CN104086520A

CN104086520A - 一种环烯醚萜类化合物及其制备方法和用途

Info

Publication number: CN104086520A
Application number: CN201410321928.XA
Authority: CN
Inventors: 闫智勇; 陈朝勇; 林玉; 兰明; 张瑞桐; 许科科; 张天娥
Original assignee: Southwest Jiaotong University
Current assignee: Southwest Jiaotong University
Priority date: 2014-06-26
Filing date: 2014-07-04
Publication date: 2014-10-08
Anticipated expiration: 2034-07-04
Also published as: CN104086520B; CN104906083B; CN104906083A

Abstract

本发明公开一种环烯醚萜类新化合物及其抗肿瘤作用。本发明还提供了该化合物的制备方法和用途。本发明化合物在抑制人乳腺癌MCF-7细胞生长的IC50为7.4μg/mL，抑制人肝癌HepG-2细胞生长的IC50为11.7μg/mL，抑制人肺癌A549细胞生长的IC50为17.9μg/mL，抑制人直结肠癌细胞的HT-29细胞生长的IC50为3.1μg/mL，抑制人成骨肉瘤MG-63细胞生长的IC50为3.5μg/mL，抑制人白血病K562肿瘤细胞生长的IC50为12.7μg/mL。说明本发明化合物对人乳腺癌、肝癌、肺癌、结肠癌、人成骨肉瘤、白血病的肿瘤生长均有强的抑制作用，可应用于治疗和预防人乳腺癌、肝癌、肺癌、结肠癌、人成骨肉瘤、白血病。

Description

一种环烯醚萜类化合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种环烯醚萜类化合物。

背景技术

蜘蛛香曾载于《本草纲目》，曰：“蜘蛛香出蜀西茂松藩山中。草根也，黑色有粗须，状如蜘蛛及藁本，芎穷，气味芳香”。为1977版中国药典(一部)和2010版中国药典(一部)所收载，又名马蹄香、鬼见愁、雷公七、臭药等。中药蜘蛛香的基源为败酱科(Valerianaceae)缬草属(Valeriana Linn)植物蜘蛛香(Valeriana jatamansi Jones)的干燥根茎。2010版《中国药典(一部)》药典称其微苦，辛、温；功能理气止痛、消食止泻、祛风除湿、镇静安神；用于脘腹胀痛，食积不化，腹泻痢疾，风湿痹痛，腰膝酸软，失眠。”蜘蛛香在我国主要分布于湖北、湖南、陕西、河南、广西、四川、贵州、云南等省，一般生长于海拔1900-2700m的高原地区。

迄今国内外对蜘蛛香的研究表明，该植物主要含有环烯醚萜类、挥发油类、黄酮类、生物碱类、木脂素类等成分。其中生物碱类成分和黄酮类成分多存在于蜘蛛香地上部分，而环烯醚萜和倍半萜等萜类成分多存在于根部，其中倍半萜和其它单萜在根部的挥发油中含量较多。其药理作用现代研究发现具有抗焦虑、镇静催眠、降压、解痉、心脏抑制、抗肿瘤、抗菌抗病毒等作用。如专利申请号：200810207746.4，发明名称：母核共轭的环烯醚萜类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用，具体涉及母核共轭的环烯醚萜类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。该专利从蜘蛛香中分离的环烯醚萜类化合物母核为C3-4，C5-6号位的双键耦合，且C11位为饱和碳原子连接取代基，与母核形成共轭。

发明内容

发明人在针对蜘蛛香的系统化学成分研究中，分离鉴定了一个结构式1的新环烯醚萜类化合物。药理活性研究结果表明，结构式1化合物具有良好的抗肿瘤作用。

本发明提供了一种环烯醚萜类化合物，其化学结构式如下：

进一步优选地，所述的化合物如式1所示：

本发明还提供了所述的环烯醚萜类化合物的提取方法，它包括以下步骤：

(1)蜘蛛香干燥根茎粉末为原料，乙醇冷浸提取，回收溶剂，得浸膏；

(2)将浸膏用蒸馏水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取，得乙酸乙酯萃取物。

(3)将乙酸乙酯萃取物用硅胶柱层析，以氯仿-甲醇系统梯度洗脱(100：0，99:1，98:2-90:10，8:1，7:1-1:1，0:1)，每个梯度约2倍柱体积。对各馏分利用薄层色谱检识，以7％浓硫酸乙醇显色，其中，在氯仿-甲醇比例为93:7-90:10梯度的馏分化学成分相似，显黑色点，合并得到馏分3。

其中所述的洗脱梯度98:2-90:10分别是：98:2、97:3、96:4、95:5、94:6、93:7、92:8、91:9、90:10；所述的7:1-1:1分别是：7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1。

(4)其中馏分3再用硅胶柱层析，以石油醚-丙酮系统梯度洗脱(30:1，20:1，15:1，10:1，9:1-1:1)，每个梯度约2倍柱体积。对各馏分利用薄层色谱检识，以7％浓硫酸乙醇显色，其中，石油醚-丙酮比例在8:1-7:1梯度的馏分化学成分相似，先显褐色后变黑，合并得到馏分D。

所述的洗脱梯度9:1-1:1分别是：9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1。

(5)其中馏分D再经硅胶柱层析，用石油醚-丙酮系统梯度洗脱(20:1，15:1，10:1，9:1，8:1-1:1)，对各馏分利用薄层色谱检识，以7％浓硫酸乙醇显色，其中，石油醚-丙酮比例在10:1-9:1梯度的馏分化学成分相似，先显褐色后变黑，合并得到馏分D2。所述的洗脱梯度8:1-1:1分别是：8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1。

(6)取D2馏分用葡聚糖凝胶LH-20柱层析，以氯仿-甲醇(1:1)洗脱。后对各馏分利用薄层色谱检识，以7％浓硫酸乙醇显色，对先显褐色后变黑色的部分馏分进行合并，得馏分D2-2。

(7)其中D2-2再经葡聚糖凝胶LH-20柱，纯甲醇洗脱。对各馏分利用薄层色谱检识，以7％浓硫酸乙醇显色，对主要含先显褐色后变黑色的成分的部分馏分，将含其他杂质少的若干馏分合并，得馏分D2-2-1；

(8)取D2-2-1再经硅胶柱层析，以石油醚-丙酮系统(5:1)等度洗脱，去除部分色素，再在薄层色谱上，以7％浓硫酸乙醇显色，将主要含先显褐色后变黑色的成分的馏分合并。过夜自然挥干溶剂，得淡黄色结晶；

(9)将淡黄色结晶在石油醚-丙酮(15:1)中重结晶，得到白色结晶，即为结构式为1的新化合物。

本发明还提供了所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤的药物中的用途。

其中上，所述的药物是治疗或/和预防人乳腺癌、肝癌、肺癌、结肠癌、人成骨肉瘤、白血病的药物。

本发明还提供了一种抗肿瘤药物组合物，它是由所述的环烯醚萜类化合物及其药学上可接受的盐为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。

其中，所述的制剂是片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、注射液、粉针剂、滴丸剂。

本发明化合物中环烯醚萜母核中C-11号位为一醛基，并与母核上C4-5，C6-7形成共轭，与其他报道的环烯醚萜化合物相比，在共轭体系及C11为关键醛基上存在很大的差异。本发明化合物抑制人乳腺癌MCF-7细胞生长的IC₅₀为7.4μg/mL，抑制人肝癌HepG-2细胞生长的IC₅₀为11.7μg/mL，抑制人肺癌A549细胞生长的IC₅₀为17.9μg/mL，抑制人直结肠癌细胞的HT-29细胞生长的IC₅₀为3.1μg/mL，抑制人成骨肉瘤MG-63细胞生长的IC₅₀为3.5μg/mL，抑制人白血病K562肿瘤细胞生长的IC₅₀为12.7μg/mL。说明本发明化合物对人乳腺癌、人肝癌、人肺癌、人结肠癌、人成骨肉瘤、白血病的肿瘤生长均有强的抑制作用，可用于治疗和预防人乳腺癌、肝癌、肺癌、结肠癌、成骨肉瘤、白血病。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

具体实施方式

附图说明：

图1：结构式1化合物的高分辨质谱。

图2：结构式1化合物的氢谱。

图3：结构式1化合物的碳谱。

图4：结构式1化合物的HSQC谱

图5：结构式1化合物的HMBC谱。

图6：结构式1化合物的ROESY谱。

图7：结构式1化合物的UV谱。

图8：结构式1化合物的IR谱。

图9：结构式1化合物的结构。

具体实施方案：

实施例1 本发明环烯醚萜类新化合物的制备

结构式1化合物的制备

以蜘蛛香(Valeriana jatamansi Jones)干燥根茎粉末(20kg)为原料，经用95％工业乙醇冷浸提取4次，每次24h，提取液经减压浓缩得4.2kg褐色粘稠状浸膏。浸膏用蒸馏水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到石油醚部位浸膏约600g、乙酸乙酯浸膏550g、正丁醇浸膏1000g。取乙酸乙酯萃取物550g。经硅胶(100-200目)柱层析，以氯仿-甲醇系统梯度洗脱(100：0，99:1，98:2，-90:10，8:1，7:1，-1:1，0:1))，每个梯度2倍柱体积；对各馏分利用薄层色谱检识，以7％浓硫酸乙醇显色，其中，在氯仿-甲醇比例为93:7-90:10梯度的馏分化学成分相似，显黑色点，合并得到馏分3，其中馏分3(120g)再次用硅胶(100-200目)柱层析，以石油醚-丙酮系统梯度洗脱(30:1，20:1，15:1，10:1，9:1，-1:1)，每个梯度约2倍柱体积；对各馏分利用薄层色谱检识，以7％浓硫酸乙醇显色，其中，石油醚-丙酮比例在8:1-7:1梯度的馏分化学成分相似，先显褐色后变黑，合并得到馏分D。其中D馏分(25g)再经硅胶柱层析，用石油醚-丙酮系统(20:1，15:1，10:1，9:1，8:1，-1:1)梯度洗脱，每个梯度约3倍柱体积对各馏分利用薄层色谱检识，以7％浓硫酸乙醇显色，其中，石油醚-丙酮比例在10:1-9:1梯度的馏分化学成分相似，先显褐色后变黑，合并得到馏分D2；取D2馏分(5.9g)用葡聚糖凝胶LH-20柱层析，以氯仿-甲醇(1:1)洗脱，后对各馏分利用薄层色谱检识，以7％浓硫酸乙醇显色，对先显褐色后变黑色的部分馏分进行合并，得馏分D2-2；其中D2-2再经葡聚糖凝胶LH-20柱，甲醇洗脱，对各馏分利用薄层色谱检识，以7％浓硫酸乙醇显色，对主要含先显褐色后变黑色的成分的部分馏分，将含其他杂质少的若干馏分合并，得馏分D2-2-1。取D2-2-1再经硅胶柱层析，以石油醚-丙酮系统(5:1)等度洗脱，，去除色素，再将在薄层色谱上，以7％浓硫酸乙醇显色，将主要含先显褐色后变黑色的成分的馏分合并；过夜自然挥干溶剂，得淡黄色结晶；将淡黄色结晶在石油醚-丙酮(15:1)中重结晶，得到白色结晶，即结构式为1的新化合物(1.46g)。

实施例2 结构式1化合物的鉴定

结构式1化合物，白色针状结晶，高分辨质谱HR-ESI-MS(见图1)给出[M+Na]⁺为361.1264，确定其分子式C₁₇H₂₂O₇，不饱和度为7。

根据¹H NMR(见图2)和¹³C NMR(见图3)可以判断为环烯醚萜类化合物骨架；HR-ESI-MS显示[M+Na]⁺为361.1264，结合分子量，确定其分子式为C₁₇H₂₂O₇。由δ_H(9.953)处为明显的单峰信号，结合δ_C(190.677)的可推测为一个醛基信号，邻位碳原子上无氢原子。一维¹³C NMR波谱中的δ_C(172.849，43.108，25.730，22.322and22.322)推测含有异戊酰基取代，再结合¹H NMR中δ_H(0.90)附近的积分曲线高度，推断有1个异戊酰基。δ_C(170.932，20.878)结合碳信号数目及¹H NMR中的δ_H(2.045)，可以推测还有一个为乙酰基取代，δ_C(163.033，145.155，134.634，127.636)可推测可能含两个双键。2D HSQC图谱(见图4)显示，δ_C(163.033，134.634)显示无直接C-H键，说明C4，C5间存在双键。δ_C(145.155，127.636)均显示有C-H键，说明了C6，C7均无其他取代，并由¹HNMR说明的H积分曲线高度说明含有1个氢，则说明C6，C7间为双键连接。δ_C95.400的C信号无C，H相关，说明C8被双取代。再根据2D HMBC谱(见图5)中C3的氢与δ_C190.677的C相关，说明的醛基为4号位取代。其他HMBC中的H-C相关信息符合本文中的结构。与文献中的NMR数据进行对照，发现本化合物与蜘蛛香中得到的化合物Jatamanvaltrate N的环烯醚萜母核一致，只是C11位被氧化为醛基，而C3位无甲氧基取代，得到1结构。再通过ROESY(见图6)、IR(见图7)、UV(见图8)确认其结构(见图9)。经SciFinderScholar数据库查询，本化合物为一新结构化合物，命名为蜘蛛香素E(Valjatrate E)。1H NMR和13C NMR数据见表1。

表1 结构1化合物的¹H and¹³C NMR ^a

实施例3 片剂的制备

取处方量结构式1化合物与处方量乳糖混合均匀，加3％聚维酮乙醇溶液制软材，过18目筛制颗粒，50℃干燥30-45分钟，整粒，加入硬脂酸镁，混匀，压片。每片含化合物20mg。

实施例4 胶囊剂的制备

取处方量结构式1化合物与处方量乳糖混合均匀，加3％聚维酮乙醇溶液制软材，过18目筛制颗粒，50℃干燥30-45分钟，整粒，加入硬脂酸镁，混匀，充于1号胶囊。每粒含化合物20mg。

实施例5

结构式1化合物对人乳腺癌、人肝癌、人肺癌、人结肠癌、人成骨肉瘤的生长抑制作用

1、受试细胞株及主要试剂

(1)各类型肿瘤细胞株

肿瘤类型	细胞株
		人乳腺癌	MCF‐7
人肝癌	HepG2
		人肺癌	A549
人结肠癌	HT‐29
		人成骨肉瘤	MG‐63

(2)主要试剂

高糖DMEM(批号：NZA1070，美国HyClone公司)，胎牛血清(批号：NWA0362，美国HyClone公司)，胰蛋白酶(批号：J130029，美国HyClone公司)，MTT(批号：1305BI1，美国Sigma公司)，二甲基亚砜(批号：293K0068，美国Sigma公司)，PBS缓冲液(批号：08D16B30，博士德生物工程有限公司)。

(3)受试药物

分别称取适量结构式1化合物，用移液器加取适量二甲亚砜(DMSO)溶解后，再加入PBS缓冲液，配制为50 mmol·L^-1的母液，用0.22μm的微孔过滤器过滤后，密封避光放置于-20℃冰箱中备用。加药时取母液用高糖DMEM培养基稀释至所需浓度，即刻使用。

2、实验方法

(1)细胞培养

对数生长期的人源乳腺癌、肝癌、肺癌、结肠癌、人成骨肉瘤细胞，经胰酶消化后制成单细胞悬液，以细胞计数板计数，稀释至合适浓度；后吸取细胞悬液100μl，以每孔5000个细胞在96孔培养板中进行铺板接种。每组设五个平行孔。铺板时接种孔选择靠近板的中部，并在接种孔周围的孔中加入培养基，以此来为减少板内各孔培基中的水分损失，降低96孔板较边缘的孔因水分损失引起的实验误差。接种完成后放入培养箱中37℃恒温培养24h。

(2)实验分组与处理

设空白组(无细胞，含相应浓度DMSO的培养基)、对照组、及各用药剂量实验组。接种完成后，放入细胞培养箱中培养24小时。

细胞贴壁生长24h后，以每孔200μl的加药体积，在实验组根据预试试验得出的浓度梯度，分别加入结构式1化合物的不同浓度溶液。；对照组加入相应浓度的含DMSO培养液，但不加药。加药完成后放入培养箱中，培养48h。

(3)MTT法检测化合物1对人源乳腺癌、肝癌、肺癌、结肠癌、人成骨肉瘤细胞的生长抑制率

上述培养48h后，对贴壁生长的人源乳腺癌MCF-7细胞、肝癌HepG-2、肺癌A549、结肠癌HT-29、人成骨肉瘤MG-63细胞，采用移液器吸出培养基后，换入新鲜的不含血清的高糖DMEM培养基，并加入20μlMTT，放入培养箱中培养4h；后吸除培养基后，再加入100μlDMSO，振荡器振板10min。取出放入酶标仪中，以主波长570nm下检测，得OD值，可按以下公式计算的到肿瘤细胞的抑制率。

肿瘤细胞抑制率＝100％-[OD对照－OD实验]/[OD对照－OD空白]×100％

(4)数据分析

用Graphpad统计软件计算IC₅₀。

3、结果

(1)结构式1化合物对人乳腺癌MCF-7细胞的生长抑制作用

(2)结构式1化合物对人肝癌HepG2细胞的生长抑制作用

(3)结构式1化合物对人肺癌A549细胞的生长抑制作用

(4)结构式1化合物对人结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用

(5)结构式1化合物对人成骨肉瘤MG-63细胞的生长抑制作用

以上选用的多种细胞株，均为该类型肿瘤研究中常见并广泛应用的细胞株。其实验结果能说明本药物对相关肿瘤细胞生长的抑制作用。结构式1化合物在抑制人乳腺癌MCF-7细胞生长的IC₅₀为7.4μg/mL，抑制人肝癌HepG2细胞生长的IC₅₀为11.7μg/mL，抑制人肺癌A549细胞生长的IC₅₀为17.9μg/mL，抑制人直结肠癌细胞的HT-29细胞生长的IC₅₀为3.1μg/mL，抑制人成骨肉瘤MG-63细胞生长的IC₅₀为3.5μg/mL。说明结构式1的化合物对人乳腺癌、肝癌、肺癌、结肠癌、人成骨肉瘤的肿瘤生长均有强的抑制作用，可用于治疗和预防人乳腺癌、肝癌、肺癌、结肠癌、人成骨肉瘤。

实施例6

结构式1化合物对人白血病K562肿瘤生长的抑制作用

1、试剂主要及药物

(1)主要试剂

高糖DMEM(批号：NZA1070，美国HyClone公司)，胎牛血清(批号：NWA0362，美国HyClone公司)，MTT(批号：1305BI1，美国Sigma公司)，二甲基亚砜(批号：293K0068，美国Sigma公司)，PBS缓冲液(批号：08D16B30，博士德生物工程有限公司)，十二烷基硫酸钠(SDS，德国Serva公司产品)，异丁醇(分析纯，科龙化工有限公司)。

(2)受试药物

分别称取适量结构式1化合物，用移液器加取适量二甲亚砜(DMSO)溶解后，再加入PBS缓冲液，配制为50mmol·L^-1的母液，用0.22μm的微孔过滤器过滤后，密封避光放置于-20℃冰箱中备用。加药时取母液用高糖DMEM培养基稀释至所需浓度，即刻使用。

2、实验方法

(1)细胞培养及分组处理

对数生长期的人白血病K562肿瘤细胞，制成浓度均匀单细胞悬液，以细胞计数板计数；吸取细胞悬液100μl，以每孔10000个细胞在96孔培养板中进行铺板接种。设空白组(无细胞，含相应浓度DMSO的培养基)、对照组、及各用药剂量实验组。以每孔10μl的加药体积，在各用药剂量实验组根据预试试验得出的浓度梯度，分别加入50，25，12.5，6.25，3.125，1.56μg/mL的结构式1化合物的溶液；对照组加入相应浓度的含DMSO培养液，但不加药。加药完成后放入37℃培养箱中，培养48h。每组设五个平行孔。铺板时接种孔选择靠近板的中部，并在接种孔周围的孔中加入培养基，以此来为减少板内各孔培基中的水分损失，降低96孔板较边缘的孔因水分损失引起的实验误差。

(2)MTT法检测化合物1对人白血病K562肿瘤细胞生长的抑制率

培养48h后，加入20μlMTT，放入培养箱中培养4h；后以100μl/孔加入10％SDS-5％异丁醇-0.012mol/L HCl(W/V/V)，于37℃恒温培养箱中放置12h过夜。取出放入酶标仪中，以主波长570nm下检测，得OD值，可按以下公式计算的到肿瘤细胞的抑制率。

(3)数据分析

用Graphpad统计软件计算IC₅₀。

3、结果

结构式1化合物对人白血病K562肿瘤细胞的生长抑制作用

人白血病细胞K562从白血病急变期的患者的胸水中分离建立的，处于高度未分化阶段；该细胞是对自然杀伤细胞高度敏感的体外靶标，免疫学上常用来作为抗肿瘤研究的靶细胞。本研究中结构式1化合物对K562细胞的生长抑制作用显著，其IC₅₀为12.7μg/mL。表明结构式1化合物可以抑制人慢性粒白血病肿瘤细胞生长，可在治疗和预防人白血病的药物中应用。

Claims

1.一种环烯醚萜类化合物，结构式如下：

其中，R1为异戊酰基、乙酰基；R7为异戊酰氧基、乙酰氧基、羟基或氢；R8为乙酰基、异戊酰基；R10为羟基、氯原子。

2.根据权利要求1所述的环烯醚萜类化合物，其特征在于：所述的R1为异戊酰基，R7为氢，R8为乙酰基，R10为羟基。

3.根据权利要求2所述的环烯醚萜类化合物，其特征在于：所述的化合物如式1所示：

4.权利要求3所述的环烯醚萜类化合物的提取方法，其特征在于：它包括以下步骤：

(2)将浸膏用蒸馏水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇分别萃取，得乙酸乙酯萃取物；

(3)将乙酸乙酯萃取物用硅胶柱层析，以氯仿-甲醇系统梯度洗脱(100:0，99:1，98:2-90:10，8:1，7:1-1:1，0:1)，每个梯度约2倍柱体积；对各馏分利用薄层色谱检识，以7％浓硫酸乙醇显色，其中，在氯仿-甲醇比例为93:7-90:10梯度的馏分化学成分相似，显黑色点，合并得到馏分3；

(4)其中馏分3再用硅胶柱层析，以石油醚-丙酮系统梯度洗脱(30:1，20:1，15:1，10:1，9:1-1:1)，每个梯度约2倍柱体积；对各馏分利用薄层色谱检识，以7％浓硫酸乙醇显色，其中，石油醚-丙酮比例在8:1-7:1梯度的馏分化学成分相似，先显褐色后变黑，合并得到馏分D；

(5)其中馏分D再经硅胶柱层析，用石油醚-丙酮系统梯度洗脱(20:1，15:1，10:1，9:1，8:1-1:1)，每个梯度约3倍柱体积对各馏分利用薄层色谱检识，以7％浓硫酸乙醇显色，其中，石油醚-丙酮比例在10:1-9:1梯度的馏分化学成分相似，先显褐色后变黑，合并得到馏分D2；

(6)取D2馏分用葡聚糖凝胶LH-20柱层析，以氯仿-甲醇(1:1)洗脱；后对各馏分利用薄层色谱检识，以7％浓硫酸乙醇显色，对先显褐色后变黑色的部分馏分进行合并，得馏分D2-2；

(7)其中D2-2再经葡聚糖凝胶LH-20柱，纯甲醇洗脱；对各馏分利用薄层色谱检识，以7％浓硫酸乙醇显色，将含先显褐色后变黑色的成分的部分馏分，且含其他杂质少的若干馏分合并，得馏分D2-2-1；

(8)取D2-2-1再经硅胶柱层析，以石油醚-丙酮系统(5:1)等度洗脱，去除色素，再将在薄层色谱上，以7％浓硫酸乙醇显色，将含先显褐色后变黑色的成分的馏分合并；过夜自然挥干溶剂，得淡黄色结晶；

5.权利要求1-3任意一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤的药物中的用途。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：所述的药物是治疗或/和预防人乳腺癌、肝癌、肺癌、结肠癌、人成骨肉瘤、白血病的药物。

7.一种抗肿瘤药物组合物，它是由权利要求1-3任意一项所述的环烯醚萜类化合物及其药学上可接受的盐为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的制剂。

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其特征在于：所述的制剂是片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、注射液、粉针剂、滴丸剂。