CN109549923A - 1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统及其制备方法和应用 - Google Patents

1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109549923A
CN109549923A CN201811228643.6A CN201811228643A CN109549923A CN 109549923 A CN109549923 A CN 109549923A CN 201811228643 A CN201811228643 A CN 201811228643A CN 109549923 A CN109549923 A CN 109549923A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cineole
delivery system
drug delivery
emulsion
micro emulsion
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201811228643.6A
Other languages
English (en)
Inventor
陶玲
沈祥春
张敏
姜丰
李婉蓉
贺智勇
周雪
吴林菁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guizhou Medical University
Original Assignee
Guizhou Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guizhou Medical University filed Critical Guizhou Medical University
Priority to CN201811228643.6A priority Critical patent/CN109549923A/zh
Publication of CN109549923A publication Critical patent/CN109549923A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/14—Esters of carboxylic acids, e.g. fatty acid monoglycerides, medium-chain triglycerides, parabens or PEG fatty acid esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/107—Emulsions ; Emulsion preconcentrates; Micelles
    • A61K9/1075—Microemulsions or submicron emulsions; Preconcentrates or solids thereof; Micelles, e.g. made of phospholipids or block copolymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明公开了1,8‑桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统及其制备方法和应用，1,8‑桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统，包括1,8‑桉叶油素、由乳化剂和助乳化剂组成的混合溶液和双蒸水，所述1,8‑桉叶油素与由乳化剂和助乳化剂组成的混合溶液的质量比为3:7～27，所述混合溶液的乳化剂和助乳化剂的质量比为1:1～3。其制备方法为将1,8‑桉叶油素、乳化剂和助乳化剂混合均匀，在搅拌状态下加入双蒸水，得成品。应用于制备治疗心脑血管疾病药物。本发明中的1,8‑桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统可以获得适宜的临床应用方式，拓展了1,8‑桉叶油素在临床上的应用。

Description

1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及自微乳和亚微乳给药系统技术领域，特别是1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统及其制备方法和应用。
背景技术
心脑血管疾病是引起人类死亡的第一大类疾病，具有疾病周期长，致残率、致死率高等特征。Lancet研究统计表明，2016年全球有1760万人死于心脑血管疾病，位居疾病死亡人数的首位；2006年至2016年，全球因心脑血管疾病引起的死亡人数增加了14.5％，并有不断增高的趋势。80年代以来，我国心脑血管疾病发病率一直保持持续上升的现象，2004年至今，我国因心脑血管疾病住院而产生的总费用的年均增长速度甚至远高于GDP增速，2014年仅住院费用就超过400亿，之后每年递增，还有不菲的后期治疗和家庭护理费用的产生。
各种因素造成的血管内膜损伤是引起动脉粥样硬化、血栓性疾病等恶性心脑血管疾病病变发生的始动环节。血管内膜不仅只是血液流动的器官，还在维持正常血管稳态中起着至关重要的作用，可以调节血管形成过程中的多种信号表达，同时还具有抗血小板、抗炎、抗增殖、抗氧化等作用。心脏搭桥手术、氧化应激和炎症等导致的机械、化学、免疫等因素反复刺激下，血管内皮组织结构改变将促进血管间黏附分子-1(VCAM-1)以及单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)等物质的释放，导致血液中的脂质和平滑肌细胞迁移致受损内膜以下，经过一系列的连锁反应和恶性循环最终形成血栓，引发心脑血管功能的障碍。
1,8-桉叶油素(1,8-cineole,CIN)是一种广泛存在于桉树叶、月桂叶、迷迭香里的无色液体，也是贵州民族药艳山姜Alpinia zer umbet(Pets.)Burtt.et Smith挥发油的主要成分之一，被广泛用作精油的香料，食用香精，驱蚊和杀虫剂，工业制品中不良气息的掩盖剂。同时还具有改善胰腺炎、结肠炎、抗增殖及抗胆固醇生成、改善非酒精性脂肪性肝炎、保护胃炎、舒张血管、抑制呼吸道炎症等作用。此外，实验室前期研究表明，其具有保护脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤作用。
但由于其与水不混溶，挥发性强，多数传统剂型难以获得适宜的临床应用方式，极大的限制了其在临床上的应用。因此，1,8-桉叶油素的传统剂型难以获得适宜的临床应用方式，限制了1,8-桉叶油素在临床上的应用。
发明内容
本发明的目的，在于提供了1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统及其制备方法和应用。本发明中的1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统可以获得适宜的临床应用方式，拓展了1,8-桉叶油素在临床上的应用。
本发明的技术方案：1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统，包括1,8-桉叶油素、由乳化剂和助乳化剂、双蒸水组成的混合溶液，所述1,8-桉叶油素与由乳化剂和助乳化剂组成的混合溶液的质量比为3:7～27，所述混合溶液的乳化剂和助乳化剂的质量比为1:1～3，所述双蒸水的加入量为使1,8-桉叶油素和由乳化剂和助乳化剂组成的混合溶液混合后由澄清变为浑浊，再由浑浊变为澄清。
前述的1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统中，所述乳化剂为KolliphorHS15、磷脂与F68的混合物或磷脂与Kolliphor HS 15的混合物，所述磷脂与F68或Kolliphor HS15的质量比为1:3～ 7；所述助乳化剂为乙醇、1,2-丙二醇或正丁醇。
前述的1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统中，所述乳化剂为KolliphorHS15，所述助乳化剂为乙醇，按质量份计数，所述1, 8-桉叶油素为9份，Kolliphor HS15为7份，乙醇为14份。
前述的1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统中，所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的平均粒径为10～1000nm，所述1, 8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的PDI为0.1～0.9，所述1,8- 桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的Zeta电位为-60～+60mV。
前述的1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统中，所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的平均粒径为38nm，所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的PDI为0.2，所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的Zeta电位为-9mV；或所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的平均粒径为220nm，所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的PDI为0.6，所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的Zeta电位为-44mV。
前述的1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统中，所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的制备方法，将1,8-桉叶油素、乳化剂和助乳化剂的混合溶液混合均匀，在搅拌状态下加入双蒸水，得成品；或将1,8-桉叶油素、乳化剂和助乳化剂的混合溶液混合均匀，加入双蒸水，高速匀质，再高压均质，得成品。
前述的1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统在制备治疗心脑血管及其他疾病药物中的应用。
前述的应用中，所述心脑血管疾病，是由高血压、血栓、高血脂或血管内皮损伤引起的心脑血管疾病。
前述的应用中，取1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统，加入一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂，制备成各种治疗心脑血管疾病的药物制剂。
前述的应用中，所述治疗心脑血管疾病的药物制剂为脂微球，软胶囊剂或口服液，或者注射制剂，或者喷雾制剂。
与现有技术比较，本发明将1,8-桉叶油素制成1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统，所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统，在生理条件下(主要是胃肠液中)能自发形成微乳，具有热力学稳定，比其他常规制剂制备简单，分散迅速，吸收快，可以显著提高治疗药物的水溶性、稳定性、有效载荷和生物利用度等优点，并且可以避免较早地与生理环境接触而降低药物的毒性。本发明中的制备方法，制得的1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统分散均匀，无黏粘。所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统，经急性毒性试验验证为低毒，可应用于心脑血管疾病治疗药物，尤其是由高血脂或血管内皮损伤引起的心脑血管疾病治疗药物。本发明中的1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统可以获得适宜的临床应用方式，拓展了1, 8-桉叶油素在临床上的应用。
附图说明
图1为1,8-桉叶油素自微乳给药系统粒径分布；
图2为1,8-桉叶油素自微乳给药系统Zeta电位结果；
图3为1,8-桉叶油素自微乳给药系统局部×25000透射电镜图；
图4为1,8-桉叶油素自微乳给药系统整体×4000透射电镜图；
图5为实验动物注射P40724h后的TC水平，n＝10，图中的标记为#-P<0.05，##-P<0.01VS正常对照组；*-P<0.05，**-P<0.01VS 模型对照组；
图6为实验动物注射P40724h后的TG水平，n＝10，图中的标记为#-P<0.05，##-P<0.01VS正常对照组；*-P<0.05，**-P<0.01VS 模型对照组；
图7为实验动物注射P40724h后的HDL水平，n＝10，图中的标记为#-P<0.05，##-P<0.01VS正常对照组；*-P<0.05，**-P<0.01V S模型对照组；
图8为实验动物注射P40724h后的LDL水平，n＝10，图中的标记为#-P<0.05，##-P<0.01VS正常对照组；*-P<0.05，**-P<0.01V S模型对照组；
图9为1,8-桉叶油素自微乳给药系统对促炎细胞因子IL-1β的影响，图中的标记为，##-p﹤0.01，与空白组比较，*-p﹤0.05，** -p﹤0.01，与LPS组比较；
图10为1,8-桉叶油素自微乳给药系统对促炎细胞因子IL-6的影响，图中的标记为，##-p﹤0.01，与空白组比较，*-p﹤0.05，** -p﹤0.01，与LPS组比较；
图11为1,8-桉叶油素自微乳给药系统对促炎细胞因子IL-8的影响，图中的标记为，##-p﹤0.01，与空白组比较，*-p﹤0.05，** -p﹤0.01，与LPS组比较；
图12为1,8-桉叶油素自微乳给药系统抗炎细胞因子IL-10的影响，图中的标记为，##-p﹤0.01，与空白组比较，*-p﹤0.05，**-p ﹤0.01，与LPS组比较；
图13为正常对照组(×400)的H&E染色组织病理切片结果；
图14为模型组(×400)血管内皮细胞变性、形态.不规则、皱缩凸起的H&E染色组织病理切片结果；
图15为模型组(×400)中层结构紊乱的H&E染色组织病理切片结果；
图16为1,8-桉叶油素自微乳给药系统低剂量组(×400)中膜层结构紊乱的H&E染色组织病理切片结果；
图17为1,8-桉叶油素自微乳给药系统中剂量组(×400)的H&E 染色组织病理切片结果；
图18为1,8-桉叶油素自微乳给药系统高剂量组(×400)的H&E 染色组织病理切片结果；
图19为阳性组1(×400)的H&E染色组织病理切片结果；
图20为辅料组(×400)局灶硬化的H&E染色组织病理切片结果；
图21为实验动物的VCAM-1的表达水平；
图22为实验动物的VCAM-1的表达含量；
图23为实验动物的NF-κB p-p65的表达水平；
图24为实验动物的NF-κB p-p65的表达含量；
图25为实验动物的PPAR-γ的表达水平；
图26为实验动物的PPAR-γ的表达含量。
具体实施方式
以下是本发明的实验例。
实验例1，CIN-SMEDDS的制备及其药剂学性能考察。
1.方法
1.1CIN-SMEDDS的制备
1.1.1伪三元相图的绘制
采用乳化剂滴定法，称取质量比为Km的乳化剂(S)与助乳化剂(A)，形成乳化剂与助乳化剂的混合溶液(S/A)。另取9份总质量为 0.5g的双蒸水(W)与CIN(O)，并且水与CIN的比例分别为9:1，8:2，7:3，6:4，5:5，4:6，3:7，2:8，1:9，振摇后形成浑浊溶液，向其中滴加混合溶液，记录溶液由浑浊变为澄清时各组分的质量，以乳化剂与助乳化剂的混合溶液为一个顶点，以油相及双蒸水为另外两个顶点，用orgin7.5软件绘制伪三元相图。根据微乳区域占比越大，乳化剂乳化能力越强的原理，使用IPP 6.0软件定量计算微乳区域占比，以形成微乳区域占比为指标，优化CIN-SMEDDS处方。
微乳区域占比＝微乳区域面积/总面积
1.1.2乳化剂种类的考察
根据预实验，使用乙醇作为助乳化剂，固定乳化剂与助乳化剂的比例为1:1，考察磷脂:F68＝1:5，磷脂:Kolliphor HS15＝1:5的混合乳化剂，以及单独使用Kolliphor HS15作为乳化剂对微乳区域占比的影响。
1.1.3助乳化剂种类的考察
根据上述考察结果，使用Kolliphor HS15作为乳化剂，固定乳化剂与助乳化剂的比例为1:1，考察助乳化剂分别为乙醇，1,2-丙二醇、丙三醇、正丁醇、聚乙二醇(PEG400，分子量为400)对微乳区域占比的影响。
1.1.4乳化剂与助乳化剂比例的考察
根据上述考察结果，使用Kolliphor HS15为乳化剂，助乳化剂为乙醇，考察乳化剂与助乳化剂的比例分别为1:1，1:2，1:3时对形成微乳区域占比的影响。
1.1.5油相与乳化剂比例考察
在上述处方考察基础上，另取9份总质量为1g的CIN及乳化剂/助乳化剂的混合溶液，并且CIN与混合溶液的比例分别9:1，8:2， 7:3，6:4，5:5，4:6，3:7，2:8，1:9，室温下滴加双蒸水，记录其由澄清变为浑浊，再由浑浊变为澄清时加入水的量。分别以乳化剂/ 助乳化剂的混合溶液、水以及CIN为顶点，用orgin7.5绘制伪三元相图。
1.1.6CIN-SMEDDS的制备
终上所述，将质量比为9:7:14的CIN，Kolliphor HS15以及乙醇混合均匀，搅拌状态下加入处方量的水，即得淡蓝色透明的CIN-S MEDDS。
1.2CIN-SMEDDS药剂学性质考察
1.2.1外观形态的考察
取CIN-SMEDDS，用适量双蒸水稀释数倍后放置于铜网上，用滤纸吸去多余的水，用2％的磷钨酸钠复染15min，晾干后置于透射电镜下观察。
1.2.2CIN-SMEDDS粒径及Zeta电位的考察
取CIN-SMEDDS，用适量双蒸水稀释数倍后用激光粒度测定仪及Z eta电位测定仪分别测定其平均粒径，PDI及Zeta电位。
2.结果：
2.1乳化剂的考察结果
实验过程中观察到，F68在常温下放置时间稍长会析出，IPP 6. 0软件定量微乳区域占比结果表明，磷脂与F68作为乳化剂形成的微乳区域面积较小，单独使用KolliphorHS15作为乳化剂形成的微乳区域占比最大，所以选择Kolliphor HS15作为乳化剂进行下一步研究。
2.2助乳化剂的考察结果
IPP 6.0软件定量微乳区域占比结果表明，使用乙醇作为助乳化剂的相图中，微乳区域占比明显大于采用1,2-丙二醇和正丁醇所得微乳区域占比。并且，用丙三醇和PEG400作为助乳化剂无法形成透明澄清或者淡蓝色澄清的微乳，所以选择乙醇作为助乳化剂进行下一步考察。
2.3乳化剂与助乳化剂比例(Km)的考察结果
随着乳化剂与助乳化剂的比例从1:1到1:2，微乳区域占比增大，但是到1:3时，微乳区域占比反而下降(平均粒径增大)。因此选择混合乳化剂与助乳化剂的比例为1:2进行下一步考察。
2.4CIN-SMEDDS处方的确定
在水相比例不断增大的过程中，只有混合乳化剂与CIN质量比为 9:1，8:2，7:3时才能形成微乳(6:4，5:5，4:6平均粒径增大)，为了获得较大的载药量，确定CIN与混合乳化剂的比例为3:7。
2.5CIN-SMEDDS的药剂学性质考察
2.5.1平均粒径及Zeta电位
CIN-SMEDDS的平均粒径为38.14±1.47nm，PDI为0.208± 0.036，Zeta电位为-9.312±1.764mV(n＝3)。见图1和图2。
2.5.2外观形态
CIN-SMEDDS为淡蓝色的透明液体。透射电镜结果显示，CIN-SME DDS为圆形或者类圆形，分散均匀，无黏粘，见图3和图4。
本次实验优化制备得到的CIN-SMEDDS的平均粒径适宜，粒径分布小，Zeta电位表明其具有较好的稳定性，透射电镜结果观察可知乳滴之间分散状态好，提示考察所得CIN-SMEDDS的处方和工艺可行。
实验例2，CIN-SMEDDS的急性毒性试验
本次实验各剂量组组距呈等比数级，随着给药剂量的增大，小鼠死亡数逐渐增加，呈正态分布，并且最低剂量组死亡率0％<20％，最大剂量组死亡率为100％>80％，符合改良寇式法的条件。Bliss法程序计算结果表明，单次口服灌胃给药后，CIN-SMEDDS对昆明种小鼠的半数致死量LD50为2998.9mg/kg，95％的置信区间为2679.9～335 6.0mg/kg(Feiller精确校正)。
此次实验中，在给予CIN-SMEDDS 0.5h后，所有小鼠自发活动减少，但无痉挛现象。给药1h后，所有小鼠静止俯卧地面，不进食进水，自主活动程度降低，与剂量呈相关性。小鼠随着剂量的不同，苏醒恢复活动的时间不同，剂量越小，恢复活动的时间越短，但某些大剂量组的小鼠仍然呈静止状态，最终死亡。解剖死亡小鼠的主要器官，心、肝、脾、肺、肾、脑等组织均正常，偶见一只小鼠肠道胀气，部分肠道肿胀，发黑。
3.讨论
IC50实验考察结果表明，3.20mg/ml的CIN-SMEDDS中含有2.2 4mg/ml的KolliphorHS15/ethanol mixture以及0.96mg/ml的CI N，3.20mg/ml的CIN-SMEDDS以及2.24mg/ml的Kolliphor HS 15/ethanol mixture对培养1天的Caco-2细胞的存活率分别为9.5 7±4.10％and 13.65±5.22％，对培养3天的Caco-2细胞的存活率分别为26.57±2.76％and25.51±2.00％，而0.96mg/ml 的CIN对Caco-2细胞没有显著的损伤作用(对于培养1天的Caco-2 细胞的存活率为96.55±8.32％，对于培养3天的Caco-2细胞的存活率为104.38±3.19％)。
根据全球统一毒性分级系统(GHS)规定LD50在500～5000mg /kg(经口)属于低毒物质。小鼠急性毒性试验结果表明，CIN-SMED DS的LD50为2998.9mg/kg，95％的置信区间为2679.9～3356.0mg /kg(Feiller精确校正)，因此CIN-SMEDDS属于低毒物质。
实验例3，CIN-SMEDDS改善P407所致急性高血脂小鼠的研究。
1.3小鼠急性高血脂模型的建立及给药方案
连续3d给予相应药物预治疗，给药体积为0.1mL/10g。除空白对照组外的其他各组，于末次给药后1h腹腔注射300mg/mL的P 407溶液诱导急性高血脂模型，造模24h后摘除眼球法取血，所得血液在5000rpm下离心15min，取离心后上清适量，按照试剂盒说明书的方法测定总胆固醇(T-CHO)、甘油三酯(TG)、高密度蛋白脂胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量。取血前12 h禁食不禁水。
2.结果
2.1CIN-SMEDDS对小鼠急性高血脂的影响
腹腔注射P407后，与正常对照组相比，模型组的TC，TG，LDL- C水平显著升高，具有统计学意义(P<0.01)，而HDL-C水平显著降低，具有统计学意义(P<0.05)，提示成功建立了小鼠急性高血脂模型。在给予中浓度和高浓度的CIN-SMEDDS或者苯扎贝特预治疗后，相应的指标都有所逆转。结果见图5至图8。
实验例4，CIN-SMEDDS改善LPS诱导小鼠内皮损伤的研究。
1.3小鼠血管内皮损伤模型的建立及给药方案
连续7天灌胃给予相应药物，给药体积为0.1mL/10g。除正常对照组外，其余组末次给药30min后腹腔注射1mg/kg的脂多糖诱导小鼠血管内皮损伤，12h后摘除眼球法取血，并解剖取出小鼠胸主动脉。血液在5000rpm下离心15min，取血清适量于-20℃下保存，取一半胸主动脉于-80℃保存，用于后续的蛋白印迹分析，另一半用4％中性甲醛保存用于H&E染色病理切片。
1.4炎症因子IL-1β，IL-6，IL-8和IL-10的测定
严格按照试剂盒说明书方法测定各组血清中IL-1β、IL-6、IL- 8、IL-10的含量。
2.1IL-1β，IL-6，IL-8，IL-10结果
小鼠腹腔注射LPS(1mg/kg)12h后，与正常对照组小鼠对比，模型组小鼠血清中IL-1β、IL-6和IL-8的含量显著增加(P<0.01)， IL-10的含量显著减少(P<0.01)，具有统计学意义，提示LPS可以诱导促炎细胞因子的分泌和抑制抗炎细胞因子的表达。CIN-SMEDDS 和地塞米松预处理小鼠7d以后，小鼠血清中IL-1β、IL-6和IL-8 的含量降低(P<0.01)，IL-10的含量显著升高(P<0.01)，证实CIN -SMEDDS改善LPS诱导炎症细胞因子的表达。结果如图9至图12所示。
2.2H&E染色组织病理切片结果
在本研究结果中，正常小鼠的血管索排列整齐，结构完整，细胞间连接完整，粘膜光滑，没有明显的纤维或斑块附着(图13)。模型组小鼠血管内皮细胞变性、形态不规则、皱缩凸起(图14)，中膜层细胞增厚、间隙增宽，纤维增生，平滑肌细胞增生，排列紊乱(图1 5)。使用CIN-SMEDDS或地塞米松治疗后，虽然在低剂量CIN-SMEDDS 组(100mg/kg)组中仍然可见细胞变性和血管平滑肌层增生(图16)，但是在中剂量和高剂量CIN-SMEDDS(150，300mg/kg)组和地塞米松治疗组中(图17至图19)均未见明显病变，图20为辅料组(×40 0)局灶硬化的H&E染色组织病理切片结果。
2.3Western blot结果
与正常对照组比较，模型组小鼠中具有促炎作用的的NF-κB p- p65，VCAM-1的表达增加(P<0.01)，同时具有抗炎作用的PPAR-γ的表达降低(P<0.01)。与模型组小鼠相比，在使用CIN-SMEDDS和地塞米松预治疗后，小鼠中NF-κB p-p65和VCAM-1的表达水平以剂量依赖性的方式降低，同时PPAR-γ的表达水平上调，如图21至图26所示。
动脉粥样硬化是由血液中的脂质以及代谢废物等聚集和堆积在动脉内膜引起。VCAM-1在脂质与动脉内膜的粘附中起着重要作用，促进白细胞与内皮细胞牢固结合，然后易行至内膜下。在本研究中，我们考察了PPAR-γ，NF-κB p-p65和VCAM-1在LPS诱导的小鼠中的表达(图21至图26)，结果表明，使用CIN-SMEDDS预治疗后NF- κB p-p65的表达显著降低(图23、图24)，而PPAR-γ的表达却增加(图25、图26)，VCAM-1也呈剂量依赖性降低(图21、图22)，具有统计学意义。这些结果提示桉叶油醇能改善LPS诱导的小鼠炎症反应。该结果与与文献研究一致，即NF-κB信号通路在LPS诱导后被显著激活。NF-κB作为最常被研究的转录因子之一，可以调节内皮细胞，血管平滑肌细胞和巨噬细胞中多种促炎症和促动脉粥样硬化相关物质的表达。NF-κB的激活可以导致VCAM-1的表达，趋化因子和细胞因子的产生，使炎症反应增加，血管内皮损伤进一步加重。多项研究表明，PPAR-γ通过抑制NF-κB来降低VCAM-1的表达，从而减少单核细胞黏附到内皮细胞上以抑制炎症。
以下是本发明的实施例。
实施例1。1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统，包括1,8- 桉叶油素、由乳化剂和助乳化剂组成的混合溶液和双蒸水，所述1,8- 桉叶油素与由乳化剂和助乳化剂组成的混合溶液的质量比为3:7，所述混合溶液的乳化剂和助乳化剂的质量比为1:2，所述双蒸水的加入量为使1,8-桉叶油素和由乳化剂和助乳化剂组成的混合溶液混合后由澄清变为浑浊，再由浑浊变为澄清。
所述乳化剂为Kolliphor HS15，所述助乳化剂为乙醇，按质量份计数，所述1,8-桉叶油素为9份，Kolliphor HS15为7份，乙醇为14份。
所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的平均粒径为38n m，所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的PDI为0.2，所述 1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的Zeta电位为-9mV。
所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的制备方法，将9 份1,8-桉叶油素、由7份乳化剂和14份助乳化剂组成的混合溶液混合均匀，在搅拌状态下加入双蒸水，得成品。
软胶囊，取上述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统20KG(含 1,8-桉叶油素6KG)，加入制备软胶囊剂的相应辅料，制备成12000 粒软胶囊，每粒软胶囊含1,8-桉叶油素0.5g。用于治疗心脑血管疾病，特别是由高血脂或血管内皮损伤引起的心脑血管疾病。口服，每次4-6粒，一日1-3次。
口服液，取所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统20kg(含 1,8-桉叶油素6KG)，加入制备软胶囊剂的相应辅料，制备成2000支口服液，每支10ml，含1,8-桉叶油素3g。用于治疗心脑血管疾病，特别是由高血脂或血管内皮损伤引起的心脑血管疾病。口服，每次1 支，一日1-3次。
实施例2。1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统，包括1,8- 桉叶油素、由乳化剂和助乳化剂组成的混合溶液和双蒸水，所述1,8 -桉叶油素与由乳化剂和助乳化剂组成的混合溶液的质量比为3:12，所述混合溶液的乳化剂和助乳化剂的质量比为1:1，所述双蒸水的加入量为使1,8-桉叶油素和由乳化剂和助乳化剂组成的混合溶液混合后由澄清变为浑浊，再由浑浊变为澄清。
所述乳化剂为磷脂与F68的混合物，所述磷脂与F68或Kolliph or HS15的质量比为1:5；所述助乳化剂为1,2-丙二醇。
所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的平均粒径为220n m，所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的PDI为0.6，所述 1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的Zeta电位为-44mV。
所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的制备方法，将3 份1,8-桉叶油素、12份乳化剂和助乳化剂的混合溶液混合均匀，在搅拌状态下加入双蒸水，得成品。
注射制剂，取所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统30KG (含1,8-桉叶油素3KG)，加入制备注射制剂的相应辅料，制备成15 00支注射制剂，每支20ml，含1,8-桉叶油素2g。用于治疗心脑血管疾病。成人静脉注射，每次1支，一日1-3次。
实施例3。1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统，包括1,8- 桉叶油素、由乳化剂和助乳化剂组成的混合溶液和双蒸水，所述1,8 -桉叶油素与由乳化剂和助乳化剂组成的混合溶液的质量比为3:27，所述混合溶液的乳化剂和助乳化剂的质量比为1:3，所述双蒸水的加入量为使1,8-桉叶油素和由乳化剂和助乳化剂组成的混合溶液混合后由澄清变为浑浊，再由浑浊变为澄清。
所述乳化剂为磷脂与Kolliphor HS15的混合物，所述磷脂与K olliphor HS15的质量比为1:5；所述助乳化剂为正丁醇。
所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的平均粒径为950n m，所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的PDI为0.9，所述 1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的Zeta电位为59mV。
所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的制备方法，将3 份1,8-桉叶油素、27份乳化剂和助乳化剂的混合溶液混合均匀，在搅拌状态下加入双蒸水，得成品。
喷雾制剂，取1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统30KG(含 1,8-桉叶油素3KG)，加入制备喷雾制剂的相应辅料，制成1000支注射制剂，每支30ml，含1,8-桉叶油素3g。用于治疗由高血脂或血管内皮损伤引起的心脑血管疾病。雾化吸入，每次1支，一日1-3次。
实施例4。脂微球制剂，以50g·L-1大豆油与50g·L-11,8桉叶油素作为混合油相，以0.3g·L-1磷脂和0.9g·L-1Kolliphor HS15作为混合乳化剂，以2.5g·L-1甘油作为等渗调节剂，以0.5g·L-1油酸作为稳定剂。1,8桉叶素脂微球的最佳制备工艺为：油水两相在0℃下混合后以10000r/分高速剪切7min制备得到初乳，于100MPa高压均质7 次得到终乳。包装成每支10ml含1,8桉叶油素5g的注射制剂。用于治疗由高血脂或血管内皮损伤引起的心脑血管疾病。成人静脉注射，每日1-2次。
当然，本发明还可有其它多种实施例，在不背离本发明精神及其实质的情况下，熟悉本领域的技术人员当可根据本发明作出各种相应的改变和变形，但这些相应的改变和变形都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。

Claims (10)

1.1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统，其特征在于：包括1,8-桉叶油素、由乳化剂和助乳化剂、双蒸水组成的混合溶液，所述1,8-桉叶油素与由乳化剂和助乳化剂组成的混合溶液的质量比为3:7～27，所述混合溶液的乳化剂和助乳化剂的质量比为1:1～3，所述双蒸水的加入量为使1,8-桉叶油素和由乳化剂和助乳化剂组成的混合溶液混合后由澄清变为浑浊，再由浑浊变为澄清。
2.根据权利要求1所述的1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统，其特征在于：所述乳化剂为Kolliphor HS 15、磷脂与F68的混合物或磷脂与Kolliphor HS 15的混合物，所述磷脂与F68或Kolli phor HS 15的质量比为1:3～7；所述助乳化剂为乙醇、1,2-丙二醇或正丁醇。
3.根据权利要求2所述的1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统，其特征在于：所述乳化剂为Kolliphor HS 15，所述助乳化剂为乙醇，按质量份计数，所述1,8-桉叶油素为9份，Kolliphor HS 15为7份，乙醇为14份。
4.根据权利要求1所述的1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统，其特征在于：所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的平均粒径为10～1000nm，所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的PDI为0.1～0.9，所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的Zeta电位为-60～+60mV。
5.根据权利要求4所述的1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统，其特征在于：所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的平均粒径为38nm，所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的PDI为0.2，所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的Zeta电位为-9mV；或所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的平均粒径为220nm，所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的PDI为0.6，所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的Zeta电位为-44mV。
6.根据权利要求1-5所述的1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统，所述1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统的制备方法，其特征在于：将1,8-桉叶油素、乳化剂和助乳化剂的混合溶液混合均匀，在搅拌状态下加入双蒸水，得成品；或将1,8-桉叶油素、乳化剂和助乳化剂的混合溶液混合均匀，加入双蒸水，高速匀质，再高压均质，得成品。
7.根据权利要求1-6任一权利要求所述的1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统在制备治疗心脑血管及其他疾病药物中的应用。
8.根据权利要求7所述应用，所述心脑血管疾病，是由高血压、血栓、高血脂或血管内皮损伤引起的心脑血管疾病。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：取1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统，加入一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂，制备成各种治疗心脑血管疾病的药物制剂。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述治疗心脑血管疾病的药物制剂为脂微球，软胶囊剂或口服液，或者注射制剂，或者喷雾制剂。
CN201811228643.6A 2018-10-22 2018-10-22 1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统及其制备方法和应用 Pending CN109549923A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811228643.6A CN109549923A (zh) 2018-10-22 2018-10-22 1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811228643.6A CN109549923A (zh) 2018-10-22 2018-10-22 1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统及其制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN109549923A true CN109549923A (zh) 2019-04-02

Family

ID=65865048

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811228643.6A Pending CN109549923A (zh) 2018-10-22 2018-10-22 1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109549923A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113057940A (zh) * 2021-03-24 2021-07-02 贵州医科大学 1,8-桉叶油素乳剂及其制备方法
CN114983937A (zh) * 2022-01-19 2022-09-02 中国医学科学院药物研究所 一种鱼腥草挥发油自微乳及其制备方法与应用

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113057940A (zh) * 2021-03-24 2021-07-02 贵州医科大学 1,8-桉叶油素乳剂及其制备方法
CN113057940B (zh) * 2021-03-24 2022-08-19 贵州医科大学 1,8-桉叶油素乳剂及其制备方法
CN114983937A (zh) * 2022-01-19 2022-09-02 中国医学科学院药物研究所 一种鱼腥草挥发油自微乳及其制备方法与应用
CN114983937B (zh) * 2022-01-19 2023-11-07 中国医学科学院药物研究所 一种鱼腥草挥发油自微乳及其制备方法与应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101511340B (zh) 使用酯化卵磷脂的纳米脂质体、其制备方法和含有其的用于预防或治疗皮肤疾病的组合物
CN107308132A (zh) 一种磷脂壳聚糖药物递送系统及其制备方法和用途
US20160151440A1 (en) A Novel Composition of Curcumin with Enhanced Bioavailability
CN103830204B (zh) 一种含水飞蓟提取物的软胶囊及其制备方法
KR101510757B1 (ko) 천연 복합 추출물의 나노캡슐을 포함하는 아토피 피부염 개선용 화장료 조성물 및 그 제조방법
CN103393579A (zh) 一种美白修复脂质纳米粒乳液的制备方法
CN109549923A (zh) 1,8-桉叶油素自微乳和亚微乳给药系统及其制备方法和应用
CN104826122A (zh) 绿原酸及其衍生物的脂质修饰物及其制备和纯化方法
CN104826118A (zh) 绿原酸及其衍生物脂质修饰物的应用
CN105963254B (zh) 一种辅酶q10药物组合物及其制备工艺
CN105125592A (zh) 一种含蟾酥脂溶物的药物及其制备方法
KR102566546B1 (ko) 실리빈 함유 약학 조성물
US20220202890A1 (en) Formulation containing cornus wilsoniana extract and use thereof
CN101543521A (zh) 一种油菜花粉软胶囊及其制备方法
JP4690334B2 (ja) ビフェニルジメチルジカルボキシレート及びシリビンを含む経口用マイクロエマルション組成物
CN107951838A (zh) 细辛脑亚微乳在预防和治疗阿尔茨海默病中的应用
CN107137437A (zh) 一种细梗香草总皂苷自微乳液及其制备方法
CN102949415B (zh) 一种蜂胶脂肪乳制剂及其制备方法
CN102258467A (zh) 静脉注射用缓释青蒿素及其衍生物脂肪乳的配方及制备
CN105832744A (zh) 一种供注射用的前列地尔冻干乳剂组合物
JP4105498B2 (ja) アトピー性疾患の症状の予防・緩和に有効な組成物
WO2019233158A1 (zh) 中药凝胶组合物及其制备方法和用途
CN108355138A (zh) 一种氮酮在药物透皮促渗中的应用
CN109699887A (zh) 一种牡丹籽油降血脂软胶囊及其制备方法
CN109481464A (zh) 一种注射用富勒烯乳剂及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20190402

RJ01 Rejection of invention patent application after publication