CN113424968A - 一种有助眠功能的酪蛋白酶解物、酪蛋白酶解物组合物及其制备方法 - Google Patents

一种有助眠功能的酪蛋白酶解物、酪蛋白酶解物组合物及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种有助眠功能的酪蛋白酶解物、酪蛋白酶解物组合物及其制备方法，属于保健食品技术领域，所述酪蛋白酶解物平均相对分子量为1000～3000Da；所述的酪蛋白酶解物中十肽YLGYLEQLLR的含量为1.5％～2.5％；所述酪蛋白酶解物组合物，包括以下重量份的组分：所述酪蛋白酶解物1～35份，γ‑氨基丁酸1～30份，茶叶茶氨酸1～20份，酸枣仁粉1～20份，西番莲果粉1～20份和酸樱桃果粉1～20份。本发明提供的酪蛋白酶解物具有显著改善睡眠，提高睡眠质量，减缓紧张情绪的作用；所述酪蛋白酶解物组合物能够有效促进睡眠，缩短入睡时间，与现有技术相比，效果优异。

Description

一种有助眠功能的酪蛋白酶解物、酪蛋白酶解物组合物及其 制备方法
技术领域
本发明属于保健食品技术领域，尤其涉及一种有助眠功能的酪蛋白酶解物、酪蛋白酶解物组合物及其制备方法。
背景技术
当今社会，生活节奏逐渐加快，现代人工作压力日益增大，经常工作加班至深夜；久而久之，睡眠不足已成为现代人的通病，很多人因为紧张，焦虑，压力过大，产生失眠症状，从而影响白天工作、学习，导致精力不济，犯困，长时间还会严重影响人们的健康状况。大部分人出现以下状况：入睡困难，不能熟睡，睡眠时间逐渐减少；早醒、醒后无法入睡；频频从噩梦中惊醒，睡过后精力没有恢复；如果任由其发展下去，就会成为失眠症患者。失眠会使人出现疲劳感、不安、全身不适、无精打采、反应迟钝、头痛、注意力不集中等症状。严重一点会导致精神分裂、抑郁症、焦虑症、植物神经紊乱等各种疾病，以及心血管系统，消化系统的各种问题。
而现在市场上的助眠产品中，药物副作用大，保健食品以褪黑素类为主，但是这些褪黑素类保健食品效果不明显，同时褪黑素属于激素类，长时间服用会出现成瘾、抗性等问题；还有一部分助眠安神类食品，但是效果甚微。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种无副作用，助眠效果显著的酪蛋白酶解物、酪蛋白酶解物组合物及其制备方法。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种有助眠功能的酪蛋白酶解物，所述酪蛋白酶解物平均相对分子量为1000～3000Da；所述的酪蛋白酶解物中十肽YLGYLEQLLR的含量为1.5％～2.5％。
本发明提供了所述酪蛋白酶解物的制备方法，包括以下步骤：
1)将牛奶酪蛋白水溶液超声处理0.5～3h获得待酶解料液；
2)将所述待酶解料液与复合水解酶混合酶解获得酶解料液；
3)超滤所述酶解料液获得酪蛋白酶解物。
优选的，步骤1)中所述牛奶酪蛋白水溶液中牛奶酪蛋白的质量百分含量为4％～10％。
优选的，步骤2)中所述复合水解酶包括碱性蛋白酶，木瓜蛋白酶，菠萝蛋白酶，枯草杆菌蛋白酶和中性蛋白酶中的一种或几种；所述复合水解酶的用量为牛奶酪蛋白质量的0.5‰～1.0‰。
优选的，所述酶解的温度为35℃～60℃，所述酶解的时间为1h～4h，所述酶解的pH值为5.0～9.0。
优选的，步骤3)所述超滤后还包括将超滤后的滤液浓缩、干燥获得酪蛋白酶解物干粉。
本发明还提供了一种改善睡眠功能的酪蛋白酶解物组合物，包括以下重量份的组分：所述酪蛋白酶解物1～35份，γ-氨基丁酸1～30份，茶叶茶氨酸1～20份，酸枣仁粉1～20份，西番莲果粉1～20份和酸樱桃果粉1～20份。
优选的，包括以下重量份的组分：所述酪蛋白酶解物10～25份，γ-氨基丁酸5～20份，茶叶茶氨酸2～15份，酸枣仁粉2～10份，西番莲果粉2～10份和酸樱桃果粉2～10份。
优选的，所述酪蛋白酶解物组合物还包括辅料，所述的辅料包括山梨糖醇、赤藓糖醇、乳糖、微晶纤维素、麦芽糊精、硬脂酸镁、二氧化硅、二氧化钛、三氯蔗糖、果粉、香精、聚维酮K30和明胶中的一种或多种。
本发明还提供了所述的酪蛋白酶解物组合物的制备方法，包括以下步骤：将酪蛋白酶解物、γ-氨基丁酸、茶叶茶氨酸、酸枣仁粉、西番莲果粉和酸樱桃果粉混合获得酪蛋白酶解物组合物。
本发明提供的酪蛋白酶解物平均相对分子量为1000～3000Da；所述的酪蛋白酶解物中十肽YLGYLEQLLR的含量大于等于1.5％，容易被肠道吸收、利用；所述十肽YLGYLEQLLR表达了与GABA(A)受体的亲和力；本发明提供的酪蛋白酶解物具有显著改善睡眠，提高睡眠质量，减缓紧张情绪的作用。
本发明提供的酪蛋白酶解物组合物，包括所述酪蛋白酶解物，γ-氨基丁酸，茶叶茶氨酸，酸枣仁粉，西番莲果粉和酸樱桃果粉；酪蛋白酶解物以牛乳酪蛋白为原料制备获得，其中含有一种提高睡眠质量的作用的十肽YLGYLEQLLR，有显著改善睡眠，提高睡眠质量，减缓紧张情绪的作用；γ-氨基丁酸是一种非蛋白质组成的天然功能性氨基酸，是一种主要的神经抑制剂，有着促进睡眠，提高睡眠质量的作用，能够延长入睡后60min的熟睡时间，改善睡眠质量。茶叶茶氨酸是茶叶中特有的游离氨基酸，在化学构造上与脑内活性物质谷酰胺、谷氨酸相似，是茶叶中生津润甜的主要成份；可以明显促进脑中枢多巴胺释放，提高脑内多巴胺生理活性，从而起到镇静、安神、舒缓人体压力和放松心情的作用。酸枣仁粉有显著的镇静和催眠作用以及抗惊厥作用，其中镇静安眠的有效成分是皂甙类和黄酮类化合物；枣仁皂甙的镇静催眠作用虽不如安定明显，但其效果比安定更持久、平稳，且副作用小，是一种具有独特作用机制的安眠成分；酸枣仁总皂苷、酸枣仁总黄酮可以协同戊巴比妥钠的中枢抑制作用，拮抗神经的中枢兴奋作用。西番莲果粉中含有的丰富的天然活性成分类黄酮是减除烦躁和缓减压力的基本元素，其卓越的舒压功效，有助入睡；是天然的镇定剂，松弛、镇定神经效果特佳；西番莲果粉能够治疗失眠，诱导自然入睡和深度睡眠，消除头痛，晕眩等现象；还舒缓焦虑紧张、抑郁寡欢、神经紧张；缓解神经紧张及极度焦虑所引起的所有不适感；改善情绪极度低落、精神过度焦虑的情况。酸樱桃果粉中还有少量褪黑素成分，同时可以增加人体褪黑素的分泌，从而改善睡眠。
本发明提供的酪蛋白酶解物组合物能够有效促进睡眠，提高睡眠质量，缩短入睡时间，效果显著；与现有技术相比，效果优异。本发明将功能性化合物、新资源食品、传统中药材和功能果粉组合，各原料功能相辅相成，共同作用，经试验验证，酪蛋白酶解物组合物能够促进睡眠，延长深度睡眠时间，缩短入睡时间，尤其是对因压力、焦虑和精神紧张引起的失眠有很好的效果。另外，本发明提供的酪蛋白酶解物组合物可做多种剂型，产品稳定，易于工业化生产。
附图说明
图1为酪蛋白酶解物液相色谱图。
具体实施方式
本发明提供了一种有助眠功能的酪蛋白酶解物，所述酪蛋白酶解物平均相对分子量为1000～3000Da；所述的酪蛋白酶解物中十肽YLGYLEQLLR的含量为1.5％～2.5％。
在本发明中，所述酪蛋白酶解物平均相对分子量优选为1500～2500Da，更优选为2000Da；在本发明中，所述酪蛋白酶解物中十肽YLGYLEQLLR的含量优选为1.8％。
在本发明中，所述酪蛋白酶解物以牛奶酪蛋白为原料制备获得，其中含有一种提高睡眠质量的作用的十肽YLGYLEQLLR，有显著改善睡眠，提高睡眠质量，减缓紧张情绪的作用。
本发明还提供了所述酪蛋白酶解物的制备方法，包括以下步骤：1)将牛奶酪蛋白水溶液超声处理0.5～3h获得待酶解料液；2)将所述待酶解料液与复合水解酶混合酶解获得酶解料液；3)超滤所述酶解料液获得酪蛋白酶解物。
在本发明中，将牛奶酪蛋白水溶液超声处理0.5～3h获得待酶解料液。在本发明中，所述牛奶酪蛋白水溶液优选通过将牛奶酪蛋白与水混合获得，所述牛奶酪蛋白水溶液中牛奶酪蛋白的质量百分含量优选为4％～10％，更优选为5％～9％；本发明对所述牛奶酪蛋白的来源没有特殊限定，采用本领域常规的市售产品或自行制备获得均可，所述牛奶酪蛋白中酪蛋白的质量百分含量优选的大于80％；在本发明具体实施过程中，所述牛奶酪蛋白优选的购自陕西晨明生物科技有限公司，其中酪蛋白的质量百分含量为99％。在本发明中，所述超声处理的功率优选为600～700W，更优选为650W；所述超声处理的时间优选为1～2h；在本发明具体实施过程中，所述超声处理优选的在超声波细胞粉碎机中进行，所述超声波细胞粉碎机优选的购自上海争巧科学仪器有限公司，型号为ZQ-650，功率为650W。
本发明在获得所述待酶解料液后，将所述待酶解料液与复合水解酶混合酶解获得酶解料液。在本发明中，所述复合水解酶包括碱性蛋白酶，木瓜蛋白酶，菠萝蛋白酶，枯草杆菌蛋白酶和中性蛋白酶中的一种或几种；在本发明中，所述碱性蛋白酶，木瓜蛋白酶，菠萝蛋白酶，枯草杆菌蛋白酶和中性蛋白酶的酶活力单位独立优选为40～60万U/g，更优选为50万U/g；所述复合水解酶的用量优选为牛奶酪蛋白质量的0.5‰～1.0‰，更优选为0.6‰～0.9‰。在本发明中，所述酶解的温度优选为35℃～60℃，更优选为40～55℃；所述酶解的时间优选为1h～4h，更优选为2～3h；所述酶解的pH值优选为5.0～9.0，更优选为6～8。在本发明的一个具体实施过程中，所述复合水解酶包括木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、枯草芽孢杆菌蛋白酶和中性蛋白酶；所述木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、枯草芽孢杆菌蛋白酶和中性蛋白酶的质量比例优选为1:1:1:1。
本发明在所述酶解结束后，优选的进行灭酶，所述灭酶的温度优选为70～90℃，所述灭酶的时间优选为30～60min；所述灭酶的作用是使复合水解酶中的各个酶变性失活，从而终止酶解反应。
本发明在获得所述酶解料液后，超滤所述酶解料液获得酪蛋白酶解物。本发明在进行所述超滤之前，优选的对所述酶解料液进行过滤，所述过滤优选为板框过滤，板框过滤后的滤液进行超滤，所述超滤优选的通过超滤柱实现；所述超滤柱的滤芯规格优选为0.02μm；本发明在所述超滤后获得精制酪蛋白酶解物水溶液；本发明在所述超滤后，优选的还包括将超滤后的滤液浓缩、干燥获得酪蛋白酶解物干粉。在本发明中，所述浓缩优选的通过负压浓缩器实现，所述浓缩的真空度优选为0.5～1.0Mpa；本发明对所述浓缩的时间没有特殊限定，当浓缩的料液中酪蛋白酶解物的质量百分含量为40％～50％时，停止浓缩步骤。本发明在所述浓缩之后，优选的还包括对所述浓缩的料液进行灭菌的步骤，所述灭菌优选的采用高温瞬时灭菌，所述灭菌的温度优选为110～130℃，所述灭菌的时间优选为5～10s。本发明在所述灭菌后，优选的进行干燥，所述干燥优选为喷雾干燥，所述喷雾干燥的进口温度优选为160～220℃，出口温度优选为85～100℃；所述喷雾干燥优选的通过喷雾干燥塔实现。
本发明还提供了一种改善睡眠功能的酪蛋白酶解物组合物，包括以下重量份的组分：所述酪蛋白酶解物1～35份，γ-氨基丁酸1～30份，茶叶茶氨酸1～20份，酸枣仁粉1～20份，西番莲果粉1～20份和酸樱桃果粉1～20份。
在本发明中，所述改善睡眠功能的酪蛋白酶解物组合物包括酪蛋白酶解物1～35份，优选为10～25份，更优选为16份；在本发明中，所述酪蛋白酶解物优选的采用上述制备方法制备获得。
在本发明中，所述改善睡眠功能的酪蛋白酶解物组合物包括γ-氨基丁酸1～30份，优选为5～20份，更优选为12份；在本发明中，所述γ-氨基丁酸的纯度优选为95％～99％；本发明对所述γ-氨基丁酸的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可，天津世纪天龙生物科技有限公司，食品级，纯度98％。
在本发明中，所述改善睡眠功能的酪蛋白酶解物组合物包括茶叶茶氨酸1～20份，优选为2～15份，更优选为8份，在本发明中，所述茶叶茶氨酸的纯度优选为95％～99％；本发明对所述茶叶茶氨酸的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可，天津世纪天龙生物科技有限公司，食品级，纯度98％。
在本发明中，所述改善睡眠功能的酪蛋白酶解物组合物包括酸枣仁粉1～20份，优选为2～10份，更优选为5份；在本发明中，所述酸枣仁粉的纯度优选为70％～99％；本发明对所述酸枣仁粉的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可，陕西嘉禾生物科技股份有限公司，食品级，2％酸枣仁皂甙。
在本发明中，所述改善睡眠功能的酪蛋白酶解物组合物包括西番莲果粉1～20份，优选为2～10份，更优选为3份；在本发明中，所述西番莲果粉的纯度优选为50％～99％；本发明对所述西番莲果粉的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可，上海福宽贸易有限公司，西番莲果粉。
在本发明中，所述改善睡眠功能的酪蛋白酶解物组合物包括酸樱桃果粉1～20份，优选为2～10份，更优选为3份；在本发明中，所述酸樱桃果粉的纯度优选为50％～99％；本发明对所述酸樱桃果粉的来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可，上海福宽贸易有限公司，酸樱桃果粉。
在本发明中，所述改善睡眠功能的酪蛋白酶解物组合物的主要成分酪蛋白酶解物和γ-氨基丁酸存在协同作用。GABA是中枢神经，系统的抑制性传递物质，是脑组织中最重要的神经递质之一。其作用是降低神经元活性，防止神经细胞过热，GABA能结合抗焦虑的脑受体并使之激活，然后与另外一些物质协同作用，阻止与焦虑相关的信息抵达脑指示中枢。同时γ-氨基丁酸也是一种主要的神经抑制剂，有着促进睡眠，提高睡眠质量的作用。研究证明，摄入γ-氨基丁酸可延长入睡后60min的熟睡时间，改善睡眠质量。
GAGB为一种神经递质，在神经元内合成。GAGB神经元的分布广泛，所有的皮质层均有GAGB能控制的神经元分布，GABA突触的活动大小和持续时间由质膜蛋白即GABA运转蛋白决定。GAGB神经元分布在基底前脑和下丘脑。并在睡眠时这些神经元的放电增加。中脑和后脑也有该神经元的分布。
GAGB通过与受体结合发挥作用。GAGB受体的缺失会导致睡眠时间推迟，增加睡眠觉醒几率，影响睡眠状态。
然后酪蛋白酶解物中有一种具有令人心情放松促进睡眠的生物活性肽，十肽YLGYLEQLLR，是一个含有十个氨基酸的三维结构多肽，氨基酸序列为：Tyr-Leu-Gly-Tyr-Leu-Glu-Gln-Leu-Leu-Arg(酪氨酸-亮氨酸-甘氨酸-酪氨酸-亮氨酸-谷氨酸-谷氨酰胺-亮氨酸-亮氨酸-精氨酸)，简称YLGYLEQLLR，能够结合GABA的BDZ位点，增强其内源性神经递质GABA作用起效，主要作用的机理是辅助将GABA受体位点结合，使GABA作为神经递质更容易和迅速的通过与受体结合，和神经元作用，从而发挥抑制神经活性的作用。
本发明中，所述酸枣仁粉和茶叶茶氨酸是起到辅助睡眠功能，茶叶茶氨酸是茶叶中特有的游离氨基酸；它可以明显促进脑中枢多巴胺释放，提高脑内多巴胺生理活性，从而起到镇静，安神，舒缓人体压力，放松心情的作用。酸枣仁粉有显著的镇静和催眠作用，可抑制神经的中枢兴奋作用，延长睡眠的深睡阶段。
在本发明中，西番莲果粉和酸樱桃果粉起到促进放松的功能，西番莲果粉可以放松和缓解焦虑，有促进放松和睡眠的作用，对于因紧张引起的失眠、头痛、肌肉疼痛有很好效果，同是对于治疗睡眠失调和焦虑不安也有一定的作用；酸樱桃果粉有一定的增加入睡时间，有促进人体褪黑素的分泌的效果，对人体的睡眠状态起到一个很好的促进和补充的作用。
本发明采用的上述原料相互促进，协同，共同发挥作用。
在本发明中，所述酪蛋白酶解物组合物优选的还包括辅料，所述的辅料包括山梨糖醇、赤藓糖醇、乳糖、微晶纤维素、麦芽糊精、硬脂酸镁、二氧化硅、二氧化钛、三氯蔗糖、果粉、香精、聚维酮K30和明胶中的一种或多种。本发明对所述辅料的种类和用量没有特殊限定，优选的根据具体的剂型进行选择和确定；在本发明中，所述的组合物的剂型优选为片剂、颗粒剂、胶囊剂、粉剂或口服液中一种；所述辅料的总用量优选的为所述酪蛋白酶解物组合物质量的20％～70％。
本发明还提供了所述的酪蛋白酶解物组合物的制备方法，包括以下步骤：将酪蛋白酶解物、γ-氨基丁酸、茶叶茶氨酸、酸枣仁粉、西番莲果粉和酸樱桃果粉混合获得酪蛋白酶解物组合物。在本发明中，优选的将所述原料分别过60～80目筛获得过筛原料，然后将所述过筛原料混合获得酪蛋白酶解物组合物。
在本发明中，所述将酪蛋白酶解物、γ-氨基丁酸、茶叶茶氨酸、酸枣仁粉、西番莲果粉和酸樱桃果粉分别过60～80目筛，收集筛下组分获得过筛原料。本发明对所述过筛的具体操作没有特殊限定，采用本领域常规的过筛操作即可。
本发明在获得所述过筛原料后，将所述过筛原料混合获得酪蛋白酶解物组合物；所述混合优选的在三维混合机中进行，所述混合的转速优选为10～20rpm，所述混合的时间优选为20～40min。当所述酪蛋白酶解物组合物为片剂时，优选的还包括压片的步骤，所述压片优选的通过压片机实现。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
有助眠功能的酪蛋白酶解物的制备：
(a)原料预处理：将牛奶酪蛋白(从陕西晨明生物科技有限公司购置，规格：酪蛋白质量百分含量99％；用纯净水溶解成5％牛奶酪蛋白水溶液，然后用超声波细胞粉碎机(上海争巧科学仪器有限公司，型号ZQ-650，功率650W)超声2h；
(b)酶解：采用复合水解酶进行酶解，复合水解酶为：
木瓜蛋白酶(购自南宁庞博生物工程有限公司，50万U/g)，
菠萝蛋白酶(购自南宁庞博生物工程有限公司50万U/g)，
枯草芽孢杆菌蛋白酶(购自诺维信(中国)生物技术有限公司50万U/g)，中性蛋白酶(购自南宁庞博生物工程有限公司20万U/g)
上述四种酶按照1:1:1:1的质量比例配制获得复合水解酶。
将复合水解酶添加到牛奶酪蛋白水溶液中，添加量为牛奶酪蛋白质量的1‰，酶解温度控制在45℃，酶解时间在3h，溶液pH值控制在6.5；
(c)灭酶：酶解后，将酶解罐的温度升高到85℃，维持40min；
(d)分离精制：将灭酶后的料液从酶解罐中放出，经过板框过滤器(过滤压力0.3～0.4MPa，过滤介质微孔滤膜0.5～1μm)进行一次过滤，再经过超滤柱(滤芯规格0.02μm)进行超滤，得到精制酪蛋白酶解物水溶液；
(e)浓缩：将酪蛋白酶解物水溶液通过负压浓缩器，控制真空度在0.8MPa，当质量浓度在45％，停止浓缩；
(f)灭菌：采用高温瞬时灭菌，温度控制在121℃，维持8s，灭菌后转入中间储罐；
(g)喷雾干燥：将中间储罐中酪蛋白水解物水溶液经泵打入喷雾干燥塔中进行喷雾干燥，进口温度控制在190℃，出口温度在88℃进行收粉获得酪蛋白酶解物。
(h)含量检测：采用高效液相色谱仪(日本岛津Shimadzu型号UFLCXR)对得到的酪蛋白酶解物进行十肽含量检测，结果如图1所示，得到经测试得到十肽(YLGYLEQLLR)的含量为1.85％。
对比例1
复合酶和单一酶对牛奶酪蛋白的酶解试验：
实验用酶：木瓜蛋白酶(南宁庞博生物工程有限公司，50万U/g)、菠萝蛋白酶(南宁庞博生物工程有限公司，50万U/g)、枯草芽孢杆菌蛋白酶(诺维信(中国)生物技术有限公司，50万U/g)、中性蛋白酶(南宁庞博生物工程有限公司，20万U/g)
实验方法：将牛奶酪蛋白水溶液超声处理0.5～3h获得待酶解料液，底物浓度为5％，酶解温度45℃，PH6.0，酶解时间3小时，分别用50万U/g的木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、枯草芽孢杆菌蛋白酶、中性蛋白酶，添加量0.8‰；木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶1:1复合酶添加量0.8‰，枯草芽孢杆菌蛋白酶、中性蛋白酶1:1复合酶添加量0.8‰，以及木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、枯草芽孢杆菌蛋白酶和中性蛋白酶1:1:1:1，添加量0.8‰。
酶解后酪蛋白酶解物的平均分子量和十肽YLGYLEQLLR含量如表1。
表1不同酶酶解牛奶酪蛋白后酪蛋白酶解物的平均分子量和十肽含量
Figure BDA0003155360570000101
由以上数据可以看出，这4种酶酶解后的分子量各不相同，十肽YLGYLEQLLR含量上也有差别，但是通过多种酶的复合作用，酶解后平均分子量降低，十肽含量提高，而4种不同酶共同酶解时，平均分子量最小，同时十肽含量最高，这主要是因为不同蛋白酶针对酪蛋白的酶切位点有差别，如木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶主要针对巯基氨基酸，菠萝蛋白酶无特异性，木瓜蛋白酶针对天冬氨酸、赖氨酸、甘氨酸，枯草芽孢杆菌蛋白酶针对丝氨酸，中性蛋白酶针对金属蛋白，主要是半胱氨酸，谷氨酸的酶切位点。上述实验证实本发明采用的多点酶切比单点酶切得到的产物的平均分子量要小，十肽含量高。
实施例2
一种酪蛋白酶解物组合物
产品组成如下：
实施例1中制备获得的酪蛋白酶解物17％(17kg)，γ-氨基丁酸13％(13kg)，茶叶茶氨酸5％(5kg)，酸枣仁粉5％(5kg)，西番莲果粉2％(2kg)，酸樱桃果粉2％(2kg)，山梨糖醇46％(46kg)、微晶纤维素8％(8kg)、食品用香精0.7％(0.7kg)和硬脂酸镁1.3％(1.3kg)。
制备方法：
将上述酪蛋白酶解物，γ-氨基丁酸，茶叶茶氨酸，酸枣仁粉，西番莲果粉，酸樱桃果粉，分别过80目筛；
按照配方量称取过筛原料及相关辅料(辅料为山梨糖醇、微晶纤维素、食品用香精、硬脂酸镁，主要起到改善口感，增加片剂粘合性，崩解型，光滑性等作用)，投入三维混合机中进行混合，混合转速控制在15r/min，混合时间30min；
压片：将混合粉放入压片机料斗中进行压片，压制成0.6g/片，片剂。
实施例3
一种酪蛋白酶解物组合物
产品组成如下：
酪蛋白酶解物20％(20kg)，γ-氨基丁酸11％(11kg)，茶叶茶氨酸5％(5kg)，酸枣仁粉5％(5kg)，西番莲果粉2％(2kg)，酸樱桃果粉2％(5kg)，山梨糖醇20％(20kg)、麦芽糊精34％(34kg)、食品用香精1％(1kg)。
制备方法：
过筛：将酪蛋白酶解物，γ-氨基丁酸，茶叶茶氨酸，酸枣仁粉，西番莲果粉，酸樱桃果粉，分别过80目筛；
混合：按照配方量称取过筛原料及相关辅料，投入三维混合机中进行混合，混合转速控制在15r/min，混合时间30min获得粉剂。
实施例4
一种酪蛋白酶解物组合物
产品组成如下：
酪蛋白酶解物1％(1kg)，γ-氨基丁酸0.6％(0.6kg)，茶叶茶氨酸0.4％(0.4kg)，酸枣仁粉0.4％(0.4kg)，西番莲果粉0.1％(0.1kg)，酸樱桃果粉0.1％(0.1kg)，辅料：苹果果粉5％(5kg)，三氯蔗糖0.1％(0.1kg)、柠檬酸0.3％(0.3kg)、苹果香精0.1％(0.1kg)；水91.9％(91.9kg)。
制备方法：
2)配料：将纯水加入配料罐中，将酪蛋白酶解物，γ-氨基丁酸，茶叶茶氨酸，酸枣仁粉，西番莲果粉，酸樱桃果粉，投入配料罐，搅拌混合30min。
3)过滤：将复配料液经过滤芯式过滤机过滤。
4)灭菌：将料液通过UHT高温灭菌。
5)灌装：通过自动灌装机，灌装成口服液。
实施例5
一种酪蛋白酶解物组合物
产品组成如下：
酪蛋白酶解物16％(16kg)，γ-氨基丁酸12％(12kg)，茶叶茶氨酸8％(8kg)，酸枣仁粉5％(5kg)，西番莲果粉3％(3kg)，酸樱桃果粉3％(3kg)，辅料：苹果果粉5％(5kg)，三氯蔗糖0.1％(0.1kg)、柠檬酸0.3％(0.3kg)、苹果香精0.1％(0.1kg)；水47.5％(47.5kg)。
制备方法：
2)配料：将纯水加入配料罐中，将酪蛋白酶解物，γ-氨基丁酸，茶叶茶氨酸，酸枣仁粉，西番莲果粉，酸樱桃果粉，投入配料罐，搅拌混合30min。
3)过滤：将复配料液经过滤芯式过滤机过滤。
4)灭菌：将料液通过UHT高温灭菌。
5)灌装：通过自动灌装机，灌装成口服液。
实施例6
小鼠睡眠时间延长试验
实验样品
将实施例3制备获得的酪蛋白酶解物组合物干粉，以蒸馏水作为溶剂，配制成浓度为0.01g/ml的受试物。
实验动物
昆明小鼠120只，体重20g左右，购自北京华阜康生物科技有限公司。小鼠分笼喂养，自由饮食。
剂量选择：延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间实验、戊巴比妥钠阙下剂量催眠实验及巴比妥钠睡眠潜伏期实验，均设6，12，18mg 3个剂量组(分别相当于人体推荐量的10、20、30倍)，同时设等体积的蒸馏水阴性对照组。
主要仪器与试剂实验用玻璃槽、石英钟。中国医药(集团)上海化学试剂公司生产戊巴比妥钠。
实验方法
延长戊巴比妥钠诱导的小鼠睡眠时间实验，对小鼠进行腹腔注射受试物0.5ml，注射15min后，按10ml/kg腹腔注射戊巴比妥钠48mg/kg，以小鼠翻正反射消失为指标，观察受试物能否延长戊巴比妥睡眠时间。
戊巴比妥钠阙下剂量催眠实验，小鼠进行腹腔注射受试物0.5ml，注射15min后，按10ml/kg给各组动物腹腔注射巴比妥钠35mg/kg，记录30min内翻正反射消失达1min以上的入睡小鼠。
戊巴比妥钠睡眠潜伏期实验，小鼠进行腹腔注射受试物0.5ml，注射15min后，按10ml/kg给各组动物腹腔注射巴比妥钠320mg/kg，以翻正反射消失为指标，观察受试物对巴比妥钠睡眠潜伏期的影响。
结果：酪蛋白酶解物组合物对小鼠的影响如表1～3所示。
表1酪蛋白酶解物组合物对小鼠睡眠时间的影响
Figure BDA0003155360570000131
表2酪蛋白酶解物组合物对小鼠睡眠发生率的影响
Figure BDA0003155360570000132
Figure BDA0003155360570000141
表3酪蛋白酶解物组合物对小鼠睡眠潜伏期的影响
Figure BDA0003155360570000142
由上述表1～3的结果可以看出，通过本发明提供的酪蛋白酶解物组合物，可以明显的增加小鼠睡眠时间，增加小鼠入睡几率，缩短小鼠的睡眠潜伏期，具有促进睡眠，缩短入睡时间的作用。
实施例7
缩短入睡时间试验
(1)志愿者入选标准
年龄25～50岁。
②有失眠、入睡困难，睡眠时间短等症状；
③连续服用两周；
(2)治疗方案
空白组：不添加功效成分，仅用麦芽糊精压片，共25例。
对照组：汤臣倍健褪黑素片组，每次服用1片，睡前1小时服用，共25例。
单一组分组：酪蛋白酶解物片剂，含量17％，0.6g/片，每次服用3片，睡前1小时服用，共25例。
双组份组：采用酪蛋白酶解物和γ-氨基丁酸组合物，含量酪蛋白酶解物含量17％，γ-氨基丁酸13％，0.6g/片，每次服用3片，睡前1小时服用，共25例。
试验组：本发明实施例2制备的酪蛋白酶解物组合物片剂，0.6g/片，每次服用3片，睡前1小时服用，共25例。
(3)使用方法
以上五组均口服，睡前1小时服用。连续服用疗程2周；这三组按照使用说明进行使用。
(4)治疗结果
表4三组志愿者治疗前1周，治疗后1周和2周入睡时间(h)比较
Figure BDA0003155360570000151
表5三组志愿者治疗前1周，治疗后1周和2周睡眠时间(h)比较
Figure BDA0003155360570000152
由上述实施例结果可以看出，使用单一组分酪蛋白酶解物减少入睡时间和延长睡眠时间的助眠效果均低于对照组，而酪蛋白酶解物γ-氨基丁酸双组份要优于对照组和单组分，而采用本实施例中的酪蛋白酶解物组合物配比后，减少入睡时间和延长睡眠时间的效果都要明显优于单、双组份和对照组。这说明本发明组合物中各个组分协同增效的作用明显，比单一或部分组分的效果要好。
因此可以得出，本发明提供的酪蛋白酶解物组合物，可以明显的增加睡眠困难人群的睡眠时间，缩短入睡时间，具有促进睡眠，缩短入睡时间的作用，其效果可以超过同类的褪黑素保健食品。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种有助眠功能的酪蛋白酶解物，其特征在于，所述酪蛋白酶解物平均相对分子量为1000～3000Da；所述的酪蛋白酶解物中十肽YLGYLEQLLR的含量为1.5％～2.5％。
2.权利要求1所述酪蛋白酶解物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将牛奶酪蛋白水溶液超声处理0.5～3h获得待酶解料液；
2)将所述待酶解料液与复合水解酶混合酶解获得酶解料液；
3)超滤所述酶解料液获得酪蛋白酶解物。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述牛奶酪蛋白水溶液中牛奶酪蛋白的质量百分含量为4％～10％。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述复合水解酶包括碱性蛋白酶，木瓜蛋白酶，菠萝蛋白酶，枯草杆菌蛋白酶和中性蛋白酶中的一种或几种；所述复合水解酶的用量为牛奶酪蛋白质量的0.5‰～1.0‰。
5.根据权利要求2或4所述的制备方法，其特征在于，所述酶解的温度为35℃～60℃，所述酶解的时间为1h～4h，所述酶解的pH值为5.0～9.0。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤3)所述超滤后还包括将超滤后的滤液浓缩、干燥获得酪蛋白酶解物干粉。
7.一种有助眠功能的酪蛋白酶解物组合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：权利要求1所述的酪蛋白酶解物或权利要求2～6任意一项制备方法制备获得酪蛋白酶解物1～35份，γ-氨基丁酸1～30份，茶叶茶氨酸1～20份，酸枣仁粉1～20份，西番莲果粉1～20份和酸樱桃果粉1～20份。
8.根据权利要求7所述的酪蛋白酶解物组合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：权利要求1所述的酪蛋白酶解物或权利要求2～6任意一项制备方法制备获得酪蛋白酶解物10～25份，γ-氨基丁酸5～20份，茶叶茶氨酸2～15份，酸枣仁粉2～10份，西番莲果粉2～10份和酸樱桃果粉2～10份。
9.根据权利要求7或8所述的酪蛋白酶解物组合物，其特征在于，所述酪蛋白酶解物组合物还包括辅料，所述的辅料包括山梨糖醇、赤藓糖醇、乳糖、微晶纤维素、麦芽糊精、硬脂酸镁、二氧化硅、二氧化钛、三氯蔗糖、果粉、香精、聚维酮K30和明胶中的一种或多种。
10.权利要求7～10任意一项所述的酪蛋白酶解物组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将酪蛋白酶解物、γ-氨基丁酸、茶叶茶氨酸、酸枣仁粉、西番莲果粉和酸樱桃果粉混合获得酪蛋白酶解物组合物。
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