CN103782955A - 一种sd大鼠营养性肥胖模型的建立方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法,将若干只SD大鼠随机平均分为对照组和模型组,对照组以普通饲料足量喂养;模型组以循环间隔喂食普通饲料和高脂饲料的方式足量喂养。最终模型组大鼠的致肥率达到了82%以上,建立了比较理想的营养性肥胖模型标准,支持造模成功。
Description
技术领域
本发明涉及动物模型的建立方法,特别是指一种SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法。
背景技术
肥胖是一种典型的环境因素与遗传因素互相作用而导致能量摄入与消耗失去平衡所造成的慢性疾病,已成为危害人类健康的公共卫生问题。因此,建立适合实验所需的肥胖模型是进行肥胖研究的基础。肥胖症动物模型有营养性肥胖、遗传性肥胖、下丘脑损伤性肥胖、双侧卵巢切除性肥胖和转基因性肥胖。目前,青少年肥胖越来越多,多数人产生的肥胖是由食物所诱导的营养性肥胖,因此建立SD大鼠营养性肥胖模型对研究青少年减肥有重要意义。以往建立SD大鼠营养性肥胖模型的方法是每天给予大鼠足量的高脂饲料,但是许多学者发现其致肥效果并不显著,甚至模型组大鼠不如吃普通饲料的对照组大鼠长的肥壮。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提出一种SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法,解决现有的模型组大鼠致肥效果不理想的技术问题。
基于上述目的本发明提供的SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法以循环喂养方式建立大鼠营养性肥胖模型。方法是将若干只SD大鼠随机平均分为2组,对照组以普通饲料足量喂养;模型组以循环喂食普通饲料和高脂饲料的方式喂养。可选的循环喂养方式为第一天普通饲料、第二天和第三天高脂饲料的方式循环足量喂养,三天一个循环;或者第一天和第三天高脂饲料,第二天和第四天普通饲料喂养的方式循环喂养。该循环喂养方式采用的是普通饲料与高脂饲料循环喂养,避免了大鼠因每天食用富含高油脂、高胆固醇的饲料而引起的食欲减退。
构建营养性肥胖大鼠模型的一个关键点在于高脂饲料的配方,目前国内动物致肥主要以高脂饲料为主。普通饲料较硬,油脂与营养成分适中,一般用来喂养对照组大鼠。高脂饲料是以普通饲料为主,另外再添加猪油和其他营养成分用来喂养模型组大鼠。一般建立肥胖模型所使用的是含重量比15%或12%猪油的高脂饲料,试图使用高油脂含量增加致肥效率,一般认为不应选择含油脂重量比低于10%的饲料。本发明将猪油重量比例调整为6%~8%,优选8%,取得了意想不到的高致肥率。同时,本发明对高脂饲料中的胆固醇含量也做了调整,以重量比0-2%比例为宜,优选2%。比例过高影响饲料味道也增加饲料的成本。本发明将高脂饲料里普通饲料的重量比例调整为60%-70%,这样既保证了高脂饲料有一定的硬度,利于大鼠磨牙。因此,改良后高脂饲料配方为:普通饲料60%-70%、猪油6%-8%、全脂奶粉5%-8%、蛋黄粉7%-10%、蔗糖5%、胆固醇0-2%,以上均为重量比例,其他成分如花生和食盐可视情况酌量增减。
本发明在模型组鼠笼中放置了木筷,供大鼠在上面啃咬。SD大鼠是啮齿目动物,有磨牙的习性。在幼年时期由于牙齿长得过快、过长,会影响进食,因此它需要经常用坚硬的物品磨牙,例如喜欢啃食坚硬的饲料和木头等。本文模型组大鼠食用的高脂饲料含油量较高、质地软达不到磨牙的效果,大鼠将饲料啃的很碎造成了高脂饲料大量浪费,实际摄食量又很少,满足不了营养需求。因此,放入木筷既满足了大鼠磨牙的习性,而且实际摄食量也有所提高,浪费饲料的现象也随之减少。
SD大鼠性成熟时间为生后第6-9周龄。本发明的造模时间为SD大鼠出生后第4周-12周龄,即从4周龄开始,分组饲养8周,经历了SD大鼠的幼年期和青年期。一般来说,从幼年大鼠开始致肥,时间较长、致肥率较低,因此通常研究者采用先从幼年喂普通饲料,到青年期再喂高脂饲料,这样致肥时间短,也节省了高脂饲料。本发明模型组提供的普通饲料和高脂饲料循环喂养方式和改良的高脂饲料配方使得从幼年期喂高脂饲料致肥大鼠也成为可能。
从上面所述可以看出,本发明提供的SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法,采用普通饲料和高脂饲料混合喂养的方式诱导SD大鼠营养性肥胖,效果明显。而改良后的高脂饲料配方油脂含量和硬度适中,模型组大鼠摄食量有明显增加,平均体重迅速增长。在模型组鼠笼中放置了木筷,不但满足了大鼠磨牙的习性,更重要的是大鼠的实际摄食量增加了。采用本发明提供的方法致肥率达到82%以上,能够得到理想的SD大鼠营养性肥胖模型,对进一步研究青少年营养性肥胖具有重要意义。
附图说明
图1-1为本发明一种SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法实施例1中SD大鼠体重变化线形图;
图1-2为本发明一种SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法实施例1中SD大鼠体重变化柱形图;
图2-1为本发明一种SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法实施例1中SD大鼠Lee’s指数变化线形图;
图2-2为本发明一种SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法实施例1中SD大鼠Lee’s指数变化柱形图;
图3为本发明一种SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法实施例1中SD大鼠血脂指标TC、TG、LDL-C的柱形图;
图4-1为本发明一种SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法实施例2中SD大鼠体重变化线形图;
图4-2为本发明一种SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法实施例2中SD大鼠体重变化柱形图;
图5-1为本发明一种SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法实施例2中SD大鼠Lee’s指数变化线形图;
图5-2为本发明一种SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法实施例2中SD大鼠Lee’s指数变化柱形图;
图6为本发明一种SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法实施例2中SD大鼠血脂指标TC、TG、LDL-C的柱形图;
图7为本发明一种SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法对比例1中SD大鼠体重变化线形图;
图8为本发明一种SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法对比例1中SD大鼠Lee’s指数变化线形图;
图9为本发明一种SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法对比例1中SD大鼠血脂指标TC、TG、LDL-C的柱形图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白,以下结合具体实施例,并参照附图,对本发明进一步详细说明。
实施例1
1 材料与方法
1.1 实验动物
实验采用雄性4周龄SD大鼠,动物等级SPF,体重70±5g,购自长沙天勤生物技术有限公司(许可证号SCXK湘2009-0012)。
1.2 动物饲料
SD大鼠食用的普通饲料由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供(许可证号为SCXK湘2009-0009)。普通饲料成分为小麦,玉米,麸皮,豆粕,鱼粉、麦芽糊精、酵母、草粉、预混料等,是喂养SD大鼠的常规成分。
1.3 实验仪器和试剂
实验仪器:TGL-16台式高速离心机(湖南星科科学仪器有限公司)、紫外分光光度计(UV-9200、北京瑞利分析仪器公司)、恒温水浴箱(天津艾维欧科技发展有限公司)。
实验试剂:总胆固醇(TC)试剂盒、甘油三酯(TG)试剂盒、低密度脂蛋白(LDL-C)试剂盒均购自北京北化康泰临床试剂有限公司。
1.4 实验方法
将4周龄的40只SD大鼠放置于室温23±3℃,相对湿度在50%-70%,通风良好的环境。每笼5只,照明时间12h。适应性普通饲料喂养3天后,将其随机分为2组。对照组20只,普通饲料每天足量喂养;模型组20只,以普通饲料和改良高脂饲料循环足量喂养,具体为第一天普通饲料、第二天和第三天高脂饲料,然后依此喂养方式循环喂养。全天自由饮食饮水。改良后的高脂饲料的配方与重量比为:普通饲料60%、猪油8%、全脂奶粉5%、花生8%、蛋黄粉10%、蔗糖5%、食盐2%、胆固醇2%。
两组大鼠经上述喂养8周(第12周龄)后,按照空腹条件下模型组体重超过对照组SD大鼠平均体重20%作为肥胖SD大鼠造模成功的标准,同时参照血脂指标。
1.5 观察指标
1.5.1 一般情况每日观察SD大鼠精神状态、食量、饮水量、活动、毛色光泽及大便情况,并详细记录。
1.5.2 体重、体长、Lee's指数的测定每两周测量一次SD大鼠体重和身长。体重用电子秤称量,体长用直尺测量(从鼻尖至肛门的长度),Lee’s指数按公式〔Lee’s=(体重)1/3×103/体长(cm)〕计算。Lee's指数是目前评价动物和人肥胖程度的有效指标。
1.5.3 血脂测定分组饲养8周后断尾取血。将所取血液用TGL-16台式高速离心机离心,提取血清放入-80℃冰箱保存,用紫外分光光度计检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)的含量。
1.6 统计方法
数据处理分析采用SPSS19.0统计软件,结果以均值和标准差(x±s)表示,统计分析采用t检验,P<0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 一般情况
造模期间,观察二组大鼠精神状态、食量、饮水量、活动、毛色光泽及大便情况。造模初期模型组大鼠饮水偏多,大便较软,臭味重。随实验进行,模型组除大便臭味仍重外,其余观察指标渐如对照组,但毛色偏黄,光泽度差。
2.2 分组饲养后对照组与模型组SD大鼠平均体重的比较
如图1-1、图1-2和表1所示:
表1:分组饲养0-8周对照组与模型组体重的比较(g)
★★P﹤0.01
分组饲养2周后,模型组大鼠平均体重高于对照组,但无显著性差异(P>0.05);分组饲养4-8周,模型组大鼠平均体重明显高于对照组,且有极显著差异(P<0.01)。
2.3 分组饲养0-8周对照组与模型组Lee′s指数的比较
如图2-1、图2-2和表2所示:
表2:分组饲养0-8周对照组与模型组Lee′s指数的比较
★P﹤0.05
分组饲养2-4周后,模型组大鼠Lee’s指数高于对照组,但无显著性差异(P>0.05);分组饲养6-8周后,模型组大鼠Lee’s指数明显高于对照组,且有显著性差异(P<0.05)。
2.4 分组饲养8周后对照组与模型组TC、TG、LDL-C值的比较
如图3-1、图3-2和表3所示:
表3:分组饲养8周后对照组与模型组TC、TG、LDL-C值的比较(mmol/L)
★P﹤0.05
分组饲养8周后模型组大鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL-C)水平明显高于对照组,具有显著性差异(P<0.05)。
2.5 计算模型组SD大鼠致肥率
按照实验设计空腹条件下模型组超过对照组SD大鼠平均体重20%作为肥胖SD大鼠造模成功的标准。在分组饲养8周后,模型组20只SD大鼠中有17只大鼠的平均体重(496.32±13.04)超过对照组平均体重(306.98±10.78g)20%,确定这17只大鼠达到营养性肥胖模型标准,致肥率为85%。同时两组的血脂三项指标均有显著性差异,支持造模成功。
实施例2
1 材料与方法
本实施例中的实验动物、实验仪器和试剂、实验方法、观察指标、动物喂养环境等均与实施例1相同,不再赘述。将4周龄的33只SD大鼠随机分为2组。对照组16只,以普通饲料足量喂养;模型组17只,以改良高脂饲料足量循环喂养,具体为第一天和第三天普通饲料、第二天和第四天高脂饲料,然后依此方式循环喂养。全天自由饮食饮水。改良高脂饲料配方与重量比:普通饲料70%、猪油6%、全脂奶粉5%、蛋黄粉7%、蔗糖5%、花生6%、食盐1%、胆固醇0。
两组大鼠经上述喂养8周(第12周龄)后,按照空腹条件下模型组体重超过对照组SD大鼠平均体重20%作为肥胖SD大鼠造模成功的标准,同时参照血脂指标。
2 结果
2.1 一般情况
造模期间,观察二组大鼠精神状态、食量、饮水量、活动、毛色光泽及大便情况。造模初期模型组大鼠饮水偏多,大便较软,臭味重。随实验进行,模型组除大便臭味仍重外,其余观察指标渐如对照组,但毛色偏黄,光泽度差。
2.2 分组饲养0-8周对照组与模型组平均体重的比较
表4 分组饲养0-8周对照组与模型组平均体重的比较(g)
★P﹤0.05,★★P﹤0.01
如图4-1、4-2图和表4所示,分组饲养2周后,模型组大鼠平均体重高于对照组,但无显著性差异(P>0.05);分组饲养4周后,模型组大鼠平均体重明显高于对照组,且有显著性差异(P<0.05);分组饲养6-8周后,模型组大鼠平均体重明显高于对照组,且有极显著差异(P<0.01)。
2.3 分组饲养0-8周对照组与模型组Lee’s指数的比较
表5 分组饲养0-8周对照组与模型组Lee’s指数的比较
★P﹤0.05
如图5-1、图5-2和表5所示,分组饲养2-4周后,模型组大鼠Lee’s指数高于对照组,但无显著性差异(P>0.05);分组饲养6-8周后,模型组大鼠Lee’s指数明显高于对照组,且有显著性差异(P<0.05)。
2.4 分组饲养8周后对照组与模型组TC、TG、LDL-C值的比较
表6 分组饲养8周后对照组与模型组TC、TG、LDL-C值的比较(mmol/L)
★P﹤0.05
如图6和表6所示,分组饲养8周后模型组大鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL-C)水平明显高于对照组,具有显著性差异(P<0.05)。
2.5 计算模型组SD大鼠致肥率
按照实验设计空腹条件下模型组超过对照组SD大鼠平均体重20%作为肥胖SD大鼠造模成功的标准。在分组饲养8周后,模型组17只SD大鼠中有14只大鼠的平均体重(448.09±11.77)超过对照组平均体重(295.65±15.34)20%,确定这14只大鼠达到营养性肥胖模型标准,致肥率为82%。同时两组的血脂三项指标均有显著性差异,支持造模成功。
对比例1
实验动物、动物饲料和实验仪器和试剂均与实施例1相同,实验方法如下:
将4周龄的40只SD大鼠放置于室温23±3℃,相对湿度在50%-70%,通风良好的环境。每笼5只,照明时间12h。适应性普通饲料喂养3天后,将其随机分为2组。对照组20只,普通饲料足量喂养;模型组20只,前3周使用含15%猪油的高脂饲料喂养,第4周开始以普通饲料和改良高脂饲料循环足量喂养,具体为第一天普通饲料、第二天和第三天高脂饲料,然后依此喂养方式循环喂养。全天自由饮食饮水。改良后的高脂饲料配方为:普通饲料60%、猪油8%、蔗糖5%、全脂奶粉5%、花生8%、蛋黄粉10%、食盐2%、胆固醇2%,以上比例均为重量比。
两组大鼠经上述喂养8周(第12周龄)后,按照空腹条件下模型组体重超过对照组SD大鼠平均体重20%作为肥胖SD大鼠造模成功的标准,同时参照血脂指标。
结果分析:
1,分组饲养0-8周对照组与模型组体重的比较
如图7和表7所示:
表7:分组饲养0-8周对照组与模型组体重的比较(g)
★P﹤0.05
分组饲养2周后,模型组大鼠平均体重低于对照组,且有显著性差异(P<0.05);分组饲养4周后,模型组大鼠平均体重仍低于对照组,但无显著性差异(P>0.05)。显示此时模型组体重增长量已经高于对照组,但平均体重仍然低于对照组;分组饲养6周后,模型组大鼠平均体重高于对照组,但无显著性差异(P>0.05);分组饲养8周后,模型组大鼠平均体重明显高于对照组,且有显著性差异(P<0.05)。可以看出,采用本发明的循环喂养方式喂养后,模型组的体重增长量快速提升,大鼠的体重最终明显高于对照组。
2,分组饲养0-8周对照组与模型组Lee′s指数的比较
如图8和表8所示:
表8:分组饲养0-8周对照组与模型组Lee′s指数的比较
★P﹤0.05
分组饲养2周后,模型组大鼠Lee’s指数低于对照组,但无显著性差异(P>0.05);分组饲养4-6周后,模型组大鼠Lee’s指数开始高于对照组,但无显著性差异(P>0.05);分组饲养8周后,模型组大鼠Lee’s指数明显高于对照组,且有显著性差异(P<0.05)。可以看出,采用本发明的循环喂养方式喂养后,模型组的Lee’s指数快速提升,大鼠最终的Lee’s指数明显高于对照组。
3,分组饲养8周后对照组与模型组血脂TC、TG、LDL-C值的比较
如图9和表9所示:
表9:分组饲养8周后对照组与模型组血脂TC、TG、LDL-C值的比较(mmol/L)
★★P﹤0.01,★P﹤0.05
分组饲养8周后模型组大鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平明显高于对照组,具有高度显著性差异(P<0.01);低密度脂蛋白(LDL-C)明显高于对照组,具有显著性差异(P<0.05)。
4,计算模型组青年SD大鼠致肥率
按照实验设计空腹条件下模型组超过对照组SD大鼠平均体重20%作为肥胖SD大鼠造模成功的标准。在分组饲养8周后,模型组20只SD大鼠中有17只平均体重(437.00±53.04g)超过对照组平均体重(364.50±80.78g)20%,同时两组的血脂三项指标均有显著性差异,确定这17只大鼠达到营养性肥胖模型标准,致肥率为85%。
从上面所述可以看出,本发明提供的SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法,采用普通饲料和高脂饲料混合喂养的方式诱导SD大鼠营养性肥胖,避免了大鼠因每天食用富含高油脂、高胆固醇的饲料而引起的食欲减退,致肥效果明显。而改良后的高脂饲料配方含油量和硬度适中,激发了大鼠的食欲,导致模型组大鼠摄食量有明显增加,平均体重迅速增长。采用本发明提供的方法致肥率达到82%以上,能够得到理想的SD大鼠营养性肥胖模型,对进一步研究青少年营养性肥胖具有重要意义。
所属领域的普通技术人员应当理解:以上所述仅为本发明的具体实施例而已,并不用于限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种SD大鼠营养性肥胖模型的建立方法,其特征在于,包括:
将若干只SD大鼠平均分为对照组和模型组,对照组以普通饲料足量喂养;模型组以循环间隔喂食普通饲料和高脂饲料的方式足量喂养。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述模型组以第一天喂食普通饲料、第二天和第三天喂食高脂饲料的方式循环喂养。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述模型组以第一天和第三天喂食高脂饲料,第二天和第四天喂食普通饲料的方式循环喂养。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述高脂饲料的配方及各组分的重量比为:普通饲料60%-70%、猪油6%-8%、全脂奶粉5%-8%、蛋黄粉7%-10%、蔗糖5%、胆固醇0-2%,余量为花生和食盐。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述高脂饲料的配方及各组分的重量比为:普通饲料60%、猪油8%、全脂奶粉5%、花生8%、蛋黄粉10%、蔗糖5%、食盐2%、胆固醇2%。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述高脂饲料的配方及各组分的重量比为:普通饲料70%、猪油6%、全脂奶粉5%、蛋黄粉7%、蔗糖5%、花生6%、食盐1%、胆固醇0。
7.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述模型组的鼠笼中放置有木筷。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述对照组和模型组从SD大鼠的幼年期开始喂养,饲养时间为8周。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述对照组和模型组从4周龄SD大鼠开始喂养。
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