CN116718775A - 一种检测结直肠癌的组合物、试纸及方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种检测结直肠癌的组合物、试纸及方法，涉及生物医药技术领域，首先通过试纸对待测血清样本进行检测，通过荧光侧向免疫层析技术，快速定量待测血清样品中血清蛋白标志物（癌胚抗原、甲胎蛋白和转铁蛋白）的浓度，并将血清蛋白标志物的浓度的数值代入本发明提供的结直肠癌综合指数公式CI=0.7016a+0.3152b‑1.295c‑2.3268中，对检测结果进行综合分析，若CI值在正常参考范围[‑3，3]内，则表明所述待测血清样品为阴性，否则为阳性。该检测方法综合考虑了血清样本中癌胚抗原、甲胎蛋白和转铁蛋白浓度对于结直肠癌检测的影响，准确率高达95%以上，明显高于采用单一血清蛋白标志物的检测方法。

Description

一种检测结直肠癌的组合物、试纸及方法
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，特别涉及一种检测结直肠癌的组合物、试纸及方法。
背景技术
结直肠癌是全球第三大最常见的癌症。结肠癌临床发展共分为I-IV期（TNM分期）：肿瘤没有穿透肠道浆膜层的为I期；肿瘤穿透肠道浆膜层但没有淋巴结转移的为II期；肿瘤穿透肠道粘膜层且有淋巴结转移的为III期；肿瘤穿破肠管，有淋巴结转移，并有远处脏器转移的为IV期。结直肠癌从I期发展到IV期一般需要大概10-15年时间。研究表明，TNM分期与患者的5年总体生存率高度相关，在I期为92%，在IV期仅为11%。因此，早诊断早治疗对于降低结肠癌发病率和死亡率具有重要意义。
结肠镜、结肠CT、粪便隐血实验、血清蛋白标志物检测等是目前临床上常用的结直肠癌早期诊断方式。作为结直肠癌诊断的金标准，结肠镜利用一根由肛门进入大肠的且末端带有光源和微型电子摄像机的纤维软管来观察大肠部位的异常增生、溃疡或异常肿瘤，进而达到临床诊断的目的。由于肠道环境复杂，检查时会有明显不适，且会引起肠道受损、出血等并发症，人群对该方法的依存性较低，这可能也是结直肠癌早期诊断率较低的主要原因之一。与结肠镜相比，结肠CT不需要侵入、不会造成肠道创伤、不良反应少，更有利于肿瘤的定性和分期诊断，但该方法很难发现粘膜的细微变化，即使发现病灶也无法进行活检，因此该方法诊断准确性较差，患者常需要进一步的检查。粪便隐血实验是通过检测粪便中血红蛋白的氧化还原活性间接提示粪便中血红蛋白量，该方法敏感性较差，仅40%，阳性患者需做进一步的结肠镜检查。与传统检测技术相比，血清蛋白标志物检测是非侵入性的、操作简单、可重复检测，能够实时对疾病进行监测，且年轻人依存性高，能极大的提高结直肠癌的诊断率，被广泛应用于患者结直肠癌的检测。
对于用于早期结直肠癌诊断的血清蛋白标志物检测，目前大多通过检测单一血清蛋白标志物的升高来判断患者结直肠癌的患病情况，然而此种检测方法并不能准确反映患者的真实的患病情况，准确率低，易出现漏检现象。
因此，亟需提供一种检测结直肠癌的组合物、试纸及方法来提高结直肠癌检测的准确率。
发明内容
针对现有检测结直肠癌的方法准确率低的问题，本发明提供了一种检测结直肠癌的组合物、试纸及方法可以有效提高结直肠癌检测的准确率。
第一方面，提供了一种检测结直肠癌的组合物，所述组合物包括分别用于检测血清样品中癌胚抗原浓度、甲胎蛋白浓度和转铁蛋白浓度的第一抗体对、第二抗体对和第三抗体对；
所述第一抗体对包括鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体；
所述第二抗体对包括鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体；
所述第三抗体对包括鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体。
第二方面，本发明提供了一种检测结直肠癌的试纸，所述试纸包括第一方面所述的组合物。
优选地，所述试纸的结合垫上包被有荧光微球标记的单克隆抗体混合物；所述荧光微球标记的单克隆抗体混合物包括荧光微球标记的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、荧光微球标记的鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体。
优选地，所述结合垫上包被的荧光微球标记的单克隆抗体混合物的划膜量为2.5~5 μL/cm；
所述荧光微球标记的单克隆抗体混合物中荧光微球标记的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、荧光微球标记的鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体的质量比为1:1:1。
优选地，所述试纸的层析垫上设置有三条检测线和一条质控线；三条检测线上分别包被有鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体。
优选地，三条所述检测线上包被的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体的浓度均为1mg/mL，划膜量均为0.5~2μL/cm；质控线上包被的羊抗鼠单克隆抗体的浓度为1mg/mL，划膜量为0.5~2μL/cm。
第三方面，本发明提供了一种检测结直肠癌的方法，通过采用第二方面所述的试纸实现，包括：
S1.用所述试纸对待测血清样品进行检测，得到所述待测血清样品中血清蛋白标志物的浓度；所述血清蛋白标志物包括癌胚抗原、甲胎蛋白和转铁蛋白；
S2.将所述血清蛋白标志物的浓度的数值代入结直肠癌综合指数公式中，得到结直肠癌综合指数；所述结直肠癌综合指数公式为：
CI=0.7016a+0.3152b-1.295c-2.3268；其中，a为待测血清样品中癌胚抗原的浓度的数值，b为待测血清样品中甲胎蛋白的浓度的数值，c为待测血清样品中转铁蛋白的浓度的数值，CI为结直肠癌综合指数，CI的正常参考区间为[-3，3]；
S3.判断所述待测血清样品的结直肠癌综合指数是否在CI的正常参考区间内，若是，则表明所述待测血清样品为阴性，否则为阳性。
优选地，在步骤S1之前，还包括：
用试纸对不同浓度下的各血清蛋白标志物进行检测，并通过荧光免疫分析得到不同浓度下各血清蛋白标志物的检测值；所述检测值为与所述血清蛋白标志物对应的检测线的荧光强度和质控线的荧光强度的比值；
根据不同浓度下各血清蛋白标志物的检测值，得到各血清蛋白标志物的检测值与对应血清蛋白标志物浓度的线性关系。
优选地，所述对待测血清样品进行检测，得到所述待测血清样品中血清蛋白标志物的浓度，包括：
用试纸对所述待测血清样品进行检测，通过荧光免疫分析得到所述待测血清样品中各血清蛋白标志物的检测值；
基于各血清蛋白标志物的检测值与对应血清蛋白标志物浓度的线性关系，得到所述待测血清样品中各血清蛋白标志物的浓度。
优选地，检测所述癌胚抗原的浓度线性范围为1.25~200 ng/mL；检测所述甲胎蛋白的浓度线性范围为8~400ng/mL；检测所述转铁蛋白的浓度线性范围为0.8~200mg/mL。
本发明与现有技术相比至少具有如下有益效果：
（1）本发明提供了一种检测结直肠癌的组合物，可快速检测血清中的癌胚抗原浓度、甲胎蛋白浓度和转铁蛋白浓度，首次将癌胚抗原、甲胎蛋白和转铁蛋白以组合物的形式，对结直肠癌风险进行预测，首次通过癌胚抗原浓度、甲胎蛋白浓度和转铁蛋白浓度联合诊断患者是否患有结直肠癌，相比采用单一血清蛋白标志物进行诊断的方法，可有效提高结直肠癌检测的准确性，降低漏检率。
（2）本发明提供了一种检测结直肠癌的方法，首先通过试纸对待测血清样本进行检测，通过荧光侧向免疫层析技术，快速定量待测血清样品中血清蛋白标志物（癌胚抗原、甲胎蛋白和转铁蛋白）的浓度，并将血清蛋白标志物的浓度的数值代入本发明提供的结直肠癌综合指数公式CI=0.7016a+0.3152b-1.295c-2.3268中，对检测结果进行综合统一分析，若CI值在正常参考范围[-3，3]内，则表明所述待测血清样品为阴性（结直肠癌阴性），否则为阳性（结直肠癌阳性）。该检测方法综合考虑了血清样本中癌胚抗原、甲胎蛋白和转铁蛋白浓度对于结直肠癌检测的影响，准确率高达95%以上，明显高于采用单一血清蛋白标志物的检测方法。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明提供的一种检测结直肠癌的方法的流程图；
图2是本发明正常人群结直肠癌综合指数CI的数据分布拟合图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
第一方面，本发明提供了一种检测结直肠癌的组合物，所述组合物包括分别用于检测血清样品中癌胚抗原浓度、甲胎蛋白浓度和转铁蛋白浓度的第一抗体对、第二抗体对和第三抗体对；
所述第一抗体对包括鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体；
所述第二抗体对包括鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体；
所述第三抗体对包括鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体。
本发明提供一种检测结直肠癌的组合物可快速检测血清中的癌胚抗原浓度、甲胎蛋白浓度和转铁蛋白浓度，通过癌胚抗原浓度、甲胎蛋白浓度和转铁蛋白浓度联合诊断患者是否患有结直肠癌，相比采用单一血清蛋白标志物进行诊断的方法，可有效提高结直肠癌检测的准确性，降低漏检率。
第二方面，本发明提供了一种检测结直肠癌的试纸，所述试纸包含第一方面所述的组合物。
根据一些优选的实施方式，所述试纸的结合垫上包被有荧光微球标记的单克隆抗体混合物；所述荧光微球标记的单克隆抗体混合物包括荧光微球标记的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、荧光微球标记的鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体。
根据一些优选的实施方式，所述结合垫上包被的荧光微球标记的单克隆抗体混合物的划膜量为2.5~5 μL/cm；
所述荧光微球标记的单克隆抗体混合物中荧光微球标记的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、荧光微球标记的鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体的质量比为1:1:1。
根据一些优选的实施方式，所述试纸的层析垫上设置有三条检测线和一条质控线；三条检测线上分别包被有鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体。
根据一些优选的实施方式，三条所述检测线上包被的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体的浓度均为1mg/mL，划膜量均为0.5~2μL/cm；质控线上包被的羊抗鼠单克隆抗体的浓度为1mg/mL，划膜量为0.5~2μL/cm。
本发明的试纸的层析垫上设置有三条检测线，可同时检测待测血清样品中癌胚抗原的浓度、甲胎蛋白的浓度和转铁蛋白的浓度。
本发明的试纸包括底板，以及在底板上依次铺设的样品垫、结合垫、层析垫和吸收垫。
在本发明的一个实施例中，该试纸的底板为长度为80mm的PVC背板，吸收垫为长度为31mm的吸水纸；结合垫为长度为10mm的聚酯纤维膜，上面喷涂有荧光微球标记的单克隆抗体混合物（荧光微球标记的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、荧光微球标记的鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体的混合物），荧光微球标记的单克隆抗体混合物的用量为2.5~5 μL/cm；样品垫为长度为20mm的玻璃纤维膜；层析垫为硝酸纤维素膜，上面设有三条检测线(T1、T2、T3)和一条质控线（C），分别包被有鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体（T1）、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体（T2）、鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体（T3）和羊抗鼠单克隆抗体（C）。需要说明的是，本发明鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体购自Abcam公司，鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体购自赛默飞公司。
在本发明的一个实施例中，试纸制备过程包括：
（1）样品垫的处理：样品垫是由玻璃纤维膜裁成的，将每条裁好的样品垫加入5mL样品垫处理液，37~42℃烘干16h；其中，样品垫处理液是含有0.1~0.5%BSA（牛血清白蛋白）、0.1~0.5%吐温和0.1~0.5% PEG 2000（聚乙二醇）的0.1M磷酸盐缓冲液（pH=7.4）；样品垫处理液中各物质的百分含量为质量百分数。
（2）结合垫处理：结合垫是由聚酯纤维膜裁成的，每条裁好的结合垫加入2mL结合垫处理液，37~42℃烘干16h；结合垫处理液是含有1~5%蔗糖、1~5%海藻糖和0.1~0.5%PEG2000（聚乙二醇）的水溶液；结合垫处理液中各物质的百分含量为质量百分数。
（3）荧光微球标记：（a）荧光微球清洗：取100μL荧光微球放入离心管中，加入900μL标记缓冲液（质量分数为0.1~0.5%的吐温-20水溶液），混匀，于4℃，12000rpm转速下离心10min；弃上清，加入1mL标记缓冲液，重悬，超声1~5min；（b）活化：依次向清洗后的荧光微球中加入浓度均为20 mg/mL的NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）水溶液、EDC（碳二亚胺）水溶液，充分混匀，然后室温孵育20~30min；于4℃，12000rpm转速下离心10min，弃上清；然后加入1mL pH=8.0的标记缓冲液（0.02M的硼酸缓冲液或磷酸盐缓冲液），重悬，超声1~5min；（c）标记与封闭：在活化后的微球溶液里加入10~50μg的单克隆抗体，充分混匀，室温震荡孵育2h；然后加入100μL10%BSA溶液，封闭1h。需要说明的是，单克隆抗体包括鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体，且各单克隆抗体分别进行标记与封闭；（d）复溶：将封闭好的溶液于4℃，12000rpm转速下离心15min，弃上清；然后加入1mL复溶液（含有1~10%蔗糖、0.1~1%BSA、0.1~1%吐温-20和0.05%的叠氮化钠的0.01M 磷酸缓冲液（pH=7.4），重悬，超声1~5min，于4℃，12000rpm转速下离心15min，弃上清；加入1mL复溶液，重悬微球，超声1~5min，得到荧光微球标记的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、荧光微球标记的鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体；（e）喷微球：将荧光微球标记的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、荧光微球标记的鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体等比例混合，然后按照2.5~5μL/cm的量将微球混合物喷涂在处理后的结合垫上，37~42℃烘干1h。荧光标记过程中各物质的百分含量为质量百分数。
（4）层析垫：分别用纯水稀释得到抗体浓度均为1mg/mL的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体溶液、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体溶液、鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体溶液和羊抗鼠单克隆抗体溶液；然后按0.5~2μL/cm划膜量分别包被到硝酸纤维素膜的三条检测线和质控线上，即得层析垫。
（5）试纸条的组装与切条：吸收垫上沿与PVC背板上边缘齐平，下沿搭接于层析垫上表面约2mm；结合垫上沿搭接于层析垫下表面约2mm，下沿衬于样品垫上沿下方约2mm；样品垫下沿与PVC背板下沿持平；层析垫的C线距试纸条上沿35.5mm，同时，从层析垫搭接吸收垫的一端至层析垫搭接结合垫的一端，C线、T1线、T2线和T3线依次设置，C线更靠近吸收垫，C线、T1线、T2线和T3线之间的距离均为4mm，组装好后切成4mm±0.02mm宽度的试纸条。
需要说明的是，本发明对于三条检测线上分别包被的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体没有特别的限制，只要确保三条检测线分别包被不同的单克隆抗体即可；采用纯水对购买的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体进行稀释得到相应浓度。
需要说明的是，本发明中所需要的材料均为市售产品，其中鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体、癌胚抗原、转铁蛋白抗原购自Abcam公司；鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、甲胎蛋白抗原购自赛默飞公司；荧光微球为200nm时间分辨荧光微球购自长沙美牛生物技术有限公司；羊抗鼠单克隆抗体来自杭州伊佰新生物技术有限公司。
如图1，第三方面，本发明提供了一种检测结直肠癌的方法，通过采用第二方面所述的试纸实现，包括：
S1.用所述试纸对待测血清样品进行检测，得到所述待测血清样品中血清蛋白标志物的浓度；所述血清蛋白标志物包括癌胚抗原、甲胎蛋白和转铁蛋白；
S2.将所述血清蛋白标志物的浓度的数值代入结直肠癌综合指数公式中，得到结直肠癌综合指数；所述结直肠癌综合指数公式为：
CI=0.7016a+0.3152b-1.295c-2.3268；其中，a为待测血清样品中癌胚抗原的浓度的数值，b为待测血清样品中甲胎蛋白的浓度的数值，c为待测血清样品中转铁蛋白的浓度的数值，CI为结直肠癌综合指数，CI的正常参考区间为[-3，3]；需要说明的是，本发明血清蛋白标志物包括的癌胚抗原、甲胎蛋白的浓度的单位为ng/mL，转铁蛋白的浓度的单位为mg/mL；在本发明中，例如当测得待测血清样品中癌胚抗原的浓度为2ng/mL时，a作为待测血清样品中癌胚抗原的浓度的数值，a的取值为2；例如当测得待测血清样品中甲胎蛋白的浓度为10ng/mL时，b作为待测血清样品中甲胎蛋白的浓度的数值，b的取值为10；例如当测得待测血清样品中转铁蛋白的浓度为3mg/mL时，c作为待测血清样品中转铁蛋白的浓度的数值，c的取值为3；CI的正常参考区间为[-3，3]，即表示正常参考区间为-3≤CI≤3；
S3.判断所述待测血清样品的结直肠癌综合指数是否在CI的正常参考区间内，若是，则表明所述待测血清样品为阴性，否则为阳性。
本发明首先通过试纸对待测血清样本进行检测，通过荧光侧向免疫层析技术，快速定量待测血清样品中血清蛋白标志物（癌胚抗原、甲胎蛋白和转铁蛋白）的浓度，然后将血清蛋白标志物的浓度的数值代入本发明提供的结直肠癌综合指数公式CI=0.7016a+0.3152b-1.295c-2.3268中，得到待测血清样品的结直肠癌综合指数值，然后判断待测血清样品的结直肠癌综合指数值是否在结直肠癌综合指数的正常参考区间内，若是，则表明待测血清样品为阴性（结直肠癌阴性），否则为阳性（结直肠癌阳性）。本发明提供的检测结直肠癌的方法综合考虑了血清样本中癌胚抗原、甲胎蛋白和转铁蛋白浓度对于结直肠癌检测的影响，准确率高达95%以上，明显高于采用单一血清蛋白标志物的检测方法。
根据一些优选的实施方式，在步骤S1之前，还包括：用试纸对不同浓度下的各血清蛋白标志物进行检测，并通过荧光免疫分析得到不同浓度下各血清蛋白标志物的检测值；所述检测值为与所述血清蛋白标志物对应的检测线的荧光强度和质控线的荧光强度的比值；
根据不同浓度下各血清蛋白标志物的检测值，得到各血清蛋白标志物的检测值与对应血清蛋白标志物浓度的线性关系。
在本发明的一个实施例中，用试纸对不同浓度下的各血清蛋白标志物进行检测，然后通过荧光免疫分析得到不同浓度下各血清蛋白标志物对应检测线（T线）的荧光强度和质控线（C线）的荧光强度，并计算不同浓度下各血清蛋白标志物的检测值（与血清蛋白标志物对应的检测线的荧光强度和质控线的荧光强度的比值），同浓度下的每种血清蛋白标志物重复检测三次取平均值；根据不同浓度下各血清蛋白标志物的检测值，得到各血清蛋白标志物的检测值与对应血清蛋白标志物浓度的线性关系，需要说明的是选取的不同浓度的各血清蛋白标志物必须能够涵盖对应血清蛋白标志物的浓度线性范围区间，所述荧光免疫分析通过干式荧光免疫分析仪进行。在得到各血清蛋白标志物的检测值与对应血清蛋白标志物浓度的线性关系时，本发明不同浓度的各血清蛋白标志物为采用购买的癌胚抗原、甲胎蛋白抗原、转铁蛋白抗原经纯水稀释得到。
根据一些优选的实施方式，所述对待测血清样品进行检测，得到所述待测血清样品中血清蛋白标志物的浓度，包括：
用试纸对所述待测血清样品进行检测，通过荧光免疫分析得到所述待测血清样品中各血清蛋白标志物的检测值；
基于各血清蛋白标志物的检测值与对应血清蛋白标志物浓度的线性关系，得到所述待测血清样品中各血清蛋白标志物的浓度。
本发明待测血清样品从样品垫层析至结合垫，结合垫上的荧光微球标记的单克隆抗体（荧光微球标记的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、荧光微球标记的鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体、荧光微球标记的鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体）识别对应的血清蛋白标志物（癌胚抗原、甲胎蛋白、转铁蛋白），并与之结合，形成荧光微球标记的单克隆抗体-血清蛋白标志物结合物；该结合物继续往前层析，与检测线的单克隆抗体（鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体、鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体）接触，并被检测线的单克隆抗体拦截在检测线上，且随着样本中血清蛋白标志物浓度的升高，相对应的检测线会补获到更多的荧光微球标记的单克隆抗体-血清蛋白标志物结合物，从而使该检测线的荧光强度增强。根据这一特性，确定待测血清样品中各血清蛋白标志物浓度与对应血清蛋白标志物检测值（与血清蛋白标志物对应的检测线的荧光强度和质控线的荧光强度的比值）之间的线性关系，通过将待测血清样本中各血清蛋白标志物检测值代入该线性关系中，从而得到待测血清样本中的各血清蛋白标志物浓度。具体为：将待测血清样品加入到试纸的样品垫上，反应15分钟后，将试纸插入检测设备（干式荧光免疫分析仪）的插卡口，运行仪器，仪器通过相应的分析软件，分别自动计算出样本中的各血清蛋白标志物癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）和转铁蛋白（TRF）的检测值，再基于检测值与各血清蛋白标志物浓度的线性关系，得到待测血清样品中各血清蛋白标志物癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）和转铁蛋白（TRF）的浓度。
根据一些优选的实施方式，检测所述癌胚抗原的浓度线性范围为1.25~200ng/mL；检测所述甲胎蛋白的浓度线性范围为8~400ng/mL；检测所述转铁蛋白的浓度线性范围为0.8~200mg/mL。
为了确定结直肠癌综合指数公式CI=0.7016a+0.3152b-1.295c-2.3268的正常参考区间，本发明选择200名肝肾功能、心肌酶谱、心电图均正常，排除外伤、肌肉病变、心血管疾病、高血脂症、糖尿病和其他内分泌疾病和血肌酐浓度升高的正常健康人群作为入选对象，对其血清样本进行研究。
具体检测方法：取75μL血清样本，加入到试纸的样品垫上，反应15分钟后，将试纸插入检测设备（干式荧光免疫分析仪）的插卡口，运行仪器，仪器通过相应的分析软件，分别自动计算出样本中的癌胚抗原（CEA）的浓度、甲胎蛋白（AFP）的浓度和转铁蛋白（TRF）的浓度，然后将癌胚抗原（CEA）的浓度、甲胎蛋白（AFP）的浓度和转铁蛋白（TRF）的浓度代入直肠癌综合指数公式中，得到对应的结直肠癌综合指数（CI）。各血清样品中癌胚抗原（CEA）的浓度、甲胎蛋白（AFP）的浓度和转铁蛋白（TRF）的浓度和结直肠癌综合指数（CI）如表1所示。
表1.正常人群血清样本检测结果
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采用使用国际通用的SPSS软件（23.0版本）对表1中统计结果进行分析，分析结果如表2和图2所示，从分析结果可看出，P=0.000<0.05，拒绝原假设，入选数据为非正态分布。
表2. 正常人群血清样本检测结果的数据分布分析
偏态分布统计：将结直肠癌综合指数（CI）的检测结果按从小到大顺序排列，参考《WS/T 402-2012 临床实验室检验项目参考区间的制定》，使用国际通用的SPSS软件（23.0版本），通过百分位法确定结直肠癌综合指数CI的阳性参考区间，数据见表3和表4。
表3. 正常人群血清样本检测结果按结直肠癌综合指数（CI）增序排列
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表4 结直肠癌综合指数（CI）的百分位秩次
由表3-4可知，对200例正常人群血清样本进行检测，将综合指数CI的测定结果按从小到大顺序排列，通过百分位法确定第5百分位参考区间下限为-2.74；通过百分位法确定第95百分位参考上限为2.75，对参考上限和参考下限分别四舍五入取整数，从而可以确定本发明试纸的CI的正常参考区间为[-3，3]。在200例正常人群血清样本中，有6例样本的CI值在正常参考区间之外，其余194例样本的CI值均位于[-3，3]这一区间内，占总数的97%，表明正常参考区间范围涵盖了95%以上的样本。
实施例1
试纸的制备：
（1）样品垫的处理：样品垫是由玻璃纤维膜裁成的，将每条裁好的样品垫加入5mL样品垫处理液，40℃烘干16h；其中，样品垫处理液是含有0.3%BSA（牛血清白蛋白）、0.3%吐温和0.3% PEG 2000（聚乙二醇）的0.1M磷酸盐缓冲液（pH=7.4）；样品垫处理液中各物质的百分含量为质量百分数。
（2）结合垫处理：结合垫是由聚酯纤维膜裁成的，每条裁好的结合垫加入2mL结合垫处理液，40℃烘干16h；结合垫处理液是含有3%蔗糖、3%海藻糖和0.3% PEG2000（聚乙二醇）的水溶液；结合垫处理液中各物质的百分含量为质量百分数。
（3）荧光微球标记：（a）荧光微球清洗：取100μL荧光微球放入离心管中，加入900μL标记缓冲液（质量分数为0.3%的吐温-20水溶液），混匀，于4℃，12000rpm转速下离心10min；弃上清，加入1mL标记缓冲液，重悬，超声5min；（b）活化：依次向清洗后的荧光微球中加入浓度均为20 mg/mL的NHS（N-羟基琥珀酰亚胺）水溶液、EDC（碳二亚胺）水溶液，充分混匀，然后室温孵育25min；于4℃，12000rpm转速下离心10min，弃上清；然后加入1mL pH=8.0的标记缓冲液（0.02M的硼酸缓冲液或磷酸盐缓冲液），重悬，超声3min；（c）标记与封闭：在活化后的微球溶液里加入50μg的单克隆抗体，充分混匀，室温震荡孵育2h；然后加入100μL10%BSA溶液，封闭1h。需要说明的是，单克隆抗体包括鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体，且各单克隆抗体分别进行标记与封闭；（d）复溶:将封闭好的溶液于4℃，12000rpm转速下离心15min，弃上清；然后加入1mL复溶液（含有5%蔗糖、0.5%BSA、0.5%吐温-20和0.05%的叠氮化钠的0.01M 磷酸缓冲液（pH=7.4），重悬，超声1~5min，于4℃，12000rpm转速下离心15min，弃上清；加入1mL复溶液，重悬微球，超声5min，得到荧光微球标记的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、荧光微球标记的鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体；（e）喷微球：将荧光微球标记的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、荧光微球标记的鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体等比例混合，然后按照5μL/cm的量将微球混合物喷涂在处理后的结合垫上，40℃烘干1h。荧光标记过程中各物质的百分含量为质量百分数。
（4）层析垫：分别用纯水稀释得到抗体浓度为1mg/mL的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体溶液、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体溶液、鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体溶液和羊抗鼠单克隆抗体溶液；然后按2μL/cm划膜量分别包被到硝酸纤维素膜的三条检测线和质控线上，即得层析垫。
（5）试纸条的组装与切条：吸收垫上沿与PVC背板上边缘齐平，下沿搭接于层析垫上表面约2mm；结合垫上沿搭接于层析垫下表面约2mm，下沿衬于样品垫上沿下方约2mm；样品垫下沿与PVC背板下沿持平；层析垫的C线距试纸条上沿35.5mm，同时，从层析垫搭接吸收垫的一端至层析垫搭接结合垫的一端，C线、T1线、T2线和T3线依次设置，C线更靠近吸收垫，C线（包被羊抗鼠单克隆抗体）、T1线（包被鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体）、T2线（包被鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体）和T3线（包被鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体）之间的距离均为4mm，组装好后切成4mm±0.02mm宽度的试纸条。
待测血清样品的检测：
为了验证本发明结直肠癌检测方法的准确性，以结直肠镜作为金标准，筛选77例经临床验证确认的结直肠癌阳性血清样本（I期10例，II期12例，III期17例，IV期38例），作为入选对象，分别检测并记录癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）和转铁蛋白（TRF）和直肠癌综合指数（CI）的检测结果。
具体检测方法为：取75μL待测血清样本，加入到上述方法制得的试纸的样品垫上，反应15分钟后，将试纸插入检测设备（干式荧光免疫分析仪）的插卡口，运行仪器，仪器通过相应的分析软件，分别自动计算出样本中的癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）和转铁蛋白（TRF）的浓度，并将癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）和转铁蛋白（TRF）的浓度的数值代入直肠癌综合指数公式中，得到结直肠癌综合指数（CI）。各样品中癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）和转铁蛋白（TRF）具体检测结果和结直肠癌综合指数（CI）如表5所示，并统计了这77例阳性样本的CI值在各个范围的数量，结果见表6。
表5.结直肠癌患者阳性样本检测结果
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由表5可知，若只观察CEA（癌胚抗原）指标，按临床通用参考范围，正常参考值应＜5ng/mL，77例结直肠癌阳性样本中，有36例会存在漏检，漏检率46.8%。
若只观察AFP（甲胎蛋白）指标，按临床通用参考范围，正常参考值应＜25ng/mL，77例结直肠癌阳性样本中，有41例会存在漏检，漏检率53.2%。
若只观察TRF（转铁蛋白）指标，按临床通用参考范围，正常参考区间为2.2~4.0mg/mL，77例结直肠癌阳性样本中，有53例会存在漏检，漏检率68.8%。
表6. 结直肠癌患者阳性样本参考范围统计结果
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由表6可知，77例结直肠癌阳性样本中，有3例样本的CI值在正常参考区间内，其余74例样本的CI值均在正常参考范围之外，CI值这一参考范围涵盖了96.1%的样本，超过95%。
综上，本发明检测结直肠癌的方法通过试纸对待测血清样本进行检测，通过荧光侧向免疫层析技术，快速定量待测血清样品中血清蛋白标志物（癌胚抗原、甲胎蛋白和转铁蛋白）的浓度，然后将血清蛋白标志物的浓度的数值代入本发明提供的结直肠癌综合指数公式CI=0.7016a+0.3152b-1.295c-2.3268中，根据待测血清样品的结直肠癌综合指数值判断待测血清样品的CI值均在正常参考范围内，判断待测血清样品是否为结直肠癌阳性。该检测方法首次综合考虑了血清样本中癌胚抗原、甲胎蛋白和转铁蛋白浓度对于结直肠癌检测的影响，准确率高达95%以上，远高于采用单一血清蛋白标志物（癌胚抗原、甲胎蛋白或转铁蛋白）浓度进行诊断的方法，可有效降低漏检率。
最后应说明的是 以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解 其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (10)

1.一种检测结直肠癌的组合物，其特征在于，所述组合物包括分别用于检测血清样品中癌胚抗原浓度、甲胎蛋白浓度和转铁蛋白浓度的第一抗体对、第二抗体对和第三抗体对；
所述第一抗体对包括鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体；
所述第二抗体对包括鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体；
所述第三抗体对包括鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体。
2.一种检测结直肠癌的试纸，其特征在于，所述试纸包括权利要求1所述的组合物。
3.根据权利要求2所述的试纸，其特征在于，所述试纸的结合垫上包被有荧光微球标记的单克隆抗体混合物；所述荧光微球标记的单克隆抗体混合物包括荧光微球标记的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、荧光微球标记的鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体。
4.根据权利要求3所述的试纸，其特征在于，所述结合垫上包被的荧光微球标记的单克隆抗体混合物的划膜量为2.5~5 μL/cm；
所述荧光微球标记的单克隆抗体混合物中荧光微球标记的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、荧光微球标记的鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和荧光微球标记的鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体的质量比为1:1:1。
5.根据权利要求2所述的试纸，其特征在于，所述试纸的层析垫上设置有三条检测线和一条质控线；三条检测线上分别包被有鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体。
6.根据权利要求5所述的试纸，其特征在于，三条所述检测线上包被的鼠抗人癌胚抗原单克隆抗体、鼠抗人甲胎蛋白单克隆抗体和鼠抗人转铁蛋白单克隆抗体的浓度均为1mg/mL，划膜量均为0.5~2μL/cm；质控线上包被的羊抗鼠单克隆抗体的浓度为1mg/mL，划膜量为0.5~2μL/cm。
7.一种检测结直肠癌的方法，其特征在于，通过采用权利要求2-6任一项所述的试纸实现，所述方法包括如下步骤：
S1.用所述试纸对待测血清样品进行检测，得到所述待测血清样品中血清蛋白标志物的浓度；所述血清蛋白标志物包括癌胚抗原、甲胎蛋白和转铁蛋白；
S2.将所述血清蛋白标志物的浓度的数值代入结直肠癌综合指数公式中，得到结直肠癌综合指数；所述结直肠癌综合指数公式为：
CI=0.7016a+0.3152b-1.295c-2.3268；其中，a为待测血清样品中癌胚抗原的浓度的数值，b为待测血清样品中甲胎蛋白的浓度的数值，c为待测血清样品中转铁蛋白的浓度的数值，CI为结直肠癌综合指数，CI的正常参考区间为[-3，3]；
S3.判断所述待测血清样品的结直肠癌综合指数是否在CI的正常参考区间内，若是，则表明所述待测血清样品为阴性，否则为阳性。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，在步骤S1之前，还包括：
用试纸对不同浓度下的各血清蛋白标志物进行检测，并通过荧光免疫分析得到不同浓度下各血清蛋白标志物的检测值；所述检测值为与所述血清蛋白标志物对应的检测线的荧光强度和质控线的荧光强度的比值；
根据不同浓度下各血清蛋白标志物的检测值，得到各血清蛋白标志物的检测值与对应血清蛋白标志物浓度的线性关系。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述对待测血清样品进行检测，得到所述待测血清样品中血清蛋白标志物的浓度，包括：
用试纸对所述待测血清样品进行检测，通过荧光免疫分析得到所述待测血清样品中各血清蛋白标志物的检测值；
基于各血清蛋白标志物的检测值与对应血清蛋白标志物浓度的线性关系，得到所述待测血清样品中各血清蛋白标志物的浓度。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，检测所述癌胚抗原的浓度线性范围为1.25~200ng/mL；检测所述甲胎蛋白的浓度线性范围为8~400ng/mL；检测所述转铁蛋白的浓度线性范围为0.8~200mg/mL。
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Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN201196651Y (zh) * 2008-05-22 2009-02-18 北京德易和康技术有限公司 双肿瘤标志物金标检测试纸
CN102221612A (zh) * 2011-06-10 2011-10-19 正元盛邦(天津)生物科技有限公司 用双指示线免疫层析半定量诊断癌胚抗原的方法
KR20130005087A (ko) * 2011-07-05 2013-01-15 한국과학기술연구원 대장암 진단용 단백질 마커 멜라노트랜스페린 및 이에 대한 항체를 포함하는 대장암 진단 키트
CN103969453A (zh) * 2014-05-30 2014-08-06 上海度微医学技术有限公司 甲胎蛋白自身抗体单独或与甲胎蛋白联合作为肿瘤诊断、疗效评估和复发监控标志物的应用
CN104034892A (zh) * 2014-06-23 2014-09-10 广西博士海意信息科技有限公司 一种肿瘤标志物afp磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法
WO2016192168A1 (zh) * 2015-05-30 2016-12-08 深圳市共创百业科技开发有限公司 基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒及其制备方法
CN106546744A (zh) * 2015-09-17 2017-03-29 上海透景生命科技股份有限公司 通过粪便血红蛋白、转铁蛋白和pkm2联合检测评定结肠直肠癌的方法及相应试剂盒
US20200182875A1 (en) * 2016-07-25 2020-06-11 Belgian Volition Sprl Combination test for colorectal cancer
CN111505300A (zh) * 2020-04-30 2020-08-07 郑州大学第一附属医院 一种早期食管癌联合筛查试纸条
CN112816693A (zh) * 2021-01-26 2021-05-18 河南省人民医院 一种用于结直肠癌早期筛查的试纸条
CN114720699A (zh) * 2022-04-22 2022-07-08 浙江大学 一种结直肠癌早期预警血清指标及其检测方法和应用
WO2023050642A1 (zh) * 2021-09-29 2023-04-06 南京凡亦达生物科技有限公司 甲胎蛋白或癌胚抗原联合基因标志物在肿瘤诊断中的应用
CN115963256A (zh) * 2023-02-23 2023-04-14 中山生物工程有限公司 一种癌胚抗原荧光免疫层析检测试剂盒及其制备方法

Patent Citations (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN201196651Y (zh) * 2008-05-22 2009-02-18 北京德易和康技术有限公司 双肿瘤标志物金标检测试纸
CN102221612A (zh) * 2011-06-10 2011-10-19 正元盛邦(天津)生物科技有限公司 用双指示线免疫层析半定量诊断癌胚抗原的方法
KR20130005087A (ko) * 2011-07-05 2013-01-15 한국과학기술연구원 대장암 진단용 단백질 마커 멜라노트랜스페린 및 이에 대한 항체를 포함하는 대장암 진단 키트
CN103969453A (zh) * 2014-05-30 2014-08-06 上海度微医学技术有限公司 甲胎蛋白自身抗体单独或与甲胎蛋白联合作为肿瘤诊断、疗效评估和复发监控标志物的应用
CN104034892A (zh) * 2014-06-23 2014-09-10 广西博士海意信息科技有限公司 一种肿瘤标志物afp磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其检测方法
WO2016192168A1 (zh) * 2015-05-30 2016-12-08 深圳市共创百业科技开发有限公司 基于生物标志物的肿瘤早期检测试剂盒及其制备方法
CN106546744A (zh) * 2015-09-17 2017-03-29 上海透景生命科技股份有限公司 通过粪便血红蛋白、转铁蛋白和pkm2联合检测评定结肠直肠癌的方法及相应试剂盒
US20200182875A1 (en) * 2016-07-25 2020-06-11 Belgian Volition Sprl Combination test for colorectal cancer
CN111505300A (zh) * 2020-04-30 2020-08-07 郑州大学第一附属医院 一种早期食管癌联合筛查试纸条
CN112816693A (zh) * 2021-01-26 2021-05-18 河南省人民医院 一种用于结直肠癌早期筛查的试纸条
WO2023050642A1 (zh) * 2021-09-29 2023-04-06 南京凡亦达生物科技有限公司 甲胎蛋白或癌胚抗原联合基因标志物在肿瘤诊断中的应用
CN114720699A (zh) * 2022-04-22 2022-07-08 浙江大学 一种结直肠癌早期预警血清指标及其检测方法和应用
CN115963256A (zh) * 2023-02-23 2023-04-14 中山生物工程有限公司 一种癌胚抗原荧光免疫层析检测试剂盒及其制备方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
吴彩兰, 赵延勋, 李彩霞: "5种肿瘤标志物检测的诊断意义", 现代医学, no. 01 *
巫协宁: "胃肠道恶性肿瘤的醣抗原决定簇(CA19-9)和其他肿瘤标志", 国外医学.消化系疾病分册, no. 02 *
张琨琨;: "肿瘤标志物在胃癌诊断中的应用", 检验医学与临床, no. 08 *
敬秀平 等: "结直肠癌患者的血清癌胚抗原、甲胎蛋白和糖类抗原 19-9 水平及临床意义", 《癌症进展》, vol. 18, no. 12, pages 1244 - 1247 *
朱利国;刘云;范俊;潘凌峰;陈永伟;: "CA242荧光免疫层析定量检测试剂的建立", 标记免疫分析与临床, no. 01 *
谢荣兵;唐桂艳;王欢;: "血清AFP、CEA、CA199在结直肠癌患者中的表达及意义", 中国卫生工程学, no. 04 *

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