CN101537086B - 一种抗乙型肝炎病毒、降脂和减轻脂肪肝病变的药物组合物及其制备方法 - Google Patents
一种抗乙型肝炎病毒、降脂和减轻脂肪肝病变的药物组合物及其制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种抗乙型肝炎病毒、降脂和减轻脂肪肝病变的药物组合物，及其制备方法，该药物组合物的有效成分原料药包括射干，优化的方案是由射干和泽泻组成，将上述射干单方或者射干和泽泻两味原料药粉碎，配伍后用不同溶剂如水、1-100％乙醇、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯提取，滤液浓缩后得到比重为1.05-1.1的稠膏，即得本发明药物组合物。本发明的优点在于以射干单方入药或者将射干和泽泻二味药配伍，用于降脂和减轻脂肪肝病变：降脂同时，又可抗乙型肝炎病毒。实验证明：单用射干或者二者合用，即可以降脂，又可以具有肝保护作用，使用安全可靠。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药新配方，特别是一种可抗乙型肝炎病毒、降脂和减轻脂肪肝病变的中药新配方。
背景技术
由于经济繁荣、生活富裕，随着人们生活方式和饮食结构的改变，脂肪肝-这一典型的文明病也在不断增加。脂肪肝主要由于营养摄入过多、肥胖、过量饮酒、高脂饮食、运动量少这几个常见原因所造成。这种病症由于初期没有明显的自觉症状，所以常常被人忽视。在香港玛丽医院的一项临床研究认为，香港约5％人口，即约有30万人患有此病而不自知。另根据一项身体检查结果显示：从30岁左右开始，脂肪肝的发病率开始明显增加，40-49岁是脂肪肝的高发期；其中在大中城市居民中，成人的非酒精性脂肪肝发病率已达到20％左右。
脂肪肝是一种常见影响肝脏功能的病。脂肪肝的主要成因是肝脏吸收过量脂肪酸和碳水化合物，使肝细胞的三酸甘油酯输出受阻、代谢异常，引致肝细胞质囤积过多的脂肪颗粒，而影响细胞质本身的功能，继而造成积聚，导致脂肪肝的形成。肥胖、糖尿病、酗酒等都会影响三酸甘油酯代谢失调。虽然此病在肥胖、糖尿病和血脂高患者尤普遍，但即使身型纤瘦，体重适中的年轻人士也可以患上此病。由于大多数患者初期并没有明显病症，患者要从血液化验才得知罹患此病，所以并不容易被察觉。虽然在一般情况下脂肪肝对身体功能没有实时影响，但一部份会逐渐演变成肝硬化而引致死亡。
临床上经常看到慢性乙型肝炎合并脂肪肝的病人，这种病人有时候会出现ALT和AST的轻度升高。最近有文献认为：非酒精性脂肪肝是引起ALT升高最主要的原因。作为一种较新的现代都市病--非酒精性脂肪肝目前在发病机制、自然转归和诊断方面仍存在很多问题，在治疗上更是缺乏令人满意的方法。慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染也是一个漫长的过程，在这个过程中，部分患者会由于热量过剩而引起体重增长过快导致超重和肥胖，诱发肝炎后脂肪肝。另外，感染了肝炎病毒以后，肝脏脂肪代谢的功能降低了，所以不注意饮食，也不运动，就容易得脂肪肝。在患脂肪肝时，有的病人因肝脏体积增大，肝包膜伸张而肝区疼痛加重，往往易误认为是肝炎本身恶化，因而患者更加限制活动和增加营养，结果形成恶性循环。这使临床上，经常发生脂肪肝和乙肝病症并存的现象，由于目前并无可同时治疗这两种病症的药物，医生经常面临治疗脂肪肝先还是治疗乙型肝炎先的矛盾。由于目前临床上针对性治疗脂肪肝的中药和西药均较少，尤其西药处方多以降血脂为主，降血脂药常常有肝损伤的副作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种可用于抗乙型肝炎病毒、降脂和减轻脂肪肝病变的药物组合物。
本发明的另一个目的在于提供一种制备抗乙型肝炎病毒、降脂和减轻脂肪肝病变的药物组合物的方法。
本发明的技术解决方案是：一种抗乙型肝炎病毒、降脂和减轻脂肪肝病变的药物组合物，该药物组合物的有效成分的原料药包括射干。
作为一种优化方案，该药物组合物的有效成分原料药还包括泽泻，即有效成分原料药由射干和泽泻组成。
该药物组合物中除了所述有效成分原料药外，还包含荷叶、野菊花、蒲公英、当归或莪术中的任一种原料药。
作为一种优化方案，该药物组合物中的有效成分原料药中射干和泽泻的重量份比例为5∶1。
本发明的一种制备抗乙型肝炎病毒、降脂和减轻脂肪肝病变的药物组合物的方法，取射干或者射干、泽泻，粉碎，加水搅拌浸泡，加热提取1-2小时，过滤，滤液浓缩成比重为1.05-1.1的稠膏，即得本发明药物组合物。
本发明的又一种制备抗乙型肝炎病毒、降脂和减轻脂肪肝病变的药物组合物的方法，取射干或者射干、泽泻，粉碎，加乙醇、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯中的任一溶剂搅拌浸泡，加热流提取1-2小时，过滤；残渣再加同种溶剂加热提取1-2小时，过滤，合并滤液，浓缩成比重为1.05-1.1的稠膏，即得本发明药物组合物。
本发明的另一种抗乙型肝炎病毒、降脂和减轻脂肪肝病变的药物组合物的制备方法，取射干或泽泻粉碎，加乙醇、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯中的任一溶剂搅拌浸泡，加热提取1-2小时，过滤；残渣再加同种溶剂加热提取1-2小时，过滤，合并滤液，浓缩成比重为1.05-1.1的稠膏待用；另取泽泻或射干粉碎，加水搅拌浸泡，加热提取1-2小时，过滤，取滤液浓缩成比重为1.05-1.1的稠膏，加入待用的稠膏混匀，即得本发明药物组合物。
上述加热提取包括加热回流提取、蒸煮提取、微波提取、超声提取的方式。
取本发明药物组合物，添加淀粉、植物油等辅料，制成临床上可接受的片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液或颗粒剂等剂型。
中医学认为脂肪肝主要因饮食不节，过食肥甘厚味或酗酒，伤及脾胃，运化失司，湿浊内生，蕴而化热，湿热胶结。湿聚热灼津停为痰，阻滞经络伤及肝胆。根据本病脾胃失司、肝胆不和、湿热痰阻的病机特点，治以祛湿化痰、舒肝利胆，调和脾胃，来拟本降脂和减轻脂肪肝病变的药方。射干具清热毒、消肿痛，消积泄下的功效。主要用于咽喉肿痛、痰咳气喘、食积饱胀等症；泽泻具清利肝胆湿热，利尿、渗湿、消热的功效。
现代药理研究证实，中药射干有明显的抗炎、抗病毒作用，但临床上多用于治疗病毒引起的咽喉疾病，并无用于脂肪肝方面的报道。中药泽泻除有利水功效，并有降压、降血脂及对肝脏的保护作用。
本发明所述的射干为鸢尾科植物射干Belamcanda chinensis(L.)DC.，白射干Iris dichotoma Pall.或川射干Iris tectorum Maxim.的干燥根茎。性寒，味苦。具有消热解毒，消痰利咽和消积泄下的功效。主要用于咽喉肿痛、痰咳气喘、食积饱胀等症。尤其是感受风热，痰咳气喘或痰热壅盛所致的咽喉肿痛等症，为治疗喉痹咽痛之要药。现代药理研究证实，射干对外感及咽喉疾患中的腺病毒、ECHO11有抑制作用；有抗炎解热及止痛作用。
本发明所述的泽泻为泽泻科植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep。的干燥块茎。味甘，寒。具有利小便，清湿热的功效。用于小便不利，水肿胀满，泄泻尿少，痰饮眩晕，热淋涩痛；高血脂。泽泻的脂溶性部份对实验性高胆固醇血症家兔有明显的降胆固醇作用和抗动脉粥样硬化作用，由其中分离得的泽泻醇A、B及泽泻醇A、B、C的乙酸酯，除泽泻醇B外，都有显著的降胆固醇作用。泽泻的乙醇提取物、乙醇浸膏的乙酸乙酯提取物等，对实验性高胆固醇血症家兔和大鼠都有降血脂作用。泽泻醇A乙酸酯、泽泻醇B乙酸酯和泽泻醇C乙酸酯可保护因四氯化碳中毒的小鼠肝脏，其中以泽泻醇C乙酸酯效果最好。泽泻醇A乙酸酯能促进尿液的排出。
本发明的目的在于以射干入药，用于降脂和减轻脂肪肝病变：降脂同时，又可抗乙型肝炎病毒；以射干和泽泻二味药配伍，共享以清泻为主，共奏舒肝利胆、祛湿化痰和消积泄下之功，既能干扰外源性胆固醇的吸收，又能影响内源性胆固醇的代谢。实验证明：单用射干，或者二者合用，即可以降脂，又可以具有肝保护作用。
附图说明
附图1为射干和泽泻单味药的提取物分别对载脂蛋白A-IV(apoA-IV)基因在Caco2/TC-7细胞内表达效果图；
附图2为射干和泽泻在各种比例下的提取物对载脂蛋白A-IV(apoA-IV)基因在Caco2/TC-7细胞内表达效果图；
附图3为本发明药物组合物的有效成分中泽泻：射干为1∶5时，不同溶剂提取物对载脂蛋白A-IV(apoA-IV)基因在Caco2/TC-7细胞内表达效果图；
附图4为给药干扰前大鼠肝脏病理学检查结果图，其中A为正常组无明显的阳性变化结果图，B为模型组呈轻度的脂肪变性结果图；
附图5为给药干预20天后非酒精性脂肪肝大鼠肝脏病理学检查结果图，其中A为正常组检查结果图，B为模型组检查结果图，C为阳性对照组检查结果图，D为高剂量组检查结果图，E为中剂量组检查结果图，F为低剂量组检查结果图。
具体实施方式
为证实本发明以射干和泽泻为主所组成的配方，可抗肝炎病毒、降脂和减轻脂肪肝病变的药效作用，我们设计了以下体外细胞试验和动物实验。本发明用不同的溶剂(包括水、1-100％乙醇、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯醇)对配方药物进行提取，并进行以下试验：
1.配方药物抗乙型肝炎病毒(HBV)试验
2.配方药物对载脂蛋白A-IV(apoA-IV)基因在Caco2/TC-7细胞内表达效果。
3.配方药物对脂肪细胞3T3-L1分泌的三酸甘油酯的抑制作用
4.根据体外试验的筛选结果，测定此配方药物对非酒精性脂肪肝模型大鼠的影响。
下面通过具体实验例证来说明本发明以射干和泽泻配方的药物，可抗肝炎病毒、降脂和减轻脂肪肝病变的药效作用效果：
实验例1：HepG 2.2.15细胞筛选抗HBV药物
1、材料与仪器
HepG 2.2.15细胞转染有HBV基因组；新生牛血清、DMEM培养基干粉(美国Gibco公司)；MTT(美国Sigma公司)；G418(美国Gibco公司)；96孔培养板(丹麦NUNC公司)；NU2500E型CO2孵箱(英国Forma Scientif公司)；ELISA试剂盒：华美生物工程公司，乙肝表面抗原试剂盒，乙肝E抗原试剂盒。受试的中药样品由香港科技大学生物系及中药研发中心提供
2、方法与结果
2.1取生长状况良好的细胞按一定密度1×105/接种于96孔板上，一般接种数量以12-15天能长满而不发生生长抑制为度。每天或每隔一天取三孔测MTT及ELISA值，连续观察两周，记录数据，绘制生长曲线。
2.2制备细胞悬液
将长满细胞瓶的细胞消化制成单细胞悬液，按一定密度(1*105)接种于96孔板，过夜，待细胞贴壁后(铺到瓶壁60％左右时)，观察细胞形态良好有伪足伸出，加药。
2.3加药
各药物从起始浓度开始，往下倍比稀释，共做八个浓度，每浓度三孔。设阳性对照药及正常细胞做对照。
2.4结果检测
在细胞生长高峰期停止培养，取上清做ELISA测两抗分泌情况，细胞做MTT测活力。MTT法测定细胞存活率，用固相放射免疫法测定HBsAg及HBeAg的SI值，根据统计学方法，求出各药物的CC50(细胞存活50％的药物浓度)及IC50(HBsAg或HBeAg被抑制50％的药物浓度)，以治疗指数SI值的大小(SI＝CC50/IC50)判定该药物抗HBV的疗效。
结果判断：SI＜1，化合物毒性大，无活性。
2＞SI＞1，该化合物有中等程度活性。
SI＞2，该化合物有显著活性。
表1配方药物抗HBV作用结果
以拉米夫定(3TC)为阳性对照
从表1中可以看出，射干的不同提取物中，射干30％乙醇提取物对HBsAg有明显的抑制活性。泽泻的不同提取物中，泽泻95％乙醇提取物对HBsAg有中等的抑制活性。而由射干和泽泻以5∶1组成配方的不同提取物中，其中水提物以及95％乙醇提取物对HBsAg和HBeAg分泌有明显的抑制作用
综上抗乙型肝炎病毒(HBV)试验结果表明：射干的提取物对HBsAg分泌有抑制活性；以射干和泽泻以5∶1组成配方的不同溶剂提取物对细胞的毒性作用非常小；其对HBsAg和HBeAg分泌有明显的抑制作用，效果明显优于拉米夫定对HBsAg和HBeAg的抑制作用。
实验例2：用载脂蛋白A-IV(ApoA-IV)基因在Caco2/TC-7细胞内表达功效筛选配方药物减肥降脂的作用。
载脂蛋白A-IV(Apo A-IV)是一种由小肠合成、与脂肪代谢密切相关的一种糖蛋白。饲喂脂肪后的老鼠，为了消化脂肪而分泌大量载脂蛋白A-IV，载脂蛋白A-IV的增加，通过中枢神经系统传导至动物脑下丘体，动物因此产生饱肚和食欲下降的感觉，从而抑制脂肪的摄取，可以达到减肥降脂的目的。载脂蛋白A-IV可以在Caco2/TC7细胞内可以高度表达。本研究选用已转染载脂蛋白A-IV(Apo A-IV)和荧光酶素基因的小肠细胞Caco2/TC7细胞系，作为细胞模型，将中药配方提取物加入到Caco2/TC7细胞中，通过测定荧光强度，用以检测中药配方对脂蛋白A-IV在Caco2/TC7细胞中表达的调节作用。如果药物能促进载脂蛋白A-IV基因的表达，则可以说明其具有促进脂质代谢的作用。
Caco2-/TC7细胞体系的培养及实验条件：
1、材料与仪器
Caco2/TC7购于美国模式菌种收集中心(ATCC)后转染有载脂蛋白A-IV(ApoA-IV)基因和荧光酶素基因；新生牛血清、DMEM培养基干粉(美国Gibco公司)；MTT(美国Sigma公司)；24孔培养板(丹麦NUNC公司)；NU2500E型CO2孵箱(英国Forma Scientif公司)；Luciferase assay试剂盒(美国Tropix Inc.，Bedford，MA)；受试的中药样品由香港科技大学生物系及中药研发中心提供
2、方法与结果
2.1取生长状况良好的细胞按一定密度105/ml接种于24孔板上，1-2天细胞贴壁后，则可以加药。
2.2将水溶性药液用培养液稀释成5mg/ml，其它药物则用DMSO按1∶1000稀释，再加入已有400uL培养液的细胞中(100uL/孔)使终浓度为1mg/ml，每个样品3个孔，同时设水和DMSO对照组，置37℃，5％CO2孵箱环境培养48小时，室温吸走培养液放入-80℃冰箱至少测定。
2.3约3小时后，加消化试剂消化破碎细胞，收集细胞液，震荡20分钟后，离心，收集上清液，测定蛋白浓度，检测荧光吸收度。
2.4检测结果分别见附图1、2和3。
结果显示，泽泻单味药对提高Apoa-IV基因表达的能力不显著，射干可提高Apoa-IV基因表达；而两味中药以不同比例配伍后提高Apo A-IV合成的能力较显著，其中又以射干与泽泻比例为5∶1作用最为显著。射干与泽泻以5∶1组成的配方，用不同溶剂进行提取的提取物中，95％的乙醇提取物提高Apoa-IV基因表达效果最好。
实验例3：配方药物对非酒精性脂肪肝模型大鼠的影响
1.实验目的
建立大鼠非酒精性脂肪肝模型，对中药复方进行筛选。
2.实验材料
2.1药物和试剂
胆固醇购自上海蓝季科技发展有限公司 批号：080708
胆酸钠购自上海蓝季科技发展有限公司 批号：080628
FFA测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所批号：20081205
猪油(市售)；蛋黄粉(市售)
受试的中药样品由香港科技大学生物系及中药研发中心提供
阳性药：脂必妥片(成都地奥九泓制药厂)
2.2实验仪器
灌胃针，注射器，烧杯，水浴锅，全自动生化仪，752分光光度计
2.3实验动物
SD大鼠，清洁级，♂，体重150±10g，共82只
2.4实验条件
实验在南京中医药大学实验动物中心(实验动物使用许可证号：SCXK(苏)2002-0027)内完成，室温：18～24℃，湿度：40～70％。
2.5统计学处理
计量资料以x±s表示，各组间实验数据的比较采用t检验。
3.实验方法
将雄性SD大鼠，随机分为正常组和模型组。正常组动物均给以普通饲料，模型组每天灌胃高脂乳剂，持续4个月，复制非酒精性脂肪肝大鼠模型。根据血清ALT、AST、TC、TG、HDL、LDL及肝脏TC、TG，并对部分动物进行病理组织学检查，确定非酒精性脂肪肝大鼠模型是否复制成功。将复制成功的模型大鼠，停止灌服高脂乳剂造模，并根据TG值分组，即：模型组、阳性对照组，复方高剂量组、中剂量组、低剂量组，正常对照组。给予药物20天，实验结束测血清ALT、AST、TC、TG、HDL、LDL、FAA及肝脏TC、TG，并进行病理组织学检查，观察受试药物对非酒精性脂肪肝大鼠模型的影响。
3.1实验步骤
3.1.1动物模型的建立
适应性喂养2d后的大鼠，随机分为正常组14只、模型组68只。所有动物均给以普通饲料、自由饮水；模型组每天ig高脂乳剂，乳剂具体配制方法为：(以配制200ml，猪油含量为15％为例)
(1)称取4g胆酸钠置于小烧杯中，加入10ml蒸馏水搅拌均匀。将20g胆固醇置于200ml研钵中，缓慢加入搅拌均匀的胆酸钠研磨均匀。将5ml吐温缓慢沿着研钵壁加入胆固醇中，研磨混匀后置于500ml烧杯中；
(2)称取60g蛋黄粉置于研钵中，将40ml蒸馏水慢慢加入蛋黄粉中，边加边研磨均匀。加入装有胆固醇的烧杯中。
(3)称取30g猪油，熔化。加入胆固醇与蛋黄粉混合液中，均匀搅拌，加蒸馏水至200ml。
实验开始第1-3月乳剂中猪油含量分别以15％、25％、40％每月递增，三个月后保持40％的比例至实验结束。造模时间持续4个月。造模结束前动物禁食12h，眼眶后静脉丛取血，常规制备血清，用拜尔全自动生化分析仪(型号ADVIA1650)分别检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、三酯酰甘油(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)和游离脂肪酸(FFA)等血生化指标。随机抽取空白组4只，模型组9只大鼠处死，进行病理组织学检查。结合生化检测各项结果和病理检测结果判断模型是否成功。
3.1.2中药复方对大鼠非酒精性脂肪肝的影响
根据大鼠血清TG水平，将模型复制成功大鼠随即分为模型组、阳性对照组，复方高剂量组、中剂量组、低剂量组，另一组为正常对照组，每组12只，见表2，
表2大鼠分组示意表
| 动物分组 | 动物数 | 剂量(g生药/kg) |
| 正常对照组 | 12只 | 普通饲料、自由饮水 |
| 模型组 | 12只 | 灌胃高脂乳剂 |
| 阳性组 | 12只 | 脂必妥0.35g/kg |
| 高剂量组 | 12只 | 10g/kg |
| 中剂量组 | 12只 | 5g/kg |
| 低剂量组 | 12只 | 2.5g/kg |
为排除药物对高脂乳剂吸收的影响，考察受试药物对大鼠非酒精性脂肪肝的干预作用，在给药观察期间停止灌服高脂乳剂造模，所有动物均给以普通饲料、自由饮水。高剂量组为10g生药/kg、中剂量组为5g生药/kg、低剂量组为2.5g生药/kg灌胃给药，阳性对照组和空白对照组、模型组大鼠分别灌以等体积的阳性药脂必妥0.35g/kg和蒸馏水。连续20天后，禁食12h，眼眶后静脉丛取血，常规制备血清，检测ALT、AST、TC、TG、HDL、LDL、FFA。处死后，取肝脏相同部位，常规制备肝匀浆，检测匀浆中TC、TG值，并进行病理组织学检查。另取其腹腔脂肪，称重。计算LEE’S值及脂肪系数，观察复方对非酒精性脂肪肝大鼠的干预作用以及复方对大鼠肥胖的影响。
4.检测指标
4.1每天记录体重、摄食量，观察大鼠一般情况；
4.2血清ALT、AST、TC、TG、HDL、LDL、FFA和肝匀浆TC、TG含量的检测
4.3肝脏组织以10％的中性福尔马林固定，石蜡包埋切片进行常规HE染色，在光镜下观察肝脂肪变性和炎症活动情况。肝细胞脂肪变性程度和炎症活动度判断标准参见文献。
5.实验结果
5.1大鼠给药干预前各项指标检测结果见表3-给药前大鼠血清生化指标。
与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
结果显示，各组大鼠血清中ALT、AST含量均未见统计学差异。各组大鼠血清中TG含量均高于正常组，且有统计学差异(P＜0.05)；TC含量亦均高于正常组，除A组外，其余各组与正常组比较均有统计学差异(P＜0.05，P＜0.01)；各组HDL、LDL含量高于正常组，其中模型组和低剂量组HDL升高，与正常组比较有统计学差异(P＜0.05)，模型组和低剂量组LDL升高，与正常组比较有统计学差异(P＜0.05)。
5.2复方给药20天后对非酒精性脂肪肝模型大鼠血清生化指标影响
见表4-给药后大鼠血清生化指标。
与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
结果显示，药物对非酒精性脂肪肝大鼠进行干预后，各组大鼠血清中ALT、AST含量均未见统计学差异；高剂量组血清中TC含量明显低于空白组(P＜0.01)；阳性对照组、复方高剂量组、中剂量组、低剂量组的血清TG值，与正常组比较有统计学差异(P＜0.01)；各组HDL、LDL和FFA含量均未见统计学差异。
5.3复方给药20天后对非酒精性脂肪肝模型肝匀浆生化指标影响
见表5-给药后对大鼠肝匀浆生化指标的影响，
结果显示，药物对非酒精性脂肪肝大鼠进行干预后，阳性对照组、复方高剂量组、中剂量组、低剂量组的大鼠肝匀浆中TC值，与正常组比较均有统计学差异(P＜0.05)；与模型组比较，高剂量组TG值明显降低(P＜0.01)，阳性对照组、复方中剂量组、低剂量组的大鼠肝匀浆中TG有统计学差异(P＜0.05)。
5.4复方对大鼠肥胖的影响
见表6-给药后对大鼠体重、肝指数、脂肪指数和Lee指数的影响增长，
与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05
结果显示，药物对非酒精性脂肪肝大鼠进行干预后，阳性对照组、复方高剂量组、中剂量组、低剂量组的大鼠大鼠的体重，与模型组比较均有统计学差异(P＜0.05)；肝指数、脂肪指数、LEE’S指数，未见统计学差异。
6.复方给药20天后肝脏病理学检查报告
6.1大鼠给药干预前肝脏病理学检查结果
参见图4，其中A为正常组无明显的阳性变化结果图，B为模型组呈轻度的脂肪变性结果图，其中正常组：(4只)肝小叶结构完整，肝细胞排列整齐，无脂肪变性，无炎性细胞浸润；模型组：(9只)肝小叶结构完整，其中4只肝细胞靠中央静脉区可见脂肪变性，占肝小叶1/4，炎性细胞浸润不明显；5只肝细胞靠中央静脉区可见脂肪变性，占肝小叶1/3，局部有炎性细胞浸润。
详细比较见表7，
| - | -/+ | + | ++ | +++ | |
| 正常组 | 4 | ||||
| 模型组 | 0 | 4 | 5 |
注：-：为无脂肪变性；+：为脂肪变性累及肝小叶1/3；++：为脂肪变性累及肝小叶2/3；+++：为脂肪变性累及肝小叶全部。
结论：符合轻度脂肪肝
根据对模型大鼠血液生化指标和肝脏病理组织学检查结果的综合分析，表明实验大鼠经过四个月的高脂乳剂造模，肝脏已经呈现轻度脂肪肝病变。
6.2药物干预20天后对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏病理学的影响
参见图5，为给药干预20天后非酒精性脂肪肝大鼠肝脏病理学检查结果图，
A为正常组检查结果图，其中的肝小叶结构清楚，肝索呈放射状排列，肝细胞结构清晰，核居中，无变性、坏死，小叶内无炎细胞浸润，无窦旁细胞增生，汇管区有少量炎细胞浸润。
B为模型组检查结果图，其中的12例病变程度相似，脂肪变性总体为轻度，范围小，不到肝小叶1/4，多数病变处的脂变肝细胞＜5个/高倍视野，部分病变处的脂变肝细胞5-10个/高倍视野，散在分布。肝小叶内还可见散在点灶状坏死为主，少量灶状坏死，坏死处可见炎细胞浸润。
C为阳性对照组检查结果图，其中与模型组相比，从脂肪变性范围观察，9/12例基本恢复正常，4/12点灶及灶状坏死改善不明显。
D为高剂量组检查结果图，其中与模型组相比，从脂肪变性范围观察，9/12例基本恢复正常，3/12例坏死消退，点灶及灶状坏死改善均不明显。
E为中剂量组检查结果图，其中与模型组相比，从脂肪变性范围观察，8/12例基本恢复正常，3/12例坏死消退，1/12例点灶及灶状坏死改善不明显。
F为低剂量组检查结果图，其中与模型组相比，从脂肪变性范围观察，6/12例基本恢复正常，6/12例点灶及灶状坏死改善不明显。
上述观察表明：模型组总体病变较轻，轻度脂肪变性，范围小，伴有散在点灶状坏死为主，少量灶状坏死，坏死处可见炎细胞浸润。与模型组相比，高剂量组、中剂量组、低剂量组有减轻脂肪变性的趋势。
7.实验小结：
本实验建立了非酒精性脂肪肝模型大鼠，并用中药复方提取物以高剂量、中剂量、低剂量分为三组予以干预。实验结果表明：阳性对照组、复方高剂量组、中剂量组、低剂量组的血清TG值，与正常组比较有统计学差异(P＜0.01)；复方高剂量组、中剂量组、低剂量组的大鼠肝匀浆中TC值，与正常组比较均有统计学差异(P＜0.05)；与模型组比较，高剂量组TG值明显降低(P＜0.01)，阳性对照组、复方中剂量组、低剂量组的大鼠肝匀浆中TG有统计学差异(P＜0.05)。病理结果观察显示：与模型组相比，高剂量组、中剂量组、低剂量组有减轻脂肪变性的趋势。
实施例1：
取射干100g，粉碎为粗粉，置于5L三角瓶中。加水1000ml，浸泡半个小时，超声提取30min(240W)，过滤，残渣再加水800ml，超声提取30min(240W)，过滤，合并滤液。滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏，得本发明提取物。
实施例2：
取射干100g，粉碎为粗粉，置于5L圆底烧瓶中。加30％乙醇1000ml，浸泡半个小时，回流提取1小时，过滤，残渣再加30％乙醇800ml，回流提取30min，过滤，合并滤液。滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏，得本发明提取物。
实施例3：
取泽泻20g，射干100g，粉碎为粗粉。置于2L三角瓶中，加水1000ml，浸泡半个小时后，置于微波萃取仪，萃取功率300W，搅拌速率100RPM，萃取时间1小时，过滤，残渣再加水800ml，再萃取1小时，过滤，合并滤液。滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏，得本发明提取物。
实施例4：
取泽泻200g，射干1000g，粉碎为粗粉。置于20L提取器中，加水15kg，充分搅拌浸泡，加热提取1小时，趁热过滤，残渣再用8kg水加热提取1小时，趁热过滤，合并滤液。滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏，得本发明提取物。
实施例5：
取泽泻200g，射干1000g，粉碎为粗粉。置于20L提取器中，加95％乙醇7.2kg，充分搅拌浸泡30分钟，加热回流提取2小时，趁热过滤，残渣再加95％乙醇3.6kg加热回流提取1小时，趁热过滤，合并滤液。滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏，得本发明提取物。
实施例6：
取泽泻1g，射干1000g，粉碎为粗粉。置于20L提取器中，加70％乙醇7.2kg，充分搅拌浸泡30分钟，加热回流提取2小时，趁热过滤，残渣再加70％乙醇3.6kg加热回流提取1小时，趁热过滤，合并滤液。滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏，得本发明提取物。
实施例7：
取泽泻100g，射干1000g，粉碎为粗粉。置于20L提取器中，加50％乙醇7.2kg，充分搅拌浸泡30分钟，加热提取2小时，趁热过滤，残渣再加50％乙醇3.6kg加热提取1小时，趁热过滤，合并滤液。滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏，得本发明提取物。
实施例8：
取泽泻500g，射干1000g，粉碎为粗粉。置于20L提取器中，加30％乙醇7.2kg，充分搅拌浸泡30分钟，加热回流提取2小时，趁热过滤，残渣再加30％乙醇3.6kg加热回流提取1小时，趁热过滤，合并滤液。滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏，得本发明提取物。
实施例9：
取泽泻1000g，射干1000g，粉碎为粗粉。置于20L提取器中，加50％正丁醇7.2kg，充分搅拌浸泡30分钟，加热回流提取2小时，趁热过滤，残渣再加50％正丁醇3.6kg加热回流提取1小时，趁热过滤，合并滤液。滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏，得本发明提取物。
实施例10：
取泽泻200g，川射干1000g，粉碎为粗粉。置于20L提取器中，加水15kg，充分搅拌浸泡，加热提取1小时，趁热过滤，残渣再用8kg水加热提取1小时，趁热过滤，合并滤液。滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏，得本发明提取物。
实施例11：
取泽泻200g，川射干1000g，粉碎为粗粉。置于20L提取器中，加乙酸乙酯7.2kg，充分搅拌浸泡30分钟，加热回流提取2小时，趁热过滤，残渣再加乙酸乙酯3.6kg加热回流提取1小时，趁热过滤，合并滤液。滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏，得本发明提取物。
实施例12：
取泽泻200g，射干1000g，当归200g，粉碎为粗粉。置于20L提取器中，加30％乙醇7.2kg，充分搅拌浸泡30分钟，加热回流提取2小时，趁热过滤，残渣再加30％乙醇3.6kg加热回流提取1小时，趁热过滤，合并滤液。滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏，得本发明提取物。
实施例13：
取泽泻200g，射干1000g，蒲公英200g，粉碎为粗粉。置于20L提取器中，加95％乙醇7.2kg，充分搅拌浸泡30分钟，加热回流提取2小时，趁热过滤，残渣再加95％乙醇3.6kg加热回流提取1小时，趁热过滤，合并滤液。滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏，得本发明提取物。
实施例14：
取泽泻200g，射干1000g，莪术200g，粉碎为粗粉。置于20L提取器中，加70％乙醇7.2kg，充分搅拌浸泡30分钟，加热回流提取2小时，趁热过滤，残渣再加70％乙醇3.6kg加热回流提取1小时，趁热过滤，合并滤液。滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏，得本发明提取物。
实施例15：
取泽泻200g，射干1000g，野菊花200g，粉碎为粗粉。置于20L提取器中，加50％乙醇7.2kg，充分搅拌浸泡30分钟，加热回流提取2小时，趁热过滤，残渣再加50％乙醇3.6kg加热回流提取1小时，趁热过滤，合并滤液。滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏，得本发明提取物。
实施例16：
取泽泻200g，射干1000g，荷叶200g，粉碎为粗粉。置于20L提取器中，加水15kg，充分搅拌浸泡，加热提取1小时，趁热过滤，残渣再用8kg水加热提取1小时，趁热过滤，合并滤液。滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏，得本发明提取物。
实施例17：
取泽泻200g置于5L提取器中，加95％乙醇1.5kg，充分搅拌浸泡30分钟，加热回流提取2小时，趁热过滤，残渣再加95％乙醇0.8kg加热回流提取1小时，趁热过滤，合并滤液；滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏；滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏。另取射干1000g置于5L提取器中，加水8kg，充分搅拌浸泡，加热提取1小时，趁热过滤，残渣再用4kg水加热提取1小时，趁热过滤，合并滤液。滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏；滤液浓缩至1.05～1.1比重的稠浸膏。另取泽泻提取物加入到射干提取物中，混匀，得本发明提取物。
实施例18：
取实施例1-17中发明提取物300g，加入淀粉等辅料，置于沸腾制粒机中混合、干燥、制粒，将所得颗粒装入1号硬明胶胶囊中，每粒0.3g，分装100粒，即得。其它项目应符合中华人民共和国药典2005年版胶囊剂项下的有关规定。
实施例19：
取实施例1-17中发明提取物100g，加入淀粉等辅料，置于沸腾制粒机中混合、干燥、制粒，将所得颗粒压片，每片0.2g，分装500片，即得。其它项目应符合中华人民共和国药典2005年片剂项下的有关规定。
实施例20：
取实施例1-17中发明提取物100g，粉碎成粉未，加入植物油等辅料，混合、压成软胶囊，每片0.5g，共分装500粒，即得。其它项目应符合中华人民共和国药典2005年软胶囊项下的有关规定。
Claims (5)
1.一种抗乙型肝炎病毒、降脂和减轻脂肪肝病变的药物组合物，其特征在于：该药物组合物中的有效成分原料药中射干和泽泻的重量份比例为5∶1，其中射干为1000重量份，泽泻为200重量份。
2.一种制备权利要求1所述的抗乙型肝炎病毒、降脂和减轻脂肪肝病变的药物组合物的方法，其特征在于：取重量份比例为5∶1的1000重量份射干、200重量份的泽泻粉碎，加水搅拌浸泡，加热提取1-2小时，过滤，取滤液浓缩成比重为1.05-1.1的稠膏，即得本发明药物组合物。
3.一种制备权利要求1所述的抗乙型肝炎病毒、降脂和减轻脂肪肝病变的药物组合物的方法，其特征在于：取重量份比例为5∶1的1000重量份射干、200重量份的泽泻粉碎，加乙醇、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯中的任一溶剂搅拌浸泡，加热提取1-2小时，过滤；残渣再加同种溶剂加热提取1-2小时，过滤，合并滤液，浓缩成比重为1.05-1.1的稠膏，即得本发明药物组合物。
4.一种制备权利要求1所述的抗乙型肝炎病毒、降脂和减轻脂肪肝病变的药物组合物的方法，其特征在于：取重量份比例为5∶1的1000重量份射干、200重量份的泽泻粉碎，加乙醇、甲醇、正丁醇、乙酸乙酯中的任一溶剂搅拌浸泡，加热回流提取1-2小时，过滤；残渣再加同种溶剂加热提取1-2小时，过滤，合并滤液，浓缩成比重为1.05-1.1的稠膏待用；另取泽泻或射干粉碎，加水搅拌浸泡，加热提取1-2小时，过滤，取滤液浓缩成比重为1.05-1.1的稠膏，加入待用的稠膏混匀，即得本发明药物组合物。
5.根据权利要求2、3或4所述的制备抗乙型肝炎病毒、降脂和减轻脂肪肝病变的药物组合物的方法，其特征在于：取本发明药物组合物，制成临床上可接受的片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液或颗粒剂。
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