CN110368378A - 蜘蛛香素E在制备mGluR2和mGluR3受体激动剂类药物中的用途 - Google Patents
蜘蛛香素E在制备mGluR2和mGluR3受体激动剂类药物中的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110368378A CN110368378A CN201910291117.2A CN201910291117A CN110368378A CN 110368378 A CN110368378 A CN 110368378A CN 201910291117 A CN201910291117 A CN 201910291117A CN 110368378 A CN110368378 A CN 110368378A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- iii
- mglur2
- jatamans valeriana
- valeriana rhizome
- mglur3
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000792914 Valeriana Species 0.000 title claims abstract description 73
- 235000017468 valeriana Nutrition 0.000 title claims abstract description 73
- 102100038352 Metabotropic glutamate receptor 3 Human genes 0.000 title claims abstract description 38
- 102100036837 Metabotropic glutamate receptor 2 Human genes 0.000 title claims abstract description 37
- 108010038445 metabotropic glutamate receptor 3 Proteins 0.000 title claims abstract description 37
- 108010038421 metabotropic glutamate receptor 2 Proteins 0.000 title claims abstract description 36
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 29
- 208000015114 central nervous system disease Diseases 0.000 claims abstract description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 23
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 22
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 21
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 18
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 16
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 15
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 10
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 claims description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 9
- HWJHWSBFPPPIPD-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.CCOCC HWJHWSBFPPPIPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 claims description 5
- 239000013078 crystal Substances 0.000 claims description 5
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 claims description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 5
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 4
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 claims description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 4
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 claims description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000002269 analeptic agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 208000020401 Depressive disease Diseases 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 2
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 claims 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 claims 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 20
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 19
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 17
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 11
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 210000003568 synaptosome Anatomy 0.000 description 10
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 description 6
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 6
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 5
- OZLGRUXZXMRXGP-UHFFFAOYSA-N Fluo-3 Chemical compound CC1=CC=C(N(CC(O)=O)CC(O)=O)C(OCCOC=2C(=CC=C(C=2)C2=C3C=C(Cl)C(=O)C=C3OC3=CC(O)=C(Cl)C=C32)N(CC(O)=O)CC(O)=O)=C1 OZLGRUXZXMRXGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010010914 Metabotropic glutamate receptors Proteins 0.000 description 4
- 102000016193 Metabotropic glutamate receptors Human genes 0.000 description 4
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 2
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000002114 high-resolution electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 238000002952 image-based readout Methods 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000009125 negative feedback regulation Effects 0.000 description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 2
- 210000001640 nerve ending Anatomy 0.000 description 2
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 2
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000003518 presynaptic effect Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 241000239290 Araneae Species 0.000 description 1
- 108090000312 Calcium Channels Proteins 0.000 description 1
- 102000003922 Calcium Channels Human genes 0.000 description 1
- 241000251204 Chimaeridae Species 0.000 description 1
- 108091006068 Gq proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000052606 Gq-G11 GTP-Binding Protein alpha Subunits Human genes 0.000 description 1
- 101001071429 Homo sapiens Metabotropic glutamate receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001032848 Homo sapiens Metabotropic glutamate receptor 3 Proteins 0.000 description 1
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 1
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 1
- 241000606264 Patrinia Species 0.000 description 1
- 235000019109 Patrinia villosa Nutrition 0.000 description 1
- 108010012944 Tetragastrin Proteins 0.000 description 1
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 1
- 102000014384 Type C Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010079194 Type C Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 241000606265 Valeriana jatamansi Species 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 210000004727 amygdala Anatomy 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001142 anti-diarrhea Effects 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N chloroform;methanol Chemical compound OC.ClC(Cl)Cl WORJEOGGNQDSOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005100 correlation spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000000994 depressogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000002451 electron ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 125000001033 ether group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000003919 heteronuclear multiple bond coherence Methods 0.000 description 1
- 238000005570 heteronuclear single quantum coherence Methods 0.000 description 1
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 150000003905 phosphatidylinositols Chemical class 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000001242 postsynaptic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000000018 receptor agonist Substances 0.000 description 1
- 229940044601 receptor agonist Drugs 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- RGYLYUZOGHTBRF-BIHRQFPBSA-N tetragastrin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)CCSC)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 RGYLYUZOGHTBRF-BIHRQFPBSA-N 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/22—Anxiolytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/24—Antidepressants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
- C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D311/94—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with rings other than six-membered or with ring systems containing such rings
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Neurology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明提供了蜘蛛香素E在制备mGluR2和mGluR3受体激动剂类药物中的用途。本发明蜘蛛香素E作用于mGluR2和mGluR3，能有效激动mGluR2和mGluR3，增加mGluR2和mGluR3受体表达水平，可用于制备mGluR2和mGluR3受体激动剂类药物；具有治疗mGluR2和mGluR3相关中枢神经系统疾病的作用，临床应用前景良好。
Description
技术领域
本发明涉及蜘蛛香素E的新用途，具体地，是在制备mGluR2和mGluR3 受体激动剂类药物中的用途。
背景技术
谷氨酸(glutamate,Glu)是脊椎动物中枢神经系统传导兴奋性冲动的重要神经递质，过量的释放谷氨酸可诱发神经元的严重损伤。代谢性谷氨酸受体(metabotropicglutamate receptors,mGluRs)，是G蛋白偶联受体，广泛分布于大脑突触前和突触后神经元细胞以及神经胶质细胞中，分为I、Ⅱ、Ⅲ，3 种亚型。mGluR2和mGluR3属于mGluRs亚型中的第Ⅱ组，当其被激活时，能通过负反馈调节机制调控谷氨酸的释放，对神经元可塑性、兴奋性以及细胞膜离子通道功能具有广泛影响。目前研究表明激活mGluR2和mGluR3具有抗抑郁、抗焦虑的作用(Lucas SJ et a1.Selective activation of either mGlu2 or mGlu3receptors can induce LTD in the amygdala [J].Neuropharmacology,2013,66(3):196-201；Effects of a metabotropic glutamate(2/3)receptor agonist(LY544344/LY354740)on panic anxiety induced by cholecystokinin tetrapeptide in healthyhumans:preliminary results. Psychopharmacology(Berl),2005,179(1):310-315.)。
蜘蛛香，中药名，为败酱科植物蜘蛛香(ValerianajatamansiJones)的干燥根茎和根。环烯醚萜类化合物为蜘蛛香的主要化学成分，具有理气止痛、消食止泻、祛风除湿、镇静安神等功效。蜘蛛香素E属于蜘蛛香环烯醚萜类化合物，其化学结构如下：
目前尚无蜘蛛香素E在制备mGluR2和mGluR3受体激动剂类药物的相关文献报道。
发明内容
本发明的技术方案是提供了蜘蛛香素E的新用途。
本发明提供了蜘蛛香素E在制备mGluR2和mGluR3受体激动剂类药物中的用途。
其中，所述的药物是预防或治疗mGluR2和mGluR3相关中枢神经系统疾病的药物。
其中，所述的中枢神经系统疾病包括焦虑症、抑郁症。
其中，所述的蜘蛛香素E的制备方法包括如下步骤：
(1)取蜘蛛香药材，乙醇提取，提取液浓缩，得乙醇提取物浸膏；
(2)将浸膏溶于水，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏；
(3)选取乙酸乙酯浸膏，采用硅胶柱层析分离，依次以氯仿：甲醇＝100:1-1:1(v/v)为洗脱剂梯度洗脱，得Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ八个洗脱部分；
(4)取组分Ⅲ，采用硅胶柱层析分离，依次以石油醚-丙酮＝30:1-1:1(v/v) 为洗脱剂梯度洗脱，根据薄层追踪，合并含有相似组分的洗脱液，得Ⅲ-A、Ⅲ-B、Ⅲ-C、Ⅲ-D、Ⅲ-E、Ⅲ-F六个洗脱部分；
(5)取组分Ⅲ-D，采用硅胶柱层析分离，依次以石油醚-丙酮＝30:1-1:1 (v/v)为洗脱剂梯度洗脱，根据薄层追踪，合并含有相似组分的洗脱液，得Ⅲ-D1、Ⅲ-D2、Ⅲ-D3、Ⅲ-D4四个洗脱部分；
(6)取组分Ⅲ-D2，采用凝胶色谱柱分离，进行梯度洗脱，得Ⅲ-D2-1 及Ⅲ-D2-2两个洗脱部分；
(7)取组分Ⅲ-D2-2，采用凝胶色谱柱分离，得白色晶体；将白色晶体溶用硅胶柱层析分离，用石油醚-丙酮＝5:1洗脱，重结晶，即得蜘蛛香素E。
其中，所述步骤(1)中，乙醇浓度为95％，药材与乙醇体积比为1:3，提取方式为冷浸提取；
和/或，所述步骤(2)中，石油醚与浸膏水溶液的体积比为1:2，乙酸乙酯与浸膏水溶液的体积比为1:2。
其中，所述的药物是以蜘蛛香素E为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
其中，所述的药物制剂是口服制剂。
本发明最后提供了一种制备mGluR2和mGluR3受体激动剂的药物组合物，它是由蜘蛛香素E为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂，优选地，所述制剂为口服制剂；所述药物是治疗焦虑症或抑郁症的药物。
本发明蜘蛛香素E作用于mGluR2和mGluR3，能有效激活mGluR2和 mGluR3，可用于制备mGluR2和mGluR3受体激动剂类药物；具有抗抑郁、抗焦虑的作用，临床应用前景良好。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
下面通过具体实施方式对本发明做进一步详细说明，但是并不是对本发明的限制，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
附图说明
图1蜘蛛香环烯醚萜对Vero-Ga15-mGluR2细胞内钙离子有增强作用；
图2蜘蛛香素E对Vero-Ga15-mGluR2细胞内钙离子有增强作用；
图3蜘蛛香环烯醚萜对Vero-Ga15-mGluR3细胞内钙离子有增强作用；
图4蜘蛛香素E对Vero-Ga15-mGluR3细胞内钙离子有增强作用；
图5透射电子显微镜鉴定大鼠大脑皮质突触体的结构；
图6蜘蛛香素E可抑制由KCl诱发的大鼠大脑皮质突触体内钙离予浓度的升高
具体实施方式
实施例1本发明蜘蛛香素E的制备
蜘蛛香药材粗粉，蜘蛛香购于贵州遵义市药材市场。
制备方法：
(1)取蜘蛛香药材，按药材溶剂体积比1:3倍加入95％工业乙醇，室温冷浸提取4次，每次24小时，浓缩后得到的蜘蛛香的乙醇提取物总浸膏；
(2)将制得的浸膏加入适量蒸馏水使其充分混悬，后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每种溶剂萃取3次，每次有机相与水相比为1:2:1；萃取得到有机相减压浓缩，分别得到石油醚部位浸膏、乙酸乙酯浸膏、正丁醇浸膏；用20cm×1.2m色谱柱，8kg柱层析硅胶湿法装柱，沉降完全后上样，选取乙酸乙酯部位，采用氯仿-甲醇梯度洗脱(氯仿：甲醇＝100:1-1:1)，得Ⅰ(9g)Ⅱ(56g)Ⅲ(120g)Ⅳ(102g)Ⅴ(22g)Ⅵ(22g)Ⅶ(59g)Ⅷ(112g)八个馏分；
(3)取第Ⅲ部分浸膏119g，称取180g柱层析硅胶进行拌样，经硅胶柱层析石油醚-丙酮(30:1-1:1)梯度洗脱后，TLC检识合并相同组分，得Ⅲ-A (8g)、Ⅲ-B(14g)、Ⅲ-C(21g)、Ⅲ-D(25g)、Ⅲ-E(13g)和Ⅲ-F(7g) 六段组分；
(4)取Ⅲ-D(25g)经硅胶柱层析，石油醚-丙酮(30:1-1:1)梯度洗脱后，经TLC检识、合并相同成分，得Ⅲ-D1(2.1g)、Ⅲ-D2(5.9g)、Ⅲ-D3 (3.6g)、Ⅲ-D4(4.5g)四部分馏分；
(5)取Ⅲ-D2经Sephadex LH-20凝胶柱层析得Ⅲ-D2-1及Ⅲ-D2-2；
(6) 取Ⅲ-D2-2再经Sephadex LH-20凝胶柱后，可见白色晶体；再经硅胶柱层析，石油醚-丙酮(5:1)等度洗脱后，再重结晶得到化合物蜘蛛香素E。
蜘蛛香E的鉴定：通过EI-MS、H-NMR、C-NMR、HR-ESI-MS、HR-ESI-MS 以及2D HSQC、COSY、HMBC、ROSEY图谱，及参考文献，通过SciFinder Scholar数据库检索，确定蜘蛛香素E为环烯醚萜类新结构化合物。
实施例2本发明蜘蛛香环烯醚萜类有效部位的制备
用70％乙醇蜘蛛香药材的干燥粉末进行浸提，先8倍量浸提24h，再用 6倍量浸提12h，浓缩后得到的蜘蛛香的乙醇提取物总浸膏。选用树脂D101 进行纯化，浸膏用水超声分散均匀，按比吸附量72mg/g上样，吸附流速 1BV/h，洗脱流速2BV/h，依次用6BV的水、4BV的60％乙醇和4BV的95％乙醇洗脱，收集95％乙醇洗脱液，减压回收乙醇得浸膏，40℃真空干燥，即得蜘蛛香环烯醚萜。
实施例3蜘蛛香素E作用于mGluR2和mGluR3受体的体外验证
1、材料
蜘蛛香素E、蜘蛛香环烯醚萜(采用实施例1、2的方法制备)， Vero-Ga15-mGluR2细胞、Vero-Ga15-mGluR3细胞购于北京赛诺博生物技术中心；阳性药物：mGluR2和mGluR3选择性激动剂(LY354740)购于MCE 公司；L-谷氨酸钠购于阿拉丁公司；Fluo-3/AM钙离子指示剂购于碧云天公司；Hoechst染料购于上海前程生物科技有限公司；检测平台为ThermoScientificTM高内涵药物筛选系统；检测的信号为细胞内钙离子的荧光强度。
2、实验方法
2.1细胞培养
将处于对数生长期的Vero-Ga15mGluR2细胞和Vero-Ga15-mGluR3细胞接种到96孔板中，每孔接种细胞悬液的体积为100uL，每孔接种的细胞数目为2×105个，然后将96孔板置于细胞培养箱(5％的CO2、37℃)中培养24h，当细胞融合度达95％左右时，进行实验。
2.2验证实验
实验设置正常对照组(不加药物)、Glu对照组(L-谷氨酸钠浓度为10 μM)、阳性对照组(LY354740浓度为20μM)，蜘蛛香素E干预组(高、中、低剂量组浓度梯度为6.8、3.4、1.7μg/mL)，蜘蛛香环烯醚萜干预组(高、中、低剂量组浓度梯度为25、12、6μg/mL)，加入不同浓度的各组药物。孵育24h。然后每孔加入钙离子探针0.1μL，孵育20分钟后，加入10mM Hoechst探针，染色并孵育10分钟。最后用高内涵药物筛选系统进行检测，按照说明进行操作，检测细胞内钙离子的钙离子荧光强度。
3、实验结果
本发明通过基于钙流的GPCR高通量药物筛选技术验证了蜘蛛香素E 对mGluR2和mGluR3受体的激动活性。
Vero-Ga15-mGluR2细胞和Vero-Ga15-mGluR3细胞嵌合体蛋白Ga15、 mGluR2、mGluR3。当mGluR2和mGluR3没有激活的时候，不能引起钙流变化。当mGluR2和mGluR3激活的时候，由于Ga15是含Gq蛋白亚基的蛋白嵌合体，当Ga15取代Gq蛋白亚基C末端的一些氨基酸，使得细胞同磷脂酶C(PLC)偶联，在磷脂酰肌醇代谢途径信号传递过程中产生钙信号，引起钙流变化。因此，通过检测钙流的变化可以间接反应mGluR2、mGluR3 是否被激活。
结果如图1、图2、图3、图4，图1表示蜘蛛香环烯醚萜有效部位对 Vero-Ga15-mGluR2细胞内钙离子的影响，图2表示蜘蛛香素E对 Vero-Ga15-mGluR2细胞内钙离子的影响，图3表示蜘蛛香环烯醚萜有效部位对Vero-Ga15-mGluR3细胞内钙离子的影响，图4表示蜘蛛香素E对 Vero-Ga15-mGluR3细胞内钙离子的影响。谷氨酸、阳性药、蜘蛛香素E、蜘蛛香环烯醚萜都能引起Vero-Ga15-mGluR2和Vero-Ga15-mGluR3细胞的钙流变化，对细胞内的钙离子有增强作用，都能激活mGluR2和mGluR3。因此，蜘蛛香素E可作为mGluR2和mGluR3的受体激动剂。
另外，相对于蜘蛛香环烯醚萜，蜘蛛香素E在较少的用量下就能激活 mGluR2和mGluR3，因此，蜘蛛香素E比蜘蛛香环烯醚萜的药效更加显著。
实施例4蜘蛛香素E对大脑皮质突触体内钙离子的影响
1、材料
蜘蛛香E、蜘蛛香环烯醚萜(采用实施例1、2的方法制备)，LY354740 购于MCE公司。
2、实验方法
采用梯度离心法制备大鼠大脑皮质突触体，并用透射电子显微镜鉴定其结构(如图5)。然后，取突触体悬液分别5等份，分为空白对照组、阳性对照组(LY354740)、蜘蛛香素E高、中、低剂量组(蜘蛛香素E浓度分别为13.5、6.8、3.4μg/mL)、蜘蛛香环烯醚萜低、中、高剂量组(蜘蛛香环烯醚萜浓度分别为6、12、25μg/mL)。每组加入不同浓度药物的突触体悬液200μL。同时，为了使突触体去极化，在悬液中加入KCl孵育1h，孵育结束后，分别加入Fluo-3/AM钙离子荧光指示剂，置于37℃恒温振荡培养箱中，孵育30min。最后，采用流式细胞仪进行钙离子FITC(fluorescein isothiocyanate)异硫氰基荧光素来检测钙离子荧光强度。
3、实验结果
在谷氨酸释放过程中，钙离子是关键的调节因子，钙离予通过神经末稍上电压依赖性钙通道内流在神经递质释放中发挥重要作用。而且mGluR2和 mGluR3受体主要存在于大脑皮质突触体前膜上。本实验应用钙荧光指示剂 fluo-3测定突触体钙离子，观察蜘蛛香素E对Kcl刺激后神经末梢钙离子变化的影响，从而了解其对在谷氨酸释放过程的作用。Kcl刺激后，使得突触体内的钙离子含量升高，而在神经递质释放过程中，谷氨酸属于钙依赖性释放，钙离子升高，谷氨酸释放速度加快。mGluR2和mGluR3受体主要存在于突触前膜，可以负反馈调节谷氨酸的释放，从而影响钙离子的浓度的变化。
结果如图6A、6B所示，A图表示蜘蛛香环烯醚萜用药后结果，B图表示蜘蛛香素E用药后结果。纵坐标表示Fluo-3/AM荧光，图中的各实验组的峰面积代表钙离子荧光强度。和正常组比较，阳性组、蜘蛛香环烯醚萜和蜘蛛香素E组的钙离子荧光强度均减少并具有显著差异。说明蜘蛛香环烯醚萜和蜘蛛香素E均可抑制由KCl诱发的大鼠大脑皮质突触体内钙离予浓度的升高(如图6A、6B)，与阳性组效果相似，提示其参与谷氨酸的释放调节，可能与突触前膜上的mGluR2和mGluR3受体有关。
综上，本发明蜘蛛香素E作用于mGluR2和mGluR3，能有效激活mGluR2 和mGluR3，增加mGluR2和mGluR3受体表达水平，可用于制备mGluR2 和mGluR3受体激动剂类药物；具有抗抑郁、抗焦虑的作用，临床应用前景良好。
Claims (8)
1.蜘蛛香素E在制备mGluR2和mGluR3受体激动剂类药物中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的药物是预防或治疗mGluR2和mGluR3相关中枢神经系统疾病的药物。
3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述的中枢神经系统疾病包括焦虑症、抑郁症。
4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的蜘蛛香素E的制备方法包括如下步骤：
(1)取蜘蛛香药材，乙醇提取，提取液浓缩，得乙醇提取物浸膏；
(2)将浸膏溶于水，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，得到石油醚浸膏、乙酸乙酯浸膏；
(3)选取乙酸乙酯浸膏，采用硅胶柱层析分离，依次以氯仿：甲醇＝100:1-1:1(v/v)为洗脱剂梯度洗脱，得Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ八个洗脱部分；
(4)取组分Ⅲ，采用硅胶柱层析分离，依次以石油醚-丙酮＝30:1-1:1(v/v)为洗脱剂梯度洗脱，根据薄层追踪，合并含有相似组分的洗脱液，得Ⅲ-A、Ⅲ-B、Ⅲ-C、Ⅲ-D、Ⅲ-E、Ⅲ-F六个洗脱部分；
(5)取组分Ⅲ-D，采用硅胶柱层析分离，依次以石油醚-丙酮＝30:1-1:1(v/v)为洗脱剂梯度洗脱，根据薄层追踪，合并含有相似组分的洗脱液，得Ⅲ-D1、Ⅲ-D2、Ⅲ-D3、Ⅲ-D4四个洗脱部分；
(6)取组分Ⅲ-D2，采用凝胶色谱柱分离，行梯度洗脱，得Ⅲ-D2-1及Ⅲ-D2-2两个洗脱部分；
(7)取组分Ⅲ-D2-2，采用凝胶色谱柱分离，得白色晶体；将白色晶体用硅胶柱层析分离，用石油醚-丙酮＝5:1洗脱，重结晶，即得蜘蛛香素E。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述步骤(1)中，乙醇浓度为95％，药材与乙醇体积比为1:3，提取方式为冷浸提取；
和/或，所述步骤(2)中，石油醚与浸膏水溶液的体积比为1:2，乙酸乙酯与浸膏水溶液的体积比为1:2。
6.根据权利要求1-5任意一项所述的用途，其特征在于：所述的药物是以蜘蛛香素E为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于：所述的药物制剂是口服制剂。
8.一种制备mGluR2和mGluR3受体激动剂的药物组合物，其特征在于：它是由蜘蛛香素E为活性成分，加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂，优选地，所述制剂为口服制剂；所述药物是治疗焦虑症或抑郁症的药物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810320557 | 2018-04-11 | ||
| CN2018103205571 | 2018-04-11 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110368378A true CN110368378A (zh) | 2019-10-25 |
Family
ID=68248616
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910291117.2A Pending CN110368378A (zh) | 2018-04-11 | 2019-04-11 | 蜘蛛香素E在制备mGluR2和mGluR3受体激动剂类药物中的用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110368378A (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1799564A (zh) * | 2005-09-13 | 2006-07-12 | 闫智勇 | 蜘蛛香及其提取物在制备治疗焦虑症的药物中的用途 |
| CN103145724A (zh) * | 2013-03-12 | 2013-06-12 | 西南交通大学 | 一种环烯醚萜类新化合物及其神经保护作用 |
| CN104086520A (zh) * | 2014-06-26 | 2014-10-08 | 西南交通大学 | 一种环烯醚萜类化合物及其制备方法和用途 |
-
2019
- 2019-04-11 CN CN201910291117.2A patent/CN110368378A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1799564A (zh) * | 2005-09-13 | 2006-07-12 | 闫智勇 | 蜘蛛香及其提取物在制备治疗焦虑症的药物中的用途 |
| CN103145724A (zh) * | 2013-03-12 | 2013-06-12 | 西南交通大学 | 一种环烯醚萜类新化合物及其神经保护作用 |
| CN104086520A (zh) * | 2014-06-26 | 2014-10-08 | 西南交通大学 | 一种环烯醚萜类化合物及其制备方法和用途 |
| CN104906083A (zh) * | 2014-06-26 | 2015-09-16 | 西南交通大学 | 环烯醚萜类化合物的新用途 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| CHAD J. SWANSON等: "Metabotropic glutamate receptors as novel targets for anxiety and stress disorders", 《NATURE REVIEWS DRUG DISCOVERY》 * |
| 张雪梅: "基于mGluR2和mGluR3受体激动作用对蜘蛛香环烯醚萜类成分抗焦虑机制研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
| 邹静: "Ⅱ、Ⅲ组mGluRs激动剂的神经保护作用及其机制研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
| 陈朝勇: "蜘蛛香醇提物化学成分及抗肿瘤活性研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69933016T2 (de) | Steroidale saponine zur behandlung der alzheimerischen krankheit | |
| Petkov et al. | Effects of Standarized Ginseng extract on learning, memory and physical capabilites | |
| DE60115032T2 (de) | Verwendung von spermatophyte pflanzenextrakte mit immunomoduelierender wirkung | |
| Zainol et al. | Profiling of Centella asiatica (L.) Urban extract | |
| Hu et al. | Danggui-Shaoyao-San and its active fraction JD-30 improve Aβ-induced spatial recognition deficits in mice | |
| Jiang et al. | Identification of Centella asiatica’s effective ingredients for inducing the neuronal differentiation | |
| Koko et al. | Immunosuppressive phenolic compounds from Hydnora abyssinica A. Braun | |
| Das et al. | Evaluation of Anti–Inflammatory, Anti–diabetic activity of Indian Bauhinia vahlii (stembark) | |
| Black et al. | N‐methyl‐d‐aspartate‐or glutamate‐mediated toxicity in cultured rat cortical neurons is antagonized by FPL 15896AR | |
| CN108403723B (zh) | 一种干预ad用的美洲大蠊提取物及其提取方法和应用 | |
| CN103655997A (zh) | 一种治疗卒中后抑郁症的舒肝健脑调郁片 | |
| CN107198724B (zh) | 一种沉香树籽萃取物、制备方法及其应用于抗过敏的用途 | |
| CN110368378A (zh) | 蜘蛛香素E在制备mGluR2和mGluR3受体激动剂类药物中的用途 | |
| Ying-Ying et al. | Deep chemical identification of phytoecdysteroids in Achyranthes bidentata Blume by UHPLC coupled with linear ion trap-Orbitrap mass spectrometry and targeted isolation | |
| CN108059592B (zh) | 去氧甘松香醇a及其制备方法与应用 | |
| JP3126162B2 (ja) | 神経細胞賦活物質の製法 | |
| CN106109536B (zh) | 用于神经退行性疾病或神经再生的中药组合物 | |
| CN111558007B (zh) | 一种玉米根提取物及其制备方法和应用 | |
| Zhou et al. | MS/MS molecular networking‐guided in‐depth profiling of triterpenoid saponins from the fruit of Eleutherococcus senticosus and their neuroprotectivity evaluation | |
| EP3897683B1 (en) | Cosmetic, pharmaceutical and nutraceutical use of an extract derived from cannabis sativa cell cultures | |
| CN106074668B (zh) | 用于神经退行性疾病或神经再生的中药制剂 | |
| CN103288914B (zh) | 中药饿蚂蝗提取物的制备及抗老年性痴呆药物用途 | |
| CN106667992B (zh) | 松柏醛或松柏醛和钒化合物组合物用于预防和治疗神经退行性病变的用途 | |
| Kim et al. | Shini-san inhibits mast cell-dependent immediate-type allergic reactions | |
| Jeong et al. | Modulation of neuronal activity by EGCG |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20191025 |