CN103992252B - 一种多巴胺衍生物及分子印迹聚合物制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种多巴胺衍生物及分子印迹聚合物制备方法和应用。所述多巴胺衍生物包括丹磺酰多巴胺、咔唑磺酰多巴胺等。多巴胺衍生物由荧光发色剂前体与多巴胺通过磺化反应合成。利用所述多巴胺荧光衍生物制备荧光分子印迹聚合物，所得的荧光分子印迹聚合物，集特异性样品预处理和荧光检测于一体，与多孔酶标板联用，组建荧光传感器，根据加样前后荧光淬灭值的改变，直接测定环境水样中的系列酸性有机污染物，包括双酚A和2,4-二氯苯氧乙酸。

Description

一种多巴胺衍生物及分子印迹聚合物制备方法和应用

技术领域

本发明属于分子印迹技术领域，更具体地，涉及一种多巴胺衍生物及分子印迹聚合物制备方法和应用。

背景技术

分子印迹技术是将要分离的目标分子作为模板分子，将它与交联剂在聚合物单体溶液中进行聚合制备得到单体-模板复合物，然后通过物理或化学手段去除模板分子，便得到“印迹”有目标分子的空间结构的分子印迹聚合物(MIP)。分子印迹技术是制备对目标化合物具有选择性识别能力的聚合物新技术具有预定性、选择性、稳定性等优点，应用于色谱分离，固相萃取、催化作用、药物控释，以及检测环境残留污染物等。荧光分子印迹技术是将荧光与MIP相结合，通过荧光信号的改变(包括荧光增强、荧光猝灭及波长改变等)来检测待测物。由于荧光灵敏度高，非常适用于痕量物质的检测，而MIP又能选择性识别模板分子，因此荧光MIP可将样品预处理和荧光检测两者结合起来，实现快速、高灵敏度地检测靶分子。对于本身无荧光的模板分子，必须使用荧光功能单体制备荧光MIP。由于商品化的荧光功能单体较少，需要根据模板分子的结构合成新的荧光功能单体，才能制备相应的荧光MIP。

Sreenivasan等通过荧光素邻丙烯酸，反式二氯甲基苯硼酸以及甲基丙烯酸羟乙酯制备荧光MIP，检测眼泪中葡萄糖的含量。结果表明，即使在其他糖类存在的情况下，MIP荧光强度随着葡萄糖含量的升高而降低。其原因可能是葡萄糖与MIP结合后，导致聚合物链构象发生改变，使荧光强度降低，检出限为10mg/L(S.Manjuetal.,Biosens.Bioelectron.2010(26):894-897)。

该方法利用苯硼酸与葡萄糖的特异性结合能力，加上荧光单体甲基丙烯酸羟乙酯类，在60℃下生成凝胶状MIP，将凝胶状MIP用于荧光分光光度计检测，检出限较高(10mg/L)，上样量较大(10mL)，每次仅测定一个样本，不能快速检测。此外，葡萄糖为水溶性化合物，而环境监测中往往需要测定水相体系中的脂溶性污染物，因此该方法不适用于检测环境样本中痕量的脂溶性污染物。

发明内容

针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种多巴胺衍生物及分子印迹聚合物其制备方法和应用，其目的在于制备亲水亲脂兼容的荧光分子印迹聚合物，从而有效分离和富集水相体系中痕量的脂溶性靶分子。本发明提供的荧光分子印迹聚合物应用于酸性污染物监测，高通量、检出限低、上样量小，解决了现有技术检出限高、上样量大、每次仅测定一个样品的问题。

为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种多巴胺衍生物，其特征在于，具有式(I)的结构：

其中，R为荧光发色基团。

优选地，所述的多巴胺衍生物，其荧光发色基团为含萘、卟啉、咔唑、偶氮、二茂铁基或喹啉的光活性基团，优选为含萘的光活性基团N,N-二甲基-1-萘胺基。

按照本发明的另一方面，提供了所述多巴胺衍生物的制备方法，包括以下步骤：

(a)将荧光发色剂前体溶液和多巴胺水溶液按照荧光发色剂前体与多巴胺前体摩尔比1:2至2:1混合均匀；

(b)在步骤(a)制备的混合液中，加入碱性缓冲液，调节混合液最终pH值9.0到10.0之间，50至80摄氏度下，密封避光，使混合液发生磺化反应，制得所述多巴胺衍生物粗产物。

优选地，所述的制备方法，其所述碱性缓冲液为pH值在9至12的硼砂缓冲液。

优选地，所述的制备方法，还包括以下步骤：

(c)将步骤(b)中制得的多巴胺衍生物粗产物依次进行有机溶剂萃取和硅胶柱分离纯化。

优选地，所述的制备方法，其所述有机萃取包括以下步骤：采用氯仿作为有机溶剂，对反应产物进行1到5次萃取，留取有机相，蒸发溶剂得到油状物。

优选地，所述的制备方法，其所述硅胶柱分离包括以下步骤：将有机溶剂萃取得到的油状物通过硅胶柱分离，使用石油醚与乙酸乙酯1:1至1:8的混合液作为洗脱液洗脱，蒸发洗脱液得到纯净多巴胺衍生物。

按照本发明的另一方面，提供了多巴胺衍生物应用于制备荧光分子印迹聚合物。

优选地，所述多巴胺衍生物应用于制备荧光分子印迹聚合物，包括以下步骤：

(1)将多巴胺、如权利要求1所述的多巴胺衍生物和模板分子,按照质量比例80:30～50:1～3,均匀分散于缓冲液中；

(2)将载体材料与步骤(1)中得到的均匀分散液充分接触；

(3)在室温下将步骤(2)中的缓冲液暴露在空气中，使其发生聚合反应；

(4)使用洗脱液反复洗涤载体材料，然后改用超纯水反复洗涤载体材料。

优选地，所述多巴胺衍生物应用于制备荧光分子印迹聚合物，其所述缓冲液为tris缓冲液，其pH值在7至9之间。

优选地，所述多巴胺衍生物应用于制备荧光分子印迹聚合物，其所述载体材料为微球、滤膜或多孔板。

优选地，所述多巴胺衍生物应用于制备荧光分子印迹聚合物，其所述模板分子为双酚A或2,4-二氯苯氧乙酸。阴性对照为非印迹聚合物，表示除未使用模板分子，其余反应条件与印迹聚合物均一致下所得到的聚合物。

优选地，所述多巴胺衍生物应用于制备荧光分子印迹聚合物，其步骤(4)中所述的洗脱液按照体积比例包括，10％至30％的甲醇和1％至3％的乙酸，余重为水。

按照本发明的另一方面，提供了结合所述多巴胺衍生物的荧光分子印迹聚合物，包括载体材料骨架，所述的多巴胺衍生物和多巴胺均一地共价结合在所述载体材料骨架表面。

优选地，所述的分子印迹聚合物，其所述多巴胺衍生物和多巴胺的摩尔比为0.6:1至1:1。

按照本发明的另一方面，提供了所述的荧光分子印迹聚合物应用于酸性污染物检测。

优选地，所述的应用，包括以下步骤：

A、组建荧光传感器：将如权利要求9或10所述的荧光分子印迹聚合物与酶标仪联用，组成荧光传感器；

B、将待测样品加入步骤A中组建的荧光传感器，用20％至40％的乙醇及超纯水洗涤，使所述荧光分子印迹聚合物与目标酸性污染物特异性结合，从而导致荧光淬灭；

C、按照荧光传感器的荧光淬灭值越大，待测样品中目标酸性污染物浓度越高的原则，确定目标酸性污染物在待测样品中的浓度。

总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，能够取得下列有益效果：

(1)本发明提供的多巴胺荧光衍生物，能制备亲水亲脂兼容的荧光分子印迹聚合物，可有效分离和富集水相体系中痕量的脂溶性靶分子。

(2)将所述荧光分子印迹聚合物与酶标仪联用，制备集特异性样品预处理和荧光检测于一体的高通量荧光传感器，可同时测定96个样品，检出限低(LOD＝0.03μg/L)、上样量(250μL)小。

(3)本发明提供的荧光分子印迹聚合物，其中多巴胺衍生物具碱性基团，适合特异性分离、富集并测定样品中系列酸性有机污染物，特别适合用于复杂环境样品中酸性靶污染物的快速测定。

附图说明

图1是实施例6测定的样品核磁共振谱图谱；

图2是实施例6测定的氢归属图；

图3是实施例6质谱分析图谱；

图4是实施例6荧光光度检测结果图；

图5是实施例7的荧光分子印迹聚合物电镜扫描照片；

图6是实施例7的红外图谱；

图7是实施例9制备的荧光分子印迹聚合物在紫外灯下的照片；

图8是实施例11制备的非印迹分子聚合物电镜扫描照片；

图9是实施例13检测结果图；

图10是实施例14检测结果图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。

本发明提供了一种多巴胺衍生物，具有式(I)的结构：

其中，R为荧光发色基团，优选为含萘、卟啉、咔唑、偶氮、二茂铁基、喹啉等光活性基团，更优选为N,N-二甲基-1-萘胺基。

本发明提供的多巴胺衍生物，其制备方法包括以下步骤：

(a)将荧光发色剂前体溶液和多巴胺水溶液按照荧光发色剂前体与多巴胺前体摩尔比1:2至2:1混合均匀；优选的荧光发色剂前体溶液为浓度为5g/L至10g/L丹磺酰氯的丙酮溶液、丹磺酰氟丙酮溶液；所述多巴胺水溶液优选浓度为20g/L至40g/L。

(b)在步骤(a)制备的混合液中，加入碱性缓冲液，调节混合液最终pH值在9.0到10.0之间，50至80摄氏度下，密封避光，使混合液发生磺化反应，制得所述多巴胺衍生物粗产物；优选的碱性缓冲液为pH值在9至12之间的硼砂缓冲液。

(c)将步骤(b)中制得的多巴胺衍生物粗产物依次进行有机溶剂萃取和硅胶柱分离纯化；所述有机萃取包括以下步骤：采用氯仿作为有机溶剂，对反应产物进行1到5次萃取，留取有机相，蒸发溶剂得到油状物；所述硅胶柱分离包括以下步骤：将有机溶剂萃取得到的油状物通过硅胶柱分离，使用石油醚与乙酸乙酯1:1至1:8的混合液作为洗脱液洗脱，蒸发洗脱液得到纯净多巴胺衍生物。

本发明提供的多巴胺衍生物可做为功能单体，应用于制备荧光分子印迹聚合物。所述分子印迹聚合物，包括载体材料骨架，如权利要求1或2所述的多巴胺衍生物和多巴胺均一地共价结合在所述载体材料骨架表面。所述如权利要求1或2所述的多巴胺衍生物和多巴胺的摩尔比为0.6:1至1:1。所述分子印迹聚合物，以酸性污染物为模板，以多巴胺衍生物为荧光功能单体、多巴胺为功能单体，含有亲水性多巴胺基团和荧光发色基团的高分子膜状物，具体为双酚A荧光分子印迹聚合物及2,4-二氯苯氧乙酸荧光分子印迹聚合物。

所述荧光分子印迹聚合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将多巴胺、所述多巴胺衍生物和模板分子，按照质量比例80:30～50:1～3，混匀分散于缓冲液中。优选模板分子为双酚A或2,4-二氯苯氧乙酸，非印迹聚合物除不使用模板分子外，其余反应条件与印迹聚合物一致；所述缓冲液为tris缓冲液，其pH值优选在7至9之间。

(2)将载体材料与步骤(1)中得到的均匀分散液充分接触。所述载体材料可为微球、滤膜、多孔板如酶标板等载体材料，可将载体材料添加到所述均匀分散液中，使载体材料与均匀分散液充分接触；也可将均匀分散液添加到载体材料上，使两者充分接触，例如直接加入酶标板的孔中。

(3)在室温下将步骤(2)中的缓冲液暴露在空气中，使其发生聚合反应；优选的将步骤(2)中获取的混合液暴露在空气中12小时至36小时。

(4)使用洗脱液反复洗涤载体材料，然后改用超纯水反复洗涤载体材料。最终载体材料上附着有所述荧光印迹分子聚合物。优选地，所述洗脱液按照体积比例包括：10％至30％的甲醇和1％至3％的乙酸，余重为水。使用洗脱液，优选洗涤6至10次；使用超纯水，优选洗涤6至10次。

本发明的荧光分子印迹聚合物应用于酸性污染物检测。使用本发明提供的荧光分子印迹聚合物，检测酸性污染物的方法，包括以下步骤：

A、组建荧光传感器：将所述的荧光分子印迹聚合物与酶标仪联用，组成荧光传感器。

B、将待测样品加入步骤A中组建的荧光传感器，用20％至40％乙醇及超纯水洗涤，使所述荧光分子印迹聚合物与目标酸性污染物特异性结合，从而导致荧光淬灭。

利用荧光分子印迹聚合物可直接特异性分离富集不同样品中的模板分子的特点，将样品直接加入荧光传感器后，通过洗涤去除非特异性吸附的其他干扰物，使荧光传感器能特异性分离富集水中痕量酸性模板分子

C、按照荧光传感器的荧光淬灭值越大，待测样品中目标酸性污染物浓度越高的原则，确定目标酸性污染物在待测样品中的浓度。根据荧光传感器与水中靶模板结合前后的荧光猝灭值(I₀/I)，测定目标酸性污染物浓度。

以下为实施例：

实施例1

一种多巴胺衍生物，其特征在于，具有式(I)的结构：

其中，R为N,N-二甲基-1-萘胺基，即所述多巴胺衍生物为丹磺酰多巴胺，其分子式为C₂₀H₂₂N₂SO₄，激发波长为340nm，发射波长为514nm。其核磁共振氢谱的测定结果显示所述多巴胺衍生物具有下列特征峰：¹HNMR(400MHz):8.51(d,J＝8.6Hz,1H),8.19(d,J＝5.8Hz,1H),8.14(d,J＝7.2Hz,1H),7.53(t,J＝8.0Hz,1H),7.53(t,J＝8.0Hz,1H),7.21(d,J＝7.6Hz,1H),6.57(d,J＝8.0Hz,1H),6.48(brs),6.29(brd,J＝8.0Hz,1H),5.73(t,J＝5.8Hz,1H)，2.98(dt,J＝5.8,7.1Hz,2H),2.83(s,6H),2.44(t,J＝7.1Hz,2H)。对所述多巴胺衍生物进行液相色谱－质谱的ESI检测，结果显示其质量电荷比为387.2(分子离子峰(M+H)+)，其分子量为386。丹磺酰多巴胺具有式(II)的结构：

实施例2

一种多巴胺衍生物，其特征在于，具有式(I)的结构：

其中，R为咔唑基，即所述多巴胺衍生物为咔唑磺酰多巴胺，其分子式为C₂₀H₁₈N₂SO₄，具有式(III)的结构：

实施例3

实施例1中多巴胺衍生物的制备方法，包括以下步骤：

(a)将荧光发色剂前体溶液和多巴胺水溶液按照荧光发色剂前体与多巴胺前体摩尔比1比2混合均匀；所述荧光发色剂前体溶液为浓度为5g/L氮磺酰氟的丙酮溶液；所述多巴胺水溶液浓度为20g/L。

(b)在步骤(a)制备的混合液中，加入碱性缓冲液，调节混合液最终pH值为9.0，50摄氏度下，密封避光，使混合液发生磺化反应，制得所述多巴胺衍生物粗产物；所述碱性缓冲液为pH值9的硼砂缓冲液。

(c)将步骤(b)中制得的多巴胺衍生物粗产物依次进行有机溶剂萃取和硅胶柱分离纯化；所述有机萃取包括以下步骤：采用氯仿作为有机溶剂，对反应产物进行3次萃取，留取有机相，蒸发溶剂得到油状物；所述硅胶柱分离包括以下步骤：将有机溶剂萃取得到的油状物通过硅胶柱分离，使用石油醚与乙酸乙酯1:1的混合液作为洗脱液洗脱，蒸发洗脱液得到纯净多巴胺衍生物。

本实施例反应方程式如下：

实施例4

实施例1中多巴胺衍生物的制备方法，包括以下步骤：

(a)将荧光发色剂前体溶液和多巴胺水溶液按照荧光发色剂前体与多巴胺前体摩尔比1:1混合均匀；所述荧光发色剂前体溶液为浓度为10g/L氮磺酰氯的丙酮溶液；所述多巴胺水溶液浓度为40g/L。

(b)在步骤(a)制备的混合液中，加入碱性缓冲液，调节混合液最终pH值为10.0，80摄氏度下，密封避光，使混合液发生磺化反应，制得所述多巴胺衍生物粗产物；所述碱性缓冲液为pH值12的硼砂缓冲液。

(c)将步骤(b)中制得的多巴胺衍生物粗产物依次进行有机溶剂萃取和硅胶柱分离纯化；所述有机萃取包括以下步骤：采用氯仿作为有机溶剂，对反应产物进行5次萃取，留取有机相，蒸发溶剂得到油状物；所述硅胶柱分离包括以下步骤：将有机溶剂萃取得到的油状物通过硅胶柱分离，使用石油醚与乙酸乙酯1:3的混合液作为洗脱液洗脱，蒸发洗脱液得到纯净多巴胺衍生物。

本实施例反应方程式如下：

实施例5

实施例1中多巴胺衍生物的制备方法，包括以下步骤：

(a)将荧光发色剂前体溶液和多巴胺水溶液按照荧光发色剂前体与多巴胺前体摩尔比2比1混合均匀；所述荧光发色剂前体溶液为浓度为8g/L氮磺酰氯的丙酮溶液；所述多巴胺水溶液浓度为30g/L。

(b)在步骤(a)制备的混合液中，加入碱性缓冲液，调节混合液最终pH值为9.5，70摄氏度下，密封避光，使混合液发生磺化反应，制得所述多巴胺衍生物粗产物；所述碱性缓冲液为pH值10的硼砂缓冲液。

(c)将步骤(b)中制得的多巴胺衍生物粗产物依次进行有机溶剂萃取和硅胶柱分离纯化；所述有机萃取包括以下步骤：采用氯仿作为有机溶剂，对反应产物进行3次萃取，留取有机相，蒸发溶剂得到油状物；所述硅胶柱分离包括以下步骤：将有机溶剂萃取得到的油状物通过硅胶柱分离，使用石油醚与乙酸乙酯1:8的混合液作为洗脱液洗脱，蒸发洗脱液得到纯净多巴胺衍生物。

本实施例反应方程式如下：

实施例6

对实施例3至5制得的多巴胺衍生物进行表征

a)将得到的油状荧光材料溶于乙腈氘代溶液，制备40mg/L的溶液，取0.5mL溶液装入样品管内，插入样品管贮槽内进行核磁共振氢谱的测定。结果显示本发明所制得的产品具有下列特征峰:¹HNMR(400MHz):8.51(d,J＝8.6Hz,1H),8.19(d,J＝5.8Hz,1H),8.14(d,J＝7.2Hz,1H),7.53(t,J＝8.0Hz,1H),7.53(t,J＝8.0Hz,1H),7.21(d,J＝7.6Hz,1H),6.57(d,J＝8.0Hz,1H),6.48(brs),6.29(brd,J＝8.0Hz,1H),5.73(t,J＝5.8Hz,1H)，2.98(dt,J＝5.8,7.1Hz,2H),2.83(s,6H),2.44(t,J＝7.1Hz,2H)。核磁共振氢谱(¹HNMR)图谱如图1所示，氢归属图如图2所示。

b)将得到的油状荧光材料溶于乙腈溶液，制备1mg/L的溶液，取1mL溶液装入样品管内，对其进行液相色谱－质谱的ESI检测。结果如图3所示，显示本发明所制得的产品的质量电荷比为387.2(分子离子峰(M+H)⁺)，显示本物质分子量为386，与丹磺酰多巴胺结构式计算的分子量相同。

c)将得到的油状荧光材料溶于乙腈，进行荧光分光光度检测，结果显示丹磺酰多巴胺激发波长为340nm，发射波长为514nm，如图4所示。

实施例7

一种荧光分子印迹聚合物，以酶标板作为载体材料骨架，实施例1中的丹磺酰多巴胺和多巴胺均一地共价结合在所述载体材料骨架表面，所述丹磺酰多巴胺和多巴胺的摩尔比为0.6:1至1:1。所述荧光分子印迹聚合物的电镜扫描照片如图5所示；其红外(FT-IR)图谱如图6所示，从图6可以看出本发明制备的荧光MIP在3100，1600，1500，1000，880和650厘米^-1处具有6个明显的红外吸收峰，分别代表C-H伸缩振动，O＝S＝O伸缩振动，芳烃骨架振动，N-H的面外弯曲振动，C-H的面外弯曲振动和O-H的面外弯曲振动。

实施例8

一种荧光分子印迹聚合物，以滤膜作为载体材料骨架，实施例2中的咔唑磺酰多巴胺和多巴胺均一地共价结合在所述载体材料骨架表面，所述咔唑磺酰多巴胺和多巴胺的摩尔比为0.6:1至1:1。

实施例9

实施例7中的荧光分子印迹聚合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将多巴胺、实施例1中的多巴胺衍生物和模板分子，按照质量比例80:30:1，混匀分散于缓冲液中。模板分子为双酚A；所述缓冲液为tris缓冲液，其pH值为7。

(2)将载体材料与步骤(1)中得到的均匀分散液充分接触。所述载体材料为酶标板，将均匀分散液添加到酶标板的孔中，使两者充分接触。

(3)在室温下将步骤(2)中的缓冲液暴露在空气中，使其发生聚合反应；将步骤(2)中获取的混合液暴露在空气中24小时。

(4)使用洗脱液反复洗涤载体材料，然后改用超纯水反复洗涤载体材料。最终载体材料上附着有所述荧光印迹分子聚合物。所述洗脱液按照体积比例包括，10％的甲醇和1％的乙酸，余重为水。使用洗脱液，洗涤10次；使用超纯水，洗涤6次。

本实施例制备的荧光分子印迹聚合物，在紫外灯下照片如图7所示。

实施例10

实施例7中的荧光分子印迹聚合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将多巴胺、实施例2中的多巴胺衍生物和模板分子，按照质量比例80:50:3，混匀分散于缓冲液中。模板分子为2,4-二氯苯氧乙酸；所述缓冲液为tris缓冲液，其pH值为8。

(2)将载体材料与步骤(1)中得到的均匀分散液充分接触。所述载体材料为滤膜，将载体材料添加到所述均匀分散液中，使载体材料与均匀分散液充分接触。

(3)在室温下将步骤(2)中的缓冲液暴露在空气中，使其发生聚合反应；将步骤(2)中获取的混合液暴露在空气中36小时。

(4)使用洗脱液反复洗涤载体材料，然后改用超纯水反复洗涤载体材料。最终载体材料上附着有所述荧光印迹分子聚合物。所述洗脱液按照体积比例包括，30％的甲醇和3％的乙酸，余重为水。使用洗脱液，洗涤6次；使用超纯水，洗涤10次。

实施例11

非印迹荧光分子印迹聚合物的制备方法：

(1)将多巴胺、实施例1中的多巴胺衍生物，按照质量比例2:1，混匀分散于缓冲液中。不加入模板分子；所述缓冲液为tris缓冲液，其pH值为9。

(2)将载体材料与步骤(1)中得到的均匀分散液充分接触。所述载体材料为酶标板，将载体材料添加到所述均匀分散液中，使载体材料与均匀分散液充分接触。

(3)在室温下将步骤(2)中的缓冲液暴露在空气中，使其发生聚合反应；将步骤(2)中获取的混合液暴露在空气中12小时。

(4)使用洗脱液反复洗涤载体材料，然后改用超纯水反复洗涤载体材料。最终载体材料上附着有所述荧光印迹分子聚合物。所述洗脱液按照体积比例包括，20％的甲醇和2％的乙酸，余重为水。使用洗脱液，洗涤8次；使用超纯水，洗涤8次。

制备的空白荧光分子印迹聚合物，其电镜扫描照片如图8所示。

实施例12

实施例7中的荧光分子印迹聚合物性能评价，载体材料以96孔酶标板为例：

A)形态评价：扫描电镜分析显示96孔板中实施例7中的荧光分子聚合物为高分子膜状物。红外光谱检测显示荧光MIP在3100，1600，1500，1000，880和650厘米-1处具有6个明显的红外吸收峰，分别代表C-H伸缩振动，O＝S＝O伸缩振动，芳烃骨架振动，N-H的面外弯曲振动，C-H的面外弯曲振动和O-H的面外弯曲振动，与多巴胺和丹磺酰多巴胺的特征峰一致，证实在96孔板表面制备了含多巴胺和丹磺酰多巴胺功能基团的荧光分子印迹聚合物。

B)静态吸附试验评价所述荧光分子印迹聚合物吸附容量：分别在所述荧光分子印迹聚合物、荧光空白印迹聚合物以及空白酶标孔中，每孔加入10-80μg/L的双酚A或2,4-二氯苯氧乙酸标准溶液300μL，室温下振荡24h。用高效液相色谱-质谱联用仪分别测定上清中双酚A或2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)的浓度(Free，μg/L)。根据结合前后上清液中双酚A或2,4-二氯苯氧乙酸浓度，计算所述荧光分子印迹聚合物对双酚A或2,4-二氯苯氧乙酸的结合量(Bond，μg/L)，平行测定3次取平均值。以[Bound]/[Free]作为纵坐标，以[Bound]作为横坐标来得到斯卡查德(Scatchard)曲线。以Scatchard曲线的斜率为平衡解离常数Kd，以公式：[Bound]/[Free]＝-([Bound]/Kd)+(Bmax/Kd)，计算最大吸附容量Bmax。荧光BPA-MIPKd＝0.88ng/mL，Bmax＝5.62ng/cm²；荧光2,4-D-MIPKd＝0.50ng/mL，Bmax＝4.01ng/cm²。

c)静态吸附试验评价所述荧光分子印迹聚合物吸附特异性：采用印迹因子IPB(imprinting-inducedpromotionofbinding)值来评价所述荧光分子印迹聚合物的选择性：印迹因子IPB＝(Cmip-Cnip)/Cnip×100％。其中，Cmip为与所述荧光分子印迹聚合物结合的双酚A或2,4-二氯苯氧乙酸的量，Cnip为与荧光空白印迹聚合物结合的双酚A或2,4-二氯苯氧乙酸的量，分别得到荧光BPA-MIP的IPB＝1.29，荧光2,4-D-MIP的IPB＝1.10。

实施例13

使用实施例7中的荧光分子印迹聚合物，检测：

A、组建荧光传感器：将所述的荧光分子印迹聚合物与酶标仪联用，组成荧光传感器。多孔酶标板表面合成的所述的荧光分子印迹聚合物可直接作为荧光传感器；纳米颗粒表面或膜材料表面的所述的荧光分子印迹聚合物可加入多孔酶标板内，组建成荧光传感器。

B、将双酚A水溶液(终浓度为1-80μg/L)加入步骤A中组建的荧光传感器，用30％乙醇及超纯水洗涤，使所述荧光分子印迹聚合物与目标分子特异性结合，从而导致荧光淬灭。利用所述的荧光分子印迹聚合物对温度、有机溶剂耐受性高，可直接特异性分离富集不同样品中的模板分子的特点，加样后通过淋洗的方法，去除其他类似物的干扰，使荧光传感器能特异性分离富集水中痕量酸性有机污染物。

C、按照荧光传感器的荧光淬灭值越大，待测样品中目标酸性污染物浓度越高的原则，确定双酚A在纯水中的浓度。

根据荧光传感器与纯水中靶模板结合前后的荧光猝灭值(I₀/I)，测定双酚A浓度结果见图9。

实施例14

使用实施例7中的荧光分子印迹聚合物，检测：

A、组建荧光传感器：将所述的荧光分子印迹聚合物与酶标仪联用，组成荧光传感器。多孔酶标板表面合成的所述的荧光分子印迹聚合物可直接作为荧光传感器；纳米颗粒表面或膜材料表面的所述的荧光分子印迹聚合物可加入多孔酶标板内，组建成荧光传感器。

B、将2,4-二氯苯氧乙酸水溶液(终浓度为1-80μg/L)加入步骤A中组建的荧光传感器，用20％乙醇及超纯水洗涤，使所述荧光分子印迹聚合物与目标分子特异性结合，从而导致荧光淬灭。利用所述的荧光分子印迹聚合物对温度、有机溶剂耐受性高，可直接特异性分离富集不同样品中的模板分子的特点，加样后通过淋洗的方法，去除其他类似物的干扰，使荧光传感器能特异性分离富集水中痕量酸性有机污染物。

C、按照荧光传感器的荧光淬灭值越大，待测样品中目标酸性污染物浓度越高的原则，确定2,4-二氯苯氧乙酸在纯水中的浓度。

根据荧光传感器与纯水中靶模板结合前后的荧光猝灭值(I₀/I)，测定2,4-二氯苯氧乙酸浓度结果见图10。

实施例15

使用实施例7中的荧光分子印迹聚合物，检测：

A、组建荧光传感器：将所述的荧光分子印迹聚合物与酶标仪联用，组成荧光传感器。多孔酶标板表面合成的所述的荧光分子印迹聚合物可直接作为荧光传感器；纳米颗粒表面或膜材料表面的所述的荧光分子印迹聚合物可加入多孔酶标板内，组建成荧光传感器。

B、将含双酚A加标自来水及含2,4-二氯苯氧乙酸加标自来水(终浓度均为0.1，0.5，1，5，10μg/L)分别加入步骤A中组建的双酚A荧光传感器和2,4-二氯苯氧乙酸荧光传感器，用25％乙醇及超纯水洗涤，使所述荧光分子印迹聚合物与目标分子特异性结合，从而导致荧光淬灭。利用所述的荧光分子印迹聚合物对温度、有机溶剂耐受性高，可直接特异性分离富集不同样品中的模板分子的特点，加样后通过淋洗的方法，去除其他类似物的干扰，使荧光传感器能特异性分离富集自来水中痕量酸性有机污染物。

C、按照荧光传感器的荧光淬灭值越大，待测样品中目标酸性污染物浓度越高的原则，确定双酚A及2,4-二氯苯氧乙酸在自来水中的浓度。

根据荧光传感器与自来水中靶模板结合前后的荧光猝灭值(I₀/I)，测定双酚及2,4-二氯苯氧乙酸浓度结果见表1。

表1自来水中不同浓度双酚A及2,4-二氯苯氧乙酸的回收率

实施例16

使用实施例7中的荧光分子印迹聚合物，检测：

A、组建荧光传感器：将所述的荧光分子印迹聚合物与酶标仪联用，组成荧光传感器。多孔酶标板表面合成的所述的荧光分子印迹聚合物可直接作为荧光传感器；纳米颗粒表面或膜材料表面的所述的荧光分子印迹聚合物可加入多孔酶标板内，组建成荧光传感器。

B、将含双酚A加标江水及含2,4-二氯苯氧乙酸加标江水(终浓度均为0.1，0.5，1，5，10μg/L)分别加入步骤A中组建的双酚A荧光传感器和2,4-二氯苯氧乙酸荧光传感器，用40％乙醇及超纯水洗涤，使所述荧光分子印迹聚合物与目标分子特异性结合，从而导致荧光淬灭。利用所述的荧光分子印迹聚合物对温度、有机溶剂耐受性高，可直接特异性分离富集不同样品中的模板分子的特点，加样后通过淋洗的方法，去除其他类似物的干扰，使荧光传感器能特异性分离富集自来水中痕量酸性有机污染物。

C、按照荧光传感器的荧光淬灭值越大，待测样品中目标酸性污染物浓度越高的原则，确定双酚A及2,4-二氯苯氧乙酸在江水中的浓度。

根据荧光传感器与江水中靶模板结合前后的荧光猝灭值(I₀/I)，测定双酚及2,4-二氯苯氧乙酸浓度结果见表2。

表2江水中不同浓度双酚A及2,4-二氯苯氧乙酸的回收率

本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种多巴胺衍生物应用，其特征在于，应于制备荧光分子印迹聚合物，所述多巴胺衍生物具有(I)的结构：

其中，R为荧光发色基团，所述荧光发色基团为含萘的光活性基团N,N-二甲基-1-萘胺基或咔唑基。

2.如权利要求1所述的多巴胺衍生物应用于制备荧光分子印迹聚合物，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将多巴胺、所述多巴胺衍生物和模板分子,按照质量比例80:30～50:1～3,均匀分散于缓冲液中；

(2)将载体材料与步骤(1)中得到的均匀分散液充分接触；

(3)在室温下将步骤(2)中的缓冲液暴露在空气中，使其发生聚合反应；

(4)使用洗脱液反复洗涤载体材料，然后改用超纯水反复洗涤载体材料。

3.如权利要求2所述的多巴胺衍生物应用于制备荧光分子印迹聚合物，其特征在于，步骤(4)中所述的洗脱液按照体积比例包括，10％至30％的甲醇和1％至3％的乙酸，余重为水。

4.一种结合多巴胺衍生物的荧光分子印迹聚合物，其特征在于，包括载体材料骨架，多巴胺衍生物和多巴胺均一地共价结合在所述载体材料骨架表面，所述多巴胺衍生物和多巴胺的摩尔比为0.6:1至1:1，所述多巴胺衍生物具有(I)的结构：

其中，R为荧光发色基团，所述荧光发色基团为含萘的光活性基团N,N-二甲基-1-萘胺基或咔唑基。

5.如权利要求4所述的荧光分子印迹聚合物应用于酸性污染物检测。

6.如权利要求5所述的荧光分子印迹聚合物应用于酸性污染物检测，其特征在于，包括以下步骤：

A、组建荧光传感器：将如权利要求4所述的荧光分子印迹聚合物与酶标仪联用，组成荧光传感器；

B、将待测样品加入步骤A中组建的荧光传感器，用20％至40％的乙醇及超纯水洗涤，使所述荧光分子印迹聚合物与目标酸性污染物特异性结合，从而导致荧光淬灭；

C、按照荧光传感器的荧光淬灭值越大，待测样品中目标酸性污染物浓度越高的原则，确定目标酸性污染物在待测样品中的浓度。