CN104004693B - 一种短小芽孢杆菌及其在控制白酒中土臭味的应用 - Google Patents
一种短小芽孢杆菌及其在控制白酒中土臭味的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104004693B CN104004693B CN201410271388.9A CN201410271388A CN104004693B CN 104004693 B CN104004693 B CN 104004693B CN 201410271388 A CN201410271388 A CN 201410271388A CN 104004693 B CN104004693 B CN 104004693B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacillus pumilus
- streptomycete
- ground depth
- earthy
- antibacterial
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Abstract
本发明公开了一种新型短小芽孢杆菌，从高温酿酒大曲中分离得到一株短小芽孢杆菌，2013年8月12日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M2013372。通过向白酒酿造中添加一定量短小芽孢杆菌控制白酒中土臭味的产生。该菌株能够合成抗菌脂肽类活性物质，抑制白酒酿造过程中产土臭素链霉菌的生长和土臭素的合成，从根本上控制浓、清、酱等不同香型白酒中的土臭味。
Description
技术领域
本发明属于食品微生物技术领域，具体涉及一株抑制白酒中土臭味的短小芽孢杆菌的分离筛选及控制白酒中土臭味的方法。
背景技术
白酒是我国特有的一种蒸馏酒，并深得消费者喜爱。独特的开放式多菌种固态发酵，以及固态蒸馏模式赋予白酒独特的香味。白酒中的土臭味使白酒的香气和质量大打折扣，优级品率降低，白酒生产企业每年因此而蒙受多达上亿元的巨大经济损失。
现有的包括物理吸附在内的技术手段，虽然能够在一定程度上去除大曲中的土臭味，但此方法不仅耗时费力成本高，且能够同时非特异性地吸附有益香气成分，对白酒的香气和质量带来负面影响。因此这种方法有重大缺陷且难以大规模应用。
已有研究表明，土臭素是白酒中土臭味的化学来源，酿酒大曲中的链霉菌是土臭素的主要产生菌。通过一定手段去除大曲中产土臭素的链霉菌应该是根除白酒中土臭味的基本方法。通过添加化学合成类抗生素来去除大曲中的链霉菌进而防止土臭味产生的方法并不能应用于实际生产过程。这是因为添加抗生素一方面造成食品安全上的巨大风险，另一方面抗生素也能破坏大曲中的有益产酒产香功能微生物的微生态结构，进而影响白酒的香气和质量。因而，目前尚未有一种既能去除白酒生产中的土臭味，又能保留白酒中的有益香气成分，维持大曲中有益功能产酒产香微生物的微生态结构的方法。
来源于土壤、植物叶子及果实表面等天然环境的诸多芽孢杆菌，例如枯草芽孢杆菌(B.subtilis)，解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens)，地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)和短小芽孢杆菌(B.pumilus)，能够产生系列抗菌脂肽，具有抑制多种植物病原微生物及人类病原微生物的效果。许多研究者对芽孢杆菌产生的脂肽产生了浓厚的兴趣，包括其优秀的表面活性功能，生物防治及抗生素疗效方面的特征，以及在抗血栓、抗肿瘤方面的药效功能。我们首次从高温酿造大曲中分离了产抗菌脂肽的短小芽孢杆菌B.pumilus BP-1，发现其能够有效抑制白酒酿造过程中以Streptomyces albus为代表的产土臭素链霉菌的生长以及土臭素的形成，能够有效抑制白酒中的土臭味。
发明内容
针对现有的技术难点及存在的问题，本发明从酿酒高温大曲中分离、筛选获得一株产抗菌脂肽的短小芽孢杆菌。与其它环境中分离的短小芽孢杆菌相比，高温大曲中分离得到的短小芽孢杆菌能耐高温：45-60℃，耐酸：pH3.0～5.0，耐乙醇：0～12％，能够在白酒酿造过程中的胁迫条件(制曲最高温度达50～60℃；发酵酒醅pH3.5～4.0之间；乙醇最高达7％左右)下生存并发挥功能。对该菌株对白酒酿造中产土臭味链霉菌的拮抗能力和抑制土臭素合成能力开展了一系列研究。
本发明从高温酿酒大曲中分离筛选获得一株对土臭素产生菌具有很好拮抗作用的微生物菌株，经16S rRNA分析和其他形态学分析，确定该菌株为短小芽孢杆菌，并命名为短小芽孢杆菌(B.pumilus)BP-1。该菌株已于2013年8月12日送交湖北省武汉市武汉大学内的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏编号为CCTCC NO:M2013372。试验表明分离的这株短小芽孢杆菌，能够抑制产土臭味链霉菌的生长且抑制土臭素合成，同时又对大曲中的有益功能产酒产香微生物的生长没有影响。
分离得到的短小芽孢杆菌BP-1，与白酒酿造过程中产土臭素的链霉菌混合培养时，能有效抑制产土臭素链霉菌的生长，对土臭素的产生有显著抑制作用。
从该短小芽孢杆菌的培养物中获得具有抗菌活性物质1，被表征为抗菌脂肽surfactin系列物质。具有如说明书所示的质谱图谱，且有如下结构：
抗菌脂肽surfactin及同系物能显著抑制白酒酿造过程中产土臭素链霉菌的生长，且对土臭素的合成有显著的抑制作用。
从该短小芽孢杆菌的培养物中获得具有抗菌活性物质2，被表征为抗菌脂肽mycosubtilin系列物质。具有如说明书所示的质谱图谱，有如下结构：
抗菌脂肽mycosubtilin及同系物能显著抑制白酒酿造过程中产土臭素链霉菌的生长，且对土臭素的合成有显著的抑制作用。
本发明短小芽孢杆菌在白酒生产中以菌液或固体菌剂形式添加至酿造大曲中，添加的菌体总量为大曲中链霉菌总量的1％至100％。
具体制备步骤如下所述：
1.细菌的分离筛选与鉴定：从高温大曲中分离出具有拮抗产土臭素链霉菌的细菌。对检测到的具有显著抗菌活性的细菌进行16S rRNA和形态鉴定，确定我们分离得到的是一株短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)，16S rRNA的同源性为98％。
2.抗菌活性物质的分离纯化及有效成分鉴定：对上述获得的短小芽孢杆菌培养2天后发酵液用有机溶剂萃取(见实施例1)提取抗菌活性物质，将萃取后液体真空旋转蒸发浓缩(见实施例1)，并溶于少量的无菌蒸馏水中。用HPLC进一步分离纯化，利用洗脱曲线各峰值的组分进行抗菌活性检测。用UPLC/ESI-TOF-MASS鉴定抗菌物质。
3.对分离得到的短小芽孢杆菌菌株拮抗产土臭素链霉菌生长及土臭素产生的应用检测。将上述分离得到的短小芽孢杆菌菌株与产土臭素的链霉菌菌株按照不同比例接种马铃薯-葡萄糖液体培养基，30℃恒温摇床下200rpm培养50h。用qPCR鉴定混合培养中的链霉菌含量；用顶空固相微萃取气相色谱质谱联用技术(HS-SPME-GC-MS)检测混合培养体系中土臭素的含量(见实施例2)。
4.对步骤2提取的抗菌活性物质拮抗产土臭素链霉菌的生长及土臭素产生的应用检测。将提取得到的抗菌活性物质加入到接种有产土臭素链霉菌菌株的马铃薯-葡萄糖液体培养基中，30℃恒温摇床下200rpm培养50h。用qPCR鉴定混合培养中的链霉菌含量；用顶空固相微萃取气相色谱质谱联用技术(HS-SPME-GC-MS)检测混合培养体系中土臭素的含量(见实施例3)。
实施结果
通过16S rRNA分析确定我们分离的菌株为短小芽孢杆菌Bacillus pumilus，同源性98％。该菌对白酒生产过程中的土臭素产生菌S.albus，S.fradiae，S.radiopugnans，S.sampsonii，都有明显的抗菌效果。我们成功的分离到了该菌株的抗菌成分，经质谱鉴定推测为surfactin和mycosubtilin。
将分离得到的短小芽孢杆菌菌株按一定比例添加到产土臭素的链霉菌的培养基中，共同培养一定时间，经qPCR和HS-SPME-GC-MS检测分析，短小芽孢杆菌能显著抑制链霉菌的生长及土臭素的产生。
将HPLC分离得到的抗菌活性物质加入到产土臭素的链霉菌的培养基中，培养一定时间，经qPCR和HS-SPME-GC-MS检测分析，抗菌活性物质能显著拮抗产土臭素链霉菌的生长及土臭素的产生。
本发明提供的短小芽孢杆菌来源于高温酿造大曲，能产生两种抗菌脂肽，可降低酿造大曲中链霉菌含量最高至100％，降低白酒中土臭素浓度最高至100％。
附图说明
图1是短小芽孢杆菌在PDA平板上表现的抗链霉菌活性。
图中PDA平板上涂布了80μl链霉菌孢子(1×108孢子/ml)，平板中央滴加2μl过夜培养的短小芽孢杆菌培养液。在短小芽孢杆菌的菌落周围形成了明显的抑菌圈。
图2是surfactin的ESI-TOF-MASS图谱。
图3是mycosubtilin的ESI-TOF-MASS图谱。
具体实施方式：
实施例1
1.短小芽孢杆菌BP-1的筛选分离：
用无菌铲刀取1g不同阶段和不同曲饼位置的大曲曲粉于5ml的无菌塑料离心管中。向离心管中加入5ml的生理盐水(0.9％氯化钠溶液)，漩涡震荡2分钟，静置10分钟后吸取2μl点种涂布有链霉菌S.albus，S.fradiae，S.radiopugnans，S.sampsonii孢子的PDA平板中央(含200g马铃薯煮出液，20g葡萄糖，加蒸馏水定容至1L，加15g琼脂)于30℃恒温培养箱培养72h，检测平板中央的抑菌圈的大小。选取抑菌圈最大的菌落在PDA平板上划线分离出单菌种，分别点种涂布有有链霉菌S.albus，S.fradiae，S.radiopugnans，S.sampsonii孢子的PDA平板中央，观察抑菌圈的大小。对检测到的显著抑菌活性的细菌进行16SrRNA和形态鉴定。以LB液体培养基(含10g胰蛋白胨，10g氯化钠，5g酵母粉)，30℃-37℃过夜培养分离得到的细菌，用常规细菌基因组提取方法提取基因组DNA。以测定16S rRNA的通用引物(由上海生工生物工程技术有限公司合成)进行PCR反应。1％琼脂糖凝胶电泳检测扩增出大小为1.5kb左右的DNA片段，送交上海生工生物技术有限公司进行序列测定后在NCBI中经Blast比较分析确定为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。
2.短小芽孢杆菌BP-1无菌发酵液的制备：
接种保存的短小芽孢杆菌到100ml灭菌的LB培养基中，37℃，200rpm培养过夜。然后接种1ml新鲜培养物到含有1L新鲜LB培养基的2L三角瓶中，30℃或37℃，200rpm培养48h。然后8000g离心10min收集上清，用0.22μl的滤膜过滤除菌后得到无菌发酵液4℃保存备用。
3.短小芽孢杆菌BP-1无菌发酵液抗菌活性物质的纯化：
将得到的短小芽孢杆菌的无菌发酵液用等体积的乙醇:三氯甲烷(1:1)萃取10-15h。有机相经真空旋转蒸发仪(BUCHI，Rotavapor R-210)60℃蒸干，再用少量蒸馏水溶解。溶解后得到的溶液经0.22微米的滤膜过滤后，采用HPLC纯化；285nm紫外检测；流动相为0.1％甲酸溶液和甲醇，收集各峰值洗脱组分，分别取200μl加到涂布有S.albus孢子的PDA平板中的牛津杯内，30℃恒温培养箱培养72h，观察各组分的抑菌情况。
4.UPLC/ESI-TOF-MASS鉴定抗菌物质
分别对HPLC收集到的具有抑菌活性的组分进行超高效液相色谱飞行时间质谱联用技术(UPLC/ESI-TOF-MASS)分析。UPLC采用UPLCTM BEH C18(100mm×2.1mm，1.7μm)色谱柱，以甲醇和水作为流动相，进行线性梯度洗脱。质谱采用正离子模式，离子扫描范围50–1500m/z。采用Masslynx4.1软件对数据进行采集和分析。结果见图2-3，分离的抑菌物质分子量为1008及同系物，推测为surfactin；分子量1141及同系物，推测为mycosubtilin。
实施例2：短小芽孢杆菌抑制链霉菌生长及土臭素产生的应用检测
1.短小芽孢杆菌BP-1与产土臭素链霉菌S.albus的混合培养
将分离得到的短小芽孢杆菌菌株与产土臭素的链霉菌菌株S.albus按照1:10000,1:1000,1:100,1:10,1:1的比例(对应地，短小芽孢杆菌菌株的接种量分别为0.1‰，1‰，1％，10％，100％)接种马铃薯-葡萄糖液体培养基，30℃恒温摇床200rpm培养50h。发酵结束后，取1ml菌液离心后收集菌体，做混合培养下链霉菌菌株S.albus的生物量测定。剩余发酵液10000g离心除去菌体，经0.22μm微孔滤膜过滤除菌后，得到无菌发酵液，4℃保藏备用。
2.qPCR检测混合培养体系中链霉菌S.albus生物量
采用绝对定量的方法检测混合体系中S.albus生物量
按照用常规细菌基因组提取方法提取纯培养链霉菌S.albus(空白对照组)基因组DNA，并用NanoDrop1000(NanoDrop Technologies，Wilmington，DE，USA)测定基因组浓度，计算基因组拷贝数。按照10倍梯度稀释，得到一系列浓度梯度的S.albus基因组DNA作为qPCR模板，制作基因组拷贝数与qPCR Ct值的标准曲线。20μl qPCR体系包括：SsoFast EvaGreen Supermix10μl(Bio-Rad)，引物各0.4μl，ddH2O8.2μl，模板1μl；扩增程序为98℃预变性2min，39个循环的98℃变性5s，60℃15s。应用Bio-Rad CFX Manager2.1进行数据采集和处理，得到基因组拷贝数与qPCR Ct值的标准曲线。
按照用常规细菌基因组提取方法提取不同短小芽孢杆菌接种量的链霉菌S.albus基因组DNA，稀释100倍作为qPCR模板。20μl qPCR体系包括：SsoFastEvaGreen Supermix10μl(Bio-Rad)，引物各0.4μl，ddH2O8.2μl，模板1μl；扩增程序为98℃预变性2min，39个循环的98℃变性5s，60℃15s，39循环。应用Bio-Rad CFX Manager2.1进行数据采集和处理，根据qPCR Ct值和基因组拷贝数与qPCR Ct值的标准曲线计算不同短小芽孢杆菌接种量的链霉菌S.albus基因组拷贝数，并进行绝对定量，结果见表1。从结果可以看出添加1％，10％，100％的短小芽孢杆菌能有效抑制链霉菌的生长。
表1 不同接种量的B.pumilus对S.albus的抑制作用
| B.pumilus接种量 | S.albus抑制率 |
| 0％(对照) | 0 |
| 1％ | 45％ |
| 10％ | 80％ |
| 100％ | 100％ |
3.混合培养对S.albus产土臭素的影响
混合培养的无菌发酵液中的土臭素含量采用HS-SPME-GC-MS方法进行定量。取8ml的无菌发酵液，加入3g NaCl至过饱和。定量结果见表2。结果表明添加不同比例的短小芽孢杆菌能有效抑制土臭素的产生。
表2 不同接种量的B.pumilus对S.albus产土臭素的影响
| B.pumilus接种量 | 土臭素抑制率 |
| 0％(对照) | 0 |
| 1％ | 50％ |
| 10％ | 72％ |
| 100％ | 100％ |
实施例3：短小芽孢杆菌BP-1抗菌活性组分拮抗产土臭素链霉菌及土臭素产生的应用检测
1.添加短小芽孢杆菌抗菌活性组分的产土臭素链霉菌S.albus的培养
将HPLC分离得到的抗菌活性组分3，4和组分5，6分别添加到产土臭素的链霉菌菌株S.albus的马铃薯-葡萄糖液体培养基中，30℃恒温摇床下200rpm培养50h，对照组为添加等体积的甲醇。发酵结束后，取1ml菌液离心后收集菌体，做链霉菌菌株S.albus的生物量测定。剩余发酵液10000g离心除去菌体，经0.22μm微孔滤膜过滤除菌后，得到无菌发酵液，4℃保藏备用。
2.qPCR检测链霉菌S.S.albus生物量
qPCR Ct值和基因组拷贝数的标准曲线的制作方法同实施例2
按照用常规细菌基因组提取方法提取不同短小芽孢杆菌接种量的链霉菌S.S.albus基因组DNA，稀释100倍作为qPCR模板。20μl qPCR体系包括：SsoFastEvaGreen Supermix10μl(Bio-Rad)，引物各0.4μl，ddH2O8.2μl，模板1μl；扩增程序为98℃预变性2min，39个循环的98℃变性5s，60℃15s，39循环。应用Bio-Rad CFX Manager2.1进行数据采集和处理，根据qPCR Ct值和基因组拷贝数的标准曲线得到不同短小芽孢杆菌接种量的链霉菌S.albus基因组拷贝数，结果如表3，表明添加抑菌组分能够有效抑制链霉菌S.albus的生长。
表3 抑菌组分对S.albus的抑制作用
| 抑菌组分 | S.albus抑制率 |
| 对照 | 0 |
| Surfactin | 63％ |
| Mycosubtilin | 40％ |
3.抗菌活性组分对S.albus产土臭素的影响
添加抗菌活性组分的发酵液中土臭素含量采用HS-SPME-GC-MS方法进行定量，结果如表4，结果表明添加抑菌组分能够有效抑制土臭素的合成。
表4 抑菌组分对对S.albus产土臭素的影响
| 抑菌组分 | 土臭素抑制率 |
| 对照 | 0 |
| Surfactin | 100％ |
| Mycosubtilin | 80％ |
Claims (1)
1.一种短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)BP-1，分离自高温酿酒大曲，2013年8月12日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC:M2013372。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410271388.9A CN104004693B (zh) | 2014-06-17 | 2014-06-17 | 一种短小芽孢杆菌及其在控制白酒中土臭味的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410271388.9A CN104004693B (zh) | 2014-06-17 | 2014-06-17 | 一种短小芽孢杆菌及其在控制白酒中土臭味的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104004693A CN104004693A (zh) | 2014-08-27 |
| CN104004693B true CN104004693B (zh) | 2016-08-17 |
Family
ID=51365603
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410271388.9A Active CN104004693B (zh) | 2014-06-17 | 2014-06-17 | 一种短小芽孢杆菌及其在控制白酒中土臭味的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104004693B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105648001A (zh) * | 2016-01-28 | 2016-06-08 | 淮阴工学院 | 对橙色粘球菌jch-04次级代谢产物分离纯化提取抗霉枯草菌素的方法 |
| CN109897807B (zh) * | 2019-04-19 | 2021-01-29 | 江南大学 | 一种大曲中土味素的抑制方法 |
| CN112111421B (zh) * | 2020-08-24 | 2022-04-19 | 上海海洋大学 | 一株具有抑制水产品土腥味物质形成的地衣芽孢杆菌鲜味菌1号及其应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101475944A (zh) * | 2008-12-12 | 2009-07-08 | 南京农业大学 | 一种提高淀粉液化芽孢杆菌fengycin产量的启动子置换方法 |
| CN101892176A (zh) * | 2010-03-23 | 2010-11-24 | 天津科技大学 | 产生抗真菌脂肽的微生物及其抗真菌脂肽制备方法与应用 |
| CN102703358A (zh) * | 2012-06-12 | 2012-10-03 | 福建师范大学 | 一种芽孢杆菌高温大曲的制备方法 |
-
2014
- 2014-06-17 CN CN201410271388.9A patent/CN104004693B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101475944A (zh) * | 2008-12-12 | 2009-07-08 | 南京农业大学 | 一种提高淀粉液化芽孢杆菌fengycin产量的启动子置换方法 |
| CN101892176A (zh) * | 2010-03-23 | 2010-11-24 | 天津科技大学 | 产生抗真菌脂肽的微生物及其抗真菌脂肽制备方法与应用 |
| CN102703358A (zh) * | 2012-06-12 | 2012-10-03 | 福建师范大学 | 一种芽孢杆菌高温大曲的制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| ISOLATION OF A NEW SURFACTIN PRODUCER BACILLUS PUMILUS A-1,AND CLONING AND NUCLEOTIDE SEQUENCE OF THE REGULATOR GENE,PSF-1;MASAAKI MORIKAWA ET AL.;《JOURNAL OF FERMENTATION AND BIOENGINEERING》;19920531;第74卷(第5期);255-261 * |
| 微生物产生的土腥味化合物及其清除方法;刘欣等;《中国生物工程杂志》;20050825;第25卷(第08期);35-38 * |
| 水产品异味物质形成机理、检测及去除技术研究进展;杨玉平 等;《食品科学》;20091231;第30卷(第23期);533-538 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104004693A (zh) | 2014-08-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11459593B2 (en) | Dendrobium officinale endophytic fungus strain and extracellular polysaccharide produced thereby, and extraction method and application of extracellular polysaccharide | |
| CN102533593B (zh) | 洋葱伯克霍尔德氏菌sd7及其培养方法和应用 | |
| CN106434409B (zh) | 一株体外高效拮抗稻瘟病菌的水稻内生放线菌OsiLf-2 | |
| CN107201322B (zh) | 用于降解黄曲霉毒素b1的枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| CN103436457A (zh) | 一种双向伯克霍尔德氏菌及其培养方法和应用 | |
| CN103540542A (zh) | 一种双向伯克霍尔德氏菌及其培养方法和应用 | |
| CN105713858A (zh) | 一种产多种脂肽类抗生物质的甲基营养型芽孢杆菌及其应用 | |
| CN112575039B (zh) | 具有清除dpph自由基作用的内生真菌提取物及其制备方法和应用 | |
| CN105861333A (zh) | 冠突散囊菌ls1菌株 | |
| CN104004693B (zh) | 一种短小芽孢杆菌及其在控制白酒中土臭味的应用 | |
| CN111019838B (zh) | 一株内生真菌及其提取物与用途 | |
| CN104450580A (zh) | 放线菌素d的制备方法及其应用 | |
| CN105420164B (zh) | 南极来源芽孢杆菌n311及其在防治植物致病真菌上的应用 | |
| CN104073453B (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌及其在控制白酒中土臭味的应用 | |
| CN104087526B (zh) | 一种利用地衣芽孢杆菌控制白酒中土臭味的方法 | |
| CN109112086B (zh) | 一株暹罗芽孢杆菌及其用途 | |
| CN107699526B (zh) | 一株防治灰霉病的放线菌菌株及其应用 | |
| CN104004692B (zh) | 一种枯草芽孢杆菌及其在控制白酒中土臭味的应用 | |
| CN104745654B (zh) | 一种制备尼莫克汀的方法及其生产菌株 | |
| CN111849844A (zh) | 一种地衣芽孢杆菌a10201及其应用 | |
| CN105462854B (zh) | 越南槐内生真菌sdte-p在防治三七炭疽病中的应用 | |
| CN105132338B (zh) | 芽孢杆菌dy26-020及其在制备防治植物致病真菌发酵上清液中的应用 | |
| CN105462892A (zh) | 越南槐内生细菌b21在防治三七黑斑病中的应用 | |
| CN110157646A (zh) | 一株抑制真菌生长的乳酸菌及其在馒头制作中的应用 | |
| CN106085880B (zh) | 一种黑粉菌的分离方法及所用培养基 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP02 | Change in the address of a patent holder | ||
| CP02 | Change in the address of a patent holder |
Address after: 214122 Jiangsu city of Wuxi Province District Liangxi No. 898 South Road 7 layer beam Creek area of food science and Technology Park Patentee after: Jiangnan University Address before: 1800 No. 214122 Jiangsu city of Wuxi Province Li Lake Avenue Patentee before: Jiangnan University |