CN103749304B - 花叶山菅兰的组织培养方法 - Google Patents
花叶山菅兰的组织培养方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及花叶山菅兰的组织培养方法，分别利用小芽诱导培养基进行芽诱导培养、增殖培养基进行增殖培养、壮苗培养基进行壮苗培养、生根培养基进行生根培养，然后进行炼苗与移栽获得花叶山菅兰植株。与现有技术相比，本发明通过组培技术，极大提高繁殖速度和苗的整齐度，更好地保持原有的母本性状，移栽成活率高达95％。
Description
技术领域
本发明涉及植物组培领域，尤其是涉及一种花叶山菅兰的组织培养方法。
背景技术
花叶山菅兰为百合科山菅兰属园艺栽培品种，属于多年生草本植物，株高50-70厘米；叶近基生，2列，狭条状披针形，革质，长30-60厘米；茎横走，结节状，节上有细而硬的细根；花葶从叶丛中抽出，圆锥花序长10-30厘米，花多朵，夏季开放，淡紫色，浆果紫蓝色。花叶山菅兰株形优美，叶色秀丽，叶边缘具银白色条纹，清逸美观，深受园艺工作者的喜爱，在园林中常作地被植物观赏，常用于林下、园路边、山石旁，在室内亦可作盆栽观赏。园林中多丛植或孤植于花境、庭院，又可做疏林地被植物，是良好的花镜与庭院材料。市场需求量大，种苗供应受限制。
发明内容
本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种保证母本性状、移栽成活率高的花叶山菅兰的组织培养方法。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：
花叶山菅兰的组织培养方法，采用以下步骤：
(1)取花叶山菅兰从基部萌发的小芽，冲洗干净后依次用75v／v％的乙醇浸泡30s、1wt‰升汞浸泡15min、无菌水冲洗5-6次，吸干表面水份后取小芽基部切成1cm长，接种于小芽诱导培养基上，该培养基上的营养成分为MS+6-BA1.0-5.0mg／L+NAA0.1-0.5mg／L，控制培养温度为24-30℃，光照为70-100μmol／ms，进行芽诱导培养；
(2)小芽接种于小芽诱导培养基上4周后开始膨大并出现黄绿色突起，2周后可见明显的愈伤组织，继续培养1个月，切下带芽愈伤组织分别放入增殖培养基中，该培养基的营养成分为MS+6-BA1.0-3.0mg／L-+NAA0.1-0.3mg／L，控制培养温度为24-30℃，光照为70-100μmol／ms，进行增殖培养；
(3)诱导出的丛生芽每丛有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，分成小丛或单芽后放入壮苗培养基中，该培养基的营养成分为MS+6-BA0.5-2.0mg／L+NAA0.1-0.2mg／L上，控制培养温度为24-30℃，光照为70-100μmol／ms，进行壮苗培养，不定芽迅速伸长，30天后长到2-3cm；
(4)取2-3cm的小植株转接入生根培养基中诱导生根，该培养基的营养成分为MS+NAA0.1-1.0mg／L，控制培养温度为24-30℃，光照为70-100μmol／ms，20天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后长至2-3cm；
(5)生根培养30天，根系长至1-2cm，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外。
所述的小芽诱导培养基的营养成分优选MS+6-BA1.0mg／L+NAA0.1mg／L，MS+6-BA3.0mg／L+NAA0.3mg／L或MS+6-BA5.0mg／L+NAA0.5mg／L。
所述的小芽诱导培养基的营养成分优选MS+6-BA3.0mg／L+NAA0.3mg／L。
所述的增殖培养基的营养成分优选MS+6-BA1mg／L-+NAA0.1mg／L，MS+6-BA2mg／L+NAA0.2mg／L或MS+6-BA3mg／L+NAA0.3mg／L。
所述的增殖培养基的营养成分优选MS+6-BA2mg／L+NAA0.2mg／L。
所述的壮苗培养基的营养成分优选MS+6-BA0.5mg／L+NAA0.1mg／L，MS+6-BA1.0mg／L+NAA0.1mg／L或MS+6-BA2mg／L+NAA0.2mg／L。
所述的壮苗培养基的营养成分优选MS+6-BA1.0mg／L+NAA0.1mg／L。
所述的生根培养基的营养成分优选MS+NAA0.1mg/L，MS+NAA0.5mg／L或MS+NAA1mg/L。
所述的生根培养基的营养成分优选MS+NAA0.5mg／L。
小芽诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基还包括基本成分，该基本成分包括蔗糖30g/L、琼脂6g/L，上述培养基的pH值控制在5.8。
与现有技术相比，本发明通过组培技术，极大提高繁殖速度和苗的整齐度，更好地保持原有的母本性状，移栽成活率高达95％。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
无菌材料的获得
取花叶山菅兰从基部萌发的小芽，用自来水冲洗2h后于超净工作台上，用75％的乙醇浸泡30s，1‰升汞浸泡15min，无菌水冲洗5-6次，无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成1cm长，接种于小芽诱导培养基上，该培养基的营养成分为MS+6-BA1.0mg／L+NAA0.1mg／L，基本组成成分为蔗糖30g/L、琼脂6g／L，培养基的pH值控制在5.8，控制培养温度为24℃，光照为70μmol／ms，进行芽诱导培养。
芽的分化和增殖
小芽接种于小芽诱导培养基上4周后，小芽开始膨大，出现黄绿色突起，2周后可见明显的愈伤组织。继续培养1个月，切下带芽愈伤组织分别放入增殖培养基中，该培养基的营养成分为MS+6-BA1mg/L-+NAA0.1mg／L，基本组成成分为蔗糖30g／L、琼脂6g／L，培养基的pH值控制在5.8，控制培养温度为24℃，光照为70μmol／ms，进行增殖培养，基部愈伤组织上小芽比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好。
不定芽壮苗培养
在诱导培养基上诱导出的丛生芽每丛只有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基中，该培养基的营养成分为MS+6-BA0.5mg／L+NAA0.1mg／L，基本组成成分为蔗糖30g／L、琼脂6g／L，培养基的pH值控制在5.8，控制培养温度为24℃，光照为70μmol／ms，进行壮苗培养，不定芽迅速伸长，30天后可以长到2-3cm。
生根培养
取2-3cm的小植株，转接入生根培养基中，该培养基的营养成分为MS+NAA0.1mg／L，基本组成成分为蔗糖30g／L、琼脂6g／L，培养基的pH值控制在5.8，控制培养温度为24℃，光照为70μmol／ms，诱导生根。20天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至2-3cm。
炼苗与移栽
生根培养30天左右，根系长至1-2cm左右时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理。
实施例2
无菌材料的获得
取花叶山菅兰从基部萌发的小芽，用自来水冲洗2h后于超净工作台上，用75％的乙醇浸泡30s，1‰升汞浸泡15min，无菌水冲洗5-6次，无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成1cm长，接种于小芽诱导培养基上，该培养基的营养成分为MS+6-BA2.0mg／L+NAA0.2mg／L，基本组成成分为蔗糖30g／L、琼脂6g／L，培养基的pH值控制在5.8，控制培养温度为24℃，光照为70μmol／ms，进行芽诱导培养。
芽的分化和增殖
小芽接种于小芽诱导培养基上4周后，小芽开始膨大，出现黄绿色突起，2周后可见明显的愈伤组织。继续培养1个月，切下带芽愈伤组织分别放入增殖培养基中，该培养基的营养成分为MS+6-BA1.5mg／L-+NAA0.2mg／L，基本组成成分为蔗糖30g／L、琼脂6g／L，培养基的pH值控制在5.8，控制培养温度为24℃，光照为70μmol／ms，进行增殖培养，基部愈伤组织上小芽比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好。
不定芽壮苗培养
在诱导培养基上诱导出的丛生芽每丛只有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基中，该培养基的营养成分为MS+6-BA0.8mg／L+NAA0.2mg／L，基本组成成分为蔗糖30g／L、琼脂6g／L，培养基的pH值控制在5.8，控制培养温度为24℃，光照为70μmol／ms，进行壮苗培养，不定芽迅速伸长，30天后可以长到2-3cm。
生根培养
取2-3cm的小植株，转接入生根培养基中，该培养基的营养成分为MS+NAA0.2mg／L，基本组成成分为蔗糖30g／L、琼脂6g／L，培养基的pH值控制在5.8，控制培养温度为24℃，光照为70μmol／ms，诱导生根。20天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至2-3cm。
炼苗与移栽
生根培养30天左右，根系长至1-2cm左右时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理，其移栽成活率可以达到95％。
实施例3
无菌材料的获得
取花叶山菅兰从基部萌发的小芽，用自来水冲洗2h后于超净工作台上，用75％的乙醇浸泡30s，1‰升汞浸泡15min，无菌水冲洗5-6次，无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成1cm长，接种于小芽诱导培养基上，该培养基的营养成分为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg／L，基本组成成分为蔗糖30g/L、琼脂6g／L，培养基的pH值控制在5.8，控制培养温度为25℃，光照为80μmol／ms，进行芽诱导培养。
芽的分化和增殖
小芽接种于小芽诱导培养基上4周后，小芽开始膨大，出现黄绿色突起，2周后可见明显的愈伤组织。继续培养1个月，切下带芽愈伤组织分别放入增殖培养基中，该培养基的营养成分为MS+6-BA3mg／L-+NAA0.3mg／L，基本组成成分为蔗糖30g／L、琼脂6g／L，培养基的pH值控制在5.8，控制培养温度为25℃，光照为80μmol／ms，进行增殖培养，基部愈伤组织上小芽比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好。
不定芽壮苗培养
在诱导培养基上诱导出的丛生芽每丛只有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基中，该培养基的营养成分为MS+6-BA1.0mg／L+NAA0.1mg／L，基本组成成分为蔗糖30g/L、琼脂6g／L，培养基的pH值控制在5.8，控制培养温度为25℃，光照为80μmol／ms，进行壮苗培养，不定芽迅速伸长，30天后可以长到2-3cm。
生根培养
取2-3cm的小植株，转接入生根培养基中，该培养基的营养成分为MS+NAA0.5mg／L，基本组成成分为蔗糖30g/L、琼脂6g／L，培养基的pH值控制在5.8，控制培养温度为25℃，光照为80μmol／ms，诱导生根。20天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至2-3cm。
炼苗与移栽
生根培养30天左右，根系长至1-2cm左右时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理，其移栽成活率可以达到95％。
实施例4
无菌材料的获得
取花叶山菅兰从基部萌发的小芽，用自来水冲洗2h后于超净工作台上，用75％的乙醇浸泡30s，1‰升汞浸泡15min，无菌水冲洗5-6次，无菌滤纸吸干表面水份，取小芽基部切成1cm长，接种于小芽诱导培养基上，该培养基的营养成分为MS+6-BA5.0mg／L+NAA0.5mg／L，基本组成成分为蔗糖30g／L、琼脂6g／L，培养基的pH值控制在5.8，控制培养温度为30℃，光照为100μmol／ms，进行芽诱导培养。
芽的分化和增殖
小芽接种于小芽诱导培养基上4周后，小芽开始膨大，出现黄绿色突起，2周后可见明显的愈伤组织。继续培养1个月，切下带芽愈伤组织分别放入增殖培养基中，该培养基的营养成分为MS+6-BA3mg／L-+NAA0.3mg／L，基本组成成分为蔗糖30g／L、琼脂6g／L，培养基的pH值控制在5.8，控制培养温度为30℃，光照为100μmol／ms，进行增殖培养，基部愈伤组织上小芽比较多，但不影响不定芽的增殖，不定芽生长迅速并无玻璃化等不良现象，在该培养中生长发育良好。
不定芽壮苗培养
在诱导培养基上诱导出的丛生芽每丛只有2-3株可以伸长，其余处于矮化状态，分成小丛或单芽后，放入壮苗培养基中，该培养基的营养成分为MS+6-BA2mg／L+NAA0.2mg／L，基本组成成分为蔗糖30g／L、琼脂6g／L，培养基的pH值控制在5.8，控制培养温度为30℃，光照为100μmol／ms，进行壮苗培养，不定芽迅速伸长，30天后可以长到2-3cm。
生根培养
取2-3cm的小植株，转接入生根培养基中，该培养基的营养成分为MS+NAA1mg／L，基本组成成分为蔗糖30g／L、琼脂6g／L，培养基的pH值控制在5.8，控制培养温度为30℃，光照为100μmol／ms，诱导生根。20天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后可以长至2-3cm。
炼苗与移栽
生根培养30天左右，根系长至1-2cm左右时，选择根系发达生长健壮的无菌苗，室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即可移栽室外，给予肥水管理即可。
Claims (10)
1.花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，该方法采用以下步骤：
(1)取花叶山菅兰从基部萌发的小芽，冲洗干净后依次用75v/v％的乙醇浸泡30s、1wt‰升汞浸泡15min、无菌水冲洗5-6次，吸干表面水份后取小芽基部切成1cm长，接种于小芽诱导培养基上，该培养基上的营养成分为MS+6-BA1.0-5.0mg/L+NAA0.1-0.5mg/L，控制培养温度为24-30℃，光照为70-100μmol/m2·s，进行芽诱导培养；
(2)小芽接种于小芽诱导培养基上4周后开始膨大并出现黄绿色突起，2周后见明显的愈伤组织，继续培养1个月，切下带芽愈伤组织分别放入增殖培养基中，该培养基的营养成分为MS+6-BA1.0-3.0mg/L-+NAA0.1-0.3mg/L，控制培养温度为24-30℃，光照为70-100μmol/m2·s，进行增殖培养；
(3)诱导出的丛生芽每丛有2-3株伸长，其余处于矮化状态，分成小丛或单芽后放入壮苗培养基中，该培养基的营养成分为MS+6-BA0.5-2.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L上，控制培养温度为24-30℃，光照为70-100μmol/m2·s，进行壮苗培养，不定芽迅速伸长，30天后长到2-3cm；
(4)取2-3cm的小植株转接入生根培养基中诱导生根，该培养基的营养成分为MS+NAA0.1-1.0mg/L，控制培养温度为24-30℃，光照为70-100μmol/m2·s，20天后幼苗基部分化出许多白色的根原基，30天后长至2-3cm；
(5)生根培养30天，根系长至1-2cm，选择根系发达生长健壮的无菌苗,室内开瓶炼苗3天，取出后洗净根部琼脂，在温室中驯化40天后，即移栽室外。
2.根据权利要求1所述的花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，所述的小芽诱导培养基的营养成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L或MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L。
3.根据权利要求2所述的花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，所述的小芽诱导培养基的营养成分为MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L。
4.根据权利要求1所述的花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，所述的增殖培养基的营养成分为MS+6-BA1mg/L-+NAA0.1mg/L，MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L或MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L。
5.根据权利要求4所述的花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，所述的增殖培养基的营养成分为MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L。
6.根据权利要求1所述的花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，所述的壮苗培养基的营养成分为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L,MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L或MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L。
7.根据权利要求6所述的花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，所述的壮苗培养基的营养成分为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。
8.根据权利要求1所述的花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，所述的生根培养基的营养成分为MS+NAA0.1mg/L，MS+NAA0.5mg/L或MS+NAA1mg/L。
9.根据权利要求8所述的花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，所述的生根培养基的营养成分为MS+NAA0.5mg/L。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的花叶山菅兰的组织培养方法，其特征在于，小芽诱导培养基、增殖培养基、壮苗培养基、生根培养基还含有基本成分，该基本成分为蔗糖30g/L、琼脂6g/L，上述培养基的pH值控制在5.8。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Chen Jianhua Inventor after: Huang Jianrong Inventor after: Chen Di Inventor after: Zhang Chendi Inventor after: Shen Qin Inventor before: Chen Jianhua Inventor before: Huang Jianrong Inventor before: Shen Qin |
|
| COR | Change of bibliographic data | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |