CN104130855A - 一种南蛇藤果实或/和反枝苋种子的综合循环应用方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种南蛇藤果实或/和反枝苋种子的综合循环应用方法。(1)将成熟干燥的南蛇藤果实或/和反枝苋种子粉碎后用石油醚提取分离得油脂，将所得油脂用活性炭脱色后，加入甲醇和碱性催化剂后进行酯交换反应后得生物柴油和甘油。(2)将提取油脂后的南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣采取水提醇沉工艺制得具有养胃安神作用的口服液。(3)向已经过前两步处理的南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣中加入菌种，搅拌均匀后进行发酵处理后得有机肥料，可以作为种植南蛇藤、反枝苋及其它植物的有机肥料。充分解决南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣造成的环境污染和垃圾处理难题。通过以上三步方法的处理，形成南蛇藤果实或/和反枝苋种子综合循环应用体系，为南蛇藤果实或/和反枝苋种子综合利用提供了依据。

Description

一种南蛇藤果实或/和反枝苋种子的综合循环应用方法

技术领域

本发明涉及南蛇藤果实或/和反枝苋种子的综合循环应用方法，属于生物医药工程领域。

背景技术

由于全球石化能源短缺、环境污染加剧、原油价格一再上涨，生物柴油作为可再生能源受到人们的广泛关注。Knothe等研究表明，相比石化燃料，生物柴油燃用时产生的CO减少65％，CO₂减少8％，SO₂减少90％，未燃烧的碳氢化合物减少50％。目前生物柴油的生产原料主要是地沟油、菜籽油、小桐梓油和棉籽油等。菜籽油、大豆油、花生油、棉花籽油等是我国的主要食用油，每年尚且需从国外大量进口大豆作为食用油原料，国家不允许将菜籽油、棉籽油等大规模用于炼制生物柴油。原料不足是目前制约我国生物柴油发展的主要问题之一。因此，研究和开发新的植物油脂作为生物柴油的原料是我国国情的迫切需要。

南蛇藤(Celastrus Orbiculatus)为卫矛科南蛇藤属，落叶攀援灌木。分布于我国东北、华北、西北、华东、华中、华南、西南，俄罗斯、朝鲜、日本也有分布。一般多野生于地沟谷及株缘灌木丛中。垂直分布可达海拔1500m。性喜阳耐阴，分布广，抗寒耐旱，对土壤要求不严。栽植于背风向阳、湿润而排水好的肥沃沙质壤土中生长最好，若栽于半阴处，也能生长。卫矛科(平均含油为44％)是中国少有的木本富油科(指该科果实、果仁、种子或种仁，其含油量一般在20％以上，并在该科中占有较多的属或较多的种)之一，南蛇藤属又是卫矛科中含油主要属。南蛇藤，种子含油45％～52％，是适合中国发展的潜在的燃料油植物物种之一。

反枝苋(Amaranthus Retroflexus L)为苋科苋属植物，别名苋菜、野苋菜。多生长于农田、路边或荒地。在我国主要分布于黑龙江，吉林，辽宁，内蒙古，河北，北京，山东，山西，河南，陕西，甘肃，宁夏，青海，新疆，湖北，湖南，安徽，江苏，浙江，江西，上海，四川，重庆，西藏(芒康)。反枝苋适应性极强，到处都能生长，不耐荫。其成熟种子近球形，为黑色或棕色，秋季采收。种子富含油脂10％～20％，可作为制备生物柴油的原料。利用我国闲置的荒山荒地大面积种植南蛇藤和反枝苋，可以充分解决我国生物柴油原料供应不足的问题。

由于现代生活节奏的加快，人们饮食无规律，精神压力大，工作学习压力大，环境因素的影响，使得胃病发病率越来越高，每一个人的一生中都会不同程度的发生急性或慢性胃炎。数据显示我国约有30％的人患有各种胃炎，目前全国胃病患者约有4亿人，其中病情严重者约占40％左右。”《素问·调逆论》曰“胃不和则卧不安”，胃的功能失调，引起心神不安，导致失眠，已为中医医家所公认。现代医学的研究表明，胃肠存在着一些内分泌细胞，其功能类似大脑内的内分泌功能，其分泌的物质，具有类似大脑内分泌物，调节胃肠神经，乃至全身神经系统的功能，有学者称“胃肠是人的第二大脑”。慢性胃疾病的腹胀和疼痛等长期慢性刺激，必然刺激和影响其胃的内分泌细胞的分泌功能，从而引起人体神经系统的调节失常，引起失眠。《中华本草》南蛇藤果实具有养心安神和活血止痛作用，主治心悸失眠、健忘多梦、牙痛、筋骨痛、腰腿麻木和跌打伤痛。经申请者研究首次发现反枝苋成熟黑色种子中有修复受损胃粘膜的活性因子。经申请者设计将南蛇藤果实或/和反枝苋种子以一定比例复配，脱除油脂后经水提取制成口服液，具有良好的养胃安神作用，可以实现标本兼治的功效，能很好解决目前由于快的生活节奏、不规律饮食、工作学习压力大、精神压力大及环境因素引起急慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃十二指肠复合溃疡等所导致的失眠问题。可以将其开发为医疗保健作用的饮品，一但开发成功将具有广阔的市场前景。

经过提油和制备口服液后产生大量的南蛇藤果实或/和反枝苋种子药渣中含有一定量的活性成分和大量的粗纤维、粗脂肪、淀粉、粗多糖、氨基酸等营养成分，若堆积、焚烧或填埋都会对环境造成一定的影响，处理成本高，处理后会排放废气和占用土地，而且也会造成药渣资源浪费和环境的二次污染。如何高效利用中药渣这一宝贵物质资源，消除中药制药企业产生废物对环境的污染是当前急需解决的问题。将南蛇藤果实或/和反枝苋种子药渣进行生物发酵处理制取可以作为种植南蛇藤、反枝苋及其它植物的有机肥料。在保护环境的同时也能为企业带来良好的经济效益。

发明内容

本发明的目的是提供一种南蛇藤果实或/和反枝苋种子的综合循环应用方法，具体为：

1、将成熟干燥的南蛇藤果实或/和反枝苋种子粉碎后用石油醚提取分离得油脂，将所得油脂用活性炭脱色后，加入甲醇和碱性催化剂后进行酯交换反应后得生物柴油和甘油。

2、将提取油脂后的南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣采取水提醇沉工艺制得具有养胃安神作用的口服液。

3、向已经过前两步处理的南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣中加入菌种，搅拌均匀后进行发酵处理后得有机肥料，可以作为种植南蛇藤、反枝苋及其它植物的有机肥料。

实现本发明目的技术方案是：

本发明提供一种南蛇藤果实或/和反枝苋种子的综合循环应用方法，所述方法为：

(1)先将成熟干燥的南蛇藤果实或/和反枝苋种子中的油脂提取分离、脱色后制得提取物1，所述提取物1作为制备生物柴油的原料；

(2)再对提取油脂后的南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣采取水提醇沉工艺制得提取物2，所述提取物2作为养胃安神的口服液；

(3)最后将已经过前两步处理的南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣进行生物发酵处理后制得有机肥料，所述有机肥料作为种植南蛇藤或/和反枝苋或其它植物生长的有机肥料，最终形成南蛇藤果实或/和反枝苋种子的综合循环应用体系。

其中，步骤(1)中南蛇藤果实或/和反枝苋种子中油脂提取分离方法如下：

①干燥

将采集的新鲜成熟南蛇藤果实和反枝苋种子分别置于40℃～80℃条件下干燥，控制含水量≤5％。

②粉碎

将经干燥处理后的南蛇藤果实和反枝苋种子(质量比为1/10～10/1)混合物粉碎至10目～60目。

③溶剂提取

选择正己烷、石油醚(沸程30℃～60℃)、石油醚(沸程60℃～90℃)、乙酸乙酯、丙酮或二氯乙烷中的至少一种加入到南蛇藤果实和反枝苋种子颗粒[溶剂体积比混合颗粒质量(mL/g)为5/1～20/1]于回流提取罐中进行加热回流提取1到3次，每次1到3h，过滤后合并提取液，减压回收有机溶剂后得粗油脂。

④活性炭脱色

向粗油脂中加入活性炭(活性炭质量为粗油脂的5％～20％)于50℃水浴(温度为30℃～90℃)条件下搅拌30分钟至2小时，滤除活性炭得南蛇藤果实或/和反枝苋种子的脱色油脂，制得提取物1。

本发明中的提取物1在制备生物柴油原料中的应用，具体应用如下：

将从南蛇藤果实或/和反枝苋种子中制取的混合油脂即提取物1制成生物柴油和副产品甘油，依次包括如下过程：

①萃取脱羧

向南蛇藤果实和反枝苋种子中制取的混合油脂中加入一定体积甲醇(二者体积比为1/5～1/2)，30℃～60℃条件下搅拌10min～60min，静止分层，除去上层甲醇-游离脂肪酸层，蒸馏上层溶液回收甲醇。重复三次，分离得到的下层为脱羧的南蛇藤果实和反枝苋种子混合油脂。

②脱水干燥

脱羧的南蛇藤果实和反枝苋种子混合油脂进入真空干燥器干燥，去除水分等杂质，干燥器内真空度50mmHg～100mmHg，温度90℃～110℃，干燥脱水后的混合油脂冷却到30℃～40℃，得到脱水后的南蛇藤果实和反枝苋种子混合油脂。

③酯化反应

经脱羧和脱水的南蛇藤果实和反枝苋种子混合油脂进入酯交换反应器，加入摩尔数为油脂3～20倍的低碳醇和重量为油重的0.1％～5％的催化剂，在30℃～70℃和搅拌回流下进行酯化反应0.2h～2h，反应结束后室温条件下静置分层，上层为粗生物柴油，下层为粗甘油。

④蒸发分离精制

将上层粗生物柴油通过蒸馏塔除去低碳醇，然后用30℃～50℃的水洗涤至澄清，再将上层液体真空蒸馏脱水得成品生物柴油；将下层粗甘油通过蒸馏塔除去低碳醇，过滤后真空蒸馏脱水得副产品甘油。蒸发的低碳醇回收循环使用。

其中，步骤③中所述低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇或丁醇，所述催化剂为NaOH、KOH、H₂SO₄、H₃PO₄、HCl和甲醇钠。

本发明步骤(2)中对提取油脂后的南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣采取水提醇沉工艺制得提取物2，方法如下：

①提取浓缩

将提取油脂后的南蛇藤果实和反枝苋种子残渣置于提取罐中，然后向罐中加入水[水体积比残渣质量(mL/g)为5/1～20/1]煎煮1～3次，每次1h～3h。每次煎煮完毕过滤，得滤液，将几次滤液合并后置于真空浓缩罐中浓缩至密度为1.10g/mL～1.20g/mL的浓缩液。

②醇沉浓缩

向贮有密度为1.05g/mL～1.15g/mL浓缩液的真空浓缩罐中加入1～5倍浓缩液体积的乙醇搅拌均匀后静置10h～48h，析出沉淀。滤除沉淀后将滤液置于真空浓缩罐中浓缩至密度为1.30g/mL～1.40g/mL的流浸膏。

③配制口服液

向所制得流浸膏中加入水[水体积比流浸膏体积(mL/mL)为10/1～100/1]和适量的苯甲酸、尼泊金搅拌溶解后过滤得提取物2。

一种养胃安神口服液，由治疗有效量的上述提取物2制成。

本发明步骤(3)中将已经经过提取油脂和制备养胃安神口服液处理的南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣进行生物发酵处理后得有机肥料，方法如下：

将经水提取后的南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣置于发酵罐中，再加入适量的水和发酵菌，于30℃～40℃调件下发酵10～30天后，烘干粉碎成细粉，制备得到的有机肥料，所述有机肥料作为种植南蛇藤和反枝苋或其它植物生长的有机肥料。

本发明与现有技术相比其显著优点是：将南蛇藤果实或/和反枝苋种子中富含的油脂提取分离出来，可以充分解决我国生物柴油原料供应不足的问题；南蛇藤果实或/和反枝苋种子以一定比例复配，脱除油脂后经水提取制成口服液，能很好解决目前由于快的生活节奏、不规律饮食、工作学习压力大、精神压力大及环境因素引起急慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃十二指肠复合溃疡等所导致的失眠问题；将南蛇藤果实或/和反枝苋种子药渣进行生物发酵处理制成有机肥料，即可以避免环境污染又能给企业带来良好的经济效益。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。

实施例1

将采集的新鲜成熟南蛇藤果实和反枝苋种子分别置于40℃～80℃条件下干燥，控制含水量≤5％。将经干燥处理后的南蛇藤果实和反枝苋种子(质量比为1/10～10/1)混合物粉碎至10目～60目。选择正己烷、石油醚(沸程30℃～60℃)、石油醚(沸程60℃～90℃)、乙酸乙酯、丙酮或二氯乙烷中的至少一种加入到南蛇藤果实和反枝苋种子颗粒[溶剂体积比混合颗粒质量(mL/g)为5/1～20/1]于回流提取罐中进行加热回流提取1到3次，每次1到3h，过滤后合并提取液，减压回收有机溶剂后得粗油脂。向粗油脂中加入活性炭(活性炭质量为粗油脂的5％～20％)于50℃水浴(温度为30℃～90℃)条件下搅拌30分钟至2小时，滤除活性炭得南蛇藤果实和反枝苋种子的脱色混合油脂。向南蛇藤果实和反枝苋种子中制取的二者混合油脂中加入一定体积甲醇(二者体积比为1/5～1/2)，30℃～60℃条件下搅拌10min～60min，静止分层，除去上层甲醇-游离脂肪酸层，蒸馏上层溶液回收甲醇。重复三次，分离得到的下层为脱羧的南蛇藤果实和反枝苋种子二者混合油脂。脱羧的南蛇藤果实和反枝苋种子二者混合油脂进入真空干燥器干燥，去除水分等杂质，干燥器内真空度50mmHg～100mmHg，温度90℃～110℃，干燥脱水后的二者混合油脂冷却到30℃～40℃，得到脱水后的南蛇藤果实和反枝苋种子二者混合油脂。经脱羧和脱水的南蛇藤果实和反枝苋种子二者混合油脂进入酯交换反应器，加入摩尔数为油脂3～20倍的低碳醇和重量为油重的0.1％～5％的催化剂，在30℃～70℃和搅拌回流下进行酯化反应0.2h～2h，反应结束后室温条件下静置分层，上层为粗生物柴油，下层为粗甘油。将上层粗生物柴油通过蒸馏塔除去低碳醇，然后用30℃～50℃的水洗涤至澄清，再将上层液体真空蒸馏脱水得成品生物柴油；将下层粗甘油通过蒸馏塔除去低碳醇，过滤后真空蒸馏脱水得副产品甘油。蒸发的低碳醇回收循环使用。所述低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇或丁醇，所述催化剂为NaOH、KOH、H₂SO₄、H₃PO₄、HCl和甲醇钠。将提取油脂后的南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣置于提取罐中，然后向罐中加入水[水体积比残渣质量(mL/g)为5/1～20/1]煎煮1～3次，每次1h～3h。每次煎煮完毕过滤，得滤液，将几次滤液合并后置于真空浓缩罐中浓缩至密度为1.10g/mL～1.20g/mL的浓缩液。向贮有密度为1.05g/mL～1.15g/mL浓缩液的真空浓缩罐中加入1～5倍浓缩液体积的乙醇搅拌均匀后静置10h～48h，析出沉淀。滤除沉淀后将滤液置于真空浓缩罐中浓缩至密度为1.30g/mL～1.40g/mL的流浸膏。向所制得流浸膏中加入水[水体积比流浸膏体积(mL/mL)为10/1～100/1]和适量的苯甲酸、尼泊金搅拌溶解后过滤得澄清的养胃安神口服液。将经水提取后的南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣置于发酵罐中，再加入适量的水和发酵菌，于30℃～40℃调件下发酵10～30天后，烘干粉碎成细粉，装袋即可。

实施例2

将采集的新鲜成熟南蛇藤果实置于40℃～80℃条件下干燥，控制含水量≤5％。将经干燥处理后的南蛇藤果实粉碎至10目～60目。选择正己烷、石油醚(沸程30℃～60℃)、石油醚(沸程60℃～90℃)、乙酸乙酯、丙酮或二氯乙烷中的至少一种加入到南蛇藤果实颗粒[溶剂体积比混合颗粒质量(mL/g)为5/1～20/1]于回流提取罐中进行加热回流提取1到3次，每次1到3h，过滤后合并提取液，减压回收有机溶剂后得粗油脂。向粗油脂中加入活性炭(活性炭质量为粗油脂的5％～20％)于50℃水浴(温度为30℃～90℃)条件下搅拌30分钟至2小时，滤除活性炭得南蛇藤果实的脱色油脂。向南蛇藤果实中制取油脂中加入一定体积甲醇(二者体积比为1/5～1/2)，30℃～60℃条件下搅拌10min～60min，静止分层，除去上层甲醇-游离脂肪酸层，蒸馏上层溶液回收甲醇。重复三次，分离得到的下层为脱羧的南蛇藤果实油脂。脱羧的南蛇藤果实油脂进入真空干燥器干燥，去除水分等杂质，干燥器内真空度50mmHg～100mmHg，温度90℃～110℃，干燥脱水后的油脂冷却到30℃～40℃，得到脱水后的南蛇藤果实油脂。经脱羧和脱水的南蛇藤果实油脂进入酯交换反应器，加入摩尔数为油脂3～20倍的低碳醇和重量为油重的0.1％～5％的催化剂，在30℃～70℃和搅拌回流下进行酯化反应0.2h～2h，反应结束后室温条件下静置分层，上层为粗生物柴油，下层为粗甘油。将上层粗生物柴油通过蒸馏塔除去低碳醇，然后用30℃～50℃的水洗涤至澄清，再将上层液体真空蒸馏脱水得成品生物柴油；将下层粗甘油通过蒸馏塔除去低碳醇，过滤后真空蒸馏脱水得副产品甘油。蒸发的低碳醇回收循环使用。所述低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇或丁醇，所述催化剂为NaOH、KOH、H₂SO₄、H₃PO₄、HCl和甲醇钠。

实施例3

将采集的新鲜成熟反枝苋种子置于40℃～80℃条件下干燥，控制含水量≤5％。将经干燥处理后的反枝苋种子粉碎至10目～60目。选择正己烷、石油醚(沸程30℃～60℃)、石油醚(沸程60℃～90℃)、乙酸乙酯、丙酮或二氯乙烷中的至少一种加入到反枝苋种子颗粒[溶剂体积比混合颗粒质量(mL/g)为5/1～20/1]于回流提取罐中进行加热回流提取1到3次，每次1到3h，过滤后合并提取液，减压回收有机溶剂后得粗油脂。向粗油脂中加入活性炭(活性炭质量为粗油脂的5％～20％)于50℃水浴(温度为30℃～90℃)条件下搅拌30分钟至2小时，滤除活性炭得反枝苋种子的脱色油脂。向反枝苋种子中制取油脂中加入一定体积甲醇(二者体积比为1/5～1/2)，30℃～60℃条件下搅拌10min～60min，静止分层，除去上层甲醇-游离脂肪酸层，蒸馏上层溶液回收甲醇。重复三次，分离得到的下层为脱羧的反枝苋种子油脂。脱羧的反枝苋种子油脂进入真空干燥器干燥，去除水分等杂质，干燥器内真空度50mmHg～100mmHg，温度90℃～110℃，干燥脱水后的油脂冷却到30℃～40℃，得到脱水后的反枝苋种子油脂。经脱羧和脱水的反枝苋种子油脂进入酯交换反应器，加入摩尔数为油脂3～20倍的低碳醇和重量为油重的0.1％～5％的催化剂，在30℃～70℃和搅拌回流下进行酯化反应0.2h～2h，反应结束后室温条件下静置分层，上层为粗生物柴油，下层为粗甘油。将上层粗生物柴油通过蒸馏塔除去低碳醇，然后用30℃～50℃的水洗涤至澄清，再将上层液体真空蒸馏脱水得成品生物柴油；将下层粗甘油通过蒸馏塔除去低碳醇，过滤后真空蒸馏脱水得副产品甘油。蒸发的低碳醇回收循环使用。所述低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇或丁醇，所述催化剂为NaOH、KOH、H₂SO₄、H₃PO₄、HCl和甲醇钠。

实施例4

分别将实施例1～3提取油脂后的南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣混合均匀后(质量比为1/10～10/1)置于提取罐中，然后向罐中加入水[水体积比残渣质量(mL/g)为5/1～20/1]煎煮1～3次，每次1h～3h。每次煎煮完毕过滤，得滤液，将几次滤液合并后置于真空浓缩罐中浓缩至密度为1.10g/mL～1.20g/mL的浓缩液。向贮有密度为1.05g/mL～1.15g/mL浓缩液的真空浓缩罐中加入1～5倍浓缩液体积的乙醇搅拌均匀后静置10h～48h，析出沉淀。滤除沉淀后将滤液置于真空浓缩罐中浓缩至密度为1.30g/mL～1.40g/mL的流浸膏。向所制得流浸膏中加入水[水体积比流浸膏体积(mL/mL)为10/1～100/1]和适量的苯甲酸、尼泊金搅拌溶解后过滤得澄清的养胃安神口服液。将经水提取后的南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣置于发酵罐中，再加入适量的水和发酵菌，于30℃～40℃条件下发酵10～30天后，烘干粉碎成细粉，装袋即可。

实施例5

按照实施例4制备所得养胃安神口服液对小白鼠的催眠作用

(1)材料

1)动物

健康昆明种ICR小白鼠18g～22g，雌雄各半。由南京中医药大学动物实验中心提供。

2)药品

养胃安神口服液(按照前述发明方法制备)；戊巴比妥钠注射液(上海新亚药业有限公司，批号：20100324)；地西泮注射液(通化茂祥制药有限公司，批号：20110818)。

(2)方法

1)养胃安神口服液对催眠剂量戊巴比妥钠的小白鼠睡眠时间的影响

取雌雄各半小白鼠50只，随机分成5组，养胃安神口服液分别按照20mL/Kg、10mL/Kg和5mL/Kg灌胃，地西泮模型组按照3mg/Kg给药，对照组给予20mL/Kg生理盐水，60mins后，各组均腹腔注射戊巴比妥钠50mg/Kg，以反正反射消失为睡眠潜伏期；以反正反射消失至恢复为睡眠持续时间。结果见表1：

2)养胃安神口服液对阈下催眠剂量戊巴比妥钠作用的影响

取雌雄各半小白鼠100只，随机分成5组，养胃安神口服液分别按照20mL/Kg、10mL/Kg和5mL/Kg灌胃，地西泮模型组按照3mg/Kg给药，对照组给予20mL/Kg生理盐水，60mins后，各组均腹腔注射戊巴比妥钠25mg/Kg，记录小鼠睡眠数。结果见表2：

(3)结果

表-1养胃安神口服液对催眠剂量戊巴比妥钠的小白鼠睡眠时间的影响

组别	剂量	小白鼠数(只)	睡眠潜伏期(s)	睡眠持续期(s)
					生理盐水	20mL/Kg	10	350±110：	1346±576：
地西泮	3mg/Kg	10	173±43**	4872±1298**
					口服液大剂量	20mL/Kg	10	216±23**	3576±1231**
口服液中剂量	10mL/Kg	10	192±34**：	3320±1376**：
					口服液小剂量	5mL/Kg	10	201±43*：	2742±1085*：

注：“：”为对比组；“^**”为P<0.01；“^*”为P<0.05

表-2养胃安神口服液对阈下催眠剂量戊巴比妥钠作用的影响

组别	剂量	小白鼠数(只)	睡眠小鼠数
				生理盐水	20mL/Kg	20	0：
地西泮	3mg/Kg	20	14**
				口服液大剂量	20mL/Kg	20	10**
口服液中剂量	10mL/Kg	20	18**：
				口服液小剂量	5mL/Kg	20	14*：

注：“：”为对比组；“^**”为P<0.01；“^*”为P<0.05

采用两组比较t检验，养胃安神口服液对戊巴比妥钠诱导的睡眠潜伏期以及睡眠持续期均有影响，其可缩短睡眠潜伏期、延长睡眠持续期，与正常组比较有非常显著性意义。采用双侧检验计算，养胃安神口服液对阈下催眠剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠个数的影响与正常组相比有非常显著性意义。

实施例6

按照实施例4制备所得养胃安神口服液对实验性胃溃疡形成的抑制作用

(1)材料

1)动物

普通级KM级小鼠，18g～22g，雌雄各半。由南京中医药大学动物实验中心提供。

SPF级别SD大鼠，150g～180g，雌雄各半。由南京中医药大学动物实验中心提供。

2)药品

养胃安神口服液(按照前述发明方法制备)；雷尼替丁胶囊(浙江普洛康裕制药有限公司，批号：20120118)；利血平注射液(广东邦民制药有限公司，批号：20120408)。

3)供试品制备与剂量设置

模型对照组供试品制备与剂量设置：以含水聚乙二醇-400代替药物，同等容量灌胃给药。

雷尼替丁供试品制备与剂量设置：取雷尼替丁胶囊内容物，加含水聚乙二醇-400制成每1mL含5mg的溶液(给药剂量为50mg/Kg)，备用。

养胃安神口服液供试品制备与剂量设置：向按照实施例1和实施例4制备所得流浸膏加含水聚乙二醇-400[含水聚乙二醇-400体积比流浸膏体积(mL/mL)为10/1～100/1]制成20mL/Kg、10mL/Kg和5mL/Kg供试品，备用。

(2)方法

1)养胃安神口服液对利血平所致小鼠急性实验性胃溃疡的影响

取雌雄各半KM小白鼠50只，随机分成5组(模型对照组、雷尼替丁对照组、养胃安神口服液高、中、低剂量组)，每组10只，雷尼替丁对照组灌胃给药10mL/Kg，养胃安神口服液分别按照20mL/Kg、10mL/Kg和5mL/Kg灌胃，模型对照组给予20mL/Kg的含水聚乙二醇，连续5天，实验前禁食不禁水24h，各组再给药一次，1h后皮下注射利血平6mg/Kg，6h后颈椎脱臼处死动物，解剖取胃，结扎胃的贲门和幽门部并经胃壁向胃腔内注入1％甲醛2mL，将胃取出浸入1％甲醛溶液中，30min后沿胃大弯剪开，洗净胃内容物，将胃粘膜剪开，胃粘膜损伤表现为腺胃区粘膜的条状出血，用游标卡尺测定胃粘膜损伤的程度，(计分方法：无损伤为0分，淤血点为1分，线状淤血长度<1mm为2分，1mm～2mm为3分，2mm～3mm为3分，大于3mm为5分)，计算溃疡指数，并计算溃疡抑制率。

溃疡抑制率＝【(模型对照组平均溃疡指数-各给药剂量组平均溃疡指数)/模型对照组平均溃疡指数】×100％

2)养胃安神口服液对醋酸所致大鼠慢性实验性胃溃疡的影响

取雌雄各半SD大鼠50只，禁食12h后，腹腔注射5％水合氯醛2mL麻醉，剪掉腹壁毛，用碘酒和酒精消毒。在剑突下腹部正中2cm～2.5cm处剪开皮肤和腹壁，用弯止血钳在右侧肝脏下方将十二指肠轻轻勾出，然后将胃腺部轻轻拉出腹外，在胃的腹侧面，将微量注射器平刺入胃体部与幽门窦交界处的浆膜下0.4mm～0.5mm处，注入40％醋酸0.05mL，缝合切口，术后常规喂养，次日随机分成5组(模型对照组、雷尼替丁对照组、养胃安神口服液高、中、低剂量组)，每组10只，雷尼替丁对照组灌胃给药10mL/Kg，养胃安神口服液分别按照20mL/Kg、10mL/Kg和5mL/Kg灌胃，模型对照组给予20mL/Kg的含水聚乙二醇，连续给药14天。第15天处死大鼠，取出胃后用1％甲醛溶液固定10min，沿胃大弯切开胃壁，将胃外翻，洗净胃内容物，取腺胃区展开，用纸吸干溃疡内水分，用游标卡尺测定胃粘膜损伤程度，用溃疡最长径和最短径的均值表示溃疡指数，并计算溃疡抑制率。

(3)结果

实验数据以平均值±标准差(x±s)表示，采用SPSS软件提供的单因素方差分析方法方差分析，按照方差分析的程序现进方差齐性检验：方差齐性，用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；方差不齐性，对数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到方差齐性，改用秩和检验进行统计。

数据统计分析结果表明：与模型对照组比较，养胃安神口服液具有非常显著抑制利血平所致小鼠急性实验性胃溃疡形成作用(P<0.01)，其中口服液高剂量组，溃疡抑制率显著高于雷尼替丁对照组(P<0.05)(见表-3)。

表-3养胃安神口服液对利血平致小鼠急性实验性胃溃疡的抑制作用

注：与模型对照组比较^**P<0.01；与雷尼替丁对照组比较^⊿P<0.05。

实验结果表明：养胃安神口服液(高剂量组和中剂量组)，抑制醋酸致大鼠慢性实验性胃溃疡形成作用，具有非常显著性意义(与模型对照组比较，P<0.01)；养胃安神口服液(低剂量组)，抑制醋酸致大鼠慢性实验性胃溃疡形成作用，具有显著性意义(与模型对照组比较，P<0.05)(见表-4)。

表-4养胃安神口服液对醋酸致大鼠慢性实验性胃溃疡的抑制作用实验结果

注：与模型对照组比较^**P<0.01；与雷尼替丁对照组比较^⊿P<0.05，^⊿⊿P<0.01。

Claims (10)

1.一种南蛇藤果实或/和反枝苋种子的综合循环应用方法，其特征是：

(1)先将成熟干燥的南蛇藤果实或/和反枝苋种子中的油脂提取分离、脱色后制得提取物1，所述提取物1作为制备生物柴油的原料；

(2)再对提取油脂后的南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣采取水提醇沉工艺制得提取物2，所述提取物2作为养胃安神的口服液；

(3)最后将已经过前两步处理的南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣进行生物发酵处理后制得有机肥料，所述有机肥料作为种植南蛇藤或/和反枝苋或其它植物生长的有机肥料，最终形成南蛇藤果实或/和反枝苋种子的综合循环应用体系。

2.根据权利要求1所述的南蛇藤果实或/和反枝苋种子的综合循环应用方法，其特征是：步骤(1)中南蛇藤果实或/和反枝苋种子中油脂提取分离方法如下：

①干燥

将采集的新鲜成熟南蛇藤果实或/和反枝苋种子分别置于40℃～80℃条件下干燥，控制含水量≤5％；

②粉碎

将经干燥处理后的南蛇藤果实或/和反枝苋种子粉碎；

③溶剂提取

有机溶剂加入到南蛇藤果实或/和反枝苋种子颗粒于回流提取罐中进行加热回流提取1～3次，过滤后合并提取液，减压回收有机溶剂后得粗油脂；

④活性炭脱色

向粗油脂中加入活性炭于水浴条件下搅拌，滤除活性炭得南蛇藤果实或/和反枝苋种子的脱色油脂，制得提取物1。

3.根据权利要求2所述的南蛇藤果实或/和反枝苋种子的综合循环应用方法，其特征是：步骤③中有机溶剂选择正己烷、石油醚1、石油醚2、乙酸乙酯、丙酮、二氯乙烷中的一种或多种；其中石油醚1沸程为30℃～60℃，石油醚2沸程为60℃～90℃。

4.一种权利要求1或2或3所述的提取物1在制备生物柴油原料中的应用。

5.根据权利要求4所述的提取物1在制备生物柴油原料中的应用，其特征是：将从南蛇藤果实或/和反枝苋种子中制取的混合油脂即提取物1制成生物柴油和副产品甘油，依次包括如下过程：

①萃取脱羧

向南蛇藤果实或/和反枝苋种子中制取的混合油脂中加入,甲醇，30℃～60℃条件下搅拌，静止分层，除去上层甲醇游离脂肪酸层，蒸馏上层溶液回收甲醇，重复三次，分离得到的下层为脱羧的南蛇藤果实或/和反枝苋种子混合油脂。

②脱水干燥

脱羧的南蛇藤果实或/和反枝苋种子混合油脂进入真空干燥器干燥，去除水分等杂质，温度90℃～110℃，干燥脱水后的混合油脂冷却到30℃～40℃，得到脱水后的南蛇藤果实或/和反枝苋种子混合油脂，

③酯化反应

经脱羧和脱水的南蛇藤果实或/和反枝苋种子混合油脂进入酯交换反应器，加入摩尔数为油脂3～20倍的低碳醇和重量为油重的0.1％～5％的催化剂，在30℃～70℃和搅拌回流下进行酯化反应，反应结束后室温条件下静置分层，上层为粗生物柴油，下层为粗甘油。

④蒸发分离精制

将上层粗生物柴油通过蒸馏塔除去低碳醇，然后用30℃～50℃的水洗涤至澄清，再将上层液体真空蒸馏脱水得成品生物柴油；将下层粗甘油通过蒸馏塔除去低碳醇，过滤后真空蒸馏脱水得副产品甘油，蒸发的低碳醇回收循环使用。

6.根据权利要求5所述的提取物1在制备生物柴油原料中的应用，其特征在是：步骤③中所述低碳醇为甲醇、乙醇、丙醇或丁醇，所述催化剂为NaOH、KOH、H₂SO₄、H₃PO₄、HCl和甲醇钠。

7.根据权利要求1所述的南蛇藤果实或/和反枝苋种子的综合循环应用方法，其特征是：步骤(2)中对提取油脂后的南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣采取水提醇沉工艺制得提取物2，方法如下：

①提取浓缩

将提取油脂后的南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣置于提取罐中，然后向罐中加入水煎煮1～3次，每次1h～3h，每次煎煮完毕过滤，得滤液，将几次滤液合并后置于真空浓缩罐中浓缩至密度为1.10g/mL～1.20g/mL的浓缩液；

②醇沉浓缩

向贮有密度为1.05g/mL～1.15g/mL浓缩液的真空浓缩罐中加入1～5倍浓缩液体积的乙醇搅拌均匀后静置10h～48h，析出沉淀。滤除沉淀后将滤液置于真空浓缩罐中浓缩至密度为1.30g/mL～1.40g/mL的流浸膏；

③配制口服液

向所制得流浸膏中加入水为和苯甲酸、尼泊金搅拌溶解后过滤得提取物2。

8.一种养胃安神口服液，其特征是：由治疗有效量的权利要求8中所述的提取物2制成。

9.根据权利要求1所述的一种南蛇藤果实或/和反枝苋种子的综合循环应用方法，其特征是：步骤(3)中将已经经过提取油脂和制备养胃安神口服液处理的南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣进行生物发酵处理后得有机肥料，方法如下：

将经水提取后的南蛇藤果实或/和反枝苋种子残渣置于发酵罐中，再加入适量的水和发酵菌，于30℃～40℃调件下发酵10～30天后，烘干粉碎成细粉，制备得到的有机肥料，所述有机肥料作为种植南蛇藤和反枝苋或其它植物生长的有机肥料。

10.一种有机肥料，其特征是：由权利要求9所述的方法制备。