CN104095219A - 一种益生菌整肠药剂的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了一种益生菌整肠药剂的制备方法，包括：将乳杆菌株、乳酸菌株、双歧杆菌株发酵24小时，发酵温度为35-40℃，然后进行离心；收集上述菌体，并添加冻干保护剂，然后进行预冻；冷冻干燥。采用本发明使得益生菌能以存活形式进入肠道，保证肠道健康。
Description
技术领域
本发明涉及保健药物食品技术领域，尤其涉及一种益生菌整肠药剂的制备方法。
背景技术
在现代社会里，随着生活节奏的增强以及饮食的无规律状态，越来越多的人都有不同程度的肠胃道疾病，肠胃道疾病具体表现在，肠炎、胃炎、腹泻等等，大多数情况属于胃肠道机能紊乱、消化吸收功能减弱、免疫系统出现问题，如果得不到及时的治疗处理，会增大胃肠癌的发生率。
至今，益生菌在临床医疗方面的应用研究最新成果包括下述几个方面：
（1）益生菌对溃疡性大肠炎（IBD）和婴儿过敏性湿疹有防治作用；
（2）益生菌对免疫细胞（巨噬细胞）的功能调节作用；
（3）益生菌通过调节肠内菌群对过敏性肠炎等腹部症状的预防效果；
（4）益生菌对糖尿病等生活习惯病的预防效果；
（5）关于益生菌对肠道出血性大肠菌等有害菌感染防御的研究；
（6）益生菌的流感预防作用；
（7）益生菌的肠道菌群及免疫调节作用；
（8）益生菌对大肠癌，胃癌，膀胱癌术后复发的抑制作用；
（9）益生菌对便秘和痢疾的改善效果；
（10）益生菌的摄取对场内有害物质生成的抑制作用；
（11）益生菌对血液中总胆固醇的影响；
（12）益生菌与益生元的并用对短肠症患者营养状态的改善作用；
（13）益生菌与乳糖不耐症的关联性研究。
目前国内市场上未见能以存活状态到达肠内的健肠药剂。另外，直投式高密度发酵菌粉及活性乳酸菌食品市场被三家外资企业所占领，还未见拥有国内自主知识产权的菌株。国内有类似的乳酸菌粉制剂，但所使用的乳酸菌均不耐酸，不能以存活状态到达肠道。
有鉴于此，如何设计一种益生菌整肠药剂的制备方法，以增加益生菌的耐酸性，解决益生菌不能以存活状态到达肠内的现象，是业内人士亟需解决的问题。
发明内容
针对现有技术中，健肠药剂不能以存活状态到达肠内的这一缺陷，本发明提供了一种益生菌整肠药剂的制备方法。
根据本发明，提供了一种益生菌整肠药剂的制备方法，其中，包括以下步骤：
（a）：将乳杆菌株、乳酸菌株、双歧杆菌株发酵24小时，发酵温度为35-40℃，然后进行离心；
（b）：收集所述步骤（a）中的菌体，并添加冻干保护剂，然后进行预冻；以及
（c）：冷冻干燥。
优选的，所述步骤（a）中，所述乳杆菌株、所述乳酸菌株、所述双歧杆菌株的质量比为2：1：1。
优选的，所述步骤（a）中，所述乳杆菌株为瑞士乳杆菌株或干酪乳杆菌株。
优选的，所述步骤（a）中，在2-6℃的温度下，以5000-7000rpm的转速离心10-30min。
优选的，所述步骤（a）中，所述乳酸菌株利用TPY培养基进行培养。
优选的，所述步骤（a）中，所述双歧杆菌株利用MRS培养基进行培养。
优选的，所述步骤（b）中，以重量份计，所述冻干保护剂的配方包括：30-50份脱脂乳、10-30份乳清粉、1-3份维生素C、1-3份乳糖。
优选的，所述步骤（b）中，以重量份计，所述冻干保护剂的配方包括：40份脱脂乳、20份乳清粉、2份维生素C、2份乳糖。
优选的，所述步骤（b）中，在-70～-90℃下预冻1-3小时。
优选的，所述步骤（c）中，冷冻干燥24小时。
本发明的优点是：通过将乳杆菌株、乳酸菌株、双歧杆菌株以诱导比例混合进行高新发酵，发酵后进行冷冻干燥，提高益生菌在食（饮）品种的存活率。该益生菌株能以存活形式到达肠道，大量分泌乳酸，从而促进有益菌的生育，减少有害菌和有害物质，平衡肠内菌群环境，提高身体健康。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1示出了不同菌株对酸的耐受性的比较示意图。
图2示出了不同菌株对胆盐的耐受性的比较示意图。
图3示出了不同菌株在脱脂乳中的活菌稳定性的比较示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
首先，将80重量份的瑞士乳杆菌株、40重量份的乳酸菌株、40重量份的双歧杆菌株发酵24小时，发酵温度为37℃，然后在4℃的温度下，以6000rpm的转速离心20min，接着收集上述步骤中形成菌体，并相其内添加冻干保护剂，该冻干保护剂的配方包括：脱脂乳、乳清粉、维生素C、乳糖，其中，在冻干保护剂中，脱脂乳为40重量份、乳清粉为20重量份、维生素C为2重量份、乳糖为2重量份，接下来以-80℃进行预冻，最后冷冻干燥24小时。
实施例2
首先，将100重量份的瑞士乳杆菌株、50重量份的乳酸菌株、50重量份的双歧杆菌株发酵24小时，发酵温度为35℃，然后在2℃的温度下，以5000rpm的转速离心10min，接着收集上述步骤中形成菌体，并相其内添加冻干保护剂，该冻干保护剂的配方包括：脱脂乳、乳清粉、维生素C、乳糖，其中，在冻干保护剂中，脱脂乳为30重量份、乳清粉为50重量份、维生素C为1重量份、乳糖为1重量份，接下来以-70℃进行预冻，最后冷冻干燥24小时。
实施例3
首先，将120重量份的瑞士乳杆菌株、60重量份的乳酸菌株、60重量份的双歧杆菌株发酵24小时，发酵温度为40℃，然后在6℃的温度下，以7000rpm的转速离心30min，接着收集上述步骤中形成菌体，并相其内添加冻干保护剂，该冻干保护剂的配方包括：脱脂乳、乳清粉、维生素C、乳糖，其中，在冻干保护剂中，脱脂乳为50重量份、乳清粉为10重量份、维生素C为3重量份、乳糖为3重量份，接下来以-90℃进行预冻，最后冷冻干燥24小时。
以下是具体实验数据：
《试验方法》
1实验材料
被试菌株：瑞士乳杆菌（LcJY68）、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌干酪亚种（LCSC）、嗜热链球菌
培养基：MRS培养基
试剂：胆盐、脱脂乳
2耐酸性试验
菌体制备：将被试菌株分别在MRS液体培养基中静置培养过夜，然后再转入新鲜的MRS液体培养基静置培养24h。将菌体在4℃离心（400g/10min），用无菌磷酸盐缓冲液[(PBS)NaCl,0.8%；0.1M，pH7.2]，洗涤一次并重新悬浮成原来的十分之一体积，菌悬液用来做耐酸性实验。
取上述菌悬液0.1mL注射入含有2mL无菌磷酸盐缓冲液的pH为3（最终用盐酸调节pH）的试管中。将这些试管放入37℃生化培养箱中，并分别于0h,1h,2h,3h,4h进行活菌计数，每次计数均重复三次取平均值。
3胆盐耐受性试验
菌种活化两代后的液体培养物按照2%接种量接入含不同胆盐浓度的改良液体MRS培养基中（培养基中分别含0%，0.3%，0.6%，1%），在37℃恒温培养箱中培养24小时后取样测定活菌数。
4稳定性试验
配制12%的脱脂乳溶液，按照2%的接种量接种后于37℃培养箱中培养24h，取出置于4℃冰箱，分别于0天，7天，14天及21天测定活菌数。
二试验结果及分析
1耐酸特性
将瑞士乳杆菌（LcJY68）、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌干酪亚种（LCSC）、嗜热链球菌在pH3的条件下分别培养0h,1h,2h,3h,4h后测定活菌数，结果见图1。
由图1可以看出，LcJY68表现出良好的耐酸性，在pH3时培养3h后仍能保持89.33%的活菌数，与其他几株商业上常见的益生菌相比，其对酸的耐受性也表现出一定的优势。研究表明，人体胃液的pH值在2左右，进食过程中，由于食物成分、进食量以及个体之间的差异，一般胃液的pH值在1.8～5.0之间波动，平均值在3左右。此外，不同食物形态也影响其在胃中的消化时间。流体食物通常在胃中的平均消化时间为1.5～2h。由此得出人体在摄入LcJY68后，完全可以耐受胃液的极端酸性环境，保持较高的活菌数进入人体肠道。
2耐胆汁特性
将瑞士乳杆菌（LcJY68）、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌干酪亚种（LCSC）、嗜热链球菌在不同的胆汁浓度下培养24小时后测定活菌数，结果见图2。
由图2可以看出，LcJY68在0.3%及0.6%的胆汁浓度下，均保持良好的生长状态，相比较嗜酸乳杆菌、LCSC及嗜酸乳杆菌均表现出一定的优势。在1%的胆汁浓度下，LcJY68仍能获得超过106的活菌数，表明该菌具有良好的耐胆汁特性，为其在小肠及大肠中发挥作用奠定了基础。
3稳定性试验
将瑞士乳杆菌（LcJY68）、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌干酪亚种（LCSC）、嗜热链球菌接种至脱脂乳中培养24小时后分别于0d,7d,14d和21d进行活菌计数，考察其在4℃下的保存稳定性。
由图3可以看出，LcJY68在4℃下储存21天后，仍能保持107CFU/mL的活菌数，与其他常见的三种商业菌株在稳定性上具有相同优势，该菌具有优异的特性，是良好的益生菌备选菌株。
本发明的优点是：通过将乳杆菌株、乳酸菌株、双歧杆菌株以诱导比例混合进行高新发酵，发酵后进行冷冻干燥，提高益生菌在食（饮）品种的存活率。该益生菌株能以存活形式到达肠道，大量分泌乳酸，从而促进有益菌的生育，减少有害菌和有害物质，平衡肠内菌群环境，提高身体健康。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。
Claims (10)
1.一种益生菌整肠药剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（a）：将乳杆菌株、乳酸菌株、双歧杆菌株发酵24小时，发酵温度为35-40℃，然后进行离心；
（b）：收集所述步骤（a）中的菌体，并添加冻干保护剂，然后进行预冻；以及
（c）：冷冻干燥。
2.如权利要求1所述的益生菌整肠药剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（a）中，所述乳杆菌株、所述乳酸菌株、所述双歧杆菌株的质量比为2：1：1。
3.如权利要求1所述的益生菌整肠药剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（a）中，所述乳杆菌株为瑞士乳杆菌株或干酪乳杆菌株。
4.如权利要求1所述的益生菌整肠药剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（a）中，在2-6℃的温度下，以5000-7000rpm的转速离心10-30min。
5.如权利要求1所述的益生菌整肠药剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（a）中，所述乳酸菌株利用TPY培养基进行培养。
6.如权利要求1所述的益生菌整肠药剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（a）中，所述双歧杆菌株利用MRS培养基进行培养。
7.如权利要求1所述的益生菌整肠药剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（b）中，以重量份计，所述冻干保护剂的配方包括：30-50份脱脂乳、10-30份乳清粉、1-3份维生素C、1-3份乳糖。
8.如权利要求7所述的益生菌整肠药剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（b）中，以重量份计，所述冻干保护剂的配方包括：40份脱脂乳、20份乳清粉、2份维生素C、2份乳糖。
9.如权利要求1所述的益生菌整肠药剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（b）中，在-70～-90℃下预冻1-3小时。
10.如权利要求1所述的益生菌整肠药剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（c）中，冷冻干燥24小时。
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