CN103969453A - 甲胎蛋白自身抗体单独或与甲胎蛋白联合作为肿瘤诊断、疗效评估和复发监控标志物的应用 - Google Patents

甲胎蛋白自身抗体单独或与甲胎蛋白联合作为肿瘤诊断、疗效评估和复发监控标志物的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了甲胎蛋白(AFP)自身抗体单独或与AFP联合作为肿瘤诊断、疗效评估和复发监控标志物的应用。研究发现，在用于肝癌、胰腺癌、肺癌等肿瘤的诊断和预示、疗效评估及复发监控时，单独检测血清或血浆AFP自身抗体的准确度、灵敏度和特异性较单独检测血清或血浆AFP高或与其基本相当，而联合检测血清或血浆AFP自身抗体与AFP的准确度、灵敏度和特异性高于上述二者单独检测。此外，本发明还提供了一种基于磁微粒分离酶联免疫检测技术的AFP自身抗体检测试剂盒以及AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒，具有检测准确、灵敏、特异，操作简便等优点。

Description

甲胎蛋白自身抗体单独或与甲胎蛋白联合作为肿瘤诊断、疗效评估和复发监控标志物的应用
技术领域
本发明属于医学技术领域，涉及甲胎蛋白(AFP)自身抗体在医学领域中的新应用。
背景技术
肝癌是死亡率仅次于胃癌、食道癌的第三大常见恶性肿瘤。相对于高死亡率，早期肝癌的发现比例却非常低，八成以上一经发现就已是晚期，其生存期大多只剩半年。因此，如何更早发现、及时干预，如何实现疗效评估和监测，以及如何对术后患者进行实时准确的复发监控等是肝癌防治中亟待解决的问题。而灵敏度高、特异性强的肝癌诊断试剂的研制是提高肝癌早期检出率、改善患者预后的关键之一。过去一直认为AFP是诊断原发性肝癌的特异性标志物，具有确立诊断、早期诊断、鉴别诊断的作用。近年来大量临床却发现，如果将cutoff值定为20μg/L，以AFP诊断肝癌的阳性率仅80％左右，在肠胃管肿瘤如胰腺癌、肺癌以及一些肝的良性病变如肝炎、肝硬化中也会出现不同程度的AFP增高现象，比如约有15-18％的慢性肝炎和11-47％的肝硬化患者其血清AFP在20-200μg/L水平。因此，以AFP诊断肝癌的特异性尚不理想。而提高cutoff值虽然可以提高诊断的特异性，但诊断灵敏度却会大幅下降。
自身抗体是指针对自身组织、器官、细胞及细胞成分的抗体。人体的生长、发育和生存有完整的自身免疫耐受机制的维持，—旦自身耐受的完整性遭到破坏，则机体视自身组织、器官、细胞或细胞成分为“异物”而发生自身免疫反应，产生自身抗体。大量研究表明，肿瘤本身能诱导机体免疫反应，产生抗肿瘤相关抗原的自身抗体，在肿瘤抗原表达很低的时候也能够检测到。因此，检测与肿瘤抗原相关的自身抗体，有望及时地发现肿瘤。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的之一在于考察AFP自身抗体单独用于肝癌、胰腺癌、肺癌等肿瘤的诊断、疗效评估和复发监控的可能性，目的之二在于考察AFP与AFP自身抗体联合用于肝癌、胰腺癌、肺癌等肿瘤的诊断、疗效评估和复发监控的可能性，以达到准确、灵敏、特异的技术效果。
经研究，本发明提供如下技术方案：
1.甲胎蛋白自身抗体单独作为肿瘤诊断、疗效评估和复发监控标志物的应用，所述肿瘤为肝癌、肺癌和胰腺癌中的任一种。
2.甲胎蛋白自身抗体检测试剂盒，包括磁分离试剂、生物素标记反应试剂、酶反应试剂和底物溶液；所述磁分离试剂为甲胎蛋白抗原III偶联磁性纳米微球，所述甲胎蛋白抗原III的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；所述生物素标记反应试剂为生物素标记甲胎蛋白抗原I或II，所述甲胎蛋白抗原I的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，甲胎蛋白抗原II的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；所述酶反应试剂为酶标记亲和素；所述底物溶液为酶促化学发光底物溶液。
进一步，所述甲胎蛋白自身抗体检测试剂盒还包括反应增强剂、样本稀释液和清洗浓缩液；所述反应增强剂为含有4.23g/L NaCl、0.2mL/L Proclin-300和8.16g/L甲基异丙基酮的pH7.2-7.4的10mM Tris-HCl缓冲液；所述样本稀释液为含有9g/L NaCl、0.5mL/L Proclin-300和50g/L BSA的pH6.8-7.2的水溶液；所述清洗浓缩液为含有42.8g/L NaCl、2mL/L Proclin-300和10mL/L Tween-20的pH7.2-7.4的10mM PBS缓冲液。
进一步，所述甲胎蛋白自身抗体检测试剂盒还包括标准品和质控品；所述标准品为浓度梯度分别为0、5、25、125、500、1000pg/mL的抗甲胎蛋白抗原III的单克隆抗体溶液；所 述质控品为5pg/mL或125pg/mL的抗甲胎蛋白抗原III的单克隆抗体溶液。
3.甲胎蛋白与甲胎蛋白自身抗体联合作为肿瘤诊断、疗效评估和复发监控标志物的应用，所述肿瘤为肝癌、肺癌和胰腺癌中的任一种。
4.甲胎蛋白与甲胎蛋白自身抗体联合检测试剂盒，包括磁分离试剂A和B、生物素标记反应试剂A和B、酶反应试剂和底物溶液；所述磁分离试剂A为甲胎蛋白抗原III偶联磁性纳米微球，所述甲胎蛋白抗原III的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；所述磁分离试剂B为抗甲胎蛋白抗原III的单克隆抗体偶联磁性纳米微球；所述生物素标记反应试剂A为生物素标记甲胎蛋白抗原I或II，所述甲胎蛋白抗原I的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，甲胎蛋白抗原II的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；所述生物素标记反应试剂B为生物素标记抗甲胎蛋白抗原I或II的单克隆抗体；所述酶反应试剂为酶标记亲和素；所述底物溶液为酶促化学发光底物溶液。
进一步，所述甲胎蛋白与甲胎蛋白自身抗体联合检测试剂盒还包括反应增强剂、样本稀释液和清洗浓缩液；所述反应增强剂为含有4.23g/L NaCl、0.2mL/L Proclin-300和8.16g/L甲基异丙基酮的pH7.2-7.4的10mM Tris-HCl缓冲液；所述样本稀释液为含有9g/L NaCl、0.5mL/L Proclin-300和50g/L BSA的pH6.8-7.2的水溶液；所述清洗浓缩液为含有42.8g/L NaCl、2mL/L Proclin-300和10mL/L Tween-20的pH7.2-7.4的10mM PBS缓冲液。
进一步，所述甲胎蛋白与甲胎蛋白自身抗体联合检测试剂盒还包括标准品A和B以及质控品A和B；所述标准品A为浓度梯度分别为0、5、25、125、500、1000pg/mL的抗甲胎蛋白抗原III的单克隆抗体溶液；所述标准品B为浓度梯度分别为0、5、25、125、500、1000pg/mL的甲胎蛋白抗原III溶液；所述质控品A为5pg/mL或125pg/mL的抗甲胎蛋白抗原III的单克隆抗体溶液；所述质控品B为5pg/mL或125pg/mL的甲胎蛋白抗原III溶液。
其中，磁分离试剂A、生物素标记反应试剂A、标准品A和质控品A配套用于AFP自身抗体的检测；磁分离试剂B、生物素标记反应试剂B、标准品B和质控品B配套用于AFP的检测。
本发明的有益效果在于：本发明公开了AFP自身抗体单独或与AFP联合作为肿瘤诊断、疗效评估和复发监控标志物的应用。研究发现，在用于肝癌、胰腺癌、肺癌等肿瘤的诊断和预示、疗效评估及复发监控时，单独检测血清或血浆AFP自身抗体的准确度、灵敏度和特异性较单独检测血清或血浆AFP高或与其基本相当，而联合检测血清或血浆AFP自身抗体与AFP的准确度、灵敏度和特异性高于上述二者单独检测。此外，本发明还提供了一种基于磁微粒分离酶联免疫检测技术的AFP自身抗体检测试剂盒以及AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒，具有检测准确、灵敏、特异，操作简便等优点。
附图说明
为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，本发明提供如下附图进行说明：
图1为采用本发明试剂盒单独检测肝癌患者与健康人血清AFP浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。
图2为采用本发明试剂盒单独检测肝癌患者与健康人血清AFP自身抗体浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。
图3为采用本发明试剂盒联合检测肝癌患者与健康人血清AFP与AFP自身抗体浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。
图4为采用本发明试剂盒单独检测肝癌患者与健康人血浆AFP浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。
图5为采用本发明试剂盒单独检测肝癌患者与健康人血浆AFP自身抗体浓度的散点图 (A)和ROC曲线(B)。
图6为采用本发明试剂盒联合检测肝癌患者与健康人血浆AFP与AFP自身抗体浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。
图7为采用本发明试剂盒单独检测胰腺癌患者与健康人血清AFP浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。
图8为采用本发明试剂盒单独检测胰腺癌患者与健康人血清AFP自身抗体浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。
图9为采用本发明试剂盒联合检测胰腺癌患者与健康人血清AFP与AFP自身抗体浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。
图10为采用本发明试剂盒单独检测胰腺癌患者与健康人血浆AFP浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。
图11为采用本发明试剂盒单独检测胰腺癌患者与健康人血浆AFP自身抗体浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。
图12为采用本发明试剂盒联合检测胰腺癌患者与健康人血浆AFP与AFP自身抗体浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。
图13为采用本发明试剂盒单独检测肺癌患者与健康人血清AFP浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。
图14为采用本发明试剂盒单独检测肺癌患者与健康人血清AFP自身抗体浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。
图15为采用本发明试剂盒联合检测肺癌患者与健康人血清AFP与AFP自身抗体浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。
图16为采用本发明试剂盒单独检测肺癌患者与健康人血浆AFP浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。
图17为采用本发明试剂盒单独检测肺癌患者与健康人血浆AFP自身抗体浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。
图18为采用本发明试剂盒联合检测肺癌患者与健康人血浆AFP与AFP自身抗体浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。
具体实施方式
下面将结合附图，对本发明的优选实施例进行详细的描述。优选实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照试剂制造厂商所建议的条件进行。
主要试剂及材料：
AFP抗原I(AFP76-89，序列如SEQ.ID No.1所示)、AFP抗原II(AFP110-120，序列如SEQ.ID No.2所示)、AFP抗原III(AFP1-609，序列如SEQ.ID No.3所示)均由Invitrogen公司合成。
抗AFP抗原I的单克隆抗体(Anti-alpha1Fetoprotein antibody[EPR9309](ab169552))、抗AFP抗原II的单克隆抗体(Anti-alpha Fetoprotein antibody(ab128028))、抗AFP抗原III的单克隆抗体(Anti-alpha1Fetoprotein antibody[AFP-11](ab3969))均购自abcam公司。
磁性纳米微球(MS50002)购自苏州纳微生物科技有限公司；碱性磷酸酶(11464752001)购自罗氏公司；其余未注明试剂均购自Sigma aldrich公司。
实施例一、AFP自身抗体检测试剂盒、AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒的制备及其检测方法
一、试剂盒组分的制备
1、磁分离试剂的制备
取0.96g Tween-20，加适量水使完全溶解后，加入6.05g TRIS和3.4g NaCl，再加入0.2mL Proclin-300与10mL水的混合液，再加水800mL，搅拌使固体溶解，调pH至7.95-8.05，再加入3g BSA，搅拌使完全溶解，用水稀释至1000mL，摇匀，用孔径为0.2μm的滤器滤过，得磁珠缓冲液。
取5mg AFP抗原III溶于1mL pH6.8的0.1M PBS中；另取10mg EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)-碳化二亚胺)溶于1mL pH6.8的0.1M PBS中；将上述两种溶液混合，室温搅拌90min后，在4℃、3000g条件下离心浓缩至总体积为1ml，得EDC活化的AFP抗原III液。取5mL磁性纳米微球悬液(固含量100mg)，用磁力架进行固液分离，弃上清，沉淀用pH6.8的0.1M PBS洗涤3次(5mL/次)后，加入EDC活化的AFP抗原III液，混匀，37℃反应3小时，用磁力架进行固液分离，弃上清，沉淀用pH6.8的0.1M PBS洗涤3次(5mL/次)后，用100mL磁珠保存液(将BSA10g、Tween-1000.5mL、NaN30.5g用pH7.0的10mM PBS溶解并稀释至1000mL即得)重悬，得AFP抗原III偶联磁性纳米微球悬液。
将AFP抗原III偶联磁性纳米微球悬液与磁珠缓冲液按体积比1:1混合，得磁分离试剂A，2-8℃贮存，有效期12个月。
以抗AFP抗原III的单克隆抗体替代AFP抗原III，按照上述同样方法，制得磁分离试剂B。
2、生物素标记反应试剂的制备
取1mg AFP抗原I(或AFP抗原II)溶于0.1mL pH6.8的0.1M PBS中；另取2mg戊二醛溶于0.9mL pH5.0的MES中；将上述两种溶液混合，室温搅拌90min后，在4℃、3000g条件下离心浓缩至总体积为0.5mL，得戊二醛活化的AFP抗原I(或AFP抗原II)液。取1mg生物素溶于0.5mL pH6.8的0.1M PBS中，加入戊二醛活化的AFP抗原I(或AFP抗原II)液，混匀，37℃反应3小时，通过亲和层析与透析法除去未标记生物素与游离抗体，用10mL生物素标记物保存液(将BSA30g、NaN30.5g用pH7.0的10mM Tris-HCl溶解并稀释至1000mL即得)溶解，得生物素标记反应试剂A，2-8℃贮存，有效期12个月。
以抗AFP抗原I的单克隆抗体(或抗AFP抗原II的单克隆抗体)替代AFP抗原I(或AFP抗原II)，按照上述同样方法，制得生物素标记反应试剂B。
3、酶反应试剂的制备
取10mg碱性磷酸酶溶于0.8mL pH6.8的0.1M PBS中，加入0.2mL0.1M NaIO4溶液，37℃混匀20min后，在4℃、3000g条件下离心浓缩至总体积为0.5mL，用pH9.5的0.2M碳酸盐缓冲液调节pH至9.0，立即加入3-5mg亲和素，37℃搅拌1h，再加入0.1mL4mg/mL NaBH4溶液，混匀，4℃反应30min；所得溶液装入透析袋中，用pH6.8的0.1M PBS于4℃透析过夜，收集保留液，用10mL酶反应试剂保存液(将BSA50g、NaN30.5g用pH7.0的10mM PBS溶解并稀释至1000mL即得)溶解，得酶反应试剂，2-8℃贮存，有效期12个月。
4、反应增强剂的制备
取NaCl4.23g、Proclin-3000.2mL及甲基异丙基酮(Methyl Isopropyl Ketone,MIK)8.16g溶于pH7.2的100mM Tris-HCl100mL中，再加入800mL水，调pH至7.2-7.4，用水稀释至1000mL，摇匀后，用孔径0.2μm的滤器滤过，得反应增强剂，2-8℃贮存，有效期12个月。
5、样本稀释液的制备
取NaCl9g和BSA50g，加适量水使完全溶解后，加入Proclin-3000.5mL，再加入800mL 水，调pH至6.8-7.2，用水稀释至1000mL，摇匀后，用孔径为0.2μm的滤器滤过，得样本稀释液，2-8℃贮存，有效期12个月。
6、标准品和质控品的制备
标准品A和质控品A的原料均为1000pg/mL的抗AFP抗原III的单克隆抗体溶液；标准品B和质控品B的原料均为1000pg/mL的AFP抗原III溶液。
将标准品A或B的原料用酶反应试剂保存液稀释，制得浓度梯度分别为0、5、25、125、500、1000pg/mL的标准品A或B，2-8℃贮存，有效期为12个月。
将质控品A或B的原料用酶反应试剂保存液稀释，制得浓度分别为5pg/mL或125pg/mL的质控品A或B，2-8℃贮存，有效期为12个月。
7、清洗浓缩液的制备
取NaCl42.8g溶于pH7.2的100mM PBS100mL中，加入10mL Tween-20和Proclin-3002mL，再加入800mL水，调pH至7.2-7.4，用水稀释至1000mL，摇匀后，用孔径为0.2μm的滤器滤过，得清洗浓缩液，2-8℃贮存，有效期12个月。
8、底物溶液的制备
取NaCl5.14g，Tris36.36g，Na2SO310mg，Proclin-3000.5mL，Lumi-Phos530(lumigen P-501)15mL，Tween-200.2mL，加入800mL水，调pH至9.2-9.4，用水稀释至1000mL，摇匀后，用孔径为0.2μm的滤器滤过，得底物溶液，2-8℃贮存，有效期为12个月。
二、AFP自身抗体检测试剂盒的组成
AFP自身抗体检测试剂盒的具体组成如表1所示。
表1.AFP自身抗体检测试剂盒的组成
编号 组分 规格 备注
1 酶标板 12条×8孔
2 磁分离试剂A 1.5mL/管 AFP抗原III偶联磁性纳米微球
3 生物素标记反应试剂A 150μL/管 生物素标记AFP抗原I或II
4 酶反应试剂 150μL/管 碱性磷酸酶标记亲和素
5 反应增强剂 3mL/管
6 样本稀释液 25mL/瓶
7 标准品A 100μL/管 0、5、25、125、500、1000pg/mL的抗AFP抗原III的单抗
8 质控品A 100μL/管 5pg/mL或125pg/mL的抗AFP抗原III的单抗
9 清洗浓缩液 20mL/瓶 使用前用双蒸水进行10倍稀释
10 底物溶液 11mL/瓶 避光保存
11 终止液 6mL/瓶 2mol/L的硫酸
12 封口膜 3张 孵育时贴在酶标板上防止液体蒸发
三、AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒的组成
AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒的具体组成如表2所示。
表2.AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒的组成
编号 组分 规格 备注
1 酶标板 12条×8孔
2 磁分离试剂A 1.5mL/管 AFP抗原III偶联磁性纳米微球
3 磁分离试剂B 1.5mL/管 抗AFP抗原III的单抗偶联磁性纳米微球
4 生物素标记反应试剂A 150μL/管 生物素标记AFP抗原I或II
5 生物素标记反应试剂B 150μL/管 生物素标记抗AFP抗原I或II的单抗
6 酶反应试剂 150μL/管 碱性磷酸酶标记亲和素
7 反应增强剂 3mL/管
8 样本稀释液 25mL/瓶
9 标准品A 100μL/管 0、5、25、125、500、1000pg/mL的抗AFP抗原III的单抗
10 标准品B 100μL/管 0、5、25、125、500、1000pg/mL的AFP抗原III
11 质控品A 100μL/管 5pg/mL或125pg/mL的抗AFP抗原III的单抗
12 质控品B 100μL/管 5pg/mL或125pg/mL的AFP抗原III
13 清洗浓缩液 20mL/瓶 使用前用双蒸水进行10倍稀释
14 底物溶液 11mL/瓶 避光保存
15 终止液 6mL/瓶 2mol/L的硫酸
16 封口膜 3张 孵育时贴在酶标板上防止液体蒸发
其中，磁分离试剂A、生物素标记反应试剂A、标准品A和质控品A配套用于AFP自身抗体的检测；磁分离试剂B、生物素标记反应试剂B、标准品B和质控品B配套用于AFP的检测。
四、试剂盒的检测方法
在酶标板不同孔中分别加入浓度分别为0、5、25、125、500、1000pg/mL的标准品A(或B)、质控品A(或B)、待测样本各15μL，再每孔加入15μL生物素标记反应试剂A(或B)和15μL反应增强剂，混匀，37℃温育5min，再每孔加入15μL磁分离试剂A(或B)，混匀，37℃温育5min，将酶标板置磁分离器上沉淀2min，倾除上清液，再将酶标板连同磁分离器倒置在吸水纸上，拍干孔中残留液体；然后每孔加入300μL稀释10倍的清洗浓缩液，将酶标板置磁分离器上沉淀2min，倾除上清液，再将酶标板连同磁分离器倒置在吸水纸上，拍干孔中残留液体，重复清洗操作2次；再每孔加入100μL酶反应试剂，混匀，37℃温育5min，将酶标板置磁分离器上沉淀2min，倾除上清液，再将酶标板连同磁分离器倒置在吸水纸上，拍干孔中残留液体；然后按前述方法用稀释10倍的清洗浓缩液重复清洗酶标板2次；再每孔加入100μL底物溶液，混匀，37℃温育5min，再每孔加入100μL终止液终止反应，用化学发光仪或酶标仪测定发光值。
如遇到高值HOOK样本，为了避免出现高值HOOK效应，可将待测样本进行稀释后再次检测。
实施例二、AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于肝癌诊断和预示、疗效评估、复发监控
一、血清AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于肝癌诊断和预示
从江苏省肿瘤医院收集肝癌患者血清30例，从血站收集健康献血人员血清30例，用实施例一制备的AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒分别检测血清AFP浓度与血清AFP自身抗体浓度，考察血清AFP检测与血清AFP自身抗体检测单独或联合用于肝癌诊断和预示的效果。结果如下：
1、血清AFP检测单独用于肝癌诊断和预示
图1为采用本发明试剂盒单独检测肝癌患者与健康人血清AFP浓度的散点图(A)和ROC 曲线(B)。由图1可知，ROC曲线下面积为0.647，95％CI＝0.543-0.753，由此确定临床诊断cutoff值为4.2736ng/mL，血清AFP浓度明显高于4.2736ng/mL的判断为肝癌患者，明显低于4.2736ng/mL的判断为非肝癌患者，在该值附近的为疑似肝癌患者，灵敏度为64.7％，特异性为80％。
2、血清AFP自身抗体检测单独用于肝癌诊断和预示
图2为采用本发明试剂盒单独检测肝癌患者与健康人血清AFP自身抗体浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。由图2可知，ROC曲线下面积为0.767，95％CI＝0.645-0.863，由此确定临床诊断cutoff值为612.3516pg/mL，血清AFP自身抗体浓度明显高于612.3516pg/mL的判断为肝癌患者，明显低于612.3516pg/mL的判断为非肝癌患者，在该值附近的为疑似肝癌患者，灵敏度为71％，特异性为82％。
3、血清AFP与AFP自身抗体联合检测用于肝癌诊断和预示
图3为采用本发明试剂盒联合检测肝癌患者与健康人血清AFP和AFP自身抗体浓度的(A)和ROC曲线(B)。由图3A可知，血清AFP和AFP自身抗体浓度联合检测有效地将检测样本分成三组：一组为AFP和AFP自身抗体的浓度都较低，二组为AFP自身抗体的浓度较高，三组为AFP的浓度较高。由图3B可知，联合检测血清AFP和AFP自身抗体时，ROC曲线下面积为0.823，95％CI＝0.745-0.886，血清AFP浓度明显高于4.2736ng/mL或血清AFP自身抗体浓度明显高于612.3516pg/mL的判断为肝癌患者，血清AFP浓度明显低于4.2736ng/mL及血清AFP自身抗体浓度明显低于612.3516pg/mL的判断为非肝癌患者，在上述两值附近的为疑似肝癌患者，灵敏度为82.3％，特异性为90％。
综合上述结果可以看出，血清AFP自身抗体单独检测用于肝癌诊断和预示的灵敏度和特异性高于血清AFP单独检测，而血清AFP与AFP自身抗体联合检测用于肝癌诊断和预示的灵敏度和特异性又高于血清AFP自身抗体或血清AFP单独检测用于肝癌诊断和预示。
二、血清AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于肝癌疗效评估
从上海肿瘤医院分别收集10例肝癌患者的治疗前血清和治疗后血清，用实施例一制备的AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒分别检测血清AFP浓度与血清AFP自身抗体浓度，根据以下公式计算P值：P＝治疗后浓度/治疗前浓度，P≥1判断为治疗无效，0.6＜P＜1判断为病情改善，P≤0.6判断为疗效显著，将P值判断结果与这10名患者的临床评价结果进行比较，考察血清AFP检测与血清AFP自身抗体检测单独或联合用于肝癌疗效评估的效果。结果如下：
1、血清AFP检测单独用于肝癌疗效评估
表3为血清AFP检测单独用于肝癌疗效评估的结果。由表3可知，血清AFP检测单独用于肝癌疗效评估的结果与临床评价结果的符合率达80％。
表3.血清AFP检测单独用于肝癌疗效评估
患者编号 P值 P值判断结果 临床评价结果
1 1.252 治疗无效 无效
2 0.287 疗效显著 疗效显著
3 0.577 疗效显著 无效
4 0.637 病情改善 改善
5 1.341 治疗无效 无效
6 1.668 治疗无效 无效
7 0.797 病情改善 无效
8 0.506 疗效显著 疗效显著
9 0.711 病情改善 改善
10 1.462 治疗无效 无效
2、血清AFP自身抗体检测单独用于肝癌疗效评估
表4为血清AFP自身抗体检测单独用于肝癌疗效评估的结果。由表4可知，血清AFP自身抗体检测单独用于肝癌疗效评估的结果与临床评价结果的符合率达90％。
表4.血清AFP自身抗体检测单独用于肝癌疗效评估
患者编号 P值 P值判断结果 临床评价结果
1 1.615 治疗无效 无效
2 0.448 疗效显著 疗效显著
3 1.139 治疗无效 无效
4 1.221 治疗无效 改善
5 1.087 治疗无效 无效
6 1.741 治疗无效 无效
7 1.255 治疗无效 无效
8 0.516 疗效显著 疗效显著
9 0.819 病情改善 改善
10 1.342 治疗无效 无效
3、血清AFP与AFP自身抗体联合检测用于肝癌疗效评估
表5为血清AFP与AFP自身抗体联合检测用于肝癌疗效评估的结果。由表5可知，血清AFP与AFP自身抗体联合检测用于肝癌疗效评估的结果与临床评价结果的符合率达100％。
表5.血清AFP与AFP自身抗体联合检测用于肝癌疗效评估
患者编号 血清AFP检测P值 血清AFP自身抗体检测P值 P值判断结果 临床评价结果
1 1.252 1.615 治疗无效 无效
2 0.287 0.448 疗效显著 疗效显著
3 0.577 1.139 治疗无效 无效
4 0.637 1.221 病情改善 改善
5 1.341 1.087 治疗无效 无效
6 1.668 1.741 治疗无效 无效
7 0.797 1.255 治疗无效 无效
8 0.506 0.516 疗效显著 疗效显著
9 0.711 0.819 病情改善 改善
10 1.462 1.342 治疗无效 无效
综合上述结果可以看出，血清AFP自身抗体检测单独用于肝癌疗效评估的准确度高于血清AFP检测单独用于肝癌疗效评估，而血清AFP与AFP自身抗体检测联合用于肝癌疗效评估的准确度又高于血清AFP自身抗体检测单独用于肝癌疗效评估。
三、血清AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于肝癌复发监控
从上海肿瘤医院收集6例早期肝癌患者的化疗后血清，用实施例一制备的AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒分别检测血清AFP浓度与血清AFP自身抗体浓度，并对患者进行跟踪随访，分别于疗程结束后六周、3个月、6个月、9个月采用同样方法分别检测血清AFP浓度与血清AFP自身抗体浓度，根据以下公式计算P值：P＝疗程结束后不同时间的浓度/化疗后浓度，P>1判断为复发，P≤1判断为未复发即无进展生存，将P值判断结果与这6名患者在疗程结束后9个月的临床评价结果进行比较，考察血清AFP检测与血清AFP自身抗体检测单独或联合用于肝癌复发监控的效果。结果如下：
1、血清AFP检测单独用于肝癌复发监控
表6为血清AFP检测单独用于肝癌复发监控的结果。由表6可知，血清AFP检测获得的肝癌复发监控结果显示，6例肝癌患者中有4例在疗程结束后6周复发，有1例在疗程结束后3个月复发，而在疗程结束后9个月6例全部复发，而临床评价结果显示，6例肝癌患者在疗程结束后9个月仅2例复发，说明血清AFP浓度的升高早于临床症状和体征的发现，血清AFP检测可以为医生提前干预提供指导。
表6.血清AFP检测单独用于肝癌复发监控
2、血清AFP自身抗体检测单独用于肝癌复发监控
表7为血清AFP自身抗体检测单独用于肝癌复发监控的结果。由表7可知，血清AFP自身抗体检测获得的肝癌复发监控结果显示，6例肝癌患者中有3例在疗程结束后6周复发，有1例在疗程结束后6个月复发，而在疗程结束后9个月有2例为无进展生存，而临床评价结果显示，6例肝癌患者在疗程结束后9个月仅2例复发，说明血清AFP自身抗体浓度的升高早于临床症状和体征的发现，血清AFP自身抗体检测可以为医生提前干预提供指导。
表7.血清AFP自身抗体检测单独用于肝癌复发监控
3、血清AFP与AFP自身抗体检测联合用于肝癌复发监控
表8为血清AFP与AFP自身抗体检测联合用于肝癌复发监控的结果。由表8可知，血清AFP与AFP自身抗体检测联合获得的肝癌复发监控结果显示，6例肝癌患者中有3例在疗程结束后6周复发，有1例在疗程结束后3个月复发，而在疗程结束后9个月有1例为无进展生存，而临床评价结果显示，6例肝癌患者在疗程结束后9个月仅2例复发，说明血清AFP自身抗体浓度的升高早于临床症状和体征的发现，血清AFP自身抗体检测可以为医生提前干预提供指导。
表8.血清AFP与AFP自身抗体检测联合用于肝癌复发监控
综合上述结果可以看出，单独检测血清AFP或AFP自身抗体监控肝癌复发的准确度基本相当，而联合检测血清AFP与AFP自身抗体监控肝癌复发的准确度(50％)高于二者单独检测。
四、血浆AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于肝癌诊断和预示
从江苏省肿瘤医院收集肝癌患者血浆30例，从血站收集健康献血人员血浆30例，用实施例一制备的AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒分别检测血浆AFP浓度与血浆AFP自身抗体浓度，考察血浆AFP检测与血浆AFP自身抗体检测单独或联合用于肝癌诊断和预示的效果。结果如下：
1、血浆AFP检测单独用于肝癌诊断和预示
图4为采用本发明试剂盒单独检测肝癌患者与健康人血浆AFP浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。由图4可知，ROC曲线下面积为0.627，95％CI＝0.537-0.743，由此确定临床诊断cutoff值为5.1203ng/mL，血浆AFP浓度明显高于5.1203ng/mL的判断为肝癌患者，明显低于5.1203ng/mL的判断为非肝癌患者，在该值附近的为疑似肝癌患者，灵敏度为62％，特异性为79％。
2、血浆AFP自身抗体检测单独用于肝癌诊断和预示
图5为采用本发明试剂盒单独检测肝癌患者与健康人血浆AFP自身抗体浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。由图5可知，ROC曲线下面积为0.737，95％CI＝0.652-0.838，由此确定临床诊断cutoff值为700.1536ng/mL，血浆AFP自身抗体浓度明显高于700.1536ng/mL的判断为肝癌患者，明显低于700.1536ng/mL的判断为非肝癌患者，在该值附近的为疑似肝 癌患者，灵敏度为62％，特异性为78％。
3、血浆AFP与AFP自身抗体检测联合用于肝癌诊断和预示
图6为采用本发明试剂盒联合检测肝癌患者与健康人血浆AFP与AFP自身抗体浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。由图6A可知，血浆AFP和AFP自身抗体浓度联合检测有效地将检测样本分成三组：一组为AFP和AFP自身抗体的浓度都较低，二组为AFP自身抗体的浓度较高，三组为AFP的浓度较高。由图6B可知，联合检测血清AFP和AFP自身抗体时，ROC曲线下面积为0.810，95％CI＝0.732-0.896，血清AFP浓度明显高于5.1203ng/mL或血清AFP自身抗体浓度明显高于700.1536pg/mL的判断为肝癌患者，血清AFP浓度明显低于5.1203ng/mL及血清AFP自身抗体浓度明显低于700.1536pg/mL的判断为非肝癌患者，在上述两值附近的为疑似肝癌患者，灵敏度为81％，特异性为82％。
综合上述结果可以看出，单独检测血清AFP或AFP自身抗体诊断和预示肝癌的灵敏度和特异性基本相当，而联合检测血清AFP与AFP自身抗体诊断和预示肝癌的灵敏度和特异性高于二者单独检测。
五、血浆AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于肝癌疗效评估
从上海肿瘤医院分别收集10例肝癌患者的治疗前血浆和治疗后血浆，用实施例一制备的AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒分别检测血浆AFP浓度与血浆AFP自身抗体浓度，根据以下公式计算P值：P＝治疗后浓度/治疗前浓度，P≥1判断为治疗无效，0.6＜P＜1判断为病情改善，P≤0.6判断为疗效显著，将P值判断结果与这10名患者的临床评价结果进行比较，考察血浆AFP检测与血浆AFP自身抗体检测单独或联合用于肝癌疗效评估的效果。结果如下：
1、血浆AFP检测单独用于肝癌疗效评估
表9为血浆AFP检测单独用于肝癌疗效评估的结果。由表9可知，血浆AFP检测单独用于肝癌疗效评估的结果与临床评价结果的符合率达80％。
表9.血浆AFP检测单独用于肝癌疗效评估
患者编号 P值 P值判断结果 临床评价结果
1 1.152 治疗无效 无效
2 0.217 疗效显著 疗效显著
3 0.827 病情改善 无效
4 0.637 病情改善 改善
5 1.311 治疗无效 无效
6 1.725 治疗无效 无效
7 0.891 病情改善 无效
8 0.331 疗效显著 疗效显著
9 0.917 病情改善 改善
10 1.562 治疗无效 无效
2、血浆AFP自身抗体检测单独用于肝癌疗效评估
表10为血浆AFP自身抗体检测单独用于肝癌疗效评估的结果。由表10可知，血浆AFP自身抗体检测单独用于肝癌疗效评估的结果与临床评价结果的符合率达90％。
表10.血浆AFP自身抗体检测单独用于肝癌疗效评估
患者编号 P值 P值判断结果 临床评价结果
1 1.532 治疗无效 无效
2 0.697 病情改善 疗效显著
3 1.317 治疗无效 无效
4 0.695 病情改善 改善
5 1.562 治疗无效 无效
6 1.316 治疗无效 无效
7 1.371 治疗无效 无效
8 0.368 疗效显著 疗效显著
9 0.813 病情改善 改善
10 1.456 治疗无效 无效
3、血浆AFP与AFP自身抗体联合检测用于肝癌疗效评估
表11为血浆AFP与AFP自身抗体联合用于肝癌疗效评估的结果。由表11可知，血浆AFP与AFP自身抗体联合用于肝癌疗效评估的结果与临床评价结果的符合率达100％。
表11.血浆AFP与AFP自身抗体联合用于肝癌疗效评估
患者编号 血浆AFP检测P值 血浆AFP自身抗体检测P值 P值判断结果 临床评价结果
1 1.152 1.532 治疗无效 无效
2 0.217 0.597 疗效显著 疗效显著
3 0.827 1.317 治疗无效 无效
4 0.637 0.695 病情改善 改善
5 1.311 1.562 治疗无效 无效
6 1.725 1.316 治疗无效 无效
7 0.891 1.371 治疗无效 无效
8 0.331 0.368 疗效显著 疗效显著
9 0.917 0.813 病情改善 改善
10 1.562 1.456 治疗无效 无效
综合上述结果可以看出，血浆AFP自身抗体检测单独用于肝癌疗效评估的准确度高于血浆AFP检测单独用于肝癌疗效评估，而血浆AFP与AFP自身抗体联合检测用于肝癌疗效评估的准确度高于血浆AFP自身抗体或血浆AFP单独检测用于肝癌疗效评估。
六、血浆AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于肝癌复发监控
从上海肿瘤医院收集6例早期肝癌患者的化疗后血浆，用实施例一制备的AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒分别检测血浆AFP浓度与血浆AFP自身抗体浓度，并对患者进行跟踪随访，分别于疗程结束后六周、3个月、6个月、9个月采用同样方法分别检测血浆AFP浓度与血浆AFP自身抗体浓度，根据以下公式计算P值：P＝疗程结束后不同时间的浓度/化疗后浓度， P>1判断为复发，P≤1判断为未复发即无进展生存，将P值判断结果与这6名患者在疗程结束后9个月的临床评价结果进行比较，考察血浆AFP检测与血浆AFP自身抗体检测单独或联合用于肝癌复发监控的效果。结果如下：
1、血浆AFP检测单独用于肝癌复发监控
表12为血浆AFP检测单独用于肝癌复发监控的结果。由表12可知，血浆AFP检测获得的肝癌复发监控结果显示，6例肝癌患者中有4例在疗程结束后6周复发，有1例在疗程结束后3个月复发，而在疗程结束后9个月6例全部复发，而临床评价结果显示，6例肝癌患者在疗程结束后9个月仅2例复发，说明血浆AFP浓度的升高早于临床症状和体征的发现，血浆AFP检测可以为医生提前干预提供指导。
表12.血浆AFP检测单独用于肝癌复发监控
2、血浆AFP自身抗体检测单独用于肝癌复发监控
表13为血浆AFP自身抗体检测单独用于肝癌复发监控的结果。由表13可知，血浆AFP自身抗体检测获得的肝癌复发监控结果显示，6例肝癌患者中有3例在疗程结束后6周复发，有2例在疗程结束后3个月复发，而在疗程结束后9个月1例无进展生存，而临床评价结果显示，6例肝癌患者在疗程结束后9个月仅2例复发，说明血浆AFP自身抗体浓度的升高早于临床症状和体征的发现，血浆AFP自身抗体检测可以为医生提前干预提供指导。
表13.血浆AFP自身抗体检测单独用于肝癌复发监控
3、血浆AFP与AFP自身抗体联合检测用于肝癌复发监控
表14为血浆AFP与AFP自身抗体联合检测用于肝癌复发监控的结果。由表14可知，血浆AFP与AFP自身抗体联合检测获得的肝癌复发监控结果显示，6例肝癌患者中有3例在疗程结束后6周复发，有1例在疗程结束后3个月复发，而在疗程结束后9个月1例无进展生存，而临床 评价结果显示，6例肝癌患者在疗程结束后9个月仅2例复发，说明血浆AFP自身抗体浓度的升高早于临床症状和体征的发现，血浆AFP自身抗体检测可以为医生提前干预提供指导。
表14.血浆AFP与AFP自身抗体联合检测用于肝癌复发监控
综合上述结果可以看出，单独检测血浆AFP或AFP自身抗体监控肝癌复发的准确度基本相当，而联合检测血浆AFP与AFP自身抗体监控肝癌复发的准确度(50％)高于二者单独检测。
实施例三、AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于胰腺癌诊断和预示、疗效评估、复发监控
一、血清AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于胰腺癌诊断和预示
从江苏省肿瘤医院收集胰腺癌患者血清30例，从血站收集健康献血人员血清30例，用实施例一制备的AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒分别检测血清AFP浓度与血清AFP自身抗体浓度，考察血清AFP检测与血清AFP自身抗体检测单独或联合用于胰腺癌诊断和预示的效果。结果如下：
1、血清AFP检测单独用于胰腺癌诊断和预示
图7为采用本发明试剂盒单独检测胰腺癌患者与健康人血清AFP浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。由图7可知，ROC曲线下面积为0.567，95％CI＝0.487-0.663，由此确定临床诊断cutoff值为4.1213ng/mL，血清AFP浓度明显高于4.1213ng/mL的判断为胰腺癌患者，明显低于4.1213ng/mL的判断为非胰腺癌患者，在该值附近的为疑似胰腺癌患者，灵敏度为63％，特异性为75％。
2、血清AFP自身抗体检测单独用于胰腺癌诊断和预示
图8为采用本发明试剂盒单独检测胰腺癌患者与健康人血清AFP自身抗体浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。由图7可知，ROC曲线下面积为0.658，95％CI＝0.583-0.794，由此确定临床诊断cutoff值为511.3516pg/mL，血清AFP自身抗体浓度明显高于511.3516pg/mL的判断为胰腺癌患者，明显低于511.3516pg/mL的判断为非胰腺癌患者，在该值附近的为疑似胰腺癌患者，灵敏度为65％，特异性为82％。
3、血清AFP与AFP自身抗体检测联合用于胰腺癌诊断和预示
图9为采用本发明试剂盒联合检测胰腺癌患者与健康人血清AFP和AFP自身抗体浓度的(A)和ROC曲线(B)。由图9A可知，血清AFP和AFP自身抗体浓度联合检测有效地将检测样本分成三组：一组为AFP和AFP自身抗体的浓度都较低，二组为AFP自身抗体的浓度较高，三组为AFP的浓度较高。由图9B可知，联合检测血清AFP和AFP自身抗体时， ROC曲线下面积为0.800，95％CI＝0.723-0.882，血清AFP浓度明显高于4.1213ng/mL及血清AFP自身抗体浓度明显高于511.3516pg/mL的判断为胰腺癌患者，血清AFP浓度明显低于4.1213ng/mL及血清AFP自身抗体浓度明显低于511.3516pg/mL的判断为非胰腺癌患者，在上述两值附近的为疑似胰腺癌患者，灵敏度为75％，特异性为82％。
综合上述结果可以看出，血清AFP自身抗体单独检测用于胰腺癌诊断和预示的灵敏度和特异性高于血清AFP单独检测用于胰腺癌诊断和预示，而血清AFP与AFP自身抗体联合检测用于胰腺癌诊断和预示的灵敏度和特异性又高于血清AFP自身抗体检测单独用于胰腺癌诊断和预示。
二、血清AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于胰腺癌疗效评估
从上海肿瘤医院分别收集10例胰腺癌患者的治疗前血清和治疗后血清，用实施例一制备的AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒分别检测血清AFP浓度与血清AFP自身抗体浓度，根据以下公式计算P值：P＝治疗后浓度/治疗前浓度，P≥1判断为治疗无效，0.6＜P＜1判断为病情改善，P≤0.6判断为疗效显著，将P值判断结果与这10名患者的临床评价结果进行比较，考察血清AFP检测与血清AFP自身抗体检测单独或联合用于胰腺癌疗效评估的效果。结果如下：
1、血清AFP检测单独用于胰腺癌疗效评估
表15为血清AFP检测单独用于胰腺癌疗效评估的结果。由表11可知，血清AFP检测单独用于胰腺癌疗效评估的结果与临床评价结果的符合率达70％。
表15.血清AFP检测单独用于胰腺癌疗效评估
患者编号 P值 P值判断结果 临床评价结果
1 1.351 治疗无效 无效
2 0.317 疗效显著 疗效显著
3 0.941 病情改善 无效
4 1.027 治疗无效 改善
5 1.141 治疗无效 无效
6 1.568 治疗无效 无效
7 1.417 治疗无效 无效
8 0.582 疗效显著 疗效显著
9 1.123 治疗无效 改善
10 1.216 治疗无效 无效
2、血清AFP自身抗体检测单独用于胰腺癌疗效评估
表16为血清AFP自身抗体检测单独用于胰腺癌疗效评估的结果。由表16可知，血清AFP自身抗体检测单独用于胰腺癌疗效评估的结果与临床评价结果的符合率达80％。
表16.血清AFP自身抗体检测单独用于胰腺癌疗效评估
患者编号 P值 P值判断结果 临床评价结果
1 1.457 治疗无效 无效
2 0.156 疗效显著 疗效显著
3 1.671 治疗无效 无效
4 0.792 病情改善 改善
5 0.921 病情改善 无效
6 1.451 治疗无效 无效
7 1.149 治疗无效 无效
8 0.312 疗效显著 疗效显著
9 0.621 病情改善 改善
10 0.782 病情改善 无效
3、血清AFP与AFP自身抗体检测联合用于胰腺癌疗效评估
表17为血清AFP与AFP自身抗体联合检测用于胰腺癌疗效评估的结果。由表17可知，血清AFP与AFP自身抗体联合检测用于胰腺癌疗效评估的结果与临床评价结果的符合率达100％。
表17.血清AFP与AFP自身抗体联合检测用于肝癌疗效评估
患者编号 血清AFP检测P值 血清AFP自身抗体检测P值 P值判断结果 临床评价结果
1 1.351 1.457 治疗无效 无效
2 0.317 0.156 疗效显著 疗效显著
3 0.941 1.671 治疗无效 无效
4 1.027 0.792 病情改善 改善
5 1.141 0.921 治疗无效 无效
6 1.568 1.451 治疗无效 无效
7 1.417 1.149 治疗无效 无效
8 0.582 0.312 疗效显著 疗效显著
9 0.923 0.621 病情改善 改善
10 1.216 0.782 治疗无效 无效
综合上述结果可以看出，血清AFP自身抗体单独检测用于胰腺癌疗效评估的准确度高于血清AFP单独检测用于胰腺癌疗效评估，而血清AFP与AFP自身抗体联合检测用于胰腺癌疗效评估的准确度又高于血清AFP自身抗体单独检测用于胰腺癌疗效评估。
三、血清AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于胰腺癌复发监控
从上海肿瘤医院收集6例早期胰腺癌患者的化疗后血清，用实施例一制备的AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒分别检测血清AFP浓度与血清AFP自身抗体浓度，并对患者进行跟踪随访，分别于疗程结束后六周、3个月、6个月、9个月采用同样方法分别检测血清AFP浓度与血清AFP自身抗体浓度，根据以下公式计算P值：P＝疗程结束后不同时间的浓度/化疗后浓度，P>1判断为复发，P≤1判断为未复发即无进展生存，将P值判断结果与这6名患者在疗程结束后9个月的临床评价结果进行比较，考察血清AFP检测与血清AFP自身抗体检测单独或联合用于胰腺癌复发监控的效果。结果如下：
1、血清AFP单独检测用于胰腺癌复发监控
表18为血清AFP单独检测用于胰腺癌复发监控的结果。由表13可知，血清AFP检测获得的胰腺癌复发监控结果显示，6例胰腺癌患者中有3例在疗程结束后6周复发，有2例在疗程结束后3个月复发，而在疗程结束后9个月6例全部复发，而临床评价结果显示，6例胰腺癌患者在疗程结束后9个月仅2例复发，说明血清AFP浓度的升高早于临床症状和体征的发现，血清AFP检测可以为医生提前干预提供指导。
表18.血清AFP单独检测用于胰腺癌复发监控
2、血清AFP自身抗体检测单独用于胰腺癌复发监控
表19为血清AFP自身抗体单独检测用于胰腺癌复发监控的结果。由表19可知，血清AFP自身抗体检测获得的胰腺癌复发监控结果显示，6例胰腺癌患者中有1例在疗程结束后6周复发，有2例在疗程结束后3个月复发，而在疗程结束后9个月2例无进展生存，而临床评价结果显示，6例胰腺癌患者在疗程结束后9个月仅2例复发，说明血清AFP自身抗体浓度的升高早于临床症状和体征的发现，血清AFP自身抗体检测可以为医生提前干预提供指导。
表19.血清AFP自身抗体单独检测用于胰腺癌复发监控
3、血清AFP与AFP自身抗体检测联合用于胰腺癌复发监控
表20为血清AFP与AFP自身抗体联合检测用于胰腺癌复发监控的结果。由表20可知，血清AFP与AFP自身抗体联合检测获得的肝癌复发监控结果显示，6例胰腺癌患者中有3例在疗程结束后6周复发，有1例在疗程结束后3个月复发，而在疗程结束后9个月2例无进展生存，而临床评价结果显示，6例胰腺癌患者在疗程结束后9个月仅2例复发，说明血清AFP自身抗体浓度的升高早于临床症状和体征的发现，血清AFP自身抗体检测可以为医生提前干预提供指导。
表20.血清AFP与AFP自身抗体联合检测用于胰腺癌复发监控
综合上述结果可以看出，单独检测血清AFP或AFP自身抗体监控胰腺癌复发的准确度基本相当，而联合检测血清AFP与AFP自身抗体监控胰腺癌复发的准确度(66.7％)高于二者单独检测。
四、血浆AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于胰腺癌诊断和预示
从江苏省肿瘤医院收集胰腺癌患者血浆30例，从血站收集健康献血人员血浆30例，用实施例一制备的AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒分别检测血浆AFP浓度与血浆AFP自身抗体浓度，考察血浆AFP检测与血浆AFP自身抗体检测单独或联合用于胰腺癌诊断和预示的效果。结果如下：
1、血浆AFP检测单独用于胰腺癌诊断和预示
图10为采用本发明试剂盒单独检测胰腺癌患者与健康人血浆AFP浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。由图10可知，ROC曲线下面积为0.528，95％CI＝0.438-0.642，由此确定临床诊断cutoff值为4.5152ng/mL，血浆AFP浓度明显高于4.5152ng/mL的判断为胰腺癌患者，明显低于4.5152ng/mL的判断为非胰腺癌患者，在该值附近的为疑似胰腺癌患者，灵敏度为60％，特异性为72％。
2、血浆AFP自身抗体检测单独用于胰腺癌诊断和预示
图11为采用本发明试剂盒单独检测胰腺癌患者与健康人血浆AFP自身抗体浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。由图10可知，ROC曲线下面积为0.628，95％CI＝0.517-0.723，由此确定临床诊断cutoff值为512.3516pg/mL，血浆AFP自身抗体浓度明显高于512.3516pg/mL的判断为胰腺癌患者，明显低于512.3516pg/mL的判断为非胰腺癌患者，在该值附近的为疑似胰腺癌患者，灵敏度为65％，特异性为75％。
3、血浆AFP与AFP自身抗体检测联合用于胰腺癌诊断和预示
图12为采用本发明试剂盒联合检测胰腺癌患者与健康人血浆AFP和AFP自身抗体浓度的(A)和ROC曲线(B)。由图12A可知，血浆AFP和AFP自身抗体浓度联合检测有效地将检测样本分成三组：一组为AFP和AFP自身抗体的浓度都较低，二组为AFP自身抗体的浓度较高，三组为AFP的浓度较高。由图12B可知，联合检测血浆AFP和AFP自身抗体时，ROC曲线下面积为0.800，95％CI＝0.723-0.882，血浆AFP浓度明显高于4.5152ng/mL及血浆AFP自身抗体浓度明显高于512.3516pg/mL的判断为胰腺癌患者，血浆AFP浓度明显低于4.5152ng/mL及血浆AFP自身抗体浓度明显低于512.3516pg/mL的判断为非胰腺癌患者，在上述两值附近的为疑似胰腺癌患者，灵敏度为75％，特异性为82％。
综合上述结果可以看出，血浆AFP自身抗体检测单独用于胰腺癌诊断和预示的灵敏度和 特异性高于血浆AFP检测单独用于胰腺癌诊断和预示，而血浆AFP与AFP自身抗体检测联合用于胰腺癌诊断和预示的灵敏度和特异性又高于血浆AFP自身抗体检测单独用于胰腺癌诊断和预示。
五、血浆AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于胰腺癌疗效评估
从上海肿瘤医院分别收集10例胰腺癌患者的治疗前血浆和治疗后血浆，用实施例一制备的AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒分别检测血浆AFP浓度与血浆AFP自身抗体浓度，根据以下公式计算P值：P＝治疗后浓度/治疗前浓度，P≥1判断为治疗无效，0.6＜P＜1判断为病情改善，P≤0.6判断为疗效显著，将P值判断结果与这10名患者的临床评价结果进行比较，考察血浆AFP检测与血浆AFP自身抗体检测单独或联合用于胰腺癌疗效评估的效果。结果如下：
1、血浆AFP检测单独用于胰腺癌疗效评估
表21为血浆AFP检测单独用于胰腺癌疗效评估的结果。由表21可知，血浆AFP检测单独用于胰腺癌疗效评估的结果与临床评价结果的符合率达70％。
表21.血浆AFP检测单独用于胰腺癌疗效评估
患者编号 P值 P值判断结果 临床评价结果
1 1.335 治疗无效 无效
2 0.373 疗效显著 疗效显著
3 0.792 病情改善 无效
4 1.073 治疗无效 改善
5 1.211 治疗无效 无效
6 1.525 治疗无效 无效
7 1.591 治疗无效 无效
8 0.631 病情改善 疗效显著
9 0.871 病情改善 改善
10 1.462 治疗无效 无效
2、血浆AFP自身抗体检测单独用于胰腺癌疗效评估
表22为血浆AFP自身抗体检测单独用于胰腺癌疗效评估的结果。由表22可知，血浆AFP自身抗体检测单独用于胰腺癌疗效评估的结果与临床评价结果的符合率达80％。
表22.血浆AFP自身抗体检测单独用于胰腺癌疗效评估
3、血浆AFP与AFP自身抗体检测联合用于胰腺癌疗效评估
表23为血浆AFP与AFP自身抗体联合检测用于胰腺癌疗效评估的结果。由表23可知，血浆AFP与AFP自身抗体联合检测用于胰腺癌疗效评估的结果与临床评价结果的符合率达90％。
表23.血浆AFP与AFP自身抗体联合检测用于胰腺癌疗效评估
患者编号 血清AFP检测P值 血清AFP自身抗体检测P值 P值判断结果 临床评价结果
1 1.335 1.351 治疗无效 无效
2 0.373 0.377 疗效显著 疗效显著
3 0.792 1.097 病情改善 无效
4 1.073 0.695 病情改善 改善
5 1.211 1.362 治疗无效 无效
6 1.525 1.416 治疗无效 无效
7 1.591 1.271 治疗无效 无效
8 0.631 0.316 疗效显著 疗效显著
9 0.871 0.763 病情改善 改善
10 1.462 1.461 治疗无效 无效
综合上述结果可以看出，单独检测血浆AFP或AFP自身抗体评估胰腺癌疗效的准确度基本相当，而联合检测血浆AFP与AFP自身抗体评估胰腺癌疗效的准确度高于二者单独检测。
六、血浆AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于胰腺癌复发监控
从上海肿瘤医院收集6例早期胰腺癌患者的化疗后血浆，用实施例一制备的AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒分别检测血浆AFP浓度与血浆AFP自身抗体浓度，并对患者进行跟踪随访，分别于疗程结束后六周、3个月、6个月、9个月采用同样方法分别检测血浆AFP浓度与血浆AFP自身抗体浓度，根据以下公式计算P值：P＝疗程结束后不同时间的浓度/化疗后浓度，P>1判断为复发，P≤1判断为未复发即无进展生存，将P值判断结果与这6名患者在疗程结束后9个月的临床评价结果进行比较，考察血浆AFP检测与血浆AFP自身抗体检测单独或联合用于胰腺癌复发监控的效果。结果如下：
1、血浆AFP检测单独用于胰腺癌复发监控
表24为血浆AFP检测单独用于胰腺癌复发监控的结果。由表24可知，血浆AFP检测获得的胰腺癌复发监控结果显示，6例胰腺癌患者中有4例在疗程结束后6周复发，有1例在疗程结束后3个月复发，而在疗程结束后9个月6例全部复发，而临床评价结果显示，6例胰腺癌患者在疗程结束后9个月仅2例复发，说明血浆AFP浓度的升高早于临床症状和体征的发现，血浆AFP检测可以为医生提前干预提供指导。
表24.血浆AFP检测单独用于胰腺癌复发监控
2、血浆AFP自身抗体检测单独用于胰腺癌复发监控
表25为血浆AFP自身抗体检测单独用于胰腺癌复发监控的结果。由表25可知，血浆AFP自身抗体检测获得的胰腺癌复发监控结果显示，6例胰腺癌患者中有1例在疗程结束后6周复发，有2例在疗程结束后3个月复发，而在疗程结束后9个月2例无进展生存，而临床评价结果显示，6例胰腺癌患者在疗程结束后9个月仅2例复发，说明血浆AFP自身抗体浓度的升高早于临床症状和体征的发现，血浆AFP自身抗体检测可以为医生提前干预提供指导。
表25.血浆AFP自身抗体检测单独用于胰腺癌复发监控
3、血浆AFP与AFP自身抗体检测联合用于胰腺癌复发监控
表26为血浆AFP与AFP自身抗体联合检测用于胰腺癌复发监控的结果。由表26可知，血浆AFP与AFP自身抗体联合检测获得的胰腺癌复发监控结果显示，6例胰腺癌患者中有3例在疗程结束后6周复发，有1例在疗程结束后3个月复发，而在疗程结束后9个月2例无进展生存，而临床评价结果显示，6例胰腺癌患者在疗程结束后9个月仅2例复发，说明血浆AFP自身抗体浓度的升高早于临床症状和体征的发现，血浆AFP自身抗体检测可以为医生提前干预提供指导。
表26.血浆AFP与AFP自身抗体联合检测用于胰腺癌复发监控
综合上述结果可以看出，单独检测血浆AFP或AFP自身抗体监控胰腺癌复发的准确度基本相当，而联合检测血浆AFP与AFP自身抗体监控胰腺癌复发的准确度66.7％)高于二者单独检测。
实施例四、AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于肺癌诊断和预示、疗效评估、复发监控
一、血清AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于肺癌诊断和预示
从江苏省肿瘤医院收集肺癌患者血清30例，从血站收集健康献血人员血清30例，用实施例一制备的AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒分别检测血清AFP浓度与血清AFP自身抗体浓度，考察血清AFP检测与血清AFP自身抗体检测单独或联合用于肺癌诊断和预示的效果。结果如下：
1、血清AFP单独检测用于肺癌诊断和预示
图13为采用本发明试剂盒单独检测肺癌患者与健康人血清AFP浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。由图13可知，ROC曲线下面积为0.517，95％CI＝0.428-0.628，由此确定临床诊断cutoff值为6.0134ng/mL，血清AFP浓度明显高于6.0134ng/mL的判断为肺癌患者，明显低于6.0134ng/mL的判断为非肺癌患者，在该值附近的为疑似肺癌患者，灵敏度为60％，特异性为75％。
2、血清AFP自身抗体单独检测用于肺癌诊断和预示
图14为采用本发明试剂盒单独检测肺癌患者与健康人血清AFP自身抗体浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。由图14可知，ROC曲线下面积为0.614，95％CI＝0.548-0.682，由此确定临床诊断cutoff值为800.1516pg/mL，血清AFP自身抗体浓度明显高于800.1516pg/mL的判断为肺癌患者，明显低于800.1516pg/mL的判断为非肺癌患者，在该值附近的为疑似肺癌患者，灵敏度为65％，特异性为78％。
3、血清AFP与AFP自身抗体检测联合用于肺癌诊断和预示
图15为采用本发明试剂盒联合检测肺癌患者与健康人血清AFP和AFP自身抗体浓度的(A)和ROC曲线(B)。由图15A可知，血清AFP和AFP自身抗体浓度联合检测有效地将检测样本分成三组：一组为AFP和AFP自身抗体的浓度都较低，二组为AFP自身抗体的浓度较高，三组为AFP的浓度较高。由图15B可知，联合检测血清AFP和AFP自身抗体时，ROC曲线下面积为0.817，95％CI＝0.724-0.864，血清AFP浓度明显高于6.0134ng/mL及血清AFP自身抗体浓度明显高于800.1516pg/mL的判断为肺癌患者，血清AFP浓度明显低于6.0134ng/mL及血清AFP自身抗体浓度明显低于800.1516pg/mL的判断为非肺癌患者，在上述两值附近的为疑似肺癌患者，灵敏度为70％，特异性为82％。
综合上述结果可以看出，血清AFP自身抗体单独检测用于肺癌诊断和预示的灵敏度和特异性高于血清AFP单独检测用于肺癌诊断和预示，而血清AFP与AFP自身抗体联合检测用于肺癌诊断和预示的灵敏度和特异性又高于血清AFP自身抗体单独检测用于肺癌诊断和预 示。
二、血清AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于肺癌疗效评估
从上海肿瘤医院分别收集10例肺癌患者的治疗前血清和治疗后血清，用实施例一制备的AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒分别检测血清AFP浓度与血清AFP自身抗体浓度，根据以下公式计算P值：P＝治疗后浓度/治疗前浓度，P≥1判断为治疗无效，0.6＜P＜1判断为病情改善，P≤0.6判断为疗效显著，将P值判断结果与这10名患者的临床评价结果进行比较，考察血清AFP检测与血清AFP自身抗体检测单独或联合用于肺癌疗效评估的效果。结果如下：
1、血清AFP检测单独用于肺癌疗效评估
表27为血清AFP检测单独用于肺癌疗效评估的结果。由表27可知，血清AFP检测单独用于肺癌疗效评估的结果与临床评价结果的符合率达70％。
表27.血清AFP检测单独用于肺癌疗效评估
患者编号 P值 P值判断结果 临床评价结果
1 1.451 治疗无效 无效
2 0.457 疗效显著 疗效显著
3 0.873 病情改善 无效
4 0.617 病情改善 改善
5 1.241 治疗无效 无效
6 0.767 病情改善 无效
7 1.357 治疗无效 无效
8 0.782 病情改善 疗效显著
9 0.913 病情改善 改善
10 1.156 治疗无效 无效
2、血清AFP自身抗体检测单独用于肺癌疗效评估
表28为血清AFP自身抗体检测单独用于肺癌疗效评估的结果。由表28可知，血清AFP自身抗体检测单独用于肺癌疗效评估的结果与临床评价结果的符合率达80％。
表28.血清AFP自身抗体检测单独用于肺癌疗效评估
患者编号 P值 P值判断结果 临床评价结果
1 1.257 治疗无效 无效
2 0.428 疗效显著 疗效显著
3 0.671 病情改善 无效
4 0.356 疗效显著 改善
5 1.521 治疗无效 无效
6 1.312 治疗无效 无效
7 1.451 治疗无效 无效
8 0.214 疗效显著 疗效显著
9 0.782 病情改善 改善
10 1.149 治疗无效 无效
3、血清AFP与AFP自身抗体检测联合用于肺癌疗效评估
表29为血清AFP与AFP自身抗体检测联合用于肺癌疗效评估的结果。由表29可知，血清AFP与AFP自身抗体检测联合用于肺癌疗效评估的结果与临床评价结果的符合率达90％。
表29.血清AFP与AFP自身抗体联合检测用于肺癌疗效评估
患者编号 血清AFP检测P值 血清AFP自身抗体检测P值 P值判断结果 临床评价结果
1 1.451 1.257 治疗无效 无效
2 0.457 0.428 疗效显著 疗效显著
3 0.873 0.671 病情改善 无效
4 0.617 0.356 病情改善 改善
5 1.241 1.521 治疗无效 无效
6 0.767 1.312 治疗无效 无效
7 1.357 1.451 治疗无效 无效
8 0.782 0.214 疗效显著 疗效显著
9 0.913 0.782 病情改善 改善
10 1.156 1.149 治疗无效 无效
综合上述结果可以看出，血清AFP自身抗体检测单独用于肺癌疗效评估的准确度高于血清AFP检测单独用于肺癌疗效评估，而血清AFP与AFP自身抗体检测联合用于肺癌疗效评估的准确度又高于血清AFP自身抗体检测单独用于肺癌疗效评估。
三、血清AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于肺癌复发监控
从上海肿瘤医院收集6例早期肺癌患者的化疗后血清，用实施例一制备的AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒分别检测血清AFP浓度与血清AFP自身抗体浓度，并对患者进行跟踪随访，分别于疗程结束后六周、3个月、6个月、9个月采用同样方法分别检测血清AFP浓度与血清AFP自身抗体浓度，根据以下公式计算P值：P＝疗程结束后不同时间的浓度/化疗后浓度，P>1判断为复发，P≤1判断为未复发即无进展生存，将P值判断结果与这6名患者在疗程结束后9个月的临床评价结果进行比较，考察血清AFP检测与血清AFP自身抗体检测单独或联合用于肺癌复发监控的效果。结果如下：
1、血清AFP检测单独用于肺癌复发监控
表30为血清AFP检测单独用于肺癌复发监控的结果。由表30可知，血清AFP检测获得的肺癌复发监控结果显示，6例肺癌患者中有2例在疗程结束后6周复发，有3例在疗程结束后3个月复发，而在疗程结束后9个月6例全部复发，而临床评价结果显示，6例肺癌患者在疗程结束后9个月仅2例复发，说明血清AFP浓度的升高早于临床症状和体征的发现，血清AFP检测可以为医生提前干预提供指导。
表30.血清AFP检测单独用于肺癌复发监控
2、血清AFP自身抗体检测单独用于肺癌复发监控
表31为血清AFP自身抗体检测单独用于肺癌复发监控的结果。由表31可知，血清AFP自身抗体检测获得的肺癌复发监控结果显示，6例肺癌患者中有1例在疗程结束后6周复发，有2例在疗程结束后6个月复发，而在疗程结束后9个月2例无进展生存，而临床评价结果显示，6例肺癌患者在疗程结束后9个月仅2例复发，说明血清AFP自身抗体浓度的升高早于临床症状和体征的发现，血清AFP自身抗体检测可以为医生提前干预提供指导。
表31.血清AFP自身抗体检测单独用于肺癌复发监控
3、血清AFP与AFP自身抗体检测联合用于肺癌复发监控
表32为血清AFP与AFP自身抗体检测联合用于肺癌复发监控的结果。由表32可知，血清AFP与AFP自身抗体检测联合获得的肺癌复发监控结果显示，6例肺癌患者中有2例在疗程结束后6周复发，有3例在疗程结束后3个月复发，而在疗程结束后9个月2例无进展生存，而临床评价结果显示，6例肺癌患者在疗程结束后9个月仅2例复发，说明血浆AFP自身抗体浓度的升高早于临床症状和体征的发现，血浆AFP自身抗体检测可以为医生提前干预提供指导。
表32.血清AFP与AFP自身抗体联合检测用于肺癌复发监控
综合上述结果可以看出，单独检测血清AFP或AFP自身抗体监控肺癌复发的准确度基本相当，而联合检测血清AFP与AFP自身抗体监控肺癌复发的准确度(66.7％)高于二者单独检测。
四、血浆AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于肺癌诊断和预示
从江苏省肿瘤医院收集肺癌患者血浆30例，从血站收集健康献血人员血浆30例，用实施例一制备的AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒分别检测血浆AFP浓度与血浆AFP自身抗体浓度，考察血浆AFP检测与血浆AFP自身抗体检测单独或联合用于肺癌诊断和预示的效果。结果如下：
1、血浆AFP单独检测用于肺癌诊断和预示
图16为采用本发明试剂盒单独检测肺癌患者与健康人血浆AFP浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。由图16可知，ROC曲线下面积为0.524，95％CI＝0.428-0.617，由此确定临床诊断cutoff值为6.5217ng/mL，血浆AFP浓度明显高于6.5217ng/mL的判断为肺癌患者，明显低于6.5217ng/mL的判断为非肺癌患者，在该值附近的为疑似肺癌患者，灵敏度为60％，特异性为72％。
2、血浆AFP自身抗体检测单独用于肺癌诊断和预示
图17为采用本发明试剂盒单独检测肺癌患者与健康人血浆AFP自身抗体浓度的散点图(A)和ROC曲线(B)。由图17可知，ROC曲线下面积为0.625，95％CI＝0.547-0.742，由此确定临床诊断cutoff值为850.2513pg/mL，血浆AFP自身抗体浓度明显高于850.2513pg/mL的判断为肺癌患者，明显低于850.2513pg/mL的判断为非肺癌患者，在该值附近的为疑似肺癌患者，灵敏度为65％，特异性为76％。
3、血浆AFP与AFP自身抗体检测联合用于肺癌诊断和预示
图18为采用本发明试剂盒联合检测肺癌患者与健康人血浆AFP和AFP自身抗体浓度的(A)和ROC曲线(B)。由图18A可知，血浆AFP和AFP自身抗体浓度联合检测有效地将检测样本分成三组：一组为AFP和AFP自身抗体的浓度都较低，二组为AFP自身抗体的浓度较高，三组为AFP的浓度较高。由图18B可知，联合检测血浆AFP和AFP自身抗体时，ROC曲线下面积为0.837，95％CI＝0.731-0.893，血清AFP浓度明显高于6.5217ng/mL及血清AFP自身抗体浓度明显高于850.2513pg/mL的判断为肺癌患者，血浆AFP浓度明显低于6.5217ng/mL及血清AFP自身抗体浓度明显低于850.2513pg/mL的判断为非肺癌患者，在上述两值附近的为疑似肺癌患者，灵敏度为72％，特异性为82％。
综合上述结果可以看出，血浆AFP自身抗体单独检测用于肺癌诊断和预示的灵敏度和特异性高于血浆AFP单独检测用于肺癌诊断和预示，而血浆AFP与AFP自身抗体联合检测用于肺癌诊断和预示的灵敏度和特异性又高于血浆AFP自身抗体单独检测用于肺癌诊断和预示。
五、血浆AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于肺癌疗效评估
从上海肿瘤医院分别收集10例肺癌患者的治疗前血浆和治疗后血浆，用实施例一制备的AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒分别检测血浆AFP浓度与血浆AFP自身抗体浓度，根据以下公式计算P值：P＝治疗后浓度/治疗前浓度，P≥1判断为治疗无效，0.6＜P＜1判断为病情改善，P≤0.6判断为疗效显著，将P值判断结果与这10名患者的临床评价结果进行比较，考察血 浆AFP检测与血浆AFP自身抗体检测单独或联合用于肺癌疗效评估的效果。结果如下：
1、血浆AFP检测单独用于肺癌疗效评估
表33为血浆AFP单独检测用于肺癌疗效评估的结果。由表33可知，血浆AFP单独检测用于肺癌疗效评估的结果与临床评价结果的符合率达70％。
表33.血浆AFP单独检测用于肺癌疗效评估
患者编号 P值 P值判断结果 临床评价结果
1 1.335 治疗无效 无效
2 0.373 疗效显著 疗效显著
3 0.792 病情改善 无效
4 0.773 病情改善 改善
5 1.211 治疗无效 无效
6 0.825 病情改善 无效
7 1.591 治疗无效 无效
8 0.851 病情改善 疗效显著
9 0.871 病情改善 改善
10 1.462 治疗无效 无效
2、血浆AFP自身抗体单独检测用于肺癌疗效评估
表34为血浆AFP自身抗体单独检测用于肺癌疗效评估的结果。由表34可知，血浆AFP自身抗体单独检测用于肺癌疗效评估的结果与临床评价结果的符合率达80％。
表35.血浆AFP自身抗体检测单独用于肺癌疗效评估
患者编号 P值 P值判断结果 临床评价结果
1 1.351 治疗无效 无效
2 0.377 疗效显著 疗效显著
3 0.897 疗效改善 无效
4 0.695 疗效改善 改善
5 1.242 治疗无效 无效
6 1.416 治疗无效 无效
7 1.271 治疗无效 无效
8 0.316 疗效显著 疗效显著
9 1.163 治疗无效 改善
10 1.461 治疗无效 无效
3、血浆AFP与AFP自身抗体检测联合用于肺癌疗效评估
表35为血浆AFP与AFP自身抗体检测联合用于肺癌疗效评估的结果。由表35可知，血浆AFP与AFP自身抗体检测联合用于肺癌疗效评估的结果与临床评价结果的符合率达90％。
表35.血浆AFP与AFP自身抗体联合检测用于肝癌疗效评估
患者编号 血清AFP检测P值 血清AFP自身抗体检测P值 P值判断结果 临床评价结果
1 1.335 1.351 治疗无效 无效
2 0.373 0.377 疗效显著 疗效显著
3 0.792 0.897 病情改善 无效
4 0.773 0.695 病情改善 改善
5 1.211 1.242 治疗无效 无效
6 0.825 1.416 治疗无效 无效
7 1.591 1.271 治疗无效 无效
8 0.851 0.316 疗效显著 疗效显著
9 0.871 1.163 病情改善 改善
10 1.462 1.461 治疗无效 无效
综合上述结果可以看出，单独检测血浆AFP或AFP自身抗体评估肺癌疗效的准确度基本相当，而联合检测血浆AFP与AFP自身抗体评估肺癌疗效的准确度高于二者单独检测。
六、血浆AFP自身抗体检测或与AFP联合检测用于肺癌复发监控
从上海肿瘤医院收集6例早期肺癌患者的化疗后血浆，用实施例一制备的AFP与AFP自身抗体联合检测试剂盒分别检测血浆AFP浓度与血浆AFP自身抗体浓度，并对患者进行跟踪随访，分别于疗程结束后六周、3个月、6个月、9个月采用同样方法分别检测血浆AFP浓度与血浆AFP自身抗体浓度，根据以下公式计算P值：P＝疗程结束后不同时间的浓度/化疗后浓度，P>1判断为复发，P≤1判断为未复发即无进展生存，将P值判断结果与这6名患者在疗程结束后9个月的临床评价结果进行比较，考察血浆AFP检测与血浆AFP自身抗体检测单独或联合用于肺癌复发监控的效果。结果如下：
1、血浆AFP检测单独用于肺癌复发监控
表36为血浆AFP检测单独用于肺癌复发监控的结果。由表36可知，血浆AFP检测获得的肺癌复发监控结果显示，6例肺癌患者中有2例在疗程结束后6周复发，有1例在疗程结束后3个月复发，而在疗程结束后9个月1例无进展生存，而临床评价结果显示，6例肺癌患者在疗程结束后9个月3例复发，说明血浆AFP浓度的升高早于临床症状和体征的发现，血浆AFP检测可以为医生提前干预提供指导。
表36.血浆AFP检测单独用于肺癌复发监控
2、血浆AFP自身抗体检测单独用于肺癌复发监控
表37为血浆AFP自身抗体检测单独用于肺癌复发监控的结果。由表37可知，血浆AFP自身抗体检测获得的肺癌复发监控结果显示，6例肺癌患者中有3例在疗程结束后6周复发，有2例在疗程结束后3个月复发，而在疗程结束后9个月仅1例无进展生存，而临床评价结果显示，6例肺癌患者在疗程结束后9个月仅2例复发，说明血浆AFP自身抗体浓度的升高早于临床症状和体征的发现，血浆AFP自身抗体检测可以为医生提前干预提供指导。
表37.血浆AFP自身抗体检测单独用于肺癌复发监控
3、血浆AFP与AFP自身抗体检测联合用于肺癌复发监控
表38为血浆AFP与AFP自身抗体检测联合用于肺癌复发监控的结果。由表38可知，血浆AFP与AFP自身抗体检测联合获得的肺癌复发监控结果显示，6例肺癌患者中有4例在疗程结束后6周复发，有1例在疗程结束后3个月复发，而在疗程结束后9个月仅1例无进展生存，而临床评价结果显示，6例肺癌患者在疗程结束后9个月有3例复发，说明血浆AFP自身抗体浓度的升高早于临床症状和体征的发现，血浆AFP自身抗体检测可以为医生提前干预提供指导。
表38.血浆AFP与AFP自身抗体联合检测用于肺癌复发监控
综合上述结果可以看出，单独检测血浆AFP或AFP自身抗体监控肺癌复发的准确度基本相当，而联合检测血浆AFP与AFP自身抗体监控肺癌复发的准确度(66.7％)高于二者单独检测。

Claims (8)

1.甲胎蛋白自身抗体单独作为肿瘤诊断、疗效评估和复发监控标志物的应用，所述肿瘤为肝癌、肺癌和胰腺癌中的任一种。
2.甲胎蛋白自身抗体检测试剂盒，其特征在于，包括磁分离试剂、生物素标记反应试剂、酶反应试剂和底物溶液；所述磁分离试剂为甲胎蛋白抗原III偶联磁性纳米微球，所述甲胎蛋白抗原III的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；所述生物素标记反应试剂为生物素标记甲胎蛋白抗原I或II，所述甲胎蛋白抗原I的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，甲胎蛋白抗原II的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；所述酶反应试剂为酶标记亲和素；所述底物溶液为酶促化学发光底物溶液。
3.如权利要求2所述的甲胎蛋白自身抗体检测试剂盒，其特征在于，还包括反应增强剂、样本稀释液和清洗浓缩液；所述反应增强剂为含有4.23g/L NaCl、0.2mL/L Proclin-300和8.16g/L甲基异丙基酮的pH7.2-7.4的10mM Tris-HCl缓冲液；所述样本稀释液为含有9g/LNaCl、0.5mL/L Proclin-300和50g/L BSA的pH6.8-7.2的水溶液；所述清洗浓缩液为含有42.8g/L NaCl、2mL/L Proclin-300和10mL/L Tween-20的pH7.2-7.4的10mM PBS缓冲液。
4.如权利要求2或3所述的甲胎蛋白自身抗体检测试剂盒，其特征在于，还包括标准品和质控品；所述标准品为浓度梯度分别为0、5、25、125、500、1000pg/mL的抗甲胎蛋白抗原III的单克隆抗体溶液；所述质控品为5pg/mL或125pg/mL的抗甲胎蛋白抗原III的单克隆抗体溶液。
5.甲胎蛋白与甲胎蛋白自身抗体联合作为肿瘤诊断、疗效评估和复发监控标志物的应用，所述肿瘤为肝癌、肺癌和胰腺癌中的任一种。
6.甲胎蛋白与甲胎蛋白自身抗体联合检测试剂盒，其特征在于，包括磁分离试剂A和B、生物素标记反应试剂A和B、酶反应试剂和底物溶液；所述磁分离试剂A为甲胎蛋白抗原III偶联磁性纳米微球，所述甲胎蛋白抗原III的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；所述磁分离试剂B为抗甲胎蛋白抗原III的单克隆抗体偶联磁性纳米微球；所述生物素标记反应试剂A为生物素标记甲胎蛋白抗原I或II，所述甲胎蛋白抗原I的氨基酸序列如SEQ IDNo.1所示，甲胎蛋白抗原II的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；所述生物素标记反应试剂B为生物素标记抗甲胎蛋白抗原I或II的单克隆抗体；所述酶反应试剂为酶标记亲和素；所述底物溶液为酶促化学发光底物溶液。
7.如权利要求6所述的甲胎蛋白与甲胎蛋白自身抗体联合检测试剂盒，其特征在于，还包括反应增强剂、样本稀释液和清洗浓缩液；所述反应增强剂为含有4.23g/L NaCl、0.2mL/LProclin-300和8.16g/L甲基异丙基酮的pH7.2-7.4的10mM Tris-HCl缓冲液；所述样本稀释液为含有9g/L NaCl、0.5mL/L Proclin-300和50g/L BSA的pH6.8-7.2的水溶液；所述清洗浓缩液为含有42.8g/L NaCl、2mL/L Proclin-300和10mL/L Tween-20的pH7.2-7.4的10mM PBS缓冲液。
8.如权利要求6或7所述的甲胎蛋白与甲胎蛋白自身抗体联合检测试剂盒，其特征在于，还包括标准品A和B以及质控品A和B；所述标准品A为浓度梯度分别为0、5、25、125、500、1000pg/mL的抗甲胎蛋白抗原III的单克隆抗体溶液；所述标准品B为浓度梯度分别为0、5、25、125、500、1000pg/mL的甲胎蛋白抗原III溶液；所述质控品A为5pg/mL或125pg/mL的抗甲胎蛋白抗原III的单克隆抗体溶液；所述质控品B为5pg/mL或125pg/mL的甲胎蛋白抗原III溶液。
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