CN103800596A - 槟榔果实总酚提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了槟榔果实总酚提取物及其制备方法和应用。本发明将槟榔果实粉碎后以有机溶剂为萃取剂,采用超声-微波协同萃取方式充分提取槟榔果实中的酚类物质,再结合大孔吸附树脂柱层析对槟榔果实提取物进行了系统分离,有效去除了具有致癌活性的槟榔碱等生物碱部分,得到了槟榔果实总酚提取物AFTP。本发明槟榔果实总酚提取物AFTP在动物实验中显示对抑郁症具有显著的拮抗作用,其抗抑郁作用比目前临床上使用的单一作用机理的抗抑郁药具有更广的适应症且无任何毒副作用,本发明为抑郁症的防治提供了新的药用资源和相应的药物制备。
Description
技术领域
本发明涉及槟榔有效部位提取物,尤其涉及槟榔果实总酚提取物及其制备方法,本发明进一步涉及槟榔果实总酚提取物在抗抑郁、预防或治疗神经紊乱性疾病中的应用。
背景技术
抑郁症是一种常见的情感性精神障碍,是一种以显著而持久的心境低落为主要特征的综合征。人们的生活节奏日益加快、工作压力日趋增大,抑郁患者日趋增多。据WHO预测,到2020年抑郁症将上升为第二大常见病。而目前市场上各类抗抑郁药物,根据化学结构的不同,大致分为三大类:单胺氧化酶抑制剂、三环类抗抑郁剂杂环类抗抑郁剂,它们的神经药理作用存在差异,治疗效果也不令人满意,不良反应较多,如引起失眠、精神紊乱、心肌损害、血象异常、肝肾损伤等,因此在临床用药上受到一定的限制,不能满足治疗抑郁症的治疗需要。WHO已将抗抑郁药物列为21世纪最需要迫切研发的药物之一。
草药及其天然药物不良反应较少,近年来一些具有潜在神经保护作用和抗抑郁作用的草药备受关注。据世界卫生组织统计,全世界大约80%的人依靠草药治疗疾病,而抑郁症是替代疗法治疗的排前五位的疾病之一。目前世界上最流行的抗抑郁草药圣·约翰草,其活性成分是金丝桃素,具有多种抗抑郁机制,常见不良反应为光敏增加,但临床上对于重度抑郁症治疗效果差。槟榔是继咖啡因、尼古丁和酒精之后的第四个最常用的精神活性物质,全世界每日约6亿人食用。它已被用作兴奋剂和传统补救措施的神经兴奋剂。
槟榔(Areca catechu)在中国使用已有上千年的历史,位居四大南药之首,富含生物碱和酚类化合物。目前槟榔果实主要为咀嚼嗜好品,嚼食槟榔能使人产生舒服感,欣快感。但过度嚼食可能会引发口腔黏膜下纤维性变(oralsubmucous fibrosis,OSF),具有致癌致突变作用。
利用传统醇热回流方法提取槟榔果实总酚,不仅存在工艺繁琐,难以控制的问题,而且不能完全去除槟榔果实中有毒而且无效的生物碱类成分,有待改进。此外,已有研究仅限于槟榔粗提物药理作用的初步研究,尚未有将槟榔果实总酚制备成药物的报道。
发明内容
本发明的目的之一是提供槟榔果实总酚提取物;
本发明的目的之二是提供槟榔果实总酚提取物的制备方法;
本发明的目的之三是将所述的槟榔果实总酚提取物制备成抗抑郁药物或应用于预防或治疗神经紊乱性疾病。
本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的:
一种具有抗抑郁活性的槟榔果实总酚提取物,其制备方法包括:(1)将槟榔果实粉碎后用乙醇为提取溶剂进行超声-微波协同萃取,将萃取液浓缩得到浸膏;(2)将浸膏稀释后过大孔吸附树脂,采用不同比例梯度的乙醇-水依次洗脱,收集洗脱物,浓缩、干燥,即得。
其中,优选的,步骤(1)中将槟榔果实粉碎后用30-90%乙醇为提取溶剂,更优选的,用70-80%乙醇为提取溶剂进行超声-微波协同萃取。
利用传统醇热回流方法提取槟榔果实总酚,工艺繁琐,难以控制,而且不能完全去除槟榔果实中有毒而且无效的生物碱类成分,本发明采用了超声-微波协同萃取能够充分的将槟榔果实中的酚类物质提取出来,再结合大孔吸附树脂层析技术去除其中的无抗抑郁活性且具有毒性的生物碱类成分。在采用超声-微波协同强化提取槟榔果实中总酚时,包括微波频率、提取时间、超声频率和提取温度在内的多种因素对于总酚的提取效率有较为显著的影响,为了提高酚类化合物的提取效率,本发明对超声-微波协同萃取的各工艺参数(主要是微波频率、提取时间、超声频率和提取温度等因素)进行正交优化试验以筛选出最佳的工艺参数;本发明通过正交试验发现,当超声-微波协同萃取在以下工艺参数进行时,槟榔果实中的总酚提取效果较好:微波频率200-400W,提取时间300-600秒,超声频率50-100W,提取温度60-105℃;本发明非常意外的发现,当采用以下超声-微波协同萃取参数进行萃取时,所提取的总酚含量要显著高于其它的萃取参数时提取的总酚含量:
微波频率300W,提取时间480秒,超声频率50W,提取温度60℃;其中,超声-微波协同萃取的次数优选为2次。
优选的,步骤(2)中将浸膏用水稀释后过弱极性大孔吸附树脂,依次采用水、30%乙醇-水、50%乙醇-水、70%乙醇-水、90%乙醇-水进行洗脱,收集70%乙醇洗脱部分;其中,所述的弱极性大孔吸附树脂包括大孔吸附树脂AB-8、大孔吸附树脂DA-201或大孔吸附树脂HPD-400。
槟榔果实富含约20%的酚类化合物,本发明首先通过有机溶剂超声-微波协同强化提取技术,再结合大孔吸附树脂柱层析等技术对槟榔果实提取物进行了系统分离,去除了具有致癌活性的槟榔碱等生物碱部分,得到了槟榔果实总酚提取物AFTP;在此基础上,本发明进一步通过系统的药理试验对总酚AFTP进行药效活性观察,经体外活性筛选,本发明的槟榔果实酚类成分AFTP显示有显著的抗抑郁活性。为了进一步验证槟榔果实酚类成分抗抑郁的功效,本发明以槟榔果实总酚提取物AFTP为试验药物进行了小鼠悬尾试验、鼠脑内单胺神经递质的测定试验、强迫游泳试验和糖水消耗等动物试验。
小鼠悬尾试验结果初步证明了本发明槟榔果实总酚提取物AFTP具有明显抗抑郁作用,呈现一定的量效关系。
鼠脑内单胺神经递质的测定试验结果表明,本发明槟榔果实总酚提取物AFTP能够抑制悬尾小鼠大脑中5-HT、NA、DA及5-HTP等多种神经递质含量的降低,提示其抗抑郁的作用机制可能是通过抑制脑内单胺类神经递质含量的降低来实现的。此外,由于槟榔果实总酚提取物AFTP能够降低神经递质的含量,其能适用于老年痴呆、帕金森或衰老等神经紊乱性疾病的预防和治疗。
强迫游泳试验结果表明本发明槟榔果实总酚提取物AFTP能够明显缩短小鼠强迫游泳不动时间,改善小鼠的抑郁状态。
糖水消耗试验结果表明本发明槟榔果实总酚提取物AFTP可明显减轻CUMS诱导的糖水消耗下降程度,说明槟榔果实总酚提取物AFTP可有效改善CUMS诱导的小鼠快感缺失的抑郁状态。
综上,本发明槟榔果实总酚提取物AFTP在动物实验中显示对抑郁症具有显著的拮抗作用,其抗抑郁作用比目前临床上使用的单一作用机理的抗抑郁药(如氟西汀等)具有更广的适应症,且无任何毒副作用,本发明为抑郁症的防治提供新的药用资源和相应的药物制备。
因此,本发明槟榔果实总酚提取物AFTP能够应用于抗抑郁、预防或治疗神经紊乱性疾病;其中,所述的神经紊乱性疾病包括老年痴呆、帕金森或衰老等疾病。
进一步的,本发明提供了一种抗抑郁的药物组合物,该药物组合物包括治疗上有效量的本发明槟榔果实总酚提取物AFTP以及一种或多种药学上可接受的载体。
本发明还提供了一种预防或治疗神经紊乱性疾病的药物组合物,该药物组合物包括治疗上有效量的本发明槟榔果实总酚提取物AFTP以及种或多种药学上可接受的载体。
所述的神经紊乱性疾病包括老年痴呆、帕金森或衰老等疾病。
所述的载体是指药学领域常规的载体,例如:稀释剂、赋形剂如水等;粘合剂可以是纤维素衍生物、明胶、聚乙烯吡咯烷酮等;填充剂可以是淀粉等物质;崩裂剂可以是碳酸钙或碳酸氢钙等;另外,还可以在槟榔果实总酚提取物AFTP中加入其它辅助剂如香味剂和甜味剂。
按照常规的制剂工艺,可以将本发明所述的抗抑郁的药物组合物(或者是预防或治疗神经紊乱性疾病的药物组合物)制成口服制剂或注射药物制剂。所述的口服制剂可以是片剂、丸剂、散剂、膏剂、胶囊剂、口服液或颗粒剂等;所述的注射制剂可以是粉针剂或注射液等。
本发明药物制剂的施用量可根据用药途径、患者年龄、体重、所治疗的疾病类型和严重程度等进行变化,其日剂量为10~40mg/Kg体重(口服)或1-20mg/kg体重(注射)。
具体实施方式
通过下列实施例将更具体说明本发明的实施方式,但是应理解所述实施例仅是范例性的,不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是,在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换,但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。
实施例1槟榔果实总酚提取物的制备
槟榔Areca catechu果实鲜果取3千克,用70%乙醇溶液超声-微波协同萃取2次,微波频率300W(300),提取时间480秒,超声频率50W,提取温度60℃;回收溶剂并浓缩得到浸膏;用水分散浸膏后上大孔吸附树脂AB-8,依次采用水、30%乙醇-水、50%乙醇-水、70%乙醇-水、90%乙醇-水进行洗脱,收集70%乙醇洗脱部分。回收溶剂并浓缩得浸膏AJFC(238.7克)。
实施例2槟榔果实总酚提取物的制备
槟榔Areca catechu榔玉取4千克,用70%乙醇超声-微波协同萃取,微波频率200W,提取时间300秒,超声频率50W,提取温度105℃;回收溶剂并浓缩得到浸膏;用水分散浸膏后上大孔吸附树脂HPD-400,依次采用水、30%乙醇-水、50%乙醇-水、70%乙醇-水、90%乙醇-水进行洗脱,收集70%乙醇洗脱部分;回收溶剂并浓缩分别得浸膏AJFC(538.4克)。
实施例3槟榔果实总酚提取物的制备
槟榔Areca catechu壳取8千克,用70%乙醇超声-微波协同萃取,微波频率400W,提取时间600秒,超声频率100W,提取温度80℃;回收溶剂并浓缩得到浸膏;用水分散浸膏后上大孔吸附树脂DA-201,依次采用水、30%乙醇-水、50%乙醇-水、70%乙醇-水、90%乙醇-水进行洗脱,收集70%乙醇洗脱部分。回收溶剂并浓缩得浸膏AJFC(106.3克)。
实施例4片剂的制备
取实施例1制备的浸膏(AJFC)15克加入药用淀粉15克,混合均匀,再与糊精30克混合均匀,加入乙醇(50%)适量制软材;通过16目尼龙筛制粒,在60℃干燥,干粒再过16目筛整粒,加入硬脂酸镁5克,混合均匀后压片。
实施例5片剂的制备
取实施例2制备的浸膏(AJFC)20克加入药用淀粉20克,混合均匀,再与糊精40克混合均匀,加入乙醇(50%)适量制软材;通过16目尼龙筛制粒,在60℃干燥,干粒再过16目筛整粒,加入硬脂酸镁7克,混合均匀后压片。
实施例6片剂的制备
取实施例3制备的浸膏(AJFC)20克混合均匀加入药用淀粉60克,再加入适量辅料,混均、制粒、干燥,压制成片即可。
试验例1槟榔果实酚类AFTP的提取参数的优化试验
采用传统醇热回流方法提取槟榔果实总酚,不仅工艺繁琐,难以控制,而且不能完全去除槟榔果实中有毒而且无效的生物碱类成分;本发明采用了超声-微波协同强化提取槟榔果实中的酚类,并结合大孔吸附树脂层析技术的分离方案解决了这一技术难题,经Folin-ciocalteu法测定总酚含量,结果见表1。
表1槟榔果实中酚类的含量
在采用超声-微波协同强化提取槟榔果实中总酚时,包括微波频率、提取时间、超声频率和提取温度等因素对于总酚的提取效率有较为显著的影响,为了将酚类化合物从槟榔果实中充分的提取出来,本发明对超声-微波协同萃取的各工艺参数(主要是微波频率、提取时间、超声频率和提取温度等因素)进行正交试验以筛选出最佳的工艺参数。
槟榔果实总酚超声-微波协同萃取方法的四因素三水平正交设计优化结果见表2,表3及表4;从试验结果可见,C因素R最小,故以C因素为误差项,通过方差分析可知,微波频率和提取时间的差异最大呈极显著水平(P<0.01),提取温度的差异较大,呈显著水平(P<0.05);C因素三个水平间没有显著性差异,因此选择最低C1频率为好,减少能源的浪费和噪音;最终本发明确定的最佳提取工艺条件为A2B2C1D1,提取两次。
表2正交实验设计因素水平表
表3槟榔果实总酚超声-微波协同萃取方法的四因素三水平正交设计优化结果
表4正交试验方差分析
F0.05(2,2)=19,F0.01(2,2)=99
表5槟榔果实主要酚类化合物色谱峰的HPLC/ESI-TOFMS分析
试验例2本发明槟榔果实总酚提取物的药效学试验
一、供试药物:实施例1-3所制备的槟榔果实总酚(AFTP);
二、试验方法及结果
1.小鼠悬尾试验
1.1试验方法
取雄性昆明小鼠(KM)体重20~24克,50只,剔除预实验不合格者,随机分成5组,每组10只。分别为阳性对照组(盐酸氟西汀4mg/mL)、槟榔果实总酚AFTP高浓度组(40mg/Kg)、槟榔果实总酚AFTP中浓度组(20mg/Kg)、槟榔果实总酚AFTP低浓度组(10mg/Kg)以及空白对照组(生理盐水),自由饮水进食。每天灌胃一次,0.2mL/次,连续灌胃7d,第1,3,5,7d给药后1h,将小鼠尾部距末端约2cm处用胶布粘住固定,使其头部向下悬挂呈倒悬状,离箱底约5cm。中间以挡板隔离小鼠视线。总观察6分钟,观察后4分钟内小鼠的不动(小鼠在空中停止挣扎,或仅有细小的肢体运动)时间。
1.2试验结果
试验结果表明槟榔果实酚类成分AFTP抗抑郁活性从第三天开始出现,与空白对照组比较,AFTP高、中浓度组均能显著减少小鼠悬尾不动时间(P<0.05),低浓度组无明显作用;与阳性对照氟西汀比较,AFTP高、中浓度组对缩短小鼠悬尾不动时间无明显影响。从作用效果上看,高浓度组与氟西汀相当,并随给药时间的增加呈现增强趋势。该实验结果初步证明了AFTP具有明显抗抑郁作用,剂量在10~40mg·Kg-1之间,呈现一定的量效关系。结果见表6。
表6不同实验组小鼠悬尾不动时间
2.小鼠脑内单胺神经递质的测定试验
2.1试验方法
悬尾试验后,正常对照组、模型组、盐酸氟西汀组及槟榔果实总酚AFTP中剂量组的小鼠迅速于冰盘上断头取脑,以滤纸吸干后称重,放入匀浆管中,加入0.4mol/L的高氯酸溶液500μL,冰浴中匀浆,取出匀浆液,加入60μL的3,4-二羟基苄胺(DHBA,0.05mg/L)溶液,10000r/min离心15min,取上清液,0.22μm滤膜过滤,以HPLC测定其中的5-HT,NA、DA、5-HTP的含量。
2.2试验结果
试验结果见表7。试验结果表明,槟榔果实总酚能够抑制悬尾小鼠大脑中5-HT、NA、DA及5-HTP等多种神经递质含量的降低,提示其抗抑郁的作用机制可能是通过抑制脑内单胺类神经递质含量的降低来实现的。此外,槟榔果实总酚对神经递质的这种作用,也可能使其适用于老年痴呆、帕金森、衰老模型等神经紊乱性疾病的预防和治疗。
表7不同处理小鼠脑内单胺神经递质的含量
3.强迫游泳试验
3.1试验方法
取小鼠50只,随机分成5组,每组10只。分别为FXT HCL组、槟榔果实总酚AFTP高、中、低浓度组、SJW组以及空白对照组(生理盐水),自由饮水进食。每天灌胃一次,0.2mL/次,连续灌胃14d,实验前24h进行游泳训练15分钟,禁食不禁水,实验前12h禁食。第14d给药1h后进行游泳实验。将小鼠单只放入水深10cm,水温(27±3)℃的矩形容器内,适应2分钟后开始计算后6分钟内累计不动(漂浮不动状态,仅露出鼻孔保持呼吸,四肢偶尔划动以保持身体不至于沉下去)时间。
3.2试验结果
试验结果见表8,表明槟榔果实总酚AFTP中、高剂量组能够明显缩短小鼠强迫游泳不动时间,改善小鼠的抑郁状态。
表8不同处理小鼠强迫游泳时间
4.糖水消耗试验
4.1试验方法
取健康雄性昆明小鼠40只,体重20~24克,按体重随机原则分为4组,每组10只,对照组小鼠正常合笼饲养,模型组(不可预计温和刺激,以CUMS代替)动物孤养。模型组刺激包括束缚3h、潮湿笼子17h、倾斜笼子(45度)17h、通宵照明、禁食24h、禁水16h加1h空瓶刺激、成组饲养17h,以上刺激随机安排于一周内,每日一种,连续8周,同种刺激不连续出现。试验前48h,训练小鼠适应含糖饮水,给动物双瓶饮水,一瓶为1%的蔗糖溶液,另一瓶为普通自来水,双瓶重量一致,20h的禁水禁食后,同时给予每只小鼠事先定量好的双瓶水:1%蔗糖水和自来水,饮水1h,然后通过称取饮水瓶的重量计算消耗量并按下式计算:动物糖水消耗(%)=糖水摄入(g)/总摄入(g)×100%。试验前,所有分组都进行糖水消耗试验和体重的测量,CUMS8周后,在进行小鼠糖水偏爱试验。
4.2试验结果
试验结果见表9;试验结果表明槟榔果实总酚AFTP可明显减轻CUMS诱导的糖水消耗下降程度,说明槟榔果实总酚AFTP可有效改善CUMS诱导的小鼠快感缺失的抑郁状态。
表9不同实验组小鼠糖水消耗
Claims (10)
1.一种槟榔果实总酚提取物的制备方法,其特征在于,包括:(1)将槟榔果实粉碎后用乙醇为提取溶剂进行超声-微波协同萃取,将萃取液浓缩得到浸膏;(2)浸膏稀释后过大孔吸附树脂,采用不同比例梯度的乙醇-水依次洗脱,收集洗脱物,浓缩、干燥,即得。
2.按照权利要求1所述的制备方法,其特征在于:步骤(1)中将槟榔果实粉碎后用30-90%乙醇为提取溶剂进行超声-微波协同萃取。
3.按照权利要求2所述的制备方法,其特征在于:步骤(1)中将槟榔果实粉碎后用70-80%乙醇为提取溶剂进行超声-微波协同萃取。
4.按照权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中的超声-微波协同萃取的工艺参数为:微波频率200-400W,提取时间300-600秒,超声频率50-100W,提取温度60-105℃。
5.按照权利要求4所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中的超声-微波协同萃取的工艺参数为:微波频率300W,提取时间480秒,超声频率50W,提取温度60℃。
6.按照权利要求1所述的制备方法,其特征在于:超声-微波协同萃取的次数为2次。
7.按照权利要求1所述的制备方法,其特征在于:步骤(2)中将浸膏用水稀释后过弱极性大孔吸附树脂,依次采用水、30%乙醇-水、50%乙醇-水、70%乙醇-水、90%乙醇-水进行洗脱,收集70%乙醇洗脱部分;优选的,所述的弱极性大孔吸附树脂包括大孔吸附树脂AB-8、大孔吸附树脂DA-201或大孔吸附树脂HPD-400。
8.由权利要求1-7任何一项方法制备得到的槟榔果实总酚提取物。
9.权利要求8所述的槟榔果实总酚提取物在制备抗抑郁、预防或治疗神经紊乱性疾病药物中的用途;优选的,所述神经紊乱性疾病包括老年痴呆、帕金森或衰老。
10.一种抗抑郁、预防或治疗神经紊乱性疾病的药物组合物,其特征在于:包括治疗上有效量的权利要求8所述的槟榔果实总酚提取物和药学上可接受的载体;优选的,所述神经紊乱性疾病包括老年痴呆、帕金森或衰老。
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CN106387243A (zh) * | 2016-09-30 | 2017-02-15 | 许启太 | 一种槟榔炭烧咖啡及其制备方法 |
CN106417843A (zh) * | 2016-09-30 | 2017-02-22 | 许启太 | 一种槟榔牡丹籽咖啡及其制备方法 |
CN109123764A (zh) * | 2018-07-23 | 2019-01-04 | 许启太 | 一种槟酚香烟的制备方法 |
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- 2014-01-24 CN CN201410036532.0A patent/CN103800596A/zh active Pending
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Legal Events
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---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20140521 |