CN104145820A - 一种红芽芋的组培快繁方法 - Google Patents

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江芹
廖华俊
董玲
宁志怨
李卫文
许晓婷
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Abstract

本发明涉及一种红芽芋组培快繁的方法，是将红芽芋球茎顶端的芽和侧芽经过处理后剥取茎尖，从茎尖上切取生长点，接种于无菌培养基上，诱导产生愈伤、不定芽和不定根，进而在较短时间内大量形成红芽芋组培种苗。本发明提供的红芽芋组培快繁方法，通过茎尖进行组织培养可以对红芽芋种苗进行脱毒和品种提纯复壮，加速种苗繁育进程，克服了红芽芋传统繁殖系数过低和工厂化快繁成本过高而无法与市场接轨的缺点；组培快繁繁殖系数高，繁殖量大，初代污染率低于10％，平均诱导率高于90％，集中成苗周期大大缩短。

Description

一种红芽芋的组培快繁方法
技术领域
本发明涉及植物脱毒快繁领域，尤其是一种利用植物组织离体培养技术、人工快速繁殖红芽芋种苗的红芽芋组培快繁的方法。
背景技术
红芽芋是芋属天南星科多年生草本植物，以地下球茎子芋为主要收获物的蔬菜，其食用部分球茎富含淀粉、粗纤维、粗脂肪、蛋白质、VC、钙、磷、铁，是芋中珍品，可作蔬菜或主食，具有无公害、产量高、商品价值高、耐贮运等优点。随着种植业结构调整和人们对无公害蔬菜及品种多样化的需求，红芽芋的身价也相对提高，特别是优质、反季节的芋头上市后倍受青睐，一直是国内外市场上紧俏的抢手货。目前，随着生产不断发展，植株无性繁殖积累病毒逐渐增多，红芽芋品种普遍出现早衰现象，病害严重，产量和品质下降。因而，利用组织培养脱毒试管苗快速繁殖已成为红芽芋生产急需解决的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种红芽芋组培快繁的方法，通过茎尖分生组织进行组织培养，加速种苗繁育进程。
为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种红芽芋的组培快繁方法，该方法包括以下步骤：
1)切取健壮红芽芋球茎顶芽或侧芽约0.5cm左右大小，浸泡在饱和洗衣粉溶液10min，流水冲洗25-30min，在无菌条件下置于75％的酒精溶液中浸泡10s，再用0.1％升汞溶液浸泡10-12min，无菌水浸洗3～4次；
2)在体式解剖镜下将顶芽或侧芽的茎尖仔细剥离，并切取0.2～0.4mm的生长点，接种于无菌培养基上，培养温度为24～26℃，光照强度1500～2000lx/12h·d，培养基配制时先用0.1mol/L氢氧化钠或0.1mol/L盐酸将pH值调整为5.8-6.0，然后进行高温高压灭菌；
3)初代培养，初代培养的基本培养基为MS，附加1.5mg/L的6-BA和0.05mg/L的NAA，培养45天；
4)继代与增值培养，将初代培养的不定芽或丛生小植株，分切成带有2-3个芽的丛生芽块，接入增殖培养基中培养30天，增殖培养基的基本培养基为MS，附加浓度为2.0mg/L的6-BA和浓度为0.03-0.05mg/L的NAA；
5)壮苗与生根培养，将生长健壮具有2-3片叶的试管苗，转接在生根培养基中，一周后红芽芋试管苗开始生根，再继续培养15天，红芽芋试管苗开始长出大量的白色根系，同时长成茁壮的小植株，生根培养基的基本培养基为1/2MS，附加浓度为0.1-0.3mg/L的IBA和浓度为15g/L的蔗糖。
上述MS培养基的成分为(mg/L)：
大量元素：NH4NO31650、KNO31900、CaCl2·2H2O440、MgSO4·7H2O370、KH2PO4170；
微量元素：KI0.83、H3BO36.3、MnSO4·4H2O22.3、ZnSO4·7H2O8.6、Na2MoO4·2H2O0.25、CuSO4·5H2O0.025、CoCl2·6H2O0.025；
铁盐：FeSO4·7H2O27.8、Na2-EDTA·2H2O37.3；
有机物质：肌醇100、烟酸0.5、盐酸吡哆醇(维生素B6)0.5、盐酸硫胺素(维生素B1)0.1、甘氨酸2.0；
配制1/2MS时，将配制好的MS母液，量取其中1/2的大量元素，其他营养元素不变，即得到1/2MS母液。
本发明的有益效果：通过茎尖进行组织培养可以对红芽芋种苗进行脱毒和品种提纯复壮，加速种苗繁育进程，克服了红芽芋传统繁殖系数过低和工厂化快繁成本过高而无法与市场接轨的缺点；组培快繁繁殖系数高，繁殖量大，初代污染率低于10％，平均诱导率高于90％，集中成苗周期大大缩短。
具体实施方式
以下对本发明的步骤和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
一种红芽芋的组培快繁方法，该方法包括以下步骤：
1)切取健壮红芽芋球茎顶芽或侧芽约0.5cm左右大小，浸泡在饱和洗衣粉溶液10min，流水冲洗25min，在无菌条件下置于75％的酒精溶液中浸泡10s，再用0.1％升汞溶液浸泡10min，无菌水浸洗3次；
2)在体式解剖镜下将顶芽或侧芽的茎尖仔细剥离，并切取0.2mm的生长点，接种于无菌培养基上，培养温度为24℃，光照强度1600lx/12h·d，培养基配制时先用0.1mol/L氢氧化钠或0.1mol/L盐酸将pH值调整为5.8，然后进行高温高压灭菌；
3)初代培养，初代培养的基本培养基为MS，附加1.5mg/L的6-BA和0.05mg/L的NAA，培养45天；
4)继代与增值培养，将初代培养的不定芽或丛生小植株，分切成带有2-3个芽的丛生芽块，接入增殖培养基中培养30天，增殖培养基的基本培养基为MS，附加浓度为2.0mg/L的6-BA和浓度为0.03mg/L的NAA；
5)壮苗与生根培养，将生长健壮具有2-3片叶的试管苗，转接在生根培养基中，一周后红芽芋试管苗开始生根，再继续培养15天，红芽芋试管苗开始长出大量的白色根系，同时长成茁壮的小植株，生根培养基的基本培养基为1/2MS，附加浓度为0.1mg/L的IBA和浓度为15g/L的蔗糖。
上述MS培养基的成分为(mg/L)：
大量元素：NH4NO31650、KNO31900、CaCl2·2H2O440、MgSO4·7H2O370、KH2PO4170；
微量元素：KI0.83、H3BO36.3、MnSO4·4H2O22.3、ZnSO4·7H2O8.6、Na2MoO4·2H2O0.25、CuSO4·5H2O0.025、CoCl2·6H2O0.025；
铁盐：FeSO4·7H2O27.8、Na2-EDTA·2H2O37.3；
有机物质：肌醇100、烟酸0.5、盐酸吡哆醇(维生素B6)0.5、盐酸硫胺素(维生素B1)0.1、甘氨酸2.0；
配制1/2MS时，将配制好的MS母液，量取其中1/2的大量元素，其他营养元素不变，即得到1/2MS母液。
实施例2
一种红芽芋的组培快繁方法，该方法包括以下步骤：
1)切取健壮红芽芋球茎顶芽或侧芽约0.5cm左右大小，浸泡在饱和洗衣粉溶液10min，流水冲洗30min，在无菌条件下置于75％的酒精溶液中浸泡10s，再用0.1％升汞溶液浸泡12min，无菌水浸洗4次；
2)在体式解剖镜下将顶芽或侧芽的茎尖仔细剥离，并切取0.4mm的生长点，接种于无菌培养基上，培养温度为26℃，光照强度1900lx/12h·d，培养基配制时先用0.1mol/L氢氧化钠或0.1mol/L盐酸将pH值调整为6.0，然后进行高温高压灭菌；
3)初代培养，初代培养的基本培养基为MS，附加1.5mg/L的6-BA和0.05mg/L的NAA，培养45天；
4)继代与增值培养，将初代培养的不定芽或丛生小植株，分切成带有2-3个芽的丛生芽块，接入增殖培养基中培养30天，增殖培养基的基本培养基为MS，附加浓度为2.0mg/L的6-BA和浓度为0.05mg/L的NAA；
5)壮苗与生根培养，将生长健壮具有2-3片叶的试管苗，转接在生根培养基中，一周后红芽芋试管苗开始生根，再继续培养15天，红芽芋试管苗开始长出大量的白色根系，同时长成茁壮的小植株，生根培养基的基本培养基为1/2MS，附加浓度为0.3mg/L的IBA和浓度为15g/L的蔗糖。
上述MS培养基的成分为(mg/L)：
大量元素：NH4NO31650、KNO31900、CaCl2·2H2O440、MgSO4·7H2O370、KH2PO4170；
微量元素：KI0.83、H3BO36.3、MnSO4·4H2O22.3、ZnSO4·7H2O8.6、Na2MoO4·2H2O0.25、CuSO4·5H2O0.025、CoCl2·6H2O0.025；
铁盐：FeSO4·7H2O27.8、Na2-EDTA·2H2O37.3；
有机物质：肌醇100、烟酸0.5、盐酸吡哆醇(维生素B6)0.5、盐酸硫胺素(维生素B1)0.1、甘氨酸2.0；
配制1/2MS时，将配制好的MS母液，量取其中1/2的大量元素，其他营养元素不变，即得到1/2MS母液。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种红芽芋的组培快繁方法，其特征在于该方法包括以下步骤：
1)切取健壮红芽芋球茎顶芽或侧芽约0.5cm左右大小，浸泡在饱和洗衣粉溶液10min，流水冲洗25-30min，在无菌条件下置于75％的酒精溶液中浸泡10s，再用0.1％升汞溶液浸泡10-12min，无菌水浸洗3～4次；
2)在体式解剖镜下将顶芽或侧芽的茎尖仔细剥离，并切取0.2～0.4mm的生长点，接种于无菌培养基上，培养温度为24～26℃，光照强度1500～2000lx/12h·d，培养基配制时先用0.1mol/L氢氧化钠或0.1mol/L盐酸将pH值调整为5.8-6.0，然后进行高温高压灭菌；
3)初代培养，初代培养的基本培养基为MS，附加1.5mg/L的6-BA和0.05mg/L的NAA，培养45天；
4)继代与增值培养，将初代培养的不定芽或丛生小植株，分切成带有2-3个芽的丛生芽块，接入增殖培养基中培养30天，增殖培养基的基本培养基为MS，附加浓度为2.0mg/L的6-BA和浓度为0.03-0.05mg/L的NAA；
5)壮苗与生根培养，将生长健壮具有2-3片叶的试管苗，转接在生根培养基中，一周后红芽芋试管苗开始生根，再继续培养15天，红芽芋试管苗开始长出大量的白色根系，同时长成茁壮的小植株，生根培养基的基本培养基为1/2MS，附加浓度为0.1-0.3mg/L的IBA和浓度为15g/L的蔗糖。
2.根据权利要求1所述的一种红芽芋的组培快繁方法，其特征在于：所述MS培养基的成分为(mg/L)：
大量元素：NH4NO31650、KNO31900、CaCl2·2H2O440、MgSO4·7H2O370、KH2PO4170；
微量元素：KI0.83、H3BO36.3、MnSO4·4H2O22.3、ZnSO4·7H2O8.6、Na2MoO4·2H2O0.25、CuSO4·5H2O0.025、CoCl2·6H2O0.025；
铁盐：FeSO4·7H2O27.8、Na2-EDTA·2H2O37.3；
有机物质：肌醇100、烟酸0.5、盐酸吡哆醇(维生素B6)0.5、盐酸硫胺素(维生素B1)0.1、甘氨酸2.0；
配制1/2MS时，将配制好的MS母液，量取其中1/2的大量元素，其他营养元素不变，即得到1/2MS母液。
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