CN103947746A

CN103947746A - 一种葡萄保鲜的方法

Info

Publication number: CN103947746A
Application number: CN201410176186.6A
Authority: CN
Inventors: 田世平; 张占全; 秦国政; 李博强; 徐勇
Original assignee: Institute of Botany of CAS
Current assignee: Institute of Botany of CAS
Priority date: 2014-04-29
Filing date: 2014-04-29
Publication date: 2014-07-30
Anticipated expiration: 2034-04-29
Also published as: CN103947746B

Abstract

本发明公开了一种葡萄保鲜的方法。本发明提供了一种葡萄保鲜或使葡萄抗灰霉病的方法，包括如下步骤：将采后的葡萄果实浸泡在肉桂酸溶液中，以实现葡萄保鲜或抗灰霉病。所述肉桂酸溶液包括肉桂酸和水，所述肉桂酸在所述肉桂酸溶液中的终浓度为1-10mM。本发明的实验证明，本发明利用肉桂酸溶液可以实现采后葡萄果实的保鲜，并达到抗灰霉病的效果。

Description

一种葡萄保鲜的方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种葡萄保鲜的方法。

背景技术

葡萄是一种古老的水果品种，原产于欧洲、西亚，我国已经有一千多年的葡萄种植历史。葡萄是一种不仅味道鲜美，而且营养价值很高的水果，其葡萄糖含量高达10-30％。葡萄中还含有多种有助于消化的果酸，具有健脾胃的功效。葡萄中矿物质及维生素含量也非常丰富，例如钙、钾、磷、铁、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素C、维生素P等。我国的中医认为葡萄味甘、性平，具有补肝肾、益气血、开胃力、生津液和利小便的功效。常食葡萄可以缓解疲劳，减轻神经衰弱等症状。把葡萄制成葡萄干后，是孕妇、儿童和体弱贫血者的滋补佳品。但是，葡萄果实皮薄、果肉含糖酸量高，采后易破碎而遭受病菌感染，造成果实腐烂。因此，如何防治采后病害和维持果实品质是葡萄贮藏保鲜的关键环节。

肉桂酸，又名β-苯丙烯酸、3-苯基-2-丙烯酸，是从肉桂皮或安息香分离出的有机酸。主要用于香精香料、食品添加剂、医药、美容等方面。肉桂酸本身就是一种香料，具有很好的保香作用，通常作为配香原料，可使主香料的香气更加清香挥发。可作为芳香混合物，用于香皂、香波、洗衣粉和日用化妆品中。肉桂酸还具有抑制形成黑色素过程中酪氨酸酶的作用，对紫外线有一定的隔绝作用，能使褐斑变浅、甚至消失，是高级防晒霜中必不可少的成分之一。在葡萄酒中加入肉桂酸，可以使其色泽光鲜。肉桂酸可以广泛添加于所有的食品中，已经是我国食品标准GB2760允许添加的成分。但是，到目前为止尚没有把肉桂酸作为保鲜剂用于葡萄果实采后贮藏保鲜的报道和专利申请。

发明内容

本发明的目的是提供一种葡萄保鲜或使葡萄抗灰霉病的方法。

本发明提供的方法，包括如下步骤：将采后的葡萄果实浸泡在肉桂酸溶液中，以实现葡萄保鲜或抗灰霉病。

上述方法中，所述肉桂酸溶液包括肉桂酸和水，所述肉桂酸在所述肉桂酸溶液中的终浓度为1-10mM。

上述肉桂酸溶液按照如下方法制备：先用无水乙醇将肉桂酸配置成浓度为500mM的母液，再用水将母液分别稀释成终浓度为1-10mM的肉桂酸溶液。

上述方法中，所述肉桂酸在所述肉桂酸溶液中的终浓度为1mM或5mM或10mM。

上述方法中，所述肉桂酸在所述肉桂酸溶液中的终浓度为10mM。

上述方法中，所述浸泡时间为30秒钟。

上述方法中，在所述浸泡步骤后，还包括如下步骤：将浸泡后的葡萄晾干。

上述方法中，所述灰霉病的病原真菌为灰葡萄孢(Botrytis cinerea)。

肉桂酸溶液在葡萄保鲜或使葡萄抗灰霉病中的应用，所述肉桂酸溶液中的肉桂酸终浓度为1-10mM。

上述应用中，所述肉桂酸溶液包括肉桂酸和水，所述肉桂酸在所述肉桂酸溶液中的终浓度为10mM；

所述灰霉病的病原真菌为灰葡萄孢(Botrytis cinerea)。

本发明的另一个目的是提供一种葡萄保鲜剂或抗灰霉病制剂。

本发明提供的制剂，包括上述方法或应用中的所述肉桂酸溶液。

上述水为蒸馏水。

本发明的实验证明，本发明采后当天葡萄果实浸泡在不同浓度的肉桂酸溶液中，可以实现采后葡萄果实抗灰霉病、并诱导提高抗氧化酶POD和PPO活性，从而达到采后果实保鲜，并达到抗灰霉病的效果。

附图说明

图1为肉桂酸对发病率的影响

图2为肉桂酸对严重度的影响

图3为肉桂酸对灰霉菌生长速率的影响

图4为肉桂酸对葡萄抗氧化酶活性的影响

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、葡萄保鲜的方法

一、葡萄保鲜

1、肉桂酸溶液的配置

配置浓度为1mM、5mM、10mM肉桂酸(购自阿法埃莎(天津)化学有限公司)溶液：先用无水乙醇将肉桂酸配置成浓度为500mM的母液，之后用蒸馏水将母液稀释成终浓度分别为1mM、5mM、10mM的肉桂酸溶液作为工作液。

注意：配置5mM和10mM的肉桂酸溶液时需要同时进行搅拌和加热以促进肉桂酸的溶解。

2、葡萄保鲜处理

供试葡萄品种为马奶葡萄，采摘新鲜的葡萄果实后，去除有病害的果粒。

肉桂酸保鲜处理：将葡萄果实(采后当天)分别在浓度为1mM、5mM、10mM肉桂酸溶液中浸泡30秒钟，之后取出，在干净的塑料筐中自然晾干(约3小时)，得到1mM肉桂酸溶液处理后葡萄、5mM肉桂酸溶液处理后葡萄、10mM肉桂酸溶液处理后葡萄。

以蒸馏水浸泡作为CK对照葡萄。

二、检测保鲜效果

1、接种病原菌

所用病原菌为葡萄生产上的主要病害灰霉病的病原真菌灰葡萄孢(Botrytis cinerea)(Williamson,B.,Tudzynski,B.,Tudzynski,P.,and van Kan,J.A.L.2007.Botrytis cinerea:the cause of grey mould disease.Molecular Plant Pathology8(5):561-580.公众可从中国科学院植物研究所获得)。收集灰葡萄孢的分生孢子，用灭菌蒸馏水配置成浓度为10⁵/ml的孢悬液。用喷雾器将孢悬液均匀的分别喷施在1mM肉桂酸溶液处理后葡萄、5mM肉桂酸溶液处理后葡萄、10mM肉桂酸溶液处理后葡萄、CK对照葡萄果实上。

2、病害统计

从接种后48小时开始统计各组病害的发病率和严重度，之后每隔24小时统计一次。发病率(％)＝发病果粒/总果粒数。

严重度分级：0，健康果粒；1，有一个小的病斑(侵染初期)；3，数个小的病斑或侵染面积达到果粒表面积的25％；4，侵染面积达到果粒表面积的26％-50％；5，侵染面积大于果粒表面积的50％。

发病率结果如表1和图1所示，不同浓度的肉桂酸溶液处理都可以显著降低葡萄灰霉病的发病率，其中以10mM的效果最为显著，在处理后的第3天和第4天对病害的抑制率最高。

表1为发病率统计

CK	1mM	5mM	10mM
				21.5	8.5	7.4	3.1
47.4	34.5	26.1	9.1
				60.3	45.0	31.1	28.3
63.4	48.1	39.6	36.6

严重度分级结果如表2和图2所示，在病害严重度方面，随着处理浓度的升高病害严重度降低，10mM处理果实的严重度降低到对照的50％以下。

表2为严重度分级统计

CK	1mM	5mM	10mM
				0.32	0.12	0.12	0.04
1.00	0.84	0.51	0.19
				1.59	1.30	0.63	0.51
2.04	1.83	1.12	0.90

3、葡萄抗氧化酶活性检测

抗氧化酶活性是植物衰老和抗病性的重要指标，可作为葡萄保鲜衡量标准。

用肉桂酸处理葡萄果实后，每隔24小时测定一次抗氧化酶POD和PPO的活性，具体如下：

取5g果肉，加入10ml提取缓冲液(0.1M PBS，1mM的EDTA，2％PVPP)，在打浆机上匀浆(100转×2min，冰浴)。匀浆液用17000g在4℃离心60min，上清液为酶提取液，在4℃存放备用。

POD的反应体系含0.2ml酶提取液、1ml的0.2％愈伤木酚(溶于0.1M PBS,pH7.0)和0.8ml的0.3％H₂O₂(溶于0.1M PBS，pH7.0)。先将酶提取液和愈伤木酚混合并在30℃预热，然后加入H₂O₂启动反应，并迅速扫描反应液在1min(10s×6)内460nm处吸光值的变化。POD酶活性单位为U mg^-1protein，1个单位(U)表示在30℃下每毫克蛋白在1min内催化反应导致的吸光值变化(1U＝1OD₄₆₀min^-1)。

PPO的反应体系含0.2ml酶提取液和2.8ml的0.5M邻苯二酚(溶于0.1M PBS，pH6.4)。先将邻苯二酚在30℃预热，然后加入酶提取液启动反应，并扫描10s(2s×5)内398nm处吸光值变化。PPO酶活性以U mg^-1protein表示，1U表示在30℃下每毫克蛋白在1min内催化反应导致的吸光值变化(1U＝1OD_398Dmin^-1)。

抗氧化酶活性检测结果如图4和表3、表4所示，肉桂酸处理可以显著诱导葡萄果实的抗氧化酶的活性。10mM肉桂酸处理后葡萄果实在24h的时候POD的活性有一个明显的峰值，在48h的时候也明显高于对照处理。10mM的肉桂酸对PPO的活性有明显的诱导作用，在24h的时候有一个明显的活性峰值，之后活性会迅速下降，表明10mM肉桂酸处理后可以增强果实的抗氧化性，延缓果实衰老。

表3为PPO活性统计

	0h	24h	48h	72h	96h
						CK	1.4	0.6	0.7	0.7	0.6
1mM	1.4	0.8	0.6	1.2	1.0
						5mM	1.4	1.7	0.9	1.0	1.4
10mM	1.4	5.0	1.2	1.7	1.1

表4为POD活性统计

	0h	24h	48h	72h	96h
						CK	6.81	10.21	1.05	0.81	0.60
1mM	6.81	2.38	2.19	0.62	0.56
						5mM	6.81	6.24	13.42	0.39	0.14
10mM	6.81	21.64	10.45	0.17	0.47

三、肉桂酸对灰葡萄孢菌生长抑制效果检测

制备含有终浓度分别为0mM、0.5mM、1mM、2.5mM、5mM、10mM肉桂酸的PDA平板。之后在平板中央接入直径为5mm的灰霉菌菌饼。之后每天统计菌落直径。

结果如图3和表5所示，肉桂酸可以显著降低灰霉菌的生长速率，随着浓度的升高对生长的抑制率越高。当浓度达到10mM时可以完全抑制灰霉菌的生长。

表5为菌落直径统计

0mM	0.5mM	1mM	2.5mM	5mM	10mM
						8.4	8.0	7.6	7.4	6.0	0.0
18.7	14.8	12.6	11.2	9.4	0.0
						40.3	25.4	19.7	19.7	15.2	0.0
50.3	30.9	25.0	22.0	17.1	0.0
						64.4	43.2	30.0	26.0	18.6	0.0
77.9	55.1	44.8	29.7	19.8	0.0

Claims

1.一种葡萄保鲜或使葡萄抗灰霉病的方法，包括如下步骤：将采后的葡萄果实浸泡在肉桂酸溶液中，以实现葡萄保鲜或抗灰霉病。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述肉桂酸溶液包括肉桂酸和水，所述肉桂酸在所述肉桂酸溶液中的终浓度为1-10mM。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述肉桂酸在所述肉桂酸溶液中的终浓度为1mM或5mM或10mM。

4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于：所述肉桂酸在所述肉桂酸溶液中的终浓度为10mM。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：所述浸泡时间为30秒钟。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：在所述浸泡步骤后，还包括如下步骤：将浸泡后的葡萄晾干。

7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：所述灰霉病的病原真菌为灰葡萄孢(Botrytis cinerea)。

8.肉桂酸溶液在葡萄保鲜或使葡萄抗灰霉病中的应用，所述肉桂酸溶液中的肉桂酸终浓度为1-10mM。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述肉桂酸溶液包括肉桂酸和水，所述肉桂酸在所述肉桂酸溶液中的终浓度为10mM；

所述灰霉病的病原真菌为灰葡萄孢(Botrytis cinerea)。

10.一种葡萄保鲜剂或抗灰霉病制剂，包括权利要求1-9所述方法或应用中的所述肉桂酸溶液。