CN103784825A

CN103784825A - 一种穿虎痛风合剂

Info

Publication number: CN103784825A
Application number: CN201410068166.7A
Authority: CN
Inventors: 王颜刚; 苗志敏; 李恩泽; 王鹏
Original assignee: Affiliated Hospital of Medical College Qingdao University
Current assignee: Affiliated Hospital of Medical College Qingdao University
Priority date: 2014-02-27
Filing date: 2014-02-27
Publication date: 2014-05-14

Abstract

本发明属于药物制备技术领域，涉及一种穿虎痛风合剂，各药物组份为穿山龙15g，虎杖15g，忍冬藤30g，防风15g，威灵仙15g，土茯苓15g，川牛膝15g，川芎15g，萆薢12g，木瓜15g，海藻酸钠1g，甘草6g，先将以上十二种药物按1：10-20的重量百分比加水煎煮2次，第一次煎煮2小时，第二次煎煮1小时，合并过滤煎液再进行过滤得清滤液，再将清滤液浓缩至1000ml，然后经灭菌的穿虎通风合剂；制成的穿虎痛风合剂服用简单，药物组分易得，制备方法易控，疗效明显，无副作用，安全可靠，加工成本低。

Description

一种穿虎痛风合剂

技术领域：

本发明属于药物制备技术领域，涉及一种中药复方式穿虎通风合剂，特别是一种治疗急性痛风性关节炎的穿虎痛风合剂。

背景技术：

目前，随着社会生活水平的不断提高以及生活节奏的迅速加快，导致痛风患者越来越多，特别是在沿海地区的饮食结构条件下的痛风者随处可见。痛风病是尿酸在人体血液中浓度过高，人体高尿酸症状引发的，尿酸过高主要是由于人体机体嘌呤代谢紊乱而导致的，其次是机体内脂肪、盐、糖的代谢紊乱，引起体内尿酸代谢失去平衡，而导致尿酸过高和痛风病的出现，并在软组织如关节膜或肌腱里形成针状结晶，导致身体免疫系统过度反应而造成痛苦的炎症；痛风给人体造成的影响主要包括脏器功能的损害、关节残疾、疼痛和诱发肾结石；痛风还会诱发脑血管病变，脑血管病变是由于动脉硬化导致的一种疾病，主要发生在脑部，会出现头痛、头昏、眼花、手脚发麻或痲痹等症状，严重的还会导致人体失去意识，甚至死亡；目前治疗痛风的常见方法一是从饮食上治疗，在治疗过程中是不能饮酒的，一旦血中酒精浓度高达200mg/dl,血中乳酸会随着乙醇的氧化过程而增加，令肾脏的尿酸排泄受阻并使尿酸增加，所以像动物的肝脏和鱼虾类，对于高胆固醇类的食物是不能多食的；二是从根源上治疗，体内的嘌呤物质饱和超标，肾脏不能正常代谢排出体外，使嘌呤物质以钠盐的形式沉积在关节处，从而引起关节肥大疼痛，迅速降低并清除血液中的氧自由基，减少尿酸结晶的沉积，改善关节组织代谢，使受损或病变组织迅速恢复功能；但大多数中医保守治疗药效慢，效果不佳，用西药治疗副作用较大，易引发人体机能的损伤，所以急需一种疗效快、药效明确、安全性高的药物应用于患者。

发明内容：

本发明的目的在于克服现有技术存在的缺点，寻求设计提供一种治疗急性痛风性关节炎的中药复方式穿虎痛风合剂，该穿虎痛风合剂具有祛风除湿、活血化瘀、通络止痛的作用，用于治疗急性痛风性关节炎，改善血管内皮细胞功能，减轻胰岛素抵抗，调节脂代谢和降低血尿酸。

为了实现上述目的，本发明涉及的穿虎痛风合剂的各药物组份为穿山龙15g，虎杖15g，忍冬藤30g，防风15g，威灵仙15g，土茯苓15g，川牛膝15g，川芎15g，萆薢12g，木瓜15g，海藻酸钠1g，甘草6g，先将以上十二种药物按1：10-20的重量百分比加水煎煮2次，第一次煎煮2小时，第二次煎煮1小时，合并过滤煎液再进行过滤得清滤液，再将清滤液浓缩至1000ml，然后经灭菌的穿虎通风合剂；本品为棕褐色液体，味苦；用于治疗急性痛风关节炎时，口服，一次125ml，一日2次。

本发明与现有技术相比，所制成的穿虎痛风合剂服用简单，药物组分易得，制备方法易控，疗效明显，无副作用，安全可靠，加工成本低。

附图说明：

图1为本发明涉及的痛风合剂及穿虎痛风合剂对尿酸盐刺激血管内皮细胞IL-1β的影响示意图。

图2为本发明涉及的穿虎痛风合剂对尿酸盐刺激血管内皮细胞TNF-α的影响示意图。

图3为本发明涉及的3T3-L1前体脂肪细胞未分化示意图。

图4为本发明涉及的3T3-L1前体脂肪细胞分化第6天示意图。

图5为本发明涉及的成熟脂肪细胞示意图。

图6为本发明涉及的TFC油红O染色后成熟脂肪细胞示意图。

图7为本发明涉及的穿山龙、罗格列酮及胰岛素对成熟脂肪细胞糖摄取的影响示意图。

具体实施方式：

下面通过实施例并结合附图作进一步说明。

实施例1：

本实施例涉及的穿虎痛风合剂的各药物组份为穿山龙15g，虎杖15g，忍冬藤30g，防风15g，威灵仙15g，土茯苓15g，川牛膝15g，川芎15g，萆薢12g，木瓜15g，海藻酸钠1g，甘草6g，先将以上十二种药物按1：10-20的重量百分比加水煎煮2次，第一次煎煮2小时，第二次煎煮1小时，合并过滤煎液再进行过滤得清滤液，再将清滤液浓缩至1000ml，然后经灭菌的穿虎通风合剂；本品为棕褐色液体，味苦；用于治疗急性痛风关节炎时，口服，一次125ml，一日2次。

实施例2：

本实施例使用实施例1的药物对治疗痛风性关节炎进行细胞实验，具体步骤：

（1）含药血清的制备：取实施例1的药物制成含生药0.567g/ml、0.635g/ml的药液后浓缩成高浓度（人鼠体表换算后10倍浓度），大鼠用高浓度痛风合剂及优化方灌胃，早晚各1次，共7天，末次灌胃后1小时处死大鼠，3000r/min离心10min,共2次，分离血清，直径0.22μm过滤器过滤，56℃，30min灭活，-20℃保存，用培养基分别将含药血清稀释成高、中、低（80%、40%、10%倍）浓度待用；

（2）尿酸盐溶液的制备：194mL蒸馏水中加6mLNaOH(1mmol/L)，煮沸后加1g尿酸，使尿酸钠完全溶解，搅拌，自然降温，用1mmol/LHCI调PH至7.2，搅拌冷却，贮存于4℃冰箱中24h，弃上清液，用滤纸将沉淀物水份吸干，放入干燥箱，70℃烘2h，取出刮下粉末，研钵内研成细末，用孔径250μm的金属筛过筛，装瓶备用；取出少许尿酸钠结晶于干燥箱180℃高温3h，然后用95%酒精洗涤离心3000r/min,3次，室温自然干燥，将制好的尿酸盐4mg,加不含血清RPMI-164040ml,pH值7.2～7.4mol/L,配制100μg/ml的尿酸溶液；

（3）细胞的培养：液氮中取出HUEVC，放入37℃水浴箱，待融开后移入15ml离心管，加入4ml RPMI-1640培养液，1000r/min,5min,弃上清液，加入10%的完全培养基2ml吹打均匀，移入预先加入3ml完全培养基的培养瓶中，放入37℃，5%CO2培养箱；每24小时换液1次，待细胞生长至80%-90%融合，经胰酶消化,含10%胎牛血清RPMI-1640培养液3ml中和,轻轻吹打几十下，吸入15ml离心管离心,去上清液,加10%胎牛血清RPMI-1640培养液6ml,打匀成悬液，移入50ml细胞培养瓶中传代培养；

（4）实验分组和干预：细胞接板厚分为12组，正常对照组、模型组、痛风合剂组、穿虎痛风合剂组，每组根据加入干预的血清浓度分为高、中、低三个剂量组；待细胞融合达80%以上，加入3ml胰酶，将细胞消化下后，加入4ml完全培养基，1000r/min,10min,弃上清液，用10%的培养基将细胞稀释成1×10⁵/ml,接种于48孔板（400μl），待细胞融合后，吸取上清液，对照组加入1640培养液和高、中、低浓度的80%、40%、10%正常大鼠血清、模型组加入100μg/ml尿酸盐溶液和高、中、低浓度的80%、40%、10%正常大鼠血清，痛风合剂组加入100μg/ml尿酸盐溶液和高、中、低浓度的80%、40%、10%含药血清、痛风合剂组加入100μg/ml尿酸盐溶液和高、中、低浓度的80%、40%、10%含药血清，共培养48h；

（5）MTT实验

共培养48h后，吸出上清液，在每孔中加入0.5mg/mlMTT200μl，孵育4h后弃上清液，加入200μlDMSO,在摇床上低速震荡10min后取出，在多功能分析仪485nm处测OD值；

（6）TNF-α和IL-1β的检测(严格按照说明书进行检测)

吸出的上清液，3000r/min,15min后，提取上清液待测，在TNF-α和IL-1β酶标包被板上均先加样品稀释液40μL，然后再加待测样品10μL，轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟；弃去液体，甩干，洗板；每孔加入酶标试剂50μL，轻轻晃动混匀，37℃温育30分钟后洗板；每孔先加入显色剂A50μL，再加入显色剂B50μL，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟；取出酶标板，每孔加终止液50μL，终止反应（此时蓝色立转黄色）；在450nm波长下测量各孔的吸光度值。每个孔中TNF-α、IL-1β吸光度分别除以相应的孔中MTT结果的OD值，即为最终的TNF-α、IL-1β水平。

（7）MTT实验结果：高、中、低浓度模型组中细胞的吸光度显著低于相应浓度的正常对照组（P<0.05），各浓度组痛风合剂及优化方各组中，痛风合剂低浓度组细胞的吸光度高于模型组，存在差异（P<0.05），见表1；其痛风合剂及优化方对尿酸盐刺激血管内皮细胞TNF-α和IL-1β的影响：高、中、低浓度模型组中的TNF-α和IL-1β水平显著高于相应浓度的对照组（P<0.05）,痛风合剂及优化方各组中TNF-α水平和模型组相比无显著差异（P>0.05）,穿虎痛风合剂高、中浓度组中IL-1β显著低于模型组（P<0.05），见表2，图1，图2；

结论：穿虎痛风合剂含药血清抑制IL-1β的作用是减轻尿酸盐诱导的人血管内皮细胞炎症损伤的机制之一。

实施例3：

细胞的诱导：3T3-L1前体脂肪细胞发生融合和接触抑制的时候加以促分化液可以完成前脂肪细胞向脂肪细胞的转化，3T3-L1前脂肪细胞在分化培养基中诱导分化至第2天细胞体积开始变丈，局部出现小膨出，随着时间的延长，膨出越来越大，膨出数目也逐渐增多，诱导分化第4天时，细胞变大、变圊.胞质内可以观察到脂质小滴，并随着分化的进展，胞质内的脂漓迅速增多，大小不等且多数在，脂滴分弁于核周围，形成“戒环样”结构；分化的12—14天大部分分化的脂肪细胞出现了小脂滴大量融合成大脂滴的情况，细胞核被推向细胞的边缘，成为成熟的脂肪细胞(图3，图4)；

细胞的鉴定：诱导分化后细胞，倒置显微镜下所见大量变圆并有脂滴样物质形成的细胞，使用油红0染色的方法可以使分化的脂肪细胞内的脂质特异性的着色，可见被染成亮红色的脂肪滴，而未分化的细胞和细胞内非脂质聚集的部分不能着色(图5，图6)；

糖摄取：用药干预后，穿山龙水提物处理组(低浓度、中浓度、高浓度)糖摄取率有逐渐增高的趋势，组间比较无明显差异，且均明显高于模型组(P均<005)，与罗格列酮组比较差异无显著性(P>005)，同时在胰岛素的作用下，并组的糖摄取率明显增加（见图7）；

结论：1.穿山龙水提物能够抑制成熟脂肪细胞细胞核内活化的核转录因子NF-κB的表达；2.穿山龙水提物能够促进成熟脂肪细胞的糖摄取；3.穿山龙具有改善胰岛素抵抗的作用，其机制可能是通过抑制脂肪细胞中核转录因子NF-κB的活化，进而抑制炎症反应来实现的。

表1：痛风合剂及穿虎痛风合剂对尿酸盐刺激血管内皮细胞MTT的影响（x±s,n）

与对照组比较，^△P<0.05；与模型组比较^▲P<0.05

表2：痛风合剂及穿虎痛风合剂对尿酸盐刺激血管内皮细胞TNF-α和IL-1β的

影响

（转化成lnX，用X±S,ng/L）

与对照组比较，^△P<0.05；与模型组比较^▲P<0.05。

Claims

1.一种穿虎痛风合剂，其特征在于涉及的穿虎痛风合剂的各药物组份为穿山龙15g，虎杖15g，忍冬藤30g，防风15g，威灵仙15g，土茯苓15g，川牛膝15g，川芎15g，萆薢12g，木瓜15g，海藻酸钠1g，甘草6g，先将以上十二种药物按1：10-20的重量百分比加水煎煮2次，第一次煎煮2小时，第二次煎煮1小时，合并过滤煎液再进行过滤得清滤液，再将清滤液浓缩至1000ml，然后经灭菌的穿虎通风合剂；本品为棕褐色液体，味苦；用于治疗急性痛风关节炎时，口服，一次125ml，一日2次。