CN103797006A

CN103797006A - 用作端锚聚合酶抑制剂的4-哌啶基化合物

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Publication number: CN103797006A
Application number: CN201280043558.7A
Authority: CN
Inventors: C·H-T·陈; N·C·钦; L·V·迪彼得罗; J·范; M·G·巴勒莫; M·D·舒尔茨; B-B·托雷
Original assignee: Novartis AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2011-07-13
Filing date: 2012-07-13
Publication date: 2014-05-14
Anticipated expiration: 2032-07-13
Also published as: US20150126513A1; CO6880065A2; EP2731940B1; DOP2014000012A; NZ620426A; AP2014007400A0; JP2014522855A; MA35342B1; US9163003B2; JP5957077B2; BR112014000792A2; CR20140071A; ES2548513T3; EA201490272A1; AU2012282076A1; KR20140051944A; USRE46942E1; WO2013008217A1; TN2014000016A1; CA2841932A1

Abstract

本发明提供了式(I)的化合物。本发明还提供了包含式(I)化合物的药物组合物和组合产品，以及此类化合物作为端锚聚合酶抑制剂和在治疗与Wnt信号转导和端锚聚合酶1和2信号转导相关的病症中的用途，所述病症包括但不限于癌症。

Description

用作端锚聚合酶抑制剂的4-哌啶基化合物

发明领域

本发明涉及新的4-哌啶基化合物、包含此类化合物的药物组合物、和此类化合物作为端锚聚合酶抑制剂以及在治疗与Wnt信号传导及端锚聚合酶1和2信号传导相关的病症(包括但不限于癌症)中的用途。

发明背景

进化上保守的常规Wnt/β-连环蛋白信号转导级联控制了多细胞动物发育的许多方面。所述通路的背景依赖性的活化参与胚胎细胞命运决定、干细胞调节和组织内稳态(Clevers,H.Cell2006,127,469-80)。

连环蛋白通路的主要特征是由β-连环蛋白降解复合物引起的下游效应器β-连环蛋白的受控的蛋白分解。β-连环蛋白降解复合物的主要组分是结肠腺瘤性息肉病(APC)蛋白、轴蛋白(Axin)和GSK3α/β。在没有Wnt通路活化时，胞质β-连环蛋白组成性地被磷酸化并定向降解。当Wnt通路活化时，β-连环蛋白降解复合物解离，其导致核的β-连环蛋白蓄积和Wnt通路响应基因的转录。

已经在许多癌症中观察到，由Wnt蛋白过表达或突变所介导的该通路不适当的活化影响β-连环蛋白降解复合物的组分，因此导致β-连环蛋白的稳定化。值得注意的是，肿瘤抑制因子APC的截短突变是在结直肠癌中最为普遍的基因改变(Miyaki,M等人Cancer Res1994,54,3011-20；Miyoshi,Y.等人Hum Mol Genet1992,1,229-33；和Powell,S.M等人Nature1992,359,235-7)。此外，已经分别在肝癌和结直肠癌患者中发现轴蛋白1和轴蛋白2突变(Taniguchi,K等人Oncogene2002,21,4863-71；Liu,W等人Nat Genet2000,26,146-7；Lammi,L等人Am J Hum Genet2004,74,1043-50)。这些体细胞突变导致β-连环蛋白的不依赖Wnt的稳定化和β-连环蛋白介导的转录的组成性活化。

在许多其它癌症中也涉及失控的Wnt通路活化(Polakis,P.Curr OpinGenet Dev2007,17,45-51；和Barker,N.等人Nat Rev Drug Discov2006,5,997-1014)，包括结直肠癌、黑素瘤、乳腺癌、肝癌、肺癌和胃癌。其它与异常的Wnt信号相关联的病症包括骨质疏松、骨关节炎、多囊肾病、肺纤维化、糖尿病、精神分裂症、血管疾病、心脏病、不形成肿瘤的增殖性疾病和神经变性疾病(例如阿尔茨海默病)。

多个蛋白组成的β-连环蛋白降解复合物的有效组装取决于其主要组分的稳态水平。已经报道，轴蛋白是调节β-连环蛋白降解复合物效能的浓度限制因子(Salic,A.,等人Mol Cell2000,5,523-32；和Lee,E.等人PLoS Biol2003,1,E10)，并且轴蛋白表达增加可以促进在表达截短的APC的细胞系中β-连环蛋白的降解(Behrens,J.等人Science1998,280,596-9；Kishida,M.等人Oncogene1999,18,979-85；和Hart,M.J.,等人Curr Biol1998,8,573-81)。因此，可能轴蛋白水平需要严格地调控以确保适当的Wnt通路信号转导。

最近发现，如WO2009/059994中和Huang等人(Huang,S.M.,等人Nature2009,461,614-620)所解释，可以通过抑制聚-ADP-核糖聚合酶(PARP)酶类，即端锚聚合酶1和端锚聚合酶2来稳定轴蛋白，从而促进β-连环蛋白降解。两种端锚聚合酶亚型与轴蛋白的高度保守区域相互作用，并通过泛素-蛋白酶体通路刺激其降解。可以利用该以前未知的用于稳定轴蛋白并因此促进β-连环蛋白降解的机制来治疗与Wnt信号转导相关的病症。轴蛋白是一系列生理过程的重要调节因子，所述生理过程包括用于髓鞘再生的大脑少突胶质细胞祖细胞的分化(Fancy,S.,等人Nature NeuroSci2011,14,1009-1017)以及肺纤维化过程中上皮向间质的转化(Ulsamer,A.,等人J Bio Chem2012,287,5164-5172)。因此，通过稳定轴蛋白，端锚聚合酶抑制剂可以用作脑损伤后的髓鞘再生和肺纤维化的治疗。

端锚聚合酶具有几种结合蛋白配体，包括TRF1，一种双链的端粒重复结合蛋白(Smith,S.,等人Science1998,282,1484-1487)；NuMA，一种在有丝分裂纺锤体装配中必需的蛋白质(Chang,W.,等人Biochem J,2005,391,177-184)；IRAP，一种涉及响应于胰岛素的葡萄糖摄入的整合膜蛋白(Chi,N.W.,等人J Biol Chem2000,275,38437-38444)；以及Mcl-1，凋亡前体蛋白质(Bae,J.,等人J Biol Chem2003,278,5195-5204)。

通过其多种相互作用的蛋白质，端锚聚合酶蛋白涉及不同的生物学功能。端锚聚合酶使TRF1聚(ADP-核糖基)化，使其从端粒中释放，并促进端粒对端粒末端转移酶开放。因此，端锚聚合酶作为阳性调节因子通过端粒末端转移酶使端粒延长，其可以得到端锚聚合酶长期过表达导致端粒延长的发现的支持(Cook,B.D.等人Mol Cell Biol2002,22,332-242)。端粒末端转移酶的端粒维持被认为可造成失控的癌细胞增殖(Hahn,W.C.等人,Nat Med1999,5,1164-1169)。端锚聚合酶可以作为通过抑制端粒末端转移酶的端粒可进入性的癌症治疗的靶点。端锚聚合酶抑制可以用作有效的癌症疗法，用于治疗患有多种癌症的患者，包括白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、肺癌和乳腺癌。

端锚聚合酶还在细胞有丝分裂中发挥作用：1)在有丝分裂过程中将NuMA聚(ADP-核糖基)化，并调节其在纺锤体极的功能(Chang,W.,等人Biochem J2005,391,177-184)；2)调节纺锤体的组装和结构(Chang,P.,等人Nature2004,432,645-649)；以及3)在端粒中维持姐妹染色单体拆分(Dynek,J.,等人Science2004,304,97-100)。抑制端锚聚合酶导致细胞有丝分裂停止或衰减，并因此可用于治疗具有异常有丝分裂的疾病，例如癌症。实例包括乳腺癌、肺癌、卵巢癌、白血病、淋巴瘤和黑素瘤。此外，端锚聚合酶1被确定为中心体簇集所需的基因，中心体簇集是具有多余中心体的癌细胞用于抑制多极有丝分裂并促使两极有丝分裂的机制(Kwon,M.,等人Genes Dev2008,22,2189-2203)。因此，抑制端锚聚合酶可以用于治疗具有中心体扩增的癌症，包括实体和血液癌症，实例包括乳腺癌、膀胱癌、肺癌、结肠癌和白血病。

此外，端锚聚合酶的细胞定位之一是在高尔基体与葡萄糖转运蛋白GLUT4囊泡共定位，其中端锚聚合酶与IRAP结合，并且端锚聚合酶参与调节GLUT4在脂细胞中的运输(Chi,N.W.,等人J Biol Chem2000,275,38437-38444)。端锚聚合酶缺陷的小鼠由于同时增加了脂肪酸氧化和胰岛素刺激的葡萄糖利用，从而表现出肥胖减少和增加的能量消耗(Yeh,T.,等人Diabetes2009)。这证明端锚聚合酶参与哺乳动物的能量稳态，并且抑制端锚聚合酶可以用于治疗代谢性疾病，例如肥胖症。

已经报道过，端锚聚合酶是单纯疱疹病毒(HSV)的宿主蛋白靶点，通过高度磷酸化、核转运和蛋白酶体降解而被HSV进行调节(Li Z.,等人J ofVirol2012,86,492-503)。更重要的是，有效的HSV病毒复制需要端锚聚合酶蛋白质的酶活性。用抑制剂XAV939抑制端锚聚合酶活性(WO2009/059994,Huang,S.M.,等人Nature2009,461,614-620)遏制了HSV病毒蛋白表达，并且降低了病毒生长。因此，抑制端锚聚合酶可以用作抗病毒治疗，包括但不限于治疗HSV感染。

因此，抑制端锚聚合酶(TNKS)和/或Wnt信号转导的化合物可以用于治疗由此类抑制所介导的疾病。

发明简述

本发明提供了式(I)化合物：

其中R¹-R⁴和n如本文所定义。本发明还提供了包含式(I)化合物的药物组合物和药物组合产品，以及此类化合物作为端锚聚合酶抑制剂和在治疗与Wnt信号转导及端锚聚合酶1和2信号转导相关的病症(包括但不限于癌症)中的用途。

发明详述

本发明提供了式(I)化合物

其中：

R¹是R²或R²-NHC(O)-；

R²是苯基，其任选地被一个或两个各自独立地选自以下的取代基取代：卤素、OH、CN、NO₂、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷基、C(O)R^a、COOR^a、NR^aR^b、NHC(O)R^a和C(O)NR^aR^b；

或者

R²是具有一至四个选自N、O和S的杂原子的5元杂芳基，或者R²是具有一个或两个N的6元杂芳基，

所述5和6元杂芳基环任选地被一至三个各自独立地选自以下的取代基取代：卤素、氧代、OH、CN、NO₂、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷基、C(O)R^a、COOR^a、NR^aR^b、NHC(O)R^a和C(O)NR^aR^b；

或者

R²是具有1-4个选自N、O和S的杂原子的8-10元二环杂芳基，

所述8-10元杂芳基任选地被一至三个各自独立地选自以下的取代基取代：

(a)卤素、

(b)氧代、

(c)OH、

(d)CN、

(e)NO₂、

(f)任选地被一个羟基或一个C_1-6烷氧基取代的C_1-6烷基、

(g)C_1-6烷氧基、

(h)C_1-6卤代烷基、

(i)C(O)R^a、

(j)COOR^a,

(k)NR^aR^b、

(l)NHC(O)R^a和

(m)C(O)NR^aR^b；

R³是H，且R⁴是苯基，其任选地被一至三个各自独立地选自以下的取代基取代：卤素、OH、CN、NO₂、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷基、C(O)R^a、COOR^a、NR^aR^b、NHC(O)R^a和C(O)NR^aR^b；

或者

R³和R⁴与它们所连接的原子一起形成任选被取代的茚满-1-酮，所述茚满-1-酮通过螺碳4与式(I)的哌啶环连接，并且其任选地被一至三个各自独立地选自以下的取代基取代：卤素和C_1-6烷氧基；

R^a是H或C_1-6烷基；

R^b是H或C_1-6烷基；且

n是1或2。

如本文所用，术语“烷基”是指具有最多6个碳原子的全饱和的支链或直链烃基部分。除非另外提供说明，烷基是指具有1-6个碳原子烃基部分。烷基基团可以任选地被一个或多个如所定义的取代基取代。烷基代表性的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基和正己基。

如本文所用，术语“烷氧基”是指通过氧桥连接的烷基部分(即–O-C_1-6烷基，其中烷基如本文所定义)。通常情况下，烷氧基基团具有1-6个碳原子。烷氧基代表性的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、戊氧基、己氧基。

如本文所用，术语“环烷基”是指4-7元单环饱和烃环系。环烷基基团可以任选地被一个或多个本文所定义的取代基取代。环烷基包括环丁基、环戊基、环己基和环庚基。

如本文所用，术语“环烯基”是指5-7元单环不饱和(但是非芳香性)烃环系。环烯基基团可以任选地被一个或多个本文所定义的取代基取代。环烯基包括环戊烯基、环己烯基和环庚烯基。

如本文所用，术语“卤素”是指氟、溴、氯或碘，特别是氟或氯。卤素取代的基团和部分，例如被卤素取代的烷基(卤代烷基)可以是单、多或全卤代的。

如本文所用，术语“卤代烷基”是指如本文所定义的烷基，其被一个或多个如本文所定义的卤素基团取代。该卤代烷基可以是单卤代烷基、二卤代烷基或多卤代烷基(包括全卤代烷基)。单卤代烷基可以在烷基基团内含有一个碘、溴、氯或氟。二卤代烷基和多卤代烷基基团可以在烷基内含有含有两个或多个相同的卤素原子或不同卤素基团的组合。通常情况下，所述多卤代烷基包含直至12个、或10、或8、或6、或4、或3、或2个卤素基团。卤代烷基的非限定性实例包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氯甲基、二氯甲基、三氯甲基、五氟乙基、七氟丙基、二氟氯甲基、二氯氟甲基、二氟乙基、二氟丙基、二氯乙基和二氯丙基。全卤代烷基是指全部氢原子都被卤素原子代替的烷基。

如本文所用，术语“杂原子”是指氮(N)、氧(O)和硫(S)原子，特别是氮或氧。

如本文所用，除非另外指明，术语"杂芳基"是指5或6元单环芳香环系，具有1-4个杂原子。通常5或6元杂芳基基团包括2-或3-噻吩基；2-或3-呋喃基；2-或3-吡咯基；2-、4-或5-咪唑基；3-、4-或5-吡唑基；2-、4-或5-噻唑基；3-、4-或5-异噻唑基；2-、4-或5-噁唑基；3-、4-或5-异噁唑基；3-或5-1,2,4-三唑基；4-或5-1,2,3-三唑基；呋咱基；噻二唑基；四唑基；2-、3-或4-吡啶基；3-或4-哒嗪基；3-、4-或5-吡嗪基；2-吡嗪基和2-、4-或5-嘧啶基。

杂芳基还指8-10元二环芳香环系，除非另外指明，具有1-4个杂原子。杂芳基还指8-10元环系，其中杂芳环与一个苯基、环烷基、环烯基或杂环基环稠合，其中连接基或连接点是在杂芳环上。非限定性实例包括1-、2-、3-、5-、6-、7-或8-吲嗪基；1-、3-、4-、5-、6-或7-异吲哚基；2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基；2-、3-、4-、5-、6-或7-吲唑基；2-、4-、5-、6-、7-或8-嘌呤基；1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-或9-喹嗪基；2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基；1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基；1-、4-、5-、6-、7-或8-酞嗪基；2-、3-、4-、5-或6-萘啶基；2-、3-、5-、6-、7-或8-喹唑啉基；3-、4-、5-、6-、7-或8-噌啉基；2-、4-、6-或7-蝶啶基；1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-4aH咔唑基；1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-咔唑基；1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-或9-咔啉基；1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-菲啶基；1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-、8-或9-吖啶基；1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-或9-萘嵌间二氮杂苯基；2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-或10-菲咯啉基；1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-或9-酚嗪基；1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-吩噻嗪基；1-、2-、3-、4-、6-、7-、8-、9-或10-吩噁嗪基；2-、3-、4-、5-、6-或1-、3-、4-、5-、6-、7-、8-、9-或10-苯并异喹啉基；2-、3-、4-或噻吩并[2,3-b]呋喃基；2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10-或11-7H-吡嗪并[2,3-c]咔唑基；2-、3-、5-、6-或7-2H-呋喃并[3,2-b]-吡喃基；2-、3-、4-、5-、7-或8-5H-吡啶并[2,3-d]-o-噁嗪基；1-、3-或5-1H-吡唑并[4,3-d]-噁唑基；2-、4-或54H-咪唑并[4,5-d]噻唑基；3-、5-或8-吡嗪并[2,3-d]哒嗪基；2-、3-、5-或6-咪唑并[2,1-b]噻唑基；1-、3-、6-、7-、8-或9-呋喃并[3,4-c]噌啉基；1-、2-、3-、4-、5-、6-、8-、9-、10或11-4H-吡啶并[2,3-c]咔唑基；2-、3-、6-或7-咪唑并[1,2-b][1,2,4]三嗪基；7-苯并[b]噻吩基；2-、4-、5-、6-或7-苯并噁唑基；2-、4-、5-、6-或7-苯并咪唑基；2-、4-、4-、5-、6-或7-苯并噻唑基；1-、2-、4-、5-、6-、7-、8-或9-苯并氧杂基；2-、4-、5-、6-、7-或8-苯并噁嗪基；1-、2-、3-、5-、6-、7-、8-、9-、10-或11-1H-吡咯并[1,2-b][2]苯并氮杂

基。通常稠合的杂芳基基团包括但不限于2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-喹啉基；1-、3-、4-、5-、6-、7-或8-异喹啉基；2-、3-、4-、5-、6-或7-吲哚基；2-、3-、4-、5-、6-或7-苯并[b]噻吩基；2-、4-、5-、6-或7-苯并噁唑基；2-、4-、5-、6-或7-苯并咪唑基；2-、4-、5-、6-或7-苯并噻唑基；环庚二烯并[d]咪唑基；7,8-二氢-5H-吡喃并[4,3-d]嘧啶基；1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基；噻吩并[3,2-d]嘧啶基；6,7-二氢-5H-环戊二烯并嘧啶基；5,6-二氢-噻唑并[2,3-c][1,2,4]三唑基；[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶基；7,8-二氢-5H-吡喃并[3,4-d]哒嗪基；和异噁唑并[5,4-b]吡啶基。

除非另外指明，包含超过一个杂原子的杂芳基基团可以包含不同的杂原子。杂芳基基团可以任选地被一个或多个本文所定义的取代基取代。

如本文所用的术语“杂环基”是指含有1-4个杂原子的4-7元单环饱和或不饱和环。杂环基环不是芳香性的。包含超过一个杂原子的杂环基可以包含不同的杂原子。杂环基基团可以任选地被一个或多个本文所定义的取代基取代。杂环基的实例包括四氢呋喃(THF)、二氢呋喃、1,4-二噁烷、吗啉、1,4-二噻烷、哌嗪、哌啶、1,3-二氧杂环戊烷、咪唑烷、咪唑啉、吡咯啉、吡咯烷、四氢吡喃、二氢吡喃、氧杂硫杂环戊烷、二硫杂环戊烷、1,3-二噁烷、1,3-二噻烷、氧杂硫杂环已烷、硫吗啉等。

当任何基团或部分(例如烷基、杂芳基或苯基)被本文定义为“任选地被一个、一个或两个，或者一至三个各自独立地选自以下的取代基取代”时，应当理解，所述基团或部分是未取代的或者被一个、一个或两个，或者一至三个取代基取代，其中各个取代基独立地选自所述取代基的组。

本领域技术人员应当理解，可以制备式(I)化合物的盐，包括可药用盐。这些盐类可以在所述化合物最终分离和纯化过程中原位制备，或者通过独立地分别将以其游离酸或游离碱形式的纯化的化合物与适合的碱或酸反应制备。

可以与无机酸和有机酸形成可药用酸加成盐，例如，乙酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、溴化物/氢溴酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、樟脑磺酸盐、氯化物/盐酸盐、氯代茶碱盐(chlortheophyllonate)、柠檬酸盐、乙二磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、马尿酸盐、氢碘化物/碘化物、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、乳糖酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘甲酸盐、萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、硬脂酸盐、油酸盐、草酸盐、软脂酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、聚半乳糖醛酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、磺基水杨酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和三氟乙酸盐。

可以生成盐的无机酸包括，例如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。

可以生成盐的有机酸包括，例如，乙酸、丙酸、羟乙酸、草酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、磺基水杨酸等。可药用碱加成盐可以与无机或有机碱形成。

可以生成盐的无机碱包括，例如铵盐和元素周期表的I至XII族的金属。在某些实施方案中，所述盐是衍生自钠、钾、铵、钙、镁、铁、银、锌和铜；特别适合的盐包括铵盐、钾盐、钠盐、钙盐和镁盐。

可以生成盐的有机碱包括，例如，伯胺、仲胺和叔胺，取代的胺包括天然产生的取代胺类，环胺、碱离子交换树脂等。某些有机胺类包括异丙胺、苄星(benzathine)、胆碱盐(cholinate)、二乙醇胺、二乙胺、赖氨酸、葡甲胺、哌嗪及氨基丁三醇。

本发明的可药用盐能够通过常规的化学方法由碱性或酸性部分合成而来。通常，这些盐能够通过将这些化合物的游离酸形式与化学量的合适的碱(Na、Ca、Mg或K的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应、或者通过将这些化合物的游离碱形式与化学量的合适的酸反应而进行制备。这些反应通常在水中或在有机溶剂中、或在两者的混合物中进行。通常，在适宜时，需要使用非水介质，例如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。其它合适的盐的列表可在“Remington's Pharmaceutical Sciences”,第20版,MackPublishing Company,Easton,Pa.,(1985)；以及Stahl和Wermuth的“Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties,Selection,andUse”(Wiley-VCH,Weinheim,德国,2002)中找到。

还可以制备式(I)化合物的溶剂化物，包括可药用溶剂化物。“溶剂化物”是指由溶质和溶剂形成的可变化学量的复合物。为了本发明目的的此类溶剂不影响所述溶质的生物活性。适合溶剂的实例包括但不限于水、MeOH、EtOH和AcOH。其中水是溶剂分子的溶剂化物通常是指水合物。水合物包括包含化学计量的量的水的组分，以及包含可变量的水的组分。

如本文所用，术语“可药用”的含义是适用于药物用途的化合物。适用于药物的本发明化合物的盐和溶剂化物(例如水合物和盐的水合物)是其中平衡离子或结合溶剂是可药用的那些。但是，具有非可药用的平衡离子或结合溶剂的盐和溶剂化物也包含在本发明范围内，例如，用作制备其它本发明化合物和其可药用盐和溶剂化物的中间体。

式(I)化合物(包括其盐和溶剂化物)可以以结晶形式、非结晶形式或其混合物存在。所述化合物或其盐或溶剂化物还可以表现出多晶现象，即以不同结晶形式出现的能力。这些不同的结晶形式通常已知为“多晶型”。多晶型具有相同的化学组成，但是结晶固体状态的堆积、几何排列和其它描述特性不同。因此，多晶型可以具有不同的物理性质，例如形状、密度、硬度、变形性、稳定性和溶解度性质。多晶型通常表现出不同的熔点、IR光谱和X-射线粉末衍射图谱，其全部都可以用于鉴别。本领域技术人员能够了解，例如，通过改变或调整在式(I)化合物的结晶/重结晶中所使用的条件而可能产生不同的多晶型。

本发明还包含式(I)化合物的不同异构体。“异构体”是指具有相同构成和分子量，但是物理和/或化学性质不同的化合物。结构的区别可以是在结构中(几何异构体)或者在旋转平面偏振光的能力上(立体异构体)。关于立体异构体，式(I)化合物可以具有一个或多个不对称碳原子，并可以以外消旋体、外消旋混合物以及以单个对映异构体或非对映异构体出现。全部此类异构体形式都包含在本发明范围内，包括其混合物。如果所述化合物含有双键，取代基可以是E或Z构型。如果所述化合物包含二取代的环烷基，该环烷基的取代基可以具有顺式-或反式-构型。也期望包含全部的互变异构体形式。

式(I)化合物的任意不对称原子(例如碳等)都能够以外消旋或对映异构体富集存在，例如(R)-、(S)-或(R,S)-构型。在某些实施方案中，每一个不对称原子在(R)-或(S)-构型中有至少50%对映异构体过量、至少60%对映异构体过量、至少70%对映异构体过量、至少80%对映异构体过量、至少90%对映异构体过量、至少95%对映异构体过量、或至少99%对映异构体过量。如有可能，在具有不饱和双键的原子上的取代基以顺式-(Z)-或反式-(E)-形式存在。

因此，如本文所用，式(I)化合物能够是可能的异构体、旋转异构体、阻转异构体、互变异构体或其混合物之一的形式，例如作为基本上纯的几何异构体(顺式或反式)、非对映异构体、旋光异构体(对映异构体)、外消旋体或其混合物。

任何所得的异构体的混合物都能够基于组分的物理化学差异被分离成纯的或基本上纯的几何或旋光异构体、非对映异构体、外消旋体，例如通过色谱法和/或分步结晶。

任何所得的终产物或中间体的外消旋体能够通过已知的方法(例如通过其非对映体盐的分离)被拆分成旋光对映异构体，其用有光学活性的酸或碱获得，并且释放出有光学活性的酸性或碱性化合物。特别地，碱性部分因此可以用于将本发明的化合物拆分成其旋光对映异构体，例如通过与有光学活性的酸(例如酒石酸、二苯甲酰酒石酸、二乙酰酒石酸、二-O,O'-对甲苯酰酒石酸、扁桃酸、苹果酸或樟脑-10-磺酸)形成的盐的分步结晶。外消旋产物也能够通过手性色谱法进行拆分，例如使用手性吸附剂的高压液相色谱法(HPLC)。

本发明包括式(I)化合物的未标记的形式以及同位素标记的形式。同位素标记的化合物具有由本文所给出的化学式描述的结构，除了一个或多个原子被具有所选择的原子量或质量数的原子替换。能够被掺入本发明化合物的同位素的实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，分别例如²H、³H、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸F、³¹P、³²P、³⁵S、³⁶Cl、¹²⁵I。本发明包括如本文所定义的各种同位素标记的化合物，例如其中出现放射性同位素(例如³H和¹⁴C)的那些或其中出现非放射性同位素(例如²H和¹³C)的那些。这些同位素标记的化合物可用于代谢研究(例如使用¹⁴C)、反应动力学研究(例如用²H或³H)、检测或成像技术，例如正电子发射断层扫描术(PET)或单光子发射计算体层摄影术(SPECT)，包括药物底物组织分布分析，或者用于患者的放射治疗。特别地，对于PET或SPECT研究可能特别需要¹⁸F或标记的化合物。同位素标记的式(I)化合物通常能够通过本领域的技术人员已知的常规技术或者通过与所附实施例和制备例中所述方法类似的方法、使用合适的同位素标记的试剂代替以前所用的未标记的试剂进行制备。

此外，用较重的同位素、特别是氘(即²H或D)的取代可能带来由更强的代谢稳定性导致的某些治疗优势，例如增加的体内半衰期或减少的剂量需求或治疗指数的改善。可以理解，在本文中氘被视为式(I)的化合物的取代基。该较重同位素、特别是氘的浓度可能由同位素富集因子决定。如本文所用的术语“同位素富集因子”是指特定同位素的同位素丰度和天然丰度之间的比例。如果本发明化合物中的取代基被标为氘，那么对于每一个标出的氘原子，该化合物具有至少3500(在每一个标出的氘原子处52.5%氘掺入)、至少4000(60%氘掺入)、至少4500(67.5%氘掺入)、至少5000(75%氘掺入)、至少5500(82.5%氘掺入)、至少6000(90%氘掺入)、至少6333.3(95%氘掺入)、至少6466.7(97%氘掺入)、至少6600(99%氘掺入)、或至少6633.3(99.5%氘掺入)的同位素富集因子。

代表性的实施方案

本文描述了本发明的不同实施方案。应当认识到，在各个实施方案中所说明的特征可以与其它说明的特征组合，以提供给进一步的实施方案。

本发明的一项实施方案是式(II)化合物：

在本发明的另一项实施方案中，R³是H且R⁴是任选被取代的苯基。适合的R⁴是苯基，其被一个或两个各自独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-6烷基和C_1-6烷氧基。更加适合的R⁴是苯基，其任选地被一个或两个各自独立地选自以下的取代基取代：氟、氯、甲基和甲氧基。特别是，R⁴是4-甲氧基苯基、4-氯苯基、4-氟苯基或4-甲氧基-3-甲基苯基。

在另一项实施方案中，R³和R⁴与它们所连接的原子一起形成任选被取代的茚满-1-酮。适合地，茚满-1-酮任选地被一个C_1-6烷氧基(例如甲氧基)取代。

在另一项实施方案中，n是1。在另一项实施方案中，n是2。适合地，n是1。

在另一项实施方案中，R¹是R²。适合地，R²是任选被取代的苯基。更加适合地，R²是苯基，其任选地被一个或两个各自独立地选自以下的取代基取代：卤素(例如氯)和氰基。特别是，R²是2-氯苄腈。

在另一项实施方案中，R²是任选被取代的5或6元杂芳基。适合地，R²是任选被取代的嘧啶基或四唑基。

在另一项实施方案中，R²是任选被取代的8-10元二环杂芳基。

在另一项实施方案中，R²是

其中，(a)-(l)各自任选地被一个或两个各自独立地选自以下的取代基取代：卤素、OH、CN、NO₂、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷基、C(O)R^a、COOR^a、NR^aR^b、NHC(O)R^a和C(O)NR^aR^b。适合地，R²是(a)-(l)，其任选地被一个或两个各自独立地选自以下的取代基取代：卤素、CN和C_1-6烷基。更加适合地，R²是(a)-(l)，其任选地被一个或两个各自独立地选自以下的取代基取代：氯、溴、CN、甲基和乙基。适合地，R²是任选被取代的(b)、(g)或(h)。更加适合地，R²是(b)、(g)或(h)。

本发明的具体化合物包括：

2-氯-6-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-苄腈；

2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮；

2-{(S)-3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮；

2-{(R)-3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮；

2-氯-5-((3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)苄腈；

6-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-1-甲基-1,3a,5,7a-四氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮；

2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-4a,7a-二氢-3H-噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-酮；

2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-6-甲基-4a,7a-二氢-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮；

2-{3-[4-(4-氯-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮；

2-{3-[4-(4-氟-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮；

2-{(S)-3-[4-(4-氟-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮；

2-{(R)-3-[4-(4-氟-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮；

2-{(S)-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮；

2-{(R)-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮；

2-((3-(5-甲氧基-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)-7,8-二氢-3H-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5H)-酮；

(S)-2-((3-(5-甲氧基-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)-7,8-二氢-3H-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5H)-酮；

(R)-2-((3-(5-甲氧基-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)-7,8-二氢-3H-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5H)-酮；

2-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-2'-氧代-[1,3’]联哌啶-1'-基甲基]-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮；

2-[(S)-4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-2'-氧代-[1,3’]联哌啶-1'-基甲基]-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮；

2-[(R)-4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-2'-氧代-[1,3’]联哌啶-1'-基甲基]-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮；

2-((3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)-6,7-二氢-3H-环戊二烯并[d]嘧啶-4(5H)-酮；

2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3H-嘧啶-4-酮；

2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮；

6-乙基-2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3H-嘧啶-4-酮；

2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮；

2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-5,6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮；

2-((3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)环庚三烯并[d]咪唑-4(3H)-酮；

2-{(S)-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3H-环庚三烯并咪唑-4-酮；

2-{(R)-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3H-环庚三烯并咪唑-4-酮；

2-{(S)-3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3H-环庚三烯并咪唑-4-酮；

2-{(R)-3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3H-环庚三烯并咪唑-4-酮；

N-(5,6-二氢噻唑并[2,3-c][1,2,4]三唑-3-基)-2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酰胺；

N-(5,6-二氢-噻唑并[2,3-c][1,2,4]三唑-3-基)-2-{(S)-3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基}-乙酰胺；

N-(5,6-二氢-噻唑并[2,3-c][1,2,4]三唑-3-基)-2-{(R)-3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基}-乙酰胺；

N-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酰胺；

2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-N-(1-甲基-1H-四唑-5-基)乙酰胺；

N-(3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-d]哒嗪-5-基)-2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酰胺；和

N-异噁唑并[5,4-b]吡啶-3-基-2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基}-乙酰胺。

例举的实施方案

实施方案1.式(I)化合物或其可药用盐，

其中：

R¹是R²或R²-NHC(O)-；

或者

R²是具有一至四个选自N、O和S的杂原子的5元杂芳基，或者R2是具有一个或两个N的6元杂芳基，

或者

R²是具有3或4个选自N、O和S的杂原子的8-10元二环杂环，

(a)卤素、

(b)氧代、

(c)OH、

(d)CN、

(e)NO₂、

(f)任选地被一个羟基或一个C_1-6烷氧基取代的C_1-6烷基、

(g)C_1-6烷氧基、

(h)C_1-6卤代烷基、

(i)C(O)R^a、

(j)COOR^a,

(k)NR^aR^b、

(l)NHC(O)R^a和

(m)C(O)NR^aR^b；

或者

R^a是H或C_1-6烷基；

R^b是H或C_1-6烷基；且

n是1或2。

实施方案2.具有下式的如实施方案1中所述的化合物或其可药用盐。

实施方案3.如实施方案1或2中所述的化合物或其可药用盐，其中R³是H。

实施方案4.如实施方案1-3中任一项所述的化合物或其可药用盐，其中R⁴是任选被取代的苯基。

实施方案5.如实施方案4中所述的化合物或其可药用盐，其中R⁴是取代的苯基。

实施方案6.如实施方案5中所述的化合物或其可药用盐，其中R⁴是苯基，其被一个或两个各自独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-6烷基和C_1-6烷氧基。

实施方案7.如实施方案1或2中所述的化合物或其可药用盐，其中R³和R⁴与它们所连接的原子一起形成任选被取代的茚满-1-酮。

实施方案8.如实施方案1-7中任一项所述的化合物或其可药用盐，其中n是1。

实施方案9.如实施方案1-7中任一项所述的化合物或其可药用盐，其中n是2。

实施方案10.如实施方案1-9中任一项所述的化合物或其可药用盐，其中R¹是R²。

实施方案11.如实施方案1-10中任一项所述的化合物或其可药用盐，其中R²是任选被取代的苯基。

实施方案12.如实施方案1-10中任一项所述的化合物或其可药用盐，其中R²是任选被取代的5或6元杂芳基。

实施方案13.如实施方案1-10中任一项所述的化合物或其可药用盐，其中R²是任选被取代的8-10元二环杂芳基。

实施方案14.如实施方案1-10中任一项所述的化合物或其可药用盐，其中R²是

其中(a)-(l)各自任选地被一个或两个各自独立地选自以下的取代基取代：卤素、OH、CN、NO₂、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷基、C(O)R^a、COOR^a、NR^aR^b、NHC(O)R^a和C(O)NR^aR^b。

通用合成方法

本发明化合物可以通过许多种方法制备，包括标准的化学方法。在下文列出了说明性的一般合成方法，并且在实施例中提供了所制备的本发明的具体化合物。

可以通过有机合成领域中已知的方法制备式(I)化合物，如在下文合成流程中部分的列出。在下文所述的流程中，应当较好的理解，如果必要，按照一般原理或化学方法对敏感性或反应性基团使用保护基团。保护基团是按照有机合成的标准方法进行操作(T.W.Greene和P.G.M.Wuts,"Protective Groups in Organic Synthesis",第三版,Wiley,New York1999)。这些基团在化合物合成的方便阶段使用本领域技术人员很清楚的方法除去。选择方法以及反应条件和其处理次序，应当与式(I)化合物的制备相符。

本领域技术人员将能够识别在式(I)化合物中是否存在立体中心。因此，本发明包括可能的立体异构体，并且既包括外消旋化合物又包括单个对映异构体。当所需化合物是单个对映异构体时，其可以通过立体特异性合成或通过终产物或任何方便的中间体拆分获得。终产物、中间体或起始原料的拆分可以通过本领域已知的任何适合的方法实现。参见，例如E.L.Eliel,S.H.Wilen和L.N.Mander的“Stereochemistry of OrganicCompounds”(Wiley-interscience,1994)。

本文所述的化合物可以从市售的起始原料制备或者使用已知的有机、无机和/或酶方法合成。

流程1

a)NaH或KHMDS，MeCN、THF或DMF，-30至70℃

如流程1所示，可以通过将3的内酰胺部分烷基化来制备1，其可以通过许多种方法来完成，包括用烷基化试剂例如烷基卤化物2或烷基磺酸酯在适合的碱(例如氢化钠或KHMDS)存在下在适合的溶剂中(例如乙腈、THF或DMF)在适合的温度下处理所述内酰胺。

流程2

a)TEA,2-氯乙脒,MeOH

烷基卤化物2是市售的或者可以如流程2所示制备。制备氯甲基嘧啶酮5有几种方法，包括用2-氯甲基乙酰胺在适合的碱(例如三乙胺)的存在下在适合的溶剂中(例如甲醇)处理β-酮酯4。

流程3

X=Cl、Br、OMs、OTs

n=1、2或3

a)DIEA、MeCN或DMF或PhMe:MeCn(1:1),15-85C

3的合成可以通过许多种方法完成，包括如流程3中所示将适当取代的5和6元内酰胺6进行反应。在3位的离去基团(例如氯、溴或甲磺酸酯)被合适的亲核试剂(例如取代的哌啶7)在合适的溶剂(例如乙腈或DMF)或者溶剂混合物(例如乙腈和甲苯)中取代，可以在一定范围的温度和反应时间内完成。

流程4

a)R⁴-Br,n-BuLi,THF,-78℃或者Ar-MgBr,THF,0℃；b)TFA,DCM

7的合成可以通过如流程4中所示的Weinreb酮合成方法来完成。在该流程中，用格氏试剂或有机金属试剂(例如正丁基锂)在R⁴-Br的存在下处理Weinreb酰胺8以形成酮9。通过加入三氟乙酸的二氯甲烷溶液将9的叔丁基保护基团除去，得到仲胺7。

流程5

(a)Ar-SH(Ar=Ph或4-MePh),HATU,DIEA,DMF；b)R-B(OH)₂),

Pd₂(dba)₃,配体TFP,噻吩-2甲酸亚铜(I),DME,50℃；c)TFA、DCM，或4N HCl、二噁烷

7的合成还可以通过如流程5中所示的硫酯硼酸交叉偶联反应来完成。硫酯11是通过用合适的芳基硫醇在HATU、DIEA和DMF的存在下处理10来获得。通过加入合适的硼酸，在钯金属催化剂(例如Pd₂(dba)₃)的存在下在三(2-呋喃基)膦和噻吩-2甲酸亚铜(I)在二甲氧基乙烷(DME)中的溶液的存在下将11转化为酮12。通过加入三氟乙酸的二氯甲烷溶液将9的叔丁基保护基团除去，得到仲胺7。

流程6

a)NaOH,H₂O；b)NaH,DMF,50℃；c)6N HCl,回流

被取代的螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮的形成可以通过许多种方法来完成，包括下文所述的那些。适合的二-(2-溴-乙基)-氨基甲酸烷基酯(例如二-(2-溴-乙基)-氨基甲酸乙酯)可以通过与氨基甲酰化试剂(例如氯甲酸烷基酯，如氯甲酸乙酯)在合适的溶剂(例如水)中在碱(例如NaOH)的存在下在-40℃至40℃的温度下反应从而用适合的保护基团(例如氨基甲酸酯，如氨基甲酸乙酯)进行保护来合成。被保护的螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮的形成可以通过将适合的酮(例如被取代的茚满酮)与强碱(例如氢化钠)在极性溶剂(例如D分子式)中在0℃至100℃的温度下反应来完成。哌啶基中氮的脱保护可以通过许多种方法来完成，例如用强酸或碱(例如6N HCl)在0℃至100℃的温度下处理。

流程7

a)TEA,DCM；b)NaH,PhMe；c)TEA,MeCN；d)i.NaOMe,MeOH；

ii.NH₄Cl；e)NaOEt,EtOH

(2-[3-(4-哌啶-1-基)-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基]-3H-嘧啶-4-酮类似物29的合成可以通过许多种方法完成，包括依赖于使用脒中间体形成嘧啶酮环的途径。内酰胺乙腈中间体(例如2-(3-溴-2-氧代吡咯烷-1-基)乙腈26)的合成可以通过许多种方法完成，包括将氨基乙腈25与适合的亲电试剂(例如2,4-二溴丁酰氯24)，在适合的碱(例如胺碱，如三乙胺)存在下，在适合的溶剂(例如二氯甲烷)中进行反应。哌啶部分(例如芳基-哌啶-4-基-甲酮类似物7)的引入，可以通过许多种方法完成，例如在适合的碱(例如胺碱，如三乙胺)存在下在适合的溶剂(例如乙腈)中替换适合的离去基团(例如溴化物)。所得腈27向脒28的转化可以通过许多种方法完成，包括用醇盐碱(例如甲醇钠)和铵源(例如氯化铵)在合适的溶剂(例如甲醇)中处理。嘧啶酮部分29的形成可以通过许多种方法完成，包括将脒28与适当地被取代的β-酮酯4(例如2-氧代环戊烷甲酸甲酯)在适合的碱(例如醇盐碱，如乙醇钠)存在下在适合的溶剂(例如乙醇)中反应。

流程8

a)DCM,水,0℃；b)NaH,PhH；c)TEA,MeCN,70℃；d)NaOH,水,EtOH；e)R-NH₂,HATU,DIEA,DCM

N-杂环-2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酰胺类似物36的合成可以通过许多种方法完成，包括依赖于使用羧酸中间体来形成杂环乙酰胺的途径。2-(2,4-二溴丁酰氨基)乙酸乙酯中间体31的合成可以通过将2-氨基乙酸乙酯盐酸化物30与适合的亲电试剂(例如2,4-二溴丁酰氯24)在适合的溶剂混合物(例如二氯甲烷和水)中反应来完成。与2-(3-溴-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酸乙酯32的环合可以通过与适合的碱(例如氢化钠)在适合的溶剂(例如苯)中反应来完成。哌啶部分(例如(4-甲氧基苯基)(哌啶-4-基)甲酮)的引入，可以通过许多种方法完成，例如在适合的碱(例如胺碱，如三乙胺)的存在下在适合的溶剂(例如乙腈)中替换适合的离去基团(例如溴化物)。所得羧酸酯34向羧酸35的转化可以通过许多种方法完成，包括用无机碱(例如氢氧化钠)在适合的溶剂组合(例如乙醇和水)中处理来完成。杂环乙酰胺36的形成可以通过许多种方法完成，包括将2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酸35与适合的杂环胺类在适合的偶联试剂(例如HATU)和适合的胺碱(例如二异丙基乙胺)存在下，在适合的溶剂(例如二氯甲烷)中进行反应。

组合物

在另一方面，本发明提供药物组合物，其包含式(I)化合物或其可药用盐以及可药用的载体。药物组合物能够针对特定的给药途径进行配制，例如口服给药、肠胃外给药和直肠给药等。此外，本发明的药物组合物能够以固体形式(非限制性地包括胶囊、片剂、丸剂、颗粒剂、粉末剂或栓剂)或以液体形式(非限制性地包括溶液剂、混悬剂或乳剂)制成。药物组合物能够经历常规的制药操作(例如灭菌)和/或能够含有常规的惰性稀释剂、润滑剂或缓冲剂以及辅料，例如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂和缓冲剂等。

通常，药物组合物是片剂或明胶胶囊，其包含活性成分以及

a)稀释剂，例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素和/或甘氨酸；

b)润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其镁或钙盐和/或聚乙二醇；对于片剂也包含

c)粘合剂，例如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要，还有

d)崩解剂，例如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐、或泡腾混合物；和/或

e)吸收剂、着色剂、调味剂和增甜剂。

根据本领域中已知的方法，片剂可以是薄膜包衣或肠溶包衣的。

用于口服给药的合适的组合物包括有效量的式(I)化合物或其可药用盐，其为片剂、锭剂、水或油混悬液、可分散的粉末或颗粒、乳剂、硬或软胶囊、或糖浆或酏剂的形式。根据本领域中已知的用于制备药物组合物的任意方法制备用于口服使用的组合物，并且为了提供精制和适口的制剂该组合物能够含有1种或多种选自增甜剂、调味剂、着色剂和防腐剂的试剂。片剂可以含有与适合于制备片剂的无毒的可药用赋形剂混合在一起的活性成分。这些赋形剂是例如惰性的稀释剂(例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠)；成粒剂和崩解剂(例如玉米淀粉、或海藻酸)；粘合剂(例如淀粉、明胶或阿拉伯胶)；和润滑剂(例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉)。片剂是未经包衣的或者通过已知的技术进行包衣从而延缓在胃肠道的崩解和吸收，从而在较长的时期内提供持久的作用。例如，能够使用延时材料，例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。用于口服的制剂能够以硬明胶胶囊呈递，其中活性成分与惰性的固体稀释剂(例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土)混合，或者以软明胶胶囊呈递，其中活性成分与水或油介质(例如花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。

某些可注射的组合物是等渗水溶液或混悬液，栓剂有利地由脂肪乳或混悬液制得。所述的组合物可以进行灭菌和/或含有辅料，例如防腐、稳定、润湿或乳化剂、溶解促进剂、用于调节渗透压的盐和/或缓冲剂。此外，其也可以含有其他的治疗上有价值的物质。所述的组合物分别根据常规的混合、制粒或包衣法进行制备，并且含有大约0.1-75%或含有大约1-50%的活性成分。

由于水可能促进某些化合物的降解，本发明还提供无水的药物组合物和剂型，其包含作为活性成分的本发明化合物。

使用无水或低水含量的成分和低水含量或低湿度的条件能够制备本发明的无水的药物组合物和剂型。可以制备和贮存无水的药物组合物以便保持其无水的性质。因此，使用已知防止与水接触的材料包装无水的组合物以便其能够包含于合适的配方药盒中。合适的包装的实例非限制性地包括气密的箔、塑料、单位剂量容器(例如管形瓶)、泡罩包装和条带包装。

本发明进一步提供药物组合物和剂型，其包含1种或多种降低作为活性成分的本发明化合物的分解速率的试剂。该试剂(其在本文中称作“稳定剂”)非限制性地包括抗氧化剂(例如抗坏血酸)、pH缓冲剂或盐缓冲剂等。

对于大约50-70kg的个体，本发明的药物组合物或组合产品能够是大约1-1000mg活性成分的单位剂量，或者大约1-500mg或大约1-250mg或大约1-150mg或大约0.5-100mg、或大约1-50mg活性成分。化合物、药物组合物或其组合产品的治疗有效剂量取决于个体的物种、体重、年龄和个体情况、其正在接受治疗的病症或疾病或其严重程度。普通技术的内科医生、临床医师或兽医能够容易地确定为了预防、治疗或抑制病症或疾病的发展所需的每一种活性成分的有效量。

使用方法

式(I)化合物是端锚聚合酶抑制剂，因此可用于治疗由端锚聚合酶介导的疾病，包括Wnt信号转导相关的病症和端锚聚合酶1和2(TNKS/TNKS2)信号转导相关的病症。

Wnt信号转导相关的病症包括与异常的Wnt信号转导相关的疾病和病症，包括但不限于Wnt信号转导相关的癌症(例如结直肠癌；恶性髓母细胞瘤和其它原发性中枢神经系统恶性神经外胚层肿瘤；横纹肌肉瘤；肺癌，特别是小细胞肺癌；肠源性肿瘤，包括但不限于食道癌、胃癌、胰腺癌和胆管系统癌症；前列腺和膀胱癌；以及肝癌)；其它的不形成肿瘤的增殖性疾病，例如增殖性皮肤病症(例如银屑病、皮炎)；骨质疏松；骨关节炎；纤维化；精神分裂症；血管疾病；心脏病；神经变性疾病(例如阿尔茨海默病)；髓鞘再生，包括脑和/或脊髓损伤后的髓鞘再生；和肺纤维化。异常的Wnt信号的上调与癌症、骨关节炎和多囊性肾病相关，而异常的Wnt信号的下调与骨质疏松、肥胖症、糖尿病和神经变性疾病相关。

端锚聚合酶信号转导相关的病症包括与异常的端锚聚合酶1和2信号转导相关的疾病和病症，包括但不限于癌症(例如白血病、淋巴瘤、黑素瘤、多发性骨髓瘤、肺癌、卵巢癌和乳腺癌)、代谢疾病和病毒感染(例如单纯疱疹病毒感染)。

术语本发明化合物的“治疗有效量”是指将引发个体的生物学或医学反应(例如酶或蛋白质活性的降低或抑制)、或改善症状、缓解状况、减慢或延迟疾病进展、或预防疾病等的式(I)化合物的量。在一个非限制性的实施方案中，术语“治疗有效量”是指式(I)化合物的量，当将其向个体给药时，其有效地(1)至少部分地缓解、抑制、预防和/或改善(i)由端锚聚合酶介导的或(ii)与端锚聚合酶活性相关的、或(iii)以端锚聚合酶的活性(正常或异常)为特征的状况、或症状、或疾病；或(2)降低或抑制端锚聚合酶的活性；或(3)减少或抑制端锚聚合酶的表达。在另一个非限制性的实施方案中，术语“治疗有效量”是指式(I)化合物的量，当将其向细胞、或组织、或非细胞的生物材料、或培养基给药时，其有效地至少部分地降低或抑制端锚聚合酶的活性；或至少部分地减少或抑制端锚聚合酶的表达。

如本文所用，术语“个体”是指动物。通常动物是哺乳动物。个体也指例如灵长类(例如人，男性或女性)、牛、绵羊、山羊、马、狗、猫、兔、大鼠、小鼠、鱼、鸟等。在某些实施方案中，个体是灵长类。在另一个实施方案中，个体是人。

如本文所用，术语“抑制”是指给定的状况、症状、或病症、或疾病的减少或压制、或者生物活性或进程的基准活性的显著降低。

如本文所用，术语任意疾病或病症的“治疗”是指在一个实施方案中改善疾病或病症(即减慢或阻止或减少疾病或其至少1个临床症状的发展)。在另一个实施方案中，“治疗”是指缓解或改善至少一项身体参数，包括可能不被患者意识到的那些参数。在另一个实施方案中，“治疗”是指从身体上(例如可辨别的症状的稳定)、从生理上(例如身体参数的稳定)或从两者上调节疾病或病症。在另一个实施方案中，“治疗”是指预防或延缓疾病或病症的发作或发展或进展。

如本文所用，如果该个体在生物学上、医学上或生活质量上将受益于该治疗，那么个体“需要”治疗。

因此，在其它实施方案中，本发明提供了式(I)化合物或其可药用盐在治疗中的用途。在其它实施方案中，所述治疗是选自可以通过端锚聚合酶抑制来治疗的疾病。在一项实施方案中，所述疾病是Wnt信号转导相关的病症。在另一项实施方案中，所述疾病是端锚聚合酶信号转导相关的病症。在另一项实施方案中，所述疾病是癌症，特别是选自白血病、黑素瘤、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、肺癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、胆管系统癌症、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、结肠癌和肝癌。在另一项实施方案中，所述疾病是癌症，特别是选自白血病、肺癌、胰腺癌、乳腺癌和结肠癌的癌症。在另一项实施方案中，所述疾病是选自结肠癌、胰腺癌和乳腺癌的癌症。

在另一项实施方案中，本发明提供了式(I)化合物或其可药用盐在制备用于治疗由端锚聚合酶所介导疾病的药物中的用途。在一项实施方案中，所述疾病是Wnt信号转导相关的病症。在另一项实施方案中，所述疾病是端锚聚合酶信号转导相关的病症。在另一项实施方案中，所述疾病是癌症，特别是选自白血病、黑素瘤、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、肺癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、胆管系统癌症、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、结肠癌和肝癌。在另一项实施方案中，所述疾病是癌症，特别是选自白血病、肺癌、胰腺癌、乳腺癌和结肠癌的癌症。在另一项实施方案中，所述疾病是选自结肠癌、胰腺癌和乳腺癌的癌症。

在另一项实施方案中，本发明提供了治疗由端锚聚合酶抑制所介导的疾病的方法，包括向有需要的个体施用治疗有效量的式(I)化合物或其可药用盐。在一项实施方案中，所述疾病是Wnt信号转导相关的病症。在另一项实施方案中，所述疾病是端锚聚合酶信号转导相关的病症。在其它实施方案中，所述疾病是癌症，特别是选自白血病、黑素瘤、多发性骨髓瘤、淋巴瘤、肺癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、胆管系统癌症、卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、结肠癌和肝癌。在另一项实施方案中，所述疾病是癌症，特别是选自白血病、肺癌、胰腺癌、乳腺癌和结肠癌的癌症。在另一项实施方案中，所述疾病是选自结肠癌、胰腺癌和乳腺癌的癌症。

组合

本发明化合物可以与1种或多种其他的治疗剂同时、或者在1种或多种其他的治疗剂之前或之后给药。本发明化合物可以以相同或不同的给药途径分别进行给药，或者与其他的活性剂在相同的药物组合物中一起给药。

在一个实施方案中，本发明提供产品，其包含作为用于在治疗中同时、分别或顺序使用的联合制剂的式(I)的化合物和至少1种其他的治疗剂。在一个实施方案中，治疗是由TNKS抑制介导的疾病或状况的治疗。以联合制剂提供的产品包括组合物，所述的组合物包含在相同药物组合物中的式(I)化合物和其他治疗剂、或者以独立的形式(例如以药盒的形式)的式(I)化合物和其他治疗剂。

在一个实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含式(I)的化合物和另一种治疗剂。如上所述，任选地，药物组合物可以包含可药用的赋形剂。

在一个实施方案中，本发明提供药盒，其包含2种或更多种独立的药物组合物，至少其中之一含有式(I)的化合物。在一个实施方案中，药盒包含分别保留所述的组合物的工具，例如容器、分开的瓶或分开的箔小盒。该药盒的实例是泡罩包装，其通常用于片剂、胶囊等的包装。

本发明的药盒可以用于不同剂型给药，例如口服和肠胃外，用于以不同的剂量间隔给予独立的组合物，或者用于相互之间滴加独立的组合物。为了协助顺应性，本发明的药盒通常包含给药说明书。

在本发明的联合治疗中，本发明化合物和其他的治疗剂可以由相同或不同的制造商制备和/或配制。而且，本发明化合物和其他的治疗剂可以共同应用于联合治疗：(i)在向医生发放联合产品之前(例如包含本发明化合物和其他治疗剂的药盒的情况)；(ii)在给药之前由医生亲自来(或者在医生的指导下)应用；(iii)由患者亲自来应用，例如在本发明化合物和其他治疗剂的连续给药期间。

因此，本发明提供式(I)的化合物用于治疗由端锚聚合酶抑制介导的疾病或状况的用途，其中制备药物用于与另一种治疗剂进行给药。本发明也提供另一种治疗剂用于治疗由端锚聚合酶抑制介导的疾病或状况的用途，其中药物与式(I)的化合物一起进行给药。

本发明也提供用于治疗由端锚聚合酶抑制介导的疾病或状况的方法的式(I)的化合物，其中制备式(I)的化合物用于与另一种治疗剂一起进行给药。本发明也提供用于治疗由端锚聚合酶抑制介导的疾病或状况的方法的另一种治疗剂，其中制备其他的治疗剂用于与式(I)的化合物一起进行给药。本发明也提供用于治疗由端锚聚合酶抑制介导的疾病或状况的方法的式(I)的化合物，其中式(I)的化合物与另一种治疗剂一起进行给药。本发明也提供用于治疗由端锚聚合酶抑制介导的疾病或状况的方法的另一种治疗剂，其中其他的治疗剂与式(I)的化合物一起进行给药。

本发明也提供式(I)的化合物用于治疗由端锚聚合酶抑制介导的疾病或状况的用途，其中患者之前(例如在24小时内)已经用另一种治疗剂进行了治疗。本发明也提供另一种治疗剂用于治疗由端锚聚合酶抑制介导的疾病或状况的用途，其中患者之前(例如在24小时内)已经用式(I)的化合物进行了治疗。

在一个实施方案中，所述的另一种治疗剂选自Hedgehog拮抗剂、PI3K抑制剂、MEK抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、烷化剂、抗代谢药、微管抑制剂、端粒酶抑制剂、PARP抑制剂和RAF抑制剂。

Hedgehog拮抗剂的例子是2-氯-N-[4-氯-3-(2-吡啶基)苯基]-4-(甲基磺酰基)-苯甲酰胺(也称为GDC-0449，如PCT出版号WO06/028958中所述)。

PI3K抑制剂的一些例子包括：4-[2-(1H-吲唑-4-基)-6-[[4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基]甲基]噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]吗啉(也称为GDC0941，且如PCT出版物WO09/036082和WO09/055730所述)和2-甲基-2-[4-[3-甲基-2-氧代-8-(喹啉-3-基)-2,3-二氢咪唑并[4,5-c]喹啉-1-基]苯基]丙腈(也称为BEZ235或NVP-BEZ235，和如PCT出版物WO06/122806所述)。

促分裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)抑制剂的例子是XL-518(CAS编号1029872-29-4，得自ACC公司)。

酪氨酸激酶抑制剂的一些例子包括：盐酸厄洛替尼(由Genentech/Roche以商标名出售)、Linifanib(N-[4-(3-氨基-1H-吲唑-4-基)苯基]-N'-(2-氟-5-甲基苯基)脲，也称为ABT869，获自Genentech)、苹果酸舒尼替尼(由Pfizer以商标名

出售)、Bosutinib(4-[(2,4-二氯-5-甲氧基苯基)氨基]-6-甲氧基-7-[3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙氧基]喹啉-3-甲腈，也称为SKI-606，并在US专利第6,780,996号中描述)、Dasatinib(由百时美施贵宝公司以商标名

出售)、Pazopanib(也称为Armala^TM，由葛兰素史克公司以商标名出售)，以及伊马替尼和甲磺酸伊马替尼(由Novartis以商标名和

出售)。

烷化剂的一些例子包括：替莫唑胺(由Schering-Plough/Merck以商标名

和

出售)、更生霉素(也称为放线菌素-D，并以商标名出售)、美法仑(也称为L-PAM、L-沙可来新和苯丙氨酸氮芥，以商标名出售)、六甲蜜胺(也称为六甲基蜜胺(HMM)，以商标名

出售)、卡莫司汀(以商标名

出售)、苯达莫司汀(以商标名

出售)、白消安(以商标名

和

出售)、卡铂(以商标名

出售)、洛莫司汀(也称为CCNU，以商标名

出售)、顺铂(也称为CDDP，以商标名

和

-AQ出售)、苯丁酸氮芥(以商标名出售)、环磷酰胺(以商标名

和

出售)、达卡巴嗪(也称为DTIC、DIC和咪唑羧酰胺，以商标名出售)、六甲蜜胺(也称为六甲基蜜胺(HMM)，以商标名

出售)、异环磷酰胺(以商标名出售)、丙卡巴肼(以商标名出售)、氮芥(也称为氮芥和二氯甲基二乙胺盐酸化物，以商标名出售)、链脲菌素(以商标名

出售)、噻替派(也称为硫代磷酰胺和TESPA和TSPA，以商标名出售。

抗代谢药的一些例子包括：克拉立平(2-氯脱氧腺苷，以商标名

出售)、5-氟尿嘧啶(以商标名

出售)、6-硫鸟嘌呤(以商标名

出售)、培美曲塞(以商标名

出售)、阿糖胞苷(也称为阿糖胞嘧啶(Ara-C)，以商标名

出售)、阿糖胞苷脂质体(也称为脂质体Ara-C，以商标名DepoCyt^TM出售)、地西他滨(以商标名

出售)、羟基脲(以商标名Droxia^TM和Mylocel^TM出售)、氟达拉滨(以商标名

出售)、氟尿苷(以商标名

出售)、克拉屈滨(也称为2-氯脱氧腺苷(2-CdA)，以商标名Leustatin^TM出售)、甲氨蝶呤(也称为氨甲蝶呤、甲氨蝶呤钠(MTX)，以商标名

和Trexall^TM出售)、以及喷司他丁(以商标名

出售)。

微管抑制剂的某些实例是长春瑞滨(以商标名

出售)、长春地辛(以商标名

出售)、雌氮芥(以商标名

出售)、长春新碱

三氯苯达唑

塞克硝唑、喹法米特、鬼臼毒素、甲苯达唑、灰黄霉素、氟苯达唑、Eribulin、秋水仙碱、环苯达唑、Cabazitaxel、阿苯达唑和长春瑞滨。

端粒末端转移酶抑制剂的一个实例是Imetelstat。

PARP抑制剂的某些实施例包括：Olaparib(来自Astrazeneca)、Iniparib(也称为BSI-201)、AGO14699(Pfizer)、Veliparib(也称为ABT-888，来自Enzo)和MK4827(Merck)。

RAF抑制剂的某些实施例包括：2-氯-5-[2-苯基-5-(4-吡啶基)-1H-咪唑-4-基]苯酚(也称为L-779450)、3-(二甲基氨基)-N-[3-[(4-羟基苯甲酰基)氨基]-4-甲基苯基]-苯甲酰胺(也称为ZM-336372)和索拉非尼(由Bayer以商标名

出售)。

中间体和实施例

以下实施例仅用于解释说明，并不以任何方式限制本发明。

所用的缩写具有本领域常规的含义或是以下含义：

AcOH乙酸

BOC 叔丁氧基羰基

C 摄氏度

d 双峰

dd 双二重峰

DCM 二氯甲烷

DIEA 二乙基异丙基胺

DME 1,4-二甲氧基乙烷

DMF N,N-二甲基甲酰胺

DMSO 二甲基亚砜

EtOAc 乙酸乙酯

EtOH 乙醇

EDCL 1-乙基-3-(3'-二甲基氨基丙基)碳二亚胺

g 克

h 小时

HBTU 1-[二(二甲基氨基)亚甲基]-1H-苯并三唑六氟磷酸盐(1-)3-氧化物

HOBt 1-羟基-7-氮杂苯并三唑

HPLC 高压液相色谱

IR 红外光谱

kg 千克

L 升

LCMS 液相色谱和质谱

MTBE 甲基叔丁基醚

MeOH 甲醇

MS 质谱

MW 微波

m 多重峰

min 分钟

mL 毫升

μM 微摩尔浓度

m/z 质荷比

nm 纳米

nM 纳摩尔浓度

N 正

NMR 核磁共振

Pa 帕斯卡

Pd/C 钯/碳

rac 外消旋

RP-HPLC 反相高压液相色谱

s 单峰

t 三重峰

TEA 三乙胺

TLC 薄层色谱

TFA 三氟乙酸

THF 四氢呋喃

中间体1

4-氧代-四氢-吡喃-3-甲酸甲酯

在氮气保护下，在-10℃历经2小时向四氢-吡喃-4-酮(1.3kg,12.98mol)和碳酸二甲酯(11.69kg,129.8mol)的溶液中分批加入固体叔丁醇钾(1.89kg,16.08mol)。加完后，将该混悬液在室温下搅拌10h。LCMS(215nm)指示四氢-吡喃-4-酮已经完全消耗。将反应物用HCl(2N)酸化至pH6～7，并随后将各相分离。将有机相用水洗涤(3L×2)，并将合并的水相用MTBE萃取(2.5L×2)。将合并的有机相在25℃下减压浓缩以除去大部分的MTBE。将残余物在74℃下用油泵(～200Pa)蒸馏，得到标题化合物，为无色油状物(545g,26.3%)。CHN分析：计算值(结果)C53.16(53.10),H6.37(6.245),N0.00(0.00)。

中间体2

2-氯-乙脒

在25℃下将钠(18.3g,0.795mol)全部溶于2L的MeOH中，并搅拌1小时。随后在N₂保护下在1小时内向该溶液中逐滴加入氯-乙腈(600g,7.95mol)。在约20℃下再搅拌一小时后，历经45分钟分批加入NH₄Cl(514g,8.73mol)(该溶液变成黄色并随后变成红色，然后获得黑色液体)，然后将反应混合物在15-20℃搅拌16小时。过滤后，将滤液浓缩，得到残余物，将其用MTBE研磨(1L×2)，得到标题化合物，为黑色固体(988g,96%)。

中间体3

2-氯甲基-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮

在N₂下将粗的4-氧代-四氢-吡喃-3-甲酸甲酯(1780g,11mol)和三乙胺(830g,8.2mol)在MeOH(3560mL)中的混合物冷却至0℃。历经50分钟逐滴加入2-氯-乙脒(567g,4.4mol)在890mL的MeOH中的溶液。将反应混合物在0℃搅拌30分钟，并随后在约20℃搅拌16小时。在215nm的LCMS和TLC(DCM:MeOH=10:1)分析显示大部分4-氧代-四氢-吡喃-3-甲酸甲酯被消耗。随后将该混合物过滤并浓缩，得到黑色油状物，将其随后经硅胶快速柱色谱纯化，并用DCM洗脱，得到黄色固体/油混合物，将其进一步用MTBE(～1200mL)和H₂O:CH₃CN:EA=1:1:2(～600mL)研磨，得到标题化合物，为白色固体(318g)。MS m/z201.2(M+H)。CHN分析：计算值(结果)C47.89(47.95),H4.52(4.401),N13.96(13.76)。

中间体4

二-(2-溴-乙基)-氨基甲酸乙酯

在0℃下向搅拌过的二-(2-溴-乙基)-胺(1g,3.21mmol)在水(10mL)的溶液中加入氯甲酸乙酯(0.293mL,3.08mmol)，并随后加入NaOH(4.01mL,8.02mmol)，并在0℃下搅拌10分钟。将反应混合物用2N HCl酸化至pH5，并用20mL乙酸乙酯萃取三次，用Na₂SO₄干燥，并真空浓缩。将粗产物用快速色谱法纯化(梯度为85:15至70:30庚烷/乙酸乙酯，30分钟)，得到标题化合物(287mg,0.947mmol,29.5%产率)。MS计算值C₇H₁₄Br₂NO₂304.0，实测值(ESI)m/z304.2(M+H)⁺,保留时间0.56min。

中间体5

5-氟-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸乙酯

在50℃下向搅拌的5-氟-1-茚满酮(302mg,2.013mmol)和二-(2-溴-乙基)-氨基甲酸乙酯(610mg,2.01mmol)在DMF(5mL)的溶液中分小批加入NaH(121mg,5.03mmol)。在50℃下搅拌16小时，将反应物冷却至25℃。将反应物用15mL乙酸乙酯稀释，并用10mL水洗涤两次，用Na₂SO₄干燥，并真空浓缩。将粗产物用快速柱纯化(梯度为85:15至60:40庚烷/乙酸乙酯，20分钟)，得到标题化合物(188mg,0.645mmol,32.1%产率)。MS(ESI)[m/e,(M+H)⁺]=292.4。HPLC保留时间=1.46分钟(Agilent1100HPLC系统；3.0cm x3.0mm x3.0um C8柱；流速为2.0mL/min；梯度为5-95%乙腈/水，含有0.1%甲酸，历经2分钟)。

中间体6

5-氟螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮

将搅拌的5-氟-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-甲酸乙酯(188mg,0.645mmol)在HCl(19.61μL,0.645mmol)中的溶液在100℃加热过夜。将反应混合物不经任何进一步纯化浓缩至干，得到标题化合物(160mg,97%产率)。MS(ESI)[m/e,(M+H)⁺]=220.0(M+H)⁺,HPLC保留时间=0.51分钟(Agilent1100HPLC系统；3.0cm x3.0mm x3.0um C8柱；流速为2.0mL/min；梯度为5-95%乙腈/水，含有0.1%甲酸，历经2分钟)。

中间体7

2,2-二烯丙基-5-甲氧基-茚满-1-酮

在环境温度下向搅拌过的5-甲氧基-1-茚满酮(5.24g,32.3mmol)和烯丙基溴(9.77g,81mmol)在DMF(80mL)的溶液中分小批加入NaH(3.23g,81mmol)。搅拌10min后，将反应混合物在50℃搅拌8h，将反应溶液冷却至环境温度，随后用15mL的EtOAc稀释，并用水(10mL)洗涤两次。将有机相用无水Na₂SO₄干燥并真空浓缩。将粗产物经快速柱纯化(梯度为85:15至60:40庚烷/乙酸乙酯，20min)，得到标题化合物(6.72g,27.7mmol)，为无色液体。MS(ESI)[m/e,(M+H)⁺=243.7。保留时间1.79min(Agilent1100HPLC系统；3.0cm x3.0mm x3.0um C8柱；流速为2.0mL/min；梯度为5-95%乙腈/水，含有0.1%甲酸，历经2分钟)。

中间体8

2,2-(5-甲氧基-1-氧代-2,3-二氢-1H-茚-2,2-二基)二乙醛

在-78℃下在2,2-二烯丙基-5-甲氧基-茚满-1-酮(600mg,2.5mmol)在CH₂Cl₂(10mL)的溶液中通入O₃持续10min，随后用N₂除去过量的O₃。在-78℃下向反应溶液中加入PS-Ph₃P(2.75mg,4.95mmol,1.8mmol/g)。在环境温度下搅拌1小时后，将反应混合物过滤。将滤液真空浓缩，得到标题化合物(535mg,2.17mmol)，不用纯化直接用于下个步骤。¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm9.61(s,2H),7.64(d,J=8.6Hz,1H),6.84(m.,2H),3.81(s,3H),3.09(s,2H),2.80(dd,J=69.2Hz,J=17.7Hz,4H)。

中间体9

(S)-5-甲氧基-1'-(2-氧代吡咯烷-3-基)螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮

在环境温度下在来自气球的H₂中将2,2-(5-甲氧基-1-氧代-2,3-二氢-1H-茚-2,2-二基)二乙醛(100mg,0.406mmol)、(S)-3-氨基吡咯烷-2-酮(41mg,0.41mmol)和Pd(OH)₂(3mg,0.02mmol)在MeOH(2mL)中的溶液搅拌5小时。将反应混合物过滤。将滤液浓缩。将粗产物经HPLC纯化(柱：SunfireWaters50x50mm；流动相：在10分钟内乙腈20%/H₂O80%(含0.1%TFA)至乙腈50%/H₂O50%的梯度，流速：65ml/min)，得到标题化合物(33mg,0.11mmol)。MS(ESI)[m/e,(M+H)⁺=315.1。保留时间=0.64min(Agilent1100HPLC系统；3.0cm x3.0mm x3.0um C8柱；流速为2.0mL/min；梯度为5-95%乙腈/水，含0.1%甲酸，在2分钟内)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm7.58(d,J=8.6Hz,1H),7.28(s,1H),6.86(d,J=8.6Hz,1H,),6.80(s.,1H),4.23(t,J=9.1Hz,1H),4.05(br,s,1H),3.48(m,1H),3.82(s,3H),3.73(s,1H),3.46(m,2H),3.30(br,s,1H),2.97(s,2H),2.52(m,2H),2.04(br,s,4H)。

中间体10

4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-甲酸叔丁基酯

将搅拌过的4-(甲氧基-甲基-氨基甲酰基)-哌啶-1-甲酸叔丁基酯(3.0g,11.02mmol)在30mL THF中的溶液冷却至0℃，然后在N₂下经注射器逐滴加入(4-甲氧基-3-甲基苯基)溴化镁(6.21g,27.5mmol)，并将反应混合物在相同温度下搅拌1.5小时，随后当LCMS鉴定反应完全时，历经1小时将其逐渐加温至室温。向反应混合物中缓慢加入40mL饱和NH₄Cl水溶液，随后将该水溶液用乙酸乙酯萃取(2x50mL)。将合并的有机相用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，并除去溶剂，得到粗产物。快速色谱纯化得到标题化合物，为白色固体(1.97g,5.62mmol,51%产率)。MS(ESI)m/z334.4(M+H⁺)；HPLC(Novapak150X3.9mm C-18柱:流动相：35-90%乙腈/水，含有0.1%TFA,以2mL/min速率，历经2分钟)保留时间=1.57min。¹H NMR(400MHz,CDCL₃)δppm1.48(s,9H)1.62-1.91(m,4H)2.27(s,3H)2.78-3.02(m,2H)3.27-3.46(m,1H)3.91(s,3H)4.12-4.27(m,2H)6.87(d,J=8.59Hz,1H)7.77(t,J=8.10Hz,2H)。

备选方法

在环境温度下在N₂中向4-(甲氧基-甲基-氨基甲酰基)-哌啶-1-甲酸叔丁基酯(5.0g,18.36mmol)在50mL无水THF的溶液中逐滴加入(4-甲氧基-3-甲基苯基)溴化镁(55.1mL,0.5M)，将反应混合物在相同温度下搅拌16小时。将反应物用饱和硫酸钠溶液(10mL)猝灭，并在盐水(150mL)和10%异丙醇/氯仿(200mL)之间分配，并将有机层除去，得到粗产物。经快速色谱纯化(硅胶：5-35%乙酸乙酯/戊烷)得到标题化合物，为白色固体(6.4g,19.21mmol,>99%产率)。HPLC(Novapak150X3.9mm C-18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA,以2mL/min，历经2分钟)保留时间=4.131min。

中间体11

(4-甲氧基-3-甲基-苯基)-哌啶-4-基-甲酮

将三氟乙酸(5.55mL,72.0mmol)加入4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-甲酸叔丁基酯(4.8g,14.4mmol)在二氯甲烷(100mL)和水(10mL)的溶液中，并在室温下搅拌4小时。将反应物减压浓缩，溶于氯仿(200mL)中，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用MgSO₄干燥，并将溶剂真空蒸发，得到粗的产物，将其直接用于下一步骤(白色固体)。计算值分子式=C₁₄H₁₉NO₂=233.3130，实测的MS(ESI)m/e234.4(M+H⁺)；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm1.22(d,J=6.57Hz,6H)1.64-1.77(m,2H)1.83(d,J=1.52Hz,2H)1.97-2.08(br.s,2H)2.26(s,3H)2.79(td,J=12.38,3.03Hz,2H)3.21(dt,J=12.63,3.79Hz,2H)3.33-3.44(m,J=11.18,11.18,3.79,3.66Hz,1H)3.91(s,3H)4.03(dq,J=6.32,6.15Hz,0.5H)6.87(d,J=8.59Hz,1H)7.83(dd,J=8.59,2.53Hz,1H)7.77(d,J=2.02Hz,1H)。分析型RP-HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA，以2mL/min，历经5分钟。)保留时间=2.444min。

备选方法1

将4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-甲酸叔丁基酯(6.4g,19.21mmol)用90%三氟乙酸/水(100mL)处理，并在室温下搅拌30分钟。将反应物减压浓缩，溶于10%异丙醇/氯仿(200mL)，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用MgSO₄干燥，除去溶剂，得到粗产物，将其直接用于下一步骤(白色固体)。计算值分子式=C₁₄H₁₉NO₂=233.3130,实测的MS(ESI)m/e234.4(M+H⁺)；¹H NMR(400MHz,氯仿-d)分析型RP-HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA，以2mL/min，历经5分钟。)保留时间=2.514min。

备选方法2

将1-(4-(4-甲氧基-3-甲基苯甲酰基)哌啶-1-基)乙酮(5.45g,19.8mmol)在6N HCl(40mL)中的混悬液加热至回流持续12h，随后真空浓缩至浅紫色固体。将该物质在加热和超声处理下溶于～100mL MeOH中，真空浓缩至～25mL，加入乙醚(～200mL)，形成白色沉淀和紫色水层。将水层经吸管除去，并真空浓缩。将该混悬液经滤器倒出以回收白色固体(1.30g)。将该水性物质真空浓缩，以形成紫色油状物，将其溶于乙醚中，并将所得混悬液过滤(0.82g)。将该滤液真空浓缩，得到紫色油状物。该固体物质被确认为标题化合物。计算值分子式=C₁₄H₁₉NO₂=233.31,实测的MS(ESI)m/e233.9(M+H⁺)

中间体12

4-苯基硫基羰基-哌啶-1-甲酸叔丁基酯

向哌啶-1,4-二甲酸单叔丁基酯(5.0g,21.81mmol)、二异丙基乙胺(5.64g,43.6mmol)在40mL的D分子式的溶液中加入HATU(9.2g,24.0mmol)和苯硫酚(2.7g,24.0mmol)。将反应混合物在环境温度下搅拌15小时。将反应混合物用水(50mL)猝灭，随后用DCM(50mL)萃取。将合并的有机层用水和饱和NaCl水溶液洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并真空浓缩，得到粗产物(6.85g,20.25mmol)，为黄色油状物。MS(ESI)m/z321.8(M+H⁺)；HPLC(Novapak150X3.9mm C-18柱:流动相：35-90%乙腈/水，含有0.1%TFA,以2mL/min，历经2分钟)保留时间=1.66min。

中间体13

甲磺酸(S)-2-氧代-吡咯烷-3-基酯

在0℃下历经35分钟向搅拌的(R)-3-羟基吡咯烷-2-酮(19.5g,193mmol)和三乙胺(90mL)的混合物中加入甲磺酸酐(33.6g,193mmol)在DCM(90mL)中的溶液，保持内部温度低于5℃。在0℃搅拌30min后，将反应物加温至室温，并再搅拌18h，并随后真空浓缩。将该物质与12g来自之前批次的粗物质合并，并随后经硅胶色谱纯化，得到35g的标题化合物。

中间体14

甲磺酸(S)-2-氧代-吡咯烷-3-基酯

在10℃下向10℃的(S)-3-羟基吡咯烷-2-酮(120g,1.19mol)在吡啶(38.4mL,475mmol)和二氯甲烷(3L)的溶液中逐滴加入亚硫酰氯(173mL,2.37mol)，并将反应物再搅拌3h。将反应物真空浓缩，溶于二氯甲烷中，并经硅胶柱过滤纯化，用10L乙酸乙酯洗脱。将该物质真空浓缩至大约1L，用1.5L乙醚稀释，并轻柔加热15min。将该混悬液过滤，用乙醚(500mL)洗涤，真空干燥，溶于乙醚(1L)中，并在45℃加热，随后过滤，得到105g标题化合物，为白色固体。

中间体15

甲磺酸2-氧代-哌啶-3-基酯

在0℃下向3-羟基-哌啶-2-酮(500mg,4.34mmol,1.0当量)和三乙胺(0.908mL,6.51mmol,1.5当量)在二氯甲烷(3mL)的混悬液中逐滴加入甲磺酰氯(497mg,4.34mmol,1.0当量)溶于二氯甲烷(1mL)中的溶液。经LCMS鉴定在30分钟内该反应完成。将橙色沉淀过滤，再次溶于二氯甲烷中，并经柱色谱纯化(MeOH/CH₂Cl₂)，得到标题化合物，为白色蜡状固体(204mg,1.056mmol,24.3%产率)。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm5.78(br.s,1H)4.94-5.05(m,1H)3.30-3.44(m,2H)3.27(s,3H)2.24-2.37(m,1H)2.08-2.21(m,1H)1.98-2.08(m,1H)1.79-1.96(m,1H)。MS(m/z,MH+):193.7

中间体16

3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-吡咯烷-2-酮

在1L圆底烧瓶中加入甲磺酸(S)-2-氧代-吡咯烷-3-基酯(按照Eur.Pat.Appl.,257602,1988年3月2日中所述方法制备)(95mmol,17g)和(4-甲氧基-苯基)-哌啶-4-基-甲酮(95mmol,20.8g)在DIEA(379mmol,66.3mL)中的溶液。将反应混合物在85℃加热18小时。将上层倒掉，并将剩余残余物经硅胶快速柱色谱用乙酸乙酯至20%MeOH/乙酸乙酯洗脱纯化，得到标题化合物，为浅褐色固体(13g,49%产率)。计算值MS=302.4,实测的MS(ESI)m/e303.4(M+H⁺)；¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm1.69-1.89(m,4H)2.11-2.18(m,1H)2.18-2.30(m,1H)2.50(td,J=11.29,3.01Hz,1H)2.78(td,J=11.54,3.01Hz,1H)2.84-2.91(m,1H)3.13(d,J=11.54Hz,1H)3.24-3.41(m,7H)3.49(t,J=8.78Hz,1H)7.01(d,J=9.00Hz,2H)7.96(d,J=9.03Hz,2H)；HPLC(Novapak150X3.9mm C₁₈柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA，以2mL/min，历经5分钟。)保留时间=2.305min。

中间体17

4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-[1,3’]联哌啶-2'-酮

向甲磺酸2-氧代-哌啶-3-基酯(250mg,1/294mmol,1.0当量)和(4-甲氧基-苯基)-哌啶-4-基-甲酮(312mg,1.423mmol,1.1当量)在乙腈(2.5mL)的溶液中加入二异丙基乙胺(351mg,0.475mL,2.1当量)，并将反应物在85℃加热3小时。将反应物冷却至室温，并真空蒸发溶剂。将所得油状残余物经硅胶柱色谱纯化(MeOH/CH₂Cl₂)，得到标题化合物，为澄清的油状物(142mg,0.449mmol,34.7%产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm7.95(d,J=9.09Hz,2H)7.39-7.43(br.s,1H)7.04(d,J=8.59Hz,2H)3.84(s,3H)3.23-3.33(m,2H)2.97-3.14(m,4H)2.74-2.85(m,2H)1.75-1.91(m,2H)1.57-1.75(m,4H)1.47-1.54(m,2H)。MS(m/z,MH+):316.8

中间体18

(S)-3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-吡咯烷-2-酮

在室温下向(4-甲氧基苯基)(哌啶-4-基)甲酮(34g,155mmol)和甲磺酸(R)-2-氧代吡咯烷-3-基酯(34.7g,194mmol)在乙腈(388mL)的混悬液中加入DIPEA(108mL,620mmol)，并将该反应物加热至60℃持续29h，随后冷却至室温，并再搅拌24h。将反应混合物真空浓缩，得到蜡状固体，将其溶于乙酸乙酯(300mL)中，并超声处理。将该混合物过滤，并将所得白色固体用乙酸乙酯(200mL)洗涤，得到21.05g。将合并的滤液浓缩，并经硅胶色谱纯化(330g isco0.01%NH₄OH5-10%MeOH/乙酸乙酯)。将纯的流分合并，真空浓缩并随后溶于乙酸乙酯(80-100mL)中，并搅拌。经过滤收集形成的白色沉淀。将滤液浓缩得到金色油状物，容纳于乙酸乙酯中，得到白色沉淀，将其经过滤收集。得到总计27.7g标题物质，为白色固体。计算值MS=302.4,实测的MS(ESI)m/e303.4(M+H⁺)

中间体19

(R)-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-吡咯烷-2-酮

在1L圆底烧瓶中加入甲磺酸(S)-2-氧代-吡咯烷-3-基酯(按照Eur.Pat.Appl.,257602,1988年3月2日中所述的方法制备)(18.75mmol,3.36g)和(4-甲氧基-3-甲基-苯基)-哌啶-4-基-甲酮(18.75mmol,4.37g)在DIEA(75mmol,13.1mL)和乙腈(100mL)中的溶液。将反应混合物在85℃加热4小时。将反应物真空蒸发，并将剩余的残余物经硅胶快速柱色谱用乙酸乙酯至20%MeOH/乙酸乙酯洗脱纯化，得到标题化合物，为白色固体(4g,67.4%产率)。计算值C₁₈H₂₄N₂O₃MS=316.4036,实测的MS(ESI)m/e317.1863(M+H⁺)；¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm1.69-1.89(m,4H)2.08-2.21(m,1H)2.24-2.30(m,1H)2.44–2.56(m,1H)2.73–2.84(m,1H)2.84-2.92(m,1H)3.08–3.17(m,1H)3.30-3.42(m,6H)3.45–3.54(m,1H)3.90(s,3H)6.95–7.04(m,1H)7.72–7.81(m,1H)7.83–7.90(m,1H)；分析型RP-HPLC保留时间=4.67min。

中间体20

(S)-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-吡咯烷-2-酮

在1L圆底烧瓶中加入甲磺酸(R)-2-氧代-吡咯烷-3-基酯(19.72mmol,3.53g)、(4-甲氧基-3-甲基-苯基)-哌啶-4-基-甲酮(19.72mmol,4.60g)在DIEA(79mmol,13.8mL)和乙腈(75mL)中的溶液。将反应混合物在85℃加热13小时。将反应物真空蒸发，并将剩余的残余物经硅胶快速柱色谱用5%MeOH/乙酸乙酯至20%MeOH/乙酸乙酯洗脱纯化，得到标题化合物，为白色固体(4.6g,73.7%产率)。计算值C₁₈H₂₄N₂O₃MS=316.4036,实测的MS(ESI)m/e317.1876(M+H⁺)；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δppm1.82-1.97(m,4H)2.15-2.36(m,5H)2.48-2.59(m,1H)2.90-3.04(m,2H)3.07-3.15(m,1H)3.23-3.44(m,3H)3.48-3.56(m,1H)3.91(s,3H)6.08-6.13(br.s,1H)6.85(s,1H)7.77(s,1H)7.83(dd,J=8.53,2.01Hz,1H)，分析型RP-HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA，以2mL/min，历经5分钟。)保留时间=2.557min。

中间体21

3-[4-(4-氟-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-吡咯烷-2-酮

向10mL微波瓶中加入甲磺酸(S)-2-氧代-吡咯烷-3-基酯(4.97mmol,890mg)和(4-氟-苯基)-哌啶-4-基-甲酮盐酸化物(4.97mmol,1.21g)在DIEA(24.8mmol,5mL)中的溶液，将其加热至85℃持续105min。将DIEA倒出，经快速柱色谱(硅胶)用乙酸乙酯至20%MeOH/乙酸乙酯洗脱纯化，得到标题化合物(112mg,7.8%产率)。MS(ESI)m/e291.2(M+H⁺),计算值290.33；HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA,以2mL/min，历经5分钟)保留时间=2.303min。

中间体22

3-[4-(4-氯-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-吡咯烷-2-酮

将装有甲磺酸(S)-2-氧代-吡咯烷-3-基酯(0.56mmol,100mg)和(4-氯-苯基)-哌啶-4-基-甲酮(0.56mmol,125mg)在DIEA(2.8mmol,0.5mL)中的溶液的10mL微波瓶加热至85℃持续105min。将二异丙基乙胺倒掉，并经快速柱色谱(硅胶)用乙酸乙酯至20%MeOH/乙酸乙酯洗脱纯化，得到标题化合物(53mg,31%产率)。MS(ESI)m/e307.3(M+H⁺),计算值306.2；HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA,以2mL/min，历经5分钟)保留时间=2.506min。

中间体23

5-甲氧基-1'-(2-氧代吡咯烷-3-基)螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮

向250mL圆底烧瓶中加入甲磺酸(S)-2-氧代-吡咯烷-3-基酯(2)(4.76mmol,852mg)和5-甲氧基螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(3)(4.32mmol,1.00g)在DIEA(17.29mmol,3.02mL)和乙腈(20mL)中的溶液。随后将该溶液加热至85℃持续90min。将反应物真空浓缩，并经快速柱色谱(硅胶)用乙酸乙酯至20%MeOH/乙酸乙酯洗脱纯化，得到标题化合物(1.05g,77%产率)。计算值MS=306.2,实测的MS(ESI)m/e307.3(M+H⁺)；HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA,以2mL/min，历经5分钟)保留时间=2.253min。

中间体24

2-(溴甲基)-6-氯苄腈

向2-氯-6-甲基苄腈(2.0g,13mmol)和N-溴琥珀酰亚胺(2.6g,15mmol)在四氯化碳(20mL)的溶液中加入偶氮二异丁腈(0.20g,1.2mmol)。将该混合物回流3h，并随后冷却，用二氯甲烷稀释，并用水和盐水洗涤，将有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将所得油状物经快速柱色谱纯化(乙酸乙酯:己烷,0:100至30:70)，得到白色固体产物(1.4g,46%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.43-7.59(m,3H),4.64(s,2H)。

中间体25

2-(3-溴-2-氧代吡咯烷-1-基)乙腈

在0℃下向2,4-二溴丁酰氯(3.6g,14mmol)的DCM(100mL)溶液和2-氨基乙腈盐酸盐(1.3g,14mmol)中加入三乙胺(5.7mL,41mmol)。将混合物在环境温度下搅拌24h。向所得物质中加入二氯甲烷，并将其用水、随后用盐水洗涤。将合并的有机层用硫酸钠干燥，过滤，并真空除去溶剂。将所得残余物溶于甲苯(130mL)中，并在0℃下历经20分钟分批加入氢化钠(545mg,13.6mmol,60%在矿物油中的溶液)。将反应物在环境温度下搅拌60h。将该混合物用乙酸乙酯稀释，并随后倒入冰水中。分离有机层，用盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并经快速柱色谱纯化(乙酸乙酯:己烷,0:100至100:0)，得到褐色油状物(730mg,26%产率)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ4.37-4.50(m,2H),4.10-4.28(m,1H),3.70(dq,J=7.6,2.0Hz,1H),3.51-3.59(m,1H),2.65-2.79(m,J=7.0Hz,1H),2.33-2.50(m,1H)。

中间体26

2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙腈

向2-(2-溴-5-氧代吡咯烷-1-基)乙腈(730mg,3.6mmol)和(4-甲氧基苯基)(哌啶-4-基)甲酮盐酸盐(920mg,3.6mmol)在乙腈(4mL)的溶液中加入三乙胺(1.5mL,11mmol)。将该混合物在130℃微波加热12分钟。真空除去溶剂，并将残余物溶于二氯甲烷和水中。将有机层经快速柱色谱纯化(乙酸乙酯:己烷,10:90至100:0)，得到浅黄色油状物(950mg,74%产率)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.94(d,J=8.5Hz,2H),6.96(d,J=8.5Hz,2H),4.22-4.39(m,2H),3.90(s,3H),3.57(dt,J=22.6,9.0Hz,2H),3.40-3.51(m,J=8.5Hz,1H),3.23-3.39(br s,1H),2.93-3.20(m,3H),2.33-2.61(m,2H),2.13-2.31(m,1H),1.83-2.03(m,4H)。HRMS计算值C₁₉H₂₃N₃O₃342.1818，实测值(ESI,[M+H]⁺),342.1830。

中间体27

2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙脒盐酸盐

向2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙腈(690mg,2.0mmol)在甲醇(15mL)的溶液中加入甲醇钠(0.046mL,0.20mmol,25%)，并将混合物在环境温度下搅拌2h。加入氯化铵(120mg,2.3mmol)，并将混合物在环境温度下搅拌60h。将反应混合物真空浓缩，加入乙酸乙酯在庚烷中的溶液(40%)，在环境温度下搅拌1h，随后过滤。将所得固体用乙醚洗涤，得到浅白色固体(800mg,100%产率)。MS m/z342.4(M+1),保留时间0.79

中间体28

2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙腈

向3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-吡咯烷-2-酮(1.65mmol,500mg)和氯乙腈(1.65mmol,0.125g)在THF(30mL)和DMF(5mL)的溶液中加入氢化钠(60%,2.48mmol,0.099g)，并加热至70℃持续30min。将反应物冷却至环境温度，并真空干燥。通过快速柱色谱(硅胶)经乙酸乙酯至20%MeOH/乙酸乙酯洗脱纯化，得到标题化合物，为灰白色残余物(125mg,22.1%产率)。计算值MS=341.4,实测的MS(ESI)m/e342.9(M+H⁺)；HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA，以2mL/min，历经5分钟。)保留时间=2.472min。

中间体29

{(S)-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基}-乙腈

在0℃下向(S)-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-吡咯烷-2-酮(6.32mmol,2.0g)和溴乙腈(18.96mmol,2.275g)在THF(60mL)的溶液中加入氢化钠(60%,18.96mmol,0.76g)，并在N₂下搅拌1小时。将其加温至环境温度，并加入氯乙腈(2mL)。30min后，将反应物冷却至0℃，并用饱和氯化铵溶液猝灭。经快速柱色谱(硅胶)用3%MeOH/乙酸乙酯至15%MeOH/乙酸乙酯洗脱纯化，得到标题化合物，为红-褐色泡沫(1.6g,71.2%产率)。计算值分子式=C₂₀H₂₅N₃O₃=355.4406,实测的MS(ESI)m/e356.6(M+H⁺)；分析型RP-HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA，以2mL/min，历经5分钟。)保留时间=2.831min。

中间体30

{(R)-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基}-乙腈

向(R)-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-吡咯烷-2-酮(6.32mmol,2.0g)和氯乙腈(6.32mmol,0.48g)在THF(50mL)的溶液中加入氢化钠(60%,9.48mmol,0.38g)，并加热至70℃持续30min。将反应物冷却至环境温度，并真空干燥。经快速柱色谱(硅胶)用乙酸乙酯至20%MeOH/乙酸乙酯洗脱纯化，得到标题化合物，为灰白色残余物(1.1g,49%产率)。计算值分子式=C₂₀H₂₅N₃O₃=355.4406,实测的MS(ESI)m/e356.1978(M+H⁺)；分析型RP-HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA，以2mL/min，历经5分钟。)保留时间=2.591min。

中间体31

2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基}-乙脒

向2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙腈(125mg,0.366mmol)在甲醇(4mL)的溶液中加入甲醇钠(2mg,0.037mmol)，并在环境温度下搅拌2h。加入氯化铵(23.5mg,0.439mmol)，并将混合物在环境温度下搅拌16h。将反应混合物浓缩，随后加入乙酸乙酯在戊烷中的溶液(1:1)，并在环境温度下搅拌1h。过滤，得到固体，将其用乙醚洗涤，得到浅白色固体(130mg,100%)。MS m/z360.0(M+1),HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA，以2mL/min，历经5分钟。)保留时间=2.139min。

中间体32

2-{(S)-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基}-乙脒

向{(S)-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基}-乙腈(1.60g,4.5mmol)在甲醇(40mL)的溶液中加入甲醇钠(511mg,9.45mmol)，在40℃搅拌3小时。加入氯化铵(265mg,9.45mmol)，并将该混合物在40℃温度下搅拌2h。将反应混合物浓缩，随后加入氯仿在乙酸乙酯中的溶液(1:2的体积)，并在环境温度下搅拌1h。在1500rpm离心30min，得到浅褐色固体(1.8g,98%)。HRMS计算值C₂₀H₂₉N₄O₃Cl372.4712，实测值(ESI,[M+H]⁺)，实测值373.2242。¹H NMR(400MHz,CDCl₃-d)δppm1.75-1.98(m,5H)2.19-2.40(m,7H)2.48-2.65(m,1H)2.76-3.01(m,3H)3.16-3.36(m,3H)3.46-3.64(m,3H)3.81-3.94(m,6H)4.34(d,J=16.56Hz,1H)4.52(d,J=16.56Hz,1H)6.84(d,J=8.53Hz,1H)7.28(s,1H)7.70-7.87(m,3H)8.51(s,1H),HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA，以2mL/min，历经5分钟。)保留时间=2.385min。

中间体33

甲苯-4-磺酸7-氧代-环庚-1,3,5-三烯基酯

按照Chem.Pharm.Bull.54(5),703,(2006)中的条件合成标题物质。

中间体34

2-(2,4-二溴丁酰氨基)乙酸乙酯

在0℃下向搅拌过的2-氨基乙酸乙酯盐酸盐(1.568g,11.24mmol)在二氯甲烷(9mL)和水(2mL)的混合物中加入2,4-二溴丁酰氯(3.0g,10.21mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液。随后缓慢加入氢氧化钠水溶液(11.5M,2mL)。将反应在0℃搅拌1小时，然后在室温搅拌15分钟。接着将反应物用二氯甲烷(40mL)和水(25mL)处理。分离各层，有机层用盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并真空干燥，得到粗的标题外消旋化合物(3.165g，90%纯度，84%产率)，为澄清油状。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm6.81(br s,1H),4.58(dd,J=8.84,4.80Hz,1H),4.21-4.31(m,2H),4.07(d,J=5.56Hz,2H),3.51-3.63(m,2H),2.62-2.75(m,1H),2.44-2.57(m,1H),1.28-1.36(m,3H)。

中间体35

2-(3-溴-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酸乙酯

在5℃向粗的2-(2,4-二溴丁酰氨基)乙酸乙酯(2.847g,8.60mmol)在苯(8.6mL)中的搅拌溶液中历经20分钟分批加入氢化钠(206mg,8.60mmol)的60%矿物油混悬液(344mg)。将反应再搅拌10分钟，随后倒入水中，用乙酸乙酯稀释。分离各层。有机层用盐水洗涤，硫酸钠干燥，过滤，浓缩，并真空干燥.将起始原料二溴化物和产物的混合物通过硅胶柱纯化，用0-100%乙酸乙酯/庚烷梯度洗脱，得到标题的外消旋化合物(523mg,24%产率)，为澄清油状。MS(ESI)[m/e,(M+H)⁺]=251.5。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm4.46(dd,J=7.07,3.03Hz,1H),3.96-4.28(m,4H),3.63-3.72(m,1H),3.43-3.53(m,1H),2.63-2.76(m,1H),2.34-2.43(m,1H),1.26-1.34(m,3H)。

中间体36

2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酸乙酯

将(4-甲氧基苯基)(哌啶-4-基)甲酮盐酸盐(524mg,2.05mmol)在室温与三乙胺(0.657mL,477mg,4.71mmol)的乙腈(80mL)溶液一起搅拌。将2-(3-溴-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酸乙酯(513mg,2.05mmol)的乙腈(20mL)溶液加入混合物中。将反应物在40℃搅拌3小时，然后在50℃搅拌过夜。24小时后，反应未完全，接着将反应物在70℃再搅拌48小时，然后冷却至室温。真空除去溶剂。将粗的橙色固体通过硅胶柱用0-10%甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，得到标题的外消旋化合物(730mg,87%产率,95%纯度)，为粘稠的琥珀色油。MS(ESI)[m/e,(M+H)⁺]=389.5。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm7.90-7.95(m,2H),6.91-6.96(m,2H),4.17-4.24(m,2H),3.95-4.17(m,2H),3.88(s,3H),3.56-3.64(m,1H),3.36-3.50(m,2H),3.18-3.29(m,1H),3.04-3.13(m,1H),2.93-3.04(m,2H),2.41-2.56(m,1H),2.20-2.35(m,1H),2.04-2.19(m,1H),1.80-1.95(m,4H),1.26-1.32(m,3H)。

中间体37

2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酸

向2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酸乙酯(727mg,1.778mmol)在乙醇(36mL)的溶液中加入2N的NaOH水溶液(1.8mL)。将混合物在室温搅拌1小时。接着将反应用1N的HCL中和至pH7。真空除去溶剂，接着与二氯甲烷共沸3次。将浅黄色泡沫状固体在高真空下干燥，得到标题的外消旋产物(835mg)。MS(ESI)[m/e,(M+H)⁺]=360.9。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm7.89-8.01(m,2H),6.96-7.11(m,2H),3.85(s,3H),3.46-3.68(m,2H),3.13-3.46(m,5H),2.93-3.04(m,1H),2.61-2.84(m,1H),2.30-2.42(m,1H),1.95-2.11(m,1H),1.81-1.95(m,1H),1.64-1.78(m,2H),1.44-1.63(m,2H)。

中间体38

5,6-二氢噻唑并[2,3-c][1,2,4]三唑-3-胺氢溴酸盐

标题化合物按照以下文献所示例的方法制备：On triazoles XLVIII[1].Synthesis of isomeric aminothiazolo[1,2,4]triazole,amino[1,2,4]triazolo[1,3]thiazine and-[1,3]thiazepine derivatives.Prauda,Ibolya；Reiter,Jozsef.Egis Pharmaceuticals Ltd.,Budapest,Hung.Journal of Heterocyclic Chemistry(2003),40(5),821-826.

中间体39

6-甲酰基-3,4-二氢-2H-吡喃-5-甲酸乙酯

将6-甲基-3,4-二氢-2H-吡喃-5-甲酸乙酯(6.0g,35.3mmol)和二氧化硒(4.3g,38.8mmol)的混合物在乙酸(141mL)中在110℃搅拌5小时。接着将反应冷却到室温，并将固体滤出。滤液浓缩，通过硅胶色谱用0-15%乙酸乙酯/庚烷梯度、随后15%浓度纯化，得到标题化合物(1.710g)，为琥珀色油，约90%纯度。MS(ESI)[m/e,(M+H)⁺]=185.3。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm10.22(s,1H),4.28(q,J=7.24Hz,2H),4.12-4.19(m,2H),2.54(t,J=6.57Hz,2H),1.88-1.98(m,2H),1.30-1.38(m,3H)。

中间体40

3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮

向搅拌的0℃的6-甲酰基-3,4-二氢-2H-吡喃-5-甲酸乙酯(1.705g,9.26mmol)在甲醇(80mL)中的混合物中快速加入35%肼水合物(0.311g,9.72mmol)。20分钟后，减压下除去溶剂，残余物用乙酸(70mL)和水(7mL)处理，在110℃搅拌20分钟。真空除去溶剂。粗的残余物通过硅胶色谱用0-25%甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，得到标题化合物(1.384g)，为浅黄色固体，高于90%纯度。MS(ESI)[m/e,(M+H)⁺]=153.2。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm10.56(br s,1H),7.53(s,1H),4.17-4.35(m,2H),2.57(t,J=6.57Hz,2H),1.99-2.08(m,2H)。

中间体41

5-氯-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-d]哒嗪

将3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-d]哒嗪-5(6H)-酮(400mg,2.63mmol)在磷酰氯(4mL,6.58g,42.9mmol)中在95℃搅拌约2小时。接着将反应冷却至室温，真空除去过量的磷酰氯。残余物用冰(～15g)和非常缓慢地用固体碳酸钾处理，直到pH>7。过滤分离褐色固体，真空干燥，得到标题化合物(267mg,57%产率)。MS(ESI)[m/e,(M)⁺]=170.6。

1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm8.68(s,1H),4.28-4.42(m,2H),2.78(t,J=6.32Hz,2H),2.05-2.20(m,2H)。

中间体42

N-(2,4-二甲氧基苄基)-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-d]哒嗪-5-胺

将5-氯-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-d]哒嗪(150mg,0.879mmol)、N,N-二异丙基乙胺(0.154mL,114mg,0.879mmol)和2,4-二甲氧基苄胺(294mg,1.76mmol)在异丙醇(2mL)中的混合物在密封管中在115℃加热18小时，随后在145℃加热4.5小时，然后加入过量的2,4-二甲氧基苄胺(约2g,12mmol)。将反应在145℃搅拌18小时。在冷却到室温后，真空除去异丙醇。然后将粗物质用乙醚(30mL)处理。过滤除去褐色固体。将滤液用少量饱和氯化铵水溶液洗涤两次。有机层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩。粗产物通过硅胶色谱用0-10%甲醇/二氯甲烷梯度洗脱，得到标题化合物(159mg)，为琥珀色泡沫状油。MS(ESI)[m/e,(M)⁺]=301.8。¹H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm8.22(s,1H),7.35(d,J=8.08Hz,1H),6.36-6.56(m,2H),4.73(d,J=5.56Hz,2H),4.37-4.56(m,1H),4.11-4.24(m,2H),3.86(s,3H),3.81(s,3H),2.27-2.31(m,2H),2.04-2.11(m,2H)。

中间体43

3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-d]哒嗪-5-胺氢溴酸盐

在90℃将N-(2,4-二甲氧基苄基)-3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-d]哒嗪-5-胺(158,0.524mmol)和30重量%的氢溴酸/乙酸(0.3mL,0.4g,1.5mmol)在乙酸(3mL)中的混合物搅拌约2小时。接着将反应冷却至室温，真空除去溶剂。暗红色固体用乙醚洗涤，随后干燥，得到粗的标题化合物(122mg)，纯度约65%。MS(ESI)[m/e,(M)⁺]=151.7。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm8.22(s,1H),8.11(br s,2H),4.36-4.40(m,2H),2.47(t,J=6.32Hz,2H),1.98-2.06(m,2H)。

实施例1:

2-氯-6-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-苄腈

向3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)吡咯烷-2-酮(70mg,0.23mmol)和2-(溴甲基)-6-氯苄腈(80mg,0.35mmol)在四氢呋喃(1mL)和二甲基甲酰胺(0.1mL)的溶液中加入氢化钠(46mg,1.2mmol,60%在矿物油中的溶液)。将混合物在环境温度下搅拌30分钟。缓慢加入二氯甲烷和甲醇以猝灭反应。接着将混合物通过短的硅胶柱过滤，真空除去溶剂，残余物经快速柱色谱纯化，首先是(乙酸乙酯:己烷，10:90至100:0)，其次是(甲醇:二氯甲烷，1:99至10:90)，得到褐色油状物，其进一步通过HPLC纯化得到无色产物。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.85(m,2H),7.45(t,J=8.0Hz,1H),7.35-7.41(m,1H),7.30(d,J=7.5Hz,1H),6.87(m,J=9.0Hz,2H),4.62(q,J=15.6Hz,2H),3.80(s,3H),3.50(t,J=9.0Hz,1H),3.11-3.37(m,3H),2.94-3.11(m,1H),2.75-2.94(m,2H),2.28-2.54(m,1H),2.09-2.28(m,1H),1.90-2.09(m,1H),1.66-1.90(m,4H)。HRMS计算值C₂₅H₂₆ClN₃O₃452.1741，实测值(ESI,[M+H]⁺)452.1760。

实施例2:

2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮

向3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-吡咯烷-2-酮(43.7mmol,13.2g)和2-氯甲基-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮(48mmol,9.6g)在THF(400mL)和DMF配方(20mL)的溶液中加入氢化钠(60%,153mmol,6.1g)，加热到70℃持续1小时。使反应冷却到环境温度，用1L乙醚稀释，将在混悬液中的所得固体过滤并真空干燥，得到标题化合物，为灰白色固体(22g,95.3%产率)。HRMS计算值C₂₅H₃₀N₄O₅466.5417，实测值(ESI,[M+H]⁺)467.2305.¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm1.67-1.92(m,4H)2.05-2.24(m,2H)2.47-2.64(m,3H)2.72-2.82(m,1H)2.84-2.93(m,1H)3.06-3.15(m,1H)3.26-3.47(m,10H)3.68(t,J=8.78Hz,1H)3.83-3.99(m,5H)4.16(d,J=15.56Hz,1H)4.40-4.58(m,3H)7.01(d,J=9.03Hz,2H)7.97(d,J=9.03Hz,2H)，分析型RP-HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA，以2mL/min，历经5分钟。)保留时间=2.455min。

实施例3:

2-{(S)-3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮

将2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮(21g)溶于甲醇(2.1L)，超声处理30分钟，通过过滤除去不溶物。在3.0x25.0cm(S,S)Whelk0-1柱上通过SFC色谱手性分离，用50%MeOH/1%异丙基胺/CO₂(v/v)以70mL/min在125巴下洗脱，得到7.91g物质。该物质与氯仿(10x1L)在真空下共蒸馏直到干燥。干燥的样品溶于乙腈/水，并通过浸没在液氮中冷冻，置于真空下(0.014torr)3天。冷冻干燥的物质溶于乙腈，用K₂CO₃(6.3g)处理，加热至80℃持续45min，过滤并干燥(9.1g)。将盐(8g)溶于40mL水，冷却至0℃，逐滴加入HCl水溶液(5mL的冷却至0℃的15%溶液)，直至pH9.5，其中溶液变浑浊。将溶液用二氯甲烷(2x50mL)萃取，浓缩至干。将化合物进一步在65℃在真空下的管中干燥，得到游离碱(4.246g,40.4%产率)。HRMS计算值C₂₅H₃₀N₄O₅466.5417，实测值(ESI,[M+H]⁺)467.2305.；¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm1.67-1.91(m,4H)2.08-2.31(m,2H)2.48-2.58(m,1H)2.59-2.66(m,2H)2.78-2.87(m,1H)2.89-2.98(m,1H)3.11-3.19(m,1H)3.27-3.41(m,12H)3.45-3.52(m,2H)3.64(t,J=8.53Hz,1H)3.87(s,3H)3.91(t,J=5.52Hz,2H)4.38(d,J=10.54Hz,2H)4.48(s,2H)7.01(d,J=9.03Hz,2H)7.96(d,J=9.03Hz,2H)。HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA，以2mL/min，历经5分钟。)保留时间=2.455min。

备选方法

将(S)-3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)吡咯烷-2-酮(25.66g,85mmol)在THF(283mL)中的溶液冷却到-1.7℃，缓慢加入NaH(10.18g,255mmol)和2-氯甲基-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮(89mmol,17.88g)，并保持温度低于5℃。将反应容器浸没在冰水浴中，并使水浴过夜。当反应通过LCMS证明完成时(约15h)，将反应物冷却到1.7℃，缓慢加入饱和NH₄Cl，保持内温低于10℃。将混合物用二氯甲烷(500mL)和1N NaOH(500mL)稀释，分成两批同样进行。加入额外的1N NaOH(500mL)，将水层用二氯甲烷(2x500mL)洗涤。将水层用约250mL3N HCl调节至pH7，用二氯甲烷(4x500mL)萃取，用Na₂SO₄干燥，过滤并真空浓缩。粗物质溶于二氯甲烷(500mL)，加入乙酸乙酯(500mL)。所得溶液浓缩至体积约300mL，用纯的标题化合物种晶，并进一步真空浓缩。向该搅拌的溶液中加入乙酸乙酯(500mL)和纯的标题化合物晶种。过滤混悬液得到标题化合物，为白色固体(32.87g,70.5mmol)。

实施例4:

2-{(R)-3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮

将2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮(37mg)通过手性SFC色谱在AS-H柱上纯化(60g/min,21x250mm)，洗脱40%IPA/0.2%DEA/CO₂(v/v)，得到19mg的粗物质，其进一步通过HPLC(300x50mm)纯化，用25-35%乙腈/水梯度历经45min洗脱，随后将纯流分冷冻干燥，得到所需物质的TFA盐。通过碳酸氢盐MP树脂柱中和，用甲醇(2mL)、DCM(3mL)和甲醇(2mL)洗脱，得到标题化合物(5mg,26%产率)。MW计算值C₂₅H₃₀N₄O₅466.5417,HRMS m/z实测值467.2305(M+H)⁺；¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm1.69-1.90(m,4H)2.09-2.32(m,2H)2.48-2.58(m,1H)2.59-2.66(m,2H)2.77-2.87(m,1H)2.90-2.99(m,1H)3.11-3.20(m,1H)3.26-3.42(m,12H)3.50(s,2H)3.63(s,1H)3.87(s,3H)3.91(t,J=5.77Hz,2H)4.39(s,2H)4.47(s,2H)7.01(d,J=9.03Hz,2H)7.96(d,J=9.03Hz,2H).；HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA,以2mL/min，历经5分钟)保留时间=2.455min

备选方法

在-78℃向(R)-3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-吡咯烷-2-酮((0.165mmol,50mg)，其按照类似于(R)-3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-吡咯烷-2-酮的方法从(S)-3-羟基吡咯烷-2-酮制备)和2-氯甲基-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮(0.165mmol,33.2mg)在THF(5mL)的溶液中加入1M六甲基二硅烷基氨基钾的THF溶液(0.331mmol,0.331mL)，持续2小时。使反应升温至0℃，持续16小时，真空蒸发。所得残余物通过快速柱色谱(硅胶)纯化，用梯度为0-50%MeOH/乙酸乙酯洗脱，得到标题化合物，为灰白色固体(20mg,25.9%产率)。HRMS计算值C₂₅H₃₀N₄O₅466.5417，实测值(ESI,[M+H]⁺)467.2296。¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm1.69-1.91(m,4H)2.10-2.33(m,2H)2.49-2.59(m,1H)2.59–2.67(m,2H)2.76-2.89(m,1H)2.91–3.01(m,1H)3.11-3.22(m,1H)3.32-3.44(m,2H)3.46-3.58(m,2H)3.59–3.71(t,J=8.78Hz,1H)3.88-3.96(m,2H)4.04-4.14(d,J=15.56Hz,2H)4.36–4.42(m,2H)4.44-4.51(m,2H)6.97(d,J=9.03Hz,2H)7.92(d,J=9.03Hz,2H),分析型RP-HPLC保留时间=4.02min。

实施例5:

2-氯-5-((3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)苄腈

向3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)吡咯烷-2-酮(70mg,0.232mmol)和5-(溴甲基)-2-氯苄腈(80mg,0.347mmol)在THF中的溶液(1mL)和DMF(0.1mL)的混合物中加入NaH(46.3mg,1.16mmol,60%)。真空浓缩反应物，然后溶于二氯甲烷和甲醇，通过短硅胶柱过滤。包含标题物质的流分被收集、浓缩，并用NaHCO3中和。加入MeOH，并将溶液在冰箱中冷却。通过过滤收集白色固体，得到标题化合物(45mg)。HRMS计算值C₂₅H₂₆ClN₃O₃451.1671，实测值(ESI,[M+H]⁺)452.1744。

实施例6:

6-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-1-甲基-1,3a,5,7a-四氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮

向3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-吡咯烷-2-酮(0.165mmol,50mg)和6-氯甲基-1-甲基-1,5-二氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酮(0.165mmol,33mg)在THF(2mL)的溶液中加入氢化钠(60%,0.331mmol,23mg)，加热至70℃持续1小时。使反应冷却到环境温度，用10mL乙醚稀释，过滤混悬液中的所得固体，真空干燥，得到标题化合物，为灰白色固体(66.4mg,87%产率)。HRMS计算值C₂₄H₂₈N₆O₄464.5286，实测值(ESI,[M+H]⁺)465.2256.¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm1.70-1.93(m,4H)2.09-2.31(m,2H)2.53-2.66(m,1H)2.80-2.91(m,1H)2.93–3.02(m,1H)3.10-3.21(m,1H)3.33-3.43(m,2H)3.48–3.57(m,2H)3.65-3.75(m,1H)3.83–3.90(m,6H)4.37-4.51(m,2H)6.97(d,J=9.03Hz,2H)7.83–7.91(m,1H)7.97(d,J=9.03Hz,2H),分析型RP-HPLC保留时间=2.77min

实施例7:

2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-4a,7a-二氢-3H-噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-酮

向3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-吡咯烷-2-酮(0.165mmol,50mg)和2-氯甲基-3H-噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-酮(0.165mmol,33mg)在THF(2mL)的溶液中加入氢化钠(60%,0.331mmol,23mg)，加热至70℃持续1小时。使反应冷却到环境温度，用10mL乙醚稀释，过滤混悬液中的所得固体，真空干燥，得到标题化合物，为灰白色固体(70.5mg,95.4%产率)。HRMS计算值C₂₄H₂₆N₄O₄S466.5632，实测值(ESI,[M+H]⁺)467.1740.¹HNMR(400MHz,MeOD)δppm1.65-1.92(m,4H)2.06-2.29(m,2H)2.48-2.62(m,1H)2.78-2.89(m,1H)2.89–3.00(m,1H)3.09-3.18(m,1H)3.34-3.53(m,4H)3.55–3.65(m,1H)3.68-3.77(m,1H)4.23–4.32(m,1H)4.60-4.69(m,1H)6.97(d,J=9.03Hz,2H)7.17–7.24(m,1H)7.73–7.81(m,1H)7.96(d,J=9.03Hz,2H),分析型RP-HPLC保留时间=2.77min

实施例8:

2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-6-甲基-4a,7a-二氢-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮

向3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-吡咯烷-2-酮(0.165mmol,50mg)和2-氯甲基-6-甲基-3H-噻吩并[2,3-d]嘧啶-4-酮(0.165mmol,33mg)在THF(2mL)的溶液中加入氢化钠(60%,0.331mmol,23mg)，加热至70℃持续1小时。使反应冷却到环境温度，用10mL乙醚稀释，过滤混悬液中的所得固体，真空干燥，得到标题化合物，为灰白色固体(70.5mg,95.4%产率)。HRMS计算值C₂₅H₂₈N₄O₄S480.5903，实测值(ESI,[M+H]⁺)481.1907.¹HNMR(400MHz,MeOD)δppm1.66-1.93(m,4H)2.05-2.30(m,2H)2.51-2.63(m,1H)2.79-2.90(m,1H)2.90–2.98(m,1H)3.03-3.18(m,1H)3.33-3.54(m,4H)3.65-3.75(m,1H)3.87(s,3H)4.20–4.31(m,1H)4.51-4.62(m,1H)6.94–7.06(m,3H)7.98(d,J=9.03Hz,2H),分析型RP-HPLC保留时间=3.22min

实施例9:

2-{3-[4-(4-氯-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮

向3-[4-(4-氯-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-吡咯烷-2-酮(0.17mmol,53mg)和2-氯甲基-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮(0.17mmol,35mg)在THF(15mL)和DMF(2.5mL)的溶液中加入氢化钠(60%,(0.6mmol,14mg)，加热至70℃持续15分钟。真空浓缩反应物，通过N₂流除去剩余的DMF。粗物质通过制备型反相HPLC(300x50mm)纯化，用梯度为25-35%乙腈/水洗脱45分钟。将纯流分冷冻干燥，得到所需物质的TFA盐。通过碳酸氢盐MP树脂柱过滤中和TFA盐，用甲醇(2mL)、DCM(3mL)和甲醇(2mL)洗脱，得到标题化合物(7mg,8.6%产率)。HR-MS m/z(M+H)⁺:测量值471.1823计算值C₂₄H₂₇ClN₄O₄=466.5417；¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm1.66-1.92(m,6H)2.05-2.28(m,3H)2.47-2.67(m,5H)2.75-2.87(m,2H)2.88-2.97(m,2H)3.08-3.18(m,2H)3.24-3.51(m,22H)3.61-3.70(m,2H)3.91(t,J=5.52Hz,2H)4.20-4.32(m,1H)4.38-4.54(m,3H)7.51(d,J=8.53Hz,2H)7.96(d,J=8.53Hz,2H)。HPLC(Novapak150X3.9mmC18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA,以2mL/min，历经5分钟)保留时间=2.666min。

实施例10:

2-{3-[4-(4-氟-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮

向3-[4-(4-氟-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-吡咯烷-2-酮(0.39mmol,112mg)和2-氯甲基-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮(0.39mmol,76mg)在THF(15mL)和DMF(2.5mL)的溶液中加入氢化钠(60%,(1.35mmol,54mg)，加热至70℃持续15分钟。真空浓缩反应物，通过N₂流除去剩余的DMF。粗物质通过制备型反相HPLC(300x50mm)纯化，用梯度为25-35%乙腈/水洗脱45分钟。随后将纯流分冷冻干燥，得到所需物质的TFA盐。通过碳酸氢盐MP树脂柱过滤中和TFA盐，用甲醇(2mL)、DCM(3mL)和甲醇(2mL)洗脱，得到标题化合物(100mg,57%产率)。HR-MS m/z(M+H)⁺:测量值455.2111,计算分子式C₂₄H₂₇FN₄O₄=454.5056；¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm1.58-1.85(m,4H)1.99-2.24(m,2H)2.42-2.57(m,3H)2.67-2.81(m,1H)2.84-2.93(m,1H)3.11-3.17(m,1H)3.36-3.47(m,2H)3.52-3.62(m,1H)3.76-3.86(m,2H)4.26-4.40(m,4H)7.09-7.18(m,2H)7.91-8.00(m,2H)；HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA,以2mL/min，历经5分钟)保留时间=2.461min。

实施例11:

2-{(S)-3-[4-(4-氟-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮

通过手性SFC色谱在AS-H柱(60g/min,21x250mm)上手性拆分2-{3-[4-(4-氟-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮(90mg)，用40%IPA/0.2%DEA/CO₂(v/v)洗脱，得到48mg粗物质，其进一步在RP-HPLC(300x50mm)上纯化，用梯度为25-35%乙腈/水历经45分钟洗脱，随后将纯流分冷冻干燥，得到所需物质的TFA盐。通过碳酸氢盐MP树脂柱过滤中和TFA盐，用甲醇(2mL)、DCM(3mL)和甲醇(2mL)洗脱，得到标题化合物(5mg,10.4%产率)。HRMS m/z(M+H)⁺:测量值455.2101计算分子式C₂₄H₂₇FN₄O₄=454.5056；¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm1.87-2.10(m,2H)2.11-2.29(m,3H)2.34-2.53(m,1H)2.53-2.70(m,3H)3.23-3.43(m,14H)3.43-3.71(m,5H)3.71-3.84(m,1H)3.86-4.01(m,3H)4.37-4.57(m,5H)7.22-7.33(m,2H)8.07-8.16(m,2H)。HPLC(Novapak150X3.9mmC18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA,以2mL/min，历经5分钟)保留时间=2.461min

实施例12:

2-{(R)-3-[4-(4-氟-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮

通过SFC色谱在AS-H柱(60g/min,21x250mm)上手性拆分2-{3-[4-(4-氟-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮(90mg)，用40%IPA/0.2%DEA/CO₂(v/v)洗脱，得到48mg粗物质，其进一步在RP-HPLC(300x50mm)上纯化，用梯度为25-35%乙腈/水历经45分钟洗脱，随后将纯流分冷冻干燥，得到所需物质的TFA盐。通过碳酸氢盐MP树脂柱过滤中和TFA盐，用甲醇(2mL)、DCM(3mL)和甲醇(2mL)洗脱，得到标题化合物的游离碱(27mg,56%产率)。HRMS m/z(M+H)⁺:测量值455.2088,计算分子式C₂₄H₂₇FN₄O₄=454.505；¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm1.66-1.93(m,4H)2.07-2.32(m,2H)2.47-2.58(m,1H)2.58-2.66(m,2H)2.75-2.87(m,1H)2.89-2.99(m,1H)3.10-3.21(m,1H)3.22-3.43(m,13H)3.44-3.53(m,2H)3.60-3.70(m,1H)3.91(t,J=5.52Hz,2H)4.29-4.53(m,4H)7.17-7.30(m,2H)8.00-8.12(m,2H)。HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA,以2mL/min，历经5分钟)保留时间=2.461min

实施例13:

2-{(S)-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮

向(R)-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-吡咯烷-2-酮(0.79mmol,250mg)和2-氯甲基-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮(0.87mmol,174mg)在THF(10mL)的溶液中加入氢化钠(60%,2.77mmol,111mg)，加热至70℃持续1小时。使反应冷却到环境温度，用100mL乙醚稀释，过滤混悬液中的所得固体，真空干燥，得到标题化合物，为灰白色固体(300mg)。通过手性SFC色谱在AS-H柱(60g/min,21x250mm)上手性拆分2-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮(300mg)，用40%IPA/0.2%DEA/CO₂(v/v)洗脱，得到77mg纯物质。HRMS计算值C₂₆H₃₂N₄O₅=480.5687，实测值(ESI,[M+H]⁺)481.2455.¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm1.69-1.90(m,4H)2.10-2.20(m,1H)2.20-2.31(m,4H)2.48-2.58(m,1H)2.59-2.65(m,2H)2.77-2.88(m,1H)2.90-3.06(m,1H)3.10-3.20(m,1H)3.32-3.42(m,3H)3.46-3.54(m,2H)3.63(t,J=8.53Hz,1H)3.88-3.94(m,5H)4.39(s,2H)4.47(s,2H)6.99(d,J=8.53Hz,1H)7.77(s,1H)7.87(dd,J=8.53,2.01Hz,1H)，分析型RP-HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA，以2mL/min，历经5分钟。)保留时间=2.731min。

实施例14:

2-{(R)-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮

该物质通过手性SFC色谱在AS-H柱(60g/min,21x250mm)上手性拆分2-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮(300mg)得到，用40%IPA/0.2%DEA/CO₂(v/v)洗脱，得到125mg纯物质。HRMS计算值C₂₆H₃₂N₄O₅480.5687，实测值(ESI,[M+H]⁺)481.2463.¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm1.69-1.91(m,4H)2.10-2.21(m,1H)2.20-2.31(m,4H)2.59-2.66(m,2H)2.78-2.87(m,1H)2.90-2.98(m,1H)3.11-3.20(m,1H)3.33-3.42(m,2H)3.46-3.55(m,2H)3.63(t,J=8.78Hz,1H)4.39(s,2H)4.47(s,2H)6.99(d,J=8.53Hz,1H)7.77(s,1H)7.87(dd,J=8.53,2.01Hz,1H)，分析型RP-HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA，以2mL/min，历经5分钟。)保留时间=2.693min。

实施例15:

2-((3-(5-甲氧基-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)-7,8-二氢-3H-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5H)-酮

向5-甲氧基-1'-(2-氧代吡咯烷-3-基)螺[茚-2,4'-哌啶]-1(3H)-酮(3.34mmol,1.05g)和2-氯甲基-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮(3.67mmol,0.737g)在THF(40mL)和DMF(5mL)的溶液中加入氢化钠(60%,11.69mmol,0.468g)，并将混悬液在70℃加热45分钟。使反应冷却到环境温度，用100mL乙醚稀释，过滤收集灰白色固体，真空干燥。从异丙醇/甲醇中重结晶，得到标题化合物，为灰白色固体(661mg,41.4%产率)。计算值MS=478.6，MS(ESI)m/e479.0(M+H⁺)；¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm1.33-1.46(m,2H)1.92-2.07(m,2H)2.07-2.27(m,2H)2.49-2.65(m,3H)2.89(dd,J=8.53,2.51Hz,2H)3.02-3.15(m,3H)3.35-3.50(m,2H)3.70(t,J=8.78Hz,1H)3.85-3.98(m,6H)4.16(d,J=15.06Hz,1H)4.44-4.53(m,3H)6.96(dd,J=8.53,2.51Hz,1H)7.05(s,1H)7.62(d,J=9.03Hz,1H)。HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA，以2mL/min，历经5分钟。)保留时间=2.391min。

实施例16(峰1)和实施例17(峰2)

通过手性SFC色谱在AS-H柱(60g/min,21x250mm)上手性拆分2-((3-(5-甲氧基-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)-7,8-二氢-3H-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5H)-酮(650mg)，用40%IPA/0.2%DEA/CO₂(v/v)洗脱，得到两个对映异构体：(S)-2-((3-(5-甲氧基-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)-7,8-二氢-3H-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5H)-酮，和(R)-2-((3-(5-甲氧基-1-氧代-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)-7,8-二氢-3H-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4(5H)-酮。

峰1:145mg,HRMS计算值C₂₆H₃₀N₄O₅478.5528，实测值(ESI,[M+H]⁺)479.2291.¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm1.39(dd,J=11.29,7.78Hz,3H)1.91-2.05(m,2H)2.06-2.26(m,2H)2.50-2.65(m,3H)3.02-3.14(m,3H)3.23-3.32(m,3H)3.34(s,1H)3.40-3.47(m,2H)3.68(t,J=8.78Hz,1H)3.87-3.94(m,4H)4.18(d,J=15.56Hz,1H)4.44-4.52(m,3H)6.96(d,J=8.53Hz,1H)7.04(s,1H)7.61(d,J=8.53Hz,1H)。HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA,以2mL/min，历经5分钟)保留时间=2.430min。

峰2:177mg,HRMS计算值C₂₆H₃₀N₄O₅478.5528，实测值(ESI,[M+H]⁺)479.2294.¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm1.36-1.52(m,10H)1.91-2.06(m,3H)2.08-2.30(m,3H)2.50-2.65(m,6H)2.76-2.95(m,6H)3.03-3.14(m,5H)3.25-3.36(m,16H)3.38-3.51(m,4H)3.58-3.74(m,3H)3.86-3.94(m,8H)4.20(d,J=15.56Hz,2H)4.44-4.54(m,5H)6.92-6.97(m,1H)7.05(s,2H)7.62(d,J=8.53Hz,2H)。HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA,以2mL/min，历经5分钟)保留时间=2.432min。

实施例18:

2-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-2'-氧代-[1,3’]联哌啶-1'-基甲基]-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮

向搅拌的NaH(23.8mg,0.942mmol,2.1当量)在THF(10mL)的溶液中加入4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-[1,3’]联哌啶-2'-酮(142mg,0.449mmol,1.0当量)和2-氯甲基-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮(90mg,0.449mmol,1.0当量)。使反应在70℃搅拌3小时。滤出固体沉淀，用CH₂Cl₂洗涤。蒸发母液的溶剂，残余物通过快速色谱在硅胶上纯化(0-15%MeOH/CH₂Cl₂)，得到标题化合物，为灰白色粉末(60mg,0.139mmol,31.1%产率)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm12.34(br s,1H)7.94(d,J=8.59Hz,2H)7.03(d,J=8.59Hz,2H)4.14-4.54(m,5H)4.06-4.10(m,1H)3.45(br s,1H)3.18(d,J=5.05Hz,3H)3.03(br s,1H)2.85(br s,2H)2.30-2.65(m,5H)1.30-2.05(m,9H)。HR-MS(m/z,MH+):481.2461,482.2471.HPLC保留时间：2.78min(Agilent柱3.0x100mm3um C18柱；流速为1.0mL/min，在10min分钟内使用5%-95%乙腈梯度，0.1%FA)。

实施例19(峰1)和实施例20(峰2)：

使用OD-H柱通过SFC手性拆分2-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-2'-氧代-[1,3’]联哌啶-1'-基甲基]-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮，使用30%MeOH的流动相，得到两个对映异构体：2-[(S)-4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-2'-氧代-[1,3’]联哌啶-1'-基甲基]-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮，和2-[(R)-4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-2'-氧代-[1,3’]联哌啶-1'-基甲基]-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮。

峰1保留时间=2.31min。

峰2保留时间=3.17min。

实施例21:

2-((3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)-6,7-二氢-3H-环戊二烯并[d]嘧啶-4(5H)-酮

向2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙脒盐酸盐(140mg,0.37mmol)和2-氧代环戊烷甲酸甲酯(0.060mL,0.47mmol)在乙醇(4mL)的溶液中加入乙醇钠(0.160mL,0.44mmol,21%)。将混合物在100℃加热24小时。所得混合物通过快速柱色谱(甲醇:二氯甲烷,1:99至10:90)纯化，接着从甲醇中结晶，得到浅黄色固体(33mg,20%产率)。¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ10.85(s,1H),7.95(d,J=8.5Hz,2H),6.96(d,J=8.5Hz,2H),4.32-4.47(m,2H),3.89(s,3H),3.60-3.73(m,1H),3.40-3.56(m,2H),3.23-3.37(br.s,1H),3.00-3.20(br.s,3H),2.84(ddd,4H,J=14.7,7.5,7.4Hz),2.46-2.62(br.s,1H),2.38(d,1H,J=7.0Hz),2.15-2.25(br.s,1H),2.10(dq,2H,J=7.8,7.6Hz),1.82-2.01(br.s,4H)HRMS计算值C₂₅H₃₀N₄O₄451.2345，实测值(ESI,[M+H]⁺),451.2362。

实施例22:

2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3H-嘧啶-4-酮

标题化合物(1.8mg,1%产率)使用与实施例21类似的方法从(E)-3-甲氧基丙烯酸甲酯(0.055mL,0.47mmol)制备。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.03(d,J=9.0Hz,2H),7.92(d,J=6.5Hz,1H),7.05(d,J=9.0Hz,2H),6.33(d,J=7.0Hz,1H),4.48-4.58(m,2H),4.36-4.48(m,1H),3.93-4.05(br.s.1H),3.89(s,3H),3.70-3.83(br.s,1H),3.66(d,J=8.0Hz,2H),3.51-3.63(br.s,2H),3.25-3.39(m,1H),2.54-2.71(m,1H),2.47(d,J=10.0Hz,1H),2.19(d,J=14.1Hz,2H),2.03-2.15(br.s,2H)。HRMS计算值C₂₂H₂₆N₄O₄411.2032，实测值(ESI,[M+H]⁺),411.2047.

实施例23:

2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-6-甲基-3H-嘧啶-4-酮

标题化合物(73mg,47%产率)使用与实施例21类似的方法从(E)-丁-2-烯酸甲酯(0.044mL,0.47mmol)制备。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ11.30(s,1H),7.95(d,J=9.0Hz,2H),6.96(d,J=9.0Hz,2H),6.20(s,1H),4.40(s,2H),3.89(s,3H),3.70(d,J=9.0Hz,1H),3.40-3.57(m,2H),3.22-3.40(m,1H),2.98-3.21(br.s,3H),2.45-2.60(br.s,1H),2.30-2.43(br.s,1H),2.28(s,3H),2.11-2.25(br.s,1H),1.82-1.99(br.s,4H)。HRMS计算值C₂₃H₂₈N₄O₄425.2189，实测值(ESI,[M+H]⁺),425.2186.

实施例24:

6-乙基-2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3H-嘧啶-4-酮

标题化合物(64mg,40%产率)使用与实施例21类似的方法从3-氧代戊酸乙酯(0.067mL,0.47mmol)制备。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ11.67(s,1H),7.95(d,J=9.0Hz,2H),6.96(d,J=8.5Hz,2H),6.19(s,1H),4.42(s,2H),3.89(s,3H),3.68(t,J=8.3Hz,1H),3.40-3.55(m,2H),3.22-3.35(br.s,1H),3.07-3.18(br.s,1H),2.98-3.07(br.s,2H),2.54(q,J=7.5Hz,3H),2.25-2.43(m,1H),2.08-2.24(br.s,1H),1.81-1.97(br.s,4H),1.15-1.33(m,3H)。HRMS计算值C₂₄H₃₀N₄O₄439.2345，实测值(ESI,[M+H]⁺),439.2356.

实施例25:

2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-5-甲基-3H-嘧啶-4-酮

标题化合物(96mg,62%产率)使用与实施例21类似的方法从2-甲基-3-氧代丙酸乙酯(0.057mL,0.47mmol)制备。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.65(s,1H),7.95(d,J=9.0Hz,2H),7.74(s,1H),6.96(d,J=8.5Hz,2H),4.25-4.51(m,2H),3.89(s,3H),3.65(t,J=8.5Hz,1H),3.39-3.58(m,2H),3.17-3.37(m,1H),3.10(d,J=10.5Hz,1H),2.99(br.s,2H),2.47(br.s,1H),2.22-2.40(m,1H),2.14(dd,J=13.3,8.3Hz,1H),2.07(s,3H),1.88(br.s,4H)。HRMS计算值C₂₃H₂₈N₄O₄425.2189，实测值(ESI,[M+H]⁺),425.2191.

实施例26:

2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-5,6-二甲基-3H-嘧啶-4-酮

标题化合物(40mg,19%产率)使用与实施例21类似的方法从(Z)-3-羟基-2-甲基丁-2-烯酸乙酯(0.081mL,0.56mmol)制备。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.65(s,1H),7.86(d,J=9.1Hz,2H),6.87(d,J=9.1Hz,2H),4.27(s,2H),3.80(s,3H),3.54(t,J=8.6Hz,1H),3.31-3.47(m,2H),3.18(ddd,J=9.5,5.3,4.9Hz,1H),2.95-3.06(m,1H),2.87-2.95(m,2H),2.33-2.45(m,1H),2.17-2.31(m,4H),1.94-2.10(m,4H),1.70-1.88(m,4H)。HRMS计算值C₂₄H₃₀N₄O₄439.2345，实测值(ESI,[M+H]⁺),439.2347。

实施例27:

2-((3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)环庚三烯并[d]咪唑-4(3H)-酮

将甲苯-4-磺酸7-氧代-环庚-1,3,5-三烯基酯(0.33mmol.91mg)、2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基}-乙脒(0.33mmol,130mg)和四丁基溴化铵(0.132mmol,42.4mg)加入30%NaOH(13.1mg,1mL)和甲苯(5mL)的溶液中，搅拌16小时。反应物用过量的盐水处理，用乙酸乙酯(3x20mL)萃取。合并的有机层真空浓缩。粗物质通过制备型反相HPLC(300x50mm)纯化，用梯度为25-35%乙腈/水历经45分钟洗脱，随后将纯流分冷冻干燥，得到标题化合物的TFA盐(23.6mg,14%产率)。HRMS计算值C₂₆H₂₈N₄O₄460.4375，实测值(ESI,[M+H]⁺)，实测值461.2200。¹H NMR(400MHz,MeOD)δppm1.91-2.26(m,4H)2.33-2.50(m,1H)2.54-2.68(m,1H)3.24-3.43(m,8H)3.45-3.82(m,6H)3.88(s,3H)3.92-4.12(m,1H)4.32-4.48(m,1H)4.72-4.92(m,2H)7.04(d,J=9.03Hz,2H)7.14-7.33(m,1H)7.42-7.65(m,1H)7.69-7.88(m,1H)8.02(d,J=9.03Hz,2H)。HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA，以2mL/min，历经5分钟。)保留时间=2.572min。

实施例28:

2-{(S)-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3H-环庚三烯并咪唑-4-酮

将甲苯-4-磺酸7-氧代-环庚-1,3,5-三烯基酯(0.86mmol.236mg)、2-{(S)-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基}-乙脒(0.86mmol,350mg)和四丁基溴化铵(0.34mmol,110mg)加入30%NaOH(13.1mg,1mL)和甲苯(5mL)的溶液中，搅拌16小时。反应物用过量的饱和氯化铵处理，用10%异丙醇/氯仿稀释，用盐水洗涤，干燥，真空浓缩。通过SFC色谱在AS-H柱(60g/min,21x250mm)上手性拆分2-((3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)环庚三烯并[d]咪唑-4(3H)-酮(405mg)，用40%IPA/0.2%DEA/CO₂(v/v)洗脱，得到21mg纯物质(21mg,9%产率)。HRMS计算值C₂₇H₃₀N₄O₄474.5646，实测值(ESI,[M+H]⁺)，实测值475.2354.¹H NMR(400MHz,CDCl₃-d)δppm1.85(d,4H)2.00-2.15(m,1H)2.16-2.33(m,4H)2.39-2.52(m,1H)2.90-3.00(m,2H)3.02-3.12(m,1H)3.18-3.31(br.s,1H)3.38-3.55(m,8H)3.57-3.67(m,1H)3.91(s,3H)4.68-4.86(m,2H)6.83-6.91(m,1H)6.98-7.10(m,1H)7.25-7.34(m,3H)7.35-7.45(m,2H)7.72-7.86(m,6H)。HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA，以2mL/min，历经5分钟。)保留时间=2.920min。

实施例29:

2-{(R)-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3H-环庚三烯并咪唑-4-酮

标题化合物(18mg)按照实施例28的通用方法从2-{(R)-3-[4-(4-甲氧基-3-甲基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基}-乙脒(405mg,0.85mmol)开始制备。HRMS计算值C₂₇H₃₀N₄O₄474.5646，实测值(ESI,[M+H]⁺)，实测值475.2345.¹H NMR(400MHz,CDCl₃-d)δppm1.74-2.11(m,4H)2.22-2.44(m,5H)2.57(d,J=8.03Hz,1H)3.09(d,J=6.53Hz,3H)3.28-3.40(m,1H)3.50(t,J=8.28Hz,2H)3.62-3.83(m,1H)3.89-3.97(m,3H)4.82(br.s,2H)6.87(d,J=8.53Hz,1H)7.00-7.11(m,1H)7.26-7.36(m,5H)7.38-7.47(m,1H)7.72-7.86(m,3H)HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA，以2mL/min，历经5分钟。)保留时间=2.874min。

实施例30:

2-{(S)-3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3H-环庚三烯并咪唑-4-酮

通过SFC色谱在AS-H柱(60g/min,21x250mm)上手性拆分2-((3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)环庚三烯并[d]咪唑-4(3H)-酮(300mg,0.65mmol)，用40%IPA/0.2%DEA/CO₂(v/v)洗脱，得到35mg纯物质。HRMS计算值C₂₆H₂₈N₄O₄460.5375，实测值(ESI,[M+H]⁺)461.2195.¹H NMR(400MHz,MeOD)1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm1.17-1.39(br.s,2H)1.41-1.50(m,1H)1.63-1.73(m,1H)1.76-1.96(br.s,4H)2.06-2.19(m,1H)2.23-2.35(m,1H)2.42-2.55(m,1H)2.93-3.03(m,2H)3.06-3.15(m,1H)3.22-3.32(m,1H)3.41-3.55(m,2H)3.60-3.70(m,1H)3.89(s,3H)4.76-4.89(m,2H)6.95(d,J=9.03Hz,2H)7.02-7.11(m,1H)7.28(s,2H)7.32-7.40(m,1H)7.40-7.50(m,1H)7.78(d,J=10.54Hz,1H)7.94(d,J=8.53Hz,2H)，分析型RP-HPLC(Novapak150X3.9mm C18柱:流动相：10-90%乙腈/水，含有0.1%TFA，以2mL/min，历经5分钟。)保留时间=2.638min。

实施例31:

2-{(R)-3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基甲基}-3H-环庚三烯并咪唑-4-酮

通过SFC色谱在AS-H柱(60g/min,21x250mm)上手性拆分2-((3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)甲基)环庚三烯并[d]咪唑-4(3H)-酮(300mg)，用40%IPA/0.2%DEA/CO₂(v/v)洗脱得到35mg纯物质。HRMS计算值C₂₆H₂₈N₄O₄460.5375，实测值(ESI,[M+H]⁺)461.2181.¹H NMR(400MHz,MeOD)1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm0.81-0.95(m,1H)1.18-1.35(m,2H)1.78-1.93(m,4H)2.13(dd,J=11.80,7.28Hz,1H)2.22-2.34(m,1H)2.49(d,J=3.51Hz,1H)2.91-3.04(br.s,2H)3.10(d,J=10.54Hz,1H)3.21-3.31(m,1H)3.40-3.55(m,3H)3.65(t,J=8.78Hz,1H)3.89(s,3H)4.76-4.91(m,2H)6.95(d,J=9.03Hz,2H)7.06(dd,J=10.54,8.53Hz,1H)7.34-7.49(m,2H)7.78(d,J=11.04Hz,1H)7.94(d,J=8.53Hz,2H)。分析型RP-HPLC保留时间=4.55min

实施例32:

N-(5,6-二氢噻唑并[2,3-c][1,2,4]三唑-3-基)-2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酰胺

将500mg的76.5%纯度的2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酸(382mg,1.061mmol)和5,6-二氢噻唑并[2,3-c][1,2,4]三唑-3-胺氢溴酸盐(237mg,1.061mmol)的混合物在二异丙基乙胺(0.741mL,549mg,4.25mmol)和二氯甲烷(10mL)中搅拌，随后加入HATU试剂(444mg,1.161mmol)。在室温搅拌反应45小时。通过过滤除去少量的灰白色固体。滤液通过硅胶柱用0-15%、随后15%-30%、接着30%的甲醇/二氯甲烷洗脱。含有污染的产物的流分被浓缩，并通过第二个硅胶柱用5%-12%甲醇/二氯甲烷梯度、随后12%甲醇/二氯甲烷洗脱，得到标题化合物(177mg)，为白色固体。计算分子量C₂₃H₂₈N₆O₄S=484.57。HR-MS[m/z,(M+H)⁺]=485.1956。HPLC保留时间=2.73分钟(Agilent1100HPLC系统；3.0x100nm3um C18柱；流速为1.0mL/min；梯度为5-95%乙腈/水，含有0.1%甲酸，历经10分钟)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm11.06(brs,1H),7.94(d,J=9.09Hz,2H),7.03(d,J=8.59Hz,2H),3.92-4.21(m,6H),3.83(s,3H),3.39-3.51(m,1H),3.21-3.37(m,3H),2.99(d,J=13.14Hz,1H),2.64-2.84(m,2H),2.28-2.42(m,1H),2.03-2.18(m,1H),1.85-2.02(m,1H),1.65-1.78(m,2H),1.44-1.60(m,2H)。

实施例33(峰1)和实施例34(峰2)：

N-(5,6-二氢噻唑并[2,3-c][1,2,4]三唑-3-基)-2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酰胺(166mg,0.343mmol)通过SCF柱(70mL/min流速)用60%CO₂和40%改性剂(由70%二氯甲烷/乙醇和0.2%二乙胺组成)洗脱，得到两个对映异构体富集的峰：N-(5,6-二氢噻唑并[2,3-c][1,2,4]三唑-3-基)-2-((S)-3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酰胺，和N-(5,6-二氢噻唑并[2,3-c][1,2,4]三唑-3-基)-2-((R)-3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酰胺。

峰1(54.5mg)SFC保留时间=3.87分钟(仪器：sfc_a-250；柱：Whelko(R,R)；流动相：40%(70%DCM/30%EtOH)0.2%DEA)。

峰2(60mg)SFC保留时间=6.85分钟(仪器：sfc_a-250；柱：Whelko(R,R)；流动相：40%(70%DCM/30%EtOH)0.2%DEA)。

实施例35:

N-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-基)-2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酰胺

按照实施例32的通用方法，从[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶-3-胺(101mg,0.472mmol)制备标题化合物(115mg)。反应在室温下进行1小时，随后在50℃进行5.5小时，接着在室温进行62小时，然后进行后处理和纯化。计算分子量C₂₅H₂₈N₆O₄=476.53。HR-MS[m/z,(M+H)⁺]=477.2269。HPLC保留时间=2.70分钟(Agilent1100HPLC系统；3.0x100nm3um C18柱；流速为1.0mL/min；梯度为5-95%乙腈/水，含有0.1%甲酸，历经10分钟)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm11.06(br s,1H),8.06(d,J=7.07Hz,1H),7.94(d,J=8.59Hz,2H),7.75(d,J=9.09Hz,1H),7.37-7.43(m,1H),6.98-7.07(m,3H),4.16-4.29(m,2H),3.84(s,3H),3.37-3.50(m,3H),3.26-3.30(m,2H),2.95-3.06(m,1H),2.75-2.81(m,1H),2.31-2.43(m,1H),2.07–2.20(m,1H),1.93-2.04(m,1H),1.63-1.77(m,2H),1.45-1.60(m,2H)。

实施例36:

2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)-N-(1-甲基-1H-四唑-5-基)乙酰胺

按照实施例32的通用方法，从1-甲基-1H-四唑-5-胺(12.7mg,0.128mmol)制备标题化合物(21mg)。反应在室温下进行1小时，随后在50℃进行。计算分子量C₂₁H₂₇N₇O₄=441.48。HR-MS[m/z,(M+H)⁺]=442.2209。HPLC保留时间=2.73分钟(Agilent1100HPLC系统；3.0x100nm3umC18柱；流速为1.0mL/min；梯度为5-95%乙腈/水，含有0.1%甲酸，历经10分钟)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm7.91(d,J=8.08Hz,2H),6.93(d,J=8.08Hz,2H),4.09-4.57(m,2H),3.75-4.06(m,6H),3.40-3.73(m,3H),3.03-3.31(m,2H),2.75-3.02(m,2H),2.38-2.61(m,1H),2.03-2.36(m,2H),1.66-1.95(m,4H)。

实施例37:

N-(3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-d]哒嗪-5-基)-2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酰胺

按照实施例32的通用方法，从3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-d]哒嗪-5-胺氢溴酸盐(186mg,0.521mmol)制备标题化合物(98.7mg)。计算分子量C₂₆H₃₁N₅O₅=493.55。HR-MS[m/z,(M+H)⁺]=494.2390。HPLC保留时间=2.82分钟(Agilent1100HPLC系统；3.0x100nm3um C18柱；流速为1.0mL/min；梯度为5-95%乙腈/水，含有0.1%甲酸，历经10分钟)。¹HNMR(400MHz,氯仿-d)δppm8.5-8.8(br s,1H),7.88-7.98(m,2H),6.89-7.00(m,2H),4.28-4.39(m,2H),4.19-4.28(m,2H),3.88(s,3H),3.57-3.66(m,1H),3.42-3.58(m,2H),3.19-3.32(m,1H),3.08-3.19(m,1H),2.93-3.06(m,2H),2.59-2.72(m,2H),2.46-2.59(m,1H),2.22-2.37(m,1H),2.10-2.22(m,1H),1.99-2.10(m,2H),1.78-1.97(m,4H)。

实施例38:

N-(异噁唑并[5,4-b]吡啶-3-基)-2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酰胺

按照实施例32的通用方法，从异噁唑并[5,4-b]吡啶-3-胺(100mg,0.740mmol)制备标题化合物(23.9mg)。反应在室温下进行1小时，在60℃进行72小时，随后进行后处理和纯化。计算分子量C₂₅H₂₇N₅O₅=477.51。HR-MS[m/z,(M+H)⁺]=478.2094。HPLC保留时间=2.68分钟(Agilent1100HPLC系统；3.0x100nm3um C18柱；流速为1.0mL/min；梯度为5-95%乙腈/水，含有0.1%甲酸铵，历经10分钟)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm12.11-12.25(br.s,1H),8.18(dd,J=7.07,2.53Hz,1H),7.96(d,J=8.59Hz,2H),7.62-7.67(m,1H),7.04(d,J=8.59Hz,2H),6.36(t,J=6.82Hz,1H),4.73-4.85(m,2H),3.84(s,3H),3.38-3.54(m,3H),3.29-3.31(m,2H),2.98-3.05(m,1H),2.77-2.82(m,1H),2.35-2.44(m,1H),2.13-2.24(m,1H),1.97-2.05(m,1H),1.68-1.79(m,2H),1.47-1.63(m,2H)。

生物学试验和数据

测定化合物对TNKS酶活性抑制的生化试验

使用Invitrogen公司的Gateway技术，将人端锚聚合酶1PARP催化结构域TNKS1P克隆到pDONR221载体。该进入克隆接着被亚克隆到目的载体pDEST20，获得N-末端谷胱甘肽S-转移酶(GST)-标记的融合蛋白。随后，GST-TNKS1P在Sf21细胞中使用Invitrogen杆状病毒表达系统表达(Invitrogen-Bac-to-

杆状病毒表达系统,版本D)。蛋白质通过GSTrap柱(GE Healthcare)纯化。将N-末端GST-标记的端锚聚合酶2蛋白质PARP结构域TNKS2P以类似方式克隆、表达和纯化。人PARP1(目录号4668-100-01)和活化的DNA(目录号4671-096-06)购自Trevigen公司。PARP2(目录号ALX-201-064-C020)购自Alexis Biochemical公司。

通过液相色谱-质谱(LC/MS)检测烟酰胺作为读数来测定TNKS1/2或PARP1/2的自发聚ADP-核糖化(autoparsylation)活性。化合物抑制TNKS和PARP的自发聚ADP-核糖化的活性通过IC₅₀测定值来评价。在化合物筛选试验中，反应包括5μL的以8个点系列稀释的化合物(其浓度为0.0086-18.75μM)、20nM纯化的酶和250μM的在1x试验缓冲液中的β-NAD⁺。在室温孵育60分钟后，将反应通过加入10μL的5x猝灭溶液(20%甲酸和500nM[d⁴]-烟酰胺的水溶液)猝灭。对于背景对照孔，加入每孔10μL的5x猝灭溶液，随后加入β-NAD⁺。抑制%如下计算：(对照–样品)/(对照–背景)*100。“对照”是8个没有化合物的孔的平均值；“背景”是8个在反应起始前与5x猝灭溶液混合的孔的测定平均值。

实施例1-38在一个或多个上述的酶反应中检测，其结果显示于表1。

表1

测定化合物对Wnt信号传导活性的抑制的细胞报道基因试验

在HEK293细胞中使用Wnt-应答的Super-TOpFlash(STF)荧光素酶报道基因试验测定化合物在抑制Wnt配体诱导的信号传导中的活性。在试验的第1天，将细胞以8000细胞/孔培养在384孔板的含5%胎牛血清(FBS)的25μl培养基中。第2天，将20μL产自小鼠L细胞的Wnt3A条件培养基(CM)加入细胞中以诱导Wnt信号传导，随后加入每孔5μL的10个点的化合物系列稀释液。在第3天，按照生产商的方法(Promega,E2620)使用Bright-Glo^TM荧光素酶试验系统测定荧光素酶活性。抑制%计算如下：(最大的Wnt诱导的信号传导–样品)/(最大的Wnt诱导的信号传导–背景)*100。“最大的Wnt诱导的信号传导”是由不含化合物的20%Wnt3A CM诱导的STF信号水平；“背景”是不加入Wnt3A CM或化合物的STF信号水平。

测定化合物对稳定Axin2蛋白质的效果的细胞ELISA试验

在结肠直肠细胞系SW480中使用夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)试验测定化合物对稳定Axin2蛋白质的活性。将每孔30,000个SW480细胞接种在96孔板中，孵育过夜，随后进行化合物处理。将细胞用6个点稀释的化合物处理24小时，稀释浓度起始于10μM。接着将细胞用100μL冷的磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤，在125μl添加了蛋白酶抑制剂(Roche,11836170)和磷酸酶抑制剂(Sigma,P2850,P5726)的冷的1X裂解缓冲液(Cell Signaling Technology,9803)中裂解。对于ELISA试验，将抗Axin-2捕捉抗体(Strategic Diagnostics)在碳酸盐涂覆缓冲液pH9.2(Sigma,C3041-50CAP)中稀释为浓度1μg/ml(1:1000)。接着在4℃用每孔100μl稀释的抗Axin-2捕捉抗体涂覆96孔ELISA板(Thermo Electron Corp.,MicroLite1平底板#7571)过夜。随后将板子用300μl/孔的洗涤溶液PBST20(PBS+0.05%Tween)洗涤3次，用300μl/孔的1%BSA/PBS(BSA,Millipore Probumin#82-045-1)在室温封闭1.5小时，同时轻柔振荡。封闭之后，将板子用300μl/孔的洗涤溶液洗涤3次。接着向每孔加入100μL制备的SW480细胞裂解液，在室温下孵育2小时，同时轻柔振荡。洗涤后，向每孔加入100μL生物素化的抗-Axin2抗体(CST,2151)，在室温下孵育2小时。然后加入每孔100μL的在1%BSA/PBS中1:200稀释的链霉抗生物素-HRP(R&D systems,DY998)，并在室温下在暗处孵育30分钟。使用Chemiluminescence(Pierce SuperSignal ELISA Femto#3704)检测信号，在PerkinElmer Wallac1420读板器上测定。

测定化合物抑制癌细胞生长的细胞增殖试验

将非小细胞肺癌ABC-1细胞以每孔5000个细胞接种在96孔板上，用8个点系列的化合物稀释液处理，使用10μM作为起始的最高浓度。在化合物处理3天后，使用CellTiter-Glo试验(Promega,G7570)测定活细胞。按照生产商的方法进行试验。使用Excel XLfit4进行生长曲线的绘制，并计算IC₅₀值。化合物处理后的生长%计算如下：(处理的样品/(DMSO对照)*100。IC₅₀值为细胞生长被抑制50%时的化合物浓度。

实施例1-38在一个或多个上述的细胞试验中检测，其结果显示于表2。

表2

Claims

1.式(I)化合物，

其中：

R¹是R²或R²-NHC(O)-；

或者

R²是具有3或4个选自N、O和S的杂原子的8-10元二环杂芳基，

(a)卤素、

(b)氧代、

(c)OH、

(d)CN、

(e)NO₂、

(f)任选地被一个羟基或一个C_1-6烷氧基取代的C_1-6烷基、

(g)C_1-6烷氧基、

(h)C_1-6卤代烷基、

(i)C(O)R^a、

(j)COOR^a,

(k)NR^aR^b、

(l)NHC(O)R^a和

(m)C(O)NR^aR^b；

或者

R^a是H或C_1-6烷基；

R^b是H或C_1-6烷基；且

n是1或2；或其可药用盐。

2.具有下式的如权利要求1所述的化合物；或其可药用盐。

3.如权利要求1或2所述的化合物，其中R³是H；或其可药用盐。

4.如权利要求1-3中任一项所述的化合物，其中R⁴是任选被取代的苯基；或其可药用盐。

5.如权利要求4所述的化合物，其中R⁴是被取代的苯基；或其可药用盐。

6.如权利要求5所述的化合物，其中R⁴是苯基，其被一个或两个各自独立地选自以下的取代基取代：卤素、C_1-6烷基和C_1-6烷氧基；或其可药用盐。

7.如权利要求1或2所述的化合物，其中R³和R⁴与它们所连接的原子一起形成任选被取代的茚满-1-酮；或其可药用盐。

8.如权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中n是1；或其可药用盐。

9.如权利要求1-7中任一项所述的化合物，其中n是2；或其可药用盐。

10.如权利要求1-9中任一项所述的化合物，其中R¹是R²；或其可药用盐。

11.如权利要求1-10中任一项所述的化合物，其中R²是任选被取代的苯基；或其可药用盐。

12.如权利要求1-10中任一项所述的化合物，其中R2是任选被取代的5或6元杂芳基；或其可药用盐。

13.如权利要求1-10中任一项所述的化合物，其中R²是任选被取代的8-10元二环杂芳基；或其可药用盐。

14.如权利要求1-10中任一项所述的化合物，其中R²是

其中，(a)-(l)各自任选地被一个或两个各自独立地选自以下的取代基取代：卤素、OH、CN、NO₂、C_1-6烷基、C_1-6烷氧基、C_1-6卤代烷基、C(O)R^a、COOR^a、NR^aR^b、NHC(O)R^a和C(O)NR^aR^b；或其可药用盐。

15.如权利要求1所述的化合物，其是：

2-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-2'-氧代-[1,3']联哌啶-1'-基甲基]-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮；

2-[(S)-4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-2'-氧代-[1,3']联哌啶-1'-基甲基]-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮；

2-[(R)-4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-2'-氧代-[1,3']联哌啶-1'-基甲基]-3,5,7,8-四氢-吡喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮；

N-(3,4-二氢-2H-吡喃并[2,3-d]哒嗪-5-基)-2-(3-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-2-氧代吡咯烷-1-基)乙酰胺；或

N-异噁唑并[5,4-b]吡啶-3-基-2-{3-[4-(4-甲氧基-苯甲酰基)-哌啶-1-基]-2-氧代-吡咯烷-1-基}-乙酰胺；

或其可药用盐。

16.药物组合物，其包含如权利要求1-15中任一项所述的化合物或其可药用盐和可药用赋形剂。

17.治疗癌症的方法，其包括向有需要的个体施用有效量的如权利要求1-15中任一项所述的化合物或其可药用盐。