CN103627698A - 乙偶姻高耐受性菌株的选育和用该菌株发酵生产乙偶姻 - Google Patents
乙偶姻高耐受性菌株的选育和用该菌株发酵生产乙偶姻 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103627698A CN103627698A CN201310658954.7A CN201310658954A CN103627698A CN 103627698 A CN103627698 A CN 103627698A CN 201310658954 A CN201310658954 A CN 201310658954A CN 103627698 A CN103627698 A CN 103627698A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- acetoin
- strain
- concentration
- fermentation
- bacterial strain
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N Acetoin Chemical compound CC(O)C(C)=O ROWKJAVDOGWPAT-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 153
- GFAZHVHNLUBROE-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl propionaldehyde Natural products CCC(=O)CO GFAZHVHNLUBROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 73
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 38
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 21
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 10
- 238000009395 breeding Methods 0.000 title abstract description 7
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 title abstract description 7
- 241000193744 Bacillus amyloliquefaciens Species 0.000 claims abstract description 14
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 9
- WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 2-nitrosoguanidine Chemical compound NC(N)=NN=O WTLKTXIHIHFSGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 claims abstract description 6
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 claims abstract description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 32
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 16
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 10
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 10
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 10
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 10
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 8
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 3
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 claims description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 abstract description 6
- 238000012262 fermentative production Methods 0.000 abstract description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 2
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 abstract 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 6
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 235000013599 spices Nutrition 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 3
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N Diacetyl Chemical compound CC(=O)C(C)=O QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 description 2
- PKAUICCNAWQPAU-UHFFFAOYSA-N 2-(4-chloro-2-methylphenoxy)acetic acid;n-methylmethanamine Chemical compound CNC.CC1=CC(Cl)=CC=C1OCC(O)=O PKAUICCNAWQPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CLBXCDSXUXNOIM-UHFFFAOYSA-N 3-oxidanylbutan-2-one Chemical compound CC(O)C(C)=O.CC(O)C(C)=O CLBXCDSXUXNOIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- -1 5g/L Substances 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000010813 internal standard method Methods 0.000 description 1
- 230000006799 invasive growth in response to glucose limitation Effects 0.000 description 1
- 208000004396 mastitis Diseases 0.000 description 1
- 238000011177 media preparation Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000010413 mother solution Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 239000012450 pharmaceutical intermediate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 1
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明阐述了乙偶姻高耐受性菌株的选育和用该菌株发酵生产乙偶姻，属于生物工程技术领域(微生物领域)。本发明包括如下过程：(1)亚硝基胍诱变：将本实验室筛选并保藏的解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens FMME044作为出发菌株制备菌悬液，并将其与不同浓度的亚硝基胍反应，一段时间后，终止反应再进行后培养。(2)驯化：在驯化培养基里添加不同浓度的乙偶姻，制成不同浓度的乙偶姻发酵液，逐步提高乙偶姻浓度进行驯化培养。将上述驯化所得的菌悬液直接涂布到含高浓度乙偶姻的平板上。(3)筛选：在高浓度乙偶姻平板上能够长出的单菌落即为能耐高浓度乙偶姻的菌株。然后，挑取单菌落进行发酵验证并将高产菌株进行二次验证，筛选出一株比出发菌株产更高浓度乙偶姻的菌株，命名为B.amyloliquefaciens E-11。本发明同时公开一种采用该菌株生产乙偶姻的方法，采用本方法发酵40h乙偶姻产量为63g/L。
Description
技术领域
乙偶姻高耐受性菌株的选育和用该菌株发酵生产乙偶姻，属于生物工程领域。
背景技术
3-羟基丁酮(乙偶姻)是一种应用广泛、令人喜爱的食用香料，是国际上常用的香料品种，主要用作奶油、酸奶等香料的生产，国家标准GB2760-86规定其为允许使用的食品香料。80％含量的3-羟基丁酮俗称″醋嗡″，是酒类调香中一个极其重要的品种。在制药工业中，3-羟基丁酮作为具有手性的化合物可以用来合成稀有药物和药物中间体，如4-氯-4，5-二甲基-1，3二氧杂环戊烷-2-酮(CDMDO)和伦氨苄西林盐酸盐。CDMDO是一种重要的医药中间体，主要用于青霉素、氨苄青霉素等抗生素类药物的修饰，以合成具有光学活性的手性药物，从而较大程度地提高药效，减轻药物的副作用。另外，含有3-羟基丁酮和2，3-丁二酮的混合物还可以用来治疗乳腺炎。
3-羟基丁酮生产方法有：化学合成法、酶转化法和微生物发酵法，目前主要通过化学合成生产，已经实现工业化；化学合成法虽然操作简单易行，但污染重、成本高、原料受石油制约、产品质量难以达到食用香料的要求。微生物发酵法生产3-羟基丁酮的还未见工业化生产的报道。3-羟基丁酮是多种微生物的糖代谢的中间代谢产物，以糖质为原料利用微生物发酵可以生产3-羟基丁酮，与化学合成法及酶转化法相比，微生物发酵法具有生产成本低廉、对环境友好、产品纯度高、反应条件温和等优势，能解决化学合成法和酶转化法所面临的环境、资源、产品质量等问题受到越来越多的关注。
发明内容
本发明的目的是提供乙偶姻高耐受性菌株的选育和用该菌株发酵生产乙偶姻。
本发明技术方案：
1、乙偶姻高耐受性菌株的选育：
(1)亚硝基胍诱变
将本实验室筛选并保藏的解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens FMME044作为出发菌株制备菌悬液，并将其与不同浓度的亚硝基胍反应，一段时间后，终止反应再进行后培养。
(2)驯化
在驯化培养基里添加不同浓度的乙偶姻，制成不同浓度的乙偶姻发酵液，将上述后培养的菌悬液添加到含有低浓度乙偶姻的培养基中，培养一段时间后再转接到相同乙偶姻浓度的培养基中，每个浓度转接三次之后，再转接到含有高浓度乙偶姻的培养基中，重复此操作，直到培养基中乙偶姻浓度达到80g/L。将上述驯化所得的菌悬液直接涂布到含高浓度乙偶姻的平板上。
(3)筛选并鉴定
，在高浓度乙偶姻平板上能够长出的单菌落即为能耐高浓度乙偶姻的菌株。然后，挑取单菌落进行发酵验证并将高产菌株进行二次验证，筛选出一株比出发菌株高产且能耐受高浓度乙偶姻的菌株，经生理生化鉴定并命名为B.amyloliquefaciens E-11。
2、根据权利要求1所述乙偶姻高耐受性菌株的选育，其筛选得到耐高浓度乙偶姻并高产乙偶姻菌株的鉴定方法如下：
1)形态学鉴定
菌落形态、细胞形态、革兰氏染色、芽孢染色；
2)生理生化鉴定
接触酶试验，V.P.及M.R.试验，明胶液化及淀粉水解，耐盐耐酸试验，硝酸盐还原试验；
通过形态学、生理生化鉴定确定该菌株为解淀粉芽孢杆菌，并命名为B.amyloliquefaciensE-11。
3、本发明公开的一种乙偶姻的生产方法，其特征是采用B.amyloliquefaciens FMME044为出发菌株，经过亚硝基胍诱变，驯化，筛选和发酵培养。以筛选固体培养基，筛选液体培养基，种子培养和液体发酵进行筛选和发酵生产乙偶姻。
(1)筛选固体培养：
固体培养基以g/L计：乙偶姻浓度30g/L、40g/L、50g/L、60g/L、70g/L和80g/L，葡萄糖20g/L，大豆蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，氯化钠，5g/L，琼脂，20g/L，初始pH7.0；
培养条件：恒温培养箱中37℃培养1-3天。
(2)筛选液体培养基：
筛选培养基以g/L计：乙偶姻浓度30、40、50、60、70和80，葡萄糖130，大豆蛋白胨12.5，酵母粉12.5，KH2PO43，K2HPO43，MgSO4·7H2O0.4；
培养条件：温度37℃、摇床转速200rpm条件下，培养12-14h。
(3)种子培养：
种子培养基以g/L计：葡萄糖10，牛肉膏5，蛋白胨5，初始pH7.0；
培养条件：温度37℃、摇床转速200rpm条件下，培养10-12h；
(4)液体发酵培养：
发酵培养基以g/L计：葡萄糖140，蛋白胨12.5，酵母粉12.5，KH2PO43，K2HPO43，MgSO4·7H2O0.4，初始pH7.0；
发酵条件：接种量10％(v/v)，温度37℃、摇床转速200rpm条件下，发酵60-72h。
(5)7L发酵罐发酵培养：
发酵培养基以g/L计：葡萄糖140，蛋白胨12.5，酵母粉12.5，KH2PO43，K2HPO43，MgSO4·7H2O0.4，初始pH7.0；
7L发酵罐中发酵培养基装液量为4L，接种量10％(v/v)，温度为37℃，搅拌转速为400r/min，通气量为1.0vvm，过程中控制pH6.5，培养时间60h。
3、乙偶姻产量的测定
取发酵液10000rpm离心10min，收集上清液，并以乙偶姻作为标准品，配制1、2、3、4、5、6、7g/L的标准溶液。将上清液与标准溶液经0.45μm微孔滤膜过滤后，用高效液相色谱法测定乙偶姻的含量。
色谱条件：
色谱柱：Aminex HPX-87H；
流动相：5mmol/L稀硫酸，用0.45μm滤膜过滤；
柱温：60℃；
检测波长：290nm；
进样量：20μL
流速：0.6ml/min。
标准曲线在1-7g/L之间呈现良好的线性关系(图1)，回归方程：y＝0.3517x，R2＝0.9992。据此得到40h乙偶姻的产量为63g/L，如图1。
附图说明
图1乙偶姻标准曲线
图2色谱检测结果，A3g/L乙偶姻标样，B40h发酵液
具体实施方式
以下是乙偶姻高耐受性菌株的选育和用该菌株发酵生产乙偶姻的实施例。
实施例1
(1)亚硝基胍诱变：
①制备菌悬液
将原始菌株Bacillus amyloliquefaciens FMME044取0.2mL接入50mL种子培养基中，37℃摇床培养14h至对数中后期，再以30％接种量接入新的培养基6h，使细胞同步培养。分别取培养液10mL于50mL离心管中，离心收集菌体，用0.1mol/LpH6.0的磷酸缓冲液洗涤3次，最后加入7mL缓冲液，重悬菌体。取菌悬液0.7mL添加到5mL的离心管中，共8支，备用。
②诱变反应
吸取0.3mLNTG母液分别加入5mL含有0.7mL菌悬液的离心管中混匀，静置30min、45min。
③终止反应
将含有处理液的离心管在10000r/min离心5min，倒掉上清液，再加入3mL的生理盐水，10000r/min离心5min，倒掉上清液，重复以上操作2次，最后加入3mL种子培养基振荡混匀。
④后培养
将混合均匀的菌悬液转入含有50mL的种子培养基，37℃、200r/min振荡培养12h，经细胞分裂，使突变性状能稳定遗传。
(2)驯化。
①将上述后培养的菌液取5mL转接到含50mL驯化培养基的500mL摇瓶中(乙偶姻浓度为0g/L)，37℃、200r/min培养12h后，再取5mL菌液转接到含50mL驯化培养基的500mL摇瓶中(乙偶姻浓度为30g/L)，37℃、200r/min培养12h，重复转接乙偶姻浓度为30g/L的驯化培养基3次，再取第三次培养12h后的菌液5mL转接到含50mL驯化培养基的500mL摇瓶中(乙偶姻浓度为40g/L)，重复转接乙偶姻浓度为40g/L的驯化培养基3次。重复此操作，逐步提高培养基中乙偶姻的浓度，分别为50、60、70和80g/L进行培养。
②将经过逐级驯化后得到的菌液稀释涂布于选择培养基上(乙偶姻浓度分别为0、30、40、50、60、70和80g/L)，37℃培养箱培养1-3天。
(3)筛选
①从含有不同浓度乙偶姻的平板上挑取单菌落，然后进行摇瓶验证，选取乙偶姻高产菌株进行保藏。
②初次筛选得到的菌株经过发酵验证后，挑选产量比出发菌株高的菌株再次进行摇瓶发酵验证，筛选出产量较高的菌株。
③将上述分离纯化得到的菌种接种于种子培养基中，然后转接到发酵培养基中，培养48h后离心收集发酵液，发酵液经过预处理并采用内标法经高效液相色谱进行定性分析，使得乙偶姻标准品峰高增高的菌株即为产乙偶姻的解淀粉芽孢杆菌。筛选出35株高产乙偶姻的菌株，其中菌株E-11产乙偶姻的能力最强。
实施例2
对筛选的FMME044菌株按《微生物分类学》进行生理生化特性鉴定(见下表1、2)：
表1菌株(FMME044)与枯草芽孢杆菌菌落形态特征对比
表2菌株(FMME044)生理生化鉴定结果
实施例3
步骤1：培养基制备
种子培养基(g/L)：葡萄糖10，牛肉膏5，蛋白胨5，氯化钠5，初始PH7.0；
发酵培养基(g/L)：葡萄糖140，蛋白胨12.5，酵母粉12.5，KH2PO43，K2HPO43，MgSO4·7H2O0.4，初始pH7.0；
步骤2：种子制备
500mL三角瓶中种子培养基为50mL，121℃灭菌15min。菌株保藏于终浓度为15％的甘油管中，取200μL保藏菌液接入50mL种子培养基中进行种子培养，37℃，200rpm培养12h。
步骤3：摇瓶发酵培养
种子培养基以10％的接种量接入50mL发酵培养基进行发酵培养。在37℃，200rpm条件下发酵48h，取发酵液离心，收集上清液用HPLC测定发酵液中的乙偶姻的含量。产量为59g/L。
实施例3
步骤1：同实施例2
步骤2：同实施例2
步骤3：7L发酵罐发酵培养
7L发酵罐中发酵培养基装液量为4L，接种量为10％(v/v)，培养温度为37℃，搅拌转速为400r/min，通气量为1.0vvm，控制pH6.5，培养时间40h取发酵液离心，收集上清液用HPLC测定发酵液中的乙偶姻的含量。产量为63g/L。
Claims (3)
1.乙偶姻高耐受性解淀粉芽孢杆菌的选育，包括以下步骤：
(1)亚硝基胍诱变
将本实验室筛选并保藏的解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens FMME044作为出发菌株制备菌悬液，并将其与不同浓度的亚硝基胍反应，一段时间后，终止反应再进行后培养；
(2)驯化
在驯化培养基里添加不同浓度的乙偶姻，制成不同浓度的乙偶姻发酵液，将上述后培养的菌悬液添加到含有低浓度乙偶姻的培养基中，培养一段时间后再转接到相同乙偶姻浓度的培养基中，每个浓度转接三次之后，再转接到含有相对高浓度乙偶姻的培养基中，重复此操作，直到培养基中乙偶姻浓度达到80g/L；将上述驯化所得的菌悬液直接涂布到含高浓度乙偶姻的平板上；
(3)筛选
在高浓度乙偶姻平板上能够长出的单菌落即为能耐高浓度乙偶姻的菌株；然后，挑取单菌落进行发酵验证并将高产菌株进行二次验证，筛选出35株比出发菌株高产且能耐受高浓度乙偶姻的菌株，其中菌株E-11生产乙偶姻的能力最强。
2.根据权利要求1所述，其筛选得到生产乙偶姻菌株，经形态学、生理生化鉴定为解淀粉芽孢杆菌，并命名为B.amyloliquefaciens E-11。
3.一种乙偶姻的生产方法，其特征是采用B.amyloliquefaciens E-11为出发菌株，以种子培养和液体发酵生产乙偶姻；
1)种子培养：
种子培养基以g/L计：葡萄糖10，牛肉膏5，蛋白胨5，初始PH7.0；
培养条件：温度37℃、摇床转速200rpm条件下，培养12h；
2)液体发酵培养：
发酵培养基以g/L计：葡萄糖140，蛋白胨12.5，酵母粉12.5，NaCl 5，K2HPO43，MgSO4·7H2O0.4，初始pH7.0；
发酵条件：接种量10％(v/v)，温度37℃、摇床转速200rpm条件下，发酵60-72h；
3)7L发酵罐发酵培养：
发酵培养基以g/L计：葡萄糖140，蛋白胨12.5，酵母粉12.5，NaCl 5，K2HPO43，MgSO4·7H2O0.4，初始pH7.0；
7L发酵罐中发酵培养基装液量为4L，接种量10％(v/v)，温度为37℃，搅拌转速为400r/min，通气量为1.0vvm，过程中不控制pH，培养时间32-48h。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310658954.7A CN103627698A (zh) | 2013-12-05 | 2013-12-05 | 乙偶姻高耐受性菌株的选育和用该菌株发酵生产乙偶姻 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310658954.7A CN103627698A (zh) | 2013-12-05 | 2013-12-05 | 乙偶姻高耐受性菌株的选育和用该菌株发酵生产乙偶姻 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103627698A true CN103627698A (zh) | 2014-03-12 |
Family
ID=50209147
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310658954.7A Pending CN103627698A (zh) | 2013-12-05 | 2013-12-05 | 乙偶姻高耐受性菌株的选育和用该菌株发酵生产乙偶姻 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103627698A (zh) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107164281A (zh) * | 2017-07-03 | 2017-09-15 | 中国石油大学(华东) | 一株芽孢杆菌及其在制备13c标记的乙偶姻中的应用 |
| CN108251339A (zh) * | 2018-03-12 | 2018-07-06 | 江南大学 | 一株乙偶姻高产菌株及其在发酵生产乙偶姻中的应用 |
| CN109563471A (zh) * | 2016-07-19 | 2019-04-02 | 腾亚研创 | 产生2,3-丁二醇和其他代谢物的细菌菌株 |
| CN109652348A (zh) * | 2019-02-25 | 2019-04-19 | 山西农业大学 | 一株耐受性强、高产酸和乙偶姻的巴氏醋杆菌及在山西老陈醋生产中的应用 |
| CN109868242A (zh) * | 2019-03-13 | 2019-06-11 | 南京工业大学 | 一株耐盐产乙偶姻的枯草芽孢杆菌及其应用 |
| CN113186247A (zh) * | 2020-01-14 | 2021-07-30 | 广东利世康低碳科技有限公司 | 一种耐受辣椒的乙醇高产酵母菌及其筛选方法和验证方法 |
| CN116200613A (zh) * | 2023-02-22 | 2023-06-02 | 武汉科技大学 | 一种钒溶液驯化诱变细菌浸出钒页岩中钒的方法 |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000003021A2 (en) * | 1998-07-10 | 2000-01-20 | Jens Nielsen | Metabolically engineered microbial cell comprising a modified redox activity |
| RU2180575C2 (ru) * | 2000-02-21 | 2002-03-20 | Губанов Данил Викторович | Штамм bacillus subtilis x-15, используемый для профилактики и лечения эндометритов у коров |
| CN101016530A (zh) * | 2007-01-29 | 2007-08-15 | 山东省食品发酵工业研究设计院 | 一株产高纯度3－羟基丁酮的枯草芽孢杆菌 |
| US20070259410A1 (en) * | 2006-05-02 | 2007-11-08 | Donaldson Gail K | Fermentive production of four carbon alcohols |
| CN101294143A (zh) * | 2008-06-20 | 2008-10-29 | 南京工业大学 | 一种产3-羟基丁酮的菌株及其应用 |
| CN101899407A (zh) * | 2010-05-10 | 2010-12-01 | 江南大学 | 一株高产3-羟基丁酮的地衣芽胞杆菌mel09的筛选及应用 |
| WO2012033832A2 (en) * | 2010-09-07 | 2012-03-15 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Integration of a polynucleotide encoding a polypeptide that catalyzes pyruvate to acetolactate conversion |
| CN102634563A (zh) * | 2011-10-19 | 2012-08-15 | 江南大学 | 一种产乙偶姻菌株的筛选方法及用该菌株发酵法生产乙偶姻 |
| CN103333842A (zh) * | 2013-07-10 | 2013-10-02 | 山东省食品发酵工业研究设计院 | 一株产3-羟基丁酮的芽孢杆菌及其应用 |
-
2013
- 2013-12-05 CN CN201310658954.7A patent/CN103627698A/zh active Pending
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000003021A2 (en) * | 1998-07-10 | 2000-01-20 | Jens Nielsen | Metabolically engineered microbial cell comprising a modified redox activity |
| RU2180575C2 (ru) * | 2000-02-21 | 2002-03-20 | Губанов Данил Викторович | Штамм bacillus subtilis x-15, используемый для профилактики и лечения эндометритов у коров |
| US20070259410A1 (en) * | 2006-05-02 | 2007-11-08 | Donaldson Gail K | Fermentive production of four carbon alcohols |
| CN101016530A (zh) * | 2007-01-29 | 2007-08-15 | 山东省食品发酵工业研究设计院 | 一株产高纯度3－羟基丁酮的枯草芽孢杆菌 |
| CN101294143A (zh) * | 2008-06-20 | 2008-10-29 | 南京工业大学 | 一种产3-羟基丁酮的菌株及其应用 |
| CN101899407A (zh) * | 2010-05-10 | 2010-12-01 | 江南大学 | 一株高产3-羟基丁酮的地衣芽胞杆菌mel09的筛选及应用 |
| WO2012033832A2 (en) * | 2010-09-07 | 2012-03-15 | Butamax(Tm) Advanced Biofuels Llc | Integration of a polynucleotide encoding a polypeptide that catalyzes pyruvate to acetolactate conversion |
| CN102634563A (zh) * | 2011-10-19 | 2012-08-15 | 江南大学 | 一种产乙偶姻菌株的筛选方法及用该菌株发酵法生产乙偶姻 |
| CN103333842A (zh) * | 2013-07-10 | 2013-10-02 | 山东省食品发酵工业研究设计院 | 一株产3-羟基丁酮的芽孢杆菌及其应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| PCMANO P ET AL.: "葡萄酒酿酒酵母产生的乙偶姻", 《MICROBIOL LETT》 * |
| 张小舟等: "乙偶姻合成研究现状及展望", 《江苏化工》 * |
| 王萌: "产乙偶姻枯草芽孢杆菌代谢工程改造的初步研究", 《全国优秀硕士论文全文数据库》 * |
| 罗建超等: "大曲中产酱香芽孢杆菌的筛选及其代谢产香探析", 《酿酒科技》 * |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109563471A (zh) * | 2016-07-19 | 2019-04-02 | 腾亚研创 | 产生2,3-丁二醇和其他代谢物的细菌菌株 |
| CN109563471B (zh) * | 2016-07-19 | 2023-02-14 | 腾亚研创 | 产生2,3-丁二醇和其他代谢物的细菌菌株 |
| CN107164281A (zh) * | 2017-07-03 | 2017-09-15 | 中国石油大学(华东) | 一株芽孢杆菌及其在制备13c标记的乙偶姻中的应用 |
| CN107164281B (zh) * | 2017-07-03 | 2020-06-23 | 中国石油大学(华东) | 一株芽孢杆菌及其在制备13c标记的乙偶姻中的应用 |
| CN108251339A (zh) * | 2018-03-12 | 2018-07-06 | 江南大学 | 一株乙偶姻高产菌株及其在发酵生产乙偶姻中的应用 |
| CN109652348A (zh) * | 2019-02-25 | 2019-04-19 | 山西农业大学 | 一株耐受性强、高产酸和乙偶姻的巴氏醋杆菌及在山西老陈醋生产中的应用 |
| CN109652348B (zh) * | 2019-02-25 | 2021-12-28 | 山西农业大学 | 一株耐受性强、高产酸和乙偶姻的巴氏醋杆菌及在山西老陈醋生产中的应用 |
| CN109868242A (zh) * | 2019-03-13 | 2019-06-11 | 南京工业大学 | 一株耐盐产乙偶姻的枯草芽孢杆菌及其应用 |
| CN109868242B (zh) * | 2019-03-13 | 2020-07-03 | 南京工业大学 | 一株耐盐产乙偶姻的枯草芽孢杆菌及其应用 |
| CN113186247A (zh) * | 2020-01-14 | 2021-07-30 | 广东利世康低碳科技有限公司 | 一种耐受辣椒的乙醇高产酵母菌及其筛选方法和验证方法 |
| CN116200613A (zh) * | 2023-02-22 | 2023-06-02 | 武汉科技大学 | 一种钒溶液驯化诱变细菌浸出钒页岩中钒的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103627698A (zh) | 乙偶姻高耐受性菌株的选育和用该菌株发酵生产乙偶姻 | |
| US12129504B2 (en) | Caproate-producing bacterium with multiple substrate utilization capabilities and its applications | |
| CN101792727B (zh) | 一株凝结芽孢杆菌及其在l-乳酸钠制备中的应用 | |
| CN108251339B (zh) | 一株乙偶姻高产菌株及其在发酵生产乙偶姻中的应用 | |
| CN102965311A (zh) | 一种枯草芽孢杆菌及其在制备γ-D-聚谷氨酸中的应用 | |
| CN101993841B (zh) | 一种黄单胞菌及用其制备黄原胶的方法 | |
| CN104342390A (zh) | 一种苜蓿中华根瘤菌株及其组合物与应用 | |
| CN110982855B (zh) | 一种合成γ-氨基丁酸的生物转化方法 | |
| WO2012016445A1 (zh) | 一种枯草芽孢杆菌及其应用 | |
| CN102559782B (zh) | 利用酪丁酸梭菌发酵甘蔗渣水解液生产丁酸的工艺 | |
| CN101294143A (zh) | 一种产3-羟基丁酮的菌株及其应用 | |
| CN102533612A (zh) | 拜氏梭菌菌株及其筛选方法和应用 | |
| CN100558884C (zh) | 一种产酸克雷伯氏菌及其应用 | |
| CN103525877B (zh) | 一种微生物发酵选择性生产3-羟基-2-丁酮和2,3-丁二醇的方法 | |
| CN102851224A (zh) | 产琥珀酸放线杆菌菌株及其筛选和发酵生产丁二酸的方法 | |
| CN102127515B (zh) | 一株高产l-脯氨酸短波单胞杆菌(jnpp-1)的筛选及应用 | |
| CN102925364A (zh) | 发酵－酶解－提取耦联制备橙皮素单葡萄糖苷的方法 | |
| CN101864389B (zh) | 一株丙酮丁醇梭杆菌菌株及其筛选方法和应用 | |
| CN103305437B (zh) | 一株l-乳酸铵耐受菌及其应用 | |
| CN103555610B (zh) | 利普司他汀高产毒三素链霉菌及其发酵培养基 | |
| CN102796797B (zh) | 微生物转化葡萄糖制备木糖醇及其中间体d-木酮糖的方法及所用的菌种 | |
| CN110592047B (zh) | 一种梨囊鞭菌发酵秸秆生产阿魏酸酯酶的新方法和应用 | |
| CN102417888A (zh) | 一株利用木薯为原料生产丁醇的丙酮丁醇梭菌及其应用 | |
| CN101659925A (zh) | 一种光滑球拟酵母突变株及其在发酵生产丙酮酸中的应用 | |
| CN117925429B (zh) | 一种酿酒酵母及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140312 |