CN103690862A - 复方药物组合物的新用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了下述重量配比的原料制备而成的药物组合物在制备治疗脂肪肝的药物中的用途：牛胆水150-300份、火硝100-150份、鸡内金100-200份、枳壳30-90份、香附30-100份、木香20-50份、延胡索20-55份、黄连10-40份、白术40-120份、吴茱萸10-45份、高良姜20-80份、山楂40-120份、建曲120-200份、青皮20-60份。通过临床试验及动物药效试验证明，本发明药物能够治疗酒精性脂肪肝，有效率高，本发明药物的使用为临床提供了一种新的用药选择。

Description

复方药物组合物的新用途

技术领域

本发明涉及一种复方药物的新用途，具体地，是涉及制备治疗脂肪肝的药物中的用途，属药物领域。 

背景技术

脂肪肝，是指由于各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积过多的病变。脂肪性肝病正严重威胁国人的健康，成为仅次于病毒性肝炎的第二大肝病，已被公认为隐蔽性肝硬化的常见原因。脂肪肝是一种常见的临床现象，而非一种独立的疾病。其临床表现轻者无症状，重者病情凶猛。一般而言，脂肪肝属可逆性疾病，早期诊断并及时治疗常可恢复正常。根据其病因，可以分为：肥胖性脂肪肝、酒精性脂肪肝、快速减肥性脂肪肝、营养不良性脂肪肝、糖尿病脂肪肝、药物性脂肪肝、妊娠脂肪肝等。 

脂肪变性是酒精性肝病最早和最常出现的损伤形式。越来越多的证据表明，脂变的肝细胞体积增大，互相挤压并压迫肝血窦造成肝细胞缺血缺氧，使肝脏对许多损伤较为敏感，易发生病理损害。如持续饮酒，酒精性脂肪肝患者可由单纯性脂肪肝发展为更严重的肝损伤如脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化甚至肝癌。流行病学资料显示，长期酗酒者约90%-100%患有脂肪肝，但只有10%-35%可发展成脂肪性肝炎，8%-20%发展成肝纤维化。如在酒精性肝病早期即脂肪肝阶段能及时诊断和治疗，不仅可阻止或减缓酒精性肝病的进一步发展，甚至可以完全痊愈。 

目前，有关酒精性脂肪肝的确切发生机制尚未完全明了；一般认为长期饮酒可使体内乙醛生成量增加，NADH/NAD的平衡改变而导致脂肪代谢和转运紊乱，酒精性脂肪肝是由于乙醇削弱了正常肝细胞的代谢及肝细胞膜的稳定性。①乙醇中间产物乙醛及乙酸，可使还原性辅酶Ⅰ与辅酶Ⅱ的比值升高，从而抑制线粒体三按酸循环，使肝内脂肪酸代谢发生障碍。②酒精促胆碱需要量上升的作用，以及磷脂不足影响脂蛋白的合成，从而使运出发生障碍。③大量饮酒致胃肠功能紊乱，影响微量元素的吸收，使体内氧化磷酸化和脂肪酸β氧化受损，血中游离脂肪酸增多，促进脂肪肝形成，大量乙醇刺激肾上腺及垂体-肾上腺轴，增加脂肪组织分解率，使甘油三脂合成增加并堆积。④长期饮酒可诱导肝微粒体中细胞色素P450的活性，其活性增加更加重乙醇及代谢产物对肝脏的毒性作用。酒精中毒引起的肝损伤的机理比较复杂，除了乙醇的直接毒性作用外，乙醇代谢过程中，产生大量的氧自由基，引起肝 脏脂质过氧化，是形成肝脏损伤的一个原因。 

由于酒精性脂肪肝的发病机制尚未完全阐明，目前尚无防治脂肪肝的特效药。而现有的一些抗氧化剂、降血脂药物、保肝药物等仅是起到辅助和对症的作用，有些药物的应用是经验性的，缺乏确实的临床药理学基础。由于脂肪化的肝脏比正常肝脏更容易遭受药物的肝损伤，如若药物应用不当极易导致肝功能恶化和肝脏脂肪沉积加重。因此，对抗酒精性脂肪肝药物的开发制备具有极其重要的意义。 

申请号：200510021336.7，发明名称：一种治疗胆道结石的药物组合物及其制备方法和用途，公开了本发明提供了一种治疗胆道结石的药物组合物，它是由牛胆水、火硝、鸡内金、枳壳、香附、木香、延胡索、黄连、白术、吴茱萸、高良姜、山楂、建曲、青皮为原料制备而成的药剂。该药物具有消溶肝胆结石，具有理气调肝，和胃止痛之功能，有显著溶石作用，且制剂工艺可行，质量稳定，可控，为临床提供了一种新的用药选择。申请号：201110365911.0，发明名称:复方药物组合物的新用途，还公开了该组方用于治疗胆汁返流性胃炎。此外，还公开了上述专利药物可用于治疗胆囊炎。 

胆结石是胆管树内（包括胆囊）形成的凝结物，是临床最常见的消化系统疾病之一。临床表现主要包括发作性腹痛、急性炎症。如果结石进入胆总管后可出现下列并发症：黄疸、胆管炎和胰腺炎等；但大部分患者可无任何症状。依据结石发生部位不同，分为胆囊结石、肝内胆管结石、胆总管结石；依据结石化学成分不同，结石通常包括胆固醇结石、胆色素结石或二者的混合物（混合型结石）及少见的黑结石、碳酸钙结石、多糖或蛋白为主的结石。胆结石发病机理包括几种要素，首先，胆汁中的胆固醇或钙必须过饱和；其次，溶质必须从溶液中成核并呈固体结晶状而沉淀；第三，结晶体必须聚集和融合以形成结石，结晶物在遍布于胆囊壁的粘液，凝胶里增长和集结，胆囊排空受损害有利于胆结石形成。目前，胆结石的治疗方法有：（一）胆结石的非手术疗法：1.溶石疗法（口服胆酸等药物溶石）；2.接触溶石（经PTC注入辛酸甘油单酯等药物溶石）；3.体外冲击波震波碎石（ESWL）；4.体内接触碎石（经胆道镜置入液电碎石机、激光等能源接触碎石）；5.经内镜微创手术取石碎石；6.中医药溶石碎石促排石（如口服胆石清片、胆石利通片）。（二）胆结石的手术疗法：1.传统开腹手术切除胆囊取石；2.开腹探查胆管取石；3.腹腔镜微小切口切除胆囊；4.腹腔镜联合胆道镜探查胆管取石。胆汁反流性胃炎（bile reflux gastritis，BRG）是由于从胆囊排入十二指肠的胆汁和其它肠液混合，通过幽门，逆流至胃，刺激胃粘膜，从而产生的炎症性病变。胆汁反流性胃炎的病因主要为胃大部切除胃空肠吻合术后，以及幽门功能失常和慢性胆道疾病等，胆汁反流性胃炎在临床上比较常见。胆汁反流性 胃炎，也称碱性返流性胃炎，系指由于胆汁返流入胃所引起的上腹痛，呕吐胆汁，腹胀，体重减轻等一系列表现的综合征，本综合征的发生首先要有幽门功能丧失或幽门关闭不全的基本条件，如在胃切除或胃肠吻合术后，胆汁可直接返流入胃。 

单纯胆汁直接接触胃粘膜一般不引起损害但可通过其刺激胃酸分泌的作用胆盐与胃酸结合可增强酸性水解酶的活力破坏溶酶体，膜溶解脂蛋白而破坏胃粘膜的屏障作用，H⁺逆向弥散增加进入粘膜和粘膜下层可刺激肥大细胞而释放组胺，后者又刺激分泌胃酸和胃蛋白酶最终导致胃粘膜炎症糜烂出血胆汁与胰液混合后胆汁中的卵磷脂与胰液中的磷酸酯酶A起作用而转化为溶血卵磷脂，返流入胃也可造成胃粘膜屏障的损害。胃泌素可刺激胃粘膜细胞增殖以加强其屏障作用防止H⁺的逆向弥散但在BillrothⅡ式胃切除术后胃泌素分泌减少约50～75%这可能是本综合征的重要发病原因之一。 

胃切除术后胆汁返流入胃是常见现象但并不是每个人都发生症状其发病原因还可能与下列因素有关：①胃排空障碍，返流液在胃内滞留时间长pH升高，残胃中需氧菌及厌氧菌更易生长这些细菌可使胆盐游离而引起胃粘膜炎症从而出现症状，②胆酸成分改变Gadacz发现胆酸成分正常者不发生症状而去氧胆酸明显增高者常有症状，③胃液中存有细菌，有症状患者的胃液中都有革兰氏阴性杆菌或假单胞菌使用强力霉素可减轻症状；而无症状者的胃液中均无细菌存在，④胃液中钠浓度，钠浓度超过15mmol/L者易发生胃炎而钠浓度低于15mmol/L者无胃炎。 

目前，胆汁反流性胃炎具体治疗方法有：1.西药治疗：胃动力药：此类药物能增加胃肠道蠕动，抑制胆汁反流入胃，常用的有：吗丁啉、莫沙必利。胃黏膜保护剂：硫糖铝，能与胃黏膜的黏蛋白络合形成保护膜，以保护胃黏膜免受胆汁损伤；胃膜素，能在胃内形成膜状物覆盖胃黏膜，以减轻反流的胆汁和胃酸对胃黏膜的刺激；思密达，为胃黏膜保护剂，有加强消化道黏膜屏障作用，有利于胃黏膜的再生；生胃酮，能促使胃黏膜分泌黏液，从而保护胃黏膜；吉福士，有保护胃黏膜、促进炎症愈合作用。吸附胆汁药：考来烯胺，能吸附胆汁，拮抗胆汁中胆酸对胃粘膜的损害作用。2.中药治疗：胆汁反流性胃炎的中医辨证，大多属于脾胃升降失调、水饮停滞胃脘，兼有肝气郁结。按此辨证结果对症下药，效果比较理想。(经过近些年的临床观察与治疗，发现胆汁反流性胃炎的实际病因是胰头及胃窦部位发炎引起的。）3.手术治疗。 

酒精性脂肪肝在发病机理、疾病治疗上与胆结石、胆汁返流性胃炎存在着实质差异，它们属于完全不同的病症，它们之间没有必然关系。 

发明内容

本发明的技术方案是提供了一种复方药物组合物的新用途。 

本发明提供了下述重量配比的原料制备而成的药物组合物在制备脂肪肝的药物中的用途： 

牛胆水150-300份、火硝100-150份、鸡内金100-200份、枳壳30-90份、香附30-100份、木香20-50份、延胡索20-55份、黄连10-40份、白术40-120份、吴茱萸10-45份、高良姜20-80份、山楂40-120份、建曲120-200份、青皮20-60份。 

进一步优选地，所述的原料重量配比为：牛胆水173份、火硝115份、鸡内金133份、枳壳52份、香附68份、木香34份、延胡索34份、黄连21份、白术68份、吴茱萸27份、高良姜41份、山楂68份、建曲141份、青皮34份。 

进一步优选地，所述的药物是治疗治疗酒精性脂肪肝的药物的药物。 

所述的药物是由牛胆水浓缩的清膏，火硝、鸡内金粉末，青皮、木香、白术、枳壳、香附、吴茱萸、高良姜的挥发油及提取挥发油后的水提取物，建曲粉末或水提取物，黄连、延胡索、山楂的水提取物为活性成分加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。 

其中，所述的制剂是片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂或口服液。 

其中，所述的片剂每片含牛胆水以胆酸C₂₄H₄₀O₅不少于1.5mg，每片含火硝以硝酸钾KNO₃不少于100.0mg；胶囊剂每粒胶囊含牛胆水以胆酸C₂₄H₄₀O₅不少于2.25mg，含火硝以硝酸钾KNO₃不少于150mg；颗粒剂每10g含牛胆水以胆酸C₂₄H₄₀O₅不少于9mg，含火硝以硝酸钾KNO₃不少于600mg；丸剂每10g含牛胆水以胆酸C₂₄H₄₀O₅不少于9mg，含火硝以硝酸钾KNO₃不少于600mg；口服液每10ml含牛胆水以胆酸C₂₄H₄₀O₅不少于9mg，含火硝以硝酸钾KNO₃不少于600mg。 

其中，所述的制剂的制备方法包括如下步骤： 

a、称取下述重量配比的原料：牛胆水150-300份、火硝100-150份、鸡内金100-200份、枳壳30-90份、香附30-100份、木香20-50份、延胡索20-55份、黄连10-40份、白术40-120份、吴茱萸10-45份、高良姜20-80份、山楂40-120份、建曲120-200份、青皮20-60份； 

b、取鸡内金、火硝粉碎成细粉，备用； 

c、取建曲粉碎或加热水提取； 

d、牛胆水加热至沸，滤过，滤液浓缩，得清膏； 

e、青皮、木香、白术、枳壳、香附、吴茱萸、高良姜提取挥发油，挥发油用β-环糊精进行包结，包结物干燥，粉碎后备用； 

f、将e步骤的药渣与黄连、延胡索、山楂加水煎煮，滤过，滤液浓缩至稠膏，加入牛胆水清膏与b步骤制备的细粉、c步骤的建曲细粉或水提取物，混匀加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。 

酒精性脂肪肝以气滞血瘀证最为常见，气滞血瘀、肝郁脾虚、湿热蕴结贯穿始终为其主要病机。酒为湿热有毒之品，饮则湿热邪毒蕴结于内。湿邪重浊黏滞，阻碍气机运行，湿热阻于胁下，致肝失疏泄，肝气郁滞，肝木乘脾土，脾虚后天之本乏源遂成痼疾。故对于酒精性脂肪肝的治疗，以疏肝健脾为首要之法，同时予以行气止痛、清热利湿解毒。 

本方以牛胆水为君，利胆通肠、解毒消肿；辅以鸡内金、火硝为臣，健脾消食、解毒。佐以枳壳、香附、木香、延胡索行气止痛，佐以黄连、白术燥湿健脾，又反佐温肝胃之吴茱萸、高良姜以制它药苦寒，以求相德益彰，再佐消食化滞之山楂、建曲，脾胃健运则有利服药，以满疗程；青皮为全方之使，引达诸药于肝。 

综观全方，药良方精，紧扣病机，直达病所，疏肝健脾、行气而止痛、清热利湿解毒。 

通过临床试验及动物药效试验证明，本发明药物能够治疗酒精性脂肪肝，药效明确，有效率高，为临床提供了一种新的用药选择。 

具体实施方式

实施例1本发明药物的制备 

1、处方： 

牛胆水173g、火硝115g、鸡内金(炒)133g、枳壳(麸炒)52g、香附(制)68g、木香34g、延胡索(醋制)34g、黄连21g、白术(麸炒)68g、吴茱萸(炒)27g、高良姜41g、山楂(炒焦)68g、建曲141g、青皮34g； 

辅料:淀粉20g,硬脂酸镁5g。 

以上原辅料共制成本发明药物1000片。 

2.工艺与操作 

（1）取炒鸡内金、建曲和火硝混合，按《粉碎岗位技术安全操作法》进行粉碎,过120目筛，细粉备用。 

（2）取青皮、木香、白术、枳壳、香附、吴茱萸、高良姜,置多功能提取罐中，加8倍量的水浸泡1h，按《多功能提取罐标准操作程序》规定的方法、参数进行煎煮,从沸腾开始计时,并调节好油水分离器的液位,收集挥发油。挥发油的收得率为0.3-0.5%。 

（2）煎煮3h后放出药液,滤过(80目筛),泵入粗滤液贮罐； 

（3）再将黄连、延胡索和山楂置多功能提取罐中，向提取罐中加入8 倍量的水,如前通蒸汽煎煮1h,放出药液滤过(80目筛),泵入同一粗滤液贮罐。 

（4）再向提取罐加入6倍量水,通蒸汽煮沸1h，放出药液，滤过(80目筛),泵入同一粗滤液罐,备用。 

（5）再向提取罐加入4倍量水,通蒸汽煮沸1h，放出药液，滤过(80目筛),泵入同一粗滤液罐,备用。 

（6）将粗滤液贮罐中的药液滤过(200目筛),泵入精滤液贮罐。 

（7）将精滤液贮罐中的药液和另器贮存的牛胆水(经检验合格)分别泵入各自的三效浓缩器中,按《三效浓缩器标准操作程序(SOP)》规定的温度压力和方法进行减压浓缩。当牛胆水浓缩至原体积的1/3～1/4，相对密度为1.02～1.03时,放入干燥洁净桶内，备用。 

（8）当药液浓缩到相对密度为1.25-1.30（60℃测）时，放入洁净容器备用。药液的提取率应为14.5-18.5%。 

（9）粘合剂的制备：按方取出淀粉,加适量热水(60-70℃)搅拌成糊,通蒸汽继续搅拌,直至熟透(呈半透明状)。 

（10）混合喷雾药液：取淀粉浆,牛胆水清膏和制得之药液流膏置同一容器中,混合均匀,并分次注入喷液小车备用。 

（11）将制备的细粉置沸腾式制粒机的流化床(底料锅)内,加热,使底料预热至65-70℃。 

（12）按《制粒岗位技术安全操作法》和《FL-120型沸腾式制粒机标准操作程序》规定的方法、程序和设定的参数进行制粒。 

（13）药液喷雾完毕,应升温至80-90℃干燥机内颗粒,待水份含量在2.5-3.5%时停止。颗粒的收得率为95-98%。 

（14）挥发油包合：取挥发油量：β-环糊精=1:6（重量比）称取β-环糊精的量，加入离子水（25ml/g），置胶体磨中搅成糊状。将挥发油倒入胶体磨中,与β-环糊精糊状物混合均匀后搅拌,1小时后倾出抽滤,除去水分,得黄白色包结物。将黄白色包结物置烘房中50℃干燥,粉碎后过80目筛,得挥发油包结物细粉备用。 

（15）整粒与混合。按片重0.5g的规格配好上、下冲,调节好充填量,并从40KN至50KN的压力试压药片。 

实施例2本发明药物的制备 

a、称取下述重量配比的原料：牛胆水300g、火硝150g、鸡内金200g、枳壳90g、香附100g、木香50g、延胡索55g、黄连40g、白术120g、吴茱萸45g、高良姜80g、山楂120g、建曲200g、青皮60g；（原料可以使用其炮制品，也可以不使用炮制品） 

b、取鸡内金、火硝粉碎成细粉，备用； 

c、取建曲粉碎或加热水提取，得热水提取物； 

d、牛胆水加热至沸，滤过，滤液浓缩，得清膏； 

e、青皮、木香、白术、枳壳、香附、吴茱萸、高良姜水蒸气蒸馏法提取挥发油，挥发油用β-环糊精进行包结，包结物干燥，粉碎后备用； 

f、将e步骤的药渣与黄连、延胡索、山楂加水煎煮，滤过，滤液浓缩至稠膏，加入牛胆水清膏与b步骤制备的细粉、c步骤的建曲细粉或水提取物，加入淀粉，制粒，装胶囊，即得本发明胶囊剂。 

实施例3本发明药物的制备 

a、称取下述重量配比的原料：牛胆水150g、火硝100g、鸡内金100g、枳壳30g、香附30g、木香20g、延胡索20g、黄连10g、白术40g、吴茱萸10g、高良姜20g、山楂40g、建曲120g、青皮20g； 

b、取鸡内金、火硝粉碎成细粉，备用； 

c、取建曲粉碎或加热水提取，得热水提取物； 

d、牛胆水加热至沸，滤过，滤液浓缩，得清膏； 

e、青皮、木香、白术、枳壳、香附、吴茱萸、高良姜超临界流提取挥发油，挥发油用β-环糊精进行包结，包结物干燥，粉碎后备用； 

f、将e步骤的药渣与黄连、延胡索、山楂加水煎煮，滤过，滤液浓缩至稠膏，加入牛胆水清膏与b步骤制备的细粉、c步骤的建曲细粉或水提取物，混匀加入矫味剂、制备成口服液。 

实施例4本发明药物的制备 

a、称取下述重量配比的原料：牛胆水200g、火硝180g、鸡内金180g、枳壳60g、香附80g、木香40g、延胡索35g、黄连30g、白术100g、吴茱萸35g、高良姜60g、山楂80g、建曲180g、青皮50g； 

按实施例1的方法制备成片剂。 

实施例5本发明药物的质量控制 

取实施例1的制备的片剂进行质量控制： 

1、定性鉴别：（1）取本品2片，薄膜衣片除去包衣后，研细，加乙醇2ml搅拌，滤过，滤液作为供试品溶液。另取胆酸对照品，加乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸（5：5：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃烘约10分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。 

（2）取本品10片，薄膜衣片除去包衣后，研细，加乙醇30ml，加热回 流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用氯仿提取二次，每次15ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液，另取鸡内金对照药材2g，加乙醇20ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙醇-甲酸（3：3：0.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试的色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显3～4个相同颜色的斑点。 

（3）取本品10片，薄膜衣片除去包衣后，研细，加70%甲醇30ml，加热回流1小时，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用醋酸乙酯提取二次，每次15ml，合并醋酸乙酯提取液，加水50ml洗涤，弃去水液，取醋酸乙酯液，蒸干，残渣加丙酮1ml使溶解，作为供试品溶液。另取青皮对照药材1g，同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VIB）试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-醋酸乙酯（3：7）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%香草醛硫酸溶液，105℃烘约10分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显同颜色的斑点。 

（4）取本品20片，薄膜衣片除去包衣后，研细，加氨试液适量，使润湿，加氯仿50ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加硫酸（0.05mol/L）20ml使溶解，滤过，滤液加氨试液调节pH值至10，用氯仿提取二次，每次15ml，合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇1ml，作为供试品溶液。另取吴茱萸对照药材、黄连对照药材各0.5g，加氨试液适量，加氯仿20ml，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液，照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VIB）试验，吸取供试品溶液10μl，对照药材溶液1μl、对照品溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7：1：2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的黄色荧光斑点。 

（5）取本品30片，薄膜衣片除去包衣后，研细，加甲醇50ml超声处理30分钟，滤过，取滤液置水浴上蒸干，残渣加水10ml微热使之溶解，加氨试液调P^H至碱性，用乙醚提取3次，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使之溶解，作为供试品溶液；另取延胡索药材1g，加甲醇30ml同法制成对照药材溶液；吸取延胡索乙素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的对照溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VIB）试验，吸 取供试品溶液10μl，对照品溶液、对照药材溶液各2μl，分别点于同一用1%NaOH溶液制备的硅胶G薄层板上，以正已烷-氯仿-甲醇（7.5:4:1）为展开剂，展开，取出，晾干，碘蒸气熏至斑点显色清晰，在空气中挥尽板上吸附的碘后，置紫外灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与延胡索乙素和延胡索对照药材相应位置上，显相同颜色的斑点。 

2、定量鉴别：胆酸取本品20片，薄膜衣片除去包衣后，研细，再精密称出约1g，加甲醇25ml，冷浸48小时，并时时振摇，滤过，滤渣用甲醇少量洗涤，至洗液无色，合并洗液与滤液，浓缩至干，残渣加甲醇溶解，移入5ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取胆酸对照品，加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2005年版一部附录VIB）试验，吸取供试品溶液4μl，对照品溶液2μl与4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸（5：5：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘约10分钟，至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法（附录VIB薄层扫描法）进行扫描，波长λ _S=385nm，λ_R=700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品收度积分值，按两点法计算，即得。 

每片含牛胆水以胆酸（C₂₄H₄₀O₅）应不少于1.5mg。 

硝酸钾取本品20片，薄膜衣片除去包衣后，研细，再精密称取适量（约0.67-0.70g）置坩埚内，先用小火炭化，再在700℃炽灼至完全灰化，放冷，残渣用60ml水分次洗入100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，用中速滤纸自然滤过，弃去初滤液，取续滤液25ml，加酚酞指示液1滴，甲醛试液2ml，用氢氧化钠试液调节至溶液显微红色，加热至40℃（继续保持微红色），边搅拌边滴加四苯硼钠乙醇饱和溶液15ml，继续搅拌1分钟，静置10分钟，用恒重的中速或慢速定量滤纸自然滤过，沉淀用四苯硼钾乙醇饱和溶液（四苯硼钾1g，乙醇50ml加水至1000ml，振摇使溶解，用前滤过）洗涤3-4次，每次10ml，滤过，用无水乙醇2ml沿滤纸壁洗涤1次，滤过，于120℃烘至恒重，精密称定，计算，与0.2822相乘，扣除背景干扰值4.56%，即得供试品中含有硝酸钾的重量。 

每片含火硝以硝酸钾（KNO₃）应不少于100.0mg。 

按上述方法测定的胶囊剂每粒胶囊含牛胆水以胆酸C₂₄H₄₀O₅不少于2.25mg，含火硝以硝酸钾KNO₃不少于150mg；颗粒剂每10g含牛胆水以胆酸C₂₄H₄₀O₅不少于9mg，含火硝以硝酸钾KNO₃不少于600mg；丸剂每10g含牛胆水以胆酸C₂₄H₄₀O₅不少于9mg，含火硝以硝酸钾KNO₃不少于600mg；口服液每10ml含牛胆水以胆酸C₂₄H₄₀O₅不少于9mg，含火硝以硝酸钾KNO₃ 不少于600mg。 

以下通过临床试验及药效学试验证明本发明的有益效果。 

试验例1本发明药物临床试验 

经郫县中医药研究所自2009以来收集150例酒精性脂肪肝患者口服本发明药物（实施例1制备的药物），一次6片，一日3次，3个月为一疗程。 

诊断标准： 

1、西医诊断标准：参照中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组2006年制定的《酒精性脂肪肝病诊断标准》。 

2、中医证候诊断标准：遵照中华人民共和国药品监督管理局(2002年)制定的《中药新药临床研究指导原则》制定。 

气滞血瘀证：主症：脘腹闷胀，胁肋疼痛；次症：纳食减少，肢体倦怠，头身困重，烦躁易怒，大便搪薄或黏腻不爽；体征：舌红，苔白腻或黄腻，脉弦或弦滑。 

疗效判定标准：遵照中华人民共和国药品监督管理局(2002年)《中药新药临床研究指导原则》的疗效判定标准判定。 

（一）疾病疗效判定标准 

l、痊愈:用药1个疗程后，症状、体征积分减少≥95％；TG、ALT、AST、GGT全部恢复正常；B超检查肝脏回声恢复正常及肝脏体积回缩正常。 

2、显效:用药1个疗程后，症状、体征积分减少≥70％,；肝功能除GGT仍轻度升高（＜100单位）外，均恢复正常；B超检查重度变轻度。 

3、有效:用药1个疗程后，症状、体征积分减少≥30％；肝功能及血脂有改善；B超检查重度变中度或中度变轻度。 

4、无效:用药1个疗程后，症状、体征积分减少＜30％；肝功能、血脂及B超检查无改善。 

（二）影像学疗效判定标准 

l、痊愈：B超检查肝脏回声恢复正常及肝脏体积回缩正常。 

2、显效：B超检查重度变轻度。 

3、有效：B超检查重度变中度或中度变轻度。 

4、无效：B超检查无改善。 

(三)中医证候疗效判定 

根据积分法判定中医证候疗效（采用尼莫地平法）： 

临床痊愈：n≥95％ 

显效：n≥70％ 

有效：n≥30％ 

无效：n＜30％ 

临床结果见下表： 

酒精性脂肪肝患者服用本发明药物临床结果观察表 

酒精性脂肪肝患者服用本发明药物主、次症，体征积分及总分比较

★治疗前后比较P<0.01 

本发明药物对酒精性脂肪肝总有效率达90.00%；酒精性脂肪肝患者治疗前后主、次症，体征积分及总分比较差异显著（P＜0.01）。证明本发明药物治疗酒精性脂肪肝有效率高，药效明确。 

试验例2本发明药物对大鼠实验性酒精性脂肪肝的治疗作用实验 

1实验材料 

1.1供试品：本发明药物（实施例1制备），药物含量：2.22g生药/g浸膏粉，由实施例1制备。 

1.2对照品：东宝肝泰片（复方蛋氨酸胆碱片）：国药准字H22024764，批号：090902，生产单位：通化东宝药业股份有限公司；联苯双酯滴丸：国药准字H11020980，批号：090611，生产单位：北京协和药厂。 

1.3试剂 

胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白(HDL)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙二醛(MDA)、糖原(Gn)测定试剂盒均购自四川迈克科技有限责任公司；52°牛栏山二锅头(北京顺鑫农业股份有限公司牛栏山酒厂生产)。 

1.4实验动物 

SD大鼠，共80只，体重150～210g，雄性。 

动物来源：四川省中药研究所实验动物中心。 

许可证号：川实动管第2002-32号。 

1.5仪器 

MPI-500多媒体彩色病理图文分析系统(四川省中药研究所提供)。 

2方法与结果 

2.1方法 

大鼠20只作为正常对照组正常饮食和饮水饲养。其余动物随机分为5组:模型对照组、东宝肝泰对照组、联苯双酯对照组、本发明药物高、低剂量,其中模型对照组20只,其余每组各10只。给予大鼠79.5%玉米粉、20%猪油、0.5%胆固醇做成的混合饲料,另外60%52°牛栏山二锅头定量饮用建立酒精性脂肪肝模型。饲养1个月后，正常对照组和模型对照组随机各取10只大鼠眶静脉取血,测定CHO、TG、HDL、LDL，活杀取大鼠肝脏,检测肝内TG、Gn水平，并做病理组织学检查，确定是否已形成酒精性脂肪肝模型。确定已形成脂肪肝模型后，各药物组均按10ml/kg灌胃给药,每天1次，连续30d，正常对照组、模型对照组灌胃等量NS。 

2.1.1对大鼠肝/体比值的影响 

大鼠末次给药禁食12h后,各组大鼠逐只称重，眶静脉取血，取血后立即按20ml/kg腹腔注射10%葡萄糖，1h后放血处死解剖大鼠，电子天平称取肝脏重量，计算肝/体比值。 

2.1.2对大鼠血脂代谢的影响 

大鼠末次给药禁食12h后,眶静脉取血,2500rpm低温离心15min，取血清,测定CHO、TG、HDL、LDL。 

2.1.3对大鼠肝功能的影响 

取部分肝脏精称，用组织研磨器打肝匀浆，然后按照试剂盒操作说明测定血清ALT和AST活性。 

2.1.4对大鼠肝内物质和抗氧化作用的影响 

另取部分肝脏精称，用组织研磨器打肝匀浆，然后按照试剂盒操作说明，测定肝组织内Gn、TG和MDA含量。 

2.1.5对酒精性脂肪肝大鼠肝脏病理组织学的影响 

取血后处死大鼠，迅速剖取肝脏，在距肝脏边缘0.5cm处取材，一部分快速冰冻取肝脏，取肝脏修成1cm×1cm×1cm的组织块，逐级脱水、透明、浸腊、包埋、切片，进行脂肪特殊染色，光镜下观察肝脏的组织形态。 

2.1结果 

2.2.1酒精性脂肪肝模型成模检测 

按照试剂盒操作说明,测定大鼠血清CHO、TG、HDL、LDL；肝组织内Gn、TG水平，并做病理组织学检查，见表1。 

表1酒精性脂肪肝成模检测

与正常组比较^★★P<0.001 

表1数据表明，经过30天连续高脂饮食加酒精刺激，导致血脂代谢紊乱、肝内脂肪和糖原蓄积，模型组与正常组比较均有显著性差异。肝脏大体病理检查：正常组大鼠肝脏颜色褐红、鲜艳，包膜完整、光滑，边缘锐利；模型组大鼠肝脏颜色略黄、饱满，包膜紧张、有油腻感觉，边缘欠锐利。肝脏组织病理检查：两组标本迅速低温速冻，冰冻切片，固定后，常规标本均进行脂肪特染，脂肪组织在镜下呈现橘黄色。正常组肝细胞大小一致，肝细胞索排列整齐，核无畸形，肝窦可见，枯否氏细胞偶见，无明显变性、坏死和纤维化；模型组肝细胞明显肿胀，胞浆空亮，呈分叶状，大小不一致；核膜增厚，肝窦消失；汇管区血管受挤压，管腔变小，并有少量纤维结缔组织增生。病理检查结论：与正常组比较，模型组出现明显的脂肪变性。 

2.2.2对肝/体比值的影响 

各组大鼠实验前体重分别为正常组(175.4±16.3)g、模型组(173.2±9.5)g、本发明药物高(172.2±12.2)g、低剂量组(173.6±17.1)g、东宝肝泰组(174.6±19.0)g、联苯双脂组(175.1±15.4)g,组间无显著性差异。造模后、给药15d和30d的体重变化、药后肝重和肝/体比值结果，见表2。 

表2对酒精性脂肪肝大鼠肝/体比值的影响

注：与模型组比较，^★P<0.05，^★★P<0.01。 

表2表明，酒精性脂肪肝大鼠体重降低、肝重增加，肝/体比值增加；给予高剂量的本发明药物后可使升高的肝重降下来，体重也有一定增加，使肝/体比值得到不同程度的降低；与模型组比较，高剂量有非常显著性差异，低剂量呈现一定的作用趋势。 

2.2.3对血脂代谢的影响 

结果见表3。 

表3对酒精性脂肪肝大鼠血脂代谢的影响

注：与模型组比较，^★P<0.05，^★★P<0.01。 

表3表明，酒精性脂肪肝大鼠血清CHO、TG、LDL均显著升高，HDL则显著降低。给予本发明药物后可使升高的CHO显著降低，高剂量的作用强度强于东宝肝泰、联苯双酯组；低剂量的作用强度与东宝肝泰、联苯双酯相当；可使升高的TG显著降低，其药物高、低剂量之间的药效作用强度有一定的剂量依赖关系；可使降低的HDL显著升高，作用强度优于东宝肝泰；可使升高的LDL显著降低,作用强度优于东宝肝泰。 

2.2.4对肝功能的影响 

结果见表4。 

表4对酒精性脂肪肝大鼠肝功能的影响

注：与模型组比较，^★P<0.05，^★★P<0.01。 

表4表明，酒精性脂肪肝大鼠血清AST、ALT含量均显著升高。给予本发明药物后可使升高的血清AST、ALT显著降低，作用强度优于东宝肝泰，而与联苯双酯相当。 

2.2.5对肝内物质和抗氧化作用的影响 

结果见表5。 

表5对酒精性脂肪肝大鼠肝内物质和抗氧化实验的影响

注：与模型组比较，^★P<0.05，^★★P<0.01。 

表5表明，酒精性脂肪肝大鼠肝内TG、Gn、MDA含量均显著升高。给予本发明药物后可使升高的肝内TG、Gn、MDA显著降低，作用强度有一定的剂量依赖关系。 

2.2.6对肝组织病理学的影响 

大体病理检查：正常组、模型组肝脏包膜略紧张，剖面色微黄，有轻度油腻感，各药物组大鼠外观切面有明显改善；进行脂肪特染后镜下检查：正 常组肝脏几乎见不到脂肪变性、颗粒变性和纤维组织增生，模型组肝脏有明显的不同程度的脂肪变性，胞浆空壳，可见脂滴，以近包膜处为明显，沿小叶中央区分布，部分区域可见小灶性坏死及炎细胞浸润，可见轻度的纤维组织增生，各药物组大鼠肝脏上述病理变化明显减轻。 

3结论 

本实验研究结果显示：本发明药物对酒精性脂肪肝大鼠肝/体比值、血脂代谢、血肝功能、肝内物质以及酒精肝脏病理组织学均有显著性影响，可使酒精性脂肪肝大鼠血清CHO、TG、LDL和肝内TG水平显著降低，HDL水平显著升高，提示对酒精性脂肪肝有降脂作用；可使AST、ALT水平显著降低，提示对酒精性脂肪肝有保肝作用；使肝内MDA水平显著降低，Gn含量升高，提示对酒精性脂肪肝有抗氧化作用；可使肝/体比值显著降低，对肝脏脂肪变性、颗粒变性、纤维组织增生有显著性的改善作用。并且其高、低剂量之间的药效作用强度有一定的剂量依赖关系，与模型组比较有极显著性差异。综上可见，本发明药物对酒精性脂肪肝大鼠具有降脂、保肝、抗氧化等药效作用，对实验性大鼠酒精性脂肪肝有确切的治疗作用。 

Claims (7)

1.下述重量配比的原料制备而成的药物组合物在制备治疗脂肪肝的药物中的用途：

牛胆水150-300份、火硝100-150份、鸡内金100-200份、枳壳30-90份、香附30-100份、木香20-50份、延胡索20-55份、黄连10-40份、白术40-120份、吴茱萸10-45份、高良姜20-80份、山楂40-120份、建曲120-200份、青皮20-60份。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的原料重量配比为：牛胆水173份、火硝115份、鸡内金133份、枳壳52份、香附68份、木香34份、延胡索34份、黄连21份、白术68份、吴茱萸27份、高良姜41份、山楂68份、建曲141份、青皮34份。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述的药物是治疗酒精性脂肪肝的药物。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的用途，其特征在于：它是由牛胆水浓缩的清膏，火硝、鸡内金粉末，青皮、木香、白术、枳壳、香附、吴茱萸、高良姜的挥发油及提取挥发油后的水提取物，建曲粉末或水提取物，黄连、延胡索、山楂的水提取物为活性成分加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述的是片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂或口服液。

6.根据权利要求5所述的用途，其特征在于：所述的片剂每片含牛胆水以胆酸C₂₄H₄₀O₅不少于1.5mg，每片含火硝以硝酸钾KNO₃不少于100.0mg；胶囊剂每粒胶囊含牛胆水以胆酸C₂₄H₄₀O₅不少于2.25mg，含火硝以硝酸钾KNO₃不少于150mg；颗粒剂每10g含牛胆水以胆酸C₂₄H₄₀O₅不少于9mg，含火硝以硝酸钾KNO₃不少于600mg；丸剂每10g含牛胆水以胆酸C₂₄H₄₀O₅不少于9mg，含火硝以硝酸钾KNO₃不少于600mg；口服液每10ml含牛胆水以胆酸C₂₄H₄₀O₅不少于9mg，含火硝以硝酸钾KNO₃不少于600mg。

7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的制剂的制备方法包括如下步骤：

a、称取下述重量配比的原料：牛胆水150-300份、火硝100-150份、鸡内金100-200份、枳壳30-90份、香附30-100份、木香20-50份、延胡索20-55份、黄连10-40份、白术40-120份、吴茱萸10-45份、高良姜20-80份、山楂40-120份、建曲120-200份、青皮20-60份；

b、取鸡内金、火硝粉碎成细粉，备用；

c、取建曲粉碎或加热水提取；

d、牛胆水加热至沸，滤过，滤液浓缩，得清膏；

e、青皮、木香、白术、枳壳、香附、吴茱萸、高良姜提取挥发油，挥发油用β-环糊精进行包结，包结物干燥，粉碎后备用；

f、将e步骤的药渣与黄连、延胡索、山楂加水煎煮，滤过，滤液浓缩至稠膏，加入牛胆水清膏与b步骤制备的细粉、c步骤的建曲细粉或水提取物，混匀加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂。