CN109924168B - 一种儿童及青少年代谢综合征的动物模型及构建方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种儿童及青少年代谢综合征的动物模型的构建方法，采用阶段性喂养的方式，使用普通维持饲料、高脂高胆固醇饲料和草料结合饲养6‑8周龄（儿童期）的大白兔，成功建立了儿童及青少年代谢综合征的动物实验模型。该模型同时具备代谢综合征所引发的早期冠心病，动脉粥样硬化，脂肪肝及非酒精性脂肪性肝炎和肝纤维化，蛋白尿性肾病等疾病病征，可用于代谢综合征及其并发的多脏器病变的病因学，病理学研究和药学评价。

Description

一种儿童及青少年代谢综合征的动物模型及构建方法

技术领域

本发明涉及医疗技术领域，特别是涉及一种高脂高胆固醇诱发儿童及青少年代谢综合征的动物模型及建立方法。

背景技术

代谢综合征( MS )是多种代谢成分异常聚集的病理状态,主要表现:腹型肥胖或超体质量、血脂异常、高血压、胰岛素抵抗和/或葡萄糖耐量异常,这些代谢紊乱症候群是心血管疾病和Ⅱ型糖尿病的高度危险因素。2018年中国大健康数据披露我国肥胖人口达到3.25亿，其中儿童及青少年的肥胖率占30%，未来20年这个数据将增加一倍，达到6.5亿。儿童及青少年肥胖的脂肪肝发生率达到40-50%。在肥胖儿童和青少年中,同样存在这些代谢异常并成流行趋势, 儿童期 MS 预示成人期MS 和Ⅱ型糖尿病的可能性大大增加。资料统计推测未来20年由肥胖引发的Ⅱ型糖尿病将增加33倍，心血管疾病将达到3亿人，肥胖引发的肿瘤将增加8倍。建立儿童及青少年代谢综合征的动物实验模型对于儿童及青少年代谢综合征的研究以及临床预防具有很强的应用价值。现有技术下采用高脂高胆固醇饲料造模的方法多用于非酒精性脂肪性肝病、动脉粥样硬化、外源性高脂血症等动物模型的建立，然而这些模型通常只能出现一种或几种疾病的病征。目前儿童及青少年肥胖及其引发的代谢综合征的实验动物模型在实验研究、新药开发和医疗研究领域仍处于近空白区域。

发明内容

本发明利用实验大白兔的自然生理成长周期，采用特制的高脂高胆固醇饲料饲养6-8周龄（儿童期）的大白兔成功建立了儿童及青少年代谢综合征的动物实验模型。该模型同时具备代谢综合征所引发的早期冠心病，动脉粥样硬化，脂肪肝及非酒精性脂肪性肝炎和肝纤维化，蛋白尿性肾病等疾病病征，可用于代谢综合征及其并发的多脏器病变的病因学，病理学研究和药学评价。

本发明具体技术方案如下：

一种儿童及青少年代谢综合征的动物模型的构建方法，对6-8周龄的兔（兔生后一个月到八个月的期间相当于人儿童及青少年期）饲喂高脂高胆固醇饲料、普通维持饲料和草料构建动物模型，所述高脂高胆固醇饲料为含有质量百分比为8-15%%脂肪和0.75-2%胆固醇的普通维持饲料，所述草料为苜蓿草（干料），所述普通维持饲料为常规兔饲料，饲喂分为两个阶段：

第一阶段：建模第一周的第一天和第二天采用普通维持饲料与高脂高胆固醇饲料等量进行投喂，同时添加普通维持饲料量30-50%的草料投喂，第三天至第七天采用梯度降低普通维持饲料的量并梯度提高高脂高胆固醇饲料的量进行投喂，普通维持饲料与高脂高胆固醇饲料的总量维持不变，保持草料投喂量不变；

第二阶段：建模第二周开始延续第一阶段第七天的饲料和草料配比进行每天投喂。

本发明所述高脂高胆固醇饲料优选为含有10%脂肪（猪油）和2.0%胆固醇的普通维持饲料。

本发明所述兔优选为雌性或雄性，6-8周龄新西兰白兔。

本发明所述的构建方法，优选：

第一阶段：建模第一周的第一天和第二天采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料：草料质量比为5：5：2进行投喂，第三天和第四天采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料：草料质量比为4：6：2进行投喂，第五天和第六天采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料：草料质量比为3：7：2进行投喂，第七天采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料：草料质量比为2：8：2进行投喂。

第二阶段：建模第为建模第二周开始采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料：草料质量比为2：8：2进行投喂。

上述构建方法，优选：每日饲料（普通维持饲料+高脂高胆固醇饲料）饲喂总量100克，草料（苜蓿草）饲喂总量20克。饲喂方法分为两个阶段，第一阶段为模型第一周，饲喂方式为第一天和第二天普通维持饲料50克+高脂高胆固醇饲料50克，草料20克，第三天和第四天普通维持饲料40克+高脂高胆固醇饲料60克，草料20克，第五天和第六天普通维持饲料30克+高脂高胆固醇饲料70克，草料20克，第七天普通维持饲料20克+高脂高胆固醇饲料80克，草料20克。第二阶段为模型第二周至模型第二十一周，饲喂方式为普通维持饲料20克+高脂高胆固醇饲料80克，草料20克。

本发明所述的构建方法，采用每天2次，每次总饲料（普通维持饲料+高脂高胆固醇饲料+草料）投喂量为60g/每只兔。

本发明所述的构建方法，第二阶段时长为3-20周，优选8周。

本发明另一目的在于提供一种高脂高胆固醇饮食基础上的儿童及青少年代谢综合征模型，采用本发明所述方法构建而成。本发明所述的模型伴有冠心病，动脉粥样硬化，脂肪肝及非酒精性脂肪性肝炎和肝纤维化、肝硬化，肥胖性肾病等临床和病理特征。

本发明的另一目的在于提供本发明所述的代谢综合征模型在动脉粥样硬化，脂肪肝及非酒精性脂肪性肝炎和肝纤维化、肝硬化，肥胖性肾病，特别是在儿童和青少年代谢综合征的基础研究中的应用以及在冠心病，动脉粥样硬化，脂肪肝及非酒精性脂肪性肝炎和肝纤维化、肝硬化，肥胖性肾病的临床药物开发中的应用。

本发明有益效果：

（1）现有技术下采用成年兔进行造模，通常采用直接给予高脂高胆固醇饲料饲喂方式，本发明在研究中发现对于未成年的兔采用直接给予高脂高胆固醇饲料饲喂方式，动物难以耐受，会导致动物胃肠道消化功能紊乱，在造模的1-2周内会出现动物因不耐受高脂饮食而死亡，本发明对饲料配比以及饲喂方式进行了调整，采用阶段性逐渐提高高脂高胆固醇饲料的饲喂量，逐步提高未成年的兔的适应能力，保证造模成功率。

（2）本发明进一步在饲喂过程中添加苜蓿草草料，不仅缓解动物对高脂高胆固醇饲料消化不良的症状，提高动物的存活率，还能够使造模中过程动物病程进展稳定，更好地模拟儿童及青少年代谢综合征的发病过程和的各种并发症状。

（3）本发明在造模研究中发现不同配方的高脂高胆固醇饲料饲喂造模情况不同，虽然同属于高脂高胆固醇饲料，但有的配方存在成模情况不稳定性，成模时间的不确定的情况，本发明采用特定的配方和饲喂方式实现了100%造模成功。

血液生化检测结果显示，本发明所述方法构建得到代谢综合征兔模型兼具早期冠心病的临床心电图变化和心脏以及冠状动脉的病理变化特点，非糖尿病性脂肪肝和非酒精性脂肪性肝炎以及肝纤维化的特点，高脂高胆固醇诱发的动脉粥样硬化的病理变化特点，高脂高胆固醇以及肥胖诱发的肥胖性肾病的病理变化特点。模型成功率百分之百，稳定性好，无死亡率。填补了该领域的动物模型的空白，特别是动物冠心病模型，肥胖性肾病模型，为人类代谢综合征，特别是儿童和青少年的肥胖和代谢综合征的研究，以及新药研发提供了不可缺少的实验动物模型。

附图说明

图1为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时空腹血糖。

图2为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时血浆HDL-c和LDL-c。

图3为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时血浆TG和TC。

图4为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时动物肝脏。

图5为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时肝脏重量和肝脏指数。

图6为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时血浆ALT和AST。

图7为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时肝细胞脂肪变评分、肝组织炎症评分、肝细胞气球样变评分及肝脏NAS评分结果。

图8为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时肝脏病理学变化H&E染色结果。

图9为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时肝纤维化定量分析结果。

图10为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时肝脏病理学天狼星红染色结果。

图11为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时动物主动脉。

图12为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时冠状动脉H&E染色结果。

图13为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时心脏。

图14为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时心脏重量和心脏指数。

图15为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时心脏H&E染色及Masson染色结果。

图16为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时左心室、室间隔及右心室室壁厚度变化。

图17为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时心肌组织H&E染色及Masson染色结果。

图18为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时左室壁心肌组织H&E染色及Masson染色结果。

图19为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时动物肾脏。

图20为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时肾脏重量和肾脏指数。

图21为本发明所述方法构建的模型动物20周时尿液中白蛋白的含量。

图22为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时肾脏组织H&E染色及Masson染色结果。

图23为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时肾脏肾小管区域H&E染色及Masson染色结果。

图24为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时肾脏肾集合管区域H&E染色及Masson染色结果。

具体实施方式

以下通过实施例说明本发明的具体步骤，但不受实施例限制。

在本发明中所使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。

下面结合具体实施例并参照数据进一步详细描述本发明。应理解，该实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。

在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。

下面结合具体实施例对本发明进一步说明。

动物：雄性SPF级新西兰实验大白兔，7周龄，普通级动物饲养中心饲养，12小时光照/12小时无光照，温度控制条件21-25度，湿度控制条件40-70度。动物8-10天检疫、适应后进入正式实验。

普通维持饲料购自于邳州市小河科技发展有限公司。

高脂高胆固醇饲料： 10%脂肪（猪油）+2.0%胆固醇+88%普通维持饲料。

草料：苜蓿草干草。

1. 饲喂方式筛选

实验分组：

正常对照组（n=5）：普通维持饲料，每天2次，每次投喂量为60g/每只兔。

模型动物-无阶段性饲喂组（n=7）：高脂高胆固醇饲料，每天2次，每次投喂量为60g/每只兔。

模型动物-阶段性饲喂+草料组（n=7）：第一阶段：每日饲料饲喂总量100克，草料饲喂总量20克，分为每天2次，每次投喂量为60g/每只兔。模型第一周，第一天和第二天普通维持饲料50克+高脂高胆固醇饲料50克，草料20克，第三天和第四天普通维持饲料40克+高脂高胆固醇饲料60克，草料20克，第五天和第六天普通维持饲料30克+高脂高胆固醇饲料70克，草料20克，第七天普通维持饲料20克+高脂高胆固醇饲料80克，草料20克。第二阶段采用普通维持饲料20克+高脂高胆固醇饲料80克，草料20克进行每天投喂。

模型动物-阶段性饲喂+无草料组（n=7）：第一阶段：每日饲料饲喂总量120克，分为每天2次，每次投喂量为60g/每只兔。建模第一周的第一天和第二天采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料质量比为5：5进行投喂，第三天和第四天采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料质量比为4：6进行投喂，第五天和第六天采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料质量比为3：7进行投喂，第七天采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料质量比为2：8进行投喂。

饲喂过程中本发明研究发现：（1）模型动物组-无阶段性饲喂组：单纯高脂高胆固醇饲料不分阶段性饲喂，动物难以耐受，一周后出现部分动物胃肠道消化紊乱致死；（2）模型动物-阶段性饲喂+无草料组，虽然在第一阶段耐受了高脂高胆固醇饲喂，但是在第二阶段的1-2周后亦出现动物消化不良致死。（3）模型动物-阶段性饲喂+草料组动物存活良好，未出现消化不良致死。

结果表明采用阶段性喂食+苜蓿草的方式饲喂，动物适应性良好，存活率100%。

2. 考察不同的高脂高胆固醇饲料配比对造模的影响

采用上述模型动物-阶段性饲喂+草料组的饲喂方式，仅改变高脂高胆固醇饲料配方，选择不同配方的高脂高胆固醇饲料，考察对造模的影响。

高脂高胆固醇饲料配方一： 10%脂肪（猪油）+2.0%胆固醇+88%普通维持饲料。

高脂高胆固醇饲料配方二：5%脂肪（猪油）+0.5%胆固醇+94.5%普通维持饲料。

高脂高胆固醇饲料配方三：5%脂肪（猪油）+0.75%胆固醇+94.25%普通维持饲料。

造模结束后检测模型动物：心电图，心脏彩色B-超，空腹血糖变化，外周血血常规检测包括红细胞总数，血红蛋白，白细胞总数和分类，血浆ALT，AST，CT，TG, HDL-c，LDL-c。实验终点脏器病理学检测：肝脏，心脏，主动脉，肾脏。

建模结果表明采用配方二和配方三高脂高胆固醇饲料进行造模，实验动物的出现病理症状轻重不一，无法在20周内全部出现早期冠心病变化和心脏以及冠状动脉的病理变化，非糖尿病性脂肪肝和非酒精性脂肪性肝炎以及肝纤维化，动脉粥样硬化的病理变化以及肾病的病理变化，成模率不足50%，延长造模时间至30周仍无法实现100%成模。由于30周龄的兔已经超过青春期，不符合本发明儿童及青少年模型概念，说明配方二、三不宜用于构建本发明目的模型。以下详细陈述配方一（本发明技术方案）造模的研究结果。

一、脂质代谢综合征研究结果

图1-3为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时空腹血糖、血浆HDL-c和LDL-c和TG和TC。结果显示模型动物8周内未见明显的空腹血糖升高，至模型20周可见空腹血糖显著性升高（图1）。模型动物脂质代谢障碍所致血浆LDL-c，TG，TC显著性升高，HDL-c模型晚期亦出现显著性升高。结果表明采用本方法诱导的实验动物在早期脂质代谢障碍时（8周）并没有出现显著性血糖升高的临床表现，这点符合人类儿童和青少年早期肥胖并不呈现糖尿病的病症。长期诱导后（20周）动物出现显著性血糖升高，表现出脂质代谢障碍所致的糖尿病临床症状。

二、NASH研究结果

图4-5为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时动物肝脏、肝脏重量和肝脏指数。

结果显示配方一高脂高胆固醇饲料饲养可显著性引起肝肿大，脂肪肝样的肝表面土黄色改变，连续20周饲养导致肝脏表面颗类状改变，肝表面粗糙，肝硬化的改变，表明本发明建模方法可以诱导肝脏NASH并且进入肝硬化阶段。

图6为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时血浆ALT和AST，结果显示模型动物的ALT和AST显著性升高，肝细胞显著性损伤。

图7为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时肝细胞脂肪变评分、肝组织炎症评分、肝细胞气球样变评分及肝脏NAS评分结果，结果显示模型动物自模型8周均出现显著性的NAS病理改变，随时间推移逐渐加重。NAS总评分评分模型8周在5-6分之间，模型20周再大于6分在7-8分之间。尤为突出的是肝细胞气球样变在模型20周均呈现2分。

图8为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时肝脏病理学变化H&E染色结果，结果显示NAS的三个病理改变，即脂肪变，炎细胞浸润和肝细胞气球样变，表明所有模型动物均进入显著性NASH肝脏的病理进程，模型20周肝脏进入肝硬化阶段。

图9为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时肝纤维化定量分析结果，结果显示模型动物在模型第8周与正常动物比较均出现显著的肝纤维化，纤维化量增加一倍，达到3%，模型20周的动物出现显著的肝硬化改变，纤维化量增加六倍，达到7.5%以上。

图10为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时肝脏病理学天狼星红染色结果，结果显示模型动物肝纤维化的结构分布和量的分布，再现了NASH的肝纤维化分布在肝细胞索之间和损伤肝细胞之间，呈现纤细的纤维组织沿著肝窦间隙及细胞间分布的病理特征，模型8周部分区域可见早起的桥接性纤维化，模型20周显示肝纤维化组织分割肝细胞形成结节状病理改变，肝脏进入肝硬化阶段。

以上研究结果表明采用本方法诱导的脂质代谢综合征在模型早期（8周）动物即出现了显著的的脂肪性肝病，脂肪性肝炎及肝纤维化。在模型的后期（20周）动物出现显著性的肝硬化。

三、动脉粥样硬化与冠状动脉硬化性心脏病研究结果

图11为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时动物主动脉，结果显示模型第8周与正常动物相比模型动物清晰主动脉粥样斑块形成（油红染色），病变主要分布在升主动脉、主动脉弓及胸主动脉近端。模型20周动脉粥样硬化斑块进一步加重，并延伸到胸主动脉远端，腹主动脉等大动脉血管。图12为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时冠状动脉H&E染色结果，结果显示冠状动脉入口处在模型第8周和20周可见显著性冠状动脉内膜增厚，粥样斑块形成，内腔狭窄，形成显著性冠状动脉硬化。

图13-14为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时心脏、心脏重量和心脏指数，结果显示高脂高胆固醇饲料饲养可显著性引起心脏肥大，重量增加，连续20周饲养导致心脏重量增大1.7倍。

图15为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时心脏H&E染色及Masson染色结果，图16为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时左心室、室间隔及右心室室壁厚度变化，结果显示模型动物的室壁增厚在模型第8周显著性大于正常动物，模型20周室壁厚度较模型8周变薄，特别是左室壁的变化，提示此时动物心脏出现早期衰竭，左室扩张现象。

图17为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时心肌组织H&E染色及Masson染色结果，结果显示模型动物心肌组织部分内细小冠状动脉分支，特别是左心室壁内细小冠状动脉呈现显著性动脉粥样硬化，内膜增厚，内腔狭窄，中膜结构破坏，纤维化，外膜纤维化伴有炎细胞浸润。

图18为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时左室壁心肌组织H&E染色及Masson染色结果，结果显示模型动物部分心肌组织，特别是左室壁心肌组织，呈现排列紊乱，炎细胞浸润，纤维化等局灶性心肌梗塞的病理改变。

以上研究研究表明采用本方法诱导的脂质代谢综合征在模型的早期即出现大动脉粥样硬化的病理表现，病灶主要分布在升主动脉，主动脉弓，胸主动脉和腹主动脉。模型动物的冠状动脉检测可见冠状动脉入口和远端的不同段位的粥样硬化。模型晚期（20周）可见动脉粥样硬化进一步加重。心脏呈现冠心病的病理改变包括心脏增大，左心室增厚。心肌组织无菌性炎症和纤维化等病理改变。

四、脂质代谢综合征性肾病

采用本方法诱导的脂质代谢综合征在模型的早期（8周）模型动物的肾脏呈现早期的肾小球和肾间质的炎细胞浸润，特别是泡沫细胞的沉积，导致肾小球增大，肾间质大量泡沫细胞浸润。模型晚期（20周）出现轻度的肾小球和肾间质的纤维化。其病理特征与人类的儿童青少年肥胖性肾病病理改变一致。

图19为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时动物肾脏，结果显示模型第8周与正常动物相比模型动物双侧肾脏显著性增大，表面光滑，呈现弥漫性细小点状斑点模型20周病变进一步加重。肾脏切面与正常动物相比模型动物肾皮质，髓质及集合管区域可见大面积片状白色病变区域。

图20为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时肾脏重量和肾脏指数，结果显示随着模型周期的延长，肾脏重量逐渐增加，显著性高于正常动物。

图21为本发明所述方法构建的模型动物20周时尿液中白蛋白的含量，结果显示在模型20周尿液中白蛋白的含量模型动物显著性升高，与正常动物比较尿液中白蛋白的含量增加了120倍，提示蛋白尿性肾病。

图22为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时肾脏组织H&E染色及Masson染色结果，结果显示肾脏组织病理学分析结果显示模型动物显著性肾小球肥大，肾小球毛细血管丛炎细胞浸润，泡沫细胞沉积，部分肾小球及肾球囊轻度纤维化。

图23为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时肾脏肾小管区域H&E染色及Masson染色结果，结果显示模型动物肾小管区域，特别是髓袢区域的肾小管间质大量泡沫细胞沉积，间质纤维化。模型20周可见髓袢区域除大量泡沫细胞沉积外，可见灶状胆固醇结晶沉积及纤维化。

图24为本发明所述方法构建的模型动物8周及20周时肾脏肾集合管区域H&E染色及Masson染色结果，结果显示模型动物肾集合管区域集合管间质大量泡沫细胞沉积，间质纤维化。模型20周可见灶状纤维化。

总结：

本发明对儿童至青春期新西兰实验白兔（生后6-8周龄）给予特定的高脂高胆固醇配方的饲料按照特定的饲养方法饲喂20周，构建儿童及青少年代谢综合征的实验兔模型，符合当前人群中儿童及青少年肥胖所致的代谢综合征的发病基本原理，能真实模拟并接近儿童及青少年肥胖所致的代谢综合征的病理过程，主要表现为高血脂，高胆固醇血症，高低密度脂蛋白血症；NASH及肝纤维化和肝硬化，动脉粥样硬化及冠心病，代谢综合征所致蛋白尿性肾病。模型成功率百分之百，稳定性好，无死亡率。填补了该领域的物模型的空白，为人类儿童及青少年肥胖所致的代谢综合征的研究，特别是NASH，冠心病，肾病等的重大疾病的研究，以及新药研发提供了不可缺少的动物模型。

Claims (5)

1.一种儿童及青少年代谢综合征的动物模型的构建方法，其特征在于对6-8周龄的兔饲喂普通维持饲料、高脂高胆固醇饲料、草料构建动物模型，所述高脂高胆固醇饲料为含有10%脂肪和2%胆固醇的普通维持饲料，所述草料为苜蓿草，饲喂分为两个阶段：

第一阶段：建模第一周的第一天和第二天采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料：草料质量比为5：5：2进行投喂，第三天和第四天采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料：草料质量比为4：6：2进行投喂，第五天和第六天采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料：草料质量比为3：7：2进行投喂，第七天采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料：草料质量比为2：8：2进行投喂，普通维持饲料与高脂高胆固醇饲料的总量维持不变，保持草料投喂量不变；

第二阶段：建模第二周开始采用普通维持饲料：高脂高胆固醇饲料：草料质量比为2：8：2进行投喂。

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于所述兔为新西兰白兔。

3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于每天投喂2次，每次饲料投喂总量为60g/只兔。

4.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于第二阶段时长为3-20周。

5.采用如权利要求1-4任一项所述的构建方法得到的儿童及青少年代谢综合征的动物模型在动脉粥样硬化，冠心病，脂肪肝及非酒精性脂肪性肝炎和肝纤维化、肝硬化，肥胖性肾病基础研究中的应用以及在冠心病，动脉粥样硬化，脂肪肝及非酒精性脂肪性肝炎和肝纤维化、肝硬化，肥胖性肾病的临床药物开发中的应用。

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