CN101695536B - 一种中药组合物在制备预防和治疗fm1病毒株所致甲型h1n1流感药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种预防和治疗H1N1病毒性感冒的中药组合物及其制备方法。该组合物主要由板蓝根、忍冬藤、山豆根、重楼、鱼腥草、绵马贯众、青蒿、白芷组成。
Description
发明领域
本发明涉及临床上用于预防和治疗甲型H1N1流感的领域。特别是涉及忍冬感冒中药制剂(忍冬感冒颗粒)用于预防和治疗甲型H1N1流感的新用途。
背景技术
甲型H1N1流感,又称为A(H1N1)型流感,旧称人感染猪流感。H1N1甲型猪流感病毒毒株引起的(该毒株包含有猪流感、禽流感和人流感三种流感病毒的基因片断)传染性疾病,是一种新型猪流感病毒,可以人传染人。中国卫生部明确将其纳入乙类传染病。世卫组织表明这种新型病毒到目前为止只是使人患病,还没有发现猪被感染的病例。其临床早期表现与人类流行性感冒相似,但甲型H1N1流感能够继发严重肺炎,肾功能衰竭和呼吸衰竭等并发症,导致死亡,与普通流感有区别。
目前防治甲型H1N1流感的手段主要是使用神经氨酸酶抑制剂(达菲,磷酸奥司他韦)治疗,它对甲型(H1N1)病毒可能有抑制作用,但也可能引起严重的副作用。预防则以注射甲型H1N1流感疫苗为主,目前我国已经研制出了针对于甲型H1N1流感的疫苗,并在北京等地开始规模性接种,但在全国普及该疫苗尚需时日,且该疫苗还尚十分不成熟。现在市场上的用于预防和治疗季节性流感的药物,对甲型H1N1流感并无确切效果。
发明内容
本发明解决的的目的是提供忍冬感冒中药制剂用于预防和治疗甲型H1N1流感的新用途
本发明药物组合物(忍冬感冒中药制剂)的原料药组成及配比如下(按重量份):
板蓝根150-210重量份 忍冬藤150-210重量份
山豆根65-115重量份 重楼65-115重量份
鱼腥草240-310重量份 绵马贯众110-160重量份
青蒿65-115重量份 白芷65-115重量份。
本药物组合物的制备方法:
取以上八味,去除杂质和非药用部分,加水煎煮1-3次,每次煎煮1-3小时(或热回流提取3-6小时),合并煎液,滤过,煎液浓缩至相对密度为1.05-1.15(40-60℃)的清膏,待冷至室温,加乙醇使含醇量为50-70%,搅匀,冷藏24-72小时,取上清液,过滤,滤液回收乙醇,浓缩至相对密度1.20-1.40(45-60℃),取浸膏,经过常规工序直接或间接加入药学上可接受的赋型剂制成临床可接受的剂型,如片剂、口服液、胶囊、颗粒剂、注射剂等。
下面实验例用于进一步说明本发明。
实验例1忍冬感冒颗粒抗流感病毒株活性的筛选研究
1.试验目的
筛选出忍冬感冒中药制剂(忍冬感冒颗粒)对流感病毒株有较强抑制或杀灭的病毒株。
2.材料
流感病毒株:流感病毒、副流感病毒、乙型流感病毒、腺病毒3型、呼吸道合胞病毒、流感病毒FM1株、流感病毒PR8株。鸡胚:10日龄鸡胚。阳性对照药。病毒唑(利巴韦林)针剂溶液,浓度100mg/ml。1%鸡红细胞:取自健康公鸡,经无菌生理盐水洗涤3次,配制成浓度为1%。
忍冬感冒颗粒:亚宝药业集团股份有限公司提供。批号:090801,规格:12g/包。
3.方法
3.1忍冬感冒颗粒供试品的制备
忍冬感冒颗粒用热蒸馏水溶解配制成100mg/ml的溶液,放冷后,用滤液过滤2次,取续滤液即得。
3.2药物对鸡胚的毒性测定选取
选取10日龄鸡胚,每组10个鸡胚,各供试品用无菌生理盐水按1∶1、1∶10:稀释后,分别按尿囊腔接种法注入0.2ml,设生理盐水对照组,石蜡封口后移入37℃温箱中培养,每日在检卵灯下观察鸡胚情况,观察3d(72h) 内鸡胚存活情况。
3.3流感病毒的传代及病毒半数感染量(EID50)的测定
将各冻存流感病毒适当稀释后接种鸡胚尿囊腔,37℃温箱中温育3d(72h),取鸡胚尿囊液(含流感病毒)用无菌生理盐水(预冷)作10-1~10-8倍连续稀释。每个稀释度分别尿囊腔内接种6个10日龄鸡胚,每胚0.1ml,24h内死亡者弃去,置4℃冰箱过夜,48h取出。取鸡胚尿囊液,做血凝试验,记录结果,计算病毒的EID50。
3.4药物抗流感病毒试验
药物抗流感病毒试验分为如下2组:
(1)同途径治疗组:先于尿囊腔接种病毒液0.1ml,浓度为20EID50(下同),置鸡胚37℃温箱1h,然后取出,每胚尿囊腔再注射药物0.2ml。
(2)同途径预防组:先于尿囊腔注射药物0.2ml,浓度为20EID50,置鸡胚37℃温箱1h,然后取出,每胚尿囊腔再接种病毒液0.1ml。
同时,将生理盐水(阴性对照)和病毒唑(阳性对照,浓度2.25mg/ml)代替药物,按以上方法分别进行操作。每组实验均接种6个鸡胚,37℃温箱中温育3d(72h),4℃过夜后收获尿囊液,进行血凝实验。
3.5血凝效价的测定
在大孔塑料板内,将收获的各胚尿囊液用生理盐水作1∶1,1∶2,1∶4,1∶8,1∶16,1∶32,1∶64,1∶128连续稀释,用1%鸡红细胞进行血球凝集试验,每孔加入1%的鸡红细胞悬液50μl,摇匀,静置45min后观察。根据血细胞凝集程度的不同来进行判断,以“++”为终点,即观察到红细胞在孔底形成一个环状,四周有小凝集块,以此为标准测定血凝滴度。判断结果时如果药物实验组血凝滴度为生理盐水对照组的4倍或4倍以下,即说明药物对病毒增殖有抑制作用,且效价下降越多则抗病毒效果越佳。
4.结果
4.1药物对鸡胚的毒性测定
用无菌生理盐水按1∶1,1∶10稀释的供试品对鸡胚均无明显的毒性作用。
4.2药物抗流感病毒试验
将每组实验6个鸡胚所得滴度计算其几何平均数,实验结果见表1。实 验中测得生理盐水对照组的血凝滴度为1∶128,若实验组血凝滴度分别低于1∶32,则说明药物有抗流感病毒活性。由表1可知,忍冬感冒颗粒对本实验所采用的流感病毒均具有抗流感病毒的作用。
表1忍冬感冒颗粒抗流感病毒株活性的筛选研究
5.结论
由实验结果可知,忍冬感冒颗粒对多种流感病毒均具有抗病毒作用,尤其是对流感病毒FM1株、流感病毒PR8株的抗病毒的作用最强。忍冬感冒颗粒抗流感病毒的预防作用优于治疗作用。
本实验提示忍冬感冒颗粒具有很强的抗甲型H1N1型病毒作用,可用于甲型H1N1流感的预防和治疗。
实验例2忍冬感冒颗粒对FM1、PR8流感病毒小鼠肺炎的治疗作用
1.试验目的
评价忍冬感冒中药制剂(忍冬感冒颗粒)对甲型H1N1流感病毒感染小鼠的预防与治疗作用。
2.试验材料
2.1受试药品
忍冬感冒颗粒:亚宝药业集团股份有限公司提供。批号:090801,规格:12g/包。储存条件:室温通风干燥处。
2.2阳性对照药
达菲(磷酸奥司他韦胶囊),瑞士巴塞尔豪夫迈·罗氏有限公司产品,上海罗氏制药有限公司分装,批号:B1162,分装批号:SH0033。
2.3剂量设计
忍冬感冒颗粒成人用量为12g/次,3次/日,小鼠试验用量分别为13.2g/kg/日、6.6g/kg/日、3.3g/kg/日(分别相当于人临床用药量的2倍、等倍和1/2倍),试验时按等容不等浓0.2ml/10g灌胃给药。达菲临床用量为150mg/60kg,换算成小鼠等效剂量为27.5mg/kg。均在同等情况下灌胃给药。
2.4动物
ICR小鼠(SPF/VAF级),体重14±1g,雌雄不限。由北京维通利华试验动物技术有限公司购买,许可证编号:0155422。
2.5病毒株
甲型H1N1流感病毒鼠肺适应株(FM/1/47株和PR/8/34株),购自中国疾病预防控制中心病毒病预防控制研究所,由中国中医科学院中药研究所ABSL-2生物安全实验室传代,-80℃保存备用。
3.方法及结果
3.1治疗给药对流感病毒感染正常小鼠肺炎模型的作用
取小鼠按体重等级随机分为6组,分别为正常对照组、模型对照组、达菲对照组、忍冬感冒颗粒大、中、小三个剂量组,每组10只。除正常对照组外,将小鼠用乙醚轻度麻醉,以15个LD50流感病毒液(FM1和PR8株)滴鼻感染,每只35ul。感染当天开始给药,每次按0.2ml/10g体重灌胃,每天1次,连续4天,正常对照组和模型对照组在同等条件下蒸馏水灌胃。第5天称重后解剖,称肺重计算肺指数及肺指数抑制率。结果采用组间比较t检验进行统计学处理。结果见表2、3。
肺指数/%=肺湿重(g)/体重(g)×100%
表2忍冬感冒颗粒对FM1株流感病毒小鼠肺炎的治疗作用
注:与正常组比较##P<0.01;与模型对照组比较,**P<0.01
表3忍冬感冒颗粒对PR8株流感病毒小鼠肺炎的治疗作用
注:与正常组比较##P<0.01;与模型对照组比较,*P<0.05
表2、表3结果显示:采用甲型H1N1流感病毒FM1和PR8二株病毒感染正常小鼠后,肺指数明显增高,与正常对照组比较有显著性差异(P<0.01);感染当天开始给予忍冬感冒颗粒治疗,4天后三个剂量组肺指数均有不同程度降低,其中小剂量组与模型对照组比较有显著性差异(P<0.01)。
3.2治疗给药对流感病毒感染正常小鼠肺炎模型的死亡保护作用
取小鼠按体重等级随机分为6组,分别为正常对照组、模型对照组、达菲对照组、忍冬感冒颗粒大、中、小三个剂量组,每组10只。除正常对照组外,将小鼠用乙醚轻度麻醉,以15个LD50流感病毒液(FM1和PR8株)滴鼻感染,每只35ul。感染当天开始给药,每次按0.2ml/10g体重灌胃,每天1次,连续4天,正常对照组和模型对照组在同等条件下蒸馏水灌胃。实验观察感染后14天内动物的死亡情况,计算死亡率、死亡保护率、平均存活天数和生命延长率。结果采用组间比较卡方检验和t检验进行统计学处理。结果见表4、5。
表4治疗给药对FM1株流感病毒正常小鼠肺炎的死亡保护作用
注:与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01
表4结果显示:采用甲型H1N1流感病毒\FM1株病毒感染正常小鼠14天后,动物死亡率为60%,平均存活天数为8.35天;感染当天治疗性给予忍冬感冒颗粒4天,中、小二个剂量组动物的死亡数明显减少,死亡率分别为40%、35%,死亡保护率分别为33.33%和41.67%,其中小剂量组与模型对照组比较有显著性差异(P<0.05);三个剂量组均可延长动物平均存活天数,分别为9.35天、10.05天、9.85天,其中中剂量组存活天数增加,与模型对照组比较有显著性差异(P<0.05)。
表5治疗给药对PR8株流感病毒正常小鼠肺炎的死亡保护作用
注:与模型对照组比较,*P<0.05,**P<0.01
表5结果显示:采用甲型H1N1流感病毒PR8株病毒感染正常小鼠14天后,动物死亡率为45%,平均存活天数为10.05天;感染当天治疗性给予忍冬感冒颗粒4天,三个剂量组动物的死亡数明显降低,死亡率分别为10%、15%、20%,死亡保护率分别为78.78%、66.67%和55.56%,其中大剂量组和中剂量组与模型对照组比较均有显著性差异(P<0.05);三个剂量组动物平均存活天数分别为10.40天、10.35天、10.35天,与模型对照组比较均无显著性差异(P>0.05)。
4.结论
(1)采用甲型H1N1流感病毒FM1株和PR8株病毒感染正常小鼠造成肺炎模型后,感染当天给予忍冬感冒颗粒,连续4天,小剂量组对小鼠肺部炎症有明显治疗作用。
(2)采用甲型H1N1流感病毒FM1株感染正常小鼠造成肺炎模型后,感染当天给予忍冬感冒颗粒,连续4天,感染后14天,观察到中、小剂量组可降低小鼠死亡数、延长感染小鼠存活天数,具有死亡保护作用。
(3)采用甲型H1N1流感病毒PR8株感染正常小鼠造成肺炎模型后,感染当天给予忍冬感冒颗粒,连续4天,感染后14天,观察到大剂量和中剂量组可明显降低小鼠的死亡数,延长感染小鼠存活天数,具有死亡保护作用。
下述实施例均能实现上述实验例的效果。
具体实施方式
实施例1:颗粒剂
板蓝根180g 忍冬藤180g 山豆根90g
重楼90g 鱼腥草270g 绵马贯众135g
青蒿90g 白芷90g
取以上八味,去除杂质和非药用部分,加水煎煮两次,每次煎煮2小时(或热回流提取3-4小时),合并煎液,滤过,煎液浓缩至相对密度为1.08-1.10(50℃)的清膏,待冷至室温,加乙醇使含醇量为60%,搅匀,冷藏24小时,取上清液,过滤,滤液浓缩至相对密度1.30-1.35(50℃)的浸膏,取浸膏1份,加蔗糖2-4份及糊精1-2份,混匀,制成颗粒,干燥,制成1000g,分装,即得。
功能主治:清热解毒,用于甲型H1N1流感。
用法用量:冲服,一次1~2袋,一日3次。
实施例2:片剂
板蓝根190g 忍冬藤190g 山豆根100g
重楼100g 鱼腥草250g 绵马贯众150g
青蒿100g 白芷100g
取以上八味,去除杂质和非药用部分,加水煎煮两次,每次煎煮2小时(或热回流提取3-4小时),合并煎液,滤过,煎液浓缩至相对密度为1.08-1.10(50℃)的清膏,待冷至室温,加乙醇使含醇量为60%,搅匀,冷藏48小时,取上清液,过滤,滤液回收乙醇,浓缩至相对密度为1.20-1.35(50℃)的浸膏,取浸膏加入适量的淀粉和糊精,常规制粒,干燥,制成颗粒,加入适量的硬脂酸镁,压片,包装,即得。清热解毒,用于甲型H1N1流感。
实施例3:胶囊剂
板蓝根165g 忍冬藤165g 山豆根105g
重楼105g 鱼腥草250g 绵马贯众120g
青蒿100g 白芷80g
取以上八味,去除杂质和非药用部分,加水煎煮两次,每次煎煮2小时(或热回流提取3-4小时),合并煎液,滤过,煎液浓缩至相对密度为1.08-1.10(50℃)的清膏,待冷至室温,加乙醇使含醇量为60%,搅匀,冷藏24小时,取上清液,过滤,滤液回收乙醇,浓缩至相对密度1.20-1.35(50℃)的浸膏,取浸膏加适量淀粉及糊精,混匀,制成颗粒,干燥,整粒,按常规制成胶囊,包装,即得。清热解毒,用于甲型H1N1流感。
实施例4:口服液
板蓝根170g 忍冬藤170g 山豆根80g
重楼80g 鱼腥草290g 绵马贯众145g
青蒿70g 白芷70g
取以上八味,去除杂质和非药用部分,加水煎煮两次,每次煎煮2小时(或热回流提取3-4小时),合并煎液,滤过,煎液浓缩至相对密度为1.08-1.10(50℃)的清膏,待冷至室温,加乙醇使含醇量为60%,搅匀,冷藏 24-48小时,取上清液,过滤,滤液回收乙醇,加水至900ml,搅匀,冷藏24-48小时,滤过,加0.25%尼泊金乙酯,搅匀,滤过,加新制蒸馏水至1000ml,经常规制成口服液每支装10ml,热压灭菌,检漏,质检,包装,即得。清热解毒,用于甲型H1N1流感。
实施例5:注射液
板蓝根180g 忍冬藤180g 山豆根90g
重楼90g 鱼腥草270g 绵马贯众135g
青蒿90g 白芷90g
取以上八味,去除杂质和非药用部分,加水煎煮两次,每次煎煮2小时(或热回流提取3-4小时),合并煎液,滤过,煎液浓缩至相对密度为1.08-1.10(50℃)的清膏,待冷至室温,加乙醇使含醇量为60-70%,搅匀,冷藏24-48小时,取上清液,过滤,滤液回收乙醇,加注射用水至900ml,搅匀,冷藏24小时,滤过,加注射用水加至1000ml,调pH值为5.5-7.5,灌装,115℃45分钟灭菌,检漏,质检,印字,包装,即得。清热解毒,用于甲型H1N1流感。
Claims (9)
1.一种中药组合物在制备预防和治疗甲型H1N1流感药物中的应用,其特征在于所述中药组合物是由下述原料药制成的:
所述甲型H1N1流感是由FM1病毒株所致。
2.如权利要求1所述的应用,其特征在于所述中药组合物是由下述原料药制成的:
6.如权利要求1-5任一所述的应用,其特征在于所述中药组合物由如下方法制成:取以上八味,去除杂质和非药用部分,加水煎煮1-3次,每次煎煮1-3小时;或热回流提取3-6小时,合并煎液,滤过,煎液浓缩至45-60℃相对密度为1.05-1.15的清膏,待冷至室温,加乙醇使含醇量为50-70%,搅匀,冷藏24-72小时,取上清液,过滤,滤液回收乙醇,浓缩至45-60℃相对密度1.15-1.40的浸膏,取浸膏,经过常规工序直接或间接加入药学上接受的赋型剂制成片剂、口服液、胶囊、颗粒剂、注射剂中的任一种。
7.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述中药组合物由如下方法制成:取以上八味,去除杂质和非药用部分,加水煎煮两次,每次煎煮2小时;或热回流提取3-4小时,合并煎液,滤过,煎液浓缩至50℃相对密度为1.08-1.10的清膏,待冷至室温,加乙醇使含醇量为60%,搅匀,冷藏24小时,取上清液,过滤,滤液回收乙醇,浓缩至50℃相对密度1.20-1.35的浸膏,取浸膏加适量糖粉及糊精,混匀,制成颗粒,干燥,制成1000g,分装,即得颗粒剂。
8.如权利要求1-5或7之一所述的应用,其特征在于所述病毒株是指病毒FM/1/47株。
9.如权利要求6所述的应用,其特征在于所述病毒株是指病毒FM/1/47株。
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