CN110338150A - 一种儿童及青少年肥胖性肾病的动物模型、制备方法、及应用 - Google Patents
一种儿童及青少年肥胖性肾病的动物模型、制备方法、及应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种儿童及青少年肥胖性肾病的动物模型的构建方法,采用高脂高胆固醇饲料和草料结合饲养6‑8周龄(儿童期)的大白兔,成功建立了儿童及青少年肥胖性肾病的动物模型。该模型可用于代谢综合症并发的肥胖性肾病病变的病因学,病理学研究和药学评价。
Description
技术领域
本发明涉及医疗技术领域,特别是涉及一种高脂高胆固醇诱发儿童及青少年肥胖性肾病的动物模型、建立方法、及应用。
背景技术
代谢综合征( MS )是多种代谢成分异常聚集的病理状态,主要表现:腹型肥胖或超体质量、血脂异常、高血压、胰岛素抵抗和/或葡萄糖耐量异常,这些代谢紊乱症候群是心血管疾病和Ⅱ型糖尿病的高度危险因素。2018年中国大健康数据披露我国肥胖人口达到3.25亿,其中儿童及青少年的肥胖率占30%,未来20年这个数据将增加一倍,达到6.5亿。儿童及青少年肥胖的脂肪肝发生率达到40-50%。在肥胖儿童和青少年中,同样存在这些代谢异常并成流行趋势, 儿童期 MS 预示成人期MS 和Ⅱ型糖尿病的可能性大大增加。资料统计推测未来20年由肥胖引发的Ⅱ型糖尿病将增加33倍,心血管疾病将达到3亿人,肥胖引发的肿瘤将增加8倍。建立儿童及青少年代谢综合征的动物实验模型对于儿童及青少年代谢综合征的研究以及临床预防具有很强的应用价值。目前儿童及青少年肥胖性肾病的实验动物模型在实验研究、新药开发和医疗研究领域仍处于近空白区域。
发明内容
一种儿童及青少年代谢综合征所致的肥胖性肾病的动物模型的构建方法,对6-8周龄的兔(兔生后一个月到八个月的期间相当于人儿童及青少年期)饲喂高脂高胆固醇饲料和草料构建动物模型,所述高脂高胆固醇饲料为含有质量百分比为8-15%%脂肪和0.75-2%胆固醇的普通维持饲料,所述草料为苜蓿草(干料)。
本发明目的在于提供一种高脂高胆固醇诱发儿童及青少年肥胖性肾病的动物模型。
本发明另一目的在于提供一种高脂高胆固醇饮食基础上的儿童及青少年肥胖性肾病的模型的构建方法。
本发明另一目的在于提供一种高脂高胆固醇饮食基础上的儿童及青少年肥胖性肾病的模型的应用。
本发明所述高脂高胆固醇饲料优选为含有10%脂肪(猪油)和2.0%胆固醇的普通维持饲料。
本发明所述兔优选为雌性或雄性,6-8周龄新西兰白兔。
本发明所述的构建方法,优选:建模采用高脂高胆固醇饲料:草料质量比为10:2进行投喂。
上述构建方法,优选:每日饲料(高脂高胆固醇饲料)饲喂总量80克,草料(苜蓿草)饲喂总量20克。
本发明所述的构建方法,采用其特征在于每日定量为100克高脂高胆固醇饲料,采用每天2次,分为午前60克/每只兔,午后40克/每只兔。
本发明所述的构建方法,饲喂优选8周。
本发明所述的模型具有肥胖性肾病的临床和病理特征。
本发明的优点在于:
1)现有技术下采用成年兔进行造模,通常采用直接给予高脂高胆固醇饲料饲喂方式,本发明在研究中发现对于未成年的兔采用直接给予高脂高胆固醇饲料饲喂方式,动物难以耐受,会导致动物胃肠道消化功能紊乱,在造模的1-2周内会出现动物因不耐受高脂饮食而死亡,本发明对饲料配比以及饲喂方式进行了调整,采用高脂高胆固醇饲料+草料的饲喂方法,提高未成年的兔的适应能力,保证造模成功率。
2)本发明在造模研究中发现不同配方的高脂高胆固醇饲料饲喂造模情况不同,虽然同属于高脂高胆固醇饲料,但有的配方存在成模情况不稳定性,成模时间的不确定的情况,本发明采用特定的配方和饲喂方式实现了100%造模成功。
3)血液生化检测结果显示,本发明所述方法构建得到肥胖性肾病的病理变化特点。模型成功率百分之百,稳定性好,无死亡率。填补了该领域的动物模型的空白,肥胖性肾病模型为人类代谢综合征,特别是儿童和青少年的肥胖和代谢综合征的研究,以及新药研发提供了不可缺少的实验动物模型。
附图说明
下面结合附图中的实施例对本发明作进一步的详细说明,但并不构成对本发明的任何限制。
图1为本发明所述方法构建的模型动物8周的体重变化。
图2为本发明所述方法构建的模型动物8周时肾脏大体变化。
图3为本发明所述方法构建的模型动物8周时肾脏重量和肾脏指数。
图4为本发明所述方法构建的模型动物8周时尿液中白蛋白的含量。
图5为本发明所述方法构建的模型动物8周时肾脏组织H&E染色及Masson染色结果。
具体实施方式
以下通过实施例说明本发明的具体步骤,但不受实施例限制。
在本发明中所使用的术语,除非另有说明,一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体实施例并参照数据进一步详细描述本发明。应理解,该实施例只是为了举例说明本发明,而非以任何方式限制本发明的范围。
在以下实施例中,未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。
下面结合具体实施例对本发明进一步说明。
动物:雄性SPF级新西兰实验大白兔,7周龄,普通级动物饲养中心饲养,12小时光照/12小时无光照,温度控制条件21-25度,湿度控制条件40-70度。动物8-10天检疫、适应后进入正式实验。
普通维持饲料购自于邳州市小河科技发展有限公司。
高脂高胆固醇饲料: 10%脂肪(猪油)+2.0%胆固醇+88%普通维持饲料。
草料:苜蓿草干草。
饲喂方式筛选
实验分组:
正常对照组(n=10):普通维持饲料,每天2次,每日投喂量为100g/每只兔, ,草料20 g/每只兔。
模型动物组(n=10):高脂高胆固醇饲料+草料,每天2次,每日高脂高胆固醇饲料投喂量为100g/每只兔, 草料20 g/每只兔。
结果表明采用本方案的方式饲喂,动物适应性良好,存活率100%。
造模结束后检测模型动物:尿液白蛋白分析和肾脏病理学检测。
肥胖性肾病。
采用本方法诱导的肥胖性肾病的动物模型在模型的第8周模型动物的肾脏呈现早期的肾小球和肾间质的炎细胞浸润,特别是泡沫细胞的沉积,导致肾小球增大,肾间质大量泡沫细胞浸润,出现轻度的肾小球和肾间质的纤维化。其病理特征与人类的儿童青少年肥胖性肾病病理改变一致。
图1为本发明所述方法构建的模型动物8周时动物体重变化。
图2为本发明所述方法构建的模型动物8周时动物肾脏,结果显示模型第8周与正常动物相比模型动物双侧肾脏显著性增大,表面光滑,呈现弥漫性细小点状斑点。肾脏切面与正常动物相比模型动物肾皮质,髓质及集合管区域可见大面积片状白色病变区域。
图3为本发明所述方法构建的模型动物8周时肾脏重量和肾脏指数,结果显示肾脏重量增加,显著性高于正常动物。
图4为本发明所述方法构建的模型动物8周时尿液中白蛋白的含量,结果显示在模型8周尿液中白蛋白的含量模型动物显著性升高,与正常动物比较尿液中白蛋白的含量增加了X倍,提示蛋白尿性肾病。
图5为本发明所述方法构建的模型动物8周时肾脏组织H&E染色及Masson染色结果,结果显示肾脏组织病理学分析结果显示模型动物显著性肾小球肥大,肾小球毛细血管丛炎细胞浸润,泡沫细胞沉积,部分肾小球及肾球囊轻度纤维化。
总结:
本发明对儿童至青春期新西兰实验白兔(生后6-8周龄)给予特定的高脂高胆固醇配方的饲料按照特定的饲养方法饲喂8周,构建儿童及青少年肥胖性肾病的实验兔模型,符合当前人群中儿童及青少年肥胖所致的肥胖性肾病的发病基本原理,能真实模拟并接近儿童及青少年肥胖所致的肥胖性肾病的病理过程。模型成功率百分之百,稳定性好,无死亡率。填补了该领域的物模型的空白,为人类儿童及青少年肥胖所致的代谢综合征的研究,特别是肥胖性肾病的研究,以及新药研发提供了不可缺少的动物模型。
以上所举实施例为本发明的较佳实施方式,仅用来方便说明本发明,并非对本发明作任何形式上的限制,任何所属技术领域中具有通常知识者,若在不脱离本发明所提技术特征的范围内,利用本发明所揭示技术内容所做出局部更动或修饰的等效实施例,并且未脱离本发明的技术特征内容,均仍属于本发明技术特征的范围内。
Claims (7)
1.一种儿童及青少年肥胖性肾病的动物模型的构建方法,其特征在于,对6-8周龄的兔饲喂普通维持饲料、特质高脂高胆固醇饲料、草料构建动物模型;
所述特质高脂高胆固醇饲料为含有8-15%%脂肪和0.75-2%胆固醇的普通维持饲料,所述草料为苜蓿草。饲喂高脂高胆固醇饲料:草料质量比为10:2进行投喂。
2.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述高脂高胆固醇饲料为含有10%高脂和2.0%胆固醇的普通维持饲料。
3.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述兔为新西兰白兔及日本大白兔。
4.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,每日定量为100克高脂高胆固醇饲料,草料20克,采用高脂高胆固醇饲料每天2次,分为午前60克/每只兔,午后40克/每只兔。
5.如权利要求1所述的构建方法,其特征在于,饲喂时长为8周。
6.一种儿童及青少年肥胖性肾病的动物模型,其特征在于采用权利要求1-5任一项所述的方法构建得到。
7.一种如权利要求6所述的儿童及青少年肥胖性肾病的动物模型在儿童及青少年肥胖性肾病的临床药物开发中的应用。
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2019
- 2019-08-11 CN CN201910737276.0A patent/CN110338150A/zh active Pending
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