CN103893195A - 一种用于改善糖耐量、降低血糖的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于改善糖耐量、降低血糖的组合物，该组合物的活性成分为玉米须中的黄酮苷成分。本发明公开的组合物用于糖尿病的治疗，可以显著改善糖耐量和降低血糖。进一步的，本发明还公开了所述组合物的制备方法。

Description

一种用于改善糖耐量、降低血糖的组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明公开了一种可用于糖尿病治疗的组合物，属于医药领域。 

背景技术

糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)是一种多病因的代谢疾病，对糖尿病患者能够造成严重的身体损伤，甚至早死。随着人们生活水平的提高，人口老龄化以及肥胖发生率的增加，糖尿病的发病率呈逐年上升趋势。据世界卫生组织的数据统计，全球糖尿病患者有2.46亿，预计到2030年患病人数将比2000年翻一番，已成为威胁人类生命的第三大杀手，成为继心脑血管疾病和恶性肿瘤之后，危害人类身体健康的第三大疾病。 

目前在医学领域针对糖尿病的治疗，除注射胰岛素外，大部分为口服合成药物，这种治疗方式不能停药，长期服用此类药物会对肝脏产生损害。为了克服上述问题，近年来本领域普遍尝试从中药特别是植物资源中寻找治疗糖尿病的药物，多年来已发现许多植物、动物及微生物资源中具有显著疗效的降糖活性成分。 

总体而言，此部分研究目前依旧处于起步阶段和理论研究阶段，真正投放市场的药物并未出现，究其原因是在于尽管许多植物都对抑制和治疗糖尿病具有一定的效果，但是已有的研究只能得到总黄酮、总皂苷、总糖等粗提物进行降血糖，这样的粗提物用于实验室理论研究是可行的，但是无法用于药品成品的生产。作为药品，需要有稳定明确的化合物组成才可以进行生产的质量控制和杂质分析，已有的各种粗提物均无法满足用途需求。 

发明内容

针对现有技术的缺陷，本发明公开了一种用于糖尿病的治疗可有效改善糖耐量、降低血糖的组合物，该组合物具有明确的化合物分类和组成，可用于制备治疗糖尿病的药物并具有治疗效果。 

为实现上述目的，本发明是通过下述技术方案实现的： 

一种用于改善糖耐量、降低血糖的组合物，活性成分为玉米须中的黄酮苷成分。 

相对于传统的总黄酮、总皂苷等粗提物，本发明的组合物活性成分明确为黄 酮苷，具有统一稳定的质量检测方法和杂质检测方法，可用于药品的生产；申请人进行的实验显示，本发明的组合物通过采用玉米须中的黄酮苷成分有效改善糖尿病患者的糖耐量并降低其血糖。 

申请人对玉米须中的黄酮苷成分进行了化合物结构鉴定，确认所述黄酮苷成分为2″-0-α-L-鼠李糖基-6-C-3″-脱氧葡萄糖基-3′-甲氧基木犀草素、2″-0-α-L-鼠李糖基6-C-(6-脱氧-ax-甲基-木-己-4-羰基)-3′-甲氧基木犀草素、2″-0-α-L-鼠李糖基-6-C-岩藻糖基-3′-甲氧基木犀草素、6，4′-二羟基-3′-甲氧基黄酮-7-0-葡萄糖苷、7，4′-二羟基-3′-甲氧基黄酮-2″-0-α-L-鼠李糖基-6-C-岩藻糖苷中的一种或多种的混合物。 

上述五种黄酮苷成分具有类似的结构和相近的药理活性，单独一种或多种的混合物作为活性成分均可用于糖尿病的治疗并产生良好的治疗效果。 

上述五种成分，可以采用有机合成工艺分别合成每种具体的化合物结构，但此种方法合成成本较高，生产工艺复杂。为了降低生产成本，优选的是通过提取法从玉米须中提取分离获得黄酮苷成分，这种方式所得黄酮苷成分是2″-0-α-L-鼠李糖基-6-C-3″-脱氧葡萄糖基-3′-甲氧基木犀草素、2″-0-α-L-鼠李糖基6-C-(6-脱氧-ax-甲基-木-己-4-羰基)-3′-甲氧基木犀草素、2″-0-α-L-鼠李糖基-6-C-岩藻糖基-3′-甲氧基木犀草素、6，4′-二羟基-3′-甲氧基黄酮-7-0-葡萄糖苷、7，4′-二羟基-3′-甲氧基黄酮-2″-0-α-L-鼠李糖基-6-C-岩藻糖苷五种成分组成的混合物，各成分质量份数分别为15-20、15-20、10-15、10-15和5-10。 

在上述基础上，由于提取分离工艺不可能实现活性成分的完全分离，因此该组合物中还含有玉米须黄酮、皂苷、多糖中的一种或多种的混合物，三者在组合物中的质量含量和不高于30％。 

相应的，本发明还公开了所述组合物的制备方法，包括下述步骤： 

1)将玉米须采用有机溶剂进行提取，滤出浸提液并浓缩； 

2)将步骤1)的提取物采用有机溶剂进行萃取并浓缩成浸膏用水分散，然后采用色谱柱洗脱后收集洗脱液浓缩；纯化浓缩液即得所述组合物。 

在上述工艺中，步骤1)、2)所用的有机溶剂均为植物化学和有机化学领域常用的有机提取溶剂，最常见的是乙醇、乙酸乙酯、氯仿、丙酮等，优选的，步 骤1)所用有机溶剂为乙醇，步骤2)所用有机溶剂为正己烷和/或乙酸乙酯。 

为了保证提取分离效果，步骤1)优选进行多次提取合并浸提液；步骤2)优选进行多次萃取合并萃取液。 

在上述工艺中，为了保证黄酮苷成分的分离，步骤2)所用色谱柱为聚酰胺与硅胶的混合填充柱，聚酰胺与硅胶的质量用量比为1∶2～2∶1。 

在上述工艺中，浓缩液的纯化可采用多种方法，优选的是通过凝胶树脂柱进行纯化。 

由于本发明的组合物具有改善糖耐量、降低血糖的效果，因此本发明还公开了所述组合物在制备治疗糖尿病药物中的应用。 

附图说明

图1为本发明组合物的HPLC图谱。 

具体实施方式

实施例1：组合物的制备 

第一步，提取：选取玉米须洗净、晾干后粉碎，将其放入密闭容器中，按照料液比1∶15～1∶20的比例加入浓度60％-80％的乙醇，室温浸提48-72小时，滤出浸提液，重复提取三次后合并浸提液，50℃以下真空浓缩； 

第二步，分离：将第一步所得乙醇浸提物依次用正己烷、乙酸乙酯萃取2-3次，合并乙酸乙酯相，50℃以下真空浓缩成浸膏；将上述浸膏用去离子水分散，上聚酰胺与硅胶的混合填充柱(1∶2～2∶1，充分混匀)，用乙酸乙酯洗脱，然后用含5％丙酮的乙酸乙酯洗脱，最后再用浓度20％-70％的乙醇梯度洗脱，分步收集，薄板检测，收集40％-50％乙醇洗脱液，50℃以下真空浓缩；将浓缩液上ToyopearlHW-40柱进行纯化，即可得到5个黄酮苷成品{(A)2″-0-α-L-鼠李糖基-6-C-3″-脱氧葡萄糖基-3′-甲氧基木犀草素；(B)2″-0-α-L-鼠李糖基6-C-(6-脱氧-ax-甲基-木-己-4-羰基)-3′-甲氧基木犀草素；(C)2″-0-α-L-鼠李糖基-6-C-岩藻糖基-3′-甲氧基木犀草素；(D)6，4′-二羟基-3′-甲氧基黄酮-7-0-葡萄糖苷；(E)7，4′-二羟基-3′-甲氧基黄酮-2″-0-α-L-鼠李糖基-6-C-岩藻糖苷}。实施例2：组合物的鉴定 

将实施例1所得组合物过HPLC，可以看到具有五个主波峰(图1)，分别对应于上述五种成分。 

在附图1中，保留时间19.61分钟，(D)6，4′-二羟基-3′-甲氧基黄酮-7-0-葡萄糖苷；保留时间22.19分钟，(A)2″-0-α-L-鼠李糖基-6-C-3″-脱氧葡萄糖基-3′-甲氧基木犀草素；保留时间22.76分钟，(B)2″-0-α-L-鼠李糖基6-C-(6-脱氧-ax-甲基-木-己-4-羰基)-3′-甲氧基木犀草素；保留时间28.91分钟，(C)2″-0-α-L-鼠李糖基-6-C-岩藻糖基-3′-甲氧基木犀草素；保留时间33.94分钟，(E)7，4′-二羟基-3′-甲氧基黄酮-2″-0-α-L-鼠李糖基-6-C-岩藻糖苷。 

进一步的，申请人研究了核磁共振图谱的数据(表1)，对五种化合物进行了结构确认。 

表1化合物的¹³C NMR化学位移及归属 

实施例3：组合物的药学应用 

一、试验方法 

1)糖尿病小鼠模型的建立：随机取10只实验小鼠为正常对照组(Normal control group，NC)，随机取30只实验小鼠腹腔注射200mg/kg.bw四氧嘧啶，注射量为0.1ml/10g(体重)，注射前禁食12h但不禁水，72h后，禁食12h但不禁水，尾部取血测定空腹血糖，血糖值大于11.1mmol/L者为实验性糖尿病动物模型。 

2)实验小鼠的分组与饲养：将造模成功的30只糖尿病小鼠随机分成3组，糖尿病模型组(每天灌胃0.9％生理盐水)、组合物组(每天灌胃l00mg/kg.bw的组合物)、正常对照组(每天灌胃等量的生理盐水)；每天早上8：00开始灌胃，连续灌胃14天。饲养室温18～25℃，相对湿度50％～60％，饲喂普通饲料且自由饮水。 

3)对小鼠一股生活指标及体重的影响：各组小鼠每天灌胃前称体重，灌胃后观察记录小鼠精神活动、毛色变化、进食量、饮水量、排泄物等生活状况，连续灌胃7d、14d后称体重，比较给药前和给药后7d、14d小鼠体重的变化情况，分析研究药物对各组小鼠生长状况的影响。 

4)小鼠空腹血糖的测定：小鼠连续灌胃14天，于第7、14天按1)的方法测定小鼠空腹血糖 

5)小鼠耐糖量的测定：于第14天测定小鼠空腹血糖(作为0h血糖值)后，经口给予葡萄糖2.0g/kg.bw，测定给葡萄糖0.5h、1h、2h的血糖值，测定方法同空腹血糖。 

二、试验结果(请客户补充实验结果) 

1组合物对小鼠一股生活指标及体重的影响 

造模前小鼠精神状态良好，活动自如，毛色洁白有光泽，每日进食饮水量及排泄物量正常，注射四氧嘧啶约48h后小鼠表现出精神萎靡，活动量少，毛色无光泽且杂乱，体型消瘦，多饮多食多尿等症状。给药后，组合物小鼠精神状态较模型对照组有较明显改善、三多症状有所减轻，而模型对照组小鼠精神日渐萎靡，病症日渐明显。 

表2组合物对小鼠体重的影响(x±s，n＝8) 

给药7d、14d后各组小鼠体重的变化见表2，从结果中可见：各组小鼠体重都有所增加，但增长幅度不同，模型对照组小鼠体重增长最为缓慢。7天后，模型对照组、组合物组小鼠体重均显著低于正常组小鼠(p＜0.05)，表明小鼠患病后体重增长缓慢，而组合物组小鼠体重与正常组比较不存在显著性差异(p＞0.05)，改善症状明显；14天后，模型对照组小鼠与正常组小鼠体重存在极显著性差异(p＜0.01)，而组合物组小鼠体重与正常组比较不存在显著性差异(p＞0.05)，与模型对照组存在显著性差异(p＜0.05)，这表明组合物不但能改善小鼠的糖尿病症状，而且也能控制症状。 

2组合物物对小鼠空腹血糖的影响 

表3组合物对小鼠空腹血糖的影响(x±s，n＝8) 

检验结果见表3，实验开始时，正常对照组小鼠的血糖与模型组比较存在极显著性差异(p＜0.01)，模型组和组合物组小鼠血糖明显升高，表明糖尿病模型建立成功。第7天后，组合物组小鼠的血糖与模型组相比存在极显著性差异(p＜0.01)，表明7天后组合物组小鼠血糖明显下降。14天后，组合物组小鼠的血糖与模型组相比均存在极显著性差异(p＜0.01)，但血糖值较七天后的虽有上升，但不明显。因此该组合物能起到较好的辅助降糖作用。 

3组合物对小鼠耐糖量的影响 

表4组合物对小鼠耐糖量的影响(x±s，n＝8) 

从表4可以看出，给予2.0g/kg.bw葡萄糖0.5h后，各组小鼠血糖值迅速升高，但正常组、组合组小鼠血糖值均极显著低于模型对照组(p＜0.01)。给予葡萄糖2h后，正常组小鼠血糖下降至接近空腹血糖水平，组合物组小鼠血糖值也表现出明显的下降趋势，而模型对照组小鼠血糖几乎没有下降，说明组合物有助于糖尿病小鼠提高对葡萄糖的耐受能力。 

Claims (8)

1.-种用于改善糖耐量、降低血糖的组合物，其特征在于活性成分为玉米须中的黄酮苷成分。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述黄酮苷成分选自2″-0-α-L-鼠李糖基-6-C-3″-脱氧葡萄糖基-3′-甲氧基木犀草素、2″-0-α-L-鼠李糖基6-C-(6-脱氧-ax-甲基-木-己-4-羰基)-3′-甲氧基木犀草素、2″-0-α-L-鼠李糖基-6-C-岩藻糖基-3′-甲氧基木犀草素、6，4′-二羟基-3′-甲氧基黄酮-7-0-葡萄糖苷、7，4′-二羟基-3′-甲氧基黄酮-2″-0-α-L-鼠李糖基-6-C-岩藻糖苷中的一种或多种的混合物。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述黄酮苷成分为2″-0-α-L-鼠李糖基-6-C-3″-脱氧葡萄糖基-3′-甲氧基木犀草素、2″-0-α-L-鼠李糖基6-C-(6-脱氧-ax-甲基-木-己-4-羰基)-3′-甲氧基木犀草素、2″-0-α-L-鼠李糖基-6-C-岩藻糖基-3′-甲氧基木犀草素、6，4′-二羟基-3′-甲氧基黄酮-7-0-葡萄糖苷、7，4′-二羟基-3′-甲氧基黄酮-2″-0-α-L-鼠李糖基-6-C-岩藻糖苷五种成分组成的混合物，各成分质量份数分别为15-20、15-20、10-15、10-15和5-10。

4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于组合物中还含有其它玉米须黄酮、皂苷、多糖中的一种或多种的混合物，三者质量含量和在组合物中不高于30％。

5.权利要求1所述组合物的制备方法，其特征在于包括下述步骤：1)将玉米须采用有机溶剂进行提取，滤出浸提液并浓缩；2)将步骤1)的提取物采用有机溶剂进行萃取并浓缩成浸膏用水分散，然后采用色谱柱洗脱后收集洗脱液浓缩；纯化浓缩液即得所述组合物。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤1)所用有机溶剂为乙醇，步骤2)所用有机溶剂为正己烷和/或乙酸乙酯。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于步骤2)所用色谱柱为聚酰胺与硅胶的混合填充柱，聚酰胺与硅胶的质量用量比为1∶2～2∶1。

8.权利要求1所述组合物在制备治疗糖尿病药物中的应用。

Images