CN103940656B - 一种松萝凤梨细胞核悬液制备方法 - Google Patents
一种松萝凤梨细胞核悬液制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103940656B CN103940656B CN201410115860.XA CN201410115860A CN103940656B CN 103940656 B CN103940656 B CN 103940656B CN 201410115860 A CN201410115860 A CN 201410115860A CN 103940656 B CN103940656 B CN 103940656B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- usnea
- extracting solution
- fructus ananadis
- ananadis comosi
- nucleus suspension
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种松萝凤梨细胞核悬液制备方法。步骤如下:1)取松萝凤梨嫩叶50 mg,置于塑料培养皿中加入1 ml提取液,所述提取液主要由终浓度如下的组分组成:21g/L一水柠檬酸,10g/L聚乙烯吡咯烷酮K‑30,以及体积浓度0.5%吐温20)使用刀片在提取液中切碎松萝凤梨嫩叶,然后收集提取液经350目尼龙网过滤,获得松萝凤梨细胞核悬液。本发明的有益效果:1)最大限度地减少了有害试剂的使用,如巯基乙醇,减轻了提取液对人体的危害;2)提取液成分简单,只有三种,均为常规实验室试剂,成本低廉,配置容易,可大大降低成本;3)步骤简单,无需离心,节省了时间提高了效率,可以在短时间内获得高质量的细胞核悬液用于流式细胞仪检测。
Description
技术领域
本发明涉及一种适用于流式细胞仪分析的松萝凤梨细胞核悬液制备方法。
背景技术
松萝凤梨(Tillandsia usuneoides L.),是一种生长在空气中、不需要土壤、生长所需的水分和营养可以全部来自空气的特殊植物。松萝凤梨抗逆性强又可吸收有毒有害物质,已应用于环境指示、室内观赏、装饰,市场前景广阔,发展潜力巨大。但由于松萝凤梨特殊的生长方式,相关分子生物学、细胞学及遗传育种研究极少,新品种培育也因此受到限制。随着研究深入,使用流式细胞仪进行植株倍性鉴定、基因组大小测定以及细胞周期等应用和基础研究对拓宽松萝凤梨育种基础具有重要意义。而其中获得适用于流式细胞仪分析的松萝凤梨细胞核悬液成为其中关键技术。
松萝凤梨叶片含有较多次生代谢物质,采用已报道的方法难以获得适用于流式细胞仪分析的松萝凤梨细胞核悬液,或相关方法繁琐、含有对人体有害的试剂,这些都阻碍了相关研究的进行。为了对松萝凤梨更深入的研究,必须找到一种高效、快捷而又经济的松萝凤梨细胞核悬液制备方法,这样才能更有利于松萝凤梨相关研究的开展。
发明内容
本发明目的是提供一种适用于流式细胞仪分析的松萝凤梨细胞核悬液,该方法高效、快捷、经济。
本发明采用的技术方案是:
一种松萝凤梨细胞核悬液制备方法,步骤如下:
1)取松萝凤梨嫩叶50 mg,置于塑料培养皿中加入1 ml提取液,所述提取液主要由终浓度如下的组分组成:21g/L一水柠檬酸,10g/L聚乙烯吡咯烷酮K-30,以及体积浓度0.5%吐温20;
2)使用刀片在提取液中切碎松萝凤梨嫩叶,然后收集提取液经350 目尼龙网过滤,获得松萝凤梨细胞核悬液。
在步骤2)所述的松萝凤梨细胞核悬液中加入DNA荧光染料碘化丙锭( propidiumiodide , 终浓度为50μg/ ml),及Rnase (终浓度为50μg/ ml),染色后的提取液用于流式细胞仪的检测。
与现有技术相比,本发明的有益效果主要体现在于:
1)最大限度地减少了有害试剂的使用,如巯基乙醇,减轻了提取液对人体的危害;
2)提取液成分简单,只有三种,均为常规实验室试剂,成本低廉,配置容易,可大大降低成本;
3)步骤简单,无需离心,节省了时间提高了效率,可以在短时间内获得细胞核悬液用于流式细胞仪检测;
4)可获得较高质量细胞核悬液用于流式细胞仪检测。
附图说明
图1采用本发明制备的松萝凤梨细胞核悬液流式细胞仪分析直方图;
图2采用LB01法制备的松萝凤梨细胞核悬液流式细胞仪分析直方图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进一步描述,但本发明的保护范围不仅限于此:
实施例1
一、试剂的配置
1)细胞核提取液配置:称取2.1g一水柠檬酸、1g聚乙烯吡咯烷酮K-30于一干净的250ml烧杯中,加入体积0.5 ml吐温20;加超纯水定容到100ml。用0.22微米滤膜过滤后4度保存备用。
2)荧光染料配置:称取25mg碘化丙锭、25mg核糖核酸酶于一干净的250ml烧杯中加超纯水定容到50ml。用0.22微米滤膜过滤后4度保存备用。
二、松萝凤梨细胞核悬液提取方法
(1)取松萝凤梨嫩叶(约50 mg),置于塑料培养皿中加入1 ml提取液。(2)使用锋利剃须刀片在提取液中切碎叶片;(3)收集提取液经350 目尼龙网过滤,获得松萝凤梨细胞核悬液;(4)过滤后的提取液中加入DNA荧光染料碘化丙锭(终浓度为50μg/ ml)及Rnase (终浓度为50μg/ ml)。染色后的提取液上流式细胞仪检测。
松萝凤梨细胞核悬液的流式细胞仪检测
采用Quanta SC流式细胞仪(美国贝克曼库尔特公司),在488 nm 激光的激发下发出桔红色荧光,由FL2 通道检测出荧光强度。从随机软件CellLab Quanta SC 获取数据,并通过ModFit LT软件显示直方图(横坐标以DNA相对含量反映荧光曲线的面积纵坐标为细胞核次数),结果见图1。本发明制备的松萝凤梨细胞核悬液不仅适用Quanta SC流式细胞仪,也适用于FACSCalibur(美国Becton-Dickinson 公司) 等目前市场是所有具有488nm激光器的流式细胞仪。
对比例1:采用已报道的LB01法(Dolezel J, Binarova P, Lucretti S.Analysis of nuclear DNA content in plant cells by flow cytometry. BiologiaPlantarum 1989, 31: 113 - 120)提取松萝凤梨细胞核悬液经流式细胞仪检测的直方图,结果见图2。无明显荧光峰,碎片较多,无法用于相关研究。
Claims (1)
1.一种松萝凤梨细胞核悬液制备方法,其特征在于,步骤如下:
1)取松萝凤梨嫩叶50 mg,置于塑料培养皿中加入1 ml提取液,所述提取液主要由终浓度如下的组分组成:21g/L一水柠檬酸,10g/L聚乙烯吡咯烷酮K-30,以及体积浓度0.5%吐温20;
2)使用刀片在提取液中切碎松萝凤梨嫩叶,然后收集提取液经350 目尼龙网过滤,获得松萝凤梨细胞核悬液;
在步骤2)所述的松萝凤梨细胞核悬液中加入DNA荧光染料碘化丙锭 propidiumiodide , 终浓度为50μg/ ml,及Rnase ,终浓度为50μg/ ml,染色后的提取液用于流式细胞仪的检测。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410115860.XA CN103940656B (zh) | 2014-03-26 | 2014-03-26 | 一种松萝凤梨细胞核悬液制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410115860.XA CN103940656B (zh) | 2014-03-26 | 2014-03-26 | 一种松萝凤梨细胞核悬液制备方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103940656A CN103940656A (zh) | 2014-07-23 |
CN103940656B true CN103940656B (zh) | 2016-08-24 |
Family
ID=51188419
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410115860.XA Active CN103940656B (zh) | 2014-03-26 | 2014-03-26 | 一种松萝凤梨细胞核悬液制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN103940656B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105259097B (zh) * | 2015-10-28 | 2018-03-06 | 中国科学院植物研究所 | 一种用流式细胞术鉴定蓝莓倍性的方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102243150A (zh) * | 2010-05-14 | 2011-11-16 | 河北省农林科学院昌黎果树研究所 | 一种适于流式细胞分析的果树成熟叶片细胞核提取方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2263067A1 (en) * | 1999-02-26 | 2000-08-26 | The Australian National University | Method of modifying plant morphology, biochemistry and physiology |
-
2014
- 2014-03-26 CN CN201410115860.XA patent/CN103940656B/zh active Active
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102243150A (zh) * | 2010-05-14 | 2011-11-16 | 河北省农林科学院昌黎果树研究所 | 一种适于流式细胞分析的果树成熟叶片细胞核提取方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
RESEARCH ON IDENTIFICATION OF POLYPLOIDS BY FLOW CYTOMETRY IN LAGERSTROEMIA INDICA AND LAGERSTROEMIA SUBCOSTATA;Song Ping 等;《Acta Hortic》;20121231;207-212 * |
不同倍性水稻植株茎解剖结构比较研究;金亮等;《浙江大学学报(农业与生命科学版)》;20091231;第35卷(第5期);第490页左栏最后一段,右栏第1-2段 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN103940656A (zh) | 2014-07-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN102517384A (zh) | 一种用流式细胞术快速鉴定非洲菊倍性的方法 | |
CN104316373A (zh) | 一种适于流式细胞分析的茄子叶片细胞核提取方法 | |
CN105420226A (zh) | 一种基于磁珠法的动物组织dna提取试剂盒及其应用 | |
CN103789301B (zh) | 三疣梭子蟹微卫星标记的特异性引物及筛选方法 | |
CN102605102A (zh) | 用于荧光定量检测的一管式磁珠法病毒核酸的提取方法 | |
CN102703597B (zh) | 血液白细胞分离液及其制作方法、真空采血管 | |
CN109628608A (zh) | 一种放流中国对虾资源的调查方法 | |
CN103940656B (zh) | 一种松萝凤梨细胞核悬液制备方法 | |
Dozier et al. | An improved membrane filter method for the enumeration of phytoplankton: With 3 tables in the text | |
CN106834460A (zh) | 一种鸡胚蛋性别快速鉴定方法 | |
CN104152439B (zh) | 一种适用于烟草种子的rna提取方法 | |
CN109937876A (zh) | 一种提高不结球白菜小孢子胚胎诱导率的方法 | |
CN105624307A (zh) | 鉴定香港巨牡蛎、有明牡蛎、太平洋牡蛎及其杂交种的微卫星引物和鉴定方法 | |
CN103776678B (zh) | 一种草莓细胞核悬液制备方法 | |
CN103940646B (zh) | 一种红掌细胞核悬液制备方法 | |
CN101162224A (zh) | 一种以褶皱臂尾轮虫纯系进行环境监测的方法 | |
CN207488048U (zh) | 流式细胞仪样本制备用细胞过滤器 | |
CN203467461U (zh) | 一种淡水浮游动物采集装置 | |
CN104359738A (zh) | 一种适用于流式细胞分析植物干燥组织的处理方法 | |
CN105784573A (zh) | 一种适用流式细胞术进行小麦根尖细胞周期分析的方法 | |
CN204422311U (zh) | 一种海洋浮游细菌和病毒样品快速分离装置 | |
CN103421765A (zh) | 用于叶籽银杏msap分析的dna提取方法 | |
CN102899318A (zh) | 提取楠木rna的方法 | |
CN102620974A (zh) | 一种从天然水体悬浮物中富集纯化藻类细胞的方法 | |
CN102424825A (zh) | 榛子叶片和花芽总rna提取方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant |