CN103181978B - 治疗癌症的冻干蜀羊泉 - Google Patents

Abstract

本发明涉及以冻干蜀羊泉为原料制备治疗肿瘤的药物，特征在于以冻干蜀羊泉全草或冻干蜀羊泉果为原料制备治疗肿瘤的药物，优选以冻干蜀羊泉果为原料制备治疗肿瘤的药物。冻干蜀羊泉的疗效好于晒干的蜀羊泉。

Description

治疗癌症的冻干蜀羊泉

技术领域

本发明涉及药品，特别涉及一种治疗癌症的冻干蜀羊泉，属医药技术领域。

背景技术

蜀羊泉为茄科植物青杞(Solanum septemlobum Bunge)的干燥地上部分。别名有：羊泉，青杞，漆姑草，红葵，野枸杞，野茄，小孩拳，红耳坠等。夏末采割，除去杂质，晒干。性苦、寒，归肝，胃经。具清热解毒之功效。用于热毒疮肿，咽喉肿痛，皮肤痒疹。

《本草纲目》中蜀羊泉项下恭曰：“此草俗名漆姑，叶以菊，花紫色，子类枸杞子，根如远志，无心有惨。”《中药大辞典》中为白英(白毛藤)和千年不烂心。《陕西中草药》中说在陕北叫蜀羊泉，陕南叫白毛藤，其基原植物是白英。《中国高等植物图鉴》中青杞项下别名有蜀羊泉。《中药材简介》中蜀羊泉为青柜。《全国中草药汇编》下册蜀羊泉项下别名有青把。《新编中药学》中蜀羊泉是青杞。本发明所述蜀羊泉为茄科植物青杞(Solanum septemlobum Bunge)。白英(Solanum lyratum Thunb)和千年不烂心（So1num dnlcamars L）,非本发明所述的蜀羊泉。

经过试验我们发现，冻干蜀羊泉抗癌活性高于晒干的蜀羊泉。

发明内容

本发明的目的是以蜀羊泉为原料制备高活性的治疗肿瘤的药物。本发明的目的是这样实现的，以冻干蜀羊泉为原料制备治疗肿瘤的药物。

以冻干蜀羊泉为原料制备治疗肿瘤的药物，特征在于以冻干蜀羊泉全草为原料制备治疗肿瘤的药物。

本发明所述的以冻干蜀羊泉为原料制备治疗肿瘤的药物，优选以冻干蜀羊泉果为原料制备治疗肿瘤的药物。

本发明所述的冻干，特征在于用以下工艺冻干：

鲜蜀羊泉全草，洗净去杂，切成小段；装盘，装盘重量为5-8㎏/㎡，逐渐降温至-20℃～–60℃进行预冻；升华干燥抽真空至系统绝对压力为40～60Pa，开始加热升温至30℃～60℃,升华干燥15～24小时；解析干燥保持物料温度在35℃～65℃，使含水量达到2～3%，得冻干蜀羊泉。

本发明所述的冻干，特征在于用以下工艺冻干蜀羊泉果：取蜀羊泉果用水洗净；装盘，装量为5-8Kg/㎡左右；冻结温度控制在-28～-32℃之间；达到控制温度后，立即开启真空泵抽真空至干燥室压力40-50Pa，然后启动加热开关，促进升华；升华的温度应控制在40℃以下；解析阶段的温度应控制在45℃以下，当物料温度与加热温度接近时干燥结束，得冻干蜀羊泉果。

冻干蜀羊泉的目的是解决晒干有效成分损失较大，抗癌活性低等技术问题。在蜀羊泉收获季节直接用鲜蜀羊泉制备本发明的药物可以降低成本。据此，本发明所述的冻干蜀羊泉在蜀羊泉收获季节本发明的冻干蜀羊泉可以替换为鲜蜀羊泉，或冻干蜀羊泉果可以替换为鲜蜀羊泉果,其用量按干品折算。

本发明所述的以冻干蜀羊泉为原料制备治疗肿瘤的药物，是在现有技术的基础上，采用中药制剂常规方法制备成任何可药用的制剂。例如，将冻干蜀羊泉全草或冻干蜀羊泉果粉碎，制成散剂冲服；将冻干蜀羊泉全草或冻干蜀羊泉果通过进一步提取，提取物加入辅料制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂，但这并不限制本发明的保护范围。

本发明所述的提取是低温提取；用水、乙醇、甲醇或它们的溶液回流提取、浸渍、渗漉。

本发明所述的以冻干蜀羊泉为原料制备治疗肿瘤的药物,是以冻干蜀羊泉为原料制备治疗肺癌、膀胱癌、子宫颈癌、食道癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、乳癌等多种癌症的药物。

下面通过试验例说明本发明的有益之处。

一、晒干蜀羊泉和冻干蜀羊泉水溶性浸出物和生物碱含量比较

1、制备晒干蜀羊泉和冻干蜀羊泉

制备晒干蜀羊泉：取蜀羊泉除去杂质，喷淋清水，少润，切段，晒干。

制备冻干蜀羊泉：

1）鲜蜀羊泉原料，去除杂质，切成2-5cm的小段；

2）将小段装盘，装盘重量为3㎏/㎡，逐渐降温至–40℃进行预冻，冻结速度约为0.5-1.0℃/min。

3）升华干燥抽真空至系统绝对压力为50Pa，开始加热升温至50℃,升华干燥24小时；

4)解析干燥保持物料温度在45℃，使含水量达到2～3%，得冻干蜀羊泉。

2、晒干蜀羊泉和冻干蜀羊泉水溶性浸出物、生物碱含量测定

1）采用《中国药典》2010年版一部，附录 XA 方法进行水溶性浸出物含量测定，结果：晒干蜀羊泉水浸出物含量为12.32%，冻干蜀羊泉水溶性浸出物含量为19.68%。

2）用以下方法测定晒干蜀羊泉和冻干蜀羊泉的生物碱含量。

取龙葵晒干药材和冻干龙葵药材样品细粉各约2.0g,精密称定,分别加入无水乙醇50ml,浸泡过夜(12时),超声提取40min,滤过,滤液置50℃恒温水浴上蒸干,残渣加20ml10%醋酸溶液使溶解，用等体积石油醚多次萃取,至石油醚层无色，水层转入蒸发皿中,用浓氨水调PH至9-10,置50℃恒温水浴上蒸干,残渣加20ml1mol盐酸乙醇溶液使溶解,回流水解1h,取出,放冷,用浓氨水调PH至9-10,再用氯仿萃取3次(30ml,20ml,10ml),合并氯仿萃取液,置50℃恒温水浴上蒸干,残渣用氯仿转移至10ml容量瓶中,氯仿定容,取5ml转移至分液漏斗中,加入7ml0.1%的溴甲酚绿乙醇溶液显色,收集氯仿层,多次萃取至氯仿层无色,合并氯仿层,置50℃恒温水浴上蒸干,残渣加氯仿少量多次溶解并定容至10ml，各在414nm处测吸光度值，计算蜀羊泉生物碱含量。

结果：晒干蜀羊泉和冻干蜀羊泉的生物碱含量分别为1.11%和2.42%，冻干蜀羊泉生物碱含量明显高于晒干蜀羊泉。

水溶性浸出物常被作为评价药材质量的重要指标。蜀羊泉中的生物碱是抗肿瘤的主要有效成分，其含量越高生物活性越高。以上实验结果可以看出冻干蜀羊泉水溶性浸出物含量明显高于晒干蜀羊泉，冻干蜀羊泉生物碱含量明显高于晒干蜀羊泉，进而可知药理活性高于晒干蜀羊泉。

二、晒干蜀羊泉和冻干蜀羊泉对人肝癌细胞株SMMC-7721，HepG2 和胃癌细胞株MGC-803 增殖的抑制作用试验。

1、制备晒干蜀羊泉和冻干蜀羊泉提取物  分别取晒干蜀羊泉和冻干蜀羊泉粉碎，各加水煎煮两次，第一次加水8倍量，煎煮2小时，第二次加水8倍量，煎煮1小时，合并药液，药液滤过，取滤液，浓缩至相对密度为1.10（60℃）时，加入乙醇使含醇量达到75％，沉淀，静置36小时，吸取上清液，回收乙醇，浓缩，干燥，粉碎；得晒干蜀羊泉和冻干蜀羊泉提取物。

 2、方法 MTT法 SMMC-7721、HepG2和MGC-803三种细胞株用含有10%灭活新生小牛血清，100U/ml的青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM培养基在37℃，5%CO2条件下培养，取对数生长期细胞用于实验。分别取浓度为2×106/ml的SMMC-7721、HepG2和MGC-803细胞株90μl于96孔板中培养，空白对照组加入10μlPBS，给药组分别加入10μl不同剂量的受试药液，药物终浓度(按生药计算)。设阴性对照组，阴性对照组是在不含细胞的培养液中加入不同剂量的药液。设6个平行孔，细胞给药后培养24h，每孔加入5.0 mg/mlMTT溶液20μl，振荡混匀后，置于培养箱中继续孵育4h，弃去各孔中的上清液，再加入100μlDMSO中止反应，振荡混匀10 min，待其各孔中的紫色结晶完全溶解后，用酶标仪在490nm处测定其吸光值(A490)。按下面公式计算细胞抑制率:

生长抑制率(%)=(N组OD均值-B组OD均值)—(T组OD均值-TC组OD均值)/N组OD均值-B组OD均值×100%。

3、结果见表1、表2、表3。

表1  对SMMC-7721的抑制率结果

抑制率（%）	10（μg/ml）	30（μg/ml）	50（μg/ml）
				冻干蜀羊泉	57.32	79.09	84.76
晒干蜀羊泉	48.73	54.80	68.99

表2  对HepG2的抑制率结果

抑制率（%）	10（μg/ml）	30（μg/ml）	50（μg/ml）
				冻干蜀羊泉	56.31	67.47	80.25
晒干蜀羊泉	45.75	57.94	68.36

表3  对MGC-803的抑制率结果

抑制率（%）	10（μg/ml）	30（μg/ml）	50（μg/ml）
				冻干蜀羊泉	67.18	78.64	86.70
晒干蜀羊泉	46.82	62.54	79.81

结果表明，晒干蜀羊泉和冻干蜀羊泉对人肝癌细胞株SMMC-7721，HepG2和胃癌细胞株 MGC-803增殖均有抑制作，冻干蜀羊泉疗效好于晒干蜀羊泉。

具体实施方式

以冻干蜀羊泉全草为原料制备治疗肿瘤的药物。

以冻干蜀羊泉果为原料制备治疗肿瘤的药物。

冻干蜀羊泉全草：鲜蜀羊泉全草，洗净去杂，切成小段，装盘重量为5-8㎏/㎡，逐渐降温至-20℃～–60℃进行预冻；升华干燥抽真空至系统绝对压力为40～60Pa，开始加热升温至30℃～60℃,升华干燥15～24小时；解析干燥保持物料温度在35℃～65℃，使含水量达到2～3%，得冻干蜀羊泉全草。

冻干蜀羊泉果：取蜀羊泉果用水洗净；装盘，装量为5-8Kg/㎡左右；冻结温度控制在-28～-32℃之间；达到控制温度后，立即开启真空泵抽真空至干燥室压力40- 50Pa，然后启动加热开关，促进升华；升华的温度应控制在40℃以下；解析阶段的温度应控制在45℃以下，当物料温度与加热温度接近时干燥结束，得冻干蜀羊泉果。

以冻干蜀羊泉为原料,采用中药制剂常规方法制备成任何可药用的制剂。

将冻干蜀羊泉全草或冻干蜀羊泉果粉碎，制成散剂冲服；

将冻干蜀羊泉全草或冻干蜀羊泉果通过提取，提取物加入辅料制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂。

用水低温提取制备冻干蜀羊泉。

分别用水、乙醇、甲醇或它们的溶液回流、浸渍、渗漉提取冻干蜀羊泉。

以冻干蜀羊泉为原料制备治疗肺癌、膀胱癌、子宫颈癌、食道癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、乳癌等多种癌症的药物。

实施例1

取新鲜蜀羊泉全草，洗净去杂，切成长度3-10cm的小段；装盘，装盘重量为5㎏/㎡，逐渐降温至-20℃℃进行预冻；升华干燥抽真空至系统绝对压力为40Pa，开始加热升温至30℃,升华干燥20小时；解析干燥保持物料温度在35℃，使含水量达到2～3%，得冻干蜀羊泉全草。

取冻干蜀羊泉全草，粉碎至细粉，分装为5g/袋，得蜀羊泉散剂。肺癌患者口服，每天3袋，分3次服。

实施例2

取新鲜蜀羊泉全草，洗净去杂，切成长度 15cm的小段；装盘，装盘重量为8㎏/㎡，逐渐降温至–60℃进行预冻；升华干燥抽真空至系统绝对压力为60Pa，开始加热升温至60℃,升华干燥24小时；解析干燥保持物料温度在65℃，使含水量达到2～3%，得冻干蜀羊泉全草。

取冻干蜀羊泉全草，粉碎至细粉，分装为10g/袋，得蜀羊泉散剂，肝癌患者口服，每天3袋，分3次服。

实施例3

取新鲜蜀羊泉全草，装盘，装盘重量为6㎏/㎡，逐渐降温至30℃进行预冻；升华干燥抽真空至系统绝对压力为50Pa，开始加热升温至50℃，升华干燥20小时；解析干燥保持物料温度在45℃，使含水量达到2～3%，得冻干蜀羊泉全草。

取冻干蜀羊泉全草，粉碎至粗粉，加入4倍量水，在20℃搅拌提取4小时，共2次，合并提取液，过滤，离心，离心液装入冻干箱，冻干。得冻干蜀羊泉全草提取物。

取提取物，加入适量糊精，制粒，减压真空干燥，整粒，分装为10g/袋，得冻干蜀羊泉颗粒剂，胃癌患者口服，每天2袋（相当于冻干蜀羊泉叶50g），分2次服。

实施例4

  采用ZG-100㎡型真空冷冻干燥机。取蜀羊泉果用水洗净；装盘，装量为7Kg/㎡左右；冻结温度控制在-28℃；达到控制温度后，立即开启真空泵抽真空至干燥室压力45Pa以下，然后启动加热开关，促进升华；升华的温度应控制在40℃以下；解析阶段的温度应控制在45℃以下，当物料温度与加热温度接近时干燥结束，得冻干蜀羊泉果。

取冻干冻干蜀羊泉果粉碎至粗粉，加入6倍量水，在20℃搅拌提取4小时，共2次，合并提取液，过滤，离心，离心液装入冻干箱，冻干。得冻干蜀羊泉果提取物。

取冻干蜀羊泉果提取物，粉碎，湿法制粒，减压真空干燥，整粒，加入滑石粉适量，压片，得冻干蜀羊泉果片，癌症患者口服，每天18片（相当于冻干蜀羊泉果40g），分3次服。

实施例5

采用ZG-100㎡型真空冷冻干燥机。选取新鲜蜀羊泉，洗净去杂，切成长度3cm的小段，装盘，装盘重量为7kg/㎡左右,逐渐降温2小时后至-28℃进行预冻；然后抽真空至系统绝对压力40Pa，开始加热升温至35℃，升华干燥15个小时；再保持物料温度35℃，当物料温度与加热温度接近时干燥结束，得冻干蜀羊泉。

取冻干蜀羊泉粉碎至粗粉，加入4倍量水，在40℃搅拌提取4小时，共2次，合并提取液，过滤，离心，离心液装入冻干。得冻干蜀羊泉提取物。

白花蛇舌草、威灵仙、白茅根各60kg，用水提取2次，第一次加8倍量水，提取2小时，第二次加6倍量水提取1小时，合并提取液，过滤，浓缩，干燥，加入冻干龙葵提取物30kg，混匀，制粒，干燥，整粒，加入滑石粉适量，压片，每片0.4g。用于治食道癌，每天12片，分3次服。有效率80%。

实施例6

取实施例4制得的冻干蜀羊泉提取物，加入适量糊精，制粒，减压真空干燥，整粒，分装为10g/袋（相当于冻干蜀羊泉25g），得颗粒剂，用于治疗肺癌患，每天2袋，分2次服，1个月为一疗程。

实施例7

取实施例4制得的冻干蜀羊泉提取物，加入适量甲基纤维素，制粒，减压真空干燥，整粒，装入胶囊，得冻干蜀羊泉胶囊，前列腺炎患者口服，每天15粒（相当于冻干龙葵15g），分3次服，7天治愈。

实施例8 

取冻干蜀羊泉，加水煎煮两次，第一次加水8倍量，煎煮2小时，第二次加水8倍量，煎煮1小时，合并药液，药液滤过，取滤液，浓缩至相对密度为1.10（60℃）时，加入乙醇使含醇量达到75％，沉淀，静置36小时，吸取上清液，回收乙醇，浓缩，干燥，粉碎；得蜀羊泉提取物。

取蜀羊泉提取物，加入羧甲基淀粉钠，淀粉糊制粒，干燥，整理，加入滑石粉适量,混匀，压片。每片相当于龙葵2g。用于治疗肝癌患者，每次3片，每日3次。1个月为1疗程，总有效率为70.88%。

Claims (1)

1.冻干蜀羊泉制备治疗肿瘤的药物的方法，其特征在于由单一味冻干蜀羊泉通过以下方法制备：

1）取蜀羊泉果用水洗净；装盘，装量为7kg/㎡；冻结温度控制在-28℃；达到控制温度后，立即开启真空泵抽真空至干燥室压力45Pa以下，然后加热促进升华，升华的温度应控制在40℃以下，解析阶段的温度控制在45℃以下，当物料温度与加热温度接近时干燥结束，得冻干蜀羊泉果；

2)取冻干蜀羊泉果粉碎至粗粉，加入6倍量水，在20℃搅拌提取4小时，共2次，合并提取液，过滤，离心，离心液装入冻干箱，冻干，得冻干蜀羊泉果提取物；

3）取冻干蜀羊泉果提取物，粉碎，湿法制粒，减压真空干燥，整粒，加入滑石粉适量，压片，得冻干蜀羊泉果片。