WO2011003226A1

WO2011003226A1 - 治疗抑郁症的药物组合物、制备方法及用途

Info

Publication number: WO2011003226A1
Application number: PCT/CN2009/001410
Authority: WO
Inventors: 张作光
Original assignee: 陈婷
Priority date: 2009-07-10
Filing date: 2009-12-09
Publication date: 2011-01-13
Also published as: CN101940583A

Description

治疗抑郁症的药物组合物、制备方法及用途技术领域

本发明属于医药技术领域。本发明涉及以芍药苷和芍药内酯苷配伍用于治疗抑郁症的药物组合物及其制备方法。本发明还涉及所述药物组合物用于制备药物、保健食品和营养剂的用途。本发明还涉及治疗抑郁症及与其并发的疾病、障碍或者病症的方法。

背景技术

抑郁症（ depression )是情感性精神障碍 ( mood disorders )的主要类型，是一种以显著而持久的心境低落为主要特征的综合征。抑郁症是危害人类身心健康的常见病、多发病，是一个全球性的主要精神问题。据统计在一般人口中大约有 25%女性在其一生中经历过抑郁症，男性中约有 10%左右经历过抑郁症（《现代心理学》，张春兴著）。世界卫生组织提供的资料显示，抑郁症在全世界的发病率约为 11%, 目前全球约有 3.4亿精神抑郁患者，而且这个数字仍成上升趋势，调查发现在今后 20年，抑郁症将会上升为全球第二大常见疾病。

目前国内外市场上抗抑郁症药物中基本以百优解、赛洛特、左洛复等 5 羟色胺再摄取抑制剂（SSRIs )为主，其作用机理是通过调节人体单胺类神经递质 5羟色胺等成分含量緩解抑郁症状。这类药物都有不同程度的副作用，研究表明"这些药品中含有的复安栓对平衡人体机能有作用，但更多时候，它们还是无法让患者平静下来。 "近年来，百优解等抑郁症药物是否有害已成为严重的社会问题，其中赛洛特更是早在 1996年就被发现存在有安全隐患，自 2001年开始已陆续从市场上召回。 2004年 6月，美国纽约州总检察长指控英国葛兰素史克公司为了获取利润，欺骗性隐瞒了服用赛洛特与"增加青少年自杀倾向及行为的风险 "之间有联系的研究报告。在这种背景下，如何研发生产新一代副作用小又能有明显抗郁作用的药物已成为全球医药界所关注的问题。发明内容

为有助于理解本发明，下面定义了一些术语。本文定义的术语具有本发明相关领域的普通技术人员通常理解的含义。除非另外说明，本文所用的术语"药学上可接受的载体和赋形剂，，指的是那些本领域中公知用作丸剂、片剂、胶嚢剂等中的填充剂或载体物质的物质。这些物质通常被保健专家认可用于这一目的且作为药剂的非活性成分. 有关可药用载体和赋形剂的汇编可以在《药物赋形剂手册》

( Handbook of Pharmaceutical excipients, 第 2 版, 由 A . Wade 和 P . J . Weller编辑； American Pharmaceutical Association 出版, Washington and The Pharmaceutical Press , London , 1994 )等工具书中找到。

除非另外说明，本文所用的术语"治疗有效量"为需要产生有效作用的药物的用量； "治疗有效量 "可以改变，且最终由医务人员确定，其所考虑的因素包括给药途径和制剂的性质、接受者的体重、年龄等一般情况以及所治疗疾病的性质和严重程度。

为了克服现有抗抑郁药物的不足，发明人结合现代医学和药理学对传统中药治疗抑郁症的病机和作用机理进行了研究，并在反复多次药效、药理学实验的基础上，提出本发明。

本发明的目的在于，提供一种用于治疗抑郁症的药物组合物。本发明的另一个目的在于，提供制备上述药物组合物的方法。本发明的又一个目的在于，提供上述药物组合物在制备用于治疗抑郁症或同时治疗抑郁症及与其并发的疾病、障碍或者病症的药物、保健食品和营养剂中的用途。本发明的又一个目的在于，提供一种治疗抑郁症或同时治疗抑郁症及与其并发的疾病、障碍或者病症的方法。

针对上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

一方面，本发明提供一种用于治疗抑郁症的药物组合物，所述药物组合物包括芍药苷和芍药内酯苷两种活性成分，其中：

所述芍药苷与芍药内酯苷的重量比为 1 : 0.45〜1： 1.4;

优选为 1 : 0.75 ~ 1 : 1.2;

最优选为 1 : 0.8 - 1: 1。

本发明提供的上述药物组合物为芍药提取物，其制备方法如下：将芍药（白芍或赤芍）破碎，以 70%乙醇水溶液提取（或是用水渗漉），回收乙醇，过滤得澄清液，通过 D101或 ME-1型等大孔树脂吸附柱纯化，收集解析液，浓缩干燥，即得芍药提取物。

优选地，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体或赋形剂；优选地，所述药物组合物的剂型选自：剂型选自：口服制剂、肠胃外给药制剂、局部和吸入式给药制剂和透皮制剂；更优选地, 所述剂型为选自如下的口服制剂：片剂、胶嚢剂、粉剂、颗粒剂、丸剂、滴剂，果汁和糖浆剂；

进一步优选地，所述药学上可接受的载体或赋形剂选自：崩解剂、润滑剂、粘合剂、填充剂、溶剂、香料、甜味剂、抗氧化剂、表面活性剂、防腐剂、矫味剂和色素。另一方面，本发明提供一种制备如前所述的药物组合物的方法，可以直接以芍药苷和芍药内酯两种化合物混合而制得，也可以从芍药（白芍或赤芍）中提取而制得。

因此，本发明提供的制备如前所述的药物组合物的方法，包括将芍药苷和白芍内脂苷直接混合粉碎来制备所述药物组合物；优选地，所述芍药苷与芍药内酯苷的重量比为 1 : 0.45 - 1 : 1.4，更优选为 1 : 0.75〜1 : 1.2, 最优选为 1 : 0.8〜 1 : 1。

本发明还提供了一种制备如前所述的药物组合物的醇水提上柱法方法，该方法包括： 1 )将芍药破碎，用 70%的乙醇水溶液加热回流 3次， 3 次的溶剂重量分别为芍药的 5倍、 4倍、 3倍，浓缩回收乙醇，稀释浸膏至 4倍体积，过滤得澄清液； 2 )将上述 1 )得到的澄清液上 ME-1型大孔树脂吸附柱，以 1床体积 /小时的流速吸附，先用 4倍床体积的水冲洗，然后用 2倍床体积的 10%乙醇冲洗，再用 20%乙醇冲洗，收集第 2、 3、 4、 5个床体积的解析液； 3 )将上述 2 )得到的解析液浓缩干燥，得到所述药物组合物。优选地，所述芍药为白芍。

此外，本发明还提供了一种制备如前所述的药物组合物的水渗漉上柱法，该方法包括： 1 )将芍药（白芍或赤芍）破碎，用 2〜3倍量的水浸泡 2 小时，将药材与药液倒入渗漉罐，加 12倍量的水，渗漉 12小时，收集渗漉液，浓缩，过滤，得澄清液； 2 )将上述 1 )得到的澄清液上 D-101型大孔树脂吸附柱，以 1床体积 /小时的流速吸附，先用 4倍床体积的水冲洗，然后用 2倍床体积的 10%乙醇冲洗，再用 50%乙醇冲洗，收集第 2、 3、 ⁴、 5个床体积的解析液； 3 )将上述 2 )得到的解析液浓缩干燥，得到所述药物组合物。优选地，所述芍药为白芍。又一方面，本发明提供芍药苷和芍药苷内酯共同作为活性成分在制备用于治疗抑郁症的药物、保健食品和 /或营养剂中的用途。

优选地，所述抑郁症为伴生有炎症的抑郁症，例如脑卒中抑郁症、类风湿关节炎伴生的抑郁症、老年抑郁症。

此外，本发明还提供芍药苷和芍药苷内酯共同作为活性成分在制备用于同时治疗抑郁症及与其并发的疾病、障碍或者病症的药物、保健食品和 / 或营养剂中的用途。

优选地，所述抑郁症为伴生有炎症的抑郁症，例如脑卒中抑郁症、类风湿关节炎伴生的抑郁症、老年抑郁症；和 /或

优选地，所述与其并发的疾病、障碍或病症选自焦虑、睡眠障碍、和创伤后应激性障碍。又一方面，本发明提供如前所述的药物组合物在制备用于治疗抑郁症的药物、保健食品和 /或营养剂中的用途。

此外，本发明还提供如前所述的药物组合物在制备用于同时治疗抑郁症及与其并发的疾病、障碍或者病症的药物、保健食品和 /或营养剂中的用途。

优选地，所述与其并发的疾病、障碍或病症选自焦虑、睡眠障碍、和创伤后应激性障碍。又一方面，本发明提供一种治疗抑郁症的方法，所述方法包括向受试者给予治疗有效量的芍药苷和芍药苷内酯的药物组合物。

这里所述的芍药苷和芍药苷内酯的药物组合物的治疗有效量可以是选自 0.3~10mg/kg/d体重的任一量，优选为 0.6〜5mg/kg/d体重的任一量，进一步优选为 l~3mg/kg/d体重的任一量。

本发明还提供一种同时治疗抑郁症及与其并发的疾病、障碍或者病症的方法，所述方法包括向受试者给予治疗有效量的芍药苷和芍药苷内酯的药物组合物；

优选地，所述抑郁症为伴生有炎症的抑郁症，例如脑卒中抑郁症、类风湿关节炎伴生的抑郁症、老年抑郁症；和 /或优选地，所述与其并发的疾病、障碍或病症选自焦虑、睡眠障碍和创伤后应激性障碍。上述药物组合物是实现本发明目的的核心组方，在本发明公开后，本领域的技术人员可以根据中医理论或是相关现代药理学理论，对上述药物组合物及提取物组合物进行常规的加减化裁。这种常规的加减化裁是本领域技术人员的一般性技术活动，只要是在本发明药物组合物及提取物组合物的配方基础上所进行的一般性技术加减，均在本发明的保护范围之内。

以上所述的药物组合物包括含有药学上可接受的载体或添加剂 , 可以加工为任何药剂学上所公知的口服剂型（片剂、胶嚢剂或是粉剂等）和注射剂。

本发明药物组合物的应用范围：可将其制成用于治疗抑郁症的植物药制剂、保健食品或营养剂。本发明的药物组合物还可应用于同时治疗抑郁症及与其并发的疾病、障碍或者病症中。

与现有技术相比，本发明具有如下的明显优点：

本发明药物组合物的特点是现代药理学作用机理明确，主要功效成分可以量化，因此质量稳定，疗效明显，安全性强，服用方便，由于其还具有良好的抗炎功能和免疫调节作用，故用本发明的药物组合物治疗伴生有炎症的抑郁症（如脑卒中抑郁症、类风湿关节炎伴生的抑郁症、老年抑郁症等）尤有疗效。附图的简要说明

以下，结合附图来详细说明本发明的实施例，其中：

图 1为本发明实施例 1中所使用制备方法的工艺流程图。

图 2为本发明实施例 2和 3中所使用制备方法的工艺流程图。实施发明的最佳方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。但这些实施例仅限于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体实验条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照厂商所建议的条件。实施例 1 本发明药物组合物的制备

参见图 1，将 400克的白芍药材（药材中芍药苷的含量为 1.43%、芍药内酯苷的含量为 1.17% )破碎，用 70%的乙醇水溶液加热回流 3次， 3次的溶剂重量分别为白芍的 5倍、 4倍、 3倍，浓缩回收乙醇，稀释浸膏至 4倍体积，过滤得澄清液上 ME-1型大孔树脂吸附柱（南开大学生物活性材料教育重点实验室提供），以 1床体积 /小时的流速吸附，先用 4倍床体积的水冲洗，然后用 2倍床体积的 10%乙醇冲洗，再用 20%乙醇解析，收集第 2、 3、 4、 5个床体积的解析液，浓缩干燥，得 12.96克白芍提取物，即为本发明药物组合物，出膏率为 3.24%, 内含 32.77%的芍药苷、 23.02%白芍内酯苷，两苷配比为 1 : 0.70。实施例 2 本发明药物组合物的制备

参见图 2, 将 70克白芍药材（药材中芍药苷的含量为 2.54%、芍药内酯苷的含量为 2.98% )破碎，用 2〜3倍量的水浸泡 2小时，将药材与药液倒入渗漉罐，加 12倍量的水，渗漉 12小时，收集渗漉液，浓缩，过滤，得澄清液，上 D-101型大孔树脂吸附柱，以 1床体积 /小时的流速吸附，先用 4倍床体积的水冲洗，然后用 2倍床体积的 10%乙醇冲洗，再用 50%乙醇冲洗，收集第 2、 3、 4、 5个床体积的解析液，浓缩干燥，得 4.14克白芍提取物，即为本发明的药物组合物，出膏率为 5.91%, 内含 32.72%的芍药苷、 45.66%芍药内脂苷，两苷配比为 1 : 1.39，原料中两苷的转移率分别为 76.30%和 90.88%。实施例 3 本发明药物组合物的制备

参见图 2 , 将 200克白芍破碎，用 2〜3倍量的水浸泡 2小时，将药材与药液倒入渗漉罐，加 12倍量的水，渗漉 12小时，收集渗漉液，浓缩，过滤，得澄清液，上 D-101型大孔树脂吸附柱，以 1床体积 /小时的流速吸附，先用 4 倍床体积的水冲洗，然后用 2倍床体积的 10%乙醇冲洗，再用 50%乙醇冲洗，收集第 2、 3、 4、 5个床体积的解析液，浓缩干燥，得 8克白芍提取物，即为本发明的药物组合物，出膏率为 4%，内含 48.13%的芍药苷、 31.16%的芍药内脂苷，两苷配比为 1 : 0.65。实施例 4本发明实施例 1所制备的药物组合物对小鼠悬尾不动时间的影

1. 实验材料

1.1 实验动物：

ICR小鼠，雄性，体重 19士 lg，购自维通利华动物实验中心，合格证编号： SCXK (京） 2007-0001。

1.2 实验药物：

受试药物 A: 本发明实施例 1制备的药物组合物；

受试药物 Z: 南京泽朗公司生产的芍药苷，天津中医药大学崔元璐教授提供；

阳性药物：盐酸氟西汀胶嚢（百优解），礼来苏州制药有限公司，批号： A333341 -070608 , 国药准字 J20030017, 日服用量， 20mg/日。

1.3 实验器材：

JZ型 300g张力换能器（高碑店市新航积淀设备有限公司）， Medlab生物信号采集处理系统（购自南京易美科技有限公司）

2. 实验方法

2.1 分组给药

将正常小鼠按体重随机分成 6个组，每组 20只，即给药空白组、阳性药物盐酸氟西汀胶嚢（Y组， 3.5mg/kg/d )， A、 Z两种药的高剂量组 (60mg/kg/d)、低剂量组 (30mg/kg/d)。各组均按 0.2ml/10g体重给药，连续给药 2天。

2.2 测试方法

以上各组均连续给药 2天，分别于第 2天给药后 1小时进行实验。将小鼠尾端（在距尾尖 2cm处）用胶布固定在 100g张力换能器的连线上，使其呈倒悬状态，头部离实验台约 15cm，每次同时测试 2只动物，相互之间用纸板隔开。换能器连接到 Medlab生物信号采集处理系统，适应 2min后，记录 4min 之内的结果，将不动状态换算成时间（秒）。

2.3 数据处理各组数据均以平均值士标准差（士 s )表示，实验结果两组比较采用双侧 t 检验，多组间比较用单因素方差分析，运用软件 SPSS13.0 forwindows(One Way ANOVA)进行处理。以 p<0.05作为差异具有显著性的标准。

3. 实-险结果

小鼠悬尾实验结果如表 1所示。

表 1 小鼠悬尾实验结果

组别剂量 (mg/kg/d) 样不动时间（ s )

空白组 20 128.090t57.7181 阳性药物组 3.5 20 90.420±43.3423 *

Z1组 60 20 105.490±55.2573

Z2组 30 20 126.940±68.3410

A1组 60 20 89.095±55.5091 *

A2组 30 20 115.955±61.1330

与空白组比较， * p<0.05

4. 结论

本发明实施例 1所制备的药物组合物高剂量组 (Al , 60mg/kg/d)能够缩短小鼠悬尾不动时间，与空白组相比有显著性差异， P < 0.05。初步表明，本发明实施例 1所制备的药物组合物的高剂量有抗抑郁作用。

5. 讨论

在本发明实施例 1所制备的药物组合物中，芍药苷的含量为 32.77%, 芍药内脂苷的含量为 23.02%, 据此计算， 60mg中含有 19.66mg芍药苷、 13.81mg 的芍药内酯苷，两苷配比为 1 : 0.7; 南京泽朗公司生产的芍药苷，其中芍药苷的含量是 95.29%, 芍药内脂苷的含量是 3.28% (天津中医药大学中医药研究院使用 Waters600E高效液相色谱仪测定），据此计算， 60mg中含 57.17mg 芍药苷，芍药内脂苷仅为 1.96mg, 两苷配比为 1 : 0.03。

小鼠悬尾实验结果证明：这种两苷不同配比和两苷含量的明显区别，决定了同为本发明实施例 1所制备的药物组合物和南京泽明植提芍药苷在抗抑郁功效上的显著差异。

由此提示：白芍提取物中芍药内脂苷的抗抑郁作用强于芍药苷，是白芍抗抑郁的主要有效成分，此分析尚有待进一步验证。实施例 5本发明实施例 2所制备的药物组合物对小鼠悬尾不动时间的影

1. 实验材料

1.1 实验动物：

ICR小鼠，雄性，体重 19士 lg, 购自维通利华动物实验中心，合格证编号： SCXK (京） 2007-0001。

1.2 实验药物：

受试药物 A: 本发明实施例 2制备的药物组合物；

受试药物 P: 帕夫林，购自宁波立华制药有限公司，批号： 0⁷0902, 国药准字 H200550581 , 日服用量， 1.2g ~ 1.8g/曰；阳性药物：盐酸氟西汀胶嚢（百优解），礼来苏州制药有限公司，批号： A333341-070608 , 国药准字 J20030017, 日服用量， 20mg/曰。

1.3 实验器材：

JZ型 100g张力换能器（高碑店市新航积淀设备有限公司）， Medlab生物信号采集处理系统（南京易美科技有限公司）

2. 实验方法

2.1分组给药

将正常小鼠按体重随机分成 8个组，每组 20只，即空白组、阳性药物盐酸氟西汀胶嚢（Y组， 3.5mg/kg/d )组， A、 P两种药的高、中、低剂量组 (分别记做 Al、 A2、 A3、 Pl、 P2、 P3)。各组均按 0.2ml/10g体重给药，连续给药 2天。

2.2 测试方法

以上各组均连续给药 2天，分别于第 2天给药后 lh进行实验。将小鼠尾端（在距尾尖 2cm处）用胶布固定在 100g张力换能器的连线上，使其呈倒悬状态，头部离实验台约 15cm,每次同时测试 2只动物，相互之间用纸板隔开。换能器连接到 Medlab生物信号采集处理系统，适应 2min后，记录 4分钟之内的结果，将不动状态换算成时间（秒）。

3. 实验结果

小鼠悬尾实验结果如表 2所示。

表 2 小鼠悬尾实验结果

组别剂量 (mg/kg/d) 样不动时间（）空白組 20 89.115±35.3918 阳性药物组 3.5 20 61.725±31.3404*

A1组 90 20 79.335±31.6842

A2组 45 20 71.025 4616

A3组 22.5 20 62.763±36.8926*

P1组 136 20 82.295d=37.4559

P2组 68 20 62.175±24.4321* P3组 34 20 74.275±33.8271

4. 结论

A3(22.5mg/kg/d)、 P2(68mg k^d)组均能缩短小鼠的悬尾不动时间，与空白组相比有显著性差异， P < 0.05。实验结果初步表明，本发明实施例 2所制备的药物组合物的低剂量组 (22.5mg kg/d)、帕夫林的中剂量组 (68mg/kg d)具有明显的抗抑郁作用。

5. 讨论

1、本发明实施例 2所制备的药物组合物中，芍药苷的含量是 32.72%、芍药内酯苷的含量是 45.66%，两苷之比为 1 :1.39; 帕夫林芍药苷的含量是 34.27%、芍药内脂苷的含量是 12.55% (天津中医药大学中医药研究院测定，使用 Waters600E高效液相色讲仪测定），两苷之比为 1 :0.36。这种两苷的不同配比，决定了同为白芍提取物的本发明实施例 2所制备的药物组合物和帕夫林在抗抑郁上表现为不同的量效关系。

2、本发明实施例 2所制备的药物组合物的抗抑郁有效剂量为

22.5mg^g/d, 其中含 10.21mg的芍药内酯苷，而帕夫林抗抑郁的有效剂量为 68mg/kg d, 其中含有 8.16mg的芍药内酯苷，两个有效剂量的芍药内酯苷含量接近，虽然帕夫林抗抑郁的有效剂量中芍药苷含量（23.3mg )是本发明实施例 2所制备的药物组合物芍药苷含量的 2.75倍 (8.48mg)，但这对两者的抗抑郁功效影响并不大，由此提示：白芍提取物中芍药内脂苷的抗抑郁作用要强于芍药苷，是白芍抗抑郁的主要有效成分。此分析尚待进一步验证。实施例 6本发明实施例 3所制备的药物组合物对小鼠悬尾不动时间的影

1. 实验材料

1.1 实验动物：

ICR小鼠，雄性，体重 18-22g。由维通利华动物实验中心提供，合格证编号： 2007-000 L

1.2 实验药物：

受试药物：本发明实施例 3所制备的药物组合物；

阳性药物：盐酸氟西汀（Fluoxetine, Prozac百忧解），礼来苏州制药有限公司，批号：国药准字 J20030017, 小鼠用量为 3.5mg/kg。配制方法：取出胶嚢内容物，用去离子水配制成溶液。

1.3 实验器材： Medlab生物信号釆集系统（南京易美科技有限公司）， JZ100型 100g 张力换能器（高碑店市新航机电设备有限公司）。

2. 实验方法

2.1 分组和给药

正常小鼠，随机法分为 5组，即空白对照组、阳性药物盐酸氟西汀组 ( 3.5mg kg )、本发明实施例 3所制备的药物组合物高（90mg/kg/d )、中 ( 45mg/kg/d )、低（ 22.5mg/kg/d )剂量组。各组均按 0.2ml/10g体重给药。每日一次，连续给药 7天，空白对照组给去离子水。

2.2 方法

以上各组除空白组外均连续给药 7天，于末次给药后 1小时进行实验。将小鼠尾端（在距尾尖 2cm处）用胶布固定在 100g张力换能器的连线上，使其呈倒悬状态，头部离实验台约 15cm, 换能器连接到 Medlab生物信号采集系统，适应 2min后，记录 4min之内的不动时间（秒）。

2.3 统计方法数据以士 s表示，以 SPSS 13.0统计软件处理，采用 One-Way ANOVA方差分析。

3. 实验结果

灌胃给药 7天，本发明实施例 3所制备的药物组合物高、中剂量组与阳性药组均能明显缩短小鼠悬尾不动时间，与空白组比较差异显著 (P<0.05)。结果见表 3。

表 3 对小鼠悬尾不动时间的影响

组别剂量 (mg/kg/d ) 样植不动时间（ X士 S) 空白组 - 10 105.05+8.91 阳性药物组 3.5 11 32.4lJ4.54* 受试药物低剂量组 22.5 10 91.10±16.03 受试药物中剂量组 45 10 30.80±4.92* 受试药物高剂量组 90 10 60.90±11.26* 注：与空白组比较， * P<0.05

4. 结论试验结果表明，灌胃给药 7天，本发明实施例 3所制备的药物组合物高、中剂量组可明显缩短小鼠悬尾不动时间（PO.05, 与空白组比较），提示其具有显著的抗抑郁作用。实施例 7本发明实施例 3所制备的药物组合物对利血平诱发的小鼠体温变化的影响

1. 实验材料

1.1 药品

受试药物：本发明实施例 3所制备的药物组合物；

盐酸氟西汀（Fluoxetine, Prozac百忧解），礼来苏州制药有限公司，批号：国药准字 J20030017, 小鼠用量为 3.5mg/kg。配制方法：取出胶囊内容物，用去离子水配制成溶液。

1.2 动物

ICR小鼠，雄性，体重 18-22g，购自维通利华动物实验中心，合格证编号： 2007-0001

1.3 器材

电子体温计。

2. 实验方法

2.1 分组和给药

正常小鼠随机区组法分为 6组，即空白对照组、模型组、阳性药物盐酸氟西汀组（3.5mg/kg/d )、本发明实施例 3所制备的药物组合物高

( 90mg/kg/d )、中（ 45mg/kg/d )、低（ 22.5mg/kg/d )剂量组。各组均按 0.2ml/10g 体重给药。每日一次，连续给药 7天，空白对照组给去离子水。

2.2 方法

以上各组均连续给药 7天，于末次给药后 1小时腹腔注射 1.6mg/kg利血平， 2小时后测小鼠肛温（将电子体温计探头插入小鼠肛门内约 1.5cm处）。实检室恒温于 26 °C。

2.3 统计方法数据以士 s表示，以 SPSS 13.0统计软件处理，釆用 One-Way A OVA方 3. 实险结果

注射利血平后，小鼠体温明显下降（与空白对照组比， P < 0.01 )，本发明实施例 3所制备的药物组合物高、中剂量组均能显著对抗利血平所致小鼠体温下降，与模型组比较差异显著 (P<0.05)。结果见表 4。

表 4对利血平所致小鼠体温下降的影响

组别剂量 (mg/kg/d ) 样本数体温（； ±s，°C) 空白组 - 1 1 37.44±0.36* 模型组 - 12 35.15±0.51 阳性药物组 3.5 12 36.69±0.35* 受试药物低剂量组 22.5 12 35.34±0.43 受试药物中剂量组 45 12 37.14±0.53* 受试药物高剂量组 90 11 36.86±0.77* 注：与模型组比较， *P < 0.05

4. 结论

试验结果表明 , 本发明实施例 3所制备的药物组合物能明显升高小鼠体温，表明其具有明显的对抗利血平的作用。由于利血平是一种嚢泡再摄取抑制剂，它不可逆的损伤嚢泡膜，损毁嚢泡膜的功能，使递质留在嚢泡外，易被单胺氧化酶降解，从而使单胺类神经递质耗竭，引发抑郁，所以本发明实施例 3所制备的药物组合物的作用机制可能与单胺递质有关。实施例 8 本发明实施例 3所制备的药物组合物对大鼠嗅球损毁模型的影

1. 实验材料

1.1 药品

受试药物：本发明实施例 3所制备的药物组合物；

P曰性药物：盐酸氟西汀（Fluoxetine, Prozac百忧解），礼来苏州制药有限公司，批号：国药准字 J20030017, 大鼠用量为 2.5mg/kg。配制方法：取出胶嚢内容物，用去离子水配制成溶液。

1.2 动物

SD大鼠，雄性，体重 240-260g，购自维通利华动物实验中心，合格证编号： 2007-0001„

1.3 器材

307-6型台式牙钻车， HS-80型电烙铁（270mm ), 手术灯，大鼠行为观察敞箱，大鼠跳台反应箱。

2. 实验方法

2.1 造模

正常大鼠用水合氯酪麻醉后，从大鼠前自前 1 cm至前囟后 1 cm正中线处切开，暴露颅骨，在距离前自前面 8 mm、正中线两 #J2 mm处分另 ll钻两个 2 mm直径的小孔，将电烙铁垂直插入颅内，破坏嗅球。假手术组，操作同前，但不破坏嚷球。

2.2 分组和给药

术后进行观察，出血过多，创伤较重的大鼠剔除。恢复一周后，将手术大鼠随机分成 5个组，即模型组、阳性药物盐酸氟西汀组（2.5mg/kg/d )、本发明实施例 3所制备的药物组合物（70mg/kg/d )、中（35mg/kg/d )、低 ( 17.5mg/kg/d )剂量组，加上假手术组，总共 6个组。各组均按 1.0ml/100g 体重给药。造模后连续给药 21天，每日一次。假手术组和模型组给予去离子水。

2.3 行为学观察

2.3.1 开场活动实验

敞箱高 40cm、长和宽均为 80cm, 无盖，周壁和箱底均为黑色，底面划分为面积相等的 25块方格。以动物穿越方格数作为水平活动得分，以直立次数为垂直活动得分（两前肢离地 lcm以上）。每只动物进行 1次测定，每次 3min。

2.3.2跳台被动回避实验

实验装置为一个 30cmx30cmx30cm的有机玻璃箱，底面是铜栅，间距为 0.8cm, 可以通电，电压由一变压器控制。箱子左后角置一高 5cm、直径为 8cm的木头平台。将动物放入反应箱内适应环境 3分钟，然后立即通 36V交流电，动物受到电击，正常反应是跳上平台以躲避伤害性刺激。多数动物可能会再次或多次跳至铜栅上，受到电击后又迅速跳回平台，如此训练 5分钟，大鼠受到电击的为错误次数。 24小时后重作测试，将大鼠置于平台上，通电并记时，记录 5 分钟内的错误次数。

2.4 统计方法数据以士 s表示，以 SPSS 13.0统计软件处理，釆用 One-Way ANOVA方差分析。 3. 实验结果

3.1 本发明实施例 3所制备的药物组合物对嗅球损毁模型大鼠开场活动的影响

结果表明，与伪手术组相比，模型组大鼠水平运动得分、垂直运动得分显著升高（PO.05 ), 与模型组相比，本发明实施例 3所制备的药物组合物中、高剂量组和阳性药盐酸氟西汀组大鼠水平运动、垂直运动得分显著降低（P<0.05 )，具体结果见表 5。表 5 嗅球损毁大鼠敞箱活动实验结果（ ^士 s )

组别剂量 (mg/kg/d ) 样本数垂直运动水平运动伪手术组 - 11 9.00±3.74* 26.82±8.82* 模型组 - 11 12.81±5.00 43.00±16.55 阳性药物组 2.5 10 9.20±2.10* 27.00±7.02* 受试药物低剂量组 17.5 11 12.45±3.91 40.36±11.87 受试药物中剂量组 35 11 9.36±1.91 * 26.64±7.31 * 受试药物高剂量组 70 11 9.45±3.53* 27.09±10.23* 注：与模型组比较， *P<0.05。

3.2 本发明实施例 3所制备的药物组合物对嗅球损毁模型大鼠跳台被动回避实险的影响

结果表明，与伪手术组相比模型组大鼠训练期错误次数和测试期错误次数显著增加（ PO.05 )，与模型组相比，本发明实施例 3所制备的药物组合物中、高剂量组及盐酸氟西汀组大鼠训练期错误次数和测试期错误次数显著降低 ( P<0.05 ), 见表 6。嗅球损毁大鼠跳台被动回避实验结果（ ±s ) 组别剂量 (mg/kg/d ) 样本数训练期错误次数测试期错误次数伪手术组 - 11 1.55±1.75* 1.27±1.27* 模型组 - 11 3.18±1.83 2.72±1.79 阳性药物组 2.5 10 1.60±1.17* 1.50±1.26* 受试药物低剂量组 17.5 11 2.36±1.36 2.18±1.33 受试药物中剂量组 35 11 1.55±1.69* 1.45±1.36* 受试药物高剂量组 70 11 1.73±1.74* 1.45±0.82* 注：与模型组比较， *P<0.05。

4. 结论试验结果表明，本发明实施例 3所制备的药物组合物可显著降低模型大鼠的水平运动和垂直运动量，减少模型大鼠在跳台被动回避实验的训练期和测试期的触电次数；表明本发明实施例 3所制备的药物组合物能改善嗅球损毁大鼠的行为异常（大鼠嗅球损毁后，在开场活动实验中出现自发活动增加，这与慢性应激大鼠所表现的自发活动减少不一样，但都是行为异常的表现），并提高其学习记忆能力。

以上结果均表明，本发明实施例 3所制备的药物组合物具有一定的抗抑郁作用。实施例 9本发明实施例 3所制备的药物组合物对嗅球损毁大鼠 HPA轴的影响

1. 实验材料

1.1 药品及试剂

受试药物：本发明实施例 3所制备的药物组合物；

阳性药物：盐酸氟西汀（Fluoxetine, Prozac百忧解），礼来苏州制药有限公司，批号：国药准字 J20030017, 大鼠用量 2.5mg/kg，配制方法：取出胶嚢内容物，用去离子水配制成溶液。

促腎上腺皮质激素释放素放免试剂盒、血清皮质酮放免试剂盒及促肾上腺皮质激素试剂盒均购自北京华英生物技术研究所。

1.2 动物

SD大鼠，雄性，体重 220-240g，购自维通利华动物实验中心，合格证编号： 2007-0001。

1.3 器材

TGL-16A台式高速冷冻离心机， γ-911全自动放免计数仪，购自中国科技大学实业总公司。

2. 实验方法

2.1 分组和给药

同实^ r例 5。

2.2 造模

同实验例 5。

2.3 样品制备及检测方法

行为学实验结束后，所有动物断头取血，放置， ⁴°C , 3000rpm离心 lOmin, 分离血清，取大脑组织，迅速在；水上取下丘脑、垂体、称重后置组织冷冻管中用液氮快速冷冻后，放入 -70°C冰箱保存至测定。按试剂盒说明书，用放免法测试上述指标。

2.4 统计方法数据以士 s表示，以 SPSS 13.0统计软件处理，采用 One-Way ANOVA方差分析。

3. 实验结果

结果表明，与伪手术组相比模型组大鼠下丘脑促肾上腺皮质激素释放素 ( CRH )、垂体远侧部促肾上腺皮质激素（ACTH )、血清皮质醇（CORT ) 均明显增加（P<0.05 )，与模型组相比，本发明实施例 3所制备的药物组合物中、高剂量组和阳性药盐酸氟西汀组均能明显降低嗅球损毁大鼠下丘脑 CRH、垂体 ACTH、血清 CORT的含量，见表 7。

表 7对嗅球损毁大鼠 HPA轴的影响

组别剂量（mg/kg/d ) 样本数 CRH ACTH CORT 伪手术组 - 11 5.16±1.24* 25.84±10.43* 356.82±57.46* 模型组 - 11 6.60±1.51 36.51±12.84 424.42±130.27 阳性药物组 2.5 10 4.48±1.09* 23.04土 8.68* 352.28±40.69* 受试药物低剂量组 17.5 11 5.90±2.07 28.01± 9.63 371.31±73.79 受试药物中剂量组 35 11 3.77±1.82* 17.96± 9.62* 298.34±37.65* 受试药物高剂量组 70 11 4.30±1.20* 19.45士 9.93* 298.34±37.65* 注：与模型组比较， *P<0.05。

4. 结论

嗅球损毁大鼠出现抑郁行为的神经生化机制尚不十分清楚，其机制可能与嗅球破坏后 5-HT能神经系统的改变有关。大鼠嗅球损毁后，投射到嗅球的 5-HT神经纤维遭到破坏， 5-HT能神经系统受损， 5-HT神经元活性降低，刺激 CRH分泌，后者再作用于垂体，引起 ACTH分泌增加，从而导致外周皮质醇分泌增加，使 HPA轴过度活化。

另一方面，嗅球损毁作为一种应激方式，使大鼠 HPA轴过度活化，血中皮质醇持续升高，后者降低了嗅球损毁大鼠垂体前 GR受体的数量和敏感性，从而降低皮质醇对应激的负反馈。本研究测定了下丘脑 CRH、垂体 ACTH和血清 CORT的含量，结果表明，嗅球损毁后，大鼠下丘脑的 CRH 和垂体的 ACTH分泌明显增加，血中的 CORT的含量也显著升高，与临床抑郁症的内分泌特点一致，这可能是 HPA轴过度活化的结果。给予本发明实施例 3所制备的药物组合物治疗后，可显著减少模型大鼠下丘脑的 CRH 和垂体的 ACTH分泌，并降低血中 CORT的含量，提示本发明实施例 3所制备的药物组合物可能是通过抑制 HPA轴过度亢进而发挥抗抑郁作用。

Claims

权利要求

1、一种用于治疗抑郁症的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括芍药苷和芍药内酯苷两种活性成分，其中：

所述芍药苷与芍药内酯苷的重量比为 1 : 0.45-1 : 1.4;

优选地，所述芍药苷与芍药内酯苷的重量比为 1 : 0.75-1 : 1.2;

最优选地，所述芍药苷与芍药内酯苷的重量比为 1 : 0.8-1 : 1。

2、权利要求 1所述的药物组合物，其特征在于，该药物组合物为芍药提取物，该提取物的制备方法如下：

将芍药（白芍或赤芍 )破碎，以 70%乙醇水溶液提取 (或是用水渗漉），回收乙醇，过滤得澄清液，通过 D101或是 ME-1型等大孔树脂吸附柱纯化，收集解析液，浓缩干燥，即得所述芍药提取物。

3、根据权利要求 1或 2所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体或赋形剂；

所述药物组合物的剂型选自：口服制剂、肠胃外给药制剂、局部和吸入式给药制剂和透皮制剂；

优选地，所述剂型为选自如下的口服制剂：片剂、胶嚢剂、粉剂、颗粒剂、丸剂、滴剂，果汁和糖浆剂；

进一步优选地，所述药学上可接受的载体或赋形剂选自：崩解剂、润滑剂、粘合剂、填充剂、溶剂、香料、甜味剂、抗氧化剂。

4、一种制备权利要求 1-3任一项所述的药物组合物的方法，所述方法为醇水提取，过吸附柱，其特征在于，所述方法包括：

1 )将芍药（白芍或赤芍）破碎，用 70%的乙醇水溶液加热回流 3次， 3次的溶剂重量分别为芍药的 5倍、 4倍、 3倍，浓缩回收乙醇，稀释浸膏至 4倍体积，过滤得澄清液；

2 )将上述 1 )得到的澄清液上 ME-1型大孔树脂吸附柱，以 1床体积 / 小时的流速吸附，先用 4倍床体积的水冲洗，然后用 2倍床体积的 10%乙醇冲洗，再用 30%乙醇冲洗，收集第 2、 3、 4、 5个床体积的解析液；

3 )将上述 2 )得到的解析液浓缩干燥，得到所述药物组合物；优选地，所述芍药为白芍。

5、一种制备权利要求 1-3任一项所述的药物组合物的方法，所述方法为水渗漉提取，过吸附柱，其特征在于，所述方法包括：

1 )将芍药（白芍或赤芍 )破碎，用 2~3倍量的水浸泡 2小时，将药材与药液倒入渗漉罐，加 12倍量的水，渗漉 12小时，收集渗漉液，浓缩，过滤，得澄清液；

2 )将上述 1 )得到的澄清液上 D-101型大孔树脂吸附柱，以 1床体积 / 小时的流速吸附，先用 4倍床体积的水冲洗，然后用 2倍床体积的 10%乙醇冲洗，再用 50%乙醇冲洗，收集第 2、 3、 4、 5个床体积的解析液；

6、芍药苷和芍药内酯苷共同作为活性成分在制备用于治疗抑郁症的药物、保健食品和 /或营养剂中的用途；

优选地，所述药物、保健食品和 /或营养剂中不含其它活性成分。

7、芍药苷和芍药内酯苷共同作为活性成分在制备用于同时治疗抑郁症及与其并发的疾病、障碍或者病症的药物、保健食品和 /或营养剂中的用途；优选地，所述疾病、障碍或病症选自焦虑、睡眠障碍和创伤后应激性障碍；和 /或

8、权利要求 6或 7所述的用途，其特征在于，所述抑郁症为伴生有炎症的抑郁症，优选为：脑卒中抑郁症、类风湿关节炎伴生的抑郁症和 /或老年抑郁症。

9、权利要求 1-3任一项所述的药物组合物在制备用于治疗抑郁症的药物、保健食品和 /或营养剂中的用途。

10、权利要求 1-3任一项所述的药物组合物在制备用于同时治疗抑郁症及与其并发的疾病、障碍或者病症的药物、保健食品和 /或营养剂中的用途；优选地，所述与其并发的疾病、障碍或病症为焦虑、睡眠障碍、阿尔茨海默病和创伤后应激性障碍。

11、权利要求 9或 10所述的用途，其特征在于，所述抑郁症为伴生有炎症的抑郁症，优选为：脑卒中抑郁症、类风湿关节炎伴生的抑郁症和 /或老年抑郁症。

12、一种治疗抑郁症的方法，其特征在于，所述方法包括向受试者给予治疗有效量的芍药苷和芍药内酯苷的药物组合物；

所述治疗有效量选自 0.3〜10mg/kg/d体重，优选为 0.6~5mg/kg/d体重，进一步优选为 l~3mg/kg/d体重。

13、一种同时治疗抑郁症及与其并发的疾病、障碍或者病症的方法，其特征在于，所述方法包括向受试者给予治疗有效量的芍药苷和芍药内酯苷的药物组合物；

所述治疗有效量选自 0.3〜10mg/kg/d体重，优选为 0.6~5mg/kg/d体重，进一步优选为 l〜3mg/kg/d体重。

14、权利要求 12或 13所述的方法，其特征在于，所述抑郁症为伴生有炎症的抑郁症，优选为：脑卒中抑郁症、类风湿关节炎伴生的抑郁症和 / 或老年抑郁症。