CN104010625B - 具有抗头发衰老活性的生物活性组合物 - Google Patents

具有抗头发衰老活性的生物活性组合物 Download PDF

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Abstract

本发明提供了生物活性组合物和使用所述组合物的方法，该组合物具有抗衰老、抗氧化和/或清除自由基的性质。

Description

具有抗头发衰老活性的生物活性组合物
发明领域
本发明涉及护发组合物和方法，其能增加头发的厚度和/或完整度的外观，和/或延迟白发的出现，从而展现更为健康和年轻的头发。
发明背景
很多有助于头发外观的因素是引人注目的。例如，完整而浓密的头发是很有吸引力的，反之，稀疏的头发则不具有吸引力，甚至可以理解为头发稀疏的人要大于其实际年龄。此外，白发的出现也会让人认为其大于实际年龄。另外，薄发和白发更难进行造型设计，通常有很多发型不能实现，使人产生挫败感，蓬头垢面。由于上述与薄发和白发有关的问题，很多人花费了巨大的精力和时间进行修饰，却并不能获得他们想要的发型和外观。这会导致挫败感和/或缺乏对于其外观的自信。多个年龄段的男性和女性消费者都会遇到这一问题。
因此，需要向这些消费者提供一种方法，来增加头发外观的完整度和厚度，减少白发的出现，由此使人更加健康和年轻，展现更具有吸引力的头发外观。
发明概述
本发明涉及护发组合物和方法，其能增加头发的完整度和/或厚度，和/或减少白发的出现，从而展现更为健康和年轻的头发。该结果通过增加头发茎和毛囊的直径、增加头发的数量、减少白发出现和/或使头发受损更小得以实现。
根据本发明的一个方面，提供了一种护发组合物，其包括用于头皮的有效量的抗头发衰老剂的协同组合，用于改善头发的外观，提供更为健康和年轻的哺乳动物毛发。该组合物包含有效量的抗头发衰老剂，其选自包含山茶浆液组分和黑叶母菊浆液组分的组合的第一组合物，或包含欧芹浆液组分和昆布浆液组分的组合的第二组合物，以及皮肤学可接受的载体。
根据本发明的一个方面，提供了一种方法，其包括将包含有效量的抗头发衰老剂的协同组合的护发组合物局部施用至头皮，用于改善头发的外观。
附图说明
认为通过下述的附图和说明能够更好的理解本发明。所涉及的附图不应认为限制本发明的范围。
图1是黑色素细胞试验的柱状图，其显示当昆布和欧芹浆液组分单独或以各种混合物使用时黑色素合成的激活。
图2是另一幅黑色素细胞试验的柱状图，其显示当昆布和欧芹浆液组分单独或以50：50混合使用时黑色素合成的激活。
图3是黑色素细胞试验的柱状图，其显示当山茶和黑叶母菊浆液组分单独或以各种混合物使用时黑色素合成的激活。
图4是另一幅黑色素细胞试验的柱状图，其显示当山茶和黑叶母菊浆液组分单独或以20：80混合使用时黑色素合成的激活。
图5是ADP-GloTM实验的柱状图，其显示当昆布和欧芹浆液组分单独或以各种混合物使用时白介素-1受体相关激酶(IRAK-4)的抑制。
图6是ADP-GloTM实验的柱状图，其显示当山茶和黑叶母菊浆液组分单独或以各种混合物使用时IRAK-4的抑制。
图7是本文所用的浆液组分和混合物的实体的列表。
发明详述
本文中，术语“护发组合物”是用于头发和/或头发下皮肤的组合物，包括用于治疗或护理头发的组合物。术语“护发组合物”涉及的产品包括但不限于须后滋补剂和洗剂，霜剂，乳剂，泡沫剂，头发调理剂(洗去型和免洗型)，头发着色剂，头发滋补剂，液体制剂，洗剂，摩丝，喷射剂乳液，洗发水，剃须凝胶，临时胡须染剂等。
“头发生长刺激剂”包括能增加或延长生长期的任何物质，或当有效量的含有头发生长刺激剂的组合物在结果有效时期内被局部施用至所需区域时，能增加哺乳动物毛发生长的生长期。所有本文中与头发生长有关的术语应理解为观察到的好处是相对于未施用本文的组合物后观察到或应当观察到的情况。这些观察包括但不限于增加头发茎和毛囊的直径，增加头发的数量，生长更长的头发，和/或使头发受损更小。
“增加头发的完整度和/或厚度”表示当在结果有效期内将有效量的本发明组合物局部施用至所需区域时，头发受试区域(例如头皮)的毛囊和/或茎的直径统计学显著性的增加。
"延迟白发的出现“表示出现白发的速度被延迟。已经公认，白发(即头发的天然变白或变灰)与毛干中的黑色素疾病有关。白发的发作或程度与年龄相关，因此延迟或减少白发的出现使得看上去更为年轻。白发发生率可通过视觉观察和日本专利申请2005-296352A和美国专利申请公开号2008/0064723中描述的方法测定，两者皆归资生堂公司所有。该计数法包括在前额头皮的任一侧指定一个50mmx10mm区域，收集该区域内所有的头发，从该区域割下1000根头发并计数。同时对白发和有色头发计数。该过程每月重复一次，或根据需要进行，由此计算白发的百分数。
本文所述“哺乳动物毛发”包括哺乳动物身体任何部分的毛发，包括但不限于，面部、头部和身体毛发。例如，其可以包括头皮、头部、颈部的头发、下唇须、上唇须、眉毛和鬓发。
本文中的术语“局部施用”表示将本发明的组合物用于或涂布在角质组织的表面，由此影响头发的生长。
本文中的术语“皮肤病学可接受的”表示所述的组合物或其成分适于和哺乳动物角质组织接触，而不会带来异常的毒性、不相容性、不稳定性、过敏反应等。
本文中的术语“有效量”表示化合物或组合物的量足以在统计学上显著地增加患者头发区域中发干的直径，在统计学上显著地增加头发密度(单位区域内头发数量)，和/或在统计学上显著地延迟白发的出现。
本文中的术语“浆液组分”表示由通常包括下述步骤的方法产生的组合物：(a)研磨和挤压干净新鲜的植物；(b)从细胞壁组分分离液体组分获得新鲜的细胞液，其中分离之前或期间不加入任何外源性液体；(c)过滤该新鲜细胞液，获得第一滤液；以及(d)分级分离该第一滤液以获得浆液组分。
I.护发组合物
本发明涉及护发组合物以及使用该组合物的方法，其可有效用于头皮表面，包括有效量的抗头发衰老剂，其能够有效提供更为年轻的外观的头发。该组合物可以多种产品形式存在，包括但不限于溶液、混悬液、洗剂、乳剂、凝胶、调色剂、棒状物、色笔、喷雾剂、气雾剂、软膏、清洁液洗涤剂和固体棒、洗发水和护发素、糊剂、泡沫剂、粉末、摩丝、剃毛霜、擦拭物、条状物、贴剂、电动贴剂、伤口敷料和胶布绷带、水凝胶、形成薄膜的产品等。所述组合物的形式取决于所选的特定的皮肤病学可接受的载体，如果其在组合物中存在的话。
A.抗头发衰老剂
根据本发明实施方案的护发组合物包含有效量的抗头发衰老剂的组合，所述抗头发衰老剂是浆液组分。因此，在一个实施方案中，所述护发组合物包括含有山茶属浆液组分和黑叶母菊浆液组分的第一组合，或含有欧芹浆液组分和昆布浆液组分的第二组合。根据另一个实施方案，所述护发组合物包含第一和第二组合。
所述山茶属、黑叶母菊或欧芹组分基本上由来自属于山茶(camellia sinensis)、小白菊(chrysanthemum parthenium)、或荷兰芹(petroselinum crispum)的植物的花、叶和/或茎浆液组分组成，昆布浆液组分基本上由来自光合成生物巨藻(macrocystispyrifera)的生物活性组分组成，其通常被称为褐藻。这里为简化讨论，当涉及浆液组分的来源时，褐藻应当理解为包括“植物”或“生物物质”。本文所用的示范性的浆液组分由AkzoNobel Surface Chemistry LLC(芝加哥,伊利诺伊州)提供。示范性的浆液组分制备方法参见美国专利7,473,435(山茶)，美国专利7,537,791(来自黑叶母菊(小白菊)的无小白菊内酯的生物活性成分)以及美国专利申请公开号2011/0110872(昆布)，其整体引入本文作为参考。所述浆液组分可混合形成浆液组分的组合，其令人惊讶的产生协同效应，如下文所述。
制备浆液组分的一般方法包括下列步骤：研磨和挤压干净新鲜的植物；从细胞壁组分分离液体组分获得新鲜的细胞液，其中分离之前或期间不加入任何外源性液体；过滤该新鲜细胞液，获得第一滤液；以及分级分离该第一滤液，获得本文所用的浆液组分。分级分离可包括一个或多个下列步骤：调节pH，加热例如微波加热，过滤，离心或稳定化。稳定化可包括添加防腐剂和温育混合物直到防腐剂完全溶解。示例性的防腐剂包括一种或多种以下成分：山梨酸钾、苯甲酸钠、对羟基苯甲酸甲酯钠和/或柠檬酸。
所得的浆液组分的组合相对于传统制备的植物提取物具有更好的生物活性。与传统的提取物不同，浆液组分是从已与新鲜植物材料的其他部分机械分离的新鲜植物细胞液制备。重点是，在整个细胞液分离过程中不加入任何外源性溶剂(例如水、己烷、丙酮和乙醇)。所得细胞液含有新鲜植物材料中的所有化合物，因此所得的浆液组分含有比传统植物提取物多得多的活性化合物，后者仅含有可用特定溶剂分离的少数化合物。
此外，使用新鲜植物保留了新鲜植物中生物活性成分的完整性。传统植物提取物并非由新鲜植物制备，而是从干燥的植物材料制备，其由于脱水而经历降解。在脱水过程中，细胞壁被破坏，引起化合物通过各种机制的降解，例如水解、氧化、聚合、美拉德反应和异构化。当干燥的叶被提取时，所得的提取物含有这些在新鲜植物中并不存在的降解产物。因此，所得干叶提取物的组成显著区别于新鲜的汁液和所得的浆液组分。
山茶浆液组分的示范性制备描述于美国专利7,473,435，概述如下。来自山茶植物的该浆液组分由包括以下步骤的方法制备：(1)生物质制备；(2)研磨、浸渍和挤压植物生物质；(3)从细胞液分离膜组分而获得细胞液上清；(4)从细胞液上清分离细胞质组分；以及(5)分离浆液组分。
(1)生物质制备:收集足量的新鲜山茶属(山茶)植物生物质(仅顶部带芽的嫩叶组织)，得到约100kg干物质。新鲜生物质中的干物质水平计算为21.70重量％，产生100kg干物质需要收集约461kg新鲜植物生物质。小心地维持植物生物质的固有水分含量，避免由于水分下降而枯萎。以这种方式收集可以避免或最大程度减少折断、破碎和压碎所收集的生物质，以避免叶细胞结构的破坏，因为这种破坏可以导致酚氧化酶和过氧化物酶催化的内源性酶反应。由于这些反应随氧化时间而加剧，所有的步骤应当在最短的时间内完成。例如，收集的生物质在收割后不超过10分钟内运送。这是为了使植物生物质对阳光、高温和其他负面环境因素的暴露最小化。在进一步处理前进行清洗步骤以从植物中去除土壤颗粒和其他碎片。该清洗通过将所收集的植物在≤1kg/cm2的水压下清洗≤5分钟完成。残留的水清洗液不含有任何绿色或棕色的色素，表明水压和清洗时间是合适的。过量的水从洗过的植物生物质中除去。
(2)研磨、浸软和挤压植物生物质：收获、收集和洗涤植物生物质后，对植物进行研磨、浸渍和挤压以提取细胞内成分(即植物细胞液)，将植物细胞液从富含纤维的细胞壁组分中分离。可使用具有10HP发动机的锤磨机(Model VS35,Vincent Corporation,Fla.)和一整套的筛网来研磨生物质，在最短时间内产生适当的较小的植物组织颗粒而不显著增加生物质的温度。锤磨机可设定为在≤10秒处理内产生最大尺寸≤0.5厘米的浸渍的植物颗粒。生物质的温度仅增加≤5℃。随后立即使用水平的连续螺旋压榨机(Compact Press"CP-6",Vincent Corporation,Fla.)，从植物中提取植物细胞液。螺旋压榨机的圆锥压力维持在24kg/cm2的水平，螺旋速度为12rpm，温度仅增加≤5℃。该处理可产生约276kg植物细胞液，干物质水平约为8.5重量％。
(3)从细胞液分离膜组分：最初的细胞液含有约8.5重量％的干物质，其含有细纤维颗粒，可通过4层尼龙纤维过滤或使用低速离心生物质而除去。过滤的植物细胞液使用温度探头控制的微波处理。该处理持续直至细胞液的温度达到60℃。一旦开始凝结，处理的细胞液立即冷却至40℃。使用大于等于3,000g的速度离心大于等于20分钟，从凝固的细胞液分离膜组分。其产生膜组分(沉淀)和细胞液上清，后者含有细胞质组分和细胞浆液组分(其含有低分子量可溶性成分)。所述细胞液上清用于进一步处理以产生浆液组分。
(4)从细胞液上清分离细胞质组分：为分离细胞质组分，将细胞液上清进行等电沉淀。使用滴定法，用5.0当量的盐酸(HCl)调节细胞液上清的pH至约4，诱导细胞质组分沉淀。沉淀的细胞质组分的干物质水平约为14.5重量％，其是通过在大于等于3,000g(其中g代表相对离心力)的速度离心大于等于20分钟而从上清液中分离的。
(5)分离浆液组分:分离细胞质组分后，上清液含有悬浮的颗粒。为分离这些颗粒，将上清液以大于等于7,500g的速度离心大于等于30分钟，用0.8微米小孔的滤膜过滤透明的上清液。该滤液(山茶浆液组分)的干物质水平约为5.7重量％。
应当理解，所述浆液组分的干物质水平可根据多种因素而变化，例如植物生物质的水分含量，其本身随着季节和/或地理的因素而变化。因此，在一个实施方案中，所述山茶属浆液组分的干物质水平范围为，例如约0.1重量％至约25重量％，约1重量％至约15重量％，约2重量％至约10重量％，或约3重量％至约9重量％。在一个实施方案中，黑叶母菊组分的干物质含量为，例如约0.1重量％至约25重量％，约1重量％至约15重量％，约2重量％至约10重量％，或约3重量％至约9重量％。在一个实施方案中，昆布组分的干物质含量为，例如约0.1重量％至约25重量％,约1重量％至约15重量％,约2重量％至约10重量％,或约3重量％至约9重量％。在一个实施方案中，欧芹组分的干物质含量为，例如约0.1重量％至约25重量％,约1重量％至约15重量％,约2重量％至约10重量％，或约3重量％至约9重量％。在另一个实施方案中，昆布和欧芹浆液组分和/或山茶属和黑叶母菊浆液组分混合物的干物质水平为，例如约0.1重量％至约25重量％,约1重量％至约15重量％,约2重量％至约10重量％，或约3重量％至约9重量％。
此外，浆液组分还可用浆液组分和/或干物质中特定化合物或化合物种类的含量或缺乏其他化合物或化合物种类进行定义。例如，在一个实施方案中，山茶属浆液组分每克干物质的儿茶素含量为约8.0至约20.0毫克，尤其为约10.0至约18.0毫克，更特别为约12.0至约16.0毫克。在另一个实施例中，黑叶母菊浆液组分不含或基本不含α-不饱和的γ-内酯，例如小白菊内酯。
类似地，可以对黑叶母菊(参见例如美国专利7,537,791)、昆布(参见例如美国专利申请公开号2011/0110872)和欧芹浆液组分进行分析和鉴定。
在某些情况下，浆液组分由于缺乏稳定性和变色和变味，从而不能用作局部产品的活性成分。浆液组分的精制可包括下列步骤：热处理，冷却，过滤和稳定化。精制可在从细胞质组分分离浆液组分后立即进行。例如，使用温度探头控制的微波处理山茶属浆液组分。该处理持续直至浆液组分的温度达到99℃(美国专利7,537,791中以前描述需要90℃，其整体引入本文作为参考)。一旦开始凝结，处理的浆液组分立即冷却至10℃。凝结的浆液组分使用0.8微米小孔的滤器真空过滤(也可使用双层Whatman2号滤纸，如美国专利7,537,791中所述)。可弃去沉淀，所得浆液组分滤液可进一步处理以稳定化。浆液组分滤液通过加入防腐剂(不需要任何外源性的抗氧化剂，如美国专利7,537,791中所述)以及温育混合物直至完全溶解来完成稳定化。用于稳定浆液组分滤液的防腐剂包括下列组分：0.1％山梨酸钾、0.1％苯甲酸钠、0.1％对羟基苯甲酸甲酯钠、和/或0.1％柠檬酸。山茶属浆液组分建议的储存条件包括储存在避光保存的密闭容器中，温度介于15℃-25℃。
对小白菊、荷兰芹或巨藻进行类似的处理可分别产生黑叶母菊、欧芹或昆布的浆液组分。
在某些实施方案中，所述护发组合物包含有效量的抗头发衰老剂，其包括山茶属浆液组分和黑叶母菊浆液组分的第一组合，山茶属浆液组分的量为约0.001重量％至约15重量％,或者为约0.002重量％至约10重量％，或者为约0.025重量％至约10重量％，在其他实施方案中为约0.05重量％至约10重量％，在其他中为约0.05重量％至约5重量％，在其他中为约0.1重量％至约5重量％；黑叶母菊浆液组分的量为约0.001重量％至约15重量％，约0.002重量％至约10重量％，约0.025重量％至约10重量％，约0.05重量％至约10重量％，约0.05重量％至约5重量％，或约0.1重量％至约5重量％,其中所述的重量％是基于护发组合物的重量。
根据另一个实施方案，山茶属浆液组分和黑叶母菊浆液组分的重量比为约10:90至约90:10，约10:90至约50:50，约80:20至约20:80，约30:70至约70:30，约40:60至约60:40。例如，山茶属浆液组分和黑叶母菊浆液组分的重量比可为约90:10，约80:20，约70:30，约60:40，约50:50，约40:60，约30:70，约20:80或约10:90。
在另一个实施方案中，护发组合物包含有效量的抗头发衰老剂的第二组合，其包括欧芹浆液组分和昆布浆液组分。欧芹浆液组分的量为约0.001重量％至约15重量％，约0.002重量％至约10重量％，约0.025重量％至约10重量％，约0.05重量％至约10重量％，约0.05重量％至约5重量％，或约0.1重量％至约5重量％；昆布浆液组分的量为约0.001重量％至约15重量％，约0.002重量％至约10重量％，约0.025重量％至约10重量％，约0.05重量％至约10重量％，约0.05重量％至约5重量％，或约0.1重量％至约5重量％，其中所述的重量％是基于护发组合物的重量。
根据另一个实施方案，欧芹浆液组分和昆布浆液组分的重量比为约10:90至约90:10，约10:90至约50:50，约80:20至约20:80，约30:70至约70:30，约40:60至约60:40。例如，欧芹浆液组分和昆布浆液组分的重量比可为约90:10，约80:20，约70:30，约60:40，约50:50，约40:60，约30:70，约20:80或约10:90。
B.皮肤病学可接受的载体
本发明的组合物还可包含用于该组合物的皮肤病学上可接受的载体(其可称为“载体”)。本文所用的短语“皮肤病学上可接受的载体”表示所述载体适于局部施用至角质组织，具有良好的美容性质，与组合物中的抗头发衰老剂相容，并且不会引起任何不合理的安全性或毒性影响。选择适当的载体以产生所需的产品形式。此外，成分的溶解性或分散性决定了载体的形式和特征。在一个实施方案中，所述载体的水平占组合物重量的约50重量％至约99重量％，约60重量％至约98重量％，约70重量％至约98重量％，或者，从约80重量％至约95重量％。
所述载体可以以多种形式存在。非限制性的实例包括简单的溶液(例如水溶液、有机溶剂或油溶液)、乳剂和固体形式(例如凝胶、棒状物、可流动的固体或无定形材料)。在某些实施方案中，皮肤病学上可接受的载体是乳剂的形式。乳剂通常可以分成具有连续水相的(例如水包油和水包油包水)或连续油相的(例如油包水和油包水包油)。本发明的油相可包含硅油类、非硅油类例如烃类油、酯、醚等，以及其混合物。
水相包括水，例如去矿物质水或蒸馏水。其他可用于水载体的可接受的载体包括但不限于醇化合物，例如乙醇。根据一个实施方案，所述组合物包括乙醇、双丙二醇和/或水。
所述护发组合物的pH范围为约3.0至约10，其可以在25℃使用该组合物的标准氢电极的直接测定pH法进行测定。因此，所述护发组合物的pH范围例如可以是约6至约9。
乳剂还可包含乳化剂。所述组合物可包含任何适当百分比的乳化剂，以使载体充分乳化。适当的重量范围包括基于组合物重量的约0.1重量％至约10重量％，或约0.2重量％至约5重量％的乳化剂。乳化剂可以是非离子的、阴离子或阳离子的。适当的乳化剂公开在例如美国专利3,755,560、美国专利4,421,769以及McCutcheon's Detergents and Emulsifiers,North American Edition,317-324页(1986)，其整体引入本文作为参考。适当的乳剂可具有宽范围的粘度，这取决于所需的产品形式。
C.任选的成分
根据本发明的实施方案，所述护发组合物还可根据需要包含适当的任选成分。例如，组合物可任选包括其他活性或非活性成分。
根据另一个实施方案，护发组合物还可包括一种或多种额外的抗头发衰老剂，例如美国专利申请公开号2010/0120871中公开的那些，其整体引入本文作为参考。因此，额外的头发生长刺激剂的非限制性实例包括类黄酮化合物例如芹黄素和四羟黄酮、吲哚化合物、黄嘌呤化合物、维他命B3化合物、泛醇化合物以及其衍生物。
1.类黄酮(flavonoids)
本发明实施方案的组合物可任选含有类黄酮化合物。类黄酮在美国专利号5,686,082和5,686,367已广泛地公开，将两者均引入本文作为参考。适用于本发明实施方案的类黄酮是黄烷酮类，其选自未被取代的黄烷酮类、单取代的黄烷酮类及其混合物；查耳酮类，其选自未取代的查耳酮类、单取代的查耳酮类、双取代的查耳酮类、三取代的查耳酮类及其混合物；黄酮类(flavones)，其选自未取代的黄酮类、单取代的黄酮类、双取代的黄酮类及其混合物；一种或多种异黄酮类；香豆素类，其选自未取代的香豆素类、单取代的香豆素类、双取代的香豆素类及其混合物；色酮类，其选自未取代的色酮类、单取代的色酮类、双取代的色酮类及其混合物；一种或多种双香豆素类；一种或多种二氢色原酮类；一种或多种色原烷醇；其异构体(例如顺/反异构体)；及其混合物。本文所用术语“取代的”意指类黄酮，其中该类黄酮的一个或多个氢原子独立地被羟基、C1-C8烷基、C1-C4烷氧基、0-糖苷等或这些取代基的混合物所替换。
适当的类黄酮的实例包括但不限于未取代的黄烷酮、单羟基黄烷酮(例如2'-羟基黄烷酮、6-羟基黄烷酮、7-羟基黄烷酮等)、单烷氧基黄烷酮(例如5-甲氧基黄烷酮、6-甲氧基黄烷酮、7-甲氧基黄烷酮、4'-甲氧基黄烷酮等)、未取代的查耳酮(尤其是未取代的反式查耳酮)、单羟基查耳酮(例如，2'-羟基查耳酮、4'-羟基查耳酮等)、二-羟基查耳酮(例如2',4-二羟基查耳酮、2',4'-二羟基查耳酮、2,2'-二羟基查耳酮、2',3-二羟基查耳酮、2',5'-二羟基查耳酮等)、以及三羟基查耳酮(例如2',3',4'-三羟基查耳酮、4,2',4'-三羟基查耳酮、2,2',4'-三羟基查耳酮等)、未取代的黄酮、7,2'-二羟基黄酮、3',4'-二羟基萘黄酮、4'-羟基黄酮、5,6-苯并黄酮和7,8-苯并黄酮、未取代的异黄酮、黄豆苷元(7,4'-二羟基异黄酮)、5,7-二羟基-4'-甲氧基异黄酮、大豆异黄酮(大豆中提取的混合物)、未取代的香豆素、4-羟基香豆素、7-羟基香豆素、6-羟基-4-甲基香豆素、未取代的色酮、3-甲酰基色酮、3-甲酰基-6-异丙基色酮、未取代的双香豆素、未取代的二氢色原酮、未取代的色原烷醇及其混合物。
在一个实施方案中，所述类黄酮化合物是未取代的黄烷酮、甲氧基黄烷酮、未取代的查耳酮、2',4-二羟基查耳酮及其混合物。例如，在另一个实施方案中，其为未取代的黄烷酮、未取代的查耳酮(例如反式异构体)及其混合物。
类黄酮可以是合成的物质或作为天然来源(例如植物)的提取物获得。天然来源的物质可进一步衍生(例如从天然来源提取后，制备的酯或醚衍生物)。本文中可用的类黄酮化合物可以从许多来源例如Indofine Chemical Company,Inc.(Somerville,N.J.)、Steraloids,Inc.(Wilton,N.H.)和Aldrich Chemical Company,Inc.(Milwaukee,Wis.)商购获得。
也可使用上述类黄酮化合物的混合物。
当包含在护发组合物中时，本文所述类黄酮化合物可以以约0.01重量％至约20重量％、约0.1重量％至约10重量％或约0.5重量％至约5重量％的浓度存在，其中所述重量％是基于护发组合物的总重量。
2.吲哚化合物
所述护发组合物还可包含吲哚化合物。本文所用“吲哚化合物”意指一种或多种吲哚、其衍生物、其混合物或其盐类。因此，所述组合物可包含，例如，约0.1重量％至约10重量％的吲哚化合物、约0.5重量％至约5重量％的吲哚化合物、或约1重量％至约2重量％的吲哚化合物，其中所述的重量％是基于护发组合物的总重量。
3.黄嘌呤化合物
所述护发组合物还可包含黄嘌呤化合物。本文所用“黄嘌呤化合物”意指一种或多种黄嘌呤、其衍生物和其混合物。本文中可用的黄嘌呤化合物包括但不限于咖啡因、黄嘌呤、1-甲基黄嘌呤、茶碱、可可碱、其衍生物和其混合物。因此，所述组合物可包含，例如，约0.1重量％至约10重量％的黄嘌呤化合物、约0.5重量％至约5重量％的黄嘌呤化合物、或约1重量％至约2重量％的黄嘌呤化合物，其中所述重量％是基于护发组合物的总重量。例如，护发组合物还可包含约0.75重量％的咖啡因。
4.维生素B3化合物
所述护发组合物还可包含维生素B3化合物。如本文所用，“维生素B3化合物”意指烟酸、烟酰胺、烟醇、其衍生物及其混合物。维生素B3化合物可以作为基本上纯的物质或通过适当的物理和/或化学分离从天然来源(例如植物)得到的提取物而被包含。因此，所述组合物可包含，例如，约0.1重量％至约25重量％的维生素B3化合物、约0.5重量％至约15重量％的维生素B3化合物、或约3.5重量％至约7.5重量％的维生素B3化合物，其中所述重量％是基于护发组合物的总重量。例如，护发组合物还可包含约2.5重量％的维生素B3。
5.泛醇化合物
所述护发组合物还可包含泛醇化合物。如本文所用，术语“泛醇化合物”包括泛醇、一种或多种泛酸衍生物及其混合物。泛醇化合物的非限制性实例包括D-泛醇([R]-2,4-二羟基-N-[3-羟基丙基)]-3,3-二甲基丁酰胺)、D,L-泛醇、泛酸及其盐(例如钙盐)、泛醇三乙酸酯、蜂乳、Panthetine、泛酰巯基乙胺、泛醇乙醚(panthenyl ethyl ether)、泮加酸、泛酰乳糖、复合维生素B或其混合物。因此，所述组合物可包含，例如，约0.01重量％至约5重量％的泛醇化合物；约0.03重量％至约3重量％的泛醇化合物；约0.05重量％至约2重量％的泛醇化合物；或约0.1重量％至约1重量％的泛醇化合物，其中所述重量％是基于护发组合物的总重量。例如，护发组合物还可包含约0.15重量％的泛醇。
所述组合物还可包括其他常用头发成分，例如抗头皮屑活性成分，例如吡硫翁锌、米诺地尔、硅酮类、调节剂以及其他适当的物质。CTFA化妆品成分手册，第10版(化妆品、化妆用具和香水协会公司出版，华盛顿特区)(2004)(后文称为"CTFA")描述了多种可加入本文的组合物的非限制性的物质。这些成分种类的实例包括但不限于：磨料、吸收剂、美容化合物例如香味、色素、着色剂/染料、芳香油类、皮肤感知剂、收敛剂等(例如丁香油、薄荷醇、樟脑、桉树油、丁香酚、乳酸薄荷酯、金缕梅馏出物)、抗痤疮剂、抗结块剂、消泡剂、抗菌剂(例如丁基氨基甲酸碘代丙基酯)、抗氧化剂、黏合剂、生物添加剂、缓冲剂、填充剂、螯合剂、化学添加剂、色素、化妆品收敛剂、化妆品灭菌剂、变性剂、药物收敛剂、外用镇痛药、薄膜形成剂或物质，例如聚合物，用于辅助薄膜形成性质和组合物的直接性(例如二十烯和乙烯吡咯烷酮的共聚物)、遮光剂、pH调节剂、抛射剂、还原剂、多价螯合剂、流变调节剂、头发调节剂和表面活性剂。
6.抗头皮屑活性成分
所述护发组合物还可包括抗头皮屑活性剂。适当的抗头皮屑活性剂的非限制性实例包括：抗菌活性剂、吡啶硫酮盐、唑类、例如酮康唑、克里巴唑(climbasole)、益康唑和衣鲁二醇(elubiol)；二硫化硒；硫微粒；角质溶解剂，例如水杨酸，及其混合物。在一个实施方案中，抗头皮屑微粒是吡啶硫酮盐。所述抗头皮屑微粒应当与所述组合物的成分在生理上和化学上是相容的，不应过度损害产品的稳定性、美观性和功效。
吡啶硫酮微粒是适用于本发明的护发组合物的适当的微粒抗头皮屑活性剂。在一个实施方案中，所述抗头皮屑活性剂是1-羟基-2-吡啶硫酮，并且是微粒形式的。在一个实施方案中，所述吡啶硫酮抗头皮屑微粒浓度范围为护发组合物总重量的约0.01重量％至约5重量％，或约0.1重量％至约3重量％，或约0.1重量％至约2重量％。在一个实施方案中，吡啶硫酮盐是与重金属形成的那些盐，例如锌、锡、钙、镁、铝和锆，通常是锌，通常是1-羟基-2-吡啶硫酮的锌盐(称做吡硫锌或“ZPT”)。通常是血小板颗粒形式中的1-羟基-2-吡啶硫酮。在一个实施方案中，血小板颗粒形式的1-羟基-2-吡啶硫酮类的平均颗粒尺寸最大为约20微米，或最大为约5微米，或最大为约2.5微米。从其他阳离子，例如钠形成的盐也可能是适合的。例如，美国专利2,809,971、美国专利3,236,733、美国专利3,753,196、美国专利3,761,418、美国专利4,345,080、美国专利4,323,683、美国专利4,379,753和美国专利4,470,982描述了吡啶硫酮抗头皮屑活性剂。
在一个实施方案中，除了选自巯氧吡啶的多价金属盐的抗头皮屑活性剂以外，所述组合物还可包括一种或多种抗真菌和/或抗细菌活性剂。在一个实施方案中，所述抗菌活性剂选自：煤焦油、硫、炭、惠特菲尔德软膏、卡斯泰拉尼涂料、氯化铝、龙胆紫、羟甲辛吡酮(吡罗克酮乙醇胺)、环吡酮胺、十一烯酸及其金属盐、高锰酸钾、二硫化硒、硫代硫酸钠、丙二醇、苦橙油、尿素制剂、灰黄霉素、8-羟基喹啉ciloquinol、硫苯哒唑、硫代氨基甲酸酯类、卤普罗近、聚烯类、羟基吡啶酮、吗啉、苄胺、烯丙胺(例如特比萘芬)、茶树油、丁香叶油、芫荽子、Palmarosa、小檗碱、百里香红、肉桂油、肉桂醛、香茅酸、Hinokitol、鱼石脂白、Sensiva SC-50,Elestab HP-100、壬二酸、溶细胞酶、丁基氨基甲酸碘代丙炔基酯(IPBC)、异噻唑啉酮(isothiazalinones)例如辛基异噻唑啉酮，和唑类，及其混合物。
在一个实施方案中，唑类抗菌剂是选自下列物质的咪唑：苯并咪唑、苯并噻唑、联苯苄唑、硝酸布他康唑、氯咪巴唑、克霉唑、氯康唑、依柏康唑、益康唑、衣鲁二醇、芬替康唑、氟康唑、氟三唑、异康唑、酮康唑、拉诺康唑、甲硝唑、咪康唑、奈康唑、奥莫康、硝酸奥昔康唑、舍他康唑、硝酸硫康唑、噻康唑、噻唑及其混合物。或者所述唑类抗菌剂是选自下列物质的三唑：特康唑、伊曲康唑及其混合物。当在组合物中存在时，唑类抗菌活性剂的量为约0.01重量％至约5重量％，或约0.1重量％至约3重量％，或约0.3重量％至约2重量％，其中所述重量％是基于护发组合物的总重量。
本发明还可包含抗菌活性剂的组合。在一个实施方案中，所述抗菌活性剂的组合选自下列组合：羟甲辛吡酮和吡硫翁锌、松焦油和硫、水杨酸和吡硫翁锌、水杨酸和衣鲁二醇、吡硫翁锌和衣鲁二醇、吡硫翁锌和Climbasole、羟甲辛吡酮和Climbasole、水杨酸和羟甲辛吡酮，及其混合物。
在一个实施方案中，所述护发组合物还可包含有效量的含锌分层物质。在一个实施方案中，所述护发组合物包含约0.001重量％至约10重量％、或约0.01重量％至约7重量％、或约0.1重量％至约5重量％的含锌分层物质，其中重量％是基于护发组合物的总重量。
含锌分层物质是晶体生长主要发生在二维平面的物质。本领域通常这样描述层状结构：其不仅包括所有原子组装在明确定义的层结构中的那些，还包括介于层之间具有离子或分子的那些，其称为坑道离子(A.F.Wells “Structural Inorganic Chemistry”Clarendon Press,1975)。含锌分层物质(ZLM)的锌可以是掺合在层中和/或是坑道离子的组分。下述ZLM的种类代表一般性分类中相对常见的例子，并不意味着限制符合该定义的材料的范围。
许多ZLM作为矿物而天然存在。在一个实施方案中，ZLM选自：水锌矿(碳酸锌氢氧化物)，碱式碳酸锌，绿铜锌矿(碳酸铜锌氢氧化物)，罗萨斯(碳酸锌铜氢氧化物)，以及它们的混合物。含锌的相关矿物也可以被包括在组合物中。也存在天然ZLM，其中阴离子层种类例如粘土矿物(例如层状硅酸盐)含有离子交换的锌坑道离子。所有这些天然物质也可以通过在组合物中或在生产过程中合成或就地生成。
另一类通常但并非总是合成的常见ZLM是分层的二氢氧化物。在一个实施方案中，ZLM是下式的分层的二氢氧化物：[M2+ 1-xM3+ x(OH)2]x+Am- x/m·nH2O，其中某些或全部的二价离子(M2+)是锌离子(Crepaldi,EL,Pava,PC,Tronto,J,Valim,JB J.ColloidInterfac.Sci.2002,248,429-42)。
另一类可被制备的ZLM称为羟基双盐(Morioka,H.,Tagaya,H.,Karasu,M,Kadokawa,J,Chiba,K Inorg.Chem.1999,38,4211-6)。在一个实施方案中，ZLM是式[M2+ 1-xM2 + 1+x(OH)3(1-y)]+An- (1＝3y)/n·nH2O的羟基双盐，其中两个金属离子(M2+)可以相同或不同。如果其同时为锌，该化学式简化为[Zn1+x(OH)2]2x+2x A-·nH2O。这一化学式代表了诸如羟基氯化锌和羟基硝酸锌的一类物质(其中x＝0.4)。在一个实施方案中，ZLM是羟基氯化锌和/或羟基硝酸锌。这些也涉及水锌矿，其中二价阴离子代替了一价阴离子。这些物质还可在组合物中或在生产过程中或期间就地生成。
在一个实施方案中，所述组合物可进一步包含碱式碳酸锌。碱式碳酸锌的可商业购买的来源包括碱式碳酸锌(Cater Chemicals:Bensenville,IL,USA)、碳酸锌(ShepherdChemicals:Norwood,OH,USA)、碳酸锌(CPS Union Corp.:New York,NY,USA)、碳酸锌(Elementis Pigments:Durham,UK)和碳酸锌AC(Bruggemann Chemical:Newtown Square,PA,USA)。碱式碳酸锌商品名又称为“碳酸锌”或“碱性碳酸锌”或“羟基碳酸锌”，是合成制型，其由与天然存在的水锌矿相类似的物质组成。理想的化学定量关系可由Zn5(OH)6(CO3)2表示，但实际化学计量比例会略有变化，并且在晶格中可能会掺入其它杂质。
在具有含锌分层物质和巯氧吡啶或巯氧吡啶的多价金属盐的实施方案中，含锌分层物质和巯氧吡啶或巯氧吡啶的多价金属盐的比例为约5:100至约10:1，或约2:10至约5:1，或约1:2至约3:1。
在一个实施方案中，所述护发组合物还包括流变学改性剂以增加组合物的直接性，这样其不会滴到身体的其他部分、衣物以及家居物品上，也能够作为薄膜形成剂，增加抗头发衰老剂和头发毛囊及周围组织的接触。可使用任何适当的流变学改性剂，例如基于纤维素的流变学改性剂，例如羟丙基甲基纤维素。其他非限制性的流变学改性剂的实例包括丙烯酰胺/丙烯酸铵共聚物(和)聚异丁烯(和)聚山梨酯20；丙烯酰胺/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物/异十六烷/聚山梨酯80；丙烯酸酯共聚物；丙烯酸酯/beheneth-25甲基丙烯酸酯共聚物；丙烯酸酯/C10-C30烷基丙烯酸酯交联共聚物；丙烯酸酯/steareth-20衣康酸酯共聚物；聚丙烯酸胺/异十六烷/PEG-40蓖麻油；C12-16烷基PEG-2羟丙基羟乙基乙基纤维素(HM-EHEC)；卡波姆；交联聚乙烯吡咯烷酮(PVP)；二亚苄基山梨醇；羟乙基乙基纤维素(EHEC)；羟丙基甲基纤维素(HPMC)；羟丙基甲基纤维素(HPMC)；羟丙基纤维素(HPC)；甲基纤维素(MC)；甲基羟乙基纤维素(MEHEC)；PEG-150/癸醇/SMDI共聚物；PEG-150/硬脂醇/SMDI共聚物；聚丙烯酰胺/C13-14异链烷烃/聚乙二醇单十二醚-7；聚丙烯酸酯13/聚异丁烯/聚山梨酯20；聚丙烯酸酯交联共聚物-6；聚酰胺-3；聚季铵盐-37(和)氢化聚癸烯(和)十三烷醇聚醚-6；聚氨酯-39；丙烯酸钠/丙烯酰/二甲基丙烯酰胺；交联聚合物(和)异十六烷(和)聚山梨酯60；聚丙烯酸钠。示范性的可商业购买的流变学改性剂包括ACULYNTM28、Klucel MCS、Klucel H CS、Klucel G CS、SYLVACLEAR AF1900V、SYLVACLEAR PA1200V、BenecelE10M、Benecel K35M、Optasense RMC70、ACULYNTM33、ACULYNTM46、ACULYNTM22、ACULYNTM44、Carbopol Ultrez20、Carbopol Ultrez21、Carbopol Ultrez10、Carbopol1342、SepigelTM305、SimulgelTM600、Sepimax Zen，及其组合。
根据另一个实施方案，所述护发组合物还可包括一种或多种溶剂，例如二丙二醇、丙二醇、丁二醇、1,4-丁二醇、3-烯丙氧基-1,2-丙二醇、二丙二醇正丁基醚、1,2-己二醇、二甲基异山梨醇、乙醇、1,3-丁二醇、1,3-丙二醇、2,2'-硫代二乙醇、1,6-己二醇或其组合。
本发明的护发组合物可以是典型的护发制剂的形式。其可以是溶液、分散液、乳剂、粉末、滑石粉、包囊的、球形、海绵、固体剂型、泡沫和其他递送机制。本发明实施方案的组合物可以是头发滋补剂，免洗型护发产品如调理剂、处理和定型产品，洗发产品，如调理剂、香波和处理产品；以及可以应用到头皮的任何其它形式。
所述护发组合物通常由制备局部使用的组合物领域已知的常规方法制备。所述方法通常包括在一个或多个步骤中混合所述成分至相对均一的状态，需要或不需要加热、冷却、使用真空等等。制备组合物以优化稳定性(物理稳定性、化学稳定性、光稳定性)和/或活性物质的递送。该优化可包括适当的pH(例如低于7)、排除能与活性剂络合从而对稳定性或递送产生负面影响的物质(例如排除污染的铁)、使用防止络合物形成的方法(例如适当的分散剂或二元间隔包装)、使用适当的耐光性方法(例如加入防晒/隔光物，使用不透明包装)等等。
护发组合物可以是单一相或单一产品，或护发组合物可以在分开的相或不同的产品中。如果两种产品被使用时，产品可以一起同时或者顺序使用。顺序使用可能会发生在很短的时间内，如使用一个产品之后立即使用，或者也可能发生在几小时或几天后。
II.增加头发厚度和完整度的外观和/或延迟白发出现的方法
根据本发明的另一个方面，提供了一种方法，用于增加发干和毛囊的直径；增加头发毛囊的密度；和/或延迟白发的出现。这可能使头发的外观更浓密和/或更完整，延迟白发出现。一方面，该方法包括将护发组合物施用至头发生长的皮肤表面。例如护发组合物可施用至头皮。在另一个实施方案中，该方法包括将包含有效量的抗头发衰老剂的护发组合物局部施用至哺乳动物的皮肤区域，以增加头发的厚度和完整度，和/或延迟白发的出现。
在另一个实施方案中，该方法包括以特定的施用方案施用该组合物，所述方案包括：
(a)清洗头皮，形成清洁的头皮；
(b)将所述组合物局部应用至该清洁的头皮。
该护发组合物可每日、每周或以多种方案使用。护发组合物可每日使用超过一次，例如在晚上和早上使用。该产品可在洗头后使用(湿发或干发)，其表示在某些天使用该组合物一次以上或每周仅使用数次。护发组合物可每天使用3次、2次、1次，每周使用6次、5次、4次、3次、2次或1次。在某些实施方案中，所述护发组合物每周使用4、5、6、7次。
根据另一个实施方案，该护发组合物至少约4周每天使用至少1次，或至少约4周每天使用至少2次。根据另一个实施方案，该护发组合物至少约8周每天使用至少1次。
男性或女性都可使用该护发组合物。该护发组合物对于那些想要促进头发生长或具有更健康和看上去更年轻的头发的人是想要使用的。例如，该护发组合物可用于还未诊断为脱发的患者。该护发组合物可用于年龄大于约20、25、30、35、40、45或50岁的人群。该护发组合物可用于年龄小于约70、65、60、55或50岁的人群。因此，该护发组合物可用于年龄在约20-70、约30-60、约35-55的人群。头发直径在20岁以后开始减小，因此在这些年龄后可能需要更为健康和外观更浓密和完整的头发。头发直径持续减少，某些人在30或40岁之后更为明显。此外，白发最早在20岁之后就开始出现，但根据遗传学通常在30或40岁之后更多。
制剂和实施例
以下是本发明非限制性的实施例。这些实施例仅是用于解释的目的，并非构成对本发明的限制。本领域技术人员将了解，在不偏离本发明主旨和范围的情况下可能具有许多变化。
在实施例中，除非另外说明，所有的浓度均为重量百分比，并且可能排除次要的物质，例如稀释剂、填充剂等等。因此所列出的制剂包含了列出的成分和任何与所述成分有关的次要成分。本领域技术人员清楚，这些次要物质的选择根据用于本发明的特定成分的物理和化学性质而变化。
表1:示范性的制剂
一般程序：根据本领域技术人通常使用的方法制备护发组合物。例如，可在充分搅拌下向水中加入增稠剂(例如聚羧乙烯之类的聚合物)，以在基本上不对溶液充气的情况下达到完全混合。在加入其他成分前继续混合直到增稠剂完全与水结合。加入其他皮肤病学上可接受的载体，随后加入浆液组分，继续混合直到获得均一的溶液。需要的话，测定并调节pH(例如5.5-7)。
制剂1:5.00％黑叶母菊和山茶浆液组分混合物制剂(30/70)
制剂2:5.00％黑叶母菊和山茶浆液组分混合物(30/70)制剂.
制剂3:5.00％昆布和欧芹浆液组分混合物(50/50)制剂
制剂4:5.00％昆布和欧芹浆液组分混合物(50/50)制剂
III.生物活性
简单的说，正如本发明领域普通技术人员所知晓的，毛发周期包括三个时期。第一个时期或生长期称为毛发生长初期，平均长达3-4年。第二个时期包括2-3周不连续的生长，该时期称为毛发生长中期。最后一个时期称为静止期，是毛发开始脱落的时期。该时期出现的比较缓慢，长达3-4个月。由于头发毛囊的球部退化，发干分离，从皮肤的表面脱落。
根据本发明的一个实施方案，包含山茶浆液组分和黑叶母菊浆液组分的第一组合和/或欧芹浆液组分和昆布浆液组分的护发组合物被施用至头皮和/或头皮上的发根，以增加更为健康和年轻的头发外观。一种或多种头发生长刺激剂施用至需要更多头发出现的区域可实际改善该区域的外观，其头发更为浓密和完整，和/或延迟了白发的出现。
尽管不希望受到理论的限制，局部施用各种抗头发衰老剂被认为能够：(1)中断或抑制头发毛囊的炎症周期，其随之延长了毛囊的毛发生长初期；和/或(2)刺激头发黑素细胞中黑色素的生成，其随之可能延迟白发的出现。因此，局部施用所述护发组合物也可帮助减缓头发离开毛发生长初期的速度，延迟白发的出现或上述两者。此外，局部应用会产生更为年轻的头发外观，因为头发直径已知能随患者的实足年龄而下降，而白发的出现可以被延迟。
所述护发组合物的局部施用能够帮助延长毛发生长初期。毛发生长初期的延长可通过阻断毛发生长初期向静止期的转化或抑制毛发生长初期向静止期的转化进行。头发毛囊处于生长期(毛发生长初期)或静止期(静止期)。毛囊在毛发生长初期占优势。毛发生长初期通常持续2-10年，平均周期为约3-4年，可根据多种因素而变化。相反，静止期要短的多，通常持续3-4个月。通常，人94％的毛囊处于毛发生长初期，6％的毛囊处于静止期。每个月约有2％的毛囊结束毛发生长初期而进入静止期，同时有约2％的毛囊结束静止期而进入毛发生长初期。应用本发明的护发组合物，约2％的结束毛发生长初期的毛囊可以被阻断或延迟，导致毛发生长初期的毛囊百分数增加。毛发生长初期的毛囊数的增加提高了头部头发的密度。毛发生长初期被认为能增加约2周至约2.5个月。头发密度(在特定头皮区域上的头发数量)的增加可以被测定。
预测所述浆液组分组合对于毛囊炎症周期效果的2种方法是使用体外生物测定。更具体而言，下文描述了通过白介素-1受体相关激酶(IRAK-4)的抑制而进行的白介素信号转导抑制的预测性的生物测定方法。
白介素1信号转导抑制：白介素1(IL-1)是促炎症细胞因子家族，其启动生物化学信号通路以增加炎症。在毛囊中，IL-1是驱动毛发生长初期到毛发生长中期的开关的内源性因素。在其通路上任意节点抑制IL-1信号转导被认为能通过阻断或延迟毛囊从毛发生长初期到中期的转换而延长毛发生长初期的时间。
白介素1受体相关激酶抑制：白介素1受体相关激酶(IRAK-4)是完整的IL-1信号转导的调节物，其在IL-1刺激后募集其他激酶用于随后的信号转导。IRAK-4活性的抑制通过ATP的量进行测定，其将全长人重组IRAK-4酶系统(Promega)与抑制剂一起温育30分钟后使用ADP-GloTM激酶试剂盒(Promega)测定。ADP-GloTM试剂盒根据生产商说明书使用。
黑色素合成活化:黑色素是由黑素细胞分泌的色素，其负责调节头发和皮肤的颜色。黑色素合成仅发生在毛发生长初期。延长毛发生长初期或许能延长基础黑色素合成，也提供了通过特定的激活剂来增加黑色素合成的机会。黑色素的活化在B16-F1黑素细胞(ATCC)的体外模型中测定。黑素细胞与激活剂一起温育48小时，通过分光光度计读取410nm处的光密度(O.D.)，从而测定形成的黑色素。
黑色素合成激活材料：平板:96孔平透明底白色聚苯乙烯TC-处理的微量板，#3903；细胞:B16-F1(ATCC)；生长培养基:DMEM,Gibco Invitrogen,#11965-092，包括10％FBS和1％青霉素/链霉素/谷氨酰胺(GLBCO目录号15701)；浆液组分和混合物；防腐剂和对照。
黑色素合成激活方法：第1天：接种B16-F1细胞，2000/孔/100ul；第2天:在每孔中加入10μl稀释的化合物；第4天：测定每孔中颜色的变化。通过显微镜检查细胞存活情况，如果细胞汇合<50％，不使用该点的数据。每孔中加入100μl 1％NaOH(1ml50％NaOH+49mlH2O)后在410nM通过可见光/UV读数测定OD值(黑色素产物)。注意：由于浆液组分普遍具有颜色，不含细胞的培养基孔同样进行处理并用作颜色空白对照，以除去由于浆液颜色导致的过度评价。
统计学显著性定义：使用单因素两样品的t检验。统计学显著性定义为p<0.05。本申请中实施例的数值中提供了p<0.01。统计学显著的且协同的混合物定义为所述混合物的活性在统计学上显著高于两种单独的浆液组分成分。
A.昆布和欧芹浆液组分
(1)昆布浆液组分、欧芹浆液组分及其组合可被评价其对于黑色素合成的作用(所有的浆液组分以1％(v/v)的分析组合物进行分析):
表1:实施例1A:昆布-欧芹10:90混合物
表2:实施例1B:昆布-欧芹20:80混合物
表3:实施例1C:昆布-欧芹30:70混合物
表4:实施例1D:昆布-欧芹40:60混合物
表5:实施例1E:昆布-欧芹50:50混合物
表6:实施例1F:昆布-欧芹70:30混合物
表7:实施例1G:昆布-欧芹50:50混合物
使用恒定的浓度直接证明相同水平的干物质含量的混合浆液组分的活性显著高于单个的浆液组分。这说明两种浆液在混合物中起协同作用，具有更好的生物活性。例如在表1A中，1％的单独的昆布和欧芹浆液组分分别获得了1.62和1.91的活化倍数，但1％的这些单独浆液组分的10:90混合物的活化倍数显著提高至6.36倍。
(2)昆布浆液组分和欧芹浆液组分的组合可进行IRAK-4抑制评价(所有浆液组分以4％(v/v)的分析组合物进行分析):
表8:实施例1H:昆布-欧芹50:50混合物
表9:实施例1I:昆布-欧芹60:40混合物
表10:实施例1J:昆布-欧芹70:30混合物
表11:实施例1K:昆布-欧芹80:20混合物
使用恒定的浓度直接证明相同水平的干物质含量的混合浆液组分的活性显著高于单个的浆液组分。这说明两种浆液在混合物中起协同作用，具有更好的生物活性。例如在表11、实验1K中，4％的单独的昆布和欧芹浆液组分分别获得了67.7％和43％的抑制，但4％的这些浆液组分的50:50混合物的抑制率显著提高至76.3％。
B.山茶和黑叶母菊浆液组分
(1)山茶浆液组分、黑叶母菊浆液组分及其组合可被评价其对于黑色素合成的作用(所有的浆液组分以0.8％(v/v)的分析组合物进行分析):
表12:实施例2A:山茶-黑叶母菊50:50混合物
表13:实施例2B:山茶-黑叶母菊80:20混合物
表14:实施例2C:山茶-黑叶母菊20:80混合物
使用恒定的浓度直接证明相同水平的干物质含量的混合浆液组分的活性显著高于单个的浆液组分。这说明两种浆液在混合物中起协同作用，具有更好的生物活性。例如在表14、实施例2C中，1％的单独的山茶和黑叶母菊浆液组分分别获得了2.26和2.02的活化倍数，但1％的这些单独浆液组分的20:80混合物的活化倍数显著提高至5.02倍。50:50混合物(表12,实施例2A)和80:20混合物(表13,实施例2B)同样证明了这一点。
(2)山茶浆液组分、黑叶母菊浆液组分以及其组合可进行IRAK-4抑制评价(所有浆液组分以0.8％(v/v)分析组合物进行分析):
表15:实施例2D:山茶-黑叶母菊50:50混合物
表16:实施例2E:山茶-黑叶母菊80:20混合物
使用恒定的浓度直接证明相同水平的干物质含量的混合浆液组分的活性显著高于单个的浆液组分。这说明两种浆液在混合物中起协同作用，具有更好的生物活性。例如在表16、实施例2E中，0.8％的单独的山茶和黑叶母菊浆液组分分别获得了8％和9％的抑制，但0.8％的这些浆液组分的80:20混合物的抑制率显著提高至54.3％。
本文公开的尺寸和值不应理解为严格限制到具体所述的数值。相反的，除非另外说明，各所述尺寸意图表示所述的值和围绕该值的功能等价的范围。例如，公开为“40mm”的尺寸表示“约40mm”。
所有本发明的实施方案详述中引用的文献在相关方面引入本文作为参考；任何文献的引用不应被解释为认可其作为本发明的现有技术。如果任何术语在本文中的含义或定义与其在作为参考引入本文的文献中有冲突，该术语的含义或定义以在本文中给出的为准。
尽管本发明已描述了特定的实施方案，但对于本领域技术人员而言，在不偏离本发明主旨和范围的情况下进行多种其他的变化和修饰是显而易见的。因此，所附的权利要求覆盖了本发明范围内的所有这些变化和修饰。

Claims (12)

1.生物活性组合物在制备用于增加头发的完整度和/或厚度和/或减少白发出现的护发产品中的用途，所述生物活性组合物包含:
a.有效量的生物活性混合物，选自:
i.包含山茶浆液组分和黑叶母菊浆液组分的组合的第一组合物，或
ii.包含山茶浆液组分和黑叶母菊浆液组分的组合的第一组合物和包含欧芹浆液组分和昆布浆液组分的组合的第二组合物，以及任选的
b.皮肤病学可接受的载体；
其中山茶浆液组分和黑叶母菊浆液组分的重量比范围为10:90至90:10；
其中欧芹浆液组分和昆布浆液组分的重量比范围为10:90至90:10。
2.权利要求1的用途，其中所述第一组合物包含:
a.0.001重量％至15重量％的山茶浆液组分；和
b.0.001重量％至15重量％的黑叶母菊浆液组分，
其中所述的重量％是基于组合物的总重量。
3.权利要求2的用途，其中山茶浆液组分和黑叶母菊浆液组分的重量比范围为20:80至80:20。
4.权利要求2的用途，其中山茶浆液组分和黑叶母菊浆液组分的重量比范围为50:50至80:20。
5.权利要求2的用途，其还包括增稠剂。
6.权利要求1的用途，其中所述第二组合物包含:
a.0.001重量％至15重量％的欧芹浆液组分；和
b.0.001重量％至15重量％的昆布浆液组分，
其中所述的重量％是基于组合物的总重量。
7.权利要求6的用途，其中欧芹浆液组分和昆布浆液组分的重量比范围为30:70至70:30。
8.权利要求6的用途，其中欧芹浆液组分和昆布浆液组分的重量比为50:50。
9.权利要求6的用途，其还包括增稠剂。
10.权利要求1的用途，其中第一组合物包含：
a.0.001重量％至15重量％的山茶浆液组分，和
b.0.001重量％至15重量％的黑叶母菊浆液组分；和
其中第二组合物包含：
c.0.001重量％至15重量％的欧芹浆液组分，和
d.0.001重量％至15重量％的昆布浆液组分，
其中所述的重量％是基于组合物的总重量。
11.权利要求1的用途，其中所述生物活性组合物具有一种或多种下列性质：抗衰老、抗氧化和/或清除自由基、抑制与皮肤老化和环境损伤相关的酶类、皮肤保护、修复人体组织或皮肤、UV防护，以及对臭氧和/或渗透冲击的防护。
12.权利要求11的用途，其中所述生物活性组合物具有对头发和/或皮肤的抗衰老活性。
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