CN103739644A - 一种布雷菲德菌素a糖基化衍生物及其制备与应用 - Google Patents
一种布雷菲德菌素a糖基化衍生物及其制备与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103739644A CN103739644A CN201310754867.1A CN201310754867A CN103739644A CN 103739644 A CN103739644 A CN 103739644A CN 201310754867 A CN201310754867 A CN 201310754867A CN 103739644 A CN103739644 A CN 103739644A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- brefeldin
- formula
- molecular sieve
- glycosylated derivative
- filtrate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种式（Ⅰ）所示布雷菲德菌素A糖基化衍生物及其制备方法与应用，本发明提供一种新的布雷菲德菌素A糖基化衍生物，糖基化布雷菲德菌素A水溶性增强，且保留了布雷菲德菌素A的肿瘤抑制活性，体外检测对人食管癌等癌细胞的有效抑制率高达80%；通过化合物(Ⅱ)条件优化，获得优选的布雷菲德菌素A糖基化衍生物制备方法；
Description
（一）技术领域
本发明涉及一种布雷菲德菌素A衍生物合成技术，特别涉及一类布雷菲德菌素A糖基化衍生物制备及其应用。
（二）背景技术
布雷菲德菌素A((+)-Brefeldin A，BFA)，是一种丝状真菌合成的大环内酯类抗生素，也称之为斜卧菌素、壳二孢素。布雷菲德菌素A分子结构中含有5个手性中心和1个13元大环内酯结构，结构如式(I)所示。1958年，Singleton等人从Penicillium decumben发酵液中首次分离得到布雷菲德菌素A。大量研究报道，布雷菲德菌素A诱导高尔基体分解，抑制蛋白质由内质网向高尔基体的顺向转运过程，具有抗真菌、抗病毒、抗有丝分裂和抗线虫等生物学活性。美国肿瘤研究院(NCI)研究发现，布雷菲德菌素A能够诱导肿瘤细胞分化和凋亡，在小鼠肿瘤模型上表现出明确的抗肿瘤活性。布雷菲德菌素A作为化疗试剂母核用于癌症治疗药物具有广阔的应用前景。
然而，就成药性而言，布雷菲德菌素A尚存在一些不足：①布雷菲德菌素A水溶性低；②布雷菲德菌素A胞内半衰期短，Bruening等发现布雷菲德菌素A在细胞内会在谷胱甘肽转硫酶的作用下，迅速与谷胱甘肽结合并随后被转移出细胞；③布雷菲德菌素A缺乏作用靶标专一性，对正常体细胞有毒副作用。为了克服这些缺陷，对布雷菲德菌素A进行结构修饰提高其成药性日益受到重视。
糖缀合物(Glycoconjugate)是一类糖与非糖类化合物，即甙元(Aglycon)如蛋白质、抗体、多肽、脂、核酸等生物分子以及其它小分子，以共价键相互连结而成的化合物。蛋白质翻译后糖基化是人们所熟知的糖基化过程，糖基化作用增加了蛋白质的结构复杂性和相应的功能。通常，糖苷以O-糖苷键、N-糖苷键与甙元共价连接，有些情况下通过C-糖苷键或S-糖苷键等与甙元连接。天然的糖缀合物可在不同的位置上结合1分子或1分子以上的糖基，糖链的长度也从单糖至六糖、七糖不等，甚至17糖。红霉素A肟(erythromycin A)分子含有两分子、活性必需的脱氧己糖结构，缺少任何一种糖将导致效价丧失；脱氧氨基糖存在其它的大环内酯抗生素如竹桃霉素(oleandomycin)和巨大霉素(megalomicin)结构中。天然糖基化抗生素的生物合成途径启发我们选择性糖基化修饰布雷菲德菌素A，在保留布雷菲德菌素A抗癌活性的基础上改善药物的物理化性质、提高其胞内稳定性和作用靶标专一性，降低其毒副作用。
目前鲜有布雷菲德菌素A糖基化方法的报道。本专利发明一种布雷菲德菌素A糖基化修饰方法，以及一类具有抗肿瘤活性的布雷菲德菌素A糖基化衍生物合成工艺。
（三）发明内容
本发明目的是通过三氯乙酰亚胺酯糖基化方法对布雷菲德菌素A的C7位羟基进行糖基化修饰，获得5个新的布雷菲德菌素A糖基化衍生物，并评价糖基化修饰后布雷菲德菌素A的抗肿瘤活性。本发明的目的在于提供一类具有明显抗肿瘤活性的布雷菲德菌素A糖基化衍生物，对人食管癌细胞有效抑制达80%以上，以及一种简单的布雷菲德菌素A糖基化衍生物的制备方法。
本发明采用的技术方案是：
本发明提供一种式（Ⅰ）所示布雷菲德菌素A糖基化衍生物，
式（Ⅰ）中，R为五碳糖、六碳糖、氨基六碳糖及六碳糖酸等（R还可以是其他六碳糖衍生物或五碳糖衍生物），优选所述R基团为D-α-葡萄糖、D-α-氨基葡萄糖、D-α-阿拉伯糖、D-α-葡萄糖酸或D-α-甘露糖，更优选所述R为D-α-葡萄糖。
本发明还提供一种制备所述布雷菲德菌素A糖基化衍生物的方法，所述方法为：（1）将式（Ⅲ）所示化合物和式（Ⅳ）所示化合物布雷菲德菌A溶于有机溶剂中，加入活化的分子筛a，室温（25℃）下磁力搅拌10～60分钟（优选10min）除水，降温冷却至0～-70℃（优选-30℃），再加入催化剂和活化的分子筛b，在-70～0℃（优选-30℃）条件下搅拌反应完全后，反应液经分离纯化获得式（Ⅱ）所示化合物；所述分子筛a为3
型、4
型或5型分子筛，所述分子筛b与分子筛a相同，所述催化剂为路易斯酸；所述布雷菲德菌A与式（Ⅲ）所示化合物的质量比为1:2～5（优选1:2.5～4），所述布雷菲德菌A与活化的分子筛a和活化的分子筛b的质量比为1:2～5：2～5（优选1:2.5:2.5），所述催化剂的体积用量以布雷菲德菌A质量用量计为50～200微升/克（优选200微升/克），所述有机溶剂的体积用量以布雷菲德菌A质量用量计为100～300毫升/克（优选200毫升/克）；（2）将式（Ⅱ）化合物用溶剂溶解，冰浴条件下加入试剂，在0℃下搅拌10分钟后再于0～35℃（优选25℃）下搅拌反应2小时至反应完全，向反应液中加入阳离子交换树脂搅拌至反应液pH为中性（优选pH为7），过滤，获得滤饼和滤液a，滤饼用二氯甲烷淋洗，合并滤液a和洗涤液并用饱合食盐水清洗，无水硫酸镁干燥，过滤，获得滤液b，滤液b减压浓缩，浓缩液以体积比1:1的乙酸乙酯和石油醚混合液为展开剂进行薄层层析分离，收集Rf值为0.1～0.2的组分，减压浓缩后真空干燥，获得式（Ⅰ）所示布雷菲德菌素A糖基化衍生物；所述溶剂为无水甲醇、无水乙醇、水或乙腈，优选无水甲醇，所述试剂为甲醇钠、乙醇钠、乙酸或甲酸，优选甲醇钠；
式（Ⅱ）、（Ⅲ）中R均为五碳糖、六碳糖、氨基六碳糖或六碳糖酸等（优选D-α-葡萄糖、D-α-氨基葡萄糖、D-α-阿拉伯糖、D-α-葡萄糖酸或D-α-甘露糖，更优选D-α-葡萄糖），R1均为酰基保护基团，优选为乙酰基。
进一步，步骤（1）所述有机溶剂为下列之一：二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、乙酸乙酯、氯仿、1,2-二氯乙烷、苯、甲苯或二甲苯，优选为二氯甲烷。
进一步，优选步骤（1）所述布雷菲德菌A与式（Ⅲ）所示三氯乙酰亚胺酯糖基供体的质量比为1:2.5～4，所述布雷菲德菌A与活化的分子筛a和活化的分子筛b的质量比为1:2.5：2.5，所述催化剂的体积用量以布雷菲德菌A质量用量计为200微升/克，所述有机溶剂的体积用量以布雷菲德菌A质量用量计为150毫升/克。
进一步，步骤（1）所述催化剂为三氟化硼乙醚、三氟甲磺酸三甲基硅烷、三氟甲磺酸三乙基硅烷或三氟甲磺酸银中的一种，优选为三氟化硼乙醚。
进一步，步骤（1）所述反应是在-70～0℃条件下反应3～8小时，更优选在-30℃反应4小时。
进一步，步骤（1）所述反应液分离纯化的方法为：反应结束后，将反应液过滤，获得滤液c和滤饼，滤饼用二氯甲烷淋洗，将洗涤液与滤液c合并后用饱合食盐水洗涤三次，加入无水硫酸镁干燥，过滤，获得滤液d，滤液d减压浓缩，浓缩液以体积比1:1的乙酸乙酯与石油醚混合液为展开剂进行薄层层析，收集Rf值为0.1～0.2的组分，减压浓缩后真空干燥，获得式（Ⅱ）所示化合物。
进一步，步骤（2）所述式（Ⅱ）化合物与试剂的质量比为1：0.1～0.2，所述溶剂体积用量以式（Ⅱ）化合物质量计为200～400毫升/克。
本发明还提供一种所述布雷菲德菌素A糖基化衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
进一步，本发明所述布雷菲德菌素A糖基化衍生物在制备抑制人食管癌细胞TE-1药物中的应用。
本发明所述分子筛a和分子筛b均为分子筛，所述滤液a、滤液b、滤液c和滤液d为不同步骤获得的滤液，只是为了便于表述不同步骤用量不同而命名，字母本身没有含义。
本发明的优点主要体现在：本发明提供一种新的布雷菲德菌素A糖基化衍生物，糖基化布雷菲德菌素A水溶性增强，且保留了布雷菲德菌素A的肿瘤抑制活性，体外检测对人食管癌等癌细胞的有效抑制率高达80%；通过化合物(Ⅱ)条件优化，获得优选的布雷菲德菌素A糖基化衍生物制备方法。
（四）具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
本发明所述4
分子筛采购自百灵威试剂公司，活化方法：在马弗炉中350℃活化过夜。
实施例1：7-O-（D-α-葡萄糖）-布雷菲德菌素A
（1）7-O-(2,3,4,6-四乙酰基-D-α-葡糖糖)-布雷菲德菌素A
称取0.8克三氯乙酰亚胺酸酯-2,3,4,6-四乙酰基-D-α-葡糖糖苷和0.2克布雷菲德菌素A固体粉末，溶解于30毫升无水二氯甲烷，加入0.5克活化过的4
分子筛，室温（25℃）下磁力搅拌30分钟除水，甲醇冷却回流降温至-30℃，再加入40微升三氟化硼乙醚、0.5克活化的4
分子筛，磁力搅拌反应4小时。反应结束后，将反应液过滤，获得滤液c和滤饼，将滤饼用30毫升二氯甲烷淋洗，将洗涤液与滤液c合并后用饱合食盐水清洗3次，无水硫酸镁干燥，过滤，获得滤液d，滤液d减压浓缩，浓缩物以乙酸乙酯:石油醚=1:1(v/v)为展开剂进行薄层层析分离，收集Rf值为0.1～0.2的组分，减压浓缩后真空干燥，获得136毫克淡黄色粉末，即7-O-(2,3,4,6-四乙酰基-D-α-葡糖糖)-布雷菲德菌素A。
化合物表征：
1H-NMR(500MHz,CDCl3)δ7.28(m,1H),5.92(d,J=15.6Hz,1H),5.82–5.57(m,1H),5.12(dd,J=8.7,4.5Hz,1H),4.85(dd,J=10.4,5.7Hz,1H),4.11(d,J=8.7Hz,1H),2.49–2.05(m,4H),2.20,2.07,2.09,2.29(12H)，2.03(d,J=27.9Hz,1H),1.93–1.78(m,3H),1.77–1.69(m,1H),1.67–1.57(m,1H),1.69–1.58(m,1H),1.57–1.45(m,1H),1.26(t,J=6.2Hz,3H),0.92(dd,J=19.6,12.7Hz,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ170.73,170.16,169.66,169.42,166.30,151.62,135.90,121.18,117.57,96.76,75.77,73.80,72.91,71.76,70.28,68.20,66.88,63.03,51.54,43.95,41.66,38.91,34.03,31.75,26.62,21.47,20.77,20.74,20.70,20.57.
（2）7-O-D-α-葡萄糖-布雷菲德菌素A
称取步骤（1）制备的100毫克产物，用20毫升无水甲醇溶解，冰浴条件下加入10毫克甲醇钠，0℃反应10分钟，室温（25℃）继续反应2小时，向反应液中加入5克50WX4-200阳离子交换树脂（购自百灵威试剂公司），搅拌反应10分钟至反应液至中性，过滤，获得滤液a和滤饼，滤饼用二氯甲烷淋洗，合并滤液a和洗涤液并用饱合食盐水清洗，无水硫酸镁干燥，过滤，获得滤液b，滤液b减压浓缩，浓缩物以乙酸乙酯:石油醚=1:1(v/v)为展开剂进行薄层层析，收集Rf值为0.1～0.2的组分，减压浓缩真空抽干，获得30毫克白色固体，即7-O-D-α-葡萄糖-布雷菲德菌素A。
化合物表征：
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.37(dt,J=8.8,4.4Hz,1H),5.94(s,1H),5.72(s,1H),5.30(s,1H),4.87(s,1H),4.33(d,J=15.3Hz,2H),4.10(s,1H),3.87–3.62(m,6H),3.08(s,1H),2.36(dd,J=17.0,8.5Hz,1H),2.20(ddd,J=26.4,15.7,11.2Hz,1H),2.13–1.89(m,7H),1.56–1.48(m,2H),0.89(s,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ166.25,151.60,136.62,130.55,117.69,114.18,100.08,76.09,76.05,72.63,71.81,65.61,63.79,55.59,52.15,44.36,43.31,41.37,34.20,31.92,26.75,20.93.
实施例2：7-O-(D-α-甘露糖)-布雷菲德菌素A
(1)7-O-(2,3,4,6-四-O-乙酰基-D-α-吡喃甘露糖)-布雷菲德菌素A
称取0.5克1-三氯乙酰亚胺酸酯-2,3,4,6-四乙酰基-D-α-甘露糖，溶解于30毫升无水二氯甲烷，加入0.50克活化的4
分子筛及0.2克布雷菲德菌素A粉末，室温（25℃）下磁力搅拌30分钟，采用甲醇冷却回流至-30℃，再加入40微升三氟化硼乙醚及0.5克活化的4
分子筛，在-30℃搅拌反应4小时。其他操作同实施例1，获得127毫克淡黄色粉末。
化合物表征：
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.28(m,1H),5.92(d,J=15.6Hz,1H),5.82–5.57(m,1H),5.12(dd,J=8.7,4.5Hz,1H),4.85(dd,J=10.4,5.7Hz,1H),4.11(d,J=8.7Hz,1H),2.49–2.05(m,4H),2.20,2.07,2.09,2.29(12H)，2.03(d,J=27.9Hz,1H),1.93–1.78(m,3H),1.77–1.69(m,1H),1.67–1.57(m,1H),1.69–1.58(m,1H),1.57–1.45(m,1H),1.26(t,J=6.2Hz,3H),0.92(dd,J=19.6,12.7Hz,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ170.73,170.16,169.66,169.42,166.30,151.62,135.90,121.18,117.57,96.76,75.77,73.80,72.91,71.76,70.28,68.20,66.88,63.03,51.54,43.95,41.66,38.91,34.03,31.75,26.62,21.47,20.77,20.74,20.70,20.57.
(2)7-O-(D-α-吡喃甘露糖)-布雷菲德菌素A
称取步骤（1）制备的100毫克产物，溶解于20.0毫升无水甲醇，冰浴条件下加入10.0毫克甲醇钠，0℃反应10分钟，升温至室温继续反应2小时至底物反应完全。反应液中加入5克
50WX4-200阳离子交换树脂，其他操作同实施例1，获得62毫克白色固体，即7-O-(D-α-吡喃甘露糖)-布雷菲德菌素A，收率67.3%。
化合物表征：
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.37(dt,J=8.8,4.4Hz,1H),5.94(s,1H),5.72(s,1H),5.30(s,1H),4.87(s,1H),4.33(d,J=15.3Hz,2H),4.10(s,1H),3.87–3.62(m,6H),3.08(s,1H),2.36(dd,J=17.0,8.5Hz,1H),2.20(ddd,J=26.4,15.7,11.2Hz,1H),2.13–1.89(m,7H),1.56–1.48(m,2H),0.89(s,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ166.25,151.60,136.62,130.55,117.69,114.18,100.08,76.09,76.05,72.63,71.81,65.61,63.79,55.59,52.15,44.36,43.31,41.37,34.20,31.92,26.75,20.93.
实施例3：7-O-(D-α-氨基葡萄糖)-布雷菲德菌素A
(1)7-O-(3,4,6-三乙酰基-2-脱氧-D-α-氨基葡萄糖)-布雷菲德菌素A
称取0.5克三氯乙酰亚胺酸酯氨基葡萄糖苷和0.2克布雷菲德菌素A，溶解于30毫升无水二氯甲烷，加入0.5克活化的4
分子筛，0℃搅拌30分钟。采用甲醇冷却回流降温至-30℃，再加入40微升三氟化硼乙醚及0.5克活化的4
分子筛，-30℃反应4小时。其他操作同实施例1，获得84毫克淡黄色固体。
化合物表征：
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.28(m,1H),5.92(d,J=15.6Hz,1H),5.82–5.57(m,1H),5.12(dd,J=8.7,4.5Hz,1H),4.85(dd,J=10.4,5.7Hz,1H),4.11(d,J=8.7Hz,1H),2.49–2.05(m,4H),2.20,2.07,2.09,2.29(12H），2.03(d,J=27.9Hz,1H),1.93–1.78(m,3H),1.77–1.69(m,1H),1.67–1.57(m,1H),1.69–1.58(m,1H),1.57–1.45(m,1H),1.26(t,J=6.2Hz,3H),0.92(dd,J=19.6,12.7Hz,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ170.73,170.16,169.66,169.42,166.30,151.62,135.90,121.18,117.57,96.76,75.77,73.80,72.91,71.76,70.28,68.20,66.88,63.03,51.54,43.95,41.66,38.91,34.03,31.75,26.62,21.47,20.77,20.74,20.70,20.57.
(2)7-O-(D-α-2-脱氧-乙酰亚胺-葡萄糖)-布雷菲德菌素A
称取步骤（1）制备的50毫克产物，用20毫升无水甲醇溶解，冰浴条件下加入10毫克甲醇钠，0℃磁力搅拌反应10分钟，室温（25℃）继续反应2小时，至底物反应完全，加入3克
50WX4-200阳离子交换树脂，其他操作同实施例1，获得30毫克白色固体。
化合物表征：
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.37(dt,J=8.8,4.4Hz,1H),5.94(s,1H),5.72(s,1H),5.30(s,1H),4.87(s,1H),4.33(d,J=15.3Hz,2H),4.10(s,1H),3.87–3.62(m,6H),3.08(s,1H),2.36(dd,J=17.0,8.5Hz,1H),2.20(ddd,J=26.4,15.7,11.2Hz,1H),2.13–1.89(m,6H),1.73-1.78(m,3H),1.56–1.48(m,2H),0.89(s,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ169.44,166.25,151.60,136.62,130.55,117.69,114.18,100.08,76.09,76.05,72.63,71.81,65.61,63.79,55.59,52.15,44.36,43.31,41.37,34.20,31.92,26.75,20.93,18.3.
实施例4：7-O-(D-α-阿拉伯糖)-布雷菲德菌素A
(1)7-O-(D-α-2,3,5-三乙酰基-阿拉伯糖)-布雷菲德菌素A
称取0.5克三氯乙酰亚胺酸酯阿拉伯糖苷和0.2克布雷菲德菌素A固体粉末，溶解于30毫升无水二氯甲烷，加入0.5克活化的4
分子筛，0℃搅拌30分钟去除水分，采用甲醇冷却回流降温至-30℃，再加入40微升三氟化硼乙醚及0.5克活化的4
分子筛，-30℃反应4小时。其他操作同实施例1，获得75毫克白色固体粉末。
化合物表征：
1H NMR(500MHz,CDCl3):7.33(d=15.77Hz,1H)，6.52(d,J=2.8Hz,1H),5.90-5.80(d,2H)，5.38-5.10(m,5H),4.83(m,1H)，4.12(d,2H),3.84(d,J=13.2Hz,1H),2.35(m,1H),2.25(m,1H),2.17(m,1H),2.13(s,3H),2.00(s,6H),1.99(s,3H)，1.84(m,2H),1.60-1.75(m,2H),1.50-1.60(m,4H),1.25(d=6.29Hz,3H).0.88-0.95(m,1H).13C NMR(100MHz,CDCl3):δ170.1,170.0,169.8,166.2,160.9,151.0,135.9,117.2,94.0,90.8,68.2,76.2,75.1,67.1,67.0,62.7,51.4,43.6,40.4,38.0,36.1,33.7,31.8,21.4，20.8,20.6,20.5,20.4.
(2)7-O-(D-α-阿拉伯糖)-布雷菲德菌素A
称取步骤（1）制备的50毫克产物，用20毫升无水甲醇溶解，冰浴条件下加入10毫克甲醇钠，0℃反应10分钟，室温（25℃）继续反应2小时，至底物反应完全，加入3克
50WX4-200阳离子交换树脂，其他操作同实施例1，获得30毫克白色固体，收率52%(w/w)。
化合物表征：
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.28(m,1H),5.84(d,J=15.6Hz,1H),5.60(m,1H),5.17(dd,J=8.7,4.5Hz,2H),4.85-4.60(m,4H),4.32(m,2H),4.17(d,J=8.7Hz,1H),2.49(m,4H),2.03(d,J=27.9Hz,1H),1.97-1.90(m,4H),1.77–1.69(m,1H),1.67–1.57(m,1H),1.69–1.58(m,1H),1.57–1.45(m,1H),1.26(t,J=6.2Hz,3H),0.92(dd,J=19.6,12.7Hz,1H).13CNMR(126MHz,CDCl3)δ166.08,152.54,138.76,136.68,129.75,128.35,127.60,127.07,117.09,99.84,92.60,75.33,71.79,71.27,69.71,68.93,65.67,51.72,44.10,43.29,43.09,40.95,33.86,31.62,29.38,26.49,20.65.
实施例5：7-O-(D-α-葡萄糖酸)-布雷菲德菌素A
(1)7-O-(D-α-2,3,4-三乙酰基-1-甲酯-葡萄糖)-布雷菲德菌素A
称取0.50克三氯乙酰亚胺酸酯甲酯葡萄糖苷和0.2克布雷菲德菌素A固体粉末，溶解于30毫升无水二氯甲烷，加入0.5克活化的4分子筛，0℃搅拌30分钟除去水分，采用甲醇冷却回流降温至-30℃，再加入40微升三氟化硼乙醚及0.5克活化的4
分子筛，-30℃反应4小时。其他操作同实施例1，获得132毫克白色固体粉末。
化合物表征：
1H NMR(CDCl3)δ7.22(dd,J=15.7,3.4Hz,1H),5.75–5.65(m,2H),5.35–5.17(m,5H),5.10–5.07(d,J=7.2Hz,2H),4.84(ddd,J=12.4,6.2,1.6Hz,1H)4.14(d,1H,J=9.6Hz,1H),3.74(s,3H),2.44(td,J=16.3,9.4Hz,1H),2.30(d,J=14.9,9.6,5.6Hz,1H),2.10–2.02(s,12H),1.88–1.81(m,2H),1.77–1.63(m,2H),1.59(ddd,J=14.4,6.5,3.7,1.4Hz,2H),1.56–1.47(m,2H),1.25(d,J=6.29Hz,3H),0.97–0.88(m,1H).13C NMR(CDCl3)δ170.08,169.35,169.25,168.29,166.91,165.72,147.15,135.71,131.13,118.31,99.64,75.21,72.62,71.91,71.71,71.1,69.16,52.97,49.68,44.05,40.02,38.28,34.05,31.72,26.50,21.26,20.75,20.74,20.6,20.49.
(2)7-O-(D-α-葡萄糖醛酸)-布雷菲德菌素A
称取步骤（1）制备的产物100毫克，用20.0毫升无水甲醇溶解，冰浴条件下加入10.0毫克甲醇钠，0℃搅拌反应10分钟，室温继续反应2小时，加入5克50WX4-200阳离子交换树脂，其他操作同实施例1，获得28毫克白色固体，收率71.4%(w/w)。
化合物表征：
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.22(d,J=15.7,3.4Hz,1H),5.75–5.65(m,2H),5.27–5.17(m,2H),5.10(tt,J=5.5,2.8Hz,1H),4.84(dd,J=12.4,6.2,1.6Hz,1H),2.44(td,J=16.3,9.4Hz,1H),2.30(d,J=14.9,9.6,5.6Hz,1H),2.10–2.08(m,2H),2.06–2.02(m,2H),1.88–1.81(m,2H),1.77–1.63(m,2H),1.59(d,J=14.4,6.5,3.7,1.4Hz,2H),1.56–1.47(m,2H),1.25(d,J=6.29Hz,3H),0.97–0.88(m,1H).13C NMR(126MHz,CDCl3)δ170.70,165.72,147.15,135.71,131.13,118.31,75.21,71.91,58.24,49.68,44.05,40.02,38.28,34.05,31.72,26.50,21.26,20.74.
实施例6
实验考察了实施例1～5制备的7-O-（D-α-葡萄糖）-布雷菲德菌素A、7-O-(D-α-甘露糖)-布雷菲德菌素A、7-O-(D-α-氨基葡萄糖)-布雷菲德菌素A、7-O-(D-α-阿拉伯糖)-布雷菲德菌素A、7-O-(D-α-葡萄糖酸)-布雷菲德菌素A对人食管癌细胞TE-1（购自上海上海中科院生物化学与细胞生物学研究所）抗肿瘤活性。
将人食管癌细胞TE-1按5×103个/孔均匀分散接种于细胞培养96孔板中，培养液选择商品化含10%胎牛血清的达氏修正培养基(dulbecco'smodified eagle medium，DMEM，美国Gibco公司)，置于5%二氧化碳培养箱37℃培养24小时后，向各孔中加入不同浓度（见表1所示）7-O-D-α-葡萄糖-布雷菲德菌素A、7-O-(D-α-甘露糖)-布雷菲德菌素A、7-O-(D-α-氨基葡萄糖)-布雷菲德菌素A、7-O-(D-α-阿拉伯糖)-布雷菲德菌素A、7-O-(D-α-葡萄糖酸)-布雷菲德菌素A，每个处理重复三次实验。37℃培养48小时后，每孔加入10微升WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（碧云天生物技术研究所），37℃孵育2小时后，利用酶标仪测定每孔450nm处光吸收值，以不加入布雷菲德菌素A衍生物的细胞培养液作为对照组，并以公式（1）计算得到其抗肿瘤细胞的相对活性。
表1糖基化布雷菲德菌素A衍生物细胞毒性评价
表1结果表明，上述5种布雷菲德菌素A糖基化衍生物都具有抗肿瘤活性。
Claims (10)
1.一种式（Ⅰ）所示布雷菲德菌素A糖基化衍生物，
式（Ⅰ）中，R为五碳糖、六碳糖、氨基六碳糖或六碳糖酸。
2.如权利要求1所述布雷菲德菌素A糖基化衍生物，其特征在于所述R为D-α-葡萄糖、D-α-氨基葡萄糖、D-α-阿拉伯糖、D-α-葡萄糖酸或D-α-甘露糖。
3.一种制备权利要求1所述布雷菲德菌素A糖基化衍生物的方法，其特征在于所述方法为：（1）将式（Ⅲ）所示化合物和式（Ⅳ）所示布雷菲德菌A溶于有机溶剂中，加入活化的分子筛a，室温下磁力搅拌10～60分钟，降温至0～-70℃，再加入催化剂和活化的分子筛b，磁力搅拌反应完全后，反应液经分离纯化获得式（Ⅱ）所示化合物；所述分子筛a为3
型、4
型或5型分子筛，所述分子筛b与分子筛a相同，所述催化剂为路易斯酸；所述布雷菲德菌A与式（Ⅲ）所示化合物的质量比为1:2～5，所述布雷菲德菌A与活化的分子筛a和活化的分子筛b的质量比为1:2～5：2～5，所述催化剂的体积用量以布雷菲德菌A质量用量计为50～200微升/克，所述有机溶剂的体积用量以布雷菲德菌A质量用量计为100～300毫升/克；（2）将式（Ⅱ）化合物用溶剂溶解，冰浴条件下加入试剂，在0℃下搅拌10min后再于0～35℃下搅拌反应2h，向反应液中加入阳离子交换树脂搅拌至反应液pH为中性，过滤，获得滤饼和滤液a，滤饼用二氯甲烷淋洗，合并滤液a和洗涤液并用饱合食盐水清洗，无水硫酸镁干燥，过滤，获得滤液b，滤液b减压浓缩，浓缩液以体积比1:1的乙酸乙酯和石油醚混合液为展开剂进行薄层层析分离，收集Rf值为0.1～0.2的组分，减压浓缩后真空干燥，得式（Ⅰ）所示布雷菲德菌素A糖基化衍生物；所述溶剂为无水甲醇、无水乙醇、水或乙腈，所述试剂为甲醇钠、乙醇钠、乙酸或甲酸；
式（Ⅱ）、（Ⅲ）中，R均为五碳糖、六碳糖、氨基六碳糖或六碳糖酸，R1均为乙酰基。
4.如权利要求1所述制备布雷菲德菌素A糖基化衍生物的方法，其特征在于步骤（1）所述有机溶剂为下列之一：二氯甲烷、四氢呋喃、乙腈、乙酸乙酯、氯仿、1,2-二氯乙烷、苯、甲苯或二甲苯。
5.如权利要求1所述制备布雷菲德菌素A糖基化衍生物的方法，其特征在于步骤（1）所述布雷菲德菌A与式（Ⅲ）所示化合物、活化的分子筛a和活化的分子筛b的质量比为1:2.5～4:2.5:2.5，所述催化剂的体积用量以布雷菲德菌A质量用量计为200微升/克；所述有机溶剂的体积用量以布雷菲德菌A质量用量计为150毫升/克。
6.如权利要求1所述制备布雷菲德菌素A糖基化衍生物的方法，其特征在于步骤（1）所述催化剂为三氟化硼乙醚、三氟甲磺酸三甲基硅烷、三氟甲磺酸三乙基硅烷或三氟甲磺酸银中的一种。
7.如权利要求1所述制备布雷菲德菌素A糖基化衍生物的方法，其特征在于步骤（1）所述反应是在-70～0℃条件下反应3～8小时。
8.如权利要求1所述制备布雷菲德菌素A糖基化衍生物的方法，其特征在于步骤（1）所述反应液分离纯化的方法为：反应结束后，将反应液过滤，获得滤液c和滤饼，滤饼用二氯甲烷淋洗，将洗涤液与滤液c合并后用饱合食盐水洗涤后加入无水硫酸镁干燥，过滤，获得滤液d，滤液d减压浓缩，浓缩液以体积比1:1的乙酸乙酯与石油醚混合液为展开剂进行薄层层析，收集Rf值为0.1～0.2的组分，减压浓缩后真空干燥，获得式（Ⅱ）所示化合物。
9.如权利要求1所述制备布雷菲德菌素A糖基化衍生物的方法，其特征在于步骤（2）所述式（Ⅱ）化合物与试剂的质量比为1:0.1～0.2，所述溶剂体积用量以式（Ⅱ）化合物质量计为200～400毫升/克。
10.一种权利要求1所述布雷菲德菌素A糖基化衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310754867.1A CN103739644A (zh) | 2013-12-31 | 2013-12-31 | 一种布雷菲德菌素a糖基化衍生物及其制备与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310754867.1A CN103739644A (zh) | 2013-12-31 | 2013-12-31 | 一种布雷菲德菌素a糖基化衍生物及其制备与应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103739644A true CN103739644A (zh) | 2014-04-23 |
Family
ID=50496729
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310754867.1A Pending CN103739644A (zh) | 2013-12-31 | 2013-12-31 | 一种布雷菲德菌素a糖基化衍生物及其制备与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103739644A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104592208A (zh) * | 2014-12-24 | 2015-05-06 | 浙江工业大学 | 7-n3-布雷菲德菌素a及其1,2,3-三氮唑类衍生物的制备与抗肿瘤应用 |
| CN104829663A (zh) * | 2015-04-02 | 2015-08-12 | 天津理工大学 | 一种糖基三唑并噻二唑类化合物及其制备方法和应用 |
| CN109498618A (zh) * | 2019-01-02 | 2019-03-22 | 遵义医学院 | 一种抑制卵巢癌细胞的药物组合物 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4305249A1 (de) * | 1993-02-20 | 1994-08-25 | Hoechst Ag | Galaktosylbrefeldin A, ein neuer Metabolit mit pharmakologischer Wirkung, ein Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung |
| CN101580805A (zh) * | 2009-03-31 | 2009-11-18 | 中国人民解放军第二军医大学 | 布雷菲德菌素a产生菌及发酵法生产布雷菲德菌素a |
| CN102399210A (zh) * | 2011-11-18 | 2012-04-04 | 浙江工业大学 | 一种从发酵液中分离提取高纯度布雷菲德菌素a的方法 |
| CN102731573A (zh) * | 2012-06-28 | 2012-10-17 | 天津林美科技有限公司 | 布雷菲德菌素a的羟基磷酸氨基酸酯类衍生物及其制备方法和应用 |
| CN103275128A (zh) * | 2013-04-28 | 2013-09-04 | 天津林美科技有限公司 | 布雷菲德菌素a的羟基磷酰胺类化合物、其制备方法和用途 |
-
2013
- 2013-12-31 CN CN201310754867.1A patent/CN103739644A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4305249A1 (de) * | 1993-02-20 | 1994-08-25 | Hoechst Ag | Galaktosylbrefeldin A, ein neuer Metabolit mit pharmakologischer Wirkung, ein Verfahren zu seiner Herstellung und seine Verwendung |
| CN101580805A (zh) * | 2009-03-31 | 2009-11-18 | 中国人民解放军第二军医大学 | 布雷菲德菌素a产生菌及发酵法生产布雷菲德菌素a |
| CN102399210A (zh) * | 2011-11-18 | 2012-04-04 | 浙江工业大学 | 一种从发酵液中分离提取高纯度布雷菲德菌素a的方法 |
| CN102731573A (zh) * | 2012-06-28 | 2012-10-17 | 天津林美科技有限公司 | 布雷菲德菌素a的羟基磷酸氨基酸酯类衍生物及其制备方法和应用 |
| CN103275128A (zh) * | 2013-04-28 | 2013-09-04 | 天津林美科技有限公司 | 布雷菲德菌素a的羟基磷酰胺类化合物、其制备方法和用途 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| ATSUSHI MINAMI，等: ""Aglycon switch approach toward unnatural glycosides from natural glycoside with glycosyltransferase VinC"", 《TETRAHEDRON LETTERS》, vol. 46, no. 37, 12 September 2005 (2005-09-12), pages 6187 - 6190 * |
| ATSUSHI MINAMI，等: ""Enzymatic Approach to Unnatural Glycosides with Diverse Aglycon Scaffolds Using Glycosyltransferase VinC"", 《J. AM. CHEM. SOC.》, vol. 127, no. 17, 4 July 2005 (2005-07-04), pages 6148 - 6149, XP009147948, DOI: 10.1021/ja042848j * |
| FILIP S. EKHOLM，等: ""Synthesis of Divalent 2,2’-Linked Mannose Derivatives by Homodimerization"", 《SYNTHESIS》, no. 4, 31 December 2009 (2009-12-31), pages 567 - 576 * |
| RICHARD W GANTT，等: ""Using simple donors to drive the equilibria of glycosyltransferase-catalyzed reactions"", 《NATURE CHEMICAL BIOLOGY》, vol. 7, no. 10, 21 August 2011 (2011-08-21), pages 685 - 691 * |
| SUSANNE GRABLEY，等: ""SECONDARY METABOLITES BY CHEMICAL SCREENING, 26.1 7-0-β-D-GALACTOSYL-BREFELDIN A VIA TRANSGLYCOSYLATION WITH PENICILLIUM BREFELDIANUM"", 《JOURNAL OF NATURAL PRODUCTS》, vol. 57, no. 4, 30 April 1994 (1994-04-30), pages 541 - 544 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104592208A (zh) * | 2014-12-24 | 2015-05-06 | 浙江工业大学 | 7-n3-布雷菲德菌素a及其1,2,3-三氮唑类衍生物的制备与抗肿瘤应用 |
| CN104592208B (zh) * | 2014-12-24 | 2017-04-12 | 浙江工业大学 | 7‑n3‑布雷菲德菌素a及其1,2,3‑三氮唑类衍生物的制备与抗肿瘤应用 |
| CN104829663A (zh) * | 2015-04-02 | 2015-08-12 | 天津理工大学 | 一种糖基三唑并噻二唑类化合物及其制备方法和应用 |
| CN109498618A (zh) * | 2019-01-02 | 2019-03-22 | 遵义医学院 | 一种抑制卵巢癌细胞的药物组合物 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101224215B (zh) | 熊果酸皂苷、齐墩果酸皂苷在制备升高白细胞和/或血小板药物中的应用 | |
| JP5671622B2 (ja) | フルクトシル化プエラリンおよびその調製方法と用途 | |
| CN101182313A (zh) | 喹羟酮的化学合成工艺 | |
| CN103739644A (zh) | 一种布雷菲德菌素a糖基化衍生物及其制备与应用 | |
| Sharipova et al. | Synthesis and anti-cancer activities of glycosides and glycoconjugates of diterpenoid isosteviol | |
| CN101200463A (zh) | 全酰化-4-硫代-d-核糖及其制备方法 | |
| BRILL et al. | Altromycins, novel pluramycin-like antibiotics II. Isolation and elucidation of structure | |
| SE415262B (sv) | Sett att framstella sackaridderivat av polyen-makrolidantibiotika | |
| CN100537560C (zh) | 一种具有抗癌活性的多甲氧基黄酮衍生物、药物组合物及其制备方法和应用 | |
| CN103833714A (zh) | 木犀草素、木犀草苷、木犀草素芸香糖苷半合成的方法 | |
| CN105968064B (zh) | 一种二间甲苯基四嗪二甲酰胺化合物及制备和应用 | |
| CN101307082B (zh) | 半乳糖-青蒿素及其制备方法 | |
| CN104610212B (zh) | 淫羊藿素衍生物及其制备方法和用途 | |
| CN102875565B (zh) | 具有抗肿瘤活性的酯化鬼臼类衍生物及其制备方法和用途 | |
| EP2864343B1 (en) | Selective oxidation of carbohydrates | |
| CN102295677B (zh) | 北美盐角草中一种降三萜皂苷及其制备方法和用途 | |
| CN105418700B (zh) | 基于抗肿瘤疫苗gm3关键中间体二糖化合物的制备方法 | |
| CN103739645A (zh) | 一种地西他滨的制备方法 | |
| CN105175478A (zh) | 表雄酮和去氢表雄酮糖基化衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN103012519A (zh) | 一种兽用抗生素阿维拉霉素分离纯化的方法 | |
| CN110117630A (zh) | 一种右旋糖酐蔗糖酶的糖基化应用以及将其用于制备咖啡酸苯乙酯糖苷的方法 | |
| CN108440473A (zh) | 一种2，6-二脱氧萘酚苷衍生物的制备方法 | |
| CN106243169A (zh) | Corylifol A糖基化衍生物及其制备方法和在抗肿瘤方面的应用 | |
| CN104513137A (zh) | 一种1,5-烯炔醇类化合物及其合成方法和应用 | |
| CN101348514B (zh) | 一种从面包海星提取的海星皂苷类化合物的用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20140423 |