CN103830204B - 一种含水飞蓟提取物的软胶囊及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含水飞蓟提取物的软胶囊及其制备方法，该软胶囊的内容物含有水飞蓟提取物、中链甘油三酸酯、食用油和磷脂，其中，相对于1重量份的水飞蓟提取物，中链甘油三酸酯的含量为45-115重量份，食用油的含量为40-120重量份，磷脂的含量为140-300重量份，所述食用油中的不饱和脂肪酸含量不低于70重量%，所述磷脂中的磷脂酰胆碱的含量为20-80重量%且二亚油酰磷脂酰胆碱的含量为20-80重量%。本发明的软胶囊的制备方法包括将上述各成分混合获得软胶囊的内容物，并将该内容物包封于软胶囊囊壳中。本发明的软胶囊能够有效改善肝损伤和降血脂。且本发明软胶囊中水飞蓟提取物、磷脂等活性成分能长期稳定存在。

Description

一种含水飞蓟提取物的软胶囊及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种含水飞蓟提取物的软胶囊及其制备方法。

背景技术

水飞蓟属于菊科草本植物，是欧洲民间的一种草药，用于治疗肝胆疾病。20世纪60年代末，德国药学家由其种子提取了水飞蓟素黄酮类化合物，认为主要活性成分是水飞蓟宾。近年药理研究表明水飞蓟素具有抗自由基活性、抗脂质过氧化、抗脂氧酶、抗肿瘤和降血脂等作用。是世界公认疗效确切的肝损伤修复药物。水飞蓟宾难溶于水、口服吸收差、生物利用度低。为此，国内外积极开发研制了新剂型，以增加其溶解速度或改变其溶出和吸收特性，从而提高水飞蓟宾的生物利用度。已公开的技术方案是采用聚乙二醇（PEG）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）有机化合物做助剂，或者采用环糊精包裹技术。广为公认的是采用丙酮或乙醇助溶剂与磷脂复合，制成水飞蓟素磷脂复合体。

不同的国家对聚乙二醇的平均每人摄入量有着不同要求，对丙酮、乙醇残留也严格限制。现在上市的水飞蓟素类药物和制品，存在着高分子化合物和有机溶液残留溶剂在体内积存的风险。

大豆磷脂是磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇和磷脂酰丝氨酸等混合物。不同分子构型磷脂具有不同的生物学功能。研究证明：二亚油酰磷脂酰胆碱也称“多烯磷脂酰胆碱”具有改善神经功能，减少损伤，促进了神经细胞对于外源性的β-淀粉样蛋白的吞噬和代谢降解（张晓辉等，多烯磷脂酰胆碱对β-淀粉样蛋白（Aβ1-40）致阿尔茨海默病模型大鼠的治疗作用[J]，现代生物医学进展，2011，11（13）：2438-2442）。二亚油酰磷脂酰胆碱含有丰富油酸成分也是脂溶性化合物非常好的乳化剂和表面活性剂。磷脂酸胆碱是最具生物学活性的磷脂。磷脂酰胆碱由于甘油基1位和2位结合脂肪酸的链的长短和饱和度不同，因而各种磷脂酰胆碱生物学功能也不同。德国科学家对大豆磷脂进一步纯化，获得了两个烃基侧链上都含不饱和双健亚油酸的磷脂酰胆碱（二亚油酰磷脂酰胆碱），也有称“多烯磷脂酰胆碱（PPC）”。多烯磷脂能够替代内源性饱和磷脂，使膜流动性与跨膜转运系统活性增强，易使受损的肝细胞膜得以恢复。多烯磷脂酰胆碱含有丰富油酸成分也是脂溶性药物非常好的乳化剂和表面活性剂。

中链甘油三酸酯（也称中链油）主要成分是辛酸和癸酸的甘油三酯。中链甘油三酸酯具有很好的脂溶性，是长链脂肪酸的100倍，常作为多种临床肠外营养使用并不产生脂肪蓄积。

从植物里提取具有药用和保健作用的可食用油含有丰富的不饱和脂肪酸，例如罂粟籽油，紫苏籽油、月见草籽油、葵花籽油、玉米油等。研究证明罂粟籽油不饱和脂肪酸占88%以上，罂粟籽油已鉴定出的成分还含有烃类、醛类、酮类、芳香族化合物的含氧衍生物和呋喃化合物的含氧衍生物，还有部分有机酸及其酯类化合物（祖新，罂粟籽油脂肪酸组成分析[J]，粮油食品科技，2010，18(6)：20-21）。罂粟籽油具有软化血管防止血脂在血管壁上沉积、抑制肝脏低密度脂蛋白的合成改善睡眠质量。罂粟籽油还具有极好的脂溶性作用和特殊的清香味。鱼油富含ω-3系列多不饱和脂肪酸二十碳五烯酸（EPA）和二十二碳六烯酸（DHA）。EPA、DHA为人体所必需的脂肪酸。

肝脏是人体进行新陈代谢的大型器官。事实上，所有的化学物质是通过损害肝细胞膜的方式来损害肝脏。据统计，我国大、中城市脂肪肝的平均发病率已达人口总数的8-10%，60-90%的肥胖者都患有脂肪肝。30岁左右的男性中约有20%的人患有不同程度的脂肪肝，45岁以下男性脂肪肝明显多于女性。75-90%慢性嗜酒者有脂肪肝，酒精性脂肪肝发病也趋年轻化，我国已经成为肝病大国，各种类型肝病已越来越成为主要疾病之一。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种保健效果较佳且避免使用常规的表面活性剂的用于改善肝损伤和降血脂的软胶囊及其制备方法。

为了实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种软胶囊，该软胶囊的内容物含有水飞蓟提取物、中链甘油三酸酯、食用油和磷脂，其中，相对于1重量份的水飞蓟提取物，中链甘油三酸酯的含量为45-115重量份，食用油的含量为40-120重量份，磷脂的含量为140-300重量份，所述食用油中的不饱和脂肪酸含量不低于70重量%，所述磷脂中的磷脂酰胆碱的含量为20-80重量%且二亚油酰磷脂酰胆碱的含量为20-80重量%。

第二方面，本发明提供了第一方面所述的软胶囊的制备方法，该方法包括将水飞蓟提取物、中链甘油三酸酯、食用油和磷脂混合获得软胶囊的内容物，并将该内容物包封于软胶囊囊壳中。

经过动物功效实验证明，本发明的软胶囊能够有效地改善化学性肝损伤、酒精性肝损伤和降低血脂。

而且，参照有关药品稳定性考察规定验证，本发明的软胶囊未使用聚乙二醇等表面活性剂，但是水飞蓟提取物、磷脂等活性成分能够长期稳定存在。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

附图说明

附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1显示的是测试例1中ICR雄性小鼠肝脏组织切片形态学观察（400×）的显微镜照片；

图2显示的是测试例2中ICR雄性小鼠肝脏组织切片形态学观察（400×）的显微镜照片。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

本发明提供的软胶囊的内容物含有水飞蓟提取物、中链甘油三酸酯、食用油和磷脂，其中，相对于100重量份的水飞蓟提取物，中链甘油三酸酯的含量为45-115重量份（优选为70-90重量份），食用油的含量为40-120重量份（优选为65-115重量份），磷脂的含量为140-300重量份（优选为145-260重量份），所述食用油中的不饱和脂肪酸含量不低于70重量%（如70-95重量%），所述磷脂中的磷脂酰胆碱的含量为20-80重量%且二亚油酰磷脂酰胆碱的含量为20-80重量%。

根据本发明，对所述水飞蓟提取物没有特别的限制，可以为常规方法获得的水飞蓟提取物，如，水飞蓟的乙醇提取物。优选情况下，采用的水飞蓟提取物中的水飞蓟宾的含量在20重量%以上（如20-99.9重量%，更优选30-60重量%）。获得水飞蓟宾含量在上述范围内的水飞蓟提取物的方法为本领域技术人员所熟知（亦可以通过商购获得），在此不再赘述。

根据本发明，所述中链甘油三酸酯为本领域常见饱和甘油三酸酯的混合物，优选地，所述中链甘油三酸酯为含有辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯的混合物，辛酸甘油三酯的含量为50-80重量%，癸酸甘油三酯的含量为20-50重量%且辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯总量不低于95重量%。

根据本发明，不饱和脂肪酸含量不低于70重量%的食用油均可以用于本发明，但优选情况下，所述食用油为罂粟籽油、葡萄籽油、月见草油、黑加仑籽油、紫苏籽油、亚麻油籽油、橄榄油、鱼油、大豆油、玉米油和葵花籽油中的至少一种，更优选为罂粟籽油。可以通过常规的压榨法、浸出法、超临界萃取法或水代法从植物中获取上述食用油，且这些方法均为本领域技术人员所熟知，在此不再赘述。

本发明中，“磷脂”是指分子中含有一个或多个磷酸基的，并且有极性的复合脂质之一，其分子由甘油、脂肪酸和带羟化合物（具有极性）三部分构成，其代表物有磷脂酸、磷脂酰甘油、心磷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇，以及通过酯键与脂肪酸结合的缩醛磷脂类、醚脂质类等，本发明中使用的磷脂是指磷脂酰胆碱的含量为20-80重量%且二亚油酰磷脂酰胆碱的含量为20-80重量%的磷脂，可以从动物脑和/或大豆等中提取获得。优选地，所述磷脂为大豆磷脂。需要说明的是，市售的大豆磷脂还含有磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酸、磷脂酰甘油等成分。但是这些成分并不会对本发明软胶囊的改善肝损伤和降血脂效果产生影响，因此，可以直接用于制备本发明可作为保健品或药品的软胶囊。

根据本发明，为了增强软胶囊的抗氧化性能，从而延长保质期，所述软胶囊的内容物还含有抗氧化剂。所述抗氧化剂可以为本领域常用的各种能够抗氧化的物质，更优选地，所述抗氧化剂为维生素E。

根据本发明，所述软胶囊的囊壳可以为各种常规的软胶囊囊壳，例如，可以通过将明胶、纯净水、甘油、山梨醇、甘氨酸和二氧化钛加入适量色素（柠檬黄或亮蓝）进行化胶获得。

本发明提供的制备上述软胶囊的方法包括将水飞蓟提取物、中链甘油三酸酯、食用油和磷脂混合获得软胶囊的内容物，并将该内容物包封于软胶囊囊壳中。

其中，软胶囊囊壳可以采用常规的方式制备，例如，将明胶、纯净水、甘油、山梨醇、甘氨酸和二氧化钛加入适量色素（柠檬黄或亮蓝）进行化胶获得。继而可以采用常规模制方法制丸、定型干燥、洗丸、晾丸、捡丸、制成半成品，包装。

根据本发明，对所述混合的具体方式没有特别的限定，例如，混合的方式可以为：在55-60℃下，将水飞蓟提取物、食用油和磷脂溶于中链甘油三酸酯中，然后降温至35-40℃备用。其中，对水飞蓟提取物、食用油和磷脂的溶解顺序没有特别的要求，可以按一定顺序溶解，也可以同时溶解。更优选地，可以先将中链甘油三酸酯和食用油混合，再依次加入磷脂和水飞蓟提取物。

本发明的软胶囊能够用于改善肝损伤和/或降血脂。其中，软胶囊的服用量可以根据服用者的具体身体状况而定，例如，所述软胶囊的服用量可以为0.1-5g/kg/天，优选为0.5-3.5g/kg/天。

以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，中链甘油三酸酯购自铁岭北亚药用油有限公司，辛酸甘油三酯的含量为70重量%，癸酸甘油三酯的含量为30重量%且辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯总量为95重量%；罂粟籽油购自上海万代制药有限公司，葡萄籽油、月见草油、黑加仑籽油、紫苏籽油、亚麻油籽油购自长春市现代应用生物医学有限公司，橄榄油、大豆油、玉米油、葵花籽油购自长春市恒客隆超市，鱼油购自上海东尚实业有限公司；水飞蓟提取物购自辽宁森荣制药有限公司（批号：130303），水飞蓟宾的含量为32重量%；大豆磷脂购自德国Lipoid公司，批号：576500：磷脂酰胆碱的含量45重量%且二亚油酰磷脂酰胆碱的含量为49重量%，批号1032675：磷脂酰胆碱的含量30重量%且二亚油酰磷脂酰胆碱的含量为65重量%。

实施例1

按1000粒计，在氮气保护下，将80g中链甘油三酸酯和60g罂粟籽油（不饱和脂肪酸含量为90重量%）混合，水浴加热至55℃，并在该温度下，加入170g大豆磷脂（批号：576500）和0.06g维生素E，搅拌至溶解，再加入90g水飞蓟提取物，搅拌至溶解，降温至35℃作为软胶囊的内容物待用；

按照如下重量比配制软胶囊囊壳：明胶:纯净水:甘油:山梨醇:甘氨酸:二氧化钛=1:1:0.47:0.02:0.08:0.005进行化胶，常规模制方法制丸、定型干燥、洗丸、晾丸、捡丸，得到软胶囊S-1。

对比例1

按照实施例1的方法制备软胶囊S-D1，不同的是，中链甘油三酸酯的用量为30g，罂粟籽油的用量为110g。

对比例2

按照实施例1的方法制备软胶囊S-D2，不同的是，将中链甘油三酸酯替换为油酸乙酯。

对比例3

按照实施例1的方法制备软胶囊S-D3，不同的是，将中链甘油三酸酯替换为肉豆蔻酸异丙酯。

实施例2

按1000粒计，在氮气保护下，将50g中链甘油三酸酯和80g罂粟籽油（不饱和脂肪酸含量为90重量%）混合，水浴加热至55℃，并在该温度下，加入180g大豆磷脂（批号：576500）和0.06g维生素E，搅拌至溶解，再加入70g水飞蓟提取物，搅拌至溶解，降温至35℃作为软胶囊的内容物待用；

按照如下重量比配制软胶囊囊壳：明胶:纯净水:甘油:山梨醇:甘氨酸:二氧化钛=1:1:0.47:0.02:0.08:0.005进行化胶，常规模制方法制丸、定型干燥、洗丸、晾丸、捡丸，得到软胶囊S-2。

实施例3

按1000粒计，在氮气保护下，将80g中链甘油三酸酯和50g罂粟籽油（不饱和脂肪酸含量为90重量%）混合，水浴加热至55℃，并在该温度下，加入160g大豆磷脂（批号：576500）和0.06g维生素E，搅拌至溶解，再加入110g水飞蓟提取物，搅拌至溶解，降温至35℃作为软胶囊的内容物待用；

按照如下重量比配制软胶囊囊壳：明胶:纯净水:甘油:山梨醇:甘氨酸:二氧化钛=1:1:0.47:0.02:0.08:0.005进行化胶，常规模制方法制丸、定型干燥、洗丸、晾丸、捡丸，得到软胶囊S-3。

实施例4-11

按照实施例1的方法制备软胶囊S-4至S-11，不同的是，将罂粟籽油分别替换为月见草油、黑加仑籽油、紫苏籽油、亚麻油籽油、橄榄油、鱼油、玉米油和葵花籽油。

测试例1

本测试例用来说明本发明的软胶囊对化学性肝脏损伤的保护功能。

将ICR雄性小鼠（18-22g，购自吉林大学动物中心，清洁级，动物许可证编号SYXK（吉）2007-0011）分成模型给药组、模型对照组、空白对照组和阳性给药组（n=8）。以灌胃方式向模型给药组小鼠给予实施例1-11和对比例1-3制得的软胶囊（即S-1至S-11和S-D1至S-D3）；向阳性给药组小鼠给予联苯双酯片（批号为A02121005，浙江万邦药业股份有限公司）；向空白对照组和模型对照组小鼠给予蒸馏水，一天一次给药，每周称重两次，以调整给药量。给药30天后，各组小鼠隔夜禁食16小时，然后将模型给药组、模型对照组和阳性给药组的小鼠一次灌胃给予的1重量%的CCl4（0.1mL/10g，采用花生油稀释），空白对照组给予的花生油（0.1mL/10g），模型给药组与阳性给药组继续给药至实验结束（与CCl₄灌胃间隔4小时）。给予CCl₄的20小时后处死小鼠，取血分离血清，使用试剂盒测定谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）水平（x±s，具体方法参见试剂盒说明书，且谷草转氨酶AST试剂盒（批号20130426）和谷丙转氨酶ALT试剂盒（批号20130427）均购自南京建成生物工程研究所），结果见表1。

小鼠的喂养条件：所有小鼠在实验期间饲养于屏蔽级动物房，温度25℃，湿度50-60%，每日明暗室各12小时，通风良好，标准饲料，自由饮水。

表1

#P<0.05，##P<0.01，模型给药组与模型对照组相比

*P<0.05，**P<0.01，空白对照组与模型对照组相比

模型对照组血清ALT和AST水平高于空白对照组，说明造模成功。而且，模型给药组血清ALT水平较模型对照组有所降低；且模型给药组血清AST水平较模型对照组有所降低，而给药S-1、S-2和S-3的模型给药组中ALT和AST水平下降更为显著。

剪取处死的小鼠的肝脏组织，用10%福尔马林固定，常规病理制片（石蜡包埋，HE染色），进行病理组织学检测：从肝脏的一端视野开始记录细胞的病理变化，用40倍物镜连续观察整个组织切片，结果如图1所示。可见小叶中心性肝细胞的退行性病变和少数细胞坏死。主要病变类型有肝细胞气球样变、脂肪变性、胞浆凝聚、肝细胞水样变性和细胞坏死等。

分别记录每个视野中的各种病变所占视野的面积，并累计所观察视野的病变总分，结果如表2所示，评分标准如下：

肝细胞气球样变：（细胞肿大，胞浆残留少许）

肝细胞脂肪变性：（肝细胞胞浆内出现界限清晰的脂滴空泡）

胞浆凝聚：（胞浆嗜伊红增强）

水样变性：

肝细胞坏死：（胞浆嗜伊红变，凝固性坏死）

表2

空白对照组HE染色检查肝脏色泽正常，边缘锐利，表面光滑。镜下可见肝小叶结构清晰，界板平滑，肝细胞索、肝窦排列整齐规则。肝细胞胞浆红染，核居中，未见脂肪变性和细胞坏死等退行性病理改变。汇管区三管结构清楚可见，无明显异常呈正常肝组织结构。

模型对照组靠近中央静脉的肝细胞呈环状退行性病变，主要表现为肝细胞气球样变、肝细胞胞浆凝聚、肝细胞水样变性和肝细胞坏死等改变，小叶周边的肝细胞接近正常。

给药S-1的模型给药组靠近中央静脉的肝细胞呈环状退行性病变，主要表现为肝细胞胞浆凝聚、肝细胞水样变性和肝细胞坏死等改变，小叶周边的肝细胞接近正常。

给药S-2的模型给药组靠近中央静脉的肝细胞呈环状退行性病变，主要表现为肝细胞脂肪变性、肝细胞胞浆凝聚、肝细胞水样变性和肝细胞坏死等改变，小叶周边的肝细胞接近正常。

给药S-3的模型给药组靠近中央静脉的肝细胞呈环状退行性病变，主要表现为肝细胞胞浆凝聚、肝细胞水样变性和肝细胞坏死等改变，小叶周边的肝细胞接近正常。

阳性对照组靠近中央静脉的肝细胞呈环状退行性病变，主要表现为肝细胞气球样变、肝细胞胞浆凝聚、肝细胞水样变性和肝细胞坏死等改变，小叶周边的肝细胞接近正常。

给予实施例4-11的软胶囊的小鼠的AST和ALT水平以及肝脏病理组织学检测结果与实施例1-3的相近。

从以上结果可以看出，本发明的软胶囊对于CCl₄诱导的肝损伤有一定的保护作用。

测试例2

本测试例用来说明本发明的软胶囊对酒精性肝脏损伤的保护功能。

将ICR雄性小鼠（18-22g，购自吉林大学动物中心，清洁级，动物许可证编号SYXK（吉）2007-0011）分成模型给药组、模型对照组、空白对照组和阳性给药组（n=8）。以灌胃方式向模型给药组小鼠给予实施例1-11和对比例1-3的软胶囊（即S-1至S-11和S-D1至S-D3）；向阳性给药组小鼠给予联苯双酯片（批号为A02121005，浙江万邦药业股份有限公司）；向空白对照组和模型对照组小鼠给予蒸馏水（0.1mL/10g），一天一次给药，每周称重两次，以调整给药量。给药30天后将模型给药组、模型对照组和阳性给药组的小鼠一次灌胃给予50重量%的乙醇12mL/kg，空白对照组给予蒸馏水（0.1mL/10g），禁食16小时处死小鼠，剪取肝脏组织，一部分进行肝组织中丙二醛（MDA）、还原性谷胱甘肽（GSH）和甘油三酯（TG）的含量 检测（使用试剂盒进行测定，且还原型谷胱甘肽试剂盒（批号20130424）和丙二醛试剂盒（批号20130425）均购自南京建成生物工程研究所，甘油三酯试剂盒（批号006304）购自北京北化康泰临床试剂有限公司，具体操作参见试剂盒说明书），结果见表3。

小鼠的喂养条件：所有小鼠在实验期间饲养于屏蔽级动物房，温度25℃，湿度50-60%，每日明暗室各12小时，通风良好，标准饲料，自由饮水。

表3

#P<0.05，##P<0.01，模型给药组与模型对照组相比

*P<0.05，**P<0.01，空白对照组与模型对照组相比

模型对照组肝组织中MDA和TG含量高于空白对照组且GSH含量低于空白对照组，说明造模成功。而且，模型给药组GSH含量较模型对照组有所升高，MDA含量和TG含量较模型对照组均有所降低，而给药S-1、S-2和S-3的模型给药组中，GSH含量升高得更为显著且MDA含量和TG含量下降得更为显著。

肝脏组织的另一部分用10%福尔马林固定，常规病理制片（石蜡包埋，HE染色），进行病理组织学检测：从肝脏的一端视野开始记录细胞的病理变化，用40倍物镜连续观察整个组织切片。主要观察脂滴在肝脏的分布、范围和面积，结果如图2所示。

对每个视野中肝细胞的脂滴进行评价，结果如表4所示，评分标准如下：

表4

空白对照组检查肝脏色泽正常，边缘锐利，表面光滑。镜下可见肝小叶结构清晰，界板平滑，肝细胞索、肝窦排列整齐规则。肝细胞胞浆红染，核居中，未见脂肪变性和细胞坏死等退行性病理改变。汇管区三管结构清楚可见，无明显异常呈正常肝组织结构。

模型对照组靠近中央静脉的肝细胞呈环状退行性病变，主要表现为肝细胞胞浆凝聚、肝细胞水样变性和肝细胞坏死等改变，小叶周边的肝细胞接近正常；部分肝细胞内可见明显圆形空泡。

模型给药组均无明显病理改变。

阳性给药组肝细胞内可见少量圆形空泡。

给予实施例4-11的软胶囊的小鼠MDA、GSH和TG含量以及肝脏病理组织学检测结果与实施例1-3的相近。

从以上结果可以看出，本发明的软胶囊对于酒精诱导的肝损伤有一定的保护作用。

测试例3

本测试例用来说明本发明的软胶囊辅助降血脂的保健功能。

（1）高血脂大鼠模型的建立

将Wistar雄性大鼠（180-220g，购自吉林大学动物中心，清洁级，动物许可证编号SCXK2007-0003）分为高脂饲料喂养组（喂养高脂饲料，且饲料配方参照辅助降低血脂功能评价方法（国家食品药品监督管理局））和基础饲料喂养组（喂养基础饲料，且饲料由吉林大学白求恩医学院动物实验中心提供），喂养14天后，剪尾取血，采用试剂盒检查血清总胆固醇（TC或CHO），甘油三酯（TG），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平，以确定高血脂模型大鼠（简称模型大鼠）的形成。血清TC，TG，HDL-C和LDL-C水平均采用试剂盒测得，具体测定方法参见试剂盒说明书，总胆固醇试剂盒（批号006301）、甘油三酯试剂盒（批号006304）、高密度脂蛋白试剂盒（批号006328）和低密度脂蛋白试剂盒（批号006340）均购自北京北化康泰临床试剂有限公司。

大鼠喂养条件：所有大鼠在实验期间饲养于屏蔽级动物房，温度25℃，湿度50-60%，每日明暗室各12小时，通风良好，自由饮水。

（2）软胶囊的降血脂效果测定

根据血清学改变最为明显的甘油三酯水平作为分组依据，各只大鼠的甘油三酯平均值基本相当，将高脂饲料喂养组的大鼠分成模型给药组和模型对照组（n=8），模型给药组以灌胃方式分别给予实施例1-11和对比例1-3制得的软胶囊（即S-1至S-11和S-D1至S-D3），模型对照组的大鼠为不给予药剂的高脂饲料喂养大鼠，并设置空白对照组（即，不给予药剂的基础饲料喂养大鼠，n=8），一天一次给药，给药30天，于实验结束前一天禁食16小时，腹主动脉采血，低温离心机3000转离心15分钟，吸取血清，测定血清TC，TG，HDL-C和LDL-C水平（，测定方法如步骤（1）中所示），结果见表5。

表5

#P<0.05，##P<0.01，模型给药组与模型对照组相比

*P<0.05，**P<0.01，空白对照组与模型对照组相比

从表5可以看出，模型对照组血清TC，TG和LDL-C水平均高于空白对照组，且HDL-C水平低于空白对照组，说明造模成功。而且，模型给药组的血清TC、TG、LDL-C水平较模型对照组均有所降低，HDL-C水平较模型对照组有所升高，而给药S-1、S-2和S-3的模型给药组中，TC、TG、LDL-C水平降低得更为显著且HDL-C水平升高得更为显著。

给予实施例4-11的软胶囊的大鼠的MDA、GSH和TG含量以及肝脏病理组织学检测结果与实施例1-3的相近。

从以上结果可以看出，本发明的软胶囊对于高脂血症有一定的保护作用。

测试例4

本测试例用来说明本发明的软胶囊的稳定性。

在30℃±2℃和RH65%±5%的条件下进行6个月的加速试验，在试验期间第0、1、2、3和6个月末取样检测水飞蓟宾和磷脂酰胆碱两种活性成分的含量，以及崩解时限和过氧化值等考察指标，结果如表6所示。

表6

实施例4-11的软胶囊的稳定性测定结果与实施例1-3的相近。从以上结果可以看出，本发明的软胶囊的稳定性较佳。

水飞蓟宾和磷脂酰胆碱的含量采用色谱分析法，具体操作如下：

1、水飞蓟宾色谱分析方法：

（1）色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水-冰醋酸（50:50:0.5）为流动相；检测波长为288nm。理论板数按水飞蓟宾峰计算应不低于5000。

（2）对照品溶液的制备：精密称取经60℃减压干燥3小时的水飞蓟宾对照品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液，摇匀，即得。

（3）供试品溶液的制备：取本品10粒，去囊皮，取内容物混匀，称取40mg，置25ml量瓶中，加甲醇使溶解，超声15分钟，放冷置室温，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

（4）测定法：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各5ul，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。平均每粒水飞蓟宾不低于20mg。

2、磷脂酰胆碱色谱分析方法：

（1）色谱条件与系统适用性试验：色谱柱用硅胶为填充剂（255mm×4.6mm，5μm），以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（85︰15︰0.45︰0.05）为流动相A，以正己烷-异丙醇-流动相A（20︰48︰32）为流动相B，柱温为40℃，按下表7进行梯度洗脱，检测器为蒸发光散射检测器。

表7

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
			0	10	90
20	30	70
			35	95	5
36	10	90
			41	10	90

（2）取磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰胆碱对照品各适量，用三氯甲烷-甲醇（2︰1）溶解并定量稀释制成每1ml含磷脂酰胆碱200μg，含溶血磷脂酰胆碱200μg的混合溶液，取上述溶液20μl注入液相色谱仪，依次洗脱，分离度应符合规定，理论板数按磷脂酰胆碱峰应不低于1550。

（3）回归方程：精密称取磷脂酰胆碱对照品适量，用三氯甲烷-甲醇（2︰1）溶解并定量稀释制成每1ml含磷脂酰胆碱分别为55μg、100μg、155μg、200μg、300μg、400μg的溶液做为对照品溶液。精密量取对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液浓度的对数值与相应的峰面积对数值计算回归方程。

（4）测定：取本品10粒，去囊皮，取内容物混匀，称取约15mg，置55ml量瓶中，加三氯甲烷-甲醇（2：1）溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。由回归方程计算磷脂酰胆碱的含量。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (8)

1.一种含水飞蓟提取物的软胶囊，其特征在于，该软胶囊的内容物由水飞蓟提取物、中链甘油三酸酯、食用油和磷脂组成，其中，相对于100重量份的水飞蓟提取物，中链甘油三酸酯的含量为70-90重量份，食用油的含量为65-115重量份，磷脂的含量为145-260重量份，所述食用油中的不饱和脂肪酸含量不低于70重量%，所述磷脂中的磷脂酰胆碱的含量为20-80重量%且二亚油酰磷脂酰胆碱的含量为20-80重量%，所述中链甘油三酸酯为含有辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯的混合物，辛酸甘油三酯的含量为50-80重量%，癸酸甘油三酯的含量为20-50重量%且辛酸甘油三酯和癸酸甘油三酯总量不低于95重量%。

2.根据权利要求1所述的软胶囊，其中，所述水飞蓟提取物中的水飞蓟宾的含量在20重量%以上。

3.根据权利要求1或2所述的软胶囊，其中，所述食用油为罂粟籽油、葡萄籽油、月见草油、黑加仑籽油、紫苏籽油、亚麻籽油、橄榄油、鱼油、大豆油、玉米油和葵花籽油中的至少一种。

4.根据权利要求1所述的软胶囊，其中，所述食用油为罂粟籽油。

5.根据权利要求1或2所述的软胶囊，其中，所述磷脂为大豆磷脂。

6.根据权利要求1所述的软胶囊，其中，所述软胶囊的内容物还含有抗氧化剂。

7.根据权利要求6所述的软胶囊，其中，所述抗氧化剂为维生素E。

8.制备权利要求1-7中任意一项所述的软胶囊的方法，其特征在于，该方法包括将水飞蓟提取物、中链甘油三酸酯、食用油和磷脂混合获得软胶囊的内容物，并将该内容物包封于软胶囊囊壳中。