CN104042678A - 一种治疗高脂血症的药物组合物及制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗高脂血症的药物组合物及其制备方法，所述的药物组合物按以下组分及重量比组成：白术内酯1～20重量份，地不容总生物碱2～50重量份。本发明由天然药用原料的有效成分或其药用原料的有效成分的提取物组合而成，其组成简单，疗效肯定，无须煎煮服用，在制备成片剂、胶囊、丸剂、颗粒剂、口服液后便于携带，且服用方便。本发明组合物与传统天然药物配方相比具有杂质含量少，纯度高，作用机制明确，性状稳定，在产业化时能更好的控制产品质量等优点。

Description

一种治疗高脂血症的药物组合物及制备方法和用途

技术领域

本发明属于药物领域，涉及一种治疗高脂血症的药物组合物，特别是涉及一种以中药饮片提取物为原料制成的用于治疗高脂血症的药物组合物及制备方法。

背景技术

高脂血症是血液中脂蛋白异常增加的一种症状，是目前心血管系统中常见的疾病之一，主要原因是体内脂质代谢障碍引起高密度脂蛋白下降，使消除血脂的能力下降，从而引起血液中甘油三酯、胆固醇升高，并伴有形体肥胖、胸闷、头重、眩晕、腹胀、纳呆等症状。该疾病是引起动脉粥样硬化，从而继发高血压、冠心病、脑卒中等严重心脑血管疾病、糖尿病、脂肪肝等病变的基础，也是目前治疗比较棘手的一种疾病。

目前国内外治疗高脂血症的西药主要选用他汀类、贝特类和烟酸类药物治疗高血脂症。他汀类药物属于HMG-CoA还原酶抑制剂，为临床治疗高脂血症的首选药物，但该类药物在有效降脂的同时往往会伴随肝功下降、肾功能损害、肌肉疼痛等毒副作用。贝特类药物对降低血中甘油三酯的含量疗效确切，但它对降低血中胆固醇含量的作用则明显弱于他汀类，且在用药过程中常常导致腹胀、腹泻等胃肠不适症状，长期服用可致肝肾功损害及促使胆结石的形成。烟酸类药物一方面可使脂肪组织的脂解作用减慢，另一方面还能在辅酶A的作用下与甘氨酸合成烟尿酸，从而干扰胆固醇的合成。因此，烟酸类药物仅适用于治疗高甘油三酯血症及以甘油三酯升高为主的混合性高脂血症，且在临床使用时常常出现面部潮红、皮肤灼热或瘙痒等副作用，故临床上已经较少使用烟酸类药物治疗高脂血症。

对于高脂血症的治疗，中医药通过辨证论治往往会取得满意的临床疗效，制药领域已在积极开发具有类似作用的中成药。中国专利200710065482.9公布了一种治疗高脂血症的中成药，其配方由茵陈、灵芝、败酱草、猪苓、黄芪、生山楂、泽泻、丹参、生大黄、桃仁、柴胡、陈皮组成。中国专利200710056408.0公布了一种治疗高脂血症的中药，该配方是由桂枝、茯苓、赤芍、丹皮、桃仁、麦芽、山药、山楂、生地、玄参、麦冬、陈皮、菖蒲、甘草、荷叶组成。中国专利200710017931.2公布了一种治疗高脂血症的中药及其制剂，该制剂的配方是由山楂、泽泻、大黄、稀针嗜蓝孢孔菌、三七、蜈蚣组成。虽然上述专利配方对高脂血症患者取得了较好的临床疗效，但是上述配方中药物较多，在工业化生产时很难有效的控制其杂质含量，故临床上急需一种药物少，易于进行工业化大生产的药物组合物。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术的不足，提供一种组成简单，且由天然药用原料的有效成分或其药用原料的有效成分的提取物组合而成的具有治疗高脂血症的药物组合物。该药物组合物具有疗效好，无毒副作用，不易产生耐受性，服用方便，普遍适用于高脂血症患者。

本发明的另一个目的在于提供一种该药物组合物的制备方法和用途。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种治疗高脂血症的药物组合物，它是由以下组分及重量比的原料组成：白术内酯1～20重量份，地不容总生物碱2～50重量份；优选地，白术内酯5～15重量份，地不容总生物碱10～40重量份；优选地，白术内酯8～12重量份，地不容总生物碱20～30重量份；优选地，白术内酯1重量份，地不容总生物碱8重量份。

一种制备上述任意一项所述的治疗高脂血症的药物组合物的方法，它包括以下步骤：

S1：按上述组分及重量比称取白术内酯和地不容总生物碱；

S2：将原料混合均匀后，加入药学上可接受的辅料制备成药学上常用的药物制剂。

本发明的药物组合物可以根据制药领域的常规方法制备成任何一种药剂学上所述的剂型；本发明的药物组合物可以通过口服、吸入或肠外给药的方式施用于患者。口服给药时可以制备成片剂、胶囊剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、糖浆或口服液等；在肠外给药时可以制备成冻干粉针及注射液等。本发明所述的药学上可接受的辅料包括淀粉、硬脂酸镁、糊精和微晶纤维素，本发明还提供了该药物组合物在制备治疗高脂血症药物中的用途。

为使上述剂型能够实现，需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料，例如：填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、防腐剂等，填充剂包括：淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等，崩解剂包括：淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等，润滑剂包括：硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等，助悬剂包括：聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等，粘合剂包括，淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素等，甜味剂包括：糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等，矫味剂包括：甜味剂及各种香精，防腐剂包括：尼泊金类、苯甲酸、苯甲酸钠、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等。

本发明所述的白术内酯是从中药饮片白术药材中提取分离得到的有效成分，地不容总生物碱是从中药材地不容中提取分离得到的有效成分。所述白术为菊科植物白术的干燥根茎。所述地不容为防己科植物地不容的块根，别名为解毒子(《唐本草》)，地不荣(《滇南本草图说》)，地芙蓉(《植物名实图考》)，乌龟梢、金丝荷叶(《滇南本草图谱》)，地乌龟(《昆明药植调查报告》)，金线吊乌龟、山乌龟、地胆(《滇南本草》整理本)，抱母鸡、一文钱、荷叶暗消、乌龟抱蛋(《云南中草药》)，金不换(《云南中草药选》)。

本发明的有益效果是：本发明组合物为有效成分的提取物，其组成简单，无须煎煮服用，在制备成片剂、胶囊、丸剂、颗粒剂、口服液后便于携带，且服用方便；本发明组合物为有效成分的提取物，与天然药物配方相比其杂质含量相对较少，作用机制更加明确，在产业化时则能更好的控制产品质量；本发明组合物经药效实验验证表明白术内酯、地不容总生物碱在单独应用时对高脂血症的相关指标改善作用不明显，但是两种成分按本发明比例混合后，能够明显降低高脂模型小鼠血脂水平，对高脂血症疾病具有良好的治疗作用，表明白术内酯和地不容总生物碱按本发明比例配伍后具有协同增效的作用。

具体实施方式

下面结合实施例进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。

实施例1：白术内酯的提取方法

称取白术药材粉末250g，用500ml水在室温下浸泡24h，然后超声30min用300目的滤布过滤得到提取液。滤渣再加250ml水超声30min，用滤布再过滤，如此重复一次。经过三次超声提取白术内酯之后，白术内酯已基本提取完全。提取液在65℃减压浓缩，得浓缩提取液500ml。浓缩提取液用200ml正已烷70℃下回流提取1.5h后，用分液漏斗分离，浓缩提取液再用正已烷重复回流2次。合并正已烷，减压回收正已烷后得到正己烷浓缩液10ml，在室温下冷却，得淡黄色针晶，即白术内酯粗品。该针晶经正己烷加热溶解重结晶纯化后得到白色针晶，即白术内酯精制品。除按上述方法制备白术内酯外，也可以用其它常规提取分离方法制备白术内酯。

实施例2：地不容总生物碱的提取方法

称取地不容药材粗粉200g，先用50ml的0.5％的稀硫酸溶液进行溶胀，溶胀完毕后，将药材逐层放入渗漉筒中，缓慢加入400ml的0.5％的稀硫酸溶液浸渍12h；浸渍完毕后开始渗漉，渗漉速度为5ml/min，当渗漉至渗漉液与碘化铋钾试剂反应无沉淀产生时，停止渗漉，共收集渗漉液，用浓氨水调渗漉液pH值至9～10，产生大量沉淀，抽滤，得沉淀于真空干燥器中在40℃下干燥至恒重，得到地不容总生物碱粗品；将地不容总生物碱粗品用大孔树脂进行分离纯化，得到地不容总生物碱精制品。除按照上述方法提取地不容总生物碱之外，也可以采用酸水法、超声法等常规方法提取地不容总生物碱。

实施例3：

称取原料白术内酯1g，地不容总生物碱2g，加入辅料淀粉5g制粒，硬脂酸镁0.4g，糊精2.5g、微晶纤维素2.5g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例4：

称取原料白术内酯5g，地不容总生物碱10g，加入辅料淀粉60g制粒，硬脂酸镁1.5g，糊精10g、微晶纤维素10g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例5：

称取原料白术内酯8g，地不容总生物碱20g，加入辅料淀粉100g制粒，硬脂酸镁3g，糊精50g、微晶纤维素50g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例6：

称取原料白术内酯10g，地不容总生物碱25g，加入辅料淀粉160g制粒，硬脂酸镁5g，糊精80g、微晶纤维素80g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例7：

称取原料白术内酯12g，地不容总生物碱30g，加入辅料淀粉200g制粒，硬脂酸镁4g，糊精100g、微晶纤维素100g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例8：

称取原料白术内酯15g，地不容总生物碱40g，加入辅料淀粉200g制粒，硬脂酸镁6g，糊精100g、微晶纤维素100g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例9：

称取原料白术内酯20g，地不容总生物碱50g，加入辅料淀粉250g制粒，硬脂酸镁10g，糊精120g、微晶纤维素120g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例10：

称取原料白术内酯1g，地不容总生物碱8g，加入辅料淀粉10g制粒，硬脂酸镁1g，糊精5g、微晶纤维素5g，均匀制得颗粒，压片，得到片剂。

实施例11：

称取原料白术内酯30g，地不容总生物碱80g，加入辅料淀粉300g制粒，硬脂酸镁4g，糊精100g、微晶纤维素100g，均匀制得颗粒，制备得到颗粒剂。

实施例12：

称取原料白术内酯50g，地不容总生物碱100g，加入辅料淀粉600g制粒，硬脂酸镁8g，糊精200g、微晶纤维素150g，均匀制得颗粒，制备得到颗粒剂。

实施例13：

称取原料白术内酯60g，地不容总生物碱120g，加入辅料淀粉700g制粒，硬脂酸镁8g，糊精220g、微晶纤维素200g，均匀制得颗粒，制备得到散剂。

实施例14：

称取原料白术内酯80g，地不容总生物碱140g，加入辅料淀粉800g制粒，硬脂酸镁10，糊精240g、微晶纤维素220g，均匀制得颗粒，制备得到散剂。

实施例15：

称取原料白术内酯100g，地不容总生物碱150g，加入辅料淀粉1000g制粒，硬脂酸镁15，糊精300g、微晶纤维素300g，均匀制得颗粒，制备得到口服液

实施例16：

称取原料白术内酯10g，地不容总生物碱50g，加入辅料淀粉200g制粒，硬脂酸镁4g，糊精100g、微晶纤维素100g，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例17：

称取原料白术内酯20g，地不容总生物碱60g，加入辅料淀粉300g制粒，硬脂酸镁4g，糊精100g、微晶纤维素100g，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例18：

称取原料白术内酯30g，地不容总生物碱80g，加入辅料淀粉300g制粒，硬脂酸镁4g，糊精100g、微晶纤维素100g，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例19：

称取原料白术内酯50g，地不容总生物碱100g，加入辅料淀粉600g制粒，硬脂酸镁8g，糊精200g、微晶纤维素150g，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例20：

称取原料白术内酯60g，地不容总生物碱120g，加入辅料淀粉700g制粒，硬脂酸镁8g，糊精220g、微晶纤维素200g，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例21：

称取原料白术内酯80g，地不容总生物碱140g，加入常规药用辅料制备得到冻干粉针。

实施例22：

称取原料白术内酯100g，地不容总生物碱150g，加入常规药用辅料制备得到注射液。

实施例23：

称取原料白术内酯1g，地不容总生物碱8g，加入辅料淀粉10g制粒，硬脂酸镁1g，糊精5g、微晶纤维素5g，均匀制得颗粒，装入胶囊，得到胶囊剂。

实施例24：

称取原料白术内酯1g，地不容总生物碱8g，加入常规药用辅料制备得到冻干粉针。

实施例25：

称取原料白术内酯1g，地不容总生物碱8g，加入常规药用辅料制备得到注射液。

上述片剂、胶囊剂均可以按照常规制备方法制备成规格为5mg/片、10mg/片、20mg/片、0.5g/片，或制备成规格为5mg/粒、10mg/粒、20mg/粒、0.5g/粒等不同规格。

下面通过具体的药学试验来证明本发明的有益效果：

本发明所述的白术内酯和地不容总生物碱可以采用实施例1和实施例2的方法制备，也可以常规的药学方法制备白术内酯和地不容总生物碱，只要是将这两种有效成分组合配伍，特别是按照本发明的剂量比例进行配伍，均会实现本发明的技术效果。

1.本发明药物组合物对实验性高脂模型小鼠的降脂实验

1.1材料

1.1.1药物与试剂

白术内酯和地不容总生物碱为自制品，方法参照实施例1和2制备，辛伐他汀:规格5mg/片(国药准字H20065118)，山东罗欣药业股份有限公司提供。蛋黄乳剂:75％蛋黄生理盐水混悬液；高脂乳剂:20％胆固醇、40％猪油、1％丙硫氧嘧啶、20％猪胆酸钠溶液(浓度10％)、1％吐温、2％丙二醇，加蒸馏水至100mL组成；胆固醇：成都科龙化工试剂厂，050505；猪胆酸钠：北京奥博星生物技术责任有限公司，20030105；丙硫氧嘧啶：南通精华制药有限公司，050302。猪油：自制；TG试剂盒：四川迈克科技有限责任公司，1105051、0605031；TC试剂盒：四川迈克科技有限责任公司，0805031、0905041。

1.2.1仪器

BASIC自动生化分析仪，SECOMAM；MICROCL17微量离心机(美国Thermo公司)；AR2130电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；精宏XMTD-8222水浴锅。

1.3.1动物

ICR小鼠，普通级，雄性，体重20～25g，四川省医学科学院实验动物研究所，川实动管质第15号。

1.2实验方法及结果

1.2.1不同比例配伍样品对高脂乳剂所致高脂模型小鼠血脂水平的影响

选用健康雄性ICR种小鼠80只，按体重随机分为8组，即空白组、模型组、辛伐他汀组、白术内酯、地不容总生物碱、组合物高剂量组(白术内酯+地不容总生物碱)、中剂量组合低剂量组，每组10只。第1阶段，除正常对照组外，其余各组动物均灌胃给予高脂乳剂0.5mL/只，连续10d，末日禁食，取血分离血清检测模型组的血脂。第2阶段，除正常对照组外，各组动物每日给予高脂乳剂，正常对照组、模型组灌胃给予同等体积的蒸馏水，各给药组灌胃给予相应的药物，连续给药2周。末次给药前小鼠禁食不禁水12h，末次给药后1h小鼠摘眼球取血，3000r/min离心5min，分离血清，按照试剂盒说明进行血清TC、TG测定。结果见表1。

表1 不同实验样品对高脂乳剂所致高脂模型小鼠血脂水平的影响

注：与模型组比较，**P<0.01；*P<0.05

表1结果表明，灌胃高脂乳剂10d可以造成模型小鼠TG、TC的显著升高，说明造模成功。白术内酯组在单独应用时对模型小鼠的TG、TC有降低趋势，但无统计学意义，地不容总生物碱在单独应用时对模型小鼠的TG有明显降低作用，对TC有降低趋势，但无统计学意义。将白术内酯和地不容总生物碱在配伍使用后，则具有明显的降低模型小鼠的TG、TC的作用。实验结果表明，本发明的组合物能明显降低模型小鼠升高的TG、TC值，对高脂血证具有较好的治疗作用。

2.对高脂血症大鼠模型的实验研究

2.1实验材料

药物、试剂与仪器均同实验1。

2.2实验动物

SD大鼠，SPF级，雄性，体重200～220g，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，合格证号scxk(沪2003-0003)。

2.3实验方法

高脂乳剂的制备：高脂乳剂组成:10％胆固醇、1％丙硫氧嘧啶、20％猪油、2％猪胆酸钠、20％吐温、20％丙二醇，加蒸馏水至100mL配制而成。制备方法:取猪油80g置于500mL烧杯中，加热溶化，加入40g胆固醇溶化，再加入8g胆酸钠和4g丙硫氧嘧啶，充分搅匀，然后加入80mL吐温-80、1,2丙二醇及适量蒸馏水至400mL，充分混匀，即成，4℃冰箱保存，临用前水浴加热融化使用。

2.4实验分组与给药

选用健康SD雄性大鼠80只，体重200～220g，SPF级，按体重分层随机分为8组:正常对照组、模型对照组、模型+白术内酯、模型+地不容总生物碱、模型+组合物高剂量组(白术内酯+地不容总生物碱)、模型+组合物中剂量组、模型+组合物低剂量组和模型+辛伐他汀组，每组10只动物。各组动物连续灌胃给药10天，给药体积为1～1.06mL/100g。除正常对照组每日灌胃给予蒸馏水两次外，其余各组均灌胃给予高脂乳剂1mL/100g，连续12天。模型+白术内酯、模型+地不容总生物碱和模型+辛伐他汀组的给药剂量均5mg/kg^-1，模型+组合物高剂量组(白术内酯+地不容总生物碱)、模型+组合物中剂量组、模型+组合物低剂量组的给药剂量分别按照10mg/kg^-1、5mg/kg^-1和2.5mg/kg^-1，连续给药12天。

2.5样本处理

实验第13天，末次给药前大鼠禁食不禁水8h，末次给药后60min，大鼠股动脉取血，离心分离血清，冰冻保存待测，所有血清样本在1h内分离完毕。同时迅速取出大鼠肝脏，冷生理盐水洗净血液，滤纸吸尽水分，称重，计算肝脏指数，然后迅速将肝脏分为3份，2份-20℃冻存备用，1份进行肝脏组织TC、TG含量测定，1份采用实时荧光PCR方法进行ABCA₁、HMG-CoA基因表达测定；第3份置入10％甲醛溶液中固定。同时解剖取出大鼠心脏、肾脏和脑组织，10％甲醛固定，留作病理形态学的观察。

2.6指标检测

按照试剂盒的说明，采用酶法测定血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量；采用免疫透射比浊法测定血清载脂蛋白A₁(apoA₁)、载脂蛋白B(apoB)含量。肝脏组织TC、TG含量测定时，先采用甲醇:丙酮(1:1)溶液制备20％的肝脏匀浆，离心取上清液，然后按试剂盒的说明测定TC、TG含量。

2.7统计学处理

采用SPSS17.0软件进行处理，实验结果以均数±标准差表示，采用单因素方差分析，组间采用t检验。

2.8实验结果

2.8.1各给药组对高脂血症大鼠血脂水平的影响

大鼠连续给予高脂乳剂12天，可使血清中TC、TG、LDL-C含量明显高于正常对照组(P<0.01)，并使血清HDL-C含量低于正常对照组(P>0.05)，提示高脂血症模型的成功。辛伐他汀组能显著降低模型动物血清TC、TG水平(P<0.01)，对LDL-C也有降低作用，但无统计学意义(P>0.05)，对血清HDL-C水平无明显影响。白术内酯组对模型动物血清TC、TG、LDL-C值有降低趋势，但无统计学意义(P>0.05)，对血清HDL-C水平无明显影响。地不容总生物碱对动物血清TC、TG值有降低趋势，但无统计学意义(P>0.05)，对LDL-C值有明显的降低作用(P<0.05)。本发明组合物高、中、低剂量组对模型动物血清TC、TG、LDL-C值有降低趋势(P<0.05)，具有统计学意义，对LDL-C无明显的影响(结果见表2)。

表2 各给药组对高脂血症大鼠血脂水平的影响

与空白组比较，*P<0.05；**P<0.01；与模型组比较，▲P<0.05；▲▲P<0.01。

2.8.2各给药组对高脂血症大鼠载脂蛋白含量的影响

大鼠连续给予高脂乳剂10天，模型动物血清中apoA₁含量明显低于正常对照组(P<0.05)，而apoB含量显著高于正常对照组(P<0.01)，提示高脂血症模型的成功。组合物高剂量、组合物剂量中剂量组、组合物低剂量组及辛伐他汀组能显著降低模型动物血清apoB水平(P<0.05)。白术内酯组对模型动物血清apoA1有提高趋势(P>0.05)，对血清apoB降低趋势(P>0.05)、地不容总生物碱组对模型动物血清apoA1水平有提高趋势(P<0.05)，对血清apoB水平有降低作用(P<0.05)(结果见表3)。

表3 各给药组对高脂血症大鼠载脂蛋白含量的影响

与空白组比较，*P<0.05；**P<0.01；与模型组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01。

2.8.3各给药组对高脂血症大鼠肝脏TC、TG含量的影响

大鼠连续给予高脂乳剂10天，模型动物肝脏中TC、TG含量明显高于正常对照组(P<0.05)，提示高脂血症模型的成功。辛伐他汀组和组合物高剂量、中剂量组能明显下调模型动物肝脏中升高的TC、TG含量(P<0.05)，地不容总生物碱和组合物低剂量组对模型动物肝脏中TC、TG含量有下调趋势，但是无统计学意义(结果见表4)。

表4 各给药组对高脂血症大鼠肝脏TC、TG含量的影响

与空白组比较，*P<0.05；**P<0.01；与模型组比较，▲P<0.05；▲▲P<0.01。

2.8.4各给药组对高脂血症大鼠体重及肝脏指数的影响

大鼠连续给予高脂乳剂10天，与正常对照组比较，模型组动物的体重显著降低(P<0.01)，提示高脂乳剂的给予会影响动物的胃肠吸收功能，从而影响生长发育，各给药组对模型动物体重的减轻无明显改善作用(P>0.05)。与正常对照组比较，模型对照组的肝脏指数有降低趋势，但无统计学意义，各给药组在与模型组比较差异均无统计学意义。(结果见表5)。

表5 各给药组对高脂血症大鼠体重及肝脏指数的影响

与空白组比较，*P<0.05；**P<0.01；与模型组比较，▲P<0.05；▲▲P<0.01。

3.不同配伍比例对高脂血症大鼠模型的实验研究

3.1实验材料

药物、试剂与仪器均同实验1。

3.2实验动物

SD大鼠，SPF级，雄性，体重200～220g，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，合格证号scxk(沪2003-0003)。

3.3实验方法

高脂乳剂的制备同实验1。

3.4实验分组与给药

选用健康SD雄性大鼠104只，体重200～220g，SPF级，按体重分层随机分为8组:正常对照组、模型对照组、白术内酯组、地不容总生物碱、实验A组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:1)、实验B组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:2)、实验C组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:5)、实验D组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:10)、实验E组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:20)、实验F组(白术内酯：地不容总生物碱＝2:1)、实验G组(白术内酯：地不容总生物碱＝5:1)、实验H组(白术内酯：地不容总生物碱＝10:1)、实验I组(白术内酯：地不容总生物碱＝20:1)，每组8只动物。各组动物连续灌胃给药10天，给药体积为1～1.06mL/100g。除正常对照组每日灌胃给予蒸馏水两次外，其余各组均灌胃给予高脂乳剂1mL/100g，连续12天。各给药组的给药总剂量均为5mg/kg^-1，即白术内酯组给药剂量5mg/kg^-1，地不容总生物碱组给药剂量5mg/kg^-1，实验A组(白术内酯2.5mg：地不容总生物碱2.5mg＝1:1)给药剂量5mg/kg^-1，实验B组(白术内酯1.67mg：地不容总生物碱3.33＝1:2)，以此计算各组的给药比例剂量，连续给药12天。

3.5样本处理

实验第13天，末次给药前大鼠禁食不禁水8h，末次给药后60min，大鼠股动脉取血，离心分离血清，冰冻保存待测，所有血清样本在1h内分离完毕。同时迅速取出大鼠肝脏，冷生理盐水洗净血液，滤纸吸尽水分，然后迅速将肝脏分为3份，2份-20℃冻存备用，1份进行肝脏组织TC、TG含量测定，1份采用实时荧光PCR方法进行ABCA₁、HMG-CoA基因表达测定；第3份置入10％甲醛溶液中固定。同时解剖取出大鼠心脏、肾脏和脑组织，10％甲醛固定，留作病理形态学的观察。

3.6指标检测

按照试剂盒的说明，采用酶法测定血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。肝脏组织TC、TG含量测定时，先采用甲醇:丙酮(1:1)溶液制备20％的肝脏匀浆，离心取上清液，然后按试剂盒的说明测定TC、TG含量。

3.7统计学处理

采用SPSS17.0软件进行处理，实验结果以均数±标准差表示，采用单因素方差分析，组间采用t检验。

3.8实验结果

3.8.1各给药组对高脂血症大鼠血脂水平的影响

大鼠连续给予高脂乳剂12天，可使血清中TC、TG、LDL-C含量明显高于正常对照组(P<0.01)，并使血清HDL-C含量低于正常对照组(P>0.05)，提示高脂血症模型的成功。白术内酯和地不容总生物碱在单独应用时对动物血清TC、TG、LDL-C及模型大鼠肝脏TC、TG含量影响不明显，将白术内酯和地不容总生物碱组合配伍则有明显改善，特别是在白术内酯剂量减少，地不容总生物碱剂量增加的情况配伍，其协同增效作用更为明显。(结果见表6)。

表6 各给药组对高脂血症大鼠血脂水平的影响

与空白组比较，*P<0.05；**P<0.01；与模型组比较，▲P<0.05；▲▲P<0.01。

上述实验结果表明，实验B组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:2)、实验C组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:5)、实验D组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:10)的效果最为显著，表明白术内酯与地不容总生物碱在1:2-1:10此范围内疗效最为显著。在总给药剂量相同的条件下，当白术内酯与地不容总生物碱在比例2:1-5:1此范围内，两种活性成分具有协同效果，对高脂血症具有明显的治疗作用，当白术内酯与地不容总生物碱在比例10:1-20:1此范围内时，则对高脂血症没有明显的治疗作用，表明在增加白术内酯的剂量，减少地不容总生物碱的剂量时，其协同增效的作用逐渐降低。

3.8.2各给药组对高脂血症大鼠肝脏TC、TG含量的影响

大鼠连续给予高脂乳剂10天，模型动物肝脏中TC、TG含量明显高于正常对照组(P<0.05)，提示高脂血症模型的成功。在白术内酯剂量减少，地不容总生物碱剂量增加的情况下配伍，两者的协同增效作用更为明显。(结果见表7)。

表7 各给药组对高脂血症大鼠肝脏TC、TG含量的影响

与空白组比较，*P<0.05；**P<0.01；与模型组比较，▲P<0.05；▲▲P<0.01。

4.不同配伍比例对高脂血症大鼠模型的实验研究

4.1实验材料

药物、试剂与仪器均同实验1。

4.2实验动物

SD大鼠，SPF级，雄性，体重200～220g，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，合格证号scxk(沪2003-0003)。

4.3实验方法

高脂乳剂的制备同实验1。

4.3.1实验分组与给药

选用健康SD雄性大鼠96只，体重200～220g，SPF级，按体重分层随机分为8组:正常对照组、模型对照组、实验A组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:1)、实验B组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:2)、实验C组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:3)、实验D组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:4)、实验E组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:5)、实验F组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:6)、实验G组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:7)、实验H组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:8)、实验I组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:9)、实验J组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:10)，每组8只动物。各组动物连续灌胃给药10天，给药体积为1～1.06mL/100g。除正常对照组每日灌胃给予蒸馏水两次外，其余各组均灌胃给予高脂乳剂1mL/100g，连续12天。各给药组的给药总剂量均为5mg/kg^-1，实验A组(白术内酯2.5mg：地不容总生物碱2.5mg＝1:1)给药剂量5mg/kg^-1，实验B组(白术内酯1.67mg：地不容总生物碱3.33＝1:2)，以此计算各组的给药比例剂量，连续给药12天。

4.3.2样本处理

实验第13天，末次给药前大鼠禁食不禁水8h，末次给药后60min，大鼠股动脉取血，离心分离血清，冰冻保存待测，所有血清样本在1h内分离完毕。同时迅速取出大鼠肝脏，冷生理盐水洗净血液，滤纸吸尽水分，然后迅速将肝脏分为3份，2份-20℃冻存备用，1份进行肝脏组织TC、TG含量测定，1份采用实时荧光PCR方法进行ABCA₁、HMG-CoA基因表达测定；第3份置入10％甲醛溶液中固定。同时解剖取出大鼠心脏、肾脏和脑组织，10％甲醛固定，留作病理形态学的观察。

4.3.3指标检测

按照试剂盒的说明，采用酶法测定血清总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量。肝脏组织TC、TG含量测定时，先采用甲醇:丙酮(1:1)溶液制备20％的肝脏匀浆，离心取上清液，然后按试剂盒的说明测定TC、TG含量。

4.3.4统计学处理

采用SPSS17.0软件进行处理，实验结果以均数±标准差表示，采用单因素方差分析，组间采用t检验。

4.4实验结果

4.4.1各给药组对高脂血症大鼠血脂水平的影响

大鼠连续给予高脂乳剂12天，可使血清中TC、TG、LDL-C含量明显高于正常对照组(P<0.01)，并使血清HDL-C含量低于正常对照组(P>0.05)，提示高脂血症模型的成功通过重复性试验表明，白术内酯与地不容总生物碱在1:2-1:10此范围内的疗效显著。虽然试验组之间进行比较，无显著性差异，但是从作用趋势来看，试验实验G组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:7)和实验H组(白术内酯：地不容总生物碱＝1:8)的效果最佳。(结果见表8)。

表8 各给药组对高脂血症大鼠血脂水平的影响

与空白组比较，*P<0.05；**P<0.01；与模型组比较，▲P<0.05；▲▲P<0.01。

从上述实验结果可以看出，白术内酯和地不容总生物碱在单独应用时对高脂血症客观指标TC、TG、LDL-C及apoA₁、apoB的改善作用不明显，但是当两者混合组合后，在相同给药剂量条件下，对其相关客观指标的改善作用均较为显著，特别是在白术内酯与地不容总生物碱在1:2-1:10此剂量配比范围内疗效较佳，特别是在比例1:8的剂量配比情况下，取得了显著的疗效。实验结果表明白术内酯和地不容总生物碱在本发明的剂量配伍比例范围内，不仅可以提高总疗效，也可以减少原料药的使用量，进而说明两种活性成分在本发明的剂量配伍比例范围内具有明显的协同增效的作用，同时也说明本发明的组合配伍取得了竟想不到的技术效果。

Claims (8)

1.一种治疗高脂血症的药物组合物，其特征在于：它是由以下组分及重量比的原料组成：白术内酯1～20重量份，地不容总生物碱2～50重量份。

2.根据权利要求1所述的一种治疗高脂血症的药物组合物，其特征在于：白术内酯5～15重量份，地不容总生物碱10～40重量份。

3.根据权利要求1所述的一种治疗高脂血症的药物组合物，其特征在于：白术内酯8～12重量份，地不容总生物碱20～30重量份。

4.根据权利要求1所述的一种治疗高脂血症的药物组合物，其特征在于：白术内酯1重量份，地不容总生物碱8重量份。

5.一种如权利要求1～4中任意一项权利要求所述的治疗高脂血症的药物组合物的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：

S1：按上述组分及重量比称取白术内酯和地不容总生物碱；

S2：将原料混合均匀后，加入药学上可接受的辅料制备成药学上常用的药物制剂。

6.根据权利要求5所述的一种治疗高脂血症的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述的药物制剂为片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、口服液、冻干粉针或注射液。

7.根据权利要求5所述的一种治疗高脂血症的药物组合物的制备方法，其特征在于：所述的药学上可接受的辅料包括淀粉、硬脂酸镁、糊精和微晶纤维素。

8.如权利要求1～4中任意一项权利要求所述的药物组合物在制备治疗高脂血症药物中的应用。