CN103690761B - 一种抗流感病毒的中药组合物及制备方法 - Google Patents

Abstract

一种抗流感病毒的中药组合物及制备方法，本发明的药物由化橘红、紫苏叶、桂枝混合后提取的挥发油及水提取物，返魂草的乙醇及水提取物，黄芩、甘草、桔梗混合后的水提取物，平贝母粉组成。制备方法是：取化橘红、紫苏叶、桂枝6~15混合，加水，浸泡，水蒸气蒸馏，得挥发油和滤液。挥发油β-环糊精包合。魂草加乙醇回流提取，留药渣，滤液干燥成细粉。返魂草药渣与黄芩、甘草、桔梗混合，加水回流提取，得滤液，将先后制得的滤液合并，干燥，粉碎，得细粉；将平贝母粉和先后制得药粉混合，即得。本发明的积极效果是：获得一种有较好临床疗效，毒副作用小、药源丰富、价格低廉的抗流感病毒的中药。

Description

一种抗流感病毒的中药组合物及制备方法

技术领域

本发明属于中药领域，涉及一种抗流感病毒的中药组合物的制备方法。

背景技术

流行性感冒是严重危害人类健康的急性、病毒性呼吸道传染病。在上一个世纪中，4次大规模的流感病毒袭击了人类，给人类带来了深重灾难。直到现在全世界每年仍有10％的人受到流感病毒的威胁。进入新世纪后，SARS、H7N9病毒和甲型H1N1流感病毒的流行，给人类带来极大的危害，使医学界对抗病毒药物备受关注。

目前，临床上速效、显效的抗流感病毒药物较少，然而，由于疫情的蔓延和市场需求的推动，全球抗流感病毒药物市场创出新高。迄今为止，全球抵御流感病毒的主要措施仍以接种疫苗和西药为主，由于西药通常有不同程度的毒副作用，在临床上受到一定约束。在中药治疗领域，虽然有些治疗感冒的中成药，但都笼统的以清热解毒入手，疗效并不明显。至于专门用于抗流感病毒的中药还未被明确推出。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗流感病毒的中药组合物，用于治疗流行性感冒，克服以往治疗感冒用药存在的上述不足。

本发明的另一个目的是提供了一种前述中药组合物的制备方法，使其能够工业化生产以满足社会需要。

本发明的药物由化橘红5～15重量份、紫苏叶5～20重量份、桂枝6～15重量份混合后提取的挥发油及水提取物；返魂草5～20重量份的乙醇及水提取物；黄芩10～35重量份、甘草5～15重量份、桔梗6～15重量份混合后的水提取物；平贝母粉5～15重量份组成

本发明的中药组合物的所用中药原料最佳重量份数为：

返魂草15份、黄芩25份、紫苏叶15份、桂枝12份、甘草10份、桔梗12份、化橘红10份、平贝母10份。

本发明中药组合物的制备方法是：

1、取化橘红5～15重量份、紫苏叶5～20重量份、桂枝6～15混合，再加入它们总重量的8～10倍量体积的水，浸泡1～3小时，水蒸气蒸馏4～6小时，提取挥发油；后滤除药渣，留滤液；

2、将步骤1所得的挥发油用等体积量的无水乙醇溶解，滴加至β-环糊精溶液内，β-环糊精溶液水的体积ml:β-环糊精重量g为10:1～20:1，挥发油的体积ml:β-环糊精重量g为1：4～1:8，40～60℃下搅拌2～4小时，4℃下冷藏24小时，抽滤，沉淀物在40℃下烘干，得挥发油包合物；

3、取返魂草5～20重量份，加入它重量的6～10倍量体积的乙醇水溶液，其体积浓度为50%～90%（v/v），75-85℃回流提取1～3次，每次1～2小时，滤过，药渣留用，滤液合并，滤液在50℃下减压浓缩至相对密度1.30～1.35，50℃下减压干燥，粉碎，得细粉；

4、将步骤3留用的返魂草药渣与黄芩10～35重量份、甘草5～15重量份、桔梗6～15重量份混合，再加入总药材重量的8～12倍体积的水，85-95℃回流提取1～3次，每次0.5～1.5小时，滤除药渣，得滤液；

5、将步骤4所得滤液与步骤1所留滤液合并，减压浓缩至相对密度为1.01～1.05，用体积浓度为50%～90%（v/v）的乙醇溶液醇沉，放置过夜，滤过，滤液在50℃下减压浓缩至相对密度1.30～1.35，50℃下减压干燥，粉碎，得细粉；

6、取的平贝母5～15重量份，粉碎，与步骤3所得的细粉、步骤5所得细粉混合，用体积浓度为80%（v/v）的乙醇制粒，干燥，整粒，再加入步骤2所得的包合物，混合均匀，得抗流感病毒的中药组合物。

本发明制备的一种抗流感病毒的中药组合物可以用现有的中药制备技术和工艺方法制成任何固体剂型，包括胶囊剂、片剂、散剂或丸剂等。

本发明一种抗流感病毒的中药组合物的用法用量：口服；一日三次；每次1g。

本发明的积极效果是：通过对本发明中药组合物进行的急性毒性实验和药效学实验，结果表明本发明中药组合物在体外有明显的抗病毒、抗细菌作用，并对对金葡球菌和流感病毒引起的体内感染有显著的保护作用。依照中医理论，优选八味中药，按君臣佐使将八味中药相互配伍，研究中药在抗病毒方面的协同作用，最终以取得具有较好临床疗效的新中成药为目的，获得本发明一种毒副作用小、药源丰富、价格低廉的抗流感病毒的中药组合物。

具体实施方式

实施例1

1、取化橘红5重量份、紫苏叶5重量份、桂枝6重量份，再加入它们总重量的8倍量体积的水，浸泡3小时，水蒸气蒸馏6小时，提取挥发油；滤除药渣，留滤液。

2、所提取的挥发油用等体积量的无水乙醇溶解，滴加至β-环糊精溶液内，β-环糊精溶液水的体积ml:β-环糊精重量g为10:1，挥发油的体积ml:β-环糊精重量g为1：4，40～60℃下搅拌2小时，4℃下冷藏24小时，抽滤，沉淀物在40℃下烘干，得挥发油包合物。

3、取返魂草5重量份，再加入它重量的6倍量体积的乙醇水溶液，其体积浓度为50%（v/v），75℃回流提取3次，每次1小时，滤过，药渣留用，滤液合并，滤液50℃下减压浓缩至相对密度1.30～1.35，50℃下减压干燥，粉碎，得细粉。

4、将步骤3留用的返魂草药渣与黄芩35重量份、甘草15重量份、桔梗15重量份混合，加入总药材重量的8倍量体积的水，回流85℃回流提取3次，每次0.5小时，滤过，得滤液。

5、将步骤4所得滤液与与步骤1所得滤液合并，减压浓缩至相对密度为1.01～1.05，用体积浓度为70%（v/v）的乙醇溶液醇沉，放置过夜，滤过，滤液在50℃下减压浓缩至相对密度1.30～1.35，50℃下减压干燥，粉碎，得细粉。

6、取平贝母15重量份粉碎，与步骤3所得细粉、步骤5所得细粉混合，用体积浓度为80%（v/v）的乙醇制粒，干燥，整粒，再加入步骤2所得的挥发油包合物，混合均匀，制成一定固体剂型，得到一种抗流感病毒的中药组合物。

实施例2

1、取化橘红15重量份、紫苏叶20重量份、桂枝15重量份，再加入它们总重量的10倍量体积的水，浸泡2小时，水蒸气蒸馏5小时，提取挥发油；滤除药渣，留滤液。

2、将步骤1所得挥发油用等体积量的无水乙醇溶解，滴加至β-环糊精溶液内，β-环糊精溶液水的体积ml:β-环糊精重量g为15:1，挥发油的体积ml:β-环糊精重量g为1：6，40～60℃下搅拌4小时，4℃下冷藏24小时，抽滤，沉淀物在40℃下烘干，得挥发油包合物。

3、取返魂草20重量份，再加入它重量的8倍量体积的乙醇水溶液，其体积浓度为70%（v/v），85℃回流提取1次，每次2小时，滤过，药渣留用，滤液合并，滤液在50℃下减压浓缩至相对密度1.30～1.35，50℃下减压干燥，粉碎，得细粉。

4、将步骤3留用的返魂草药渣与黄芩10重量份、甘草5重量份、桔梗6重量份混合，加入总药材重量的10倍量体积的水，95℃回流提取3次，每次0.5小时，滤过，得滤液。

5，将步骤1留用的滤液与步骤4所得滤液合并，减压浓缩至相对密度为1.01～1.05，用体积浓度为50%（v/v）的乙醇溶液醇沉，放置过夜，滤过，滤液在50℃下减压浓缩至相对密度1.30～1.35，50℃下减压干燥，粉碎，得细粉。

6、取平贝母5重量份，与步骤3所得细粉、步骤5所得细粉混合，用体积浓度为80%（v/v）的乙醇制粒，干燥，整粒，加入步骤2所得挥发油包合物，混合均匀，制成一定固体剂型，得到一种抗流感病毒的中药组合物。

实施例3

1、取化橘红10重量份、紫苏叶13重量份、桂枝10重量份，再加入它们总重量的10倍量体积的水，浸泡3小时，水蒸气蒸馏6小时，提取挥发油；滤除药渣，滤液留用。

2、挥发油用等体积量的无水乙醇溶解，滴加至β-环糊精溶液内，β-环糊精溶液水的体积ml:β-环糊精重量g为20:1，挥发油的体积ml:β-环糊精重量g为1：8，40～60℃下搅拌4小时，4℃下冷藏24小时，抽滤，沉淀物在40℃下烘干，得挥发油包合物。

3、取返魂草13重量份，再加入它重量的10倍量体积的乙醇水溶液，其体积浓度为70%（v/v），80℃回流提取3次，每次1.5小时，滤过，药渣留用，滤液合并，50℃下减压浓缩至相对密度1.30～1.35，50℃下减压干燥，粉碎，得细粉。

4、将步骤3滤出的药渣与黄芩20重量份、甘草10重量份、桔梗10重量份混合，加入总药材重量的12倍量体积的水，90℃回流提取3次，每次1.5小时，滤过，得滤液。

5将步骤4所得滤液与步骤1所得滤液合并，减压浓缩至相对密度为1.01～1.05，用体积浓度为70%（v/v）的乙醇溶液醇沉，放置过夜，滤过，滤液在50℃下减压浓缩至相对密度1.30～1.35，50℃下减压干燥，粉碎，得细粉。

6、取平贝母10重量份粉碎，与步骤3所得细粉、步骤5所得细粉混合，用体积浓度为80%（v/v）的乙醇制粒，干燥，整粒，加入步骤2所得的挥发油包合物，混合均匀，制成一定固体剂型，得到一种抗流感病毒的中药组合物。

相关试验

一.急性毒性试验：

1.预试验

健康ICR小鼠10只，雌雄各半，体重20-22g。一次灌胃给予本发明中药组合物，最大给药浓度为80%（m/v）水溶液、小鼠的最大给药体积为0.4ml/10g，连续观察7天。小鼠未见明显毒性反应，体重正常增长，无一死亡。因而进行最大给药量试验。

2.最大给药量试验方法

健康ICR小鼠20只，雌雄各半，体重20-22g。禁食不禁水12小时后灌胃给予80%中药组合物1次，给药容积为0.8ml/10g。给药后继续禁食4h。见表1。

表1组别构成及总动物号

给药后连续观察12小时，观察动物毛色、精神状态、自主活动、呼吸、口鼻分泌物、饮食、二便，出现症状的起始时间、恢复时间等。异日不定期多次观察，连续观察14天。于给药前、给药后7d、14d各测量一次体重。体重变化见表2。观察期结束后，颈椎脱臼处死全部试验动物。解剖，肉眼观察动物外表、全身各脏器，记录主要脏器有无质地、颜色、体积等变化。若发现异常则作组织病理学检查。心、肝、脾、肺、肾、胃等主要脏器置10%甲醛溶液中固定保存，待进行组织病理学检查。

表2小鼠体重变化表（n=10，）

结果：小鼠给药后，活动明显减少，静卧，30min内均全部恢复，未见呼吸改变、运动异常、惊厥、流泪等症状，鼻、眼无分泌物，二便未见异常。观察期间小鼠饮食、行为活动正常，精神状态良好，动物体重正常增加。观察期结束后，解剖观察心、肝、脾、肺、肾、胃等主要脏器未见异常改变。测得中药组合物小鼠灌胃1日内最大给药剂量为32g/kg。

二、药效学实验

1.试验材料

病毒株：流感病毒A₃、甲型H₁N₁病毒、RSV病毒、流感病毒亚甲型FM₁（由中国预防医学科学院病毒研究所提供提供）

细胞模型：狗肾细胞MDCK细胞、Hep-11（由中国医学科学院基础医学研究所提供）

菌株：金黄色葡萄球菌（CMCC(B)26001-25）、大肠杆菌（CMCC(B)44104-4）、肺炎链球菌、甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌（CMCC(B)32172-10）均由中国药品生物制品检定所提供。

阳性对照药：连花清瘟胶囊（石家庄以岭药业股份有限公司提供）病毒唑（湖北纽兰药业有限公司提供）

实验动物：健康ICR小鼠（吉林大学基础医学院实验动物中心合格证号：SCXK(吉)2010-0001）

受试品：按实施例3制备方法所得样品（吉林修正药业新药开发有限公司提供）

2.体外抗病毒实验

将MDCK细胞和Hep-Ⅱ细胞按常规方法传代培养于96孔细胞板上，长成单层后，弃去培养液，分别加入100倍半数组织培养感染量(TCID50)的流感病毒液A₃、甲型流感H₁N₁病毒和RSV病毒液，置CO2培养箱37℃吸附2h。设病毒对照组、细胞对照组、阳性药病毒唑组、连花清瘟胶囊组和受试组。将受试药配成系列浓度，加入样品测试孔,使药物终浓度分别为5，10，20，40，60，80mg/mL，置CO2培养箱中37℃时培养3d后，观察细胞变化。结果见表3。

表3本发明的中药组合物对流感病毒和RSA病毒引起的细胞病变的影响

+有细胞病变，—无细胞病变

结果：本发明的中药组合物在≥20mg/mL时对流感病毒A3引起的细胞病变有抑制作用，中药组合物在≥60mg/mL时对甲型流感H₁N₁病毒RSV病毒引起的细胞病变有抑制作用。

3体内抗病毒实验

3.1分组

取小鼠120只，随机分为6组，即中药组合物高、中、低组，阳性对照组连花清瘟胶囊组,病毒唑组和空白对照组。

3.2实验方法

自感染病毒前1d开始灌胃给药，空白对照组给同体积蒸馏水，中药组合物高中低给不同剂量的本发明中药组合物，病毒唑组肌内注射给药。在乙醚浅麻醉下，滴鼻感染10倍半数感染量(MID50)的流感病毒液0.05mL/只，感染后继续给药5d，末次给药后4小时解剖小鼠，收集呼吸道洗液，接种于已长满单层细胞的96孔板，置CO2培养箱中37℃时培养3d后，观察细胞变化，计算各组的感染率。结果见表4。

表4本发明的中药组合物对流感病毒感染小鼠的保护作用

组别	剂量（g/kg）	动物数	感染数	感染率（%）
					空白对照组	—	20	18	90
中药组合物高	20	20	5	25**
					中药组合物中	10	20	10	50*
中药组合物低	5	20	15	75
					连花清瘟胶囊	3	20	10	50*
病毒唑	0.25	20	4	20**

与对照组比较。*P<0.05，**P<0.01

结果：本发明中药组合物高剂量(20g/kg)、中药组合物中剂量(10g/kg)可明显降低小鼠的病毒感染率(P<0.05和P<0.01)，而中药组合物低剂量（5g/kg）对感染率无明显影响。

4.对小鼠流感病毒性肺炎的影响

取健康ICR雄性小鼠60只,随机分成正常对照组、病毒感染对照组、病毒唑组、中药组合物低、中、高3个剂量组,共6组,每组10只。除正常对照组外,其余各组小鼠用乙醚轻度麻醉,选用流感病毒亚甲型鼠肺适应株FM1的15个LD50病毒浓度,滴鼻感染小鼠，每只0.05ml。从感染1d开始按0.1ml/10g的剂量灌胃给药,每天2次,连续5d,病毒感染对照组以等体积蒸馏水灌胃。第6天称取小鼠体重后解剖,肉眼观察肺部病变,记录肺部肝样实变的程度,摘取全肺称重,与体重计算肺指数值,并求出肺指数抑制率。计算公式如下:肺指数=[肺重(g)/体重(g)]×100%肺指数抑制率=(病毒对照组肺指数均值-试验组肺指数均值)/病毒对照组肺指数均值×100%

表5本发明的中药组合物对小鼠流感病毒性肺炎的影响

组别	剂量（g/kg）	动物数（只）	肺指数值	抑制率（%）
					正常对照组	----	10	0.93±0.12	---
病毒感染对照组	----	10	2.15±0.44	----
					病毒唑组	0.25	10	1.03±0.17**	52.09
中药组合物低	5	10	1.87±0.35	13.02
					中药组合物中	10	10	1.45±0.13*	32.56
中药组合物高	20	10	1.30±0.22*	39.53

与病毒感染对照组比较*P<0.05，**P<0.01

结果：中药组合物中、高剂量组小鼠的肺指数值明显低于病毒感染对照组(P<0.05),提示中药组合物对流感病毒引起的小鼠肺部炎症有明显抑制作用(表5)。

5.体外抗菌实验

按试管稀释法稀释药液并分别加人试管，加人0.05mL浓度为7.5x106·ml-1的待检菌，并设细菌对照管和空白对照管，以连花清瘟胶囊作为阳性对照。在37℃培养箱孵育18h，观察结果，求出样品对各种待检菌的最小抑菌浓度(MlCs)。

结果：中药组合物对大肠杆菌、金葡球菌、甲型溶血性链球菌、肺炎球菌、乙型溶血性链球菌均有抑制作用，其MICS值见表6。

表6本发明中药组合物和连花清瘟胶囊对不同细菌的MICs比较

细菌	中药组合物	连花清瘟胶囊
			大肠杆菌	800	450

金葡球菌	670	250
			甲型溶血性链球菌	184	62.5
肺炎链球菌	29	20
			乙型溶血性链球菌	98	78

6.体内抗菌实验

将小鼠随机分为6组，即中药组合物20，10，5g·kg^-1组，连花清瘟胶囊3g·kg^-1组，青霉素10万U·kg^-1（相当于临床用量的20倍）组和空白对照组。每组20只，取培养18h的金葡球菌，用5%胃膜素稀释为最小致死量（MLD）的菌悬液，每鼠腹腔注射0.5mL。于感染后1，6及12h灌胃给药，阳性药青霉素肌内注射，空白对照组给溶媒。记录小鼠死亡数，作统计学处理。

结果：中药组合物10、20g·kg^-1可明显降低金葡球菌感染小鼠的死亡率(P<0.05和P<0.01)，提示它有较好的体内抗菌作用，结果见表7。

表7本发明的中药组合物对金葡球菌感染小鼠的保护作用（invivo）

组别	给药剂量（g/kg）	动物数	感染数	感染率（%）
					对照组	—	20	19	85
中药组合物高	20	20	7	35**
					中药组合物中	10	20	11	55*
中药组合物低	5	20	15	75
					连花清瘟胶囊	3	20	10	50
青霉素	10万U/kg	20	1	5

与对照组比较*P<0.05，**P<0.01。

Claims (2)

1.一种抗流感病毒的中药组合物，其特征是，由返魂草15～20重量份的乙醇及水提取物，黄芩25～35重量份、甘草10～15重量份、桔梗12～15重量份混合后的水提物，化橘红10～15重量份、紫苏叶15～20重量份、桂枝12～15重量份混合后提取的挥发油及水提取物，平贝母粉10～15重量份组成。

2.一种抗流感病毒的中药组合物的制备方法，其特征是包括如下步骤：

(1)取化橘红10～15重量份、紫苏叶15～20重量份、桂枝12～15重量份混合，再加入它们总重量的8～10倍量体积的水，浸泡1～3小时，水蒸气蒸馏4～6小时，提取挥发油；后滤除药渣，滤液备用；

(2)将步骤(1)所得的挥发油用等体积量的无水乙醇溶解，滴加至β-环糊精溶液内，β-环糊精溶液水的体积ml:β-环糊精重量g为10:1～20:1，挥发油的体积ml:β-环糊精重量g为1:4～1:8，40～60℃下搅拌2～4小时，4℃下冷藏24小时，抽滤，沉淀物在40℃下烘干，得挥发油包合物；

(3)取返魂草15～20重量份，加入它重量的6～10倍量体积的乙醇水溶液，其浓度为50％～90％(v/v)，75～85℃回流提取1～3次，每次1～2小时，滤过，药渣备用，滤液合并，滤液在50℃下减压浓缩至相对密度1.30～1.35，50℃下减压干燥，粉碎，得细粉；

(4)将步骤(3)备用的返魂草药渣与黄芩25～35重量份、甘草10～15重量份、桔梗12～15重量份混合，再加入总药材重量的8～12倍量体积的水，85～95℃回流提取1～3次，每次0.5～1.5小时，滤除药渣，得滤液；

(5)将步骤(4)所得滤液与步骤(1)滤液合并，减压浓缩至相对密度为1.01～1.05，用50％～90％(v/v)的乙醇醇沉，放置过夜，滤过，滤液在50℃下减压浓缩至相对密度1.30～1.35，50℃下减压干燥，粉碎，得细粉；

(6)取平贝母10～15重量份，粉碎，与步骤(3)所得的细粉、步骤(5)所得细粉混合，用80％(v/v)的乙醇制粒，干燥，整粒，再加入步骤(2)所得的包合物，混合均匀，得抗流感病毒的中药组合物。