CN104023533B - 植物病害防治剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及含有下述式(1)所示的化合物或其盐作为有效成分的植物病害防治剂、将上述植物病害防治剂施用于病害植物的植物病害防治方法及下述式(1)所示的新颖化合物或其盐，式中，R¹及R²表示氢原子或甲基，且R¹与R²相同的情况除外。

Description

植物病害防治剂

技术领域

本发明涉及含有具有杀菌活性的新颖化合物作为有效成分的植物病害防治剂、将该植物病害防治剂施用于病害植物的植物病害防治方法、及新颖的杆菌霉素(Bacillomycin)系化合物。

背景技术

以往，已知多种农业园艺用杀菌剂(植物病害防治剂)，就抗药性和安全性等问题而言，需要可更有效而安全地使用的制剂。

其中，已知芽孢杆菌属(Bacillussp.)细菌会生产抗菌性二次代谢产物。该抗菌性二次代谢产物中最为重要的是对多种植物病原性丝状菌具有抗菌活性的伊枯草菌素(Iturin)类的环状肽(cyclicpeptide)(非专利文献1及2)。

伊枯草菌素类的环状肽为具有7个α-氨基酸和1个含有脂肪族侧链的β-氨基酸的环状肽，已报告有氨基酸序列及β-氨基酸(β‐AA)侧链构造不同的多种化合物。具有此种构造的伊枯草菌素家族的构造示于表1。

表1

伊枯草菌素(Iturin)A于1978年由F.Peypoux等报告其构造(非专利文献3)，之后于1982年由A.Isogai等进行了构造的再研究，确定了其为包含具有n-C13、n-C14、ai-C15、i-C15、n-C15、i-C16、n-C16(n＝正式(normal)；i＝异式(iso)；ai＝反异式(anteiso)，以下相同)的侧链构造的β-氨基酸的伊枯草菌素(Iturin)A1～A7的构造(非专利文献4)。该报告中，包含具有C14、C15的侧链的β-氨基酸的伊枯草菌素为主要成分，而于1983年G.Winkelman等报告了包含具有C15和C16的侧链构造的β-氨基酸的伊枯草菌素A_L，其显示β-氨基酸的侧链构造的构成比率会依菌株的不同而异(非专利文献5)。此外，2002年S.Hiradate等报告了包含具有解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)RC-2～ai-C17的侧链构造的β-氨基酸的伊枯草菌素A8的构造，并弄清楚了伊枯草菌素A1～A8的全部构造(非专利文献6)。

抗霉枯草菌素(Mycosubtilin)于1949年由R.Walton等发现(非专利文献7)，并于1986年由F.Peypoux等确定了其包含具有n-C16、i-C16、i-C17、ai-C17的侧链的β-氨基酸和7个α-氨基酸的构造(非专利文献8)。

杆菌霉素F(BacillomycinF)于1982年由A.Mhammedi等从枯草杆菌(B.subutilis)单独分离(非专利文献9)，并于1985年由F.Peypoux等弄清楚了其包含具有i-C16、i-C17、ai-C17的侧链构造的β-氨基酸和7个α-氨基酸的构造(非专利文献10)。

杆菌肽素(Bacillopeptin)于1995年由Y.Kajimura等单独分离，并报告了其由具有n-C14、i-C15、i-C16的侧链构造的β-氨基酸和7个α-氨基酸构成的构造(非专利文献11)。

杆菌霉素Lc(BacillomycinLc)于1995年由S.M.Eshita等从枯草杆菌中单独分离，并弄清楚了其由具有n-C14、ai-C15、i-C15、i-C16、n-C16的侧链构造的β-氨基酸和7个α-氨基酸(与Bacillopeptin相同的序列)构成的构造(非专利文献12)。

杆菌霉素L(BacillomycinL)于1984年由M.Landy等从枯草杆菌中单独分离(非专利文献13)，并于1984年由F.Peypoux等提出了其包含具有n-C14、ai-C15、i-C15、i-C16、n-C16的侧链构造的β-氨基酸和7个α-氨基酸的构造(非专利文献14)，之后于2007年由L.Volpon等修正了α-氨基酸的构造，弄清楚了杆菌霉素L具有与杆菌霉素Lc相同的构造(非专利文献15)。

杆菌霉素D(BacillomycinD)于1950年由F.Raubitschek等发现(非专利文献16)，之后于1981年由F.Peypoux等一度提出了其构造(非专利文献17)，并于1984年由F.Peypoux等修正了其包含具有n-C14、ai-C15、i-C15、i-C16、n-C16的侧链构造的β-氨基酸、2分子Asn和各1分子Tyr、Glu、Pro、Ser、Thr的构造(非专利文献14)。此报告中，β-氨基酸的构成比率为n-C14＝47.6％、i-C15＝22.7％、ai-C15＝12.5％、i-C16＝3.3％、n-C16＝8.8％，且具有C14及C15的β-氨基酸的杆菌霉素D为主要构成成分。此外，2005年G.K.Oleinikova等从海洋性枯草杆菌(B.subutilis)中单独分离了i-C15杆菌霉素D，并确定了其构造。

2001年A.C.Moyne等从枯草杆菌(B.subutilis)中单独分离了2种对黄曲菌(Aspergillusflavus)具有活性的成分，并根据串联质谱(tandemmassspectrometry)推测该物质为C15及C16-杆菌霉素D(非专利文献19、专利文献1)。O.Tabbene等于2011年从枯草杆菌(B.subutilis)中分离出对于对人类具病原性的白色念珠菌(Candidaalbicans)具有抗菌效果的3种活性物质，并通过MALDI-TOF/MS察知这些物质为C14、C15及C16-杆菌霉素(bacillomycin)D(非专利文献20)。2004年A.Koumoutsi等虽在解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)FZB42的培养物的MALDI-TOF/MS分析中，推测存在有C14、C15、C16及极微量的C17杆菌霉素(Bacillomycin)D，但完全未述及β-氨基酸的侧链构造(非专利文献21、专利文献2)。2007年R.Ramarathnam等通过MALDI-TOF/MS分析枯草杆菌(B.subutilis)49株的抗菌成分，推测其为包含极微量的C17杆菌霉素(Bacillomycin)D的杆菌霉素(Bacillomycin)D，但完全未述及杆菌霉素(Bacillomycin)D的详细构造(非专利文献22)。

另一方面，关于这些伊枯草菌素(Iturin)类的环状肽的构造与活性的相关性，有以下的报告。1993年J.M.Bland等研究了伊枯草菌素(Iturin)A的构造与对青霉菌(Penicillium)及曲菌(Aspergillus)的活性的相关性，并报告了i-C16＞n-C16＞i-C15＞n-C14＝ai-C15(非专利文献23)。此外，1995年S.M.Eshita等研究了杆菌霉素(Bacillomycin)Lc对植物病原菌的基础活性，弄清楚了n-C16＞n-C14、i-C16＞i-C15、n-C16≥i-C16、i-C15≥ai-C15的关系(非专利文献12)。然而，完全未弄清楚具有C17的侧链的伊枯草菌素(Iturin)类的环状肽的活性。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：美国专利第6183736号说明书

专利文献2：国际公开第2004/111240号小册子

非专利文献

非专利文献1：MolecularMicrobiology56,845-857(2005)

非专利文献2：TrendsinMicrobiology16,115-125(2007)

非专利文献3：Biochemistry17,3992-3996(1978)

非专利文献4：TetrahedronLetters23,3065-3068(1982)

非专利文献5：JournalofAntibiotics36,1451-1457(1983)

非专利文献6：Phytochemistry61,693-698(2002)

非专利文献7：J.Clin.Invest.28,924-926(1949)

非专利文献8：JournalofAntibiotics39,636-641(1986)

非专利文献9：JournalofAntibiotics35,306-311(1982)

非专利文献10：Eur.J.Biochem.153,335-340(1985)

非专利文献11：JournalofAntibiotics48,1095-1103(1995)

非专利文献12：JournalofAntibiotics48,1240-1247(1995)

非专利文献13：Proc.Soc.Exp.Biol.Med.67,539-541(1948)

非专利文献14：JournalofAntibiotics37,1600-1604(1984)

非专利文献15：SpectrochimicaactapartA67,1374-1381(2007)

非专利文献16：Dermatologyca100,45-49(1950)

非专利文献17：Eur.J.Biochem.118,323-327(1981)

非专利文献18：ChemystryofNaturalCompounds41,240-242(2005)

非专利文献19：JournalofAppliedMicrobiology90,622-629(2001)

非专利文献20：FEMSMicrobiol.Lett.316,108-114(2011)

非专利文献21：JournalofBacteriology186,1084-1096(2004)

非专利文献22：Can.J.Microbiol.53,901-911(2007)

非专利文献23：Peptides1992：proceedingsoftheTwenty-SecondEuropeanPeptideSymposium；Schneider,C.H.,Eberle,A.N.Eds.：ESCOM：Leiden,1993；pp332-333

发明内容

发明欲解决的课题

本发明的目的在于提供一种具有杀菌活性的新颖化合物及含有该新颖化合物的植物病害防治剂。

用于解决课题的手段

本发明者们积极寻求新颖的植物病害防治剂，结果发现了芽孢杆菌属(Bacillussp.)所生产的β-氨基酸侧链的碳数为17(C17)的杆菌霉素(Bacillomycin)D即式(1)所示的新颖的化合物(化合物1及化合物2)显示有作为植物病害防治剂有用的杀菌活性。

如前所述的迄今为止的研究完全未有化合物1及2的报告，且其活性亦同样未有报告。本发明者们对芽孢杆菌属(Bacillussp.)生产的这些化合物进行了精制并确定了其严格的构造，发现了其活性比以往已知的相关化合物高。另外，还发现了通过含有属于公知的脂肽(lipopeptide)的表面活性素(Surfactin)，其效果会显著增强，从而完成了本发明。

即，本发明提供以下的技术方案。

1.一种植物病害防治剂，其含有下述式(1)所示的化合物或其盐作为有效成分，

(式中，R¹及R²表示氢原子或甲基，且R¹与R²相同的情况除外)。

2.上述第1项所述的植物病害防治剂，其中，R¹表示氢原子、R²表示甲基。

3.上述第1项所述的植物病害防治剂，其中，R¹表示甲基、R²表示氢原子。

4.上述第1～3项中任一项所述的植物病害防治剂，其进一步含有表面活性素。

5.一种植物病害防治方法，其特征在于，将上述第1～4项中任一项所述的植物病害防治剂施用于病害植物。

6.下述式(1)所示的化合物或其盐，

(式中，R¹及R²表示氢原子或甲基，且R¹与R²相同的情况除外)。

7.上述第6项所述的化合物(化合物1)或其盐，其中，R¹表示氢原子、R²表示甲基。

8.上述第6项所述的化合物(化合物2)或其盐，其中，R¹表示甲基、R²表示氢原子。

发明效果

本发明的化合物1及化合物2具有优异的杀菌活性，可作为安全的农业园艺用杀菌剂(植物病害防治剂)使用。

附图说明

图1为化合物1的¹H-NMR光谱。

图2为化合物1的¹³C-NMR光谱。

图3为化合物2的¹H-NMR。

图4为化合物2的¹³C-NMR光谱。

具体实施方式

以下示出本发明的化合物1及2的理化性质。其中，理化性质的测定方法如下所述。

1.从外观判断颜色及形状。

2.使用WatersMicromassLCTPremmierXE进行质谱(massspectrum)的测定。

3.使用BrukerAvanceII进行NMR光谱的测定。

化合物1的理化性质：

1)颜色及形状：白色粉末，

2)质谱：m/z1073.5902(M+H)⁺，

3)分子式：C₅₁H₈₀N₁₀O₁₅，

4)¹H-NMR光谱(600MHz、C₅D₅N)(图1)

δ(ppm)：0.81(3H,d)、0.81(3H,t)、1.06(1H,m)、1.10-1.23(m)、1.24(4H,m)、1.28(2H,m)、1.34(3H,d)、1.44(1H,m)、1.55(1H,m)、1.64(1H,m)、1.85(1H,m)、2.08(1H,m)、2.11(1H,m)、2.42(1Hm)、2.61(1H,m)、2.63(1H,m)、2.78(1H,m)、2.95(1H,m)、3.00(1H,m)、3.04(1H,m)、3.09(1H,m)、3.18(1H,dd)、3.39(1H,dd)、3.57(1H,dd)、3.71(1H,dd)、4.03(1H,m)、4.26(1H,m)、4.32(1H,dd)、4.38(1H,dd)、4.61(1H,m)、4.72(1H,dd)、4.87(1H,m)、4.88(1H,m)、4.88(1H,m)、4.95(1H,m)、5.27(1H,m)、5.32(1H,m)、5.38(1H,m)、7.05(2H,d)、7.46(2H,d)、7.80(1H,brs)、7.89(1H,brs)、8.12(1H,d)、8.14(1H,brs)、8.35(1H,brs)、8.36(1H,brs)、8.55(1H,brs)、8.73(1H,brs)、8.97(1H,brs)、9.02(1H,brs)、9.67(1H,brs)，

5)¹³C-NMR光谱(150MHz、C₅D₅N)(图2)

δ(ppm)：11.4、19.2、20.7、24.9、26.0、27.3、27.6、29.5、29.6、29.7、29.8、29.8、29.9、29.9、30.2、31.6、34.5、35.7、36.4、36.8、37.0、37.7、41.9、47.3、48.5、50.2、52.8、55.4、55.8、57.9、59.3、62.1、63.5、66.1、116.0、128.6、131.2、157.4、171.0、171.6、172.3、172.4、172.4、172.6、172.8、173.2、173.6、173.7、175.5。

化合物2的理化性质：

1)颜色及形状：白色粉末，

2)质谱：m/z1073.5876(M+H)⁺，

3)分子式：C₅₁H₈₀N₁₀O₁₅，

4)¹H-NMR光谱(600MHz、C₅D₅N)(图3)

δ(ppm)：0.84(6H,d)、1.11(2H,m)、1.15-1.21(m)、1.31(1H,m)、1.35(3H,d)、1.44(1H,m)、1.44(1H,m)、1.55(1H,m)、1.65(1H,m)、1.86(1H,m)、2.09(1H,m)、2.10(1H,m)、2.42(1H,m)、2.62(1H,m)、2.63(1H,m)、2.79(1H,m)、2.97(1H,m)、3.01(1H,m)、3.04(1H,m)、3.09(1H,m)、3.18(1H,dd)、3.41(1H,dd)、3.57(1H,dd)、3.72(1H,dd)、4.04(1H,m)、4.28(1H,m)、4.33(1H,dd)、4.39(1H,dd)、4.62(1H,m)、4.73(1H,dd)、4.87(1H,m)、4.88(1H,m)、4.89(1H,m)、4.95(1H,m)、5.28(1H,dd)、5.32(1H,m)、5.39(1H,m)、7.06(2H,d)、7.47(2H,d)、7.80(1H,brs)、7.89(1H,brs)、8.13(1H,brs)、8.17(1H,brs)、8.39(1H,brs)、8.40(1H,brs)、8.58(1H,brs)、8.75(1H,brs)、8.98(1H,brs)、9.07(1H,brs)、9.68(1H,brs),

5)¹³C-NMR光谱(150MHz、C₅D₅N)(图4)

δ(ppm)：20.7、22.7、22.7、24.9、26.0、27.6、27.6、28.1、29.5、29.7、29.8、29.8、29.9、29.9、29.9、30.1、30.2、31.6、35.7、36.4、37.0、37.7、39.1、41.9、47.3、48.5、50.2、52.8、55.3、55.8、57.8、59.3、62.0、63.5、66.2、116.0、128.6、131.2、157.4、171.0、171.6、172.4、172.6、172.6、172.8、173.2、173.6、173.7、173.7、175.4。

化合物1及2的盐无特别限定，可列举出钠盐、钾盐、钙盐、铵盐等，优选为钠盐。

化合物1及2可通过培养具有生产化合物1及2的能力的微生物并从其培养物中采集得到。化合物1及2的生产菌可列举出杆菌(Bacillus)属的微生物，作为其例子可列举出芽孢杆菌属(Bacillussp.)AT-332菌株及芽孢杆菌属(Bacillussp.)AT-79菌株。芽孢杆菌属(Bacillussp.)AT-332菌株及芽孢杆菌属(Bacillussp.)AT-79菌株作为芽孢杆菌属(Bacillussp.)AT-332及芽孢杆菌属(Bacillussp.)AT-79保藏于保藏机构：独立行政法人制品评估技术基盘机构(NationalInstituteofTechnologyandEvaluation)专利微生物保藏中心(〒292-0818日本国千叶县木更津市上总鎌足2-5-8)(原保藏日(寄存日)：2011年5月2日，保藏编号：NITEBP-1095及NITEBP-1094)。

关于具有生产化合物1及2的能力的微生物的培养方法，可通过在固态培养基上静置培养、液体培养等公知的手段使其增殖，关于可利用的培养基种类、培养条件等，只要本申请的菌能够生存并增殖则无特别限制。例如除了肉提取物培养基等普通培养基之外，还可列举出包含葡萄糖、胨(peptone)、酵母提取物的培养基等。此外，亦可使用除液体培养基以外的含有琼脂的斜面培养基及平板培养基等固态培养基。

作为培养基的碳源，可利用上述菌株可同化的所有碳源。具体而言，除了葡萄糖、半乳糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、麦芽提取物、废糖蜜、淀粉糖浆、淀粉水解物等糖之外，还可列举出具有生产化合物1及2的能力的微生物能够利用的各种合成或天然碳源。

作为培养基的氮源，也同样地以胨、肉提取物、酵母提取物、大豆粉、玉米浸液(CornSteepLiquor)等有机含氮物为代表，可利用所述菌株能够利用的各种合成或天然物。

此外，依照微生物培养的常规方法，还可根据需要添加食盐、磷酸盐等无机盐类；钙、镁、铁等金属的盐类；维生素、氨基酸等微量营养源。

培养可在振荡培养、通气培养等好气性条件下进行。培养温度为20～40℃、优选为25～35℃，pH为5～8、优选为6～7，培养期为1～4日、优选为2～3日。

如后述的制造例所示的，使用芽孢杆菌属(Bacillussp.)AT-332菌株时，会生产作为抗菌性伊枯草菌素的β-氨基酸侧链为C15～C17的杆菌霉素D类的混合物。这些比例因培养条件的不同而异，C15为2～15％、C16为15～45％、C17为40～70％，抗菌活性最强的C17的本发明化合物1及2可作为主要成分而得到。

从培养液中精制化合物1及2的方法无特别限定，可通过酸沉降、盐析、溶剂提取、各种层析等公知的方法实施。

本发明所使用的表面活性素为非专利文献1及2所公开的化合物，可使用市售品。

本发明的化合物1及化合物2为β-氨基酸侧链的碳数为17(C17)的新颖的杆菌霉素(Bacillomycin)D化合物，其具有比以往已知的相关化合物高的杀菌活性。因此，本发明的化合物1、化合物2或它们的盐对于植物病害防治是有用的，通过使含有本发明化合物1、化合物2或它们的盐的植物病害防治剂以其自身或其稀释液的方式，存在于根、茎、叶、种子等植物体上或存在于植物体的栽培土壤中，可以抑止各种植物病害。

含有本发明的化合物1、化合物2或它们的盐的植物病害防治剂可通过不同施用形态而防治属于卵菌类(Oomycetes)、子囊菌类(Ascomycetes)、担子菌类(Basidiomycetes)及半知菌类(Deuteromycetes)的菌类及细菌类所引起的植物病害。

关于含有本发明的化合物1、化合物2或它们的盐的植物病害防治剂可防治的病害的病原菌，具体地可列举出：水稻的稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)、胡麻叶斑病(Cochliobolusmiyabeanus)、纹枯病菌(Rhizoctonia solani)、藤仓赤霉菌(Gibberellafujikuroi)，麦类的白粉病菌(Erysiphe graminisf.sp.hordei，Erysiphegraminisf.sp.tritici)、条锈病菌(Puccinia striiformis，Pucciniagraminis，Pucciniareconditaf.sp.tritici，Puccinia hordei)、赤霉病菌(Gibberellazeae)、网斑病菌(Pyrenophorateres)、雪腐病菌(Typhulaincarnata，Typhulaishikariensis，Sclerotiniaborealis，Micronectriellanivalis)、裸黑穗病菌(Ustilagonuda)、腥黑穗病菌(Tilletia caries，Tilletiatoetida)、眼斑病菌(Tapesiayallundae)、云纹病菌(Phynchosporiumsecalisf.sp.hordei)、叶枯病菌(Septoriatritici)、颖枯病菌(Leptosphaerianodorum)，柑橘的黑点病菌(Diaporthecitri)、痂囊腔病菌(Elsinoefawcettii)、褐腐疫病菌(Phytophthoracitrophthora)、绿霉病菌(Penicilliumdigitatum)、绿霉病菌(Penicilliumitalicum)，苹果的花腐病菌(Moniliniamali)、腐烂病菌(Valsaceratosperma)、白粉病菌(Podosphaera leucotricha)、斑点落叶病菌(Alternariaalternataapplepathotype)、黑星病菌(Venturiainaequalis)、胶锈菌(Gymnosporangiumyamadae)、轮纹病菌(Botriophaeriaberengerianaf.sp.piricola)、蝇斑病菌(Zygophiala jamaicensis)、煤污病菌(Gloeodespomigena)、黑点病菌(Mycosphaerella pomi)、炭疽病菌(Glomerellacingulata)、褐斑病菌(Diplocarponmali)，梨的黑星病菌(Venturianashicola)、黑斑病菌(Alternariaalternatajapanesepearpathotype)、轮纹病菌(Physalosporapiricola)、胶锈菌(Gymnosporangiumasiaticum)、桃的褐腐病菌(Moniliniafructicola)、黑星病菌(Cladosporiumcarpophilum)、拟茎点霉病菌(Phomopsissp.)，葡萄的褐斑病菌(Pseudocercosporavitis)、轮纹病菌(Marssoninaviticola)、黑痘病菌(Elsinoeampelina)、晚腐病菌(Glomerellacingulata)、白粉病菌(Uncinulanecator)、锈病菌(Phakopsoraampelopsidis)、拟茎点霉病菌(Phomopsissp.)，柿子的白粉病菌(Phyllactiniakakicola)、炭疽病菌(Colletotrichumgloeosporioides)、角斑落叶病菌(Cercosporakaki)、柿叶球腔病菌(Mycosphaerellanawae)，梅的黑星病菌(Cladosporium carpophilum)，樱桃的灰星病菌(Moniliniafructicola)、瓜类的白粉病菌(Sphaerothecafuliginea)、蔓枯病菌(Didymellabryoniae)、炭疽病菌(Colletotorichumlegenarium)、番茄轮纹病菌(Alternariasolani)、叶锈病菌(Cladosporiumfulvum)，茄子的褐纹病菌(Phomopsisvexans)、白粉病菌(Erysiphecichoracearum)，十字花科蔬菜的黑斑病菌(Alternaria japonica，Alternariabracicae，Alternariabrassicicola)、白斑病菌(Cercosporellabrassicae)，葱的锈病菌(Pucciniaallii)，生姜的终极腐霉病菌(Pyrhiumultimum，Pythiumzigiberis)，草莓的白粉病菌(Sphaerotheca humuli)、炭疽病菌(Glomerellacingulata)，大豆的紫斑病菌(Cercospora kikuchii)、黑痘病菌(Elsinoeglycines)、黑点病菌(Diaporthephaseolorum var.sojae)、小豆的褐斑病菌(Cercosporacanescens)、锈病菌(Uromyces phaseolivar.azukicola)，扁豆的炭疽病菌(Colletotrichumlindemuthianum)，花生的黑斑病菌(Cercosporidiumpersonatum)、褐斑病菌(Cercospora arachidicola)、疮痂病菌(Shacelomaarachidis)，豌豆的白粉病菌(Erysiphe pisi)，马铃薯的早疫病菌(Alternariasolani)，茶的网饼病菌(Exobasidium reticulatum)、白星病菌(Elsinoeleucospila)、轮斑病菌(Pestalotiopsistheae， Pestalotiopsislongiseta)，烟草的胶锈菌(Alternarialongipes)、白粉病菌(Erysiphecichoracearum)、炭疽病菌(Colletotrichumgloeosporioides)，甜菜的褐斑病菌(Cercosporabeticola)，草的弯孢叶斑病菌(Curvularia geniculata)、角担菌属真菌(Ceratobasidiumspp.)，玫瑰的黑星病菌(Diplocarponrosae)、白粉病菌(Shaerothecapannosa)，菊花的褐斑病菌(Septoriaobesa)、白锈病菌(Pucciniahoriana)，各种作物的灰霉菌(Botrytis cinerea)、菌核病菌(Sclerotiniasclerotiorum)等，但不限定于这些。

此外，含有本发明的化合物1、化合物2或它们的盐的植物病害防治剂的适用量可根据上述病原菌而适当确定。

含有本发明的化合物1、化合物2或它们的盐的植物病害防治剂除了直接使用化合物之外，还可制成用惰性液体或固体载体稀释，并根据需要添加有表面活性剂、分散剂、其它助剂的药剂来使用。作为具体制剂的例子，可列举出颗粒剂、粉剂、可湿性粉剂、悬浮制剂、乳剂等剂型等。

作为载体，可列举出例如滑石、膨润土、高岭土、粘土、硅藻土、白碳(whitecarbon)、蛭石(vermiculite)、熟石灰、硫酸铵、硅砂、尿素、多孔质的固体载体、水、异丙醇、甲萘、二甲苯、环己酮、烷二醇等液体载体等。作为表面活性剂及分散剂，可列举出例如二萘基甲磺酸盐、硫酸醇酯盐、木质素磺酸盐(ligninsulfonates)、烷基芳基磺酸盐、聚氧乙二醇醚、聚氧乙烯山梨醇单烷酯、聚氧乙烯烷基芳基醚等。作为助剂，可列举出羧甲纤维素、聚乙二醇、丙二醇、阿拉伯胶、黄原胶等；作为保护剂，可列举出脱脂乳、pH缓冲剂等。此时，化合物的量、以及适用时期及适用量可根据上述病原菌而适当确定。

含有本发明的化合物1、化合物2或它们的盐的植物病害防治剂可根据需要包含除本发明的有效成分以外的有效成分，例如杀虫剂、其它杀菌剂、除草剂、植物生长调节剂、肥料等。

作为杀菌剂成分，可列举出伊枯草菌素A、伊枯草菌素A_L、抗霉枯草菌素、杆菌霉素F、杆菌霉素Lc、丰原素(fengycin)、联苯三唑醇、糠菌唑、环唑醇、苯醚甲环唑、烯唑醇、恩康唑、氟环唑、喹唑菌酮、腈苯唑、氟哇唑、粉唑醇、己唑醇、亚胺唑、种菌唑、叶菌唑、腈菌唑、戊菌唑、丙环唑、丙硫菌唑、硅氟唑、三唑酮、三唑醇、戊唑醇、四氟醚唑、灭菌唑、咪酰胺、稻瘟酯、烯菌灵、氟菌唑、氰霜唑、苯菌灵、多菌灵、噻菌灵、麦穗宁、噻唑菌胺、土菌灵、噁咪唑富马酸盐、噁霉灵、腈嘧菌脂、醚菌胺、烯肟菌酯、氟嘧菌酯、亚胺菌、苯氧菌胺、肟醚菌胺、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯、布洛芬、萎锈灵、苯霜灵、啶酰菌胺、联苯吡菌胺、环酰菌胺、氟酰胺、呋吡菌胺、灭锈胺、甲霜灵、精甲霜灵、甲呋酰胺(Ofurace)、噁霜灵、氧化萎锈灵、吡噻菌胺、噻呋酰胺、噻酰菌胺、烯酰吗啉、氟吗啉、氟联苯菌、氟吡菌胺、环丙酰菌胺、双氯氰菌胺、双炔酰菌胺、氟啶胺、啶斑肟、乙嘧酚磺酸酯、嘧菌环胺、氯苯嘧啶醇、嘧菌腙、嘧菌胺、氟苯嘧啶醇、嘧毒胺、嗪氨灵、拌种咯、咯菌腈、氨丙膦酸、吗菌灵、粉锈啉、十三吗啉、苯锈啶、异菌脲、腐霉利、乙烯菌核利、噁唑菌酮、咪唑菌酮、辛异噻啉酮、烯丙苯噻唑、敌菌灵、哒菌酮、百快隆、丙氧喹啉、三环唑、敌菌丹、克菌丹、棉隆、灭菌丹、稻瘟酰胺、喹氧灵、吲唑磺菌胺、代森锰锌、代森锰、威百亩、代森联、福美铁、丙森锌、秋兰姆、代森锌、福美锌、乙霉威、缬霉威、苯噻菌胺、霜霉威盐酸盐、甲基硫菌灵、氟吡菌胺、波尔多液、碱性氯化铜、碱性硫酸铜、氢氧化铜、8－羟基喹啉铜、多果定、双胍辛烷苯磺酸盐、双胍辛胺乙酸盐、双胍盐、春雷霉素、硫酸双氢链霉素、多抗霉素、土霉素、井岗霉素A、乐杀螨、敌螨普、敌螨通、二噻农、稻瘟灵、克瘟散、异稻瘟净、福赛得、乙磷铝、定菌磷、甲基立枯磷、百菌清、抑菌灵、磺菌胺、六氯苯、四氯苯酞、戊菌隆、五氯硝基苯、环氟菌胺、霜脲氰、甲菌定、乙菌定、呋霉灵、苯菌酮、葚孢菌素、代森胺、硫、石硫合剂、氯唑灵、碳酸氢钾、碳酸氢钙、噻二嗪、叶枯酞、三嗪、壬基酚磺酸铜、羟基异噁唑、氟氯菌核利、代森福美锌、磺菌威、EDDP、IBP、唑虫酰胺、氟吡菌酰胺、异噻菌胺、以及吡唑萘菌胺，但不限定于这些。

作为杀虫剂成分，可列举出例如吡虫清、吡蚜酮、杀螟硫磷、乙酰甲胺磷、西维因、灭多虫、杀螟丹、三氟氯氰菊酯、醚菊酯、伏虫隆、氟虫酰胺、氟虫脲、抑虫肼、唑螨酯、速螨酮、吡虫啉、噻嗪酮、BPMC、MIPC、马拉硫磷、杀扑磷、倍硫磷、二嗪磷、异亚砜磷、蚜灭磷、乙硫苯威、抗蚜威、氯菊酯、氯氰菊酯、毕芬宁、苄螨醚、氟硅菊酯、烯啶虫胺、氟啶脲、甲氧虫酰肼、吡螨胺、醚螨醚、开乐散、炔螨特、噻螨酮、四螨嗪、艾克敌、密灭汀、BT(苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis))、茚虫威、氰氟虫腙、溴虫腈、氟虫清、乙烯基双二硫代氨基甲酸盐、灭螨醌、甲基虫螨磷、氟丙菊酯、灭螨猛、毒死蜱、阿维菌素、因灭汀、苯丁锡、特丁硫磷、普伏松、硫线磷、克线磷、丰索磷、DSP、除线磷、噻唑磷、杀线威、异美沙同磷、丁硫环磷、氯唑磷、草净津、丙硫克百威、螺螨酯、杀虫丹、谷硫磷、乙拌磷、甲硫威、砜吸磷、对硫磷、氟氯氰菊酯、β-氟氯氰菊酯、丁基嘧啶磷、螺甲螨酯、安杀番、四溴菊酯、乙酰虫腈、乙虫清、乙硫磷、敌百虫、甲胺磷、敌敌畏、速灭磷、久效磷、乐果、伐虫脒、安果、灭蚜磷、甲基乙拌磷、乙拌磷、二溴磷、甲基对硫磷、杀螟腈、除线特、阿苯达唑、奥苯达唑、芬苯达唑、奥芬达唑、丙虫磷、硫丙磷、丙硫磷、丙溴磷、埃文松、双硫磷、稻丰散、甲基毒虫畏、毒虫畏、杀虫威、辛硫磷、异噁唑磷、吡唑硫磷、毒死蜱、哒嗪硫磷、伏杀硫磷、亚胺硫磷、蔬果磷、奎硫磷、除虫菊素、丙烯菊酯、炔丙菊酯、苄呋菊酯、氯菊酯、七氟菊酯、甲氰菊酯、α－氯氰菊酯、λ－氯氟氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、高氰戊菊酯、氟氰菊酯、氟胺氰菊酯、乙氰菊酯、硫双威、涕灭威、棉铃威、速灭威、灭杀威、残杀威、苯醚威、苯硫威、联苯肼酯、克螨威、丁呋喃、硫、石硫合剂(Pyrifluquinazon)、呋线威、丁嘧脲、除虫脲、氟铃脲、双苯氟脲、虱螨脲、氟啶脲、三环已基氢氧化锡、油酸钠、油酸钾、烯虫酯、烯虫乙酯(hydroprene)、乐杀螨、双甲脒、克氯苯、溴螨酯、三氯杀螨砜、杀虫磺、杀螨特、环虫酰肼、氯虫酰肼、安杀番、二苯丙醚、唑虫酰胺、唑蚜威、硫酸烟碱、噻虫啉、噻虫嗪、噻虫胺、呋虫胺、氟啶胺、蚊蝇醚、嘧螨酯、伏蚁腙、落灭津、TPIC、杀虫环、喹螨醚、浏阳霉素复合体、印楝素、鱼藤酮、羟基丙基淀粉、线虫灵、磷虫威、涕灭砜威、威百亩、酒石酸甲噻嘧啶、棉隆、盐酸左旋咪唑、水杨菌胺、啶虫丙醚、氯虫酰胺、榭诺芬(音译，cyenopyrafen)、以及丁氟螨酯，但并不限定于这些。

本发明的植物病害防治剂的施用方法无特别限定，可列举出例如直接散布于植物或害虫的方法、散布于土壤的方法、添加于用来添加给植物或土壤的水或肥料的方法等。此外，制剂的施用量因对象病害、对象作物、施用方法、发生倾向、受害的程度、环境条件、所使用的剂型等的不同而变动，因此优选适当进行调整。

如以上所述，含有本发明的化合物1、化合物2或它们的盐的植物病害防治剂具有广的病害谱，可防治多种植物病害。含有这些菌株之本发明的植物病害防治剂对环境的安全性高，且对多种病害具有防治效果，因此即使不采用其它的并用手段，也可广泛地防止病害。

实施例

以下列举制造例、制剂例及试验例以具体地说明本发明，但本发明并不限定于这些例子。

制造例：AT-332菌株的培养及制备

作为预培养，将一接种环的AT-332菌株的保存菌接种至每一烧瓶包含60ml普通肉汤(bouillon)培养基(荣研化学株式会社)的带挡板(baffle)的500ml三角烧瓶后，用旋转振荡机以180rpm的转速在28℃下培养1日。

将通过上述预培养得到的培养物60ml接种至包含2000mlLB培养基(胨：20g，酵母提取物：10g，氯化钠：20g，水：余量)的5000ml缸式发酵槽(jarfermenter)后，以500rpm的转速、1L/h的通气，在35℃下培养3日，作为正式培养。

将通过上述正式培养得到的约1800g培养物离心分离，得到1500ml的培养上清物。

用HCl将所得的培养上清物1500g调整为pH4.0，并用等量的乙酸乙酯进行3次提取。将乙酸乙酯级分浓缩并使其悬浮于水后，用氢氧化钠使其为pH7.0。使所得的溶液吸附于预先用水进行了平衡的SepPakC18，用60～80％的甲醇进行洗脱。将所得的级分供至HPLC，分离出具有抗真菌活性的5个峰。各峰的存在量的比率为：峰1(C15·杆菌霉素D(bacillomycinD))7％、峰2(比较化合物；异-C16杆菌霉素D(bacillomycinD))31％、峰3(n-C16杆菌霉素D(bacillomycinD))4％、峰4(化合物1)37％、峰5(化合物2)22％。

对峰4(化合物1：约350mg)、峰5(化合物2：约200mg)、峰2(比较化合物；异-C16杆菌霉素D；约300mg)分别进行单独分离。

通过将所得的化合物1与化合物2进行氨基酸分析、LC(ESI)-TOF-MS、¹H-NMR、¹³C-NMR、HH-COSY、HSQC、NOESY、MALDI-TOF-MSPSD分析，艾德曼降解(Edmandegradation)，清楚了化合物1与化合物2为本文记载的构造。峰3通过同样的方法确认为异-C16杆菌霉素D(bacillomycinD)。

制剂例1：可湿性粉剂之制备

将通过制造例1制得的化合物1、化合物2、比较化合物及表面活性素(Sigma-AldrichJapan制)各5份(质量份，以下相同)、硅藻土50份、白碳35份、木质磺酸钠(Sodiumlignosulfonate)8份及烷基萘磺酸钠2份进行混合粉碎，得到各可湿性粉剂。

试验例1：基础抗菌活性的比较

分别制备化合物1及2、比较化合物的1％w/v二甲亚砜溶液。用二甲亚砜稀释该药剂，将预定量充分混合到灭菌后的马铃薯葡萄糖琼脂培养基中，向直径为90mm的培养皿内注入15ml，放置于室温。另外，作为对照组，同样地制作仅添加了二甲亚砜的马铃薯葡萄糖琼脂培养基。培养基凝固后，从预先培养的代表性植物病原菌(纹枯病菌(Rhizoctoniasolani)、稻瘟病菌(Pyriculariaoryzae)及灰霉菌(Botrytiscinerea))的菌落处，用直径为5mm的软木穿孔器从每个培养基凿取菌丝，并将菌丝接种于试验培养基的中央。将培养皿在25℃下培养，于第2～7日测定从接种源扩展的菌落的直径，并通过下述算式与对照组的菌落直径进行比较，求出菌的生长抑制率，用抑制度表示。结果示于表2。清楚了化合物1及2对3种植物病原菌的效果较目前为止所公开的比较化合物强。

[算式1]

生长抑制率(％)＝(对照组的菌落直径－试验区的菌落直径/对照组的菌落直径)×100

表2

试验例2：对黄瓜白粉病的效果试验

将制剂例1的可湿性粉剂的1000倍稀释液用喷枪充分量地散布到在温室内用直径为6cm的塑料容器培育的3叶龄黄瓜(品种：光3号P型)。作为比较剂，将Impression可湿性粉剂(SDSBiotech株式会社制)稀释250倍者同样地供于试验。第二天，喷雾接种黄瓜白粉病胞子悬浮液。于温室内放置10天，目视研究第一叶及第二叶(由下起的第1片和第2片叶)的发病面积率，求出防治度。防治度(％)用下述算式算出。结果示于表3。通过用本发明的化合物1及2进行处理，黄瓜白粉病发病率与未处理区相比显著减少，即使是与对照化合物及比较剂相比，也得到了极高的防治效果。此外，还清楚了其效果与表面活性素协同地增强。

[算式2]

防治度＝((1－散布区的病斑面积率/未散布区的病斑面积率))×100

表3

(产业上的可利用性)

因为本发明的化合物(化合物1及2)具有优异的杀菌活性，因此可制成含有本发明的化合物1、化合物2或它们的盐的安全的植物病害防治剂使用。

Claims (9)

1.一种植物病害防治剂，其含有下述式(1)所示的化合物或其盐作为有效成分，

式(1)中，R¹及R²表示氢原子或甲基，且R¹与R²相同的情况除外。

2.如权利要求1所述的植物病害防治剂，其中，R¹表示氢原子、R²表示甲基。

3.如权利要求1所述的植物病害防治剂，其中，R¹表示甲基、R²表示氢原子。

4.如权利要求1～3中任一项所述的植物病害防治剂，其进一步含有至少一种β-氨基酸侧链的碳数为15～16的杆菌霉素D化合物。

5.如权利要求1～3中任一项所述的植物病害防治剂，其进一步含有表面活性素。

6.一种植物病害防治方法，其特征在于，将权利要求1～5中任一项所述的植物病害防治剂施用于病害植物。

7.一种下述式(1)所示的化合物或其盐，

式(1)中，R¹及R²表示氢原子或甲基，且R¹与R²相同的情况除外。

8.如权利要求7所述的化合物或其盐，其中，其为R¹表示氢原子、R²表示甲基的化合物1或其盐。

9.如权利要求7所述的化合物或其盐，其中，其为R¹表示甲基、R²表示氢原子的化合物2或其盐。