TW201332447A - 植物病害防治劑 - Google Patents

Abstract

本發明係關於下述式(1)所示之新穎化合物或其鹽、以前述式(1)所示之化合物或其鹽作為有效成分之植物病害防治劑、及將前述植物病害防治劑施用於病害植物之植物病害防治方法；□(式中，R1及R2係表示氫原子或甲基，惟R1與R2為相同之情形除外)。

Description

植物病害防治劑

本發明係關於含有以具有殺菌活性之新穎化合物作為有效成分之植物病害防治劑、將該植物病害防治劑施用於病害植物之植物病害防治方法、及新穎的桿菌黴素(Bacillomycin)系化合物。

以往，已知多種農業園藝用殺菌劑(植物病害防治劑)，惟就抗藥性和安全性等問題而言，係需要可更有效而安全地使用之製劑。

其中，已知桿菌屬(Bacillus sp.)細菌會生產抗菌性二次代謝產物。該抗菌性二次代謝產物之中最為重要者，係對多種植物病原性絲狀菌具有抗菌活性之伊枯草菌素(Iturin)類之環狀肽(cyclic peptide)(非專利文獻1及2)。

伊枯草菌素類之環狀肽係具有7個α-胺基酸、與含有脂肪族側鏈之具有1個β-胺基酸之環狀肽，已報告有多種胺基酸序列及β-胺基酸(β-AA)側鏈構造相異之化合物。具有此種構造之伊枯草菌素家族的構造係示於表1。

伊枯草菌素A係於1978年由F.Peypoux等報告其構造(非專利文獻3)，之後，於1982年由A.Isogai等進行構造的再檢討，而決定係包含具有n-C13，n-C14，ai-C15，i-C15，n-C15，i-C16，n-C16(n=正式(normal)；i=異式(iso)；ai=反異式(anteiso)，以下相同)之側鏈構造的β-胺基酸之伊枯草菌素A1至A7的構造(非專利文獻4)。該報告中，包含具有C14、C15之側鏈的β-胺基酸之伊枯草菌素係主要成分，而於1983年G.Winkelman等係報告包含具有C15與C16之側鏈構造的β-胺基酸之伊枯草菌素A_L，表示β-胺基酸之側鏈構造的構成比率會依菌株而異(非專利文獻5)。此外，2002年S.Hiradate等係報告包含具有芽孢枯草桿菌(B.amyloliquefaciens)RC-2至ai-C17之側鏈構造的β-胺基酸之伊枯草菌素A8之構造，並揭明了伊枯草菌素A1至A8之全部構造(非專利文獻6)。

抗霉枯草菌素(Mycosubtilin)，係於1949年由R.Walton等發現(非專利文獻7)，並於1986年由F.Peypoux等決定其係包含具有n-C16、i-C16、i-C17、ai-C17之側鏈的β-胺基酸與7個α-胺基酸之構造(非專利文獻8)。

桿菌黴素F(Bacillomycin F)係1982年由A.Mhammedi等從枯草桿菌(B.subutils)所單離(非專利文獻9)，並於1985年由F.Peypoux等揭明其係包含具有i-C16、i-C17、ai-C17之側鏈構造的β-胺基酸與7個α-胺基酸之構造(非專利文獻10)。

桿菌肽素(Bacillopeptin)係於1995年由Y.Kajimura等單離，並報告其係由具有n-C14、i-C15、i-C16之側鏈構造的β-胺基酸與7個α-胺基酸所構成之構造(非專利文獻11)。

桿菌黴素Lc(Bacillomycin Lc)係於1995年由S.M.Eshita等從枯草桿菌所單離，並揭明其係由具有n-C14、ai-C15、i-C15、i-C16、n-C16之側鏈構造的β-胺基酸與7個α-胺基酸(與Bacillopeptin相同之序列)所構成之構造(非專利文獻12)。

桿菌黴素L(Bacillomycin L)係於1984年由M.Landy等從枯草桿菌所單離(非專利文獻13)，並於1984年由F.Peypoux等提出其係包含具有n-C14、ai-C15、i-C15、i-C16、n-C16之側鏈構造的β-胺基酸與7個α-胺基酸之構造(非專利文獻14)，之後，於2007年由L.Volpon 等修正α-胺基酸之構造，揭明桿菌黴素L係具有與桿菌黴素Lc相同之構造(非專利文獻15)。

桿菌黴素D(Bacillomycin D)係於1950年由F.Raubitschek等所發現(非專利文獻16)，之後，於1981年由F.Peypoux等一度提出其構造(非專利文獻17)，而於1984年由F.Peypoux等修正其係包含具有n-C14、ai-C15、i-C15、i-C16、n-C16之側鏈構造的β-胺基酸與於2分子Asn分別有1分子Tyr、Glu、Pro、Ser、Thr之構造(非專利文獻14)。此報告中，β-胺基酸之構成比率係n-C14=47.6%、i-C15=22.7%、ai-C15=12.5%、i-C16=3.3%、n-C16=8.8%，具有C14及C15的β-胺基酸之桿菌黴素D為主要構成成分。此外，於2005年，G.K.Oleinikova等從海洋性枯草桿菌單離了i-C15桿菌黴素D，並決定其構造。

於2001年，A.C.Moyne等係從枯草桿菌中單離了2種對黃麴菌(Aspergillus flavus)具活性之成分，並以該等物質從串聯質譜推知該等物質為C15及C16-桿菌黴素D(非專利文獻19、專利文獻1)。O.Tabbene等係於2011年從枯草桿菌分離出對於對人類具病原性之白色念珠菌(Candida albicans)具有抗菌效果的3個活性物質，並藉由MALD f TOF/MS，察知該等物質係C14、C15及C16-桿菌黴素D(bacillomycin D)(非專利文獻20)。2004年A.Koumoutsi等雖在芽孢枯草桿菌FZB42(B.amyloliquefaciens FZB42)的培養物之MALD I-TOF/MS分析，推知存在有C14、C15、C16及極微量的C17桿菌黴素D，但完全未述 及β-胺基酸之側鏈構造(非專利文獻21、專利文獻2)。於2007年，R.Ramarathnam等藉由MALD I-TOF/MS分析枯草桿菌49株的抗菌成分，推知其係包含極微量C17桿菌黴素D之桿菌黴素D，但完全未述及桿菌黴素D的詳細構造(非專利文獻22)。

另一方面，關於該等伊枯草菌素類之環狀肽的構造與活性，係有以下之報告。1993年J.M.Bland等係檢討伊枯草菌素A的構造與對於青黴菌(Penicillium)及麴菌(Aspergillus)的活性之關聯，並報告i-C16>n-C16>i-C15>n-C14=ai-C15(非專利文獻23)。此外，1995年S.M.Eshita等，調查桿菌黴素Lc對植物病原菌的基礎活性，而揭明n-C16>n-C14、i-C16>i-C15、n-C16≧i-C16、i-C15≧ai-C15之關係(非專利文獻12)。然而，完全未揭明具有C17之側鏈的伊枯草菌素類之環狀肽之活性。

[先前技術文獻] [專利文獻]

[專利文獻1] 美國專利第6183736號說明書

[專利文獻2] 國際公開第2004/111240號小冊子

[非專利文獻]

[非專利文獻1] Molecular Microbiology 56, 845-857 (2005)

[非專利文獻2] Trends in Microbiology 16, 115-125 (2007)

[非專利文獻3] Biochemistry 17, 3992-3996 (1978)

[非專利文獻4] Tetrahedron Letters 23, 3065-3068 (1982)

[非專利文獻5] Journal of Antibiotics 36, 1451-1457 (1983)

[非專利文獻6] Phytochemistry 61, 693-698 (2002)

[非專利文獻7] J. Clin. Invest. 28, 924-926 (1949)

[非專利文獻8] Journal of Antibiotics 39, 636-641 (1986)

[非專利文獻9] Journal of Antibiotics 35, 306-311 (1982)

[非專利文獻10] Eur. J. Biochem. 153, 335-340 (1985)

[非專利文獻11] Journal of Antibiotics 48, 1095-1103 (1995)

[非專利文獻12] Journal of Antibiotics 48, 1240-1247 (1995)

[非專利文獻13] Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 67, 539-541 (1948)

[非專利文獻14] Journal of Antibiotics 37, 1600-1604 (1984)

[非專利文獻15] Spectrochimica acta part A 67, 1374-1381 (2007)

[非專利文獻16] Dermatologyca 100, 45-49 (1950)

[非專利文獻17] Eur. J. Biochem. 118, 323-327 (1981)

[非專利文獻18] Chemystry of Natural Compounds 41, 240-242 (2005)

[非專利文獻19] Journal of Applied Microbiology 90, 622-629 (2001)

[非專利文獻20] FEMS Microbiol. Lett. 316, 108-114 (2011)

[非專利文獻21] Journal of Bacteriology 186, 1084-1096 (2004)

[非專利文獻22] Can. J. Microbiol. 53, 901-911 (2007)

[非專利文獻23] Peptides 1992: proceedings of the Twenty-Second European Peptide Symposium; Schneider, C. H., Eberle, A. N. Eds.: ESCOM: Leiden, 1993; pp332-333

本發明之目的係提供一種具有殺菌活性的新穎化合物及含有該具有殺菌活性的新穎化合物之植物病害防治劑。

本發明者等積極尋求新穎的植物病害防治劑，結果發現桿菌屬(Bacillus sp.)所生產之胺基酸側鏈的碳數為17(C17)的桿菌黴素D之式(1)所示之新穎的化合物(化合物1及化合物2)，係表現有用於作為植物病害防治劑之殺菌活性。

如前所述，迄今為止的研究完全未有化合 物1及2之報告，且其活性亦同樣未有報告。本發明者等係將桿菌屬(Bacillus sp.)生產之該等化合物進行精製、並嚴格地決定其構造，且發現其活性係較以往已知之相關化合物來的高。另外，發現藉由含有公知之脂肽(lipopeptide)之表面活性素(Surfactin)，其效果會顯著增強，遂完成本發明。

亦即，本發明提供以下之物。

1.一種植物病害防治劑，其係以下述式(1)所示之化合物或其鹽作為有效成分， (式中，R¹及R²係表示氫原子或甲基，惟R¹與R²為相同之情形除外)。

2.前述第1項所述之植物病害防治劑，其中，R¹表示氫原子，R²表示甲基。

3.前述第1項所述之植物病害防治劑，其中，R¹表示甲基，R²表示氫原子。

4.前述第1至3項中之任一項所述之植物病害防治劑，其中復含有表面活性素。

5.一種植物病害防治方法，其係將前述第1至4項中任一項所述之植物病害防治劑施用於病害植物。

6.一種下述式(1)所示之化合物或其鹽， (式中，R¹及R²係表示氫原子或甲基，惟R¹與R²為相同之情形除外)。

7.前述第6項所述之化合物(化合物1)或其鹽，其中，R¹表示氫原子，R²表示甲基。

8.前述第6項所述之化合物(化合物2)或其鹽，其中，R¹表示甲基，R²表示氫原子。

本發明之化合物1及化合物2可使用作為具有優異的殺菌活性、安全的農業園藝用殺菌劑(植物病害防治劑)。

第1圖係化合物1之¹H-NMR光譜。

第2圖係化合物1之¹³C-NMR光譜。

第3圖係化合物2之¹H-NMR。

第4圖係化合物2之¹³C-NMR光譜。

以下揭示本發明之化合物1及2之理化性質。又，理化性質之測定方法係如下所述。

1.從外觀判斷顏色及形狀。

2.使用Waters Micromass LCT Premmier XE進行質譜(mass spectrum)之測定。

3.使用Bruker Avance II進行NMR光譜之測定。

化合物1之理化性質：1)顏色及形狀：白色粉末，2)質譜：m/z 1073.5902(M+H)⁺，3)分子式：C₅₁H₈₁N₁₀O₁₅，4)¹H-NMR光譜(600MHz、C₅D₅N)(第1圖)δ(ppm)：0.81(3H,d)、0.81(3H,t)、1.06(1H,m)、1.10-1.23(m)、1.24(1H,m)、1.28(1H,m)、1.34(3H,d)、1.44(1H,m)、1.55(1H,m)、1.64(1H,m)、1.85(1H,m)、2.08(2H,m)、2.42(1Hm)、2.61(1H,m)、2.63(1H,m)、2.78(1H,m)、2.95(1H,m)、3.00(1H,m)、3.04(1H,m)、3.09(1H,m)、3.18(1H,dd)、3.39(1H,dd)、3.57(1H,dd)、3.71(1H,dd)、4.03(1H,m)、4.26(1H,m)、4.32(1H,dd)、4.38(1H,dd)、4.61(1H,m)、4.72(1H,dd)、4.87(1H,m)、4.88(1H,m)、4.88(1H,m)、4.95(1H,m)、5.27(1H,dd)、5.32(1H,dd)、5.38(1H,m)、7.05(2H,d)、7.46(2H,d)、7.80(1H,brs)、7.89(1H,brs)、8.12(1H,d)、8.14(1H,brs)、 8.35(1H,brs)、8.36(1H,brs)、8.55(1H,brs)、8.73(1H,brs)、8.97(1H,brs)、9.02(1H,brs)、9.67(1H,brs)，5)¹³C-NMR光譜(150MHz、C₅D₅N)(第2圖)δ(ppm)：11.4、19.2、20.7、24.9、26.0、27.3、27.6、29.5、29.6、29.7、29.8、29.8、29.9、29.9、30.2、31.6、34.5、35.7、36.4、36.8、37.0、37.7、41.9、47.3、48.5、50.2、52.8、55.4、55.8、57.9、59.3、62.1、63.5、66.1、116.0、128.6、131.2、157.4、171.0、171.6、172.3、172.4、172.4、172.6、172.8、173.2、173.6、173.7、175.5。

化合物2之理化性質：1)顏色及形狀：白色粉末，2)質譜：m/z 1073.5876(M+H)⁺，3)分子式：C₅₁H₈₁N₁₀O₁₅，4)¹H-NMR光譜(600MHz、C₅D₅N)(第3圖)δ(ppm)：0.84(6H,d)、1.11(2H,m)、1.11(1H,m)、1.15-1.21(m)、1.31(1H,m)、1.35(3H,d)、1.44(1H,m)、1.44(1H,m)、1.55(1H,m)、1.65(1H,m)、1.86(1H,m)、2.09(2H,m)、2.42(1H,m)、2.62(1H,m)、2.63(1H,m)、2.79(1H,m)、2.97(1H,m)、3.01(1H,m)、3.04(1H,m)、3.09(1H,m)、3.18(1H,dd)、3.41(1H,dd)、3.57(1H,dd)、3.72(1H,dd)、4.04(1H,m)、4.28(1H,m)、4.33(1H,dd)、4.39(1H,dd)、4.62(1H,m)、4.73(1H,dd)、4.87(1H,m)、4.88(1H,m)、4.89(1H,m)、4.95(1H,m)、5.28(1H,dd)、5.32(1H,m)、5.39(1H,m)、7.06(2H,d)、7.47(2H,d)、7.80(1H,brs)、7.89(1H,brs)、8.13(1H,d)、8.17(1H,brs)、 8.39(1H,brs)、8.40(1H,brs)、8.58(1H,brs)、8.75(1H,brs)、8.98(1H,brs)、9.07(1H,brs)、9.68(1H,brs),5)¹³C-NMR光譜(150MHz、C₅D₅N)(第4圖)δ(ppm)：20.7、22.7、24.9、26.0、27.6、27.6、28.1、29.5、29.7、29.8、29.8、29.9、29.9、29.9、30.1、31.6、35.7、36.4、37.0、37.7、39.1、41.9、47.3、48.5、50.2、52.8、55.3、55.8、57.8、59.3、62.0、63.5、66.2、116.0、128.6、131.2、157.4、171.0、171.6、172.4、172.6、172.6、172.8、173.2、173.6、173.7、173.7、175.4。

化合物1及2之鹽係無特別限定，可列舉如鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、銨鹽等，較佳為鈉鹽。

化合物1及2係藉由培養具有生產化合物1及2的能力之微生物，而從該微生物之培養物採取而得到。化合物1及2之生產菌可列舉如桿菌(Bacillus)屬之微生物，其例可列舉如桿菌屬AT-332(Bacillus sp.AT-332)菌株及桿菌屬AT-79(Bacillus sp.AT-79)菌株。桿菌屬AT-332菌株及桿菌屬AT-79菌株，係作為桿菌屬AT-332及桿菌屬AT-79而寄託於寄存機構：獨立行政法人 製品評估技術基盤機構(National Institute of Technology and Evaluation)專利微生物寄託中心(〒292-0818日本國千葉縣木更津市上總鎌足2-5-8)(原寄託日(寄存日)：2011年5月2日，寄存編號：NITE BP-1095及NITE BP-1094)。

具有生產化合物1及2的能力之微生物之培養方法，係可藉由在固態培養基上靜置培養、液體培養等 公知的手段使其增殖，只要是本案之菌能夠生存並增殖的培養基種類、培養條件等即可利用，而無特別限制。例如在肉萃培養基等一般的培養基之外，可列舉包含葡萄糖、腖(peptone)、酵母萃之培養基等。此外，亦可使用液體培養基以外之含有洋菜的斜面培養基及平板培養基等固態培養基。

作為培養基之碳源，可利用上述菌株可同化者。具體而言，除了葡萄糖、半乳糖、乳糖、蔗糖、麥芽糖、麥芽萃取物、廢糖蜜、澱粉糖漿、澱粉水解物等糖之外，可列舉具有生產化合物1及2的能力之微生物能夠利用之各種合成或天然碳源。

培養基之氮源亦相同，以腖、肉萃、酵母萃取物、大豆粉、玉米浸液(Corn Steep Liquor)等有機含氮物為首，係可利用所述菌株能夠利用之各種合成或天然物。

此外，依照培養微生物之慣常方法，亦可視所需而添加食鹽、磷酸鹽等無機鹽類；鈣、鎂、鉄等金屬的鹽類；維生素、胺基酸等微量營養源。

培養係可在振盪培養、通氣培養等好氣性條件下進行。培養溫度為20至40℃、較佳為25至35℃，pH為5至8、較佳為6至7，培養期為1至4日、較佳為2至3日。

如後述之製造例所示，使用桿菌屬AT-332菌株時，會生產作為抗菌性伊枯草菌素之胺基酸側鏈為C15至C17之桿菌黴素D類的混合物。該等之比例因培養 條件而異，C15為2至15%、C16為15至45%、C17為40至70%，得到抗菌活性最強的C17之本發明化合物1及2作為主要成分。

從培養液精製化合物1及2之方法係無特別限定，可以酸沈降、鹽析、溶劑萃取、各種層析等公知方法實施。

本發明所使用之表面活性素可使用非專利文獻1及2所揭示之化合物的市售品。

本發明之化合物1及化合物2係胺基酸側鏈之碳數為17(C17)之新穎的桿菌黴素D化合物，其具有較以往已知之相關化合物更高的殺菌活性。因此，本發明之化合物1、化合物2或該等之鹽係有用於植物病害防治，藉由使含有本發明化合物1、化合物2、或該等之鹽的植物病害防治劑以本身、或其稀釋液的方式，存在於根、莖、葉、種子等植物體上，或存在於植物體之栽培土壤中，即可抑止各種植物病害。

含有本發明之化合物1、化合物2、或該等之鹽的植物病害防治劑，係可藉由施用形態而防治屬於卵菌類(Oomycetes)、子囊菌類(Ascomycetes)、擔子菌類(Basidiomycetes)及不完全菌類(Deuteromycetes)之菌類及細菌類所造成的植物病害。

就含有本發明之化合物1、化合物2、或該等之鹽的植物病害防治劑可防治之病害之病原菌而言，具體可列舉如：稻之稻熱病菌(Pyricularia oryzae)、稻胡麻葉 枯病菌(Cochliobolus miyabeanus)、稻紋病菌(Rhizoctonia solani)、稻苗徒長病菌(Gibberella fujikuroi)；麥類之白粉病菌(Erysiphe graminis f.sp.hordei，Erysiphe graminis f.sp.tritici)、鏽病菌(Puccinia striiformis，Puccinia graminis，Puccinia recondita f.sp.tritici，Puccinia hordei)、赤黴病菌(Gibberella zeae)、網斑病菌(Pyrenophorateres)、雪腐病菌(Typhula incarnata，Typhula ishikariensis，Sclerotiniaborealis，Micronectriella nivalis)、裸黑穗病菌(Ustilago nuda)、腥黑穂病菌(Tilletia caries，Tilletia toetida)、眼斑病菌(Tapesia yallundea)、雲紋病菌(Phynchosporium secalis f.sp.hordei)、葉枯病菌(Septoria tritici)、穎枯病菌(Lentosphaeria nodorum)；柑橘之黑點病菌(Diaporthe citri)、瘡痂病菌(Elsinoe fawcettii)、褐色腐敗病菌(Phytophthora citrophthora)、綠黴病菌(Penicillium digitatum)、青黴病菌(Penicillium italicum)；蘋果之花腐病菌(Monilinia mali)、腐爛病菌(Valsa ceratosperma)、白澀病菌(Podosphaera leucotricha)、斑點落葉病菌(Alternaria alternataapple pathotype)、黑星病菌(Venturia inaequalis)、赤星病菌(Gymnosporangium yamadae)、輪紋病菌(Botriophaeria berengeriana f.sp.piricola)、煤點病菌(Zygophiala jamaicensis)、煤斑病菌(Gloeodes pomigena)、黑點病菌(Mycosphaerella pomi)、炭疽病菌(Glomerella cingulata)、褐斑病菌(Diplocarponmali)；梨之黑星病菌(Venturia nashicola)、黑斑病菌(Alternaria alternataiapanese pear pathotype)、輪紋病菌(Physalospora piricola)、赤星病菌(Gymnosporangium asiaticum)；桃之褐腐病菌(Monilinia fructicola)、黑星病菌(Cladosporium carpophilum)、枝枯病菌(Phomopsis sp.)；葡萄之褐斑病菌(Pseudocercospora vitis)、輪紋病菌(Marssonina viticola)、黑痘病菌(Elsinoe ampelina)、晚腐病菌(Glomerella cingulata)、白粉病菌(Uncinula necator)、鏽病菌(Phakopsora ampelopsidis)、枝枯病菌(Phomopsis sp.)；柿之白粉病菌(Phyllactinia kakicola)、炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、角斑落葉病菌(Cercospora kaki)、園星落葉病菌(Mycosphaerella nawae)；梅之黑星病菌(Cladosporium carpophilum)；櫻桃之褐腐病菌(Monilinia fructicola)；瓜類之白粉病菌(Sphaerotheca fuliginea)、蔓枯病菌(Didymella bryoniae)、炭疽病菌(Colletotorichum legenarium)；番茄之輪紋病菌(Alternaria solani)、葉黴病菌(Cladosporium fulvum)；茄子之褐紋病菌(Phomopsis vexans)、白粉病菌(Erysiphe cichoracearum)；十字花科蔬菜之黑斑病菌(Alternaria japonica，Alternaria bracicae，Alternaria brassicicola)、白斑病菌(Cercosporella brassicae)；蔥之銹病菌(Pucciniaallii)；生薑之根莖腐敗病菌(Pyrhium ultimum，Pythium zigiberis)；草莓之白粉病菌(Sphaerotheca humuli)、炭疽病菌(Glomerella cingulata)；大豆之紫斑病菌(Cercospora kikuchii)、黑痘病菌(Elsinoe glycines)、黑點病菌(Diaporthe phaseolorum var.sojae)；紅豆之褐斑病菌(Cercospora canescens)、鏽病菌(Uromvces phaseoli var.azukicola)；菜豆之炭疽病菌(Colletotrichum lindemuthianum)；落花生之黑斑病菌(Cercosporidium personatum)、褐斑病菌(Cercospora arachidicola)、瘡痂病菌(Shaceloma arachidis)；豌豆之白粉病菌(Erysiphe pisi)；馬鈴薯之夏疫病菌(Alternaria solani)；茶之網餅病菌(Exobasidium reticulatum)、瘡痂病菌(Elsinoe leucospila)、輪斑病菌(Pestalotiopsis theae，Pestalotiopsis longiseta)；菸草之赤星病菌(Alternaria longipes)、白粉病菌(Erysiphe cichoracearum)、炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)；甜菜之褐斑病菌(Cercospora beticola)；日本芝草之葉緣枯病菌(Curvularia geniculata)、類葉枯病菌(Ceratobasidium spp.)；薔薇之黑星病菌(Diplocarpon rosae)、白粉病菌(Shaerotheca pannosa)；菊之褐斑病菌(Septoria obesa)、白鏽病菌(Puccinia horiana)；各種作物之灰黴病菌(Botrytis cinerea)、菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)等，但不限定為該等者。

此外，含有本發明之化合物1、化合物2、或該等之鹽的植物病害防治劑之適當使用量係可依上述生菌之情況而適宜決定。

含有本發明之化合物1、化合物2、或該等之鹽的植物病害防治劑除了直接使用化合物之外，亦可以惰性之液體或固體之載體稀釋，而作為視所需添加有界面活性劑、分散劑、其他補助劑之藥劑使用。具體的製劑之例，可列舉如粒劑、粉劑、可濕性粉劑、懸浮製劑、乳劑 等劑型等。

載體可列舉例如滑石、膨土、高嶺土、黏土、矽藻土、白碳(white carbon)、蛭石(vermiculite)、熟石灰、硫酸銨、矽砂、尿素、多孔質的固體載體、水、異丙醇、甲萘、二甲苯、環己酮、烷二醇等液體載體等。界面活性劑及分散劑可列舉例如二萘基甲磺酸鹽、硫酸醇酯鹽、木質素磺酸鹽(lignin sulfonates)、烷基芳基磺酸鹽、聚氧乙二醇醚、聚氧乙烯山梨醇單烷酯、聚氧乙烯烷基芳基醚等。補助劑可列舉如、羧甲纖維素、聚乙二醇、丙二醇、阿拉伯膠、三仙膠等；保護劑可列舉如脫脂乳、pH緩衝劑等。於此情形下，化合物之量以及進一步之適當使用時期及適當使用量，係可依上述生菌之情況而適宜地決定。

含有本發明之化合物1、化合物2、或該等之鹽的植物病害防治劑，可視所需而包含本發明之有效成分以外之有效成分，例如殺蟲劑、其他的殺菌劑、除草劑、植物生長調節劑、肥料等。

殺菌劑成分係可列舉如伊枯草菌素A、伊枯草菌素A_L、抗霉枯草菌素、桿菌黴素F、桿菌黴素Lc、豐原素(fengycin)、比多農(Bitertanol)、溴克座(Bromuconazole)、環克座(Cyproconazole)、待克利(difenoconazole)、達克利(diniconazole)、恩康唑(enilconazole)、依普座(epoxiconazole)、氟喹唑(fluquinconazole)、芬克座(fenbuconazole)、護矽得(flusilazole)、護汰芬(Flutriafol)、己唑醇(hexaconazole)、 易胺座(Imibenconazole)、依普克唑(ipconazole)、滅特座(Metconazole)、邁克尼(Myclobutanil)、平克座(penconazole)、普克利(propiconazole)、丙硫克唑(Prothioconazole)、矽氟唑(simeconazole)、三泰芬(Triadimefon)、三泰隆(Triadimenol)、得克利(Tebuconazole)、四克利(Tetraconazole)、滅菌唑(triticonazole)、撲克拉(prochloraz)、稻瘟酯(pefurazoate)、依滅列(imazalil)、賽福座(Triflumizole)、賽座滅(Cyazofamid)、免賴得(Benomyl)、貝芬替(Carbendazim)、涕本達唑(thiabendazole)、麥穗寧(fuberidazole)、噻唑菌胺(ethaboxam)、依得利(Etridiazole)、噁咪唑富馬酸(oxpoconazole fumarate)、殺紋寧(Hymexazol)、亞托敏(Azoxystrobin)、醚菌胺(dimoxystrobin)、烯肟菌酯(enestroburin)、氟嘧菌酯(Fluoxastrobin)、克收欣(Kresoximmethyl)、苯氧菌胺(Metominostrobin.)、肟醚菌胺(oryzastrobin)、啶氧菌酯(picoxystrobin)、百克敏(Pyraclostrobin)、三氟敏(Trifloxystrobin)、萎銹靈(carboxin)、本達樂(Benalaxyl)、白克列(Boscalid)、比殺芬(音譯，bixafen)、環醯菌胺(Fenhexamid)、福多寧(Flutolanil)、福拉比(Furametpyr)、滅普寧(mepronil)、滅達樂(Metalaxyl)、甲霜靈(Mefenoxam)、呋酰胺(ofurace)、歐殺斯(Oxadixyl)、嘉保信(Oxycarboxin)、吡噻菌胺(penthiopyrad)、賽氟滅(Thifluzamide)、噻醯菌胺(tiadinil)、達滅芬(Dimethomorph)、氟嗎啉(Flumorph)、氟滅倍(音譯，flumetover)、氟比來(Fluopicolide)、加普胺(Carpropamid)、雙氯氰菌胺 (Diclocymet)、曼普胺(Mandipropamid)、扶吉胺(Fluazinam)、比芬諾(Pyrifenox)、布瑞莫(Bupirimate)、賽普洛(Cyprodinil)、芬瑞莫(Fenarimol)、富米綜(ferimzone)、滅派林(Mepanipyrim)、尼瑞莫(Nuarimol)、嘧霉胺(Pyrimethanil)、賽福寧(Triforine)、拌種咯(Fenpiclonil)、護汰寧(fludioxonil)、亞吉芬(音譯，aldimorph)、十二嗎啉(dodemorph)、芬普福(Fenpropimorph)、三得芬(Tridemorph)、苯鏽啶(fenpropidin)、依普同(Iprodione)、撲滅寧(Procymidone)、免克寧(Vinclozolin)、凡殺同(Famoxadone)、咪唑菌酮(Fenamidone)、辛噻酮(Octhilinone)、撲殺熱(Probenazole)、敵菌靈(Anilazine)、達滅淨(diclomezine)、百快隆(pyroquilon)、百快淨(音譯，Proquinazid)、三賽唑(tricyclazole)、四氯丹(captafol)、蓋普丹(captan)、邁隆(dazomet)、福爾培(folpet)、芬諾尼(fenoxanil)、快諾芬(quinoxyfen)、安美速(amisulbrom)、鋅錳乃浦(Mancozeb)、代森錳鋅(Manzeb)、斯美地(Metam)、免得爛(Metiram)、富爾邦(Ferbam)、甲基鋅乃浦(Propineb)、得恩地(thiram)、鋅乃浦(zineb)、吉闌(Ziram)、乙霉威(Diethofencarb)、纈霉威(iprovalicarb)、異丙基苯並噻菌威(Benthiavalicarb-isopropyl)、普拔克鹽酸鹽、甲基多保淨(thiophanate-methyl)、吡菌苯威(Pyribencarb)、波爾多液(Bordeaux mixture)、鹼性氯氧化銅(Copper oxychloride)、鹼性硫酸銅、氫氧化銅、8-羥喹啉銅、多寧(dodine)、双胍三辛烷基苯磺酸鹽(iminoctadine albesilate)、双胍乙酸鹽、克熱淨(Guazatine)、春日黴素(Kasugamycin)、 鏈黴素(streptomycin)、保粒黴素(Polyoxin)、土黴素(oxytetracycline)、維利黴素A(validamycin A)、百蟎克(binapacryl)、敵蟎普(dinocap)、敵蟎通(dinobuton)、腈硫醌(dithianon)、亞賜圃(isoprothiolane)、護粒松(Edifenphos)、丙基喜樂松(iprobenfos)、乙膦(Fosetyl)、乙膦鋁(Fosetyl-aluminum)、白粉松(pyrazophos)、脫克松(Tolclophos-methyl)、四氯異苯腈(Chlorothalonil)、益發靈(dichlofluanid)、氟硫滅(flusulfamide)、六氯苯(Hexachlorobenzene)、熱必斯(fthalide)、賓克隆(pencycuron)、五氯硝苯(quintozene)、賽芬胺(Cyflufenamid)、克絕(cymoxanil)、二甲瑞莫(Dimethirimol)、依瑞莫(Ethirimol)、福拉樂(音譯，furalaxyl)、滅芬農(metrafenone)、葚孢菌素(spiroxamine)、銨乃浦(Amobam)、硫、石硫合劑、氯唑靈(Echlomezol)、碳酸氫鉀、碳酸氫鈣、噻二(diazine)、克枯爛(tecloftalam)、三、酸銅壬基苯酚磺酸銅(nonylphenolsulfonate copper)、羥異唑(hydroxyisoxazole)、氟醯亞胺(Fluoroimide)、聚胺酯(polycarbamate)、滅速克(methasulfocarb)、EDDP、IBP、脫芬瑞(tolfenpyrad)、氟吡菌酰胺(fluopyram)、亞汰尼(isotianil)、及吡唑萘菌胺(isopyrazam)，但不限定為該等。

殺蟲劑成分可列舉例如：亞滅培(acetamiprid)、派滅淨(pymetrozine)、撲滅松(Fenitrothion)、毆殺松(acephate)、加保利(carbaryl)、納乃得(methomyl)、培丹(Cartap)、賽洛寧(Cyhalothrin)、依芬寧(etofenprox)、 得福隆(teflubenzuron)、氟大滅(flubendiamide)、氟芬隆(flufenoxuron)、得芬諾(Tebufenozide)、芬普蟎(fenpyroximate)、畢達本(pyridaben)、益達胺(Imidacloprid)、布芬淨(buprofezin)、BPMC、MIPC、馬拉松(Malathion)、滅大松(methidathion)、芬殺松(fenthion)、大利松(Diazinon)、異亞碸磷(oxydeprofos)、繁米松(vamidothion)、愛芬克(ethiofencarb)、比加普(Pirimicarb)、百滅寧(Permethrin)、賽滅寧(Cypermethrin)、畢芬寧(bifenthrin)、合芬寧(halfenprox)、矽護芬(silafluofen)、烯啶蟲胺(nitenpyram)、克福隆(chlorfluazuron)、滅芬諾(methoxyfenozide)、得芬瑞(Tebufenpyrad)、畢汰芬(pyrimidifen)、開樂散(Kelthane)、毆蟎多(propargite)、合賽多(hexythiazox)、克芬蟎(clofentezine)、賜諾殺(spinosad)、密滅汀(Milbemectin)、BT(蘇力菌(Bacillus thuringiensis))、因得克(indoxacarb)、美氟綜(metaflumizone)、克凡派(chlorfenapyr)、芬普尼(fipronil)、依殺蟎(etoxazole)、亞醌蟎(acequinocyl)、甲基亞特松(pirimiphos-methyl)、阿納寧(acrinathrin)、6-甲基-1,3-二硫戊環并[4,5-B]喹啉-2-酮(滅蟎猛，Quinomethionate)、陶斯松(chlorpyrifos)、阿巴汀(Abamectin)、因滅汀安息香酸鹽(emamectin benzoate)、芬佈賜(fenbutatin oxide)、托福松(terbufos)、普伏松(ethoprophos)、加奪松(cadusafos)、芬滅松(fenamiphos)、繁福松(fensulfothion)、DSP、除線磷(dichlofenthion)、福賽絕(Fosthiazate)、毆殺滅(oxamyl)、殺美福(音譯，isamidofos)、吉福松(fosthietan)、依殺松 (Isazofos)、蟲線磷(thionazin)、免扶克(benfuracarb)、賜派芬(spirodiclofen)、愛芬克(ethiofencarb)、谷速松(Azinphos-methyl)、二硫松(disulfoton)、滅賜克(Methiocarb)、滅多松(oxydemeton-methyl)、巴拉松(Parathion)、賽扶寧(cyfluthrin)、貝他賽扶寧(beta-cyfluthrin)、丁基嘧啶磷(Tebupirimfos)、螺甲蟎酯(spiromesifen)、安殺番(Endosulfan)、三亞蟎(Amitraz)、泰滅寧(tralomethrin)、乙醯蟲腈(acetoprole)、益斯普(ethiprole)、愛殺松(Ethion)、三氯松(trichlorfon)、達馬松(Methamidophos)、二氯松(dichlorvos)、美文松(mevinphos)、亞素靈(monocrotophos)、大滅松(dimethoate)、覆滅蟎(formetanate)、福馬松(Formothion)、滅加松(Mecarbam)、硫滅松(thiometon)、二硫松(disulfoton)、乃力松(naled)、甲基巴拉松、殺蟲腈(cyanohos)、二胺磷(diamidafos)、爾本達唑(Albendazole)、奧本達唑(Oxibendazole)、芬本達唑(fenbendazole)、奥芬達唑(Oxfendazole)、加護松(propaphos)、硫丙磷(sulprofos)、普硫松(prothiofos)、佈飛松(profenofos)、亞芬松(isofenphos)、亞培松(temephos)、賽達松(phenthoate)、敵敵鈣(Dimethylvinfos)、氯芬松(chlorfenvinphos)、樂本松(tetrachlorvinphos)、巴賽松(phoxim)、加福松(isoxathion)、白克松(pyraclofos)、陶斯松(chlorpyifos)、必芬松(Pyridaphenthion)、裕必松(phosalone)、益滅松(phosmet)、殺力松(Dioxabenzofos；salithion)、拜裕松(quinalphos)、除蟲菊精(pyrethrin)、丙烯除蟲菊精(allethrin)、普亞列寧 (Prallethrin)、列滅寧(resmethrin)、百滅寧(permethrin)、汰福寧(Tefluthrin)、芬普寧(fenpropathrin)、亞滅寧(alpha-Cypermethrin)、賽洛寧(lambda-cyhalothrin)、第滅寧(deltamethrin)、芬化利(fenvalerate)、益化利(esfenvalerate)、護賽寧(flucythrinate)、福化利(Fluvalinate)、乙氰菊酯(Cycloprothrin)、硫敵克(thiodicarb)、得滅克(aldicarb)、棉鈴威(Alanycarb)、治滅蝨(Metolcarb)、滅爾蝨(Xylylcarb)、安丹(propoxur)、芬諾克(fenoxycarb)、芬硫克(Fenothiocarb)、必芬蟎(bifenazate)、加保扶(Carbofuran)、丁基加保扶(carbosulfan)、硫、比扶奇松(音譯，pyrifluquinazon)、扶拉克(音譯，Furathiocarb)、汰芬隆(Diafenthiuron)、二福隆(Diflubenzuron)、六伏隆(hexaflumuron)、諾伐隆(novaluron)、祿芬隆(lufenuron)、克福隆(chlorfluazuron)、三環己基氫氧化錫(tricyclohexyltin hydroxide)、油酸鈉、油酸鉀、美賜平(methoprene)、海卓平(音譯，hydroprene)、百蟎克、三亞蟎(amitraz)、克氯苯(Chlorobenzilate)、溴蟎酯(Phenisobromolate)、得脫蟎(2,4,5,4’-四氯二苯碸，tetradifon)、免速達(bensultap)、西脫蟎(Benzomate)、可芬諾(chromafenozide)、合芬隆(Halofenozide)、安殺番(Endosulfan)、達芬爛(音譯，Diofenolan)、脫芬瑞(Tolfenpyrad)、唑蚜威(triazamate)、菸鹼硫酸鹽(nicotine sulfate)、賽果培(thiacloprid)、賽速安(thiamethoxam)、可尼丁(clothianidin)、達特南(Dinotefuran)、扶吉胺(Fluazinam)、百利普芬(pyriproxyfen)、扶亞林(音譯，fluacrypyrim)、愛 美松(hydramethylnon)、賽滅淨(cyromazine)、TPIC、硫賜安(thiocyclam)、芬殺蟎(fenazaquin)、瀏陽黴素(Polynactin)複合物、印楝素(azadirachtin)、魚藤酮(rotenone)、羥丙澱粉(hydroxypropyl starch)、美芬扶(音譯，mesulfenfos)、松扶克(音譯，phosphocarb)、伊滅扶(音譯，isoamidofos)、涕滅威(aldoxycarb)、斯美地/鈉(metam-sodium)、摩朗得酒石酸鹽(Morantel tartrate)、邁隆(dazomet)、鹽酸左旋咪唑(Levamisole hydrochloride)、水楊菌胺(Trichlamide)、脫芬瑞、必噠利(音譯，pyridalyl)、剋安勃(chlorantraniliprole)、榭諾芬(音譯，cyenopyrafen)、及賽芬蟎(cyflumetofen)，但不限定為該等。

本發明之植物病害防治劑之施用方法無特別限定，可列舉例如直接散布於植物或害蟲之方法、散布於土壤之方法、添加於用來添加在植物或土壤之水或肥料之方法等。此外，製劑之施用量係因標的病害、標的作物、施用方法、發生傾向、被害之程度、環境條件、使用之劑型等而變動，故進行適宜調整較佳。

如以上所述，含有本發明之化合物1、化合物2、或該等之鹽的植物病害防治劑，係具有較廣的病害頻譜，而可防治複數種植物病害。含有該等菌株之本發明的植物病害防治劑，對於環境之安全性高，且具有對複數種病害之防治效果，故即使不採用其他的併用手段，仍可廣泛地防止病害。

(實施例)

以下列舉製造例、製劑例、及試驗例以具體說明本發明，惟本發明不限定為該等之例。

製造例：AT-332菌株之培養及調製

預培養，係將一接種環之AT-332菌株的保存菌接種至每一燒杯包含60ml之普通肉汁(bouillon)培養基(榮研化學股份有限公司)的附擋板(baffle)的500ml三角燒杯後，以回轉震盪機用回轉數180rpm、28℃、培養1日。

將藉由上述預培養得到的培養物60ml接種至包含2000mlLB培養基(腖20g，酵母萃取物10g，氯化鈉20g，水：餘量)之5000ml缸式發酵槽(jar fermenter)後，以回轉數500rpm、通氣1L/h，於35℃培養3日，作為正式培養。

將藉由上述正式培養所得到的約1800g培養物進行離心分離，得到1500ml之培養上清物。

用HCl將所得之培養上清物1500g調整為pH4.0，並以等量之乙酸乙酯進行3次萃取。將乙酸乙酯區分進行濃縮，並使其懸浮於水後，以氫氧化鈉使其成為pH7.0。以預先經水平衡化之Sep Pak C18吸附所得之溶液，以60至80%之甲醇使之溶出。將所得之區分供至HPLC，並分離出具有抗真菌活性之5個峰。各峰之存在量的比率為峰1(C15‧桿菌黴素D)7%、峰2(比較化合物；iso-C16桿菌黴素D)31%、峰3(n-C16桿菌黴素D)4%、峰4(化合物1)37%、峰5(化合物2)22%。

將峰4(化合物1：約350mg)、峰5(化合物2： 約200mg)、峰2(比較化合物；iso-C16桿菌黴素D；約300mg)分別進行單離。

藉由將所得之化合物1與化合物2進行胺基酸分析，LC(ESI)-TOF-MS、¹H-NMR、¹³C-NMR、HH-COSY、HMQC、NOESY、MALD I-TOF-MS PSD解析，艾德曼降解(Edman degradation)，判明化合物1與化合物2係本文記載構造。峰3者係以相同的方法確認為iso-C16桿菌黴素D(bacillomycin D)。

製劑例1：可濕性粉劑之調製

將製造例1所製得之化合物1、化合物2、比較化合物及表面活性素(Sigma-Aldrich Japan製)各5份(質量份，以下相同)、矽藻土50份、白碳35份、木質磺酸鈉(Sodium lignosulfonate)8份、及烷基萘磺酸鈉2份進行混合粉碎，得到各別之可濕性粉劑。

試驗例1：基礎抗菌活性之比較

各別調製化合物1及2、比較化合物之1%w/v二甲亞碸溶液。以二甲亞碸稀釋該藥劑，將預定量充分混合至滅菌後之馬鈴薯葡萄糖洋菜培養基，並於直徑90mm之培養皿內注入15ml，放置於室溫。又，作為對照組，係將僅添加二甲亞碸之馬鈴薯葡萄糖洋菜培養基也以相同方式作成。培養基凝固後，從預先培養的代表性植物病原菌[立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)、稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)及葡萄貴腐黴菌(Botrytis cinerea)]之菌落處，以直徑5mm之軟木穿孔器將培養基鑿取菌絲，並將 菌絲接種於試驗培養基的中央。將培養皿於25℃進行培養，於第2至第7日測定由接種源擴展的菌落之直徑，並藉由下述算式與對照組的菌落之直徑進行比較，而求出菌之生育阻礙率，並以阻礙度表示。結果係示於表2。明瞭到化合物1及2的3種植物病原菌之效果係較目前為止已揭示的比較化合物強。

[算式1]生育阻礙率(%)=(對照組的菌落之直徑-試驗區的菌落之直徑/對照組的菌落之直徑)×100

試驗例2：對黃瓜白粉病之效果試驗

將製劑例1之可濕性粉劑之1000倍稀釋液用噴槍充分量散布到在溫室內以直徑6cm之塑膠容器育成之3葉齡之黃瓜(品種：光3號P型)。比較劑係將Impression可濕性粉劑(SDS Biotech股份有限公司製)稀釋250倍者以相同方式供予試驗。翌日，將黃瓜白粉病胞子懸浮液進行 噴霧接種。於溫室內放置10天，以目視調查第一葉及第二葉(由下數起第1片與2片之葉)之發病面積率，求出防治度。防治度(%)係用下述算式算出。結果係示於表3。藉由以本發明之化合物1及2處理者的黃瓜白粉病發病率係較未處理區顯著減少，即使是與對照化合物及比較劑相比，也得到了極高的防治效果。此外，明瞭到其效果係以表面活性素而相乘性地增強。

[算式2]防治度=((1-散布區的病斑面積率/未散布區的病斑面積率))×100

(產業上之可利用性)

因為本發明之化合物(化合物1及2)具有優異的殺菌活性，故可使用作為含有本發明之化合物1、化合物2、或該等之鹽的安全的植物病害防治劑。

本案圖式為化合物1、化合物2之¹H-NMR光譜和¹³C-NMR光譜。故無指定代表圖。

Claims (9)

1. 一種植物病害防治劑，其係以下述式(1)所示之化合物或其鹽作為有效成分， (式中，R¹及R²係表示氫原子或甲基，惟R¹與R²為相同之情形除外)。
2. 如申請專利範圍第1項所述之植物病害防治劑，其中，R¹表示氫原子，R²表示甲基。
3. 如申請專利範圍第1項所述之植物病害防治劑，其中，R¹表示甲基，R²表示氫原子。
4. 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項所述之植物病害防治劑，復含有至少一種之胺基酸側鏈的碳數為15至16之桿菌黴素D化合物。
5. 如申請專利範圍第1項至第3項中任一項所述之植物病害防治劑，復含有表面活性素。
6. 一種植物病害防治方法，其係將申請專利範圍第1項至第5項中之任一項所述之植物病害防治劑施用於病害植物。
7. 一種下述式(1)所示之化合物或其鹽， (式中，R¹及R²係表示氫原子或甲基，惟R¹與R²為相同之情形除外)。
8. 如申請專利範圍第7項所述之化合物或其鹽，其中，該化合物為R¹表示氫原子，R²表示甲基之化合物1。
9. 如申請專利範圍第7項所述之化合物或其鹽，其中，該化合物為R¹表示甲基，R²表示氫原子之化合物2。