CN103830294B - 一种含刺五加提取物的健脑复方软胶囊及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含刺五加提取物的健脑复方软胶囊及其制备方法，该方法包括：在惰性气氛中，将刺五加提取物、混合磷脂和植物油依次溶于泊洛沙姆的乙醇液中，除去乙醇得到软胶囊的内容物，将该内容物封装于软胶囊囊壳中，其中，相对于100重量份的刺五加提取物，混合磷脂的用量为90-240重量份，植物油的用量为140-300重量份，泊洛沙姆的用量为10-50重量份，其中，所述混合磷脂由动物脑提取物和补加成分组成，动物脑提取物与补加成分的重量比为1:2-6，且所述补加成分包括磷脂酰丝氨酸和/或二亚油酰磷脂酰胆碱。本发明的健脑复方软胶囊能够有效地用于辅助改善记忆、辅助改善睡眠和预防老年痴呆症，保健效果较佳。

Description

一种含刺五加提取物的健脑复方软胶囊及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种含刺五加提取物的健脑复方软胶囊及其制备方法，具体地，涉及一种制备含刺五加提取物的健脑复方软胶囊的方法以及由该方法制得的含刺五加提取物的健脑复方软胶囊。

背景技术

紫丁香苷广泛存在于五加科植物中，具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射损伤及抗疲劳等作用，还可以治疗心脑血管疾病、糖尿病和神经衰弱。刺五加（Eleutherococcussenticosus）为常见的五加科（Araliaceae）植物，在我国本草医籍中均有记载，具有扶正固本、补肾健脾、益智安神。主要用于脾肾阳虚、体虚乏力、食欲不振、腰膝酸痛、失眠多梦等病症。

动物脑提取物含有多种具有药用或保健价值的物质，例如，中国科学院生物物理所王荫亭等人的研究证明：鸽脑含有丰富的血管活性肠肽（vasoactineintrestinalpeptide，VIP）和乙酰胆碱酯酶（acetylcholineesterase，AchE）（王荫亭等，血管活性肠肽免疫阳性神经元在家鸽中脑和间脑中的分布[J]，生物物理学报，1994，10(3)：103-110）。近期研究表明：血管VIP可以显著降低慢性实验变态反应性脑脊髓炎（experimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE，一种以中枢神经系统多发性硬化症（multiplesclerosis，MS）建立的动物模型）的发病率和疾病的严重程度。VIP通过调节多种炎性介质功能、封闭嗜脑性T细胞的活性，降低中枢神经系统的炎性改变。VIP不仅可以治疗中枢神经系统疾病，而且可以预防中枢神经系统病情复发。国内外学者普遍认为VIP可能会成为一个新的治疗多发性硬化的药物。乙酰胆碱酯酶（AchE）不仅参与胆碱能神经递质的传递，还具有调节和促进神经组织的发育和神经再生的神经营养因子样作用。江苏大学的李永金等人研究证明：猪脑提取物可提高痴呆大鼠学习记忆能力（李永金等，猪脑提取物对阿尔茨海默病大鼠学习记忆的保护作用[J]，时珍国医国药，2010，7(21)：1700-1702）。河南工业大学粮油食品学院谢朝顺等通过实验证实：猪脑含有丰富的磷脂酰胆碱，并且通过薄层色谱分离，得到了PA、PE、PC、PS、PI等组分。鸡脑磷脂中不饱和脂肪酸占67.78%，猪脑磷脂中不饱和脂肪酸占58.84%（谢朝顺等，羊、猪、鸡脑中磷脂及磷脂脂肪酸组成分析[J]，河南工业大学学报(自然科学版)，2010，4(31)：29-31）。

大豆磷脂是磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇和磷脂酰丝氨酸等混合物。不同分子构型磷脂具有不同的生物学功能。研究证明：二亚油酰磷脂酰胆碱也称“多烯磷脂酰胆碱”具有改善神经功能，减少损伤，促进了神经细胞对于外源性的β-淀粉样蛋白的吞噬和代谢降解（张晓辉等，多烯磷脂酰胆碱对β-淀粉样蛋白（Aβ1-40）致阿尔茨海默病模型大鼠的治疗作用[J]，现代生物医学进展，2011,11（13）：2438-2442）。二亚油酰磷脂酰胆碱含有丰富油酸成分也是脂溶性化合物非常好的乳化剂和表面活性剂。近几年更以脑专一性营养物质引起大家的广泛关注。

植物油含有丰富的不饱和脂肪酸，研究证明罂粟籽油中的不饱和脂肪酸占88%以上，棕榈酸占9.7%，（祖新，罂粟籽油脂肪酸组成分析[J]，粮油食品科技，2010，18(6)：20-21）。罂粟籽油具有软化血管防止血脂在血管壁上沉积、抑制肝脏低密度脂蛋白的合成改善睡眠质量。不仅如此，罂粟籽油还具有极好的脂溶性作用和特殊的清香味。

橄榄油单不饱和脂肪酸的含量为80%以上，必需脂肪酸亚油酸和亚麻酸的比例为1：4，正好完全符合人体对于摄入脂肪的科学标准。橄榄油被誉为最有益于人类健康长寿的植物油。

月见草油不饱和脂肪酸高达85%以上，其中最重要的成分是γ-亚麻酸，γ-亚麻酸含量在10%左右，γ-亚麻酸具有抗炎、抗氧化、抗血栓、降脂、降糖、减肥等作用，对多种慢性疾病具有医疗保健功能。

黑加仑籽油富含γ-亚麻酸、生育酚、甾醇等功能性成分，具有降低血液胆固醇水平、清除自由基、防治癌症等作用。葡萄籽油营养丰富，脂肪酸组成合理，含有较高的亚油酸、维生素A和维生素E活性成分，具有抗氧化、抗衰老、降血脂等作用。

泊洛沙姆（poloxamer）是聚氧乙烯-聚氧丙烯-聚氧乙烯三嵌段共聚物。泊洛沙姆是一种具有药理活性的多功能药用辅料，研究发现泊洛沙姆具有稳定细胞膜、明显减少了肝、脾摄取。泊洛沙姆可通过不同的的作用机制帮助药物穿越血脑屏障，抑制血脑屏障上P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白等外派泵系统；吸附血浆中的不同载脂蛋白后，使其通过受体介导的结合，促进药物穿越血脑屏障使泊洛沙姆包被的纳米粒药物主动转入脑内，提高药物在脑内的生物利用度（张伟和方晓玲，泊洛沙姆在药物穿越血脑屏障中的重要作用[J]，药学学报，2008，43(9)：890-897）。

老年性痴呆又称阿尔茨海默症（AD）已经成为继肿瘤、心脏病、脑血管病引起成人死亡的第四大病因，随着社会人口老龄化的迅猛发展，老年人在人群中的比重越来越大，AD必将成为一个不可忽视的卫生和社会问题。中国从上世纪90年代起，提前进入老龄化社会的行列，60岁以上的占全国总人口的10%，并以年均3.3%的速度上升，有关方面统计60岁以上老人到2025年可达2.8亿，占总人口的18.4%。一直以来，我国在预防老年性痴呆的保健品开发和食用方面受到极大的重视。研究证明，服用辅助改善记忆和/或辅助改善睡眠的保健药物能够有效地预防AD。

目前，常见的有关辅助改善记忆、辅助改善睡眠和预防老年痴呆症的保健品主要分为三大类，第一类是以不饱和脂肪酸植物油为主要成分辅以其他药食两用成分，如CN101283797A涉及以核桃油为基质的促智健脑保健品；第二类是以药食两用的重要原料为主要成分的保健品，如CN102178664A涉及五味子醇甲、五味子甲素及五味子醇提取物防治老年痴呆的新用途；第三类是以哺乳动物脑组织主要是猪脑提取物为主要成分的保健品，如CN1535974A涉及一种生产以神经节苷脂为主的糖脂类物质的方法。

由于肝脏首过效应及血脑屏障的外排作用等，人体对上述三类保健品的吸收有限，因而其辅助改善记忆和/或改善睡眠的效果并不显著。而且，磷脂酰丝氨酸不稳定（易氧化）且具异味，动物脑提取物也一般有异味。因此，研究保健效果较佳且无异味的辅助改善记忆和/或改善睡眠的健脑复方软胶囊具有重大意义。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种保健效果较佳且无异味的用于辅助改善记忆和/或改善睡眠的健脑复方软胶囊及其制备方法。

为了实现上述目的，第一方面，本发明提供了一种制备含刺五加提取物的健脑复方软胶囊的方法，该方法包括：在惰性气氛中，将刺五加提取物、混合磷脂和植物油依次溶于泊洛沙姆的乙醇液中，除去乙醇得到软胶囊的内容物，将该内容物封装于软胶囊囊壳中，其中，相对于100重量份的刺五加提取物，混合磷脂的用量为90-240重量份，植物油的用量为140-300重量份，泊洛沙姆的用量为10-50重量份，其中，所述混合磷脂由动物脑提取物和补加成分组成，动物脑提取物与补加成分的重量比为1:2-6，且所述补加成分包括磷脂酰丝氨酸（PE）和/或二亚油酰磷脂酰胆碱（DIPC）；所述植物油中的不饱和脂肪酸含量不低于70重量%。

第二方面，本发明提供了由第一方面所述的方法制得的含刺五加提取物的健脑复方软胶囊。

本发明的健脑复方软胶囊能够有效地用于辅助改善记忆、辅助改善睡眠和预防老年痴呆症，保健效果较佳且无异味。而且，磷脂酰丝氨酸在本发明的健脑复方软胶囊中能够稳定存在。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

本发明中，术语“含刺五加提取物的健脑复方软胶囊”、“健脑复方软胶囊”和“软胶囊”可互换使用。

本发明提供的制备含刺五加提取物的健脑复方软胶囊的方法包括：在惰性气氛中，将刺五加提取物、混合磷脂和植物油依次溶于泊洛沙姆的乙醇液中，除去乙醇得到软胶囊的内容物，将该内容物封装于软胶囊囊壳中，其中，相对于100重量份的五加科植物提取物，混合磷脂的用量为90-240重量份，植物油的用量为140-300重量份，泊洛沙姆的用量为10-50重量份，其中，所述混合磷脂由动物脑提取物和补加成分组成，动物脑提取物与补加成分的重量比为1:2-6，且所述补加成分包括磷脂酰丝氨酸和/或二亚油酰磷脂酰胆碱；所述植物油中的不饱和脂肪酸含量不低于70重量%（如70-95重量%）。

根据本发明，可以利用常规的溶解方式或仪器将上述各个成分溶于泊洛沙姆的乙醇溶液中，例如，借助高速剪切混合设备，如乳化机、胶体磨、均质机和分散机等。

根据本发明，所述刺五加提取物优选为紫丁香苷含量不低于2重量%（如2-8重量%）的提取物。也可以选用各种含紫丁香苷的五加科植物（如细柱五加、红毛五加和刺五加等）。优选情况下为刺五加提取物。而且，可以采用各种常规的提取方法制备刺五加提取物，控制所述紫丁香苷含量不低于2重量%（如2-8重量%）即可，本领域技术人员能够进行适当的选择，在此不再赘述。

刺五加提取物的制备方法可以为乙醇回流提取法，可以参照《中华人民共和国药典》“关于刺五加浸膏提取方法”进行制备。例如，将60g刺五加粗粉加入到烧瓶（如1000mL烧瓶）中，取75体积%的乙醇溶液420ml，水浴锅上连续回流提取12h，在低温下静置24h，过滤提取液，浓缩，并干燥至质量恒定，得紫丁香苷含量为3重量%刺五加提取物约3g。

本发明中，各种常规方法获得的动物脑提取物均可以用于本发明，优选情况下，所述动物脑提取物中的磷脂酰胆碱（PC）含量不低于12重量%（如12-20重量%），且磷脂酰乙醇胺（PE）含量不低于35重量%（如35-45重量%）。更优选地，所述动物脑提取物为鸽脑提取物、猪脑提取物和鸡脑提取物中的至少一种。

例如，动物脑提取物的制备方法可以为：在冰冻状态下取出动物的脑组织，用温度在0℃以下的丙酮或乙醇浸泡30分钟，丙酮或乙醇的用量为2.5L/kg脑组织（以湿重计），研碎，固液分离，将所得液相进行浓缩，除去丙酮（37-40℃）或乙醇（45-50℃），浓缩物用100mL/kg脑组织的石油醚（等级为60-90℃）分3次萃取，收集石油醚萃取液，去除石油醚后与固液分离所得固相合并，干燥，得动物脑提取物。

本发明中，采用动物脑提取物和补加成分作为本发明的混合磷脂能够获得更为优异的改善记忆、辅助改善睡眠或预防老年痴呆症的效果。市售的各种常用于保健品中的磷脂酰丝氨酸（PS）或二亚油酰磷脂酰胆碱（DIPC）都可以用于本发明，需要说明的是，市售的磷脂酰丝氨酸或二亚油酰磷脂酰胆碱通常并非纯物质，而还含有磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、磷脂酸、磷脂酰甘油等成分（磷脂酰丝氨酸含量不低于50重量%，二亚油酰磷脂酰胆碱含量不低于30重量%），但是这些成分并不会对本发明的健脑复方软胶囊的保健效果产生影响，因此，可以直接用于制备本发明的健脑复方软胶囊。

根据本发明，不饱和脂肪酸含量不低于70重量%的植物油均可以用于本发明，但优选情况下，所述植物油为罂粟籽油、橄榄油、月见草油、黑加仑籽油和葡萄籽油中至少一种。可以通过常规的压榨法、浸出法、超临界萃取法或水代法从植物中获取上述植物油，且这些方法均为本领域技术人员所熟知，在此不再赘述。

本发明中，泊洛沙姆优选为泊洛沙姆188。泊洛沙姆188是由环氧丙烷和丙二醇反应，形成聚氧丙烯二醇，然后加入环氧乙烷而形成的嵌段共聚物，可以通过商购获得。

根据本发明，可以采用常规的方法制备泊洛沙姆的乙醇溶液，为了使泊洛沙姆溶解更为充分，泊洛沙姆的乙醇溶液的方法优选为：在60-70℃下，将泊洛沙姆溶于乙醇中。泊洛沙姆的乙醇溶液中泊洛沙姆的浓度可以为0.05-0.1g/mL。

根据本发明，为了增强健脑复方软胶囊的抗氧化性能，从而延长保质期，所述方法优选还包括往体系中添加抗氧化剂。所述抗氧化剂可以为本领域常用的各种能够抗氧化的物质，更优选地，所述抗氧化剂为维生素E。

根据本发明，所述惰性气氛可以由各种常规的惰性气体提供，例如，氮气。

本发明还提供了由上述方法制得的含刺五加提取物的健脑复方软胶囊。

本发明中，所述软胶囊囊壳可以采用常规的方式制备，例如，将明胶、纯净水、甘油、山梨醇、甘氨酸和二氧化钛加入适量色素（柠檬黄或亮蓝）进行化胶获得。继而可以采用常规模制方法制丸、定型干燥、洗丸、晾丸、捡丸、制成半成品，包装。

在实际使用时，本发明的健脑复方软胶囊的服用量可以根据服用者的具体身体状况而定，以80kg重的人为例，每天口服2-3次，每次600-900mg。

以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，刺五加提取物参照本说明上述刺五加浸膏提取方法制得，紫丁香苷含量为3重量%；鸽脑提取物（PC含量为15重量%且PE含量为40重量%）、猪脑提取物（PC含量为15重量%且PE含量为35重量%）、鸡脑提取物（PC含量为15重量%且PE含量为35重量%）均购自长春市现代生物技术有限责任公司；磷脂酰丝氨酸、二亚油酰磷脂酰胆碱购自长春市现代生物技术有限责任公司（磷脂酰丝氨酸的含量为50重量%，二亚油酰磷脂酰胆碱含量为45重量%）；罂粟籽油购自上海万代制药有限公司，意大利进口欧丽薇兰牌橄榄油购自长春市沃尔玛超市；月见草油、黑加仑籽油、葡萄籽油购自长春市现代生物技术有限责任公司；泊洛沙姆购自长春市现代生物技术有限责任公司；FAR-25型高剪切分散乳化机为上海弗鲁克公司制造，使用转速10000rpm。

实施例1

按1000粒计，取药用乙醇300mL水浴加热至60℃，加入泊洛沙姆20g至完全溶解；在氮气保护下，依次加入80g刺五加提取物、100g磷脂酰丝氨酸、20g鸽脑提取物、165g罂粟籽油（不饱和脂肪酸含量为85重量%）和0.2g维生素E，高速剪切至溶解；减压去除乙醇和水分，作为软胶囊的内容物待用；

按照如下重量比配制软胶囊囊壳：明胶:纯净水:甘油:山梨醇:甘氨酸:二氧化钛=1:1:0.47:0.02:0.08:0.005进行化胶，常规模制方法制丸、定型干燥、洗丸、晾丸、捡丸，得到健脑复方软胶囊S-1（无异味）。

实施例2

按1000粒计，取药用乙醇300mL水浴加热至70℃，加入泊洛沙姆20g至完全溶解；在氮气保护下，依次加入100g刺五加提取物、100g磷脂酰丝氨酸、10g鸽脑提取物、165g罂粟籽油（不饱和脂肪酸含量为85重量%）和0.2g维生素E，高速剪切至溶解；减压去除乙醇和水分，作为软胶囊的内容物待用；

按照如下重量比配制软胶囊囊壳：明胶:纯净水:甘油:山梨醇:甘氨酸:二氧化钛=1:1:0.47:0.02:0.08:0.005进行化胶，常规模制方法制丸、定型干燥、洗丸、晾丸、捡丸，得到健脑复方软胶囊S-2（无异味）。

实施例3

按1000粒计，取药用乙醇300mL水浴加热至65℃，加入泊洛沙姆20g至完全溶解；在氮气保护下，依次加入60g刺五加提取物、120g磷脂酰丝氨酸、20g鸽脑提取物、180g罂粟籽油（不饱和脂肪酸含量为85重量%）和0.2g维生素E，高速剪切至溶解；减压去除乙醇和水分，作为软胶囊的内容物待用；

按照如下重量比配制软胶囊囊壳：明胶:纯净水:甘油:山梨醇:甘氨酸:二氧化钛=1:1:0.47:0.02:0.08:0.005进行化胶，常规模制方法制丸、定型干燥、洗丸、晾丸、捡丸，得到健脑复方软胶囊S-3（无异味）。

实施例4-7

按照实施例1的方法制备健脑复方软胶囊S-4至S-7，不同的是，将“罂粟籽油”分别替换为橄榄油（不饱和脂肪酸含量为80重量%）、月见草油（不饱和脂肪酸含量为88重量%）、黑加仑籽油（不饱和脂肪酸含量为85重量%）、和葡萄籽油（不饱和脂肪酸含量为80重量%），获得的健脑复方软胶囊均无异味。

实施例8-9

按照实施例1的方法制备健脑复方软胶囊S-8至S-9，不同的是，将鸽脑提取物分别替换为猪脑提取物和鸡脑提取物，获得的健脑复方软胶囊均无异味。

实施例10

按照实施例1的方法制备健脑复方软胶囊S-10，不同的是，将磷脂酰丝氨酸替换为二亚油酰磷脂酰胆碱（含量为45重量%），获得的健脑复方软胶囊无异味。

对比例1

按照实施例1的方法制备健脑复方软胶囊S-D1，不同的是，刺五加提取物的用量为120g，罂粟籽油的用量为105g。

测试例1

本测试例用来说明本发明的健脑复方软胶囊在辅助改善睡眠中的作用。

本测试例按照中国【保健食品功能学评价程序和检验方法】进行。

实验动物：成年的ICR雄性小鼠（18-22g），购自吉林大学动物中心，清洁级，动物许可证编号SCXK2007-0003。所有动物在实验期间饲养于屏蔽级动物房，温度25℃，湿度50%-60%，每日明暗室各12小时，通风良好，标准饲料，自由饮水。

实验方法：将ICR雄性小鼠分成实验组、对照组和空白对照组，每组8只小鼠。实验组服用实施例1-3和对比例1制得的软胶囊，对照组注射巴比妥钠，空白对照组不服用任何保健品。30天后，测定各组小鼠的睡眠时长，结果如表1和表2所示。

睡眠以翻正反射消失为指标。当小鼠置于仰卧位时，能立即翻正身位。

如超过30-60秒不能翻正者，即认为翻正反射消失，进入睡眠。翻正反射恢复即为动物觉醒，翻正反射消失至恢复这段时间为动物睡眠时间。

表1

由表1—不同剂量巴比妥钠对于小鼠睡眠时长的影响(n=10)预实验结果可以确定，使动物100%入睡，但又不使睡眠时间超过60min的巴比妥钠的剂量为300mg/kg。

表2

#P<0.05，##P<0.01

由表2—不同剂量对小鼠睡眠时长的影响（n=8）实验结果可以看出：本发明的软胶囊能够显著延长小鼠的睡眠时长（P<0.05）。而服用对比例1的健脑复方软胶囊的改善睡眠作用并不显著。实施例4-10制得的软胶囊对小鼠睡眠的作用与实施例1-3相似。

测试例2

本测试例用来说明本发明的健脑复方软胶囊在辅助改善记忆中的作用。

参照辅助改善记忆功能评价方法进行跳台实验和水迷宫实验，具体如下：

实验动物：成年的ICR雄性小鼠（18-22g），购自吉林大学动物中心，清洁级，动物许可证编号SCXK2007-0003。所有动物在实验期间饲养于屏蔽级动物房，温度25℃，湿度50%-60%，每日明暗室各12小时，通风良好，标准饲料，自由饮水。

本实验设计为跳台实验和水迷宫实验。实验设置低（100mg/kg/天）、中（300mg/kg/天）、高（500mg/kg/天）三个剂量组（n=10）和对照组，且三个剂量组分别给予健脑复方软胶囊S-1、S-2和S-3，对照组给予等量花生油（n=10），以灌胃方式给予30天，一天一次。在实验过程的初期（给予待测样品第1天）、中期（给予待测样品第15天）和末期（给予待测样品第30天）分别测定小鼠的体重，结果如表3所示。

（1）跳台试验

末次灌胃后次日开始训练。将动物放入反应箱内（台上、台下）适应环境3min，然后将动物放置反应箱内的铜栅上，立即通以36v（或0.3-0.4mA）的交流电。动物受到电击，其正常反应是跳回平台（绝缘体），以躲避伤害性刺激。多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击又迅速跳回平台上。训练一次后，将动物放在反应箱内的平台上，记录5min内各鼠跳下平台的错误次数和第一次跳下平台的潜伏期，以此作为学习成绩。方法同重测验）。24h或48h后重作测验，记录各鼠第一次跳下平台的潜伏期、各鼠3min内电击次数和受电击的小鼠数总数，同时计算出现错误反应的动物的百分率（受电击的动物数占该组动物总数的百分率）。停止训练5天后进行记忆消退实验。

（2）水迷宫实验

末次灌胃次日开始训练，大鼠自由游泳2min以熟悉环境，其间引导动物站上平台10s。次日开始训练，训练期间继续给样。每天训练一次，连续5天，第一次训练将小鼠放在梯子附近，使其自动爬上3次，以后每次训练前将小鼠放在梯子附近，使其自动爬上一次。最后以5天的总学习成绩进行评价（即各组到达终点的小鼠数，每鼠5天平均错误次数和到达终点的时间）。停止训练5天后记忆消退实验。

结果如表3-9所示。其中，表3表示小鼠体重变化（g，）结果；表4表示跳台实验潜伏期、错误次数和错误反应率的统计结果；表5表示第二次跳台实验潜伏期、错误次数和错误反应率的统计结果；表6表示小鼠跳台消失实验的统计结果；表7表示水迷宫实验中到达终点时间、到达终点前错误次数和到达终点的动物数的统计结果。

表3

由表3可以看出，以不同剂量的供试品灌胃小鼠30天后，未见毒性反应，实验初期、中期和末期各剂量组动物增重与相应对照组相比，差异均无统计学意义（P＞0.05）。

表4

由表4可以看出，在小鼠跳台实验中，低、中、高剂量组小鼠测验潜伏期长于对照组，且差异有统计学意义（P<0.05）。各剂量组错误次数错误反应率与对照组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）

表5

由表5可以看出，在小鼠第二次跳台实验中，低、中、高剂量组小鼠测验潜伏期长于对照组，且差异有统计学意义（P<0.05）。各剂量组错误次数错误反应率与对照组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。两次实验结果一致，即在小鼠跳台实验中，低、中、高剂量组小鼠测验潜伏期长于对照组，且差别有统计学意义（P<0.05），其他各项指标差异均无统计学意义（P>0.05）。

表6

实验组	动物数（只）	潜伏期	测验错误次数	跳下平台的动物百分数（%）
					对照组	10	112.2±58.4	1.00	80
低剂量组	10	117.5±57.2	1.00	70
					中剂量组	10	112.5±57.4	1.00	80
高剂量组	10	118.1±58.5	1.00	60

由表6可以看出，受试小鼠跳台消退实验中，各剂量组动物跳下平台的潜伏期、错误次数及跳下平台的动物数与对照组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。

表7

由表7的实验数据可以看出，水迷宫实验中，低、中、高各剂量组动物到达终点的时间小于对照组，且差异有统计学意义（P<0.05）；各剂量组小鼠到达终点前错误次数与对照组比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；各剂量组小鼠2min内到达终点的动物数与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。

给予实施例4-10制得的健脑复方软胶囊的小鼠跳台实验和水迷宫实验结果与实施例1-3的相近，可以看出，本发明的健脑复方软胶囊具有辅助改善记忆的功能。

测试例3

本测试例用来说明本发明的复方保健软胶囊的稳定性。

在30℃±2℃和RH65%±5%的条件下进行6个月的加速试验，在试验期间第0、1、2、3和6个月末取样检测紫丁香苷和磷脂酰丝氨酸两种活性成分的含量，以及崩解时限和过氧化值等考察指标，结果如表8所示。检测结果显示，储存6个月的健脑复方软胶囊中功效成分均在范围内，说明本发明的健脑复方软胶囊有利于磷脂酰丝氨酸的稳定存在。

表8

紫丁香苷和磷脂酰丝氨酸的测定方法如下：

1、紫丁香苷色谱分析方法：

色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂色谱柱(5μm，4.6mm×250mm)，流动相:甲醇-1%乙酸溶液；线性梯度：10%～50%（甲醇浓度在15min内以线性10%增加到50%）；流速:1.0ml/min；紫外检测器检测波长270nm；柱温28℃，在此条件下紫丁香苷保留时间为8.70min。理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制备：取紫丁香苷对照品20mg，置100ml棕色瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml棕色瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成每1ml约含紫丁香苷20ug的溶液，摇匀，即得。

供试品溶液的制备：取本品10粒，去囊皮，取内容物混匀，精密称取0.1g，置100ml棕色量瓶中，加甲醇使溶解，超声15分钟，放冷置室温，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。

2、磷脂酰丝氨酸色谱分析方法：

色谱条件与系统适用性试验用硅胶为填充剂（色谱柱255mm×4.6mm，5μm），以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（85︰15︰0.45︰0.05）为流动相A，以正己烷-异丙醇-流动相A（20︰48︰32）为流动相B，柱温为40℃，按表9所示的方式进行梯度洗脱，检测器为蒸发光散射检测器。

表9

时间（分钟）	流动相A（%）	流动相B（%）
			0	10	90
20	30	70
			35	95	5
36	10	90
			41	10	90

取磷脂酰丝氨酸对照品适量，用三氯甲烷-甲醇（2︰1）溶解并定量稀释制成每1ml含磷脂酰丝氨酸200μg，取溶液20μl注入液相色谱仪，依次洗脱，分离度应符合规定，理论板数按磷脂酰丝氨酸峰应不低于1500。

供试品溶液的制备：取本品10粒，去囊皮，取内容物混匀，精密称取0.1g，置100ml棕色量瓶中，加甲醇使溶解，超声15分钟，放冷置室温，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

回归方程：精密称取磷脂酰丝氨酸对照品适量，用三氯甲烷-甲醇（2︰1）溶解并定量稀释制成每1ml含磷脂酰丝氨酸分别为55μg、100μg、155μg、200μg、300μg、400μg的溶液做为对照品溶液。精密量取对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液浓度的对数值与相应的峰面积对数值计算回归方程。

测定：精密量取供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。由回归方程计算磷脂酰丝氨酸的含量。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (10)

1.一种制备含刺五加提取物的健脑复方软胶囊的方法，其特征在于，该方法包括：在惰性气氛中，将刺五加提取物、混合磷脂和植物油依次溶于泊洛沙姆的乙醇液中，除去乙醇得到软胶囊的内容物，将该内容物封装于软胶囊囊壳中，其中，相对于100重量份的刺五加提取物，混合磷脂的用量为90-240重量份，植物油的用量为140-300重量份，泊洛沙姆的用量为10-50重量份，其中，所述混合磷脂由动物脑提取物和补加成分组成，动物脑提取物与补加成分的重量比为1:2-6，且所述补加成分包括磷脂酰丝氨酸和/或二亚油酰磷脂酰胆碱；所述植物油中的不饱和脂肪酸含量不低于70重量%。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述刺五加提取物中的紫丁香苷含量不低于2重量%。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述动物脑提取物中的磷脂酰胆碱含量不低于12重量%，且磷脂酰乙醇胺含量不低于35重量%。

4.根据权利要求1或3所述的方法，其中，所述动物脑提取物为鸽脑提取物、猪脑提取物和鸡脑提取物中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，植物油为罂粟籽油、橄榄油、月见草油、黑加仑籽油和葡萄籽油中至少一种。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，泊洛沙姆为泊洛沙姆188。

7.根据权利要求1或6所述的方法，其中，制备泊洛沙姆的乙醇溶液的方法为：在60-70℃下，将泊洛沙姆溶于乙醇中。

8.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法还包括往体系中添加抗氧化剂。

9.根据权利要求8所述的方法，其中，所述抗氧化剂为维生素E。

10.权利要求1-9中任意一项所述的方法制得的健脑复方软胶囊。