CN106174494A - 一种组合物及其在制备健脑益智的产品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种组合物及其在制备健脑益智的产品中的应用。本发明提供了一种组合物及其在制备健脑益智的产品中的应用，本发明提供的组合物中包括猪脑提取物，该提取物中主要包括小分子多肽或游离氨基酸、脑磷脂、卵磷脂、肽类神经生长因子等，其分子量不超过10kDa，也不低于200Da。本发明将猪脑提取物、磷脂酰丝氨酸和富硒酵母进行复配，具有健脑益智的作用。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种组合物及其在制备健脑益智的产品中的应用。
背景技术
我国第一部老龄事业发展蓝皮书——《中国老龄事业发展报告(2013)》2013年初出版。根据蓝皮书，2012年我国老年人口数量达到1.94亿，老龄化水平达到14.3％，预计2013年老年人口数量突破2亿大关，达到2.02亿，老龄化水平达到14.8％。中国老年人口基数大，人口老龄化进程快，老年人慢性病患病率高，且患病率有每5年增长1倍的趋势该病已经成为不容忽视的一种疾病该病已经成为继心脏病、肿瘤、中风后的第四大死亡病因。老年痴呆轻症患者可有健忘、少言寡语、神志淡漠等人格行为改变，重症患者则神情淡漠、缄默不语、或哭笑无常、举动不经。给病人、家庭和社会发展都带来了巨大的挑战，然而其病因及发病机制尚不明确，加之起病隐匿、病情多样，为治疗和预防带来了极大的困难。因此痴呆已成为我国乃至世界面临的一个日渐严重的问题。
老年期痴呆是老年期常见的一组慢性进行性精神衰退性疾病，在老年人的疾病谱和死亡谱中占有重要的位置。目前认为，老年期痴呆是由于慢性或进行性大脑结构的器质性损害引起的高级大脑功能障碍的一组症候群，是患者在意识清醒的状态下出现的持久的全面的智能减退，表现为记忆力、计算力、判断力、注意力、抽象思维能力、语言功能减退，情感和行为障碍，独立生活和工作能力丧失。老年期痴呆包括老年性痴呆(AD)、血管性痴呆(VD)及混合性痴呆等。
猪脑，性寒、味甘，入心、肝、肾经，含有丰富的卵磷脂、胆固醇，能补脑益髓、镇惊安神、益虚劳，是猪科动物猪的脑髓。中药医学认为，动物脏器气味醇厚，为血肉有情之品，较草本药物更易被人体吸收，因而能迅速起效，尤其在调养、补益方面效果明显，即“同气相求”之理。而动物脏器与人体相应内脏在形态、生化特征、组织成分构成与生理功能等方面具有诸 多相似性，故古人某一脏器的疾病会以相应的脏器治之，即“以脏补脏”和“以形补形”学说。而猪脑在补脑益智这方面的作用尤为突出。
目前治疗AD疾病的药物多为化学药物，其副作用明显，效果也较为有限，故而，以猪脑为材料研制具有健脑益智作用的产品具有重要意义。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种一种组合物及其在制备健脑益智的产品中的应用。
本发明提供的组合物中包括包括猪脑提取物、磷脂酰丝氨酸和富硒酵母；所述猪脑提取物、磷脂酰丝氨酸和富硒酵母中硒元素的质量比为(30～150)：(60～100)：(0.01～0.05)。
一些实施例中，猪脑提取物、磷脂酰丝氨酸和富硒酵母中硒元素的质量比为30：60：0.01。
一些实施例中，猪脑提取物、磷脂酰丝氨酸和富硒酵母中硒元素的质量比为75：80：0.03。
一些实施例中，猪脑提取物、磷脂酰丝氨酸和富硒酵母中硒元素的质量比为150：100：0.05。
本发明提供的组合物中，磷脂酰丝氨酸是以大豆卵磷脂和L-丝氨酸为原料，采用磷脂酶转化反应后，纯化浓缩，再经过二次纯化，干燥后包装制得。其分子式：C13H24NO10P，分子量大小为385.304，作为脑专一性营养物质，PS主要有以下几大功能：(1)提高大脑机能，改善老年痴呆症：意大利、斯堪的纳维亚半岛和其他欧洲国家都广泛应用磷脂酰丝氨酸补充剂来治疗衰老引发的痴呆症及老年记忆损失。(2)帮助修复大脑损伤，有助于修复、更新大脑受损细胞和清除有害物质。(3)缓解压力，促进用脑疲劳的恢复、平衡情绪。(4)保护中枢神经系统，舒缓血管平滑肌细胞，增加脑部供血。(5)舒缓血管平滑肌细胞，增加脑部供血。本发明对磷脂酰丝氨酸的获取方式不做限定，凡以磷脂酰丝氨酸为原料制备本发明所述组合物的实施皆在本发明的保护范围之内。本发明使用的磷脂酰丝氨酸购自上海统园食品技术有限公司。
硒是人体所必需的微量元素，有很重要的生理功能，与人类的健康密切 相关。硒能够预防和抑制肿瘤、抗衰老、维持心血管系统的正常功能，预防动脉硬化和冠心病的出现。缺硒会导致克山病和大骨结病，还会诱发白内障、肝病和胰腺病等等。酵母是人类利用最广的微生物，其蛋白质含量高达50％以上，还含有丰富的B族维生素和多种矿物质，被称为优质营养之源。本发明对富硒酵母的获取方式不做限定，凡以富硒酵母为原料制备本发明所述组合物的实施皆在本发明的保护范围之内。本发明使用的富硒酵母购自安琪酵母股份有限公司。
猪脑提取物能刺激神经元的能量代谢，改善大脑的血液供应，促进有氧代谢，并使葡萄糖更容易通过血-脑脊液屏障，还能降低脑内乳酸浓度，提高警觉程度、注意力、记忆力等，主要用于脑血管疾病引起的脑细胞及功能损伤。
本发明提供的组合物中猪脑提取物的制备方法为将猪脑依次经胃蛋白酶、胰蛋白酶酶解，然后经过滤、超滤、浓缩、冻干，制得猪脑提取物；
胃蛋白酶与猪脑的质量比为(0.1～0.5)：100；酶解温度为38℃～42℃，pH值为1.6～2.0；时间为5h～7h；
胰蛋白酶与猪脑的质量比为(0.1～0.5)：100；酶解温度为38℃～42℃，pH值为7.3～7.7；时间为5h～7h。
在本发明的实施例中，胃蛋白酶与猪脑的质量比为0.2:100；酶解温度为40℃，pH值为1.8；时间为6h。
本发明中，胰蛋白酶与猪脑的质量比为0.2:100；酶解温度为40℃，pH值为7.5；时间为6h。
胃蛋白酶能够将蛋白质分解，其主要作用部位是芳香族氨基酸(如苯丙氨酸、色氨酸或酪氨酸)或酸性氨基酸(如亮氨酸)所组成的肽键。本发明采用的胃蛋白酶的酶活力为1:3000。
胰蛋白酶示肽链内切酶，能够把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切断。且还能限制分解糜蛋白酶原、羧肽酶原、磷脂酶原等其他酶的前体，起活化作用。本发明采用的胰蛋白酶的酶活力为1:12000。
本发明中，酶解前的猪脑经过清洗，并去除结缔组织，然后低温匀浆破碎。所述低温匀浆破碎的温度为0℃～8℃。
过滤的孔径为300目；所述超滤的孔径为10kDa。
过滤采用无纺布，其孔径为300目，过滤后取滤液，弃除残渣。
超滤采用超滤膜，孔径为10kDa，过滤后取滤液，弃除残渣。
经过过滤和超滤后，所得滤液经过浓缩，以方便进行冻干。所述浓缩采用纳滤浓缩，纳滤膜截留分子量不低于200Da，压力为0.8MPa。
纳滤不仅能够将提取物体积浓缩，并且能够去除其中的小分子物质，如无机盐、葡萄糖、蔗糖等。通常，被去除的物质分子量不超过200Da。本发明中，纳滤的次数为3次。
猪脑提取物的分子量不超过10kDa，也不低于200Da，主要成分为小分子多肽或游离氨基酸、脑磷脂、卵磷脂、肽类神经生长因子等。
将浓缩所得的物质再经过过滤，然后进行冻干。
此次过滤的目的是除菌和潜在的小分子病毒，孔径为0.22μm。
冻干的程序为：
-50℃～-35℃常压冷冻2h～4h后，
使真空度低于20Pa，
然后-20℃冷冻3～8小时、0℃保持6～10小时，再15℃～25℃保持2h～4h。
冻干之后，将所得产物粉碎，即为猪脑提取物。
写一些实施例中，冻干的程序为：
-40℃常压冷冻3h后，
使真空度低于20Pa，
然后-20℃冷冻5小时、0℃保持8小时，再20℃保持3h。
冻干之后，将所得产物粉碎，即为猪脑提取物。
所述粉碎至粒径为80～100目。
本发明提供的猪脑提取方法采用低温匀浆，工具酶提取，低分子量超滤相结合的方法，提取小分子多肽类活性物质，方法简便，不涉及过多化学试剂，安全有效，且保证了产品有效成分不被破坏。
本发明将猪脑提取物、磷脂酰丝氨酸和富硒酵母进行复配，所得组合物经实验证明具有健脑益智的作用。
本发明提供的组合物在制备健脑益智的产品中的应用。
本发明还提供了一种保健品，其包括本发明提供的组合物和保健品中可接受的辅料。
其中，本发明提供的组合物的质量分数为66.7％～98％。
在一些实施例中，所述保健品的剂型为胶囊剂；所述辅料为淀粉和滑石粉。
在胶囊剂中，本发明提供组合物的质量分数为55％～62.5％。
本发明提供了一种组合物及其在制备健脑益智的产品中的应用，本发明提供的组合物中包括猪脑提取物，该提取物中主要包括小分子多肽或游离氨基酸、脑磷脂、卵磷脂、肽类神经生长因子等，其分子量不超过10kDa，也不低于200Da。本发明将猪脑提取物、磷脂酰丝氨酸和富硒酵母进行复配，所得组合物经实验证明具有健脑益智的作用。
具体实施方式
本发明提供了一种组合物及其在制备健脑益智的产品中的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的材料和仪器皆为普通市售品，皆可于市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1猪脑提取物的制备
取健康猪脑，清洗、去除结缔组织后，冷冻匀浆。
每1000g匀浆，加入2g胃蛋白酶，调节pH值为1.8，40℃酶解6h；然后加入2g胰蛋白酶调节pH值为7.5，40℃酶解6h。
酶解后匀浆经过300目无纺布过滤弃除残渣，然后经过10kDa的滤膜超滤弃除残渣。
超滤获得的滤液，经过纳滤机纳滤3遍(压力0.8MPa)；
所得滤液经过过滤后，冻干。
冻干程序为-50℃℃冷冻2小时后，开启真空泵。当真空度低于20Pa后，使冻品温度上升至-20℃，恒温3小时，继续对冻品加温至0℃左右，恒温6 小时，再加热至15℃℃以后恒温2小时。
冻干后的产品经粉碎，制得猪脑提取物47.8g，多肽含量25.7％。
实施例2猪脑提取物的制备
取健康猪脑，清洗、去除结缔组织后，冷冻匀浆。
每1000g匀浆，加入1g胃蛋白酶，调节pH值为1.6，42℃酶解7h；然后加入5g胰蛋白酶调节pH值为7.3，42℃酶解5h。
酶解后匀浆经过300目无纺布过滤弃除残渣，然后经过10kDa的滤膜超滤弃除残渣。
超滤获得的滤液，经过纳滤机纳滤3遍(压力0.8MPa)；
所得滤液经过过滤后，冻干。
冻干程序为-35℃冷冻4小时后，开启真空泵。当真空度低于20Pa后，使冻品温度上升至-20℃，恒温8小时，继续对冻品加温至0℃左右，恒温10小时，再加热至25℃℃以后恒温4小时。
冻干后的产品经粉碎，制得猪脑提取物55.3g，多肽含量27.8％。
实施例3猪脑提取物的制备
取健康猪脑，清洗、去除结缔组织后，冷冻匀浆。
每1000g匀浆，加入5g胃蛋白酶，调节pH值为2.0，38℃酶解5h；然后加入1g胰蛋白酶调节pH值为7.7，38℃酶解7h。
酶解后匀浆经过300目无纺布过滤弃除残渣，然后经过10kDa的滤膜超滤弃除残渣。
超滤获得的滤液，经过纳滤机纳滤3遍(压力0.8MPa)；
所得滤液经过过滤后，冻干。
冻干程序为-43℃冷冻3小时后，开启真空泵。当真空度低于20Pa后，使冻品温度上升至-20℃，恒温5.5小时，继续对冻品加温至0℃左右，恒温8小时，再加热至20℃℃以后恒温3小时。
冻干后的产品经粉碎，制得猪脑提取物51.6g，多肽含量26.4％。
实施例4～6组合物的制备
按表1处方制备组合物：
表1实施例2～4
| 猪脑提取物 | 磷脂酰丝氨酸 | 富硒酵母(以硒计) | |
| 实施例4 | 30g(实施例1) | 60g | 0.01g |
| 实施例5 | 75g(实施例2) | 80g | 0.03g |
| 实施例6 | 150g(实施例3) | 100g | 0.05g |
按照表1处方，将各组分粉碎后，混合，制得组合物。其中富硒酵母中硒含量≥2000ppm
对比例1～2组合物的制备
按表2处方制备组合物：
表2对比例1～2
| 猪脑提取物 | 磷脂酰丝氨酸 | 富硒酵母(以硒计) | |
| 对比例1 | 150g(实施例1) | 100g | -- |
| 对比例2 | 150g(实施例1) | -- | 0.05g |
按照表2处方，将各组分粉碎后，混合，制得组合物。其中富硒酵母中硒含量≥2000ppm
实施例5
实验方案
健康雄性SPF级ICR小鼠70只，体重18±2g，按体重平均分为5组，每组14只，分笼饲养。实验组设置和给药方案见表2。各组小鼠连续灌胃给药35天后，进行小鼠跳台实验。
表3药效协同实验给药方案
注：空白对照组给予等量生理盐水。
1、跳台实验
实验共2d，第1天为学习阶段，第2天为测试阶段，学习阶段将小鼠放入DT-200小鼠跳台测试箱内适应环境3min，通32V交流电，记录5min内跳下平台的错误次数作为学习成绩，24h后进行重复跳台实验，记录潜伏期和错误次数，作为小鼠测试成绩。
3、实验结果
猪脑提取物对小鼠学习记忆巩固能力的影响。与NC组比较，猪脑提取物、实施例6和对比例1组第1天错误次数无明显差异，实施例4和对比例1组第2天潜伏期延长(P＜0.05)，错误次数明显减少(P＜0.05)。
表4猪脑提取物对各组小鼠记忆巩固能力的影响(n＝14)
| 组别 | 第1天错误次数 | 第2天潜伏期 | 第2天错误次数 |
| NC | 4.98±2.65 | 50.63±29.76 | 4.56±1.37 |
| 猪脑提取物 | 4.59±2.46 | 92.38±77.12 | 3.22±1.44 |
| 实施例6 | 4.32±2.35 | 147.39±97.45 | 1.35±1.02 |
| 对比例1 | 4.37±2.48 | 135.28±88.29 | 2.36±1.14 |
| 对比例2 | 4.88±2.57 | 96.72±86.74 | 2.97±1.84 |
本发明提供的组合物进行上述动物试验后结果显示能够显著提高记忆力，且其效果显著优于对比例1～2(P<0.05)，并显著优于猪脑提取物(P<0.05)；发明提供的组合物产生了协同作用。本发明实施例4～5制备的组合物的实验效果与实施例6的效果相似。
根据黄继汉等人(药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算。中国临床药理学与治疗学，2004；9(9)：1069-1072.)报道的方法，小鼠等效剂量为成人的12.33倍，即成人用量为3～6mg/kg(成人体重以50kg计)。
实施例7胶囊的制备
按表5处方制备胶囊剂，根据休止角测定结果筛选确定辅料用量比例。
休止角(α)：固定漏斗法。将漏斗固定于水平放置的绘图纸上，漏斗出口距绘图纸的距离为H，把粉体倒入漏斗直到漏斗的出口与圆锥尖端接触，量取圆锥体底部直径(2R)及圆锥体的高，按下式计算休止角：
α＝arctg(H/R)
其中，α为休止角，R为底盘半径。
每1000g胶囊含有：
表5不同处方休止角测定结果
| 组合物来源 | 组合物含量g | 淀粉g | 滑石粉/g | 流动性(休止角°) | |
| 处方1 | 实施例4 | 550 | 315 | 135 | 42 |
| 处方2 | 实施例5 | 550 | 360 | 90 | 44 |
| 处方3 | 实施例6 | 625 | 300 | 75 | 38 |
| 处方4 | 对比例1 | 625 | 262.5 | 112.5 | 36 |
| 处方5 | 对比例2 | 575 | 297.5 | 127.5 | 34 |
按照表5处方，将组合物粉碎后，与淀粉、滑石粉混合，常规方法造粒后灌装胶囊，每个胶囊0.5g。
以上数据说明处方1～3的流动性均较好，适合充填胶囊。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种组合物，其特征在于，包括猪脑提取物、磷脂酰丝氨酸和富硒酵母；所述猪脑提取物、磷脂酰丝氨酸和富硒酵母中硒元素的质量比为(30～150)：(60～100)：(0.01～0.05)。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述猪脑提取物的分子量不超过10kDa，不低于200Da。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述猪脑提取物的制备方法为将猪脑依次经胃蛋白酶、胰蛋白酶酶解，然后经过滤、超滤、浓缩、冻干，制得猪脑提取物；
所述胃蛋白酶与猪脑的质量比为(0.1～0.5)：100；酶解温度为38℃～42℃，pH值为1.6～2.0；时间为5h～7h；
所述胰蛋白酶与猪脑的质量比为(0.1～0.5)：100；酶解温度为38℃～42℃，pH值为7.3～7.7；时间为5h～7h。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述过滤的孔径为300目；所述超滤的孔径为10kDa。
5.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述浓缩采用纳滤，纳滤膜截留分子量不低于200Da，压力为0.8MPa。
6.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，所述冻干的程序为：
-50℃～-35℃常压冷冻2h～4h后，
使真空度低于20Pa，
然后-20℃冷冻3～8小时、0℃保持6～10小时，再15℃～25℃保持2h～4h。
7.权利要求1～6任一项所述的组合物在制备健脑益智的产品中的应用。
8.一种保健品，其特征在于，包括权利要求1～5任一项所述的组合物和保健品中可接受的辅料。
9.根据权利要求8所述的保健品，其特征在于，权利要求1～5任一项所述的组合物的质量分数为66.7％～98％。
10.根据权利要求8所述的保健品，其特征在于，其剂型为胶囊剂；所述辅料为淀粉和滑石粉。
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2016
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