CN103995119A - 检测猪唾液中猪瘟病毒特异性抗体的方法 - Google Patents

检测猪唾液中猪瘟病毒特异性抗体的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN103995119A
CN103995119A CN201410147371.2A CN201410147371A CN103995119A CN 103995119 A CN103995119 A CN 103995119A CN 201410147371 A CN201410147371 A CN 201410147371A CN 103995119 A CN103995119 A CN 103995119A
Authority
CN
China
Prior art keywords
saliva
pig
antibody
hole
swine fever
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201410147371.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103995119B (zh
Inventor
李龙
章叶恩
曹洋洋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hangzhou Bel's Tower Bioisystech Co Ltd
Original Assignee
Hangzhou Bel's Tower Bioisystech Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hangzhou Bel's Tower Bioisystech Co Ltd filed Critical Hangzhou Bel's Tower Bioisystech Co Ltd
Priority to CN201410147371.2A priority Critical patent/CN103995119B/zh
Publication of CN103995119A publication Critical patent/CN103995119A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103995119B publication Critical patent/CN103995119B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56983—Viruses
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
    • G01N33/54373—Apparatus specially adapted for solid-phase testing involving physiochemical end-point determination, e.g. wave-guides, FETS, gratings

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)

Abstract

本发明公开了一种检测猪唾液中猪瘟病毒特异性抗体的方法。方法步骤为：1）猪瘟全病毒抗原的制备、灭活和96孔聚苯乙烯反应板包被；2）利用悬挂棉绳法，采集唾液，处理后获得唾液一抗；3）将唾液一抗，按编号加入抗原包被的反应板上，22-28℃饱和湿度反应1小时，洗涤；4）将辣根过氧化物酶标记的羊抗猪IgG-FC抗体，按顺序加入到反应板上，22-28℃饱和湿度避光反应30分钟，洗涤；5）将TMB显色剂A液和B液1:1混合后，按顺序加入到反应板上，避光反应15分钟，加入终止液；6）放入酶标仪中，读取OD650数据，判定结果。本发明避免了单个动物采血的问题，适用于猪群大面积的猪瘟抗体调查。

Description

检测猪唾液中猪瘟病毒特异性抗体的方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种检测猪唾液中猪瘟病毒特异性抗体的方法。
背景技术
猪瘟（Classical swine fever, CSF）是目前危害我国养猪业最重要的疾病，其病理特征表现为小血管壁的变性, 致使内脏器官多发性出血、梗塞和坏死, 以出血和发热为主要特征, 呈急性或慢性经过, 对养猪业危害极大。
猪瘟病毒（Classical swine fever virus, CSFV） 是引起猪瘟的病原，该病具有高度接触性和致死性、传播速度快、流行广泛、发病率和死亡率高等特点。临床上，该病可分为急性、亚急性、慢性、非典型性和不明显型。急性CSF 由强毒株引发, 一般导致高发病率和死亡率, 而弱毒病毒感染则表现不明显。
猪瘟的发现已有180多年历史,世界各国均对该病的防控做出了巨大的努力, 目前北美、澳洲和北欧的一些地区已成功地消灭了猪瘟, 但猪瘟在其他许多地区仍广泛流行。墨西哥、巴西、南美的大部分地区猪瘟仍呈地方性流行，在加勒比地区古巴、海地和多米尼加都存在猪瘟，在东南亚地区的大多数国家仍存在猪瘟的间歇发生。
自从1969年在我国使用兔化弱毒疫苗后, 猪瘟的暴发明显减少。目前在我国大陆和台湾地区仍有有猪瘟流行, 其中大陆多以散发和慢性病例为主, 但从20 世纪80 年代以后, 临床症状不典型且病程变长的非典型性猪瘟( 或慢性猪瘟) 成为该病的主要发生形式, 持续感染普遍存在，疫苗的预防效果明显下降, 使猪瘟防制遇到了新的困难。据估计，临床健康的猪群中，大约20%-30%的动物持续带毒；我国每年由猪瘟致死的猪占总死亡数的1/3, 经济损失在20亿元左右。
目前，疫苗免疫依然是我国猪瘟防控的最主要手段。采集免疫后猪只血液样本，分离血清，并检测特异性的血清抗体，是目前监控猪瘟主要的手段，对猪瘟疫苗免疫效果评价、免疫程序制定、流行状态监测均具有重要意义。然而这种采样方式存在诸多限制，一方面这种采集血液、分离血清的方法费时费力，采集的样本数量不大，占猪群的比例不高，且对动物的应激非常大。固定一头体重在50公斤左右的生长猪，并从前腔静脉采集血液，通常需要2-3个人，平均花费10分钟左右。而本专利设计的唾液样本采集方法，则以同一栏的猪为单位采集（15-20头），只需一个人，平均花费5分钟，悬挂和收集唾液采集绳，即可。相对而言，唾液采集法获得的样本可覆盖整群动物，数据基本可代表整群动物的平均免疫情况，更能反映猪群抗体的总体水平。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种检测猪唾液中猪瘟病毒特异性抗体的方法。
检测猪唾液中猪瘟病毒特异性抗体的方法包括如下步骤：
1）猪瘟全病毒抗原的制备、灭活和抗原包被96孔聚苯乙烯反应板； 
2）利用悬挂棉绳法，诱导动物咀嚼，采集唾液，处理后获得唾液一抗，保存备用；
3）将唾液一抗，以PBST溶液1:1稀释后，按编号加入抗原包被的96孔聚苯乙烯反应板的反应孔中，每个反应孔加100ul，22-28℃饱和湿度反应1小时，洗涤备用；
4）将辣根过氧化物酶标记的羊抗猪IgG-FC抗体，以 PBST溶液1:2000稀释后，按顺序加入到96孔聚苯乙烯反应板的反应孔中，每个反应孔加100ul，22-28℃饱和湿度避光反应30分钟，以PBST洗涤备用；
5）将TMB显色剂 A液和B液1:1混合后，按顺序加入到96孔聚苯乙烯反应板的反应孔中，每个反应孔加50ul，避光反应15分钟，随后每个反应孔加入50ul 2M浓硫酸，终止反应；
6）放入酶标仪中，读取OD650数据，判定结果。
所述的步骤1）为：以pH 9.6的碳酸盐缓冲液稀释猪瘟C株全病毒纯化灭活抗原至10000 TCID50/ml，以100ul/孔的浓度包被96孔聚苯乙烯ELISA反应板，并以5%脱脂奶粉封闭，获得ELISA反应的抗原基质，置于4℃备用。
所述的步骤2）为：以6股、直径3mm、长1m的全棉绳索悬挂于猪群中间或围栏上，底端高度与动物肩部齐平，并将绳索的悬挂端解松，待猪群撕咬30min后，回收绳索，并置于无菌的样品收集袋中，用双手放在样品袋外挤出浸润在绳索上的唾液，并收集与无菌的50ml离心管中，以3000g离心15min，取上清，获得唾液一抗，保存备用。
所述的步骤6）为：将终止后的96孔聚苯乙烯反应板，放入预热的酶标仪中，读取各反应孔的OD650数值，并根据以下公式判定结果：已知阳性样品与已知阴性样品的比值P/N≥2.1，而且已知阳性样品的OD值≥0.35；在上述条件成立的情况下，如果待检唾液样品与已知阴性样品的比值P/N≥2.1，而且待检唾液样品的OD值≥0.35，则判为阳性、即对应群体猪瘟抗体的阳性率≥80%；否则判为阴性，即对应群体猪瘟抗体的阳性率＜80%。
本发明提供的猪瘟病毒唾液抗体采集和检测方法，避免了对单个动物采血的问题，相对于传统的血清抗体采集和检测方法，具有以下优点：1）唾液抗体的棉绳采集法对猪群没有任何应激，2）节省采样时间达 80%以上，3）节省2/3的采样人员，4）唾液样品对温度、环境、污染物的抵抗力更强，运输和保存更方便，4）可以对整个猪群实行大面积采样，所得结果更客观全面，5）猪瘟病毒唾液抗体检测与血清抗体检测的符合率在94%以上。
附图说明
图1是检测猪唾液中猪瘟病毒特异性抗体的方法的过程示意图；
图2是本发明的利用悬挂棉绳法，诱导动物咀嚼，采集唾液，处理后获得唾液一抗的示意图。
具体实施方式
检测猪唾液中猪瘟病毒特异性抗体的方法包括如下步骤：
1）猪瘟全病毒抗原的制备、灭活和抗原包被96孔聚苯乙烯反应板； 
2）利用悬挂棉绳法，诱导动物咀嚼，采集唾液，处理后获得唾液一抗，保存备用；
3）将唾液一抗，以PBST溶液1:1稀释后，按编号加入抗原包被的96孔聚苯乙烯反应板的反应孔中，每个反应孔加100ul，22-28℃饱和湿度反应1小时，洗涤备用；
4）将辣根过氧化物酶标记的羊抗猪IgG-FC抗体，以 PBST溶液1:2000稀释后，按顺序加入到96孔聚苯乙烯反应板的反应孔中，每个反应孔加100ul，22-28℃饱和湿度避光反应30分钟，以PBST洗涤备用；
5）将TMB显色剂 A液和B液1:1混合后，按顺序加入到96孔聚苯乙烯反应板的反应孔中，每个反应孔加50ul，避光反应15分钟，随后每个反应孔加入50ul 2M浓硫酸，终止反应；
6）放入酶标仪中，读取OD650数据，判定结果。
所述的步骤1）为：以pH 9.6的碳酸盐缓冲液稀释猪瘟C株全病毒纯化灭活抗原至10000 TCID50/ml，以100ul/孔的浓度包被96孔聚苯乙烯ELISA反应板，并以5%脱脂奶粉封闭，获得ELISA反应的抗原基质，置于4℃备用。
所述的步骤2）为：以6股、直径3mm、长1m的全棉绳索悬挂于猪群中间或围栏上，底端高度与动物肩部齐平，并将绳索的悬挂端解松，待猪群撕咬30min后，回收绳索，并置于无菌的样品收集袋中，用双手放在样品袋外挤出浸润在绳索上的唾液，并收集与无菌的50ml离心管中，以3000g离心15min，取上清，获得唾液一抗，保存备用。
所述的步骤6）为：将终止后的96孔聚苯乙烯反应板，放入预热的酶标仪中，读取各反应孔的OD650数值，并根据以下公式判定结果：已知阳性样品与已知阴性样品的比值P/N≥2.1，而且已知阳性样品的OD值≥0.35；在上述条件成立的情况下，如果待检唾液样品与已知阴性样品的比值P/N≥2.1，而且待检唾液样品的OD值≥0.35，则判为阳性、即对应群体猪瘟抗体的阳性率≥80%；否则判为阴性，即对应群体猪瘟抗体的阳性率＜80%。
实施例
1）以商品化的猪瘟病毒疫苗C株，1000 TCID50/ml（半数细胞感染量/毫升）浓度，感染ST细胞，培养48小时后，收集病毒液，4000g离心10min，取上清；35000g离心1h，获得纯化病毒，并滴定TCID50。将病毒液置于65℃水浴中，灭活30min，获得猪瘟全病毒纯化灭活抗原。将灭活抗原以pH 9.6的碳酸盐缓冲液稀释至10000 TCID50/ml，以100ul/孔的浓度包被96孔聚苯乙烯ELISA反应板，，饱和湿度下，22-28℃孵育1h, 然后转到4℃孵育16h。随后弃去包被液，拍干ELISA板，加入以PBST (pH7.3，0.05% tween-20) 稀释的5%脱脂奶粉100ul/孔，于22-28℃封闭2h。 弃去封闭液，拍干ELISA板，每孔加入150 ul 洗液（PBST），洗涤5 min×3次，拍干ELISA板，置于4℃备用，见图1。
2）以定制全棉绳索（6股、直径3mm、长1m）悬挂于猪群中间或围栏上，底端高度与动物肩部齐平，并将绳索的悬挂端解松，待猪群撕咬30min后，回收绳索，并置于无菌的样品收集袋中，用双手放在样品袋外，用力拧绳索，挤出浸润在绳索上的唾液，并收集于无菌的50ml离心管中，用于初步保存和运输（常温下、6小时内，或4℃下、72小时内运至实验室）。将唾液以3000g离心15min，取上清，获得唾液一抗，并与4℃（<7d）或-20℃（<60d）保存备用，见图２。
3）将处理备用的唾液一抗，以PBST(1:1)稀释后，按编号加入抗原包被的反应板上，100ul/孔，每个样品3个重复，同时设置PBST阴性和血清阳性抗体对照个3个孔。饱和湿度下，22-28℃孵育1h。随后弃去包被液，拍干ELISA板，每孔加入PBST 150 ul洗液（PBST），洗涤5 min×3次，拍干ELISA板，备用，见图1。
4）将辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗猪IgG-FC抗体，以PBST为稀释液，作1:2000倍稀释后，按100ul/孔加入到上述一抗包被的反应孔中，22-28℃/饱和湿度反应30分钟， 随后弃去包被液，拍干ELISA板，每孔加入PBST 150 ul洗液（PBST），洗涤5 min×3次，拍干ELISA板，备用，见图1。
5）TMB显色剂由Ａ液（TMB原粉以乙醇溶解配成4.0mg/ml，用时以超纯水稀释20倍）和B液（尿素过氧化氢以pH5.2磷酸盐缓冲液配制成0.15mg/ml终浓度）两种储存溶液组成，现用现配，配制比例为1:1。将配制好的TMB显色液按50ul/孔加入到上述反应孔中，室温避光反应15min，随后加入50ul/孔终止液（2M浓硫酸），终止反应，见图1。
6）将终止后的反应板，放入预热的酶标仪中，读取各反应孔的OD650数值，并根据以下公式判定结果：已知阳性样品与已知阴性样品的比值（P/N）≥2.1，而且已知阳性样品的OD值≥0.35；在上述条件成立的情况下，如果待检口水样品与已知阴性样品的比值（P/N）≥2.1，而且待检唾液样品的OD值≥0.35，则判为阳性、即对应群体猪瘟抗体的阳性率≥80%；否则判为阴性，即对应群体猪瘟抗体的阳性率＜80%。 
本发明以相同的抗原包被板和分别优化的反应程序，对浙江省某4000头基础母猪的地规模化猪场，进行了唾液抗和血清抗体的检测对照实验。实际采样覆盖动物180头，采集唾液样本17个，采集血清样本180份。。如表1所示，相对血清抗体的采集（前腔静脉采血），唾液抗体样本的采集在时间和人力需求上，具有明显优势。如表2所示，唾液抗体和血清抗体在最终结果的判断上，符合率在94%以上，完全可以满足临床大样本的抗体调查需要。
表1 两种抗体田间采样所需人员和时间的对比
抗体采集方法 采样覆盖动物数 实际采样数 实际操作人员 耗时
唾液采集 180头 17个 1人 2小时
前腔静脉采血 180头 180个 3人 8小时
表2 两种抗体检测方法的符合率比较

Claims (4)

1.一种检测猪唾液中猪瘟病毒特异性抗体的方法，其特征在于包括如下步骤：
1）猪瘟全病毒抗原的制备、灭活和抗原包被96孔聚苯乙烯反应板； 
2）利用悬挂棉绳法，诱导动物咀嚼，采集唾液，处理后获得唾液一抗，保存备用；
3）将唾液一抗，以PBST溶液1:1稀释后，按编号加入抗原包被的96孔聚苯乙烯反应板的反应孔中，每个反应孔加100ul，22-28℃饱和湿度反应1小时，洗涤备用；
4）将辣根过氧化物酶标记的羊抗猪IgG-FC抗体，以 PBST溶液1:2000稀释后，按顺序加入到96孔聚苯乙烯反应板的反应孔中，每个反应孔加100ul，22-28℃饱和湿度避光反应30分钟，以PBST洗涤备用；
5）将TMB显色剂 A液和B液1:1混合后，按顺序加入到96孔聚苯乙烯反应板的反应孔中，每个反应孔加50ul，避光反应15分钟，随后每个反应孔加入50ul 2M浓硫酸，终止反应；
6）放入酶标仪中，读取OD650数据，判定结果。
2. 根据权利要求1所述的一种检测猪唾液中猪瘟病毒特异性抗体的方法，其特征在于，所述的步骤1）为：以pH 9.6的碳酸盐缓冲液稀释猪瘟C株全病毒纯化灭活抗原至10000 TCID50/ml，以100ul/孔的浓度包被96孔聚苯乙烯ELISA反应板，并以5%脱脂奶粉封闭，获得ELISA反应的抗原基质，置于4℃备用。
3. 根据权利要求1所述的一种检测猪唾液中猪瘟病毒特异性抗体的方法，其特征在于，所述的步骤2）为：以6股、直径3mm、长1m的全棉绳索悬挂于猪群中间或围栏上，底端高度与动物肩部齐平，并将绳索的悬挂端解松，待猪群撕咬30min后，回收绳索，并置于无菌的样品收集袋中，用双手放在样品袋外挤出浸润在绳索上的唾液，并收集与无菌的50ml离心管中，以3000g离心15min，取上清，获得唾液一抗，保存备用。
4. 根据权利要求1所述的一种检测猪唾液中猪瘟病毒特异性抗体的方法，其特征在于，所述的步骤6）为：将终止后的96孔聚苯乙烯反应板，放入预热的酶标仪中，读取各反应孔的OD650数值，并根据以下公式判定结果：已知阳性样品与已知阴性样品的比值P/N≥2.1，而且已知阳性样品的OD值≥0.35；在上述条件成立的情况下，如果待检唾液样品与已知阴性样品的比值P/N≥2.1，而且待检唾液样品的OD值≥0.35，则判为阳性、即对应群体猪瘟抗体的阳性率≥80%；否则判为阴性，即对应群体猪瘟抗体的阳性率＜80%。
CN201410147371.2A 2014-04-14 2014-04-14 检测猪唾液中猪瘟病毒特异性抗体的方法 Expired - Fee Related CN103995119B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410147371.2A CN103995119B (zh) 2014-04-14 2014-04-14 检测猪唾液中猪瘟病毒特异性抗体的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410147371.2A CN103995119B (zh) 2014-04-14 2014-04-14 检测猪唾液中猪瘟病毒特异性抗体的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103995119A true CN103995119A (zh) 2014-08-20
CN103995119B CN103995119B (zh) 2016-08-17

Family

ID=51309340

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410147371.2A Expired - Fee Related CN103995119B (zh) 2014-04-14 2014-04-14 检测猪唾液中猪瘟病毒特异性抗体的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103995119B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104330559A (zh) * 2014-10-11 2015-02-04 杭州贝尔塔生物技术有限公司 检测猪血液中猪流行性腹泻病毒特异性IgG抗体的方法
CN104330558A (zh) * 2014-10-11 2015-02-04 杭州贝尔塔生物技术有限公司 检测猪血液中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的方法
CN112655566A (zh) * 2020-12-18 2021-04-16 杭州惠通检测有限公司 一种在非洲猪瘟防控中应用的多层防御体系

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20040051199A (ko) * 2002-12-12 2004-06-18 대한민국(관리부서 농림부 국립수의과학검역원) 면역 크로마토그래피법을 이용한 돼지콜레라바이러스항체의 검출 키트
CN1238500C (zh) * 2002-12-02 2006-01-25 清华大学 猪瘟病毒特征免疫学表位及其应用
CN101144818A (zh) * 2007-10-19 2008-03-19 清华大学 检测猪瘟病毒特异性抗体的方法及其酶联免疫试剂盒
CN101418304A (zh) * 2008-07-06 2009-04-29 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种制备用于检测猪瘟病毒血清抗体的可溶性e2抗原的方法
CN101487017A (zh) * 2009-02-25 2009-07-22 中国农业科学院兰州兽医研究所 猪瘟间接血凝检测试剂盒及制备方法
CN101799471A (zh) * 2009-12-23 2010-08-11 湖南农业大学 基于猪瘟病毒ns3建立的间接elisa方法
CN102175849A (zh) * 2010-12-22 2011-09-07 江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 一种快速检测猪瘟抗体的试剂盒及其制备方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1238500C (zh) * 2002-12-02 2006-01-25 清华大学 猪瘟病毒特征免疫学表位及其应用
KR20040051199A (ko) * 2002-12-12 2004-06-18 대한민국(관리부서 농림부 국립수의과학검역원) 면역 크로마토그래피법을 이용한 돼지콜레라바이러스항체의 검출 키트
CN101144818A (zh) * 2007-10-19 2008-03-19 清华大学 检测猪瘟病毒特异性抗体的方法及其酶联免疫试剂盒
CN101418304A (zh) * 2008-07-06 2009-04-29 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种制备用于检测猪瘟病毒血清抗体的可溶性e2抗原的方法
CN101487017A (zh) * 2009-02-25 2009-07-22 中国农业科学院兰州兽医研究所 猪瘟间接血凝检测试剂盒及制备方法
CN101799471A (zh) * 2009-12-23 2010-08-11 湖南农业大学 基于猪瘟病毒ns3建立的间接elisa方法
CN102175849A (zh) * 2010-12-22 2011-09-07 江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 一种快速检测猪瘟抗体的试剂盒及其制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
侯亚琴等: "猪唾液与血清中免疫抗体相关性研究", 《兽医研究》, no. 299, 31 March 2014 (2014-03-31) *

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104330559A (zh) * 2014-10-11 2015-02-04 杭州贝尔塔生物技术有限公司 检测猪血液中猪流行性腹泻病毒特异性IgG抗体的方法
CN104330558A (zh) * 2014-10-11 2015-02-04 杭州贝尔塔生物技术有限公司 检测猪血液中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的方法
CN104330558B (zh) * 2014-10-11 2016-12-07 杭州贝尔塔生物技术有限公司 检测猪血液中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的方法
CN104330559B (zh) * 2014-10-11 2016-12-07 杭州贝尔塔生物技术有限公司 检测猪血液中猪流行性腹泻病毒特异性IgG抗体的方法
CN112655566A (zh) * 2020-12-18 2021-04-16 杭州惠通检测有限公司 一种在非洲猪瘟防控中应用的多层防御体系
CN112655566B (zh) * 2020-12-18 2022-07-29 杭州惠通检测有限公司 一种在非洲猪瘟防控中应用的多层防御体系

Also Published As

Publication number Publication date
CN103995119B (zh) 2016-08-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ciacci-Zanella et al. Influenza A virus infection in Brazilian swine herds following the introduction of pandemic 2009 H1N1
Joardar et al. Seroprevalence of bluetongue in north eastern Indian state-Assam
CN103675274A (zh) 检测猪流行性腹泻病毒抗体的间接elisa试剂盒
Keshavamurthy et al. Prevalence of Coxiella burnetii in cattle and buffalo populations in Punjab, India
Ranabijuli et al. Serological evidence of foot‐and‐mouth disease virus infection in randomly surveyed goat population of Orissa, India
Singh et al. Sero-prevalence of paratuberculosis in young kids using ‘Bison type’, Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis antigen in plate ELISA
CN103995119A (zh) 检测猪唾液中猪瘟病毒特异性抗体的方法
Balogun et al. Field evaluation and confirmation of acute peste des petits ruminant outbreak in a flock of West African dwarf goats in Ibadan, Nigeria
CN106405082A (zh) 猪伪狂犬病病毒检测试纸
Feng et al. National serosurvey of encephalomyocarditis virus in healthy people and pigs in China
CN103698518A (zh) 一种利用间接免疫荧光检测猪瘟活疫苗病毒含量的方法
CN104374914B (zh) 一种恶臭假单胞菌检测试纸条及其制备方法
Ghodasara et al. Comparison of Rose Bengal plate agglutination, standard tube agglutination and indirect ELISA tests for detection of Brucella antibodies in cows and buffaloes
Xie et al. Detection of astrovirus, rotavirus C, and hepatitis E viral RNA in adult and juvenile farmed mink (Neovison vison)
Tum et al. Seroprevalence of foot-and-mouth disease in the southern provinces of Cambodia
Egwu et al. A sustainable laboratory approach for contagious bovine pleuropneumonia (CBPP) monitoring in Nigeria: Comparison between two serological tests in an endemic area complimented with post mortem lesions
CN102565392B (zh) 一种马链球菌兽疫亚种的酶联免疫检测试剂盒及检测方法
CN102876809B (zh) 一种草鱼呼肠孤病毒rt-pcr检测试剂盒及检测方法
Rola et al. Association between antibody status to bovine herpesvirus 1 and quality of milk in dairy herds in Poland
Bucardo et al. Seroprevalence in household raised pigs indicate high exposure to gii noroviruses in rural nicaragua
CN102809653A (zh) 一种检测新布尼亚病毒抗原的elisa试剂盒的制备和应用
Singh et al. Therapeutic management of clinical Bovine Johne’s disease using goat based ‘indigenous vaccine’in native Hariana Cattle: case reports
CN104330558B (zh) 检测猪血液中猪流行性腹泻病毒特异性IgA抗体的方法
CN101846681A (zh) 动物布鲁氏菌病荧光偏振检测法-fpa抗体检测试剂盒
CN104330559B (zh) 检测猪血液中猪流行性腹泻病毒特异性IgG抗体的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20160817

Termination date: 20210414

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee