CN103893188A - 冬青素a在制备抗肿瘤药物中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了从植物海南冬青中获得的单体成分冬青素A(IlexgeninA)在制备抗肿瘤药物方面的医药新用途。同时，公开了以IlexgeninA为原料制备成片剂、胶囊剂、滴丸剂、注射剂等药物剂型。体外实验表明，在一定浓度范围内，多种肿瘤细胞株具有很强的抑制作用。整体荷瘤实验表明，冬青素A30mg/kg剂量下抑瘤率达到51.13%。因此，可以用于制备成抗肿瘤药物以及防治肿瘤的药物。

Description

冬青素A在制备抗肿瘤药物中的用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及冬青素A（IlexgeninA）的抗肿瘤活性以及IlexgeninA在制备抗肿瘤药物中的新用途。

背景技术

IlexgeninA为乌苏烷型三萜衍生物，最早在毛冬青（Ilexpubescens Hook.et.Arn）中发现，在冬青属植物中含量较高，是山绿茶的主要特征成分（Johji Yamahara等.Photochemistry,1987,26(7):2023-2027）。我们前期报道其对大鼠非酒精性脂肪肝具有较好的改善作用（Wei-xi Cui,Jing-Jing Li等.Drug Development Research,2013,74(4):227–236）；另外我们研究发现IlexgeninA具有一定的抑菌作用（Xiao-Qing Chen等.Food Chemistry,2011,126(3):1454–1459）。另有报道称IlexgeninA具有抑制较好的心血管活性，其可抑制血栓形成（Li-Ping Lin等.Chinese Chemical Letters,2013,24(8):723–726）。

我们的研究发现IlexgeninA具有良好的抗肿瘤作用，特别是对人皮肤癌、肺癌及胃癌等，在一定浓度范围内，对肿瘤细胞具有杀伤作用，且整体荷瘤动物实验，对皮肤癌呈现较强的抑制作用。此外，尚未见文献报道将IlexgeninA制备成抗肿瘤药物。

发明内容

本发明目的之一提供了IlexgeninA在制备抗肿瘤药物中的用途；本发明目的之二提供了IlexgeninA的药物剂型。

本发明所指的抗肿瘤药物为抗皮肤癌、肺癌、胃癌等多种肿瘤的药物。IlexgeninA可剂量依赖性地抑制皮肤癌、肺癌、胃癌细胞活,因此IlexgeninA具有高效抗肿瘤作用。

本发明的药物制剂含有1%～99%的IlexgeninA和99%～1%的药用赋形剂（包括其他可组方的药物），优选含30%～80%的IlexgeninA和70%～20%的药用赋形剂（包括其他可组方的药物），最好含有60%～70%的IlexgeninA和40%～30%的药用赋形剂（包括其他可组方的药物）。

依照药剂学方法，拟将本发明的IlexgeninA制备成多个临床药物剂型用于抗肿瘤，包括口服制剂和非肠道给药的剂型。所指的口服制剂选自于片剂、胶囊剂、滴丸剂、口服液体制剂中的任意一种，所指的非肠道给药剂型为注射剂。

本发明的抗肿瘤药物中的辅料是指常规的赋形剂，如溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂等。本发明抗肿瘤药物中的其他配伍用的药物，指的是有效剂量的IlexgeninA为一定的药物原料，再配伍其他已允许合用的中药或化学药品。

附图说明

图1是冬青素A(IlexgeninA)的化学结构式

图2是IlexgeninA对人肺癌A549、胃癌细胞株SGC7901、黑色素瘤B16细胞株细胞株0～72h的抑制率图。A.IlexgeninA对:人肺癌细胞株A549、B:胃癌细胞株SGC7901、C:黑色素癌B16活力的影响。

图3是IlexgeninA对荷瘤小鼠的抑瘤率。

具体实施方式

下面通过具体实施例来对本发明作进一步的说明，但这些实施例只是为了说明，而不是对本发明的限制。

冬青素A(IlexgeninA)的分子式C₃₀H₄₆O₆，化学结构如图1。

冬青素A购自四川标准物质中心，含量≥98%。

本试验所用的细胞株为国际公用的肿瘤细胞株-肺癌细胞A549、胃癌细胞

SGC7901、黑色素皮肤癌细胞B16，购买自中国科学院上海细胞所。

实施例一：采用MTT比色法检测IlexgeninA对人肺癌细胞株A549活力的影响：取对数生长期的肺癌细胞株A549，0.25%胰蛋白酶消化，收集消化后的细胞计数，用DMEM培养基稀释成10³-10⁴个/100μl浓度的单细胞悬液，每孔100μl，接种到96孔板上，置37℃、5%CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中,培养12h后。空白对照组加入缓冲液PBS，阴性对照组用等体积DMEM培养液，阳性对照组加入不同浓度的顺铂溶液，实验组加入不同浓度的IlexgeninA（0、5、10、20、40μg/ml），每个浓度设6个复孔，每孔20μl。96孔板置37℃、5%CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中,培养4h后，加入5mg/ml MTT，每孔10μl，培养4h，每孔加入150μl DMSO，摇床振荡10min,酶标仪570nm吸收波长测定吸光度(A值)，分别测出24、48、72h的OD值。按下列公式计算相对抑制率，抑制率(%)=(1-A实验组/A对照组)×100%。结果见图2A。

结论：如图2A所示，IlexgeninA与A549细胞作用后,随IlexgeninA浓度增加抑制率增高，在20μg/ml浓度下即对A549细胞增殖有明显的抑制作用，与阴性对照组比较差异有显著性(P<0.05)，并呈剂量依赖关系；同时，随着时间推移，IlexgeninA对A549细胞抑制率逐步升高，呈时间依赖关系。

实施例二，采用MTT比色法检测IlexgeninA对人胃癌细胞株SGC7901活力的影响：方法学部分参照实施例一，结果见图2B。

结论：如图2A所示，IlexgeninA与SGC7901细胞作用后,随着IlexgeninA的增加抑制率上升，在10.0μg/ml、20.0μg/ml、40.0μg/ml浓度时对SGC7901细胞增殖抑制作用增强，与阴性对照组比较差异有显著性(P<0.01，P<0.001)，且呈剂量依赖性；同时，随时间推移，IlexgeninA对SGC7901细胞抑制率亦逐步增加，呈时间依赖关系。

实施例三，采用MTT比色法检测IlexgeninA对黑色素癌细胞株B16的活力影响：方法学部分参照实施例一，结果见图2C。

结论：如图2C所示，IlexgeninA与黑色素癌B16细胞作用后,随着IlexgeninA的增加，抑制率上升，在5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml和40μg/ml浓度时对B16细胞增殖有明显的抑制作用，与阴性对照组比较有显著性差异(P<0.05)，呈剂量依赖关系；同时，随着时间推移，IlexgeninA对黑色素癌B16细胞抑制率逐步增加，呈时间依赖关系。

实施例四，IlexgeninA对黑色素瘤小鼠瘤重的影响

将BALB/c nu/nu裸鼠随机分为模型组、IlexgeninA15mg/kg、30mg/kg剂量组。将小鼠B16恶性黑色素瘤细胞于背部皮下接种，细胞密度为1×10⁶，每只0.2mL。待成瘤后（2周）连续给药17天进行干预。第18天处死小鼠并剥离肿瘤称重，计算抑瘤率。

结论：冬青素A15mg/kg、30mg/kg剂量组的抑瘤率分别达到36.45%和51.13%实施例五.胶囊的制备IlexgeninA250g，淀粉2500g，将干燥好的淀粉与IlexgeninA充分混合，过120目筛，充分混匀后制备胶囊1000粒，每粒含IlexgeninA250mg。

实施例六.滴丸的制备600g聚乙二醇水浴溶化，加入IlexgeninA1200g，充分搅拌后置于保温管中，后采用液体石蜡包裹，吸干石蜡油后加入少量滑石粉混匀，制备滴丸1000丸

实施例七.片剂的制备IlexgeninA100g，淀粉1000g，糖粉200g，适量乙醇制粒后，经整粒机处理后，压片分装。

实施例八.注射剂的制备IlexgeninA10g，丙二醇20ml，聚乙二醇40ml，注射用水200ml，混合后水浴加热0.5h，注射用水加至500ml，超声处理10min，水浴加热0.5h，调节pH5.5～6.5，过滤，灌封灭菌即得。

Claims (7)

1.冬青素A在制备抗肿瘤药物中的用途。

2.根据权利要求1所述用途，其特征在于所述抗肿瘤药物为抗皮肤癌、肺癌及胃癌的药物。

3.一种药物制剂，其特征在于含有有效治疗剂量的冬青素A和一种或多种药学上可接受的药用赋形剂，或可与冬青素A组方的其他药物。

4.根据权利要求3所述的药物制剂，其特征在于含有1%～99%的冬青素A和99%～1%的药用赋形剂或其他可组方的药物。

5.根据权利要求4所述的药物制剂，其特征在于含有30%～80%的冬青素A和70%～20%的药用赋形剂或其他可组方的药物。

6.根据权利要求4所述的药物制剂，其特征在于含有60%～70%的冬青素A和40%～30%的药用赋形剂或其他可组方的药物。

7.根据权利3所述的药物制剂，其特征在于该药物剂型选自于胶囊剂、片剂、滴丸剂、口服液体制剂、注射剂当中的任何一种。

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