Ile Lys Ala Ile Leu Ala Thr Gln Phe Gly

100 105 110

Asp Phe Ser Leu Gly Lys Arg His Thr Leu Phe Lys Pro Leu Leu Gly

115 120 125

Asp Gly Ile Phe Thr Leu Asp Gly Glu Gly Trp Lys His Ser Arg Ala

130 135 140

Met Leu Arg Pro Gln Phe Ala Arg Glu Gln Val Ala His Val Thr Ser

145 150 155 160

Leu Glu Pro His Phe Gln Leu Leu Lys Lys His Ile Leu Lys His Lys

165 170 175

Gly Glu Tyr Phe Asp Ile Gln Glu Leu Phe Phe Arg Phe Thr Val Asp

180 185 190

Ser Ala Thr Glu Phe Leu Phe Gly Glu Ser Val His Ser Leu Lys Asp

195 200 205

Glu Ser Ile Gly Ile Asn Gln Asp Asp Ile Asp Phe Ala Gly Arg Lys

210 215 220

Asp Phe Ala Glu Ser Phe Asn Lys Ala Gln Glu Tyr Leu Ala Ile Arg

225 230 235 240

Thr Leu Val Gln Thr Phe Tyr Trp Leu Val Asn Asn Lys Glu Phe Arg

245 250 255

Asp Cys Thr Lys Ser Val His Lys Phe Thr Asn Tyr Tyr Val Gln Lys

260 265 270

Ala Leu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Glu Lys Gln Ser Gly Tyr Val

275 280 285

Phe Leu Tyr Glu Leu Val Lys Gln Thr Arg Asp Pro Asn Val Leu Arg

290 295 300

Asp Gln Ser Leu Asn Ile Leu Leu Ala Gly Arg Asp Thr Thr Ala Gly

305 310 315 320

Leu Leu Ser Phe Ala Val Phe Glu Leu Ala Arg His Pro Glu Ile Trp

325 330 335

Ala Lys Leu Arg Glu Glu Ile Glu Gln Gln Phe Gly Leu Gly Glu Asp

340 345 350

Ser Arg Val Glu Glu Ile Thr Phe Glu Ser Leu Lys Arg Cys Glu Tyr

355 360 365

Leu Lys Ala Phe Leu Asn Glu Thr Leu Arg Ile Tyr Pro Ser Val Pro

370 375 380

Arg Asn Phe Arg Ile Ala Thr Lys Asn Thr Thr Leu Pro Arg Gly Gly

385 390 395 400

Gly Ser Asp Gly Thr Ser Pro Ile Leu Ile Gln Lys Gly Glu Ala Val

405 410 415

Ser Tyr Gly Ile Asn Ser Thr His Leu Asp Pro Val Tyr Tyr Gly Pro

420 425 430

Asp Ala Ala Glu Phe Arg Pro Glu Arg Trp Phe Glu Pro Ser Thr Lys

435 440 445

Lys Leu Gly Trp Ala Tyr Leu Pro Phe Asn Gly Gly Pro Arg Ile Cys

450 455 460

Leu Gly Gln Gln Phe Ala Leu Thr Glu Ala Gly Tyr Val Leu Val Arg

465 470 475 480

Leu Val Gln Glu Phe Ser His Val Arg Ser Asp Pro Asp Glu Val Tyr

485 490 495

Pro Pro Lys Arg Leu Thr Asn Leu Thr Met Cys Leu Gln Asp Gly Ala

500 505 510

Ile Val Lys Phe Asp

515

<210> 62

<211> 1554

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> 分离的核酸

<400> 62

atgatcgaac aactgctgga atactggtac gttgttgttc cggttctgta catcatcaaa 60

cagctgctgg cgtacaccaa aacccgcgtt ctgatgaaaa aactgggtgc ggcgccggtt 120

accaacaaac tgtacgacaa cgcgttcggt atcgttaacg gttggaaagc gctgcagttc 180

aaaaaagaag gtcgtgcgca ggaatacaac gactacaaat tcgaccactc taaaaacccg 240

tctgttggta cctacgtttc tatcctgttc ggtacccgta tcgttgttac caaagacccg 300

gaaaacatca aagcgatcct ggcgacccag ttcggtgact tctctctggg taaacgtcac 360

accctgttca agccgctgct gggtgacggt atcttcaccc tggacggtga aggttggaaa 420

cactctcgcg cgatgctgcg tccgcagttc gcgcgtgaac aggttgcgca cgttacctct 480

ctggaaccgc acttccagct gctgaaaaag cacatcctga aacacaaagg tgaatacttc 540

gacatccagg aactgttctt ccgtttcacc gttgactctg cgaccgaatt cctgttcggt 600

gaatctgttc actctctgaa agacgaatct atcggtatca accaggacga catcgacttc 660

gcgggtcgta aagacttcgc ggaatctttc aataaagcgc aggaatacct ggcgatccgt 720

accctggttc agaccttcta ctggctggtt aacaacaaag aattccgtga ctgcaccaaa 780

tctgttcaca aattcaccaa ctactacgtt cagaaagcgc tggacgcgtc tccggaagaa 840

ctggaaaaac agtctggtta cgtattcctg tacgaactgg ttaaacagac ccgtgacccg 900

aacgttctgc gtgaccagtc tctgaacatc ctgctggcgg gtcgtgacac caccgcgggt 960

ctgctgtctt tcgcggtttt cgaactggcg cgtcacccgg aaatctgggc gaaactgcgt 1020

gaagaaatcg aacagcagtt cggtctgggt gaagactctc gtgttgaaga aatcaccttc 1080

gaatctctga aacgttgcga atacctgaaa gcgttcctga acgaaaccct gcgtatctac 1140

ccgtctgttc cgcgtaactt ccgtatcgcg accaaaaaca ccaccctgcc gcgtggtggt 1200

ggttctgacg gtacctctcc gatcctgatc cagaaaggtg aagcggtttc ttacggtatc 1260

aactctaccc acctggaccc ggtttactac ggtccggacg cggcggaatt ccgtccggaa 1320

cgttggttcg aaccgtctac caagaaactg ggttgggcgt acctgccgtt caacggtggt 1380

ccgcgtatct gcctgggtca gcagttcgcg ctgaccgaag cgggttacgt tctggttcgt 1440

ctggttcagg aattctctca cgttcgctct gacccggacg aagtttaccc gccgaaacgt 1500

ctgaccaacc tgaccatgtg cctgcaggac ggtgcgatcg ttaagttcga ctag 1554

<210> 63

<211> 680

<212> PRT

<213> 人工的

<220>

<223> 人工的多肽

<400> 63

Met Ala Leu Asp Lys Leu Asp Leu Tyr Val Ile Ile Thr Leu Val Val

1 5 10 15

Ala Ile Ala Ala Tyr Phe Ala Lys Asn Gln Phe Leu Asp Gln Gln Gln

20 25 30

Asp Thr Gly Phe Leu Asn Thr Asp Ser Gly Asp Gly Asn Ser Arg Asp

35 40 45

Ile Leu Gln Ala Leu Lys Lys Asn Asn Lys Asn Thr Leu Leu Leu Phe

50 55 60

Gly Ser Gln Thr Gly Thr Ala Glu Asp Tyr Ala Asn Lys Leu Ser Arg

65 70 75 80

Glu Leu His Ser Arg Phe Gly Leu Lys Thr Met Val Ala Asp Phe Ala

85 90 95

Asp Tyr Asp Phe Glu Asn Phe Gly Asp Ile Thr Glu Asp Ile Leu Val

100 105 110

Phe Phe Ile Val Ala Thr Tyr Gly Glu Gly Glu Pro Thr Asp Asn Ala

115 120 125

Asp Glu Phe His Thr Trp Leu Thr Glu Glu Ala Asp Thr Leu Ser Thr

130 135 140

Leu Lys Tyr Thr Val Phe Gly Leu Gly Asn Ser Thr Tyr Glu Phe Phe

145 150 155 160

Asn Ala Ile Gly Arg Lys Phe Asp Arg Leu Leu Gly Glu Lys Gly Gly

165 170 175

Asp Arg Phe Ala Glu Tyr Gly Glu Gly Asp Asp Gly Thr Gly Thr Leu

180 185 190

Asp Glu Asp Phe Leu Ala Trp Lys Asp Asn Val Phe Asp Ser Leu Lys

195 200 205

Asn Asp Leu Asn Phe Glu Glu Lys Glu Leu Lys Tyr Glu Pro Asn Val

210 215 220

Lys Leu Thr Glu Arg Asp Asp Leu Ser Gly Asn Asp Pro Asp Val Ser

225 230 235 240

Leu Gly Glu Pro Asn Val Lys Tyr Ile Lys Ser Glu Gly Val Asp Leu

245 250 255

Thr Lys Gly Pro Phe Asp His Thr His Pro Phe Leu Ala Arg Ile Val

260 265 270

Lys Thr Lys Glu Leu Phe Thr Ser Glu Asp Arg His Cys Val His Val

275 280 285

Glu Phe Asp Ile Ser Glu Ser Asn Leu Lys Tyr Thr Thr Gly Asp His

290 295 300

Leu Ala Ile Trp Pro Ser Asn Ser Asp Glu Asn Ile Lys Gln Phe Ala

305 310 315 320

Lys Cys Phe Gly Leu Glu Asp Lys Leu Asp Thr Val Ile Glu Leu Lys

325 330 335

Ala Leu Asp Ser Thr Tyr Ser Ile Pro Phe Pro Asn Pro Ile Thr Tyr

340 345 350

Gly Ala Val Ile Arg His His Leu Glu Ile Ser Gly Pro Val Ser Arg

355 360 365

Gln Phe Phe Leu Ser Ile Ala Gly Phe Ala Pro Asp Glu Glu Thr Lys

370 375 380

Lys Ser Phe Thr Arg Ile Gly Gly Asp Lys Gln Glu Phe Ala Ser Lys

385 390 395 400

Val Thr Arg Arg Lys Phe Asn Ile Ala Asp Ala Leu Leu Phe Ala Ser

405 410 415

Asn Asn Arg Pro Trp Ser Asp Val Pro Phe Glu Phe Leu Ile Glu Asn

420 425 430

Val Gln His Leu Thr Pro Arg Tyr Tyr Ser Ile Ser Ser Ser Ser Leu

435 440 445

Ser Glu Lys Gln Thr Ile Asn Val Thr Ala Val Val Glu Ala Glu Glu

450 455 460

Glu Ala Asp Gly Arg Pro Val Thr Gly Val Val Thr Asn Leu Leu Lys

465 470 475 480

Asn Ile Glu Ile Glu Gln Asn Lys Thr Gly Glu Thr Pro Met Val His

485 490 495

Tyr Asp Leu Asn Gly Pro Arg Gly Lys Phe Ser Lys Phe Arg Leu Pro

500 505 510

Val His Val Arg Arg Ser Asn Phe Lys Leu Pro Lys Asn Ser Thr Thr

515 520 525

Pro Val Ile Leu Ile Gly Pro Gly Thr Gly Val Ala Pro Leu Arg Gly

530 535 540

Phe Val Arg Glu Arg Val Gln Gln Val Lys Asn Gly Val Asn Val Gly

545 550 555 560

Lys Thr Val Leu Phe Tyr Gly Cys Arg Asn Ser Glu Gln Asp Phe Leu

565 570 575

Tyr Lys Gln Glu Trp Ser Glu Tyr Ala Ser Val Leu Gly Glu Asn Phe

580 585 590

Glu Met Phe Asn Ala Phe Ser Arg Gln Asp Pro Thr Lys Lys Val Tyr

595 600 605

Val Gln Asp Lys Ile Leu Glu Asn Ser Ala Leu Val Asp Glu Leu Leu

610 615 620

Ser Ser Gly Ala Ile Ile Tyr Val Cys Gly Asp Ala Ser Arg Met Ala

625 630 635 640

Arg Asp Val Gln Ala Ala Ile Ala Lys Ile Val Ala Lys Ser Arg Asp

645 650 655

Ile His Glu Asp Lys Ala Ala Glu Leu Val Lys Ser Trp Lys Val Gln

660 665 670

Asn Arg Tyr Gln Glu Asp Val Trp

675 680

<210> 64

<211> 2043

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> 人工的核酸

<400> 64

atggcgctgg acaagctgga cctgtacgtt atcatcaccc tggttgttgc catcgcggcg 60

tacttcgcaa agaatcagtt cctggatcag cagcaggaca ccggcttcct gaacaccgac 120

tctggcgacg gcaattcccg tgatattctg caggcgctga agaaaaataa caaaaatacc 180

ctgctgctgt tcggttctca gaccggtacc gcggaagact acgcgaataa actgtctcgt 240

gaactgcact ctcgttttgg cctgaagacc atggttgcgg acttcgccga ctacgacttc 300

gaaaatttcg gtgacattac ggaagatatc ctggttttct tcatcgttgc gacctacggc 360

gaaggtgaac cgaccgacaa cgcggacgag ttccacacct ggctgaccga agaggcggat 420

accctgtcta ccctgaagta caccgtcttc ggcctgggta attctactta tgaattcttc 480

aacgccatcg gtcgtaaatt cgaccgtctg ctgggtgaaa aaggtggcga tcgtttcgcg 540

gagtacggtg agggtgacga cggtacgggt accctggacg aggactttct ggcgtggaaa 600

gacaatgttt tcgactccct gaaaaacgat ctgaactttg aggaaaaaga actgaaatac 660

gagccgaacg ttaaactgac cgaacgtgac gacctgtctg gtaatgaccc ggacgtttct 720

ctgggcgagc cgaatgttaa gtacatcaaa tctgaaggtg ttgacctgac gaaaggtccg 780

ttcgaccaca cccacccgtt cctggcacgt atcgttaaaa ccaaagagct gtttacctct 840

gaagaccgtc actgcgttca tgtcgaattc gatatctctg aatctaacct gaaatacacc 900

acgggtgacc acctggcgat ctggccgtct aattctgacg aaaatatcaa acagttcgcg 960

aaatgcttcg gtctggaaga caaactggat accgttatcg aactgaaagc gctggactct 1020

acgtactcca tcccgttccc gaacccgatc acctatggtg cggttatccg ccaccacctg 1080

gaaatctctg gtccggtttc tcgccagttc ttcctgtcta tcgcgggttt cgcgcctgac 1140

gaagagacga aaaaatcctt cacccgtatc ggtggtgaca aacaggaatt tgcgtctaag 1200

gttacccgtc gtaaattcaa catcgctgac gcgctgctgt ttgcgagcaa caatcgtccg 1260

tggtccgacg tgccattcga gtttctgatc gagaatgttc agcacctgac cccgcgttac 1320

tattctatct cctctagctc tctgtctgaa aaacagacga tcaacgttac cgctgttgta 1380

gaagcagaag aggaggcgga tggtcgtccg gttaccggtg ttgttaccaa tctgctgaaa 1440

aacatcgaaa tcgaacaaaa caaaaccggt gaaaccccga tggttcatta cgatctgaat 1500

ggtccgcgtg gtaagttctc taaattccgc ctgccggttc acgttcgtcg ttctaacttc 1560

aaactgccga aaaactccac taccccggtt attctgattg gtccgggtac tggtgttgcg 1620

ccgctgcgtg gtttcgttcg tgagcgtgtg caacaggtta aaaacggcgt taacgtcggt 1680

aagaccgtac tgttctacgg ttgccgtaac agcgaacagg actttctgta caaacaggaa 1740

tggtctgaat acgcatctgt actgggtgag aatttcgaga tgttcaacgc gttctctcgt 1800

caggacccga ccaaaaaagt ttacgttcaa gataaaatcc tggaaaactc tgcgctggtt 1860

gacgaactgc tgtcttctgg tgcaatcatt tacgtttgcg gtgatgcgtc ccgtatggcg 1920

cgtgacgttc aggcggcaat cgctaaaatc gttgctaaaa gccgtgatat ccatgaagat 1980

aaagcggcgg aactggttaa atcttggaaa gttcagaacc gctaccagga agacgtttgg 2040

taa 2043

<210> 65

<211> 12064

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> 表达载体

<400> 65

atcgattgga tgcccgaggc atagactgta caaaaaaaca gtcataacaa gccatgaaaa 60

ccgccactgc gccgttacca ccgctgcgtt cggtcaaggt tctggaccag ttgcgtgagc 120

gcatacgcta cttgcattac agtttacgaa ccgaacaggc ttatgtcaat tcgcctctca 180

ggcgccgctg gtgccgctgg ttggacgcca agggtgaatc cgcctcgata ccctgattac 240

tcgcttcctg cgccctctca ggcggcgata ggggactggt aaaacgggga ttgcccagac 300

gcctcccccg ccccttcagg ggcacaaatg cggccccaac ggggccacgt agtggtgcgt 360

tttttgcgtt tccacccttt tcttcctttt cccttttaaa ccttttagga cgtctacagg 420

ccacgtaatc cgtggcctgt agagtttaaa aagggacgga tttgttgcca ttaagggacg 480

gatttgttgt taagaaggga cggatttgtt gttgtaaagg gacggatttg ttgtattgtg 540

ggacgcagat acagtgtccc cttatacaca aggaatgtcg aacgtggcct cacccccaat 600

ggtttacaaa agcaatgccc tggtcgaggc cgcgtatcgc ctcagtgttc aggaacagcg 660

gatcgttctg gcctgtatta gccaggtgaa gaggagcgag cctgtcaccg atgaagtgat 720

gtattcagtg acggcggagg acatagcgac gatggcgggt gtccctatcg aatcttccta 780

caaccagctc aaagaagcgg ccctgcgcct gaaacggcgg gaagtccggt taacccaaga 840

gcccaatggc aaggggaaaa gaccgagtgt gatgattacc ggctgggtgc aaacaatcat 900

ctaccgggag ggtgagggcc gtgtagaact caggttcacc aaagacatgc tgccgtacct 960

gacggaactc accaaacagt tcaccaaata cgccttggct gacgtggcca agatggacag 1020

cacccacgcg atcaggcttt acgagctgct catgcaatgg gacagcatcg gccagcgcga 1080

aatagaaatt gaccagctgc gaaagtggtt tcaactggaa ggccggtatc cctcgatcaa 1140

ggacttcaag ttgcgagtgc ttgatccagc cgtgacgcag atcaacgagc acagcccgct 1200

acaggtggag tgggcgcagc gaaagaccgg gcgcaaggtc acacatctgt tgttcagttt 1260

tggaccgaag aagcccgcca aggcggtggg taaggcccca gcgaagcgca aggccgggaa 1320

gatttcagat gctgagatcg cgaaacaggc tcgccctggt gagacatggg aagcggcccg 1380

cgctcgacta acccagatgc cgctggatct ggcctagagg ccgtggccac cacggcccgg 1440

cctgcctttc aggctgcatt attgaagcat ttatcagggt tattgtctca tgagcggata 1500

catatttgaa tgtatttaga aaaataaaca aaagagtttg tagaaacgca aaaaggccat 1560

ccgtcaggat ggccttctgc ttaatttgat gcctggcagt ttatggcggg cgtcctgccc 1620

gccaccctcc gggccgttgc ttcgcaacgt tcaaatccgc tcccggcgga tttgtcctac 1680

tcaggagagc gttcaccgac aaacaacaga taaaacgaaa ggcccagtct ttcgactgag 1740

cctttcgttt tatttgatgc ctggcagttc cctactctcg catggggaga ccccacacta 1800

ccatcggcgc tacggcgttt cacttctgag ttcggcatgg ggtcaggtgg gaccaccgcg 1860

ctactgccgc caggcaaatt ctgttttatc agaccgcttc tgcgttctga tttaatctgt 1920

atcaggctga aaatcttctc tcatccgcca aaacagaagc ttggctgcag gtcgacagaa 1980

gcttggctgc aggtcgatta gaaaacatat gacgcaccaa gactgagaat gaaaggatca 2040

acctcaattt tagtagaaac aggaaccggg ccaagagtac ctgtgacgtc cgttttgaaa 2100

ggaatataac gcacatctga atttagcatc catgagttac caaggtcata tctaaggcca 2160

acctgaaaag caggcgccca tttatcctta atatcaaacg aactcaaagc accgtcggtt 2220

ttatcaaaaa atagcacccg accaacacca accccaacat atggataaag tcgctcaaag 2280

ctatcgtaat gatattgaag cgaaagaatt gcagggccgt aatcaacttc actgactctt 2340

cccagcgagg agattgattt ctcaccttga aatttagccc tagctggcac cccaacaaaa 2400

aaatccaccg ctatatttga gctaacaaaa taggcgatat caaacgtaag tgttgtatca 2460

ttaccaatac ttacatcagc atttggcaaa gccccccctc caacatttag atcgccaagc 2520

tcctcaccca catagacctt agaaaaattg aagctagcga cccagtcacc ctgattatag 2580

ccagcagatt tcgccggata attttcattc gcccatgcag tggccgcccc caaaacaaaa 2640

ttagcaacca acaccggcat cgcgattact ttataattag aaaaactcat atgccactct 2700

ccttggttcc tagatccttt accaaacgtc ttcctggtag cggttctgaa ctttccaaga 2760

tttaaccagt tccgccgctt tatcttcatg gatatcacgg cttttagcaa cgattttagc 2820

gattgccgcc tgaacgtcac gcgccatacg ggacgcatca ccgcaaacgt aaatgattgc 2880

accagaagac agcagttcgt caaccagcgc agagttttcc aggattttat cttgaacgta 2940

aacttttttg gtcgggtcct gacgagagaa cgcgttgaac atctcgaaat tctcacccag 3000

tacagatgcg tattcagacc attcctgttt gtacagaaag tcctgttcgc tgttacggca 3060

accgtagaac agtacggtct taccgacgtt aacgccgttt ttaacctgtt gcacacgctc 3120

acgaacgaaa ccacgcagcg gcgcaacacc agtacccgga ccaatcagaa taaccggggt 3180

agtggagttt ttcggcagtt tgaagttaga acgacgaacg tgaaccggca ggcggaattt 3240

agagaactta ccacgcggac cattcagatc gtaatgaacc atcggggttt caccggtttt 3300

gttttgttcg atttcgatgt ttttcagcag attggtaaca acaccggtaa ccggacgacc 3360

atccgcctcc tcttctgctt ctacaacagc ggtaacgttg atcgtctgtt tttcagacag 3420

agagctagag gagatagaat agtaacgcgg ggtcaggtgc tgaacattct cgatcagaaa 3480

ctcgaatggc acgtcggacc acggacgatt gttgctcgca aacagcagcg cgtcagcgat 3540

gttgaattta cgacgggtaa ccttagacgc aaattcctgt ttgtcaccac cgatacgggt 3600

gaaggatttt ttcgtctctt cgtcaggcgc gaaacccgcg atagacagga agaactggcg 3660

agaaaccgga ccagagattt ccaggtggtg gcggataacc gcaccatagg tgatcgggtt 3720

cgggaacggg atggagtacg tagagtccag cgctttcagt tcgataacgg tatccagttt 3780

gtcttccaga ccgaagcatt tcgcgaactg tttgatattt tcgtcagaat tagacggcca 3840

gatcgccagg tggtcacccg tggtgtattt caggttagat tcagagatat cgaattcgac 3900

atgaacgcag tgacggtctt cagaggtaaa cagctctttg gttttaacga tacgtgccag 3960

gaacgggtgg gtgtggtcga acggaccttt cgtcaggtca acaccttcag atttgatgta 4020

cttaacattc ggctcgccca gagaaacgtc cgggtcatta ccagacaggt cgtcacgttc 4080

ggtcagttta acgttcggct cgtatttcag ttctttttcc tcaaagttca gatcgttttt 4140

cagggagtcg aaaacattgt ctttccacgc cagaaagtcc tcgtccaggg tacccgtacc 4200

gtcgtcaccc tcaccgtact ccgcgaaacg atcgccacct ttttcaccca gcagacggtc 4260

gaatttacga ccgatggcgt tgaagaattc ataagtagaa ttacccaggc cgaagacggt 4320

gtacttcagg gtagacaggg tatccgcctc ttcggtcagc caggtgtgga actcgtccgc 4380

gttgtcggtc ggttcacctt cgccgtaggt cgcaacgatg aagaaaacca ggatatcttc 4440

cgtaatgtca ccgaaatttt cgaagtcgta gtcggcgaag tccgcaacca tggtcttcag 4500

gccaaaacga gagtgcagtt cacgagacag tttattcgcg tagtcttccg cggtaccggt 4560

ctgagaaccg aacagcagca gggtattttt gttatttttc ttcagcgcct gcagaatatc 4620

acgggaattg ccgtcgccag agtcggtgtt caggaagccg gtgtcctgct gctgatccag 4680

gaactgattc tttgcgaagt acgccgcgat ggcaacaacc agggtgatga taacgtacag 4740

gtccagcttg tccagcgcca tgcttctctc tttatctgtg ccttgggctt acatcttcac 4800

gaaaacacca tcgttgtgag acatagtcag gtggatgcat ttcggaggcg ggtactccag 4860

accagggtcg gagctaacgg tttcgaacat ctgcgccaga cgagtgatga cgtaggaggc 4920

ttccgtcaga gcgaactgct ggcccaggca aacacgcgga ccaccgttga acggcacgta 4980

cgcccaaccc agcttcttgg tagaaggctc gaaccaacgt tccggacgaa agtcgttggc 5040

gtctttaccg taatattctt ccagacggtg cgtcttgtaa acaacgtaag caacggtaga 5100

gcctttagga atgtagattg ggtccgtgcc attcgcgcca ccaccacgcg gcagggtggt 5160

gtcgcgcgtc gcggtacgga aattaacagg aacgcttggg tacatacgca gcgtttcgtt 5220

caggatcgct ttcagatact cacagcgttt cagcgcttca aaggtgatct cttccacacg 5280

agaatcctcg ccaacaccga agttaacctc gatttcctca cgcagtttag accacatttc 5340

cggatgacgc gccagttcaa acagcgcaaa agacagcaga cccgcagtag tgtcacgacc 5400

agccaccatg atattcagca gctggtcctg cagaactttt ggatcacggg tttgtttcac 5460

cagctcatac aggaaaacgt agccgctttt agatttttcc tccagttcct ccggggtgaa 5520

attcagagct ttgttcacaa agtatttcgc cagatgatga accttagcgt tgcaatcacg 5580

gaactccttc gggttggtca gaaaatagaa cgtctgagag taagaacggg ttgccaggta 5640

gtgttgagag acattgaatg ccgcagcaaa gttttcacgg cctgggattt cattaggagt 5700

cggaatgccc agtttctcgt cgtacagaga atgaacagat tcaccaaaca gaaactcggt 5760

ggcggtatca accgtaaagc gaaaaaacag ttcttgaata tcgaaggtct taccctgatt 5820

cagcttgatt tgttttgcca taatctggat atgcggctcc agcgccttta catgaccaat 5880

ctggtcacga gcaaattgtg ggcgcagcat tgcgcgagag tgtttccagc cctcaccgtc 5940

cagcgtaaag ataccgtcac ccagcagcgg agcgaaatgg gcgtgacgcg tgcccagaga 6000

gaagtccgtg aattgagttg ccagaacggc cttgatattt tcagggtcaa cagtcataac 6060

gatcttcagt gcaccggcaa cagacaggta gaaggtgtga ttcggatact cgtcaaagac 6120

ctcatcggcg aagttggcca ggcggccgtc atttttggct ttgattgccg caatcagaga 6180

agaaataccg gtcaggccag cgtccttcag gtaaggcgga tcaacgcact tcagcttttt 6240

agccttaacg tagtttttga tgttagtgga gatcaggaag accagaacag ccgcggtaat 6300

gacagtatac cacttcgtca ggtatggcag cacagagtca atgatttctt gggtcgccat 6360

gtcgctctcc gcaggcgcgc caagcatatg gaattctcca atttttatta aattagtcgc 6420

tacgagattt aagacgtaat tttatgccta actgagaaag ttaagccgcc cactctcact 6480

ctcgacatct taaacctgag ctaatcggac gcttgcgcca actacaccta cgggtagttt 6540

ttgctccgtc gtctgctgga aaaacacgag ctggccgcaa gcatgccagg taccgcgagc 6600

tactcgcgac ggctgaaagc accgaaatga gcgagctatc tggtcgattt tgacccggtg 6660

cccgtcttca aaatcggcga aggccgaagt cggccagaaa tagcggccta cttcagacct 6720

tccctagtaa atattttgca ccaccgatca tgccgactac acttaagtgt agttttaata 6780

tttaacaccg taacctatgg tgaaaatttc cagtcagctg gcgcgagaat agcataatga 6840

aaataataat aaataatgat ttcccggtcg ctaaggtcgg agcggatcaa attacgactc 6900

tagtaagtgc caaagttcat agttgcatat atcggccaag attgagtatc gcggatggag 6960

ccgctcccag agtatgcctt tacagagccc cacctggata tgggaaaacc gttgctcttg 7020

cgttcgagtg gctacgccac agaacagccg gacgtcctgc agtgtggctt tctttaagag 7080

ccagttctta cagtgaattt gatatctgcg cagagattat tgagcagctt gaaactttcg 7140

aaatggtaaa attcagccgt gtgagagagg gtgtgagcaa gcctgcgctc ttgcgagacc 7200

ttgcatctag tctttggcag agcacctcga ataacgagat agaaacgcta gtttgtttgg 7260

ataatattaa tcatgactta gacttgccgt tgttgcacgc acttatggag tttatgttaa 7320

atacaccaaa aaatatcagg tttgcagttg caggcaatac aataaaaggg ttctcgcagc 7380

ttaaacttgc aggcgctatg cgggagtaca ccgagaaaga cttggccttt agcgcagaag 7440

aggcggtggc gttagcggag gcagagtctg ttcttggagt tcctgaagaa cagatagaga 7500

ccttggtgca agaagttgag gggtggcctg ctcttgtagt ttttttgtta aagcgtgagt 7560

tgccggccaa gcatatttca gcagtagttg aagtagacaa ttactttagg gatgaaatat 7620

ttgaggcgat tcccgagcgc tatcgtgttt ttcttgcaaa ttcttcattg ctcgatttcg 7680

tgacgcctga tcaatacaat tatgtattca aatgcgtcaa tggggtctca tgtattaagt 7740

atttaagcac taattacatg ttgcttcgcc atgtgagcgg tgagccagcg cagtttacac 7800

tgcatccagt actgcgtaat tttctacgag aaattacttg gactgaaaat cctgctaaaa 7860

gatcctacct gcttaagcgt gcagctttct ggcattggcg tagaggtgaa taccagtatg 7920

caatacgaat atccctacgg gcgaatgact gtcgctgggc agtcagcatg tctgagagaa 7980

taattttaga tttgtcattt cgtcagggcg aaatagatgc gctgagacag tggctgttag 8040

agctgccgaa gcaggcctgg caccaaaaac ccatagtgct tattagttac gcgtgggtat 8100

tgtatttcag tcagcaaggc gcgcgagcag agaagttaat taaagaccta tcttcacaat 8160

ccgataaaaa aaataaatgg caagaaaagg aatggctgca gcttgtgctt gcaataggta 8220

aagcaaccaa agatgaaatg ctttcgagtg aggagctctg taataagtgg attagtttat 8280

ttggggattc aaacgcagtt ggaaaagggg ccgcgctaac ctgtttggct tttatttttg 8340

ccagtgagta tagatttgca gagttggaga aggtgctggc tcaggcccaa gccgtgaata 8400

aatttgcaaa acaaaatttt gcttttggtt ggctgtatgt cgcgaggttt caacaagccc 8460

tagcaagcgg aaaaatgggc tgggcgaggc agattataac tcaagcacgc acagacagtc 8520

gcgcgcagat gatggaatcc gagtttactt cgaaaatgtt tgacgctcta gagcttgagt 8580

tacattatga attgcgctgc ttggacacct cagaagaaaa gctctccaaa attttagagt 8640

tcatttccaa tcacggggtg acagacgtgt ttttttccgt atgccgtgct gtgtcagctt 8700

ggcggcttgg aaggagtgac ctaaatggct ccattgagat attggagtgg gcgaaggcgc 8760

atgcggttga aaaaaatcta ccaagattgg aagttatgag ccaaattgag atctatcagc 8820

gcttagtctg tcaaggcata acgggcataa ataatttaaa aactcttgaa gatcataaga 8880

ttttctccgg acagcactca gcccccctaa aagcacgcct gctgcttgtt caatcactag 8940

tgctttcccg agatcggaac tttcatagtg ccgcgcacag agcgttattg gctattcagc 9000

aagcccgtaa aattaacgcg ggccagctgg aagtccgtgg attattgtgt ttggccggag 9060

cgcaggcagg tgccggtgat ttaaaaaagg ctcagcttaa cattgtttat gcagtggaga 9120

tagcaaaaca gcttcaatgc tttcaaacag ttcttgatga agtatgttta attgagcgaa 9180

taataccggc ttcatgtgaa gccttcacag cagttaattt agatcaagcg attggggctt 9240

ttagtcttcc gcgaatagtt gagattggaa agtccgcaga gaataaagct gacgctttat 9300

tgacacggaa gcagattgct gtcttgaggc ttgtaaaaga ggggtgctca aacaaacaaa 9360

tagcaacaaa tatgcatgtc accgaagatg ctataaagtg gcacatgagg aaaatatttg 9420

ccaccttgaa tgtagtgaat cgcacgcaag caacaattga agctgagcgt caaggaatta 9480

tctaaaataa tcggcattaa gtgatatagt gaaaagtata ctcgagctca tagtccacga 9540

cgcccgtgat tttgtagccc tggccgacgg ccagcaggta ggccgacagg ctcatgccgg 9600

ccgccgccgc cttttcctca atcgctcttc gttcgtctgg aaggcagtac accttgatag 9660

gtgggctgcc cttcctggtt ggcttggttt catcagccat ccgcttgccc tcatctgtta 9720

cgccggcggt agccggccag cctcgcagag caggattccc gttgagcacc gccaggtgcg 9780

aataagggac agtgaagaag gaacacccgc tcgcgggtgg gcctacttca cctatcctgc 9840

ccggctgacg ccgttggata caccaaggaa agtctacacg aaccctttgg caaaatcctg 9900

tatatcgtgc gaaaaaggat ggatataccg aaaaaatcgc tataatgacc ccgaagcagg 9960

gttatgcagc ggaaaagcgc tgcttccctg ctgttttgtg gaatatctac cgactggaaa 10020

caggcaaatg caggaaatta ctgaactgag gggacaggcg agagaggatc aatggctatc 10080

tgggggaccg agggctgtcg ctgcgccaag gcacgattgg agatccccta tgcggtgtga 10140

aataccgcac agatgcgtaa ggagaaaata ccgcatcagg cgctcttccg cttcctcgct 10200

cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc 10260

ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg 10320

ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg 10380

cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg 10440

actataaaga taccaggcgt ttccccctgg aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac 10500

cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca 10560

tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt 10620

gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc 10680

caacccggta agacacgact tatcgccact ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag 10740

agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt cttgaagtgg tggcctaact acggctacac 10800

tagaaggaca gtatttggta tctgcgctct gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt 10860

tggtagctct tgatccggca aacaaaccac cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa 10920

gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg 10980

gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa 11040

aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat 11100

atatgagtaa acttggtctg acagttacca atcgattggt cggtcatttc gaaccccaga 11160

gtcccgctca gaagaactcg tcaagaaggc gatagaaggc gatgcgctgc gaatcgggag 11220

cggcgatacc gtaaagcacg aggaagcggt cagcccattc gccgccaagc tcttcagcaa 11280

tatcacgggt agccaacgct atgtcctgat agcggtccgc cacacccagc cggccacagt 11340

cgatgaatcc agaaaagcgg ccattttcca ccatgatatt cggcaagcag gcatcgccat 11400

gggtcacgac gagatcctcg ccgtcgggca tgcgcgcctt gagcctggcg aacagttcgg 11460

ctggcgcgag cccctgatgc tcttcgtcca gatcatcctg atcgacaaga ccggcttcca 11520

tccgagtacg tgctcgctcg atgcgatgtt tcgcttggtg gtcgaatggg caggtagccg 11580

gatcaagcgt atgcagccgc cgcattgcat cagccatgat ggatactttc tcggcaggag 11640

caaggtgaga tgacaggaga tcctgccccg gcacttcgcc caatagcagc cagtcccttc 11700

ccgcttcagt gacaacgtcg agcacagctg cgcaaggaac gcccgtcgtg gccagccacg 11760

atagccgcgc tgcctcgtcc tgcagttcat tcagggcacc ggacaggtcg gtcttgacaa 11820

aaagaaccgg gcgcccctgc gctgacagcc ggaacacggc ggcatcagag cagccgattg 11880

tctgttgtgc ccagtcatag ccgaatagcc tctccaccca agcggccgga gaacctgcgt 11940

gcaatccatc ttgttcaatc atgcgaaacg atcctcatcc tgtctcttga tcagatcttg 12000

atcccctgcg ccatcagatc cttggcggca agaaagccat ccagtttact ttgcagggct 12060

tccc 12064

<210> 66

<211> 12046

<212> DNA

<213> 人工的

<220>

<223> 表达载体

<400> 66

atcgattgga tgcccgaggc atagactgta caaaaaaaca gtcataacaa gccatgaaaa 60

ccgccactgc gccgttacca ccgctgcgtt cggtcaaggt tctggaccag ttgcgtgagc 120

gcatacgcta cttgcattac agtttacgaa ccgaacaggc ttatgtcaat tcgcctctca 180

ggcgccgctg gtgccgctgg ttggacgcca agggtgaatc cgcctcgata ccctgattac 240

tcgcttcctg cgccctctca ggcggcgata ggggactggt aaaacgggga ttgcccagac 300

gcctcccccg ccccttcagg ggcacaaatg cggccccaac ggggccacgt agtggtgcgt 360

tttttgcgtt tccacccttt tcttcctttt cccttttaaa ccttttagga cgtctacagg 420

ccacgtaatc cgtggcctgt agagtttaaa aagggacgga tttgttgcca ttaagggacg 480

gatttgttgt taagaaggga cggatttgtt gttgtaaagg gacggatttg ttgtattgtg 540

ggacgcagat acagtgtccc cttatacaca aggaatgtcg aacgtggcct cacccccaat 600

ggtttacaaa agcaatgccc tggtcgaggc cgcgtatcgc ctcagtgttc aggaacagcg 660

gatcgttctg gcctgtatta gccaggtgaa gaggagcgag cctgtcaccg atgaagtgat 720

gtattcagtg acggcggagg acatagcgac gatggcgggt gtccctatcg aatcttccta 780

caaccagctc aaagaagcgg ccctgcgcct gaaacggcgg gaagtccggt taacccaaga 840

gcccaatggc aaggggaaaa gaccgagtgt gatgattacc ggctgggtgc aaacaatcat 900

ctaccgggag ggtgagggcc gtgtagaact caggttcacc aaagacatgc tgccgtacct 960

gacggaactc accaaacagt tcaccaaata cgccttggct gacgtggcca agatggacag 1020

cacccacgcg atcaggcttt acgagctgct catgcaatgg gacagcatcg gccagcgcga 1080

aatagaaatt gaccagctgc gaaagtggtt tcaactggaa ggccggtatc cctcgatcaa 1140

ggacttcaag ttgcgagtgc ttgatccagc cgtgacgcag atcaacgagc acagcccgct 1200

acaggtggag tgggcgcagc gaaagaccgg gcgcaaggtc acacatctgt tgttcagttt 1260

tggaccgaag aagcccgcca aggcggtggg taaggcccca gcgaagcgca aggccgggaa 1320

gatttcagat gctgagatcg cgaaacaggc tcgccctggt gagacatggg aagcggcccg 1380

cgctcgacta acccagatgc cgctggatct ggcctagagg ccgtggccac cacggcccgg 1440

cctgcctttc aggctgcatt attgaagcat ttatcagggt tattgtctca tgagcggata 1500

catatttgaa tgtatttaga aaaataaaca aaagagtttg tagaaacgca aaaaggccat 1560

ccgtcaggat ggccttctgc ttaatttgat gcctggcagt ttatggcggg cgtcctgccc 1620

gccaccctcc gggccgttgc ttcgcaacgt tcaaatccgc tcccggcgga tttgtcctac 1680

tcaggagagc gttcaccgac aaacaacaga taaaacgaaa ggcccagtct ttcgactgag 1740

cctttcgttt tatttgatgc ctggcagttc cctactctcg catggggaga ccccacacta 1800

ccatcggcgc tacggcgttt cacttctgag ttcggcatgg ggtcaggtgg gaccaccgcg 1860

ctactgccgc caggcaaatt ctgttttatc agaccgcttc tgcgttctga tttaatctgt 1920

atcaggctga aaatcttctc tcatccgcca aaacagaagc ttggctgcag gtcgacagaa 1980

gcttggctgc aggtcgatta gaaaacatat gacgcaccaa gactgagaat gaaaggatca 2040

acctcaattt tagtagaaac aggaaccggg ccaagagtac ctgtgacgtc cgttttgaaa 2100

ggaatataac gcacatctga atttagcatc catgagttac caaggtcata tctaaggcca 2160

acctgaaaag caggcgccca tttatcctta atatcaaacg aactcaaagc accgtcggtt 2220

ttatcaaaaa atagcacccg accaacacca accccaacat atggataaag tcgctcaaag 2280

ctatcgtaat gatattgaag cgaaagaatt gcagggccgt aatcaacttc actgactctt 2340

cccagcgagg agattgattt ctcaccttga aatttagccc tagctggcac cccaacaaaa 2400

aaatccaccg ctatatttga gctaacaaaa taggcgatat caaacgtaag tgttgtatca 2460

ttaccaatac ttacatcagc atttggcaaa gccccccctc caacatttag atcgccaagc 2520

tcctcaccca catagacctt agaaaaattg aagctagcga cccagtcacc ctgattatag 2580

ccagcagatt tcgccggata attttcattc gcccatgcag tggccgcccc caaaacaaaa 2640

ttagcaacca acaccggcat cgcgattact ttataattag aaaaactcat atgccactct 2700

ccttggttcc tagatccttt accaaacgtc ttcctggtag cggttctgaa ctttccaaga 2760

tttaaccagt tccgccgctt tatcttcatg gatatcacgg cttttagcaa cgattttagc 2820

gattgccgcc tgaacgtcac gcgccatacg ggacgcatca ccgcaaacgt aaatgattgc 2880

accagaagac agcagttcgt caaccagcgc agagttttcc aggattttat cttgaacgta 2940

aacttttttg gtcgggtcct gacgagagaa cgcgttgaac atctcgaaat tctcacccag 3000

tacagatgcg tattcagacc attcctgttt gtacagaaag tcctgttcgc tgttacggca 3060

accgtagaac agtacggtct taccgacgtt aacgccgttt ttaacctgtt gcacacgctc 3120

acgaacgaaa ccacgcagcg gcgcaacacc agtacccgga ccaatcagaa taaccggggt 3180

agtggagttt ttcggcagtt tgaagttaga acgacgaacg tgaaccggca ggcggaattt 3240

agagaactta ccacgcggac cattcagatc gtaatgaacc atcggggttt caccggtttt 3300

gttttgttcg atttcgatgt ttttcagcag attggtaaca acaccggtaa ccggacgacc 3360

atccgcctcc tcttctgctt ctacaacagc ggtaacgttg atcgtctgtt tttcagacag 3420

agagctagag gagatagaat agtaacgcgg ggtcaggtgc tgaacattct cgatcagaaa 3480

ctcgaatggc acgtcggacc acggacgatt gttgctcgca aacagcagcg cgtcagcgat 3540

gttgaattta cgacgggtaa ccttagacgc aaattcctgt ttgtcaccac cgatacgggt 3600

gaaggatttt ttcgtctctt cgtcaggcgc gaaacccgcg atagacagga agaactggcg 3660

agaaaccgga ccagagattt ccaggtggtg gcggataacc gcaccatagg tgatcgggtt 3720

cgggaacggg atggagtacg tagagtccag cgctttcagt tcgataacgg tatccagttt 3780

gtcttccaga ccgaagcatt tcgcgaactg tttgatattt tcgtcagaat tagacggcca 3840

gatcgccagg tggtcacccg tggtgtattt caggttagat tcagagatat cgaattcgac 3900

atgaacgcag tgacggtctt cagaggtaaa cagctctttg gttttaacga tacgtgccag 3960

gaacgggtgg gtgtggtcga acggaccttt cgtcaggtca acaccttcag atttgatgta 4020

cttaacattc ggctcgccca gagaaacgtc cgggtcatta ccagacaggt cgtcacgttc 4080

ggtcagttta acgttcggct cgtatttcag ttctttttcc tcaaagttca gatcgttttt 4140

cagggagtcg aaaacattgt ctttccacgc cagaaagtcc tcgtccaggg tacccgtacc 4200

gtcgtcaccc tcaccgtact ccgcgaaacg atcgccacct ttttcaccca gcagacggtc 4260

gaatttacga ccgatggcgt tgaagaattc ataagtagaa ttacccaggc cgaagacggt 4320

gtacttcagg gtagacaggg tatccgcctc ttcggtcagc caggtgtgga actcgtccgc 4380

gttgtcggtc ggttcacctt cgccgtaggt cgcaacgatg aagaaaacca ggatatcttc 4440

cgtaatgtca ccgaaatttt cgaagtcgta gtcggcgaag tccgcaacca tggtcttcag 4500

gccaaaacga gagtgcagtt cacgagacag tttattcgcg tagtcttccg cggtaccggt 4560

ctgagaaccg aacagcagca gggtattttt gttatttttc ttcagcgcct gcagaatatc 4620

acgggaattg ccgtcgccag agtcggtgtt caggaagccg gtgtcctgct gctgatccag 4680

gaactgattc tttgcgaagt acgccgcgat ggcaacaacc agggtgatga taacgtacag 4740

gtccagcttg tccagcgcca tgcttctctc tttatctgtg ccttgggcct agtcgaactt 4800

aacgatcgca ccgtcctgca ggcacatggt caggttggtc agacgtttcg gcgggtaaac 4860

ttcgtccggg tcagagcgaa cgtgagagaa ttcctgaacc agacgaacca gaacgtaacc 4920

cgcttcggtc agcgcgaact gctgacccag gcagatacgc ggaccaccgt tgaacggcag 4980

gtacgcccaa cccagtttct tggtagacgg ttcgaaccaa cgttccggac ggaattccgc 5040

cgcgtccgga ccgtagtaaa ccgggtccag gtgggtagag ttgataccgt aagaaaccgc 5100

ttcacctttc tggatcagga tcggagaggt accgtcagaa ccaccaccac gcggcagggt 5160

ggtgtttttg gtcgcgatac ggaagttacg cggaacagac gggtagatac gcagggtttc 5220

gttcaggaac gctttcaggt attcgcaacg tttcagagat tcgaaggtga tttcttcaac 5280

acgagagtct tcacccagac cgaactgctg ttcgatttct tcacgcagtt tcgcccagat 5340

ttccgggtga cgcgccagtt cgaaaaccgc gaaagacagc agacccgcgg tggtgtcacg 5400

acccgccagc aggatgttca gagactggtc acgcagaacg ttcgggtcac gggtctgttt 5460

aaccagttcg tacaggaata cgtaaccaga ctgtttttcc agttcttccg gagacgcgtc 5520

cagcgctttc tgaacgtagt agttggtgaa tttgtgaaca gatttggtgc agtcacggaa 5580

ttctttgttg ttaaccagcc agtagaaggt ctgaaccagg gtacggatcg ccaggtattc 5640

ctgcgcttta ttgaaagatt ccgcgaagtc tttacgaccc gcgaagtcga tgtcgtcctg 5700

gttgataccg atagattcgt ctttcagaga gtgaacagat tcaccgaaca ggaattcggt 5760

cgcagagtca acggtgaaac ggaagaacag ttcctggatg tcgaagtatt cacctttgtg 5820

tttcaggatg tgctttttca gcagctggaa gtgcggttcc agagaggtaa cgtgcgcaac 5880

ctgttcacgc gcgaactgcg gacgcagcat cgcgcgagag tgtttccaac cttcaccgtc 5940

cagggtgaag ataccgtcac ccagcagcgg cttgaacagg gtgtgacgtt tacccagaga 6000

gaagtcaccg aactgggtcg ccaggatcgc tttgatgttt tccgggtctt tggtaacaac 6060

gatacgggta ccgaacagga tagaaacgta ggtaccaaca gacgggtttt tagagtggtc 6120

gaatttgtag tcgttgtatt cctgcgcacg accttctttt ttgaactgca gcgctttcca 6180

accgttaacg ataccgaacg cgttgtcgta cagtttgttg gtaaccggcg ccgcacccag 6240

ttttttcatc agaacgcggg ttttggtgta cgccagcagc tgtttgatga tgtacagaac 6300

cggaacaaca acgtaccagt attccagcag ttgttcgatc atgtcgctct ccgcaggcgc 6360

gccaagcata tggaattctc caatttttat taaattagtc gctacgagat ttaagacgta 6420

attttatgcc taactgagaa agttaagccg cccactctca ctctcgacat cttaaacctg 6480

agctaatcgg acgcttgcgc caactacacc tacgggtagt ttttgctccg tcgtctgctg 6540

gaaaaacacg agctggccgc aagcatgcca ggtaccgcga gctactcgcg acggctgaaa 6600

gcaccgaaat gagcgagcta tctggtcgat tttgacccgg tgcccgtctt caaaatcggc 6660

gaaggccgaa gtcggccaga aatagcggcc tacttcagac cttccctagt aaatattttg 6720

caccaccgat catgccgact acacttaagt gtagttttaa tatttaacac cgtaacctat 6780

ggtgaaaatt tccagtcagc tggcgcgaga atagcataat gaaaataata ataaataatg 6840

atttcccggt cgctaaggtc ggagcggatc aaattacgac tctagtaagt gccaaagttc 6900

atagttgcat atatcggcca agattgagta tcgcggatgg agccgctccc agagtatgcc 6960

tttacagagc cccacctgga tatgggaaaa ccgttgctct tgcgttcgag tggctacgcc 7020

acagaacagc cggacgtcct gcagtgtggc tttctttaag agccagttct tacagtgaat 7080

ttgatatctg cgcagagatt attgagcagc ttgaaacttt cgaaatggta aaattcagcc 7140

gtgtgagaga gggtgtgagc aagcctgcgc tcttgcgaga ccttgcatct agtctttggc 7200

agagcacctc gaataacgag atagaaacgc tagtttgttt ggataatatt aatcatgact 7260

tagacttgcc gttgttgcac gcacttatgg agtttatgtt aaatacacca aaaaatatca 7320

ggtttgcagt tgcaggcaat acaataaaag ggttctcgca gcttaaactt gcaggcgcta 7380

tgcgggagta caccgagaaa gacttggcct ttagcgcaga agaggcggtg gcgttagcgg 7440

aggcagagtc tgttcttgga gttcctgaag aacagataga gaccttggtg caagaagttg 7500

aggggtggcc tgctcttgta gtttttttgt taaagcgtga gttgccggcc aagcatattt 7560

cagcagtagt tgaagtagac aattacttta gggatgaaat atttgaggcg attcccgagc 7620

gctatcgtgt ttttcttgca aattcttcat tgctcgattt cgtgacgcct gatcaataca 7680

attatgtatt caaatgcgtc aatggggtct catgtattaa gtatttaagc actaattaca 7740

tgttgcttcg ccatgtgagc ggtgagccag cgcagtttac actgcatcca gtactgcgta 7800

attttctacg agaaattact tggactgaaa atcctgctaa aagatcctac ctgcttaagc 7860

gtgcagcttt ctggcattgg cgtagaggtg aataccagta tgcaatacga atatccctac 7920

gggcgaatga ctgtcgctgg gcagtcagca tgtctgagag aataatttta gatttgtcat 7980

ttcgtcaggg cgaaatagat gcgctgagac agtggctgtt agagctgccg aagcaggcct 8040

ggcaccaaaa acccatagtg cttattagtt acgcgtgggt attgtatttc agtcagcaag 8100

gcgcgcgagc agagaagtta attaaagacc tatcttcaca atccgataaa aaaaataaat 8160

ggcaagaaaa ggaatggctg cagcttgtgc ttgcaatagg taaagcaacc aaagatgaaa 8220

tgctttcgag tgaggagctc tgtaataagt ggattagttt atttggggat tcaaacgcag 8280

ttggaaaagg ggccgcgcta acctgtttgg cttttatttt tgccagtgag tatagatttg 8340

cagagttgga gaaggtgctg gctcaggccc aagccgtgaa taaatttgca aaacaaaatt 8400

ttgcttttgg ttggctgtat gtcgcgaggt ttcaacaagc cctagcaagc ggaaaaatgg 8460

gctgggcgag gcagattata actcaagcac gcacagacag tcgcgcgcag atgatggaat 8520

ccgagtttac ttcgaaaatg tttgacgctc tagagcttga gttacattat gaattgcgct 8580

gcttggacac ctcagaagaa aagctctcca aaattttaga gttcatttcc aatcacgggg 8640

tgacagacgt gtttttttcc gtatgccgtg ctgtgtcagc ttggcggctt ggaaggagtg 8700

acctaaatgg ctccattgag atattggagt gggcgaaggc gcatgcggtt gaaaaaaatc 8760

taccaagatt ggaagttatg agccaaattg agatctatca gcgcttagtc tgtcaaggca 8820

taacgggcat aaataattta aaaactcttg aagatcataa gattttctcc ggacagcact 8880

cagcccccct aaaagcacgc ctgctgcttg ttcaatcact agtgctttcc cgagatcgga 8940

actttcatag tgccgcgcac agagcgttat tggctattca gcaagcccgt aaaattaacg 9000

cgggccagct ggaagtccgt ggattattgt gtttggccgg agcgcaggca ggtgccggtg 9060

atttaaaaaa ggctcagctt aacattgttt atgcagtgga gatagcaaaa cagcttcaat 9120

gctttcaaac agttcttgat gaagtatgtt taattgagcg aataataccg gcttcatgtg 9180

aagccttcac agcagttaat ttagatcaag cgattggggc ttttagtctt ccgcgaatag 9240

ttgagattgg aaagtccgca gagaataaag ctgacgcttt attgacacgg aagcagattg 9300

ctgtcttgag gcttgtaaaa gaggggtgct caaacaaaca aatagcaaca aatatgcatg 9360

tcaccgaaga tgctataaag tggcacatga ggaaaatatt tgccaccttg aatgtagtga 9420

atcgcacgca agcaacaatt gaagctgagc gtcaaggaat tatctaaaat aatcggcatt 9480

aagtgatata gtgaaaagta tactcgagct catagtccac gacgcccgtg attttgtagc 9540

cctggccgac ggccagcagg taggccgaca ggctcatgcc ggccgccgcc gccttttcct 9600

caatcgctct tcgttcgtct ggaaggcagt acaccttgat aggtgggctg cccttcctgg 9660

ttggcttggt ttcatcagcc atccgcttgc cctcatctgt tacgccggcg gtagccggcc 9720

agcctcgcag agcaggattc ccgttgagca ccgccaggtg cgaataaggg acagtgaaga 9780

aggaacaccc gctcgcgggt gggcctactt cacctatcct gcccggctga cgccgttgga 9840

tacaccaagg aaagtctaca cgaacccttt ggcaaaatcc tgtatatcgt gcgaaaaagg 9900

atggatatac cgaaaaaatc gctataatga ccccgaagca gggttatgca gcggaaaagc 9960

gctgcttccc tgctgttttg tggaatatct accgactgga aacaggcaaa tgcaggaaat 10020

tactgaactg aggggacagg cgagagagga tcaatggcta tctgggggac cgagggctgt 10080

cgctgcgcca aggcacgatt ggagatcccc tatgcggtgt gaaataccgc acagatgcgt 10140

aaggagaaaa taccgcatca ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc 10200

ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac 10260

agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa 10320

ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca 10380

caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc 10440

gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata 10500

cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac gctgtaggta 10560

tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca 10620

gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga 10680

cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg 10740

tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagga cagtatttgg 10800

tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg 10860

caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag 10920

aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa 10980

cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat 11040

ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc 11100

tgacagttac caatcgattg gtcggtcatt tcgaacccca gagtcccgct cagaagaact 11160

cgtcaagaag gcgatagaag gcgatgcgct gcgaatcggg agcggcgata ccgtaaagca 11220

cgaggaagcg gtcagcccat tcgccgccaa gctcttcagc aatatcacgg gtagccaacg 11280

ctatgtcctg atagcggtcc gccacaccca gccggccaca gtcgatgaat ccagaaaagc 11340

ggccattttc caccatgata ttcggcaagc aggcatcgcc atgggtcacg acgagatcct 11400

cgccgtcggg catgcgcgcc ttgagcctgg cgaacagttc ggctggcgcg agcccctgat 11460

gctcttcgtc cagatcatcc tgatcgacaa gaccggcttc catccgagta cgtgctcgct 11520

cgatgcgatg tttcgcttgg tggtcgaatg ggcaggtagc cggatcaagc gtatgcagcc 11580

gccgcattgc atcagccatg atggatactt tctcggcagg agcaaggtga gatgacagga 11640

gatcctgccc cggcacttcg cccaatagca gccagtccct tcccgcttca gtgacaacgt 11700

cgagcacagc tgcgcaagga acgcccgtcg tggccagcca cgatagccgc gctgcctcgt 11760

cctgcagttc attcagggca ccggacaggt cggtcttgac aaaaagaacc gggcgcccct 11820

gcgctgacag ccggaacacg gcggcatcag agcagccgat tgtctgttgt gcccagtcat 11880

agccgaatag cctctccacc caagcggccg gagaacctgc gtgcaatcca tcttgttcaa 11940

tcatgcgaaa cgatcctcat cctgtctctt gatcagatct tgatcccctg cgccatcaga 12000

tccttggcgg caagaaagcc atccagttta ctttgcaggg cttccc 12046

Claims

1.用于氧化式（I）的脂肪酸或其酯的方法

其中R选自H、甲基、乙基、丙基和丁基，

其中n是0-30，优选6-24，

所述方法包括以下步骤：

a）通过在分子氧和NAD(P)H存在的情况下与CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶接触来氧化所述脂肪酸或其酯。

2.权利要求1的方法，其进一步包括以下步骤：

c）通过在胺供体，优选为丙氨酸存在的情况下与氨基转移酶接触将来自步骤b）的进一步氧化的脂肪酸或其酯胺化，

3.权利要求1或2任一项的方法，其中所述CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶具有肽序列LL(I/L)(V/I)GGNDTTRN，并优选为来自泊库岛食烷菌（Alcanivorax borkumensis）SK2的CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶（数据库编号YP_691921）或其变体。

4.权利要求1-3中任一项的方法，其中所述醇脱氢酶是NAD(P)⁺依赖的醇脱氢酶，优选来自大肠杆菌（Escherichia coli）MS 187-1的NAD依赖的醇脱氢酶 (数据库编号ZP_07145023)或其变体，或葡萄糖-甲醇-胆碱-氧化还原酶家族的氧化还原酶，优选来自恶臭假单胞菌（Pseudomonas putida）GB-1 (数据库编号CAB54054.1)的氧化还原酶或其变体，或含黄素的醇脱氢酶，优选来自热带念珠菌（Candida tropicalis）的含黄素的醇脱氢酶(数据库编号AAS46878.1)或其变体。

5.权利要求1-4中任一项的方法，其中，在所述步骤a）中，存在另外的铁氧还蛋白还原酶，优选来自泊库岛食烷菌SK2的铁氧还蛋白还原酶(数据库编号YP_691923)或其变体，和/或铁氧还蛋白，优选来自泊库岛食烷菌SK2的铁氧还蛋白(数据库编号YP_691920)或其变体。

6.权利要求1-5中任一项的方法，其中所述步骤c）在丙氨酸脱氢酶、铵和NADH存在的情况下进行，并且所述丙氨酸脱氢酶是来自枯草芽孢杆菌枯草亚种168株（Bacillus subtilis subsp. subtilis str. 168）的丙氨酸脱氢酶(数据库编号NP_391071)或其变体。

7.权利要求1-6中任一项的方法，其中以全细胞催化剂的形式重组提供至少一种选自以下的酶：CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶、醇脱氢酶、氨基转移酶、丙氨酸脱氢酶、铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶。

8.权利要求7的方法，其中以一种或多于一种的全细胞催化剂的形式重组提供在所述步骤a）、b）或c）的至少一个中存在的或与所述脂肪酸或其酯、来自步骤b）的进一步氧化的脂肪酸或其酯或者来自步骤c）的胺化的进一步氧化的脂肪酸或其酯接触的选自CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶、醇脱氢酶、氨基转移酶、丙氨酸脱氢酶、铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶的所有酶。

9.权利要求7-8中任一项的方法，其中所述全细胞催化剂另外表达AlkL家族的多肽，优选选自以下的AlkL：来自恶臭假单胞菌的AlkL（数据库编号CAB69081）、来自水油海杆菌（Marinobacter aquaeolei） VT8的AlkL (数据库编号YP_957722)、来自亚历山大海洋柄菌（Oceanicaulis alexandrii） HTCC2633的AlkL (数据库编号ZP_00953584)、来自Marinobacter manganoxydans MnI7-9的AlkL (数据库编号ZP_09158756)、来自柄杆菌属种（Caulobacter sp.） K31的AlkL (数据库编号YP_001672217)、来自食油假单胞菌（Pseudomonas oleovorans）的AlkL(数据库编号Q00595)或其变体。

10.权利要求7-9中任一项的方法，其中所述全细胞催化剂是这样的细胞，其具有相比于其野生型至少一种催化脂肪酸的β-氧化反应之一的酶降低的活性，其中所述酶优选选自脂肪酸输入蛋白、脂肪酸-CoA连接酶、酰基-CoA脱氢酶、2,4-二烯酰基-CoA还原酶、烯酰基-CoA水合酶和3-酮酰基-CoA硫解酶。

11.权利要求6-10中任一项的方法，其中选择步骤c）中的所述丙氨酸脱氢酶使得它还原在步骤b）中由所述醇脱氢酶氧化的氧化还原辅因子，优选NAD⁺或NADP⁺。

12.全细胞催化剂，其表达重组的CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶、重组的醇脱氢酶、重组的氨基转移酶和任选一种或多于一种选自以下的重组酶：丙氨酸脱氢酶、铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶。

13.权利要求12的全细胞催化剂，其中所述全细胞催化剂另外表达AlkL家族的多肽，优选选自以下的AlkL：来自恶臭假单胞菌的AlkL（数据库编号CAB69081）、来自水油海杆菌（Marinobacter aquaeolei） VT8的AlkL (数据库编号YP_957722)、来自亚历山大海洋柄菌（Oceanicaulis alexandrii） HTCC2633的AlkL (数据库编号ZP_00953584)、来自Marinobacter manganoxydans MnI7-9的AlkL (数据库编号ZP_09158756)、来自柄杆菌属种（Caulobacter sp.） K31的AlkL (数据库编号YP_001672217)、来自食油假单胞菌（Pseudomonas oleovorans）的AlkL(数据库编号Q00595)或其变体。

14.权利要求12-13中任一项的全细胞催化剂，其中所述全细胞催化剂是这样的细胞，其具有相比于其野生型至少一种催化脂肪酸的β-氧化反应之一的酶降低的活性，其中所述酶优选选自脂肪酸输入蛋白、脂肪酸-CoA连接酶、酰基-CoA脱氢酶、2,4-二烯酰基-CoA还原酶、烯酰基-CoA水合酶和3-酮酰基-CoA硫解酶。

15.权利要求12-14中任一项的全细胞催化剂，其中所述全细胞催化剂表达铁氧还蛋白还原酶和铁氧还蛋白。

16.权利要求12-15中任一项的全细胞催化剂，其中所述全细胞催化剂表达丙氨酸脱氢酶，并且其中所述丙氨酸脱氢酶来自枯草芽孢杆菌枯草亚种168株（Bacillus subtilis subsp. subtilis str. 168）(数据库编号NP_391071)或是其变体。

17.权利要求12-16中任一项的全细胞催化剂，其中所述CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶具有肽序列LL(I/L)(V/I)GGNDTTRN和/或它是来自泊库岛食烷菌SK2的CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶(数据库编号YP_691921)或其变体，并且所述铁氧还蛋白还原酶是来自泊库岛食烷菌SK2的铁氧还蛋白还原酶(数据库编号YP_691923)或其变体，并且所述铁氧还蛋白是来自泊库岛食烷菌SK2的铁氧还蛋白(数据库编号YP_691920)或其变体。

18.权利要求1-17中任一项的全细胞催化剂或方法，其中所述醇脱氢酶是NAD(P)⁺依赖的醇脱氢酶、葡萄糖-甲醇-胆碱-氧化还原酶家族的氧化还原酶或者含黄素的醇氧化酶，优选NAD(P)⁺依赖的醇脱氢酶，最优选来自大肠杆菌MS 187-1的NAD依赖的醇脱氢酶(数据库编号ZP_07145023)或其变体。

19.权利要求1-18中任一项的全细胞催化剂或方法，其中所述氨基转移酶是来自恶臭假单胞菌GB-1的氨基转移酶(数据库编号YP_001668026.1)或其变体。

20.权利要求1-19中任一项的全细胞催化剂或方法，其中所述脂肪酸是不饱和的或支化的脂肪酸。

21.权利要求1-20中任一项的全细胞催化剂或方法，其中以全细胞催化剂的形式重组提供选自CYP153家族的细胞色素P450单加氧酶、醇脱氢酶、氨基转移酶、丙氨酸脱氢酶、铁氧还蛋白和铁氧还蛋白还原酶的至少一种酶，或者所述目的通过全细胞催化剂实现，其中所述全细胞催化剂是相对于细胞的野生型具有至少一种内源醛脱氢酶降低的活性的细胞。

22.权利要求12-21中任一项的全细胞催化剂用于氧化和/或胺化脂肪酸或其酯的用途，其中所述脂肪酸或其酯优选具有式（I）

其中R选自H、甲基、乙基、丙基和丁基，

其中n是0-30，优选6-24。

23.权利要求22的全细胞催化剂的用途，其中所述氧化产生氧化产物的混合物，基于反应的脂肪酸或其酯的物质的量，所述混合物包含至少90％的对应的醇、少于1％的对应的醛和少于10％的对应的酸。

24.权利要求22-23中任一项的全细胞催化剂的用途，其中所述脂肪酸是不饱和的或支化的脂肪酸。