CN103619820B - 可用作溴区结构域抑制剂的四氢喹啉衍生物 - Google Patents

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Abstract

Description

可用作溴区结构域抑制剂的四氢喹啉衍生物
技术领域
本发明涉及四氢喹啉衍生物、含有这类化合物的药物组合物，并涉及它们在治疗中的用途。
背景技术
真核生物的基因组在细胞核内被高度组织。双螺旋DNA的长链缠绕组蛋白蛋白质的八聚体(最通常包含组蛋白H2A、H2B、H3和H4的两个拷贝)以形成核小体。然后，通过核小体的聚集和折叠而进一步压缩该基本单元以形成高度凝聚的染色质结构。一系列不同的凝聚状态是可能的，且该结构的紧密度在细胞周期过程中变化，在细胞分裂过程期间最为紧密。染色质结构在调控基因转录方面起着关键作用，基因转录不能由高度凝聚的染色质有效地发生。通过对组蛋白蛋白质(尤其是组蛋白H3和H4)的一系列翻译后修饰对染色质结构进行控制，并且所述修饰最通常在延伸超出核心核小体结构的组蛋白尾部内。这些修饰包括乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化和SUMO化。通过特定酶写入和擦除这些表观遗传标记(epigenetic mark)，该特定酶将标记物(tag)置于组蛋白尾部内的特定残基上，从而形成表观遗传编码，然后其通过细胞解读以允许染色质结构的基因特异性调控并因此允许转录。
组蛋白乙酰化最通常与基因转录的活化相关联，因为该修饰通过改变静电学性质而减轻了DNA和组蛋白八聚体的相互作用。除这种物理变化之外，特定蛋白与组蛋白内的乙酰化的赖氨酸残基结合以读取表观遗传编码。在组蛋白的情况中，溴区结构域(bromodomains)是通常但非专门与乙酰化的赖氨酸残基结合的蛋白内小的(约110个氨基酸)明显不同的结构域。存在一个已知含有溴区结构域的约50种蛋白的家族，且它们在细胞内具有一系列功能。
含溴区结构域的蛋白的BET家族包括4种含串联溴区结构域的蛋白(BRD2、BRD3、BRD4和BRD-t)，所述串联溴区结构域能结合两个紧密靠近的乙酰化赖氨酸残基，从而提高相互作用的特异性。据报道，BRD2和BRD3沿活跃转录的基因与组蛋白相结合，并可能参与促进转录延伸(Leroy等人, Mol. Cell. 2008 30(1):51-60)，而BRD4似乎参与将pTEF-β复合体募集到可诱导基因，从而导致RNA聚合酶的磷酸化以及转录输出增加(Hargreaves等人, Cell, 2009 138(1): 129-145)。还已经报道，BRD4或BRD3可与NUT(睾丸中的核蛋白)融合而以上皮肿瘤的高度恶性形式形成新融合癌基因BRD4-NUT或BRD3-NUT(French等人. Cancer Research, 2003, 63, 304-307和French等人. Journal of Clinical Oncology, 2004, 22 (20), 4135-4139)。数据提示，BRD-NUT融合蛋白会促进癌发生(Oncogene, 2008, 27, 2237-2242)。BRD-t仅在睾丸和卵巢中表达。据报道所有家族成员都在细胞周期的控制或执行方面具有某些功能，并已被证明在细胞分裂期间保持与染色体的复合——提示在维持表观遗传记忆中的作用。另外，作为病毒复制过程的一部分，一些病毒利用这些蛋白以将它们的基因组束缚至宿主细胞的染色质上(You等人Cell, 2004 117(3):349-60)。
日本专利申请JP2008-156311公开了一种苯并咪唑衍生物，据说其为具有关于病毒感染/增殖的效用的BRD2溴区结构域结合剂。
专利申请WO2009084693公开了一系列噻吩并三唑并二氮杂䓬(thienotriazolodiazepiene)衍生物，据说其抑制乙酰化组蛋白和含溴区结构域的蛋白之间的结合，并据说可用作抗癌剂。
PCT专利申请PCT/EP2010/06693和PCT/EP2010/066701二者公开了一系列抑制BET族溴区结构域与乙酰化的赖氨酸残基的结合的四氢喹啉衍生物。
已经发现了一类抑制溴区结构域与它的同源乙酰化蛋白的结合的新化合物，更具体地是一类抑制BET家族溴区结构域与乙酰化的赖氨酸残基的结合的化合物。这类化合物在下文中将被称作“溴区结构域抑制剂”。
发明内容
在本发明的第一方面，提供了式(I)化合物或其盐，更具体地是其药学上可接受的盐
。
在本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，其包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
在本发明的第三方面，提供了用于治疗，特别是治疗适用于溴区结构域抑制剂的疾病或病症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在本发明的第四方面，提供了一种治疗有此需要的受试者的适用于溴区结构域抑制剂的疾病或病症的方法，其包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在本发明的第五方面，提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗适用于溴区结构域抑制剂的疾病或病症的药物中的用途。
具体实施方式
本发明涉及式(I)化合物或其盐
其中
X和Y独立地是CH或N，前提条件是，X和Y中的至少一个必须是CH；
R1是基团C(O)OR4，其中R4是C1-4烷基或C3-7环烷基；或者
R1是选自苯基、吡啶基、吡嗪基和嘧啶基的基团，所述基团任选被一个或两个选自卤素、C1-4烷基和CN的取代基取代；
R2是C1-4烷基；
R3是C1-4烷基；
R5和R6独立地是C1-4烷基；或者
R5和R6与它们所连接的N组合到一起形成5或6元杂环基；
R7不存在或者是C1-4烷基；
m是0、1或2；
n是1或2。
在一个实施方案中，本发明提供了这样的式(I)化合物：其在四氢喹啉环中关于在该环上的2和4位处的取代基具有顺式相对立体化学。在一个实施方案中，所述式(I)化合物或其盐是(2S, 4R) 对映异构体。
在一个实施方案中，X和Y均是CH。在另一个实施方案中，X是CH，且Y是N。
在一个实施方案中，R1是基团C(O)OR4，其中R4是异丙基。
在另一个实施方案中，R1是任选被一个或两个选自卤素、C1-4烷基和CN的取代基取代的苯基或吡啶基。在另一个实施方案中，R1是4-氯苯基，或R1是5-氰基吡啶-2-基。
在一个实施方案中，R2是甲基。
在一个实施方案中，R3是甲基。
在一个实施方案中，m是0。
在一个实施方案中，n是0。在另一个实施方案中，n是1。
在一个实施方案中，R5和R6均是甲基。
应当理解，当R7是C1-4烷基时，可形成季铵化的铵部分。在一个实施方案中，R7不存在。
尽管已经在上面分别针对每个变量大致列出了每个变量的实施方案，本发明意图包括在上文中描述的实施方案（包括它们的盐）的所有组合。
根据本发明的具体化合物是：
4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((4-氯苯基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸 2-(二甲基氨基)乙酯；
2-((4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((4-氯苯基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酰基)氧基)-N,N,N-三甲基乙铵；
3-((4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((4-氯苯基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酰基)氧基)-N,N,N-三甲基丙-1-铵；
4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((4-氯苯基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸 3-(二甲基氨基)丙酯；
6-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)烟酸 3-(二甲基氨基)丙酯；
6-((2R,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)烟酸 2-(二甲基氨基)乙酯；
4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸 3-(二甲基氨基)丙酯；和
4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸 2-(二甲基氨基)乙酯；
或它们的盐。
贯穿本说明书，除非另有说明，否则：
· 术语“卤素”用于描述选自氟、氯或溴的基团；
· 术语“C1-4烷基”和“C1-6烷基”用于描述包含分别含有1-4个或1-6个碳原子的直链或支链烷基的基团或所述基团的一部分。这样的基团的合适例子包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基和己基；
· 术语“C3-7环烷基”用于描述含有至少3个且至多7个碳原子的非芳族碳环环。C3-7环烷基的例子包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基和环庚基；
· 术语5或6元杂环基表示包含1、2或3个选自O、N和S的杂原子的非芳族饱和环。这样的基团的例子包括吡咯烷基、吗啉基、哌啶基和哌嗪基。
应当理解，本发明涵盖了游离碱形式和其盐形式(例如其药学上可接受的盐的形式)的式(I)化合物。在一个实施方案中，本发明涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
由于它们在药物中的潜在用途，式(I)化合物的盐理想地是药学上可接受的。合适的药学上可接受的盐可以包括酸或碱加成盐。本文中使用的术语“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的任何药学上可接受的盐或溶剂合物，其在给予接受者后，能够提供(直接地或间接地)本发明的化合物。关于合适的盐的综述，参见Berge等人, J. Pharm. Sci., 66:1-19, (1977)。通常，药学上可接受的盐可视情况通过使用所需的酸或碱而容易地制备。所得到的盐可从溶液中沉淀并通过过滤收集或可以通过溶剂蒸发而回收。
药学上可接受的碱加成盐可通过式(I)化合物与合适的无机或有机碱(例如三乙胺、乙醇胺、三乙醇胺、胆碱、精氨酸、赖氨酸或组氨酸)任选在合适的溶剂中反应以得到通常例如通过结晶和过滤来分离的碱加成盐而形成。药学上可接受的碱式盐包括铵盐、碱金属盐例如钠盐和钾盐、碱土金属盐例如钙盐和镁盐以及与有机碱的盐，包括伯、仲和叔胺(例如异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、双环己基胺和N-甲基-D-葡糖胺)的盐。
药学上可接受的酸加成盐可通过式(I)化合物与合适的无机或有机酸(例如氢溴酸、盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、琥珀酸、马来酸、乙酸、丙酸、富马酸、柠檬酸、酒石酸、乳酸、苯甲酸、水杨酸、谷氨酸、天冬氨酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸、萘磺酸如2-萘磺酸、或己酸)任选在合适的溶剂如有机溶剂中反应以得到通常例如通过结晶和过滤分离的盐而形成。式(I)化合物的药学上可接受的酸加成盐可以包括或可以是，例如，氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、乙酸盐、丙酸盐、富马酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、谷氨酸盐、天冬氨酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、萘磺酸盐(例如2-萘磺酸盐)或己酸盐。
其它非药学上可接受的盐，例如甲酸盐、草酸盐或三氟乙酸盐，可在例如式(I)化合物的分离中使用，并包括在本发明的范围内。
本发明在其范围内包括式(I)化合物的盐的所有可能的化学计量形式和非化学计量形式。
应当理解，很多有机化合物可与它们在其中发生反应或从其中沉淀或结晶的溶剂形成复合物。这些复合物称为“溶剂合物”。例如，与水的复合物称为“水合物”。具有高沸点和/或能够形成氢键的溶剂（例如水、二甲苯、N-甲基吡咯烷酮、甲醇和乙醇）可用于形成溶剂合物。鉴定溶剂合物的方法包括，但不限于，NMR和微量分析。式(I)化合物的溶剂合物在本发明的范围内。
本发明在其范围内包括式(I)化合物的溶剂合物的所有可能的化学计量形式和非化学计量形式。
式(I)化合物可为晶体或无定形形式。而且，某些晶体形式的式(I)化合物可以以多晶型物的形式存在，其包括在本发明的范围内。式(I)化合物的多晶型形式可使用许多常规的分析技术，包括但不限于X射线粉末衍射(XRPD)图、红外(IR)波谱、拉曼波谱、差示扫描量热法(DSC)、热重分析(TGA)和固态核磁共振(SSNMR)来表征和区分。
本文中描述的化合物含有手性原子，从而可以形成光学异构体，例如对映异构体或非对映异构体。因此，本发明包括式(I)化合物的所有异构体，无论是为了基本上不含有其它异构体(即纯的)而分离的单一异构体的形式，还是混合物(即外消旋体和外消旋混合物)的形式。可以分离为了基本上不含有其它异构体(即纯的)而分离的单一异构体，使得存在小于10%、特别是小于约1%，例如小于约0.1%的其它异构体。
异构体的分离可通过本领域技术人员已知的常规技术实现，例如通过分步结晶、色谱法或HPLC。
某些式(I)化合物可以以几种互变异构形式中的一种存在。应当理解，本发明包括式(I)化合物的所有互变异构体，无论是单个互变异构体的形式还是其混合物的形式。
从上文应当理解，本发明的范围内包括式(I)化合物及其盐的溶剂合物、异构体和多晶型形式。
式(I)化合物及其盐可以通过多种方法来制备，包括标准化学法。除非另外指出，否则在前面定义的任何变量将继续具有在前面定义的含义。在下面阐述了示例性的一般合成方法，然后在工作实施例中制备了具体的式(I)化合物或其盐。
本发明另外提供了一种用于制备式(I)化合物或其盐的方法，其包括选自(a)和(b)的方法，其中：
(a) 包括，使式(II)的化合物
其中R1、R2、R3、X、Y和m如在式(I)中所定义
与式(III)的化合物
其中R5、R6和n如在式(I)中所定义，
反应。
(b) 包括，使式(II)的化合物或其盐与式(IV)的化合物反应
其中R5、R6、R7和n如在式(I)中所定义，且Hal是卤素。
方法 (a)
式(II)和(III)的化合物之间的反应可以在合适的活化剂(例如二环己基碳二亚胺(DCC)或1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC))和合适的酰基转移催化剂(例如4-二甲基氨基吡啶)存在下在合适的溶剂(例如二氯甲烷或DMF)中进行。
式(II)的化合物可以通过本文中描述的方法或与其类似的操作来制备。式(III)的化合物是商购可得的。
方法 (b)
就方法(b)而言，合适的Hal基团是溴。式(II)和式(IV)的化合物之间的反应通常在合适的溶剂(例如DMF)中在合适的碱(例如碳酸钾)存在下进行。
式(II)的化合物可以通过本文中描述的方法或与其类似的操作来制备。式(IV)的化合物是商购可得的。
本领域技术人员将理解，保护所述化合物的一个或多个官能团可能是有利的。保护基及其除去方式的例子可以参见T. W. Greene‘Protective Groups in Organic Synthesis’(第4版, J. Wiley & Sons, 2006)。合适的胺保护基包括酰基(例如乙酰基)、碳甲酰胺类(carbamate)(例如2',2',2'-三氯乙氧基羰基、苄氧基羰基或叔丁氧基羰基)和芳基烷基(例如苄基)，其可在适当时通过水解(例如使用酸例如二噁烷中的盐酸或二氯甲烷中的三氟乙酸)或通过还原方式(例如苄基或苄氧基羰基的氢解、或使用乙酸中的锌还原性除去2',2',2'-三氯乙氧基羰基)而除去。其它合适的胺保护基包括三氟乙酰基(-COCF3)，其可通过碱催化的水解除去。
应当理解，在本文中描述的任一合成方法中，将各种基团和部分引入分子中的合成步骤的精确顺序可发生变化。确保在所述方法的一个阶段中引入的基团或部分将不会被后续的转化和反应所影响，并据此选择合成步骤的顺序，这在本领域专业人员的技能范畴内。
据信式(II)的某些中间体化合物是新颖的，并因此形成了本发明的又一方面。
式(I)化合物及其盐为溴区结构域抑制剂，并因此据信在治疗适用于溴区结构域抑制剂的疾病或病症中具有潜在效用。
因此，本发明提供用于治疗的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。所述式(I)化合物或其药学上的盐可用于治疗适用于溴区结构域抑制剂的疾病或病症。
因此，本发明提供用于治疗适用于溴区结构域抑制剂的任何疾病或病症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
还提供了式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗适用于溴区结构域抑制剂的疾病或病症的药物中的用途。
还提供了一种治疗有此需要的受试者的适用于溴区结构域抑制剂的疾病或病症的方法，其包括给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
适当地，所述有此需要的受试者是哺乳动物，尤其是人。
本文中使用的术语“有效量”是指会引起正被例如研究人员或临床医生寻求的组织、系统、动物或人的生物学或医学反应的药物或药剂的量。此外，术语“治疗有效量”是指与未接受该量的对应受试者相比，导致疾病、障碍或副作用的改善性治疗、治愈、预防或改善，或者疾病或障碍的进展速率降低的任意量。该术语在其范围内也包括有效增强正常生理功能的量。
据信溴区结构域抑制剂可用于治疗多种与系统或组织炎症、对感染或缺氧的炎性反应、细胞活化和增殖、脂质代谢、纤维化有关的疾病或病症，并可用于预防和治疗病毒感染。
溴区结构域抑制剂可用于治疗多种慢性自身免疫病症和/或炎性病症，例如类风湿性关节炎、骨关节炎、急性痛风、银屑病、系统性红斑狼疮、多发性硬化、炎性肠病(克罗恩氏病和溃疡性结肠炎)、哮喘、慢性阻塞性气道疾病、肺炎、心肌炎、心包炎、肌炎、湿疹、皮炎(例如异位性皮炎)、脱发、白癫风、大疱性皮肤疾病、肾炎、血管炎、动脉粥样硬化、阿尔茨海默氏病、抑郁症、舍格伦综合征(Sjögren’s syndrome)、涎腺炎、视网膜中央静脉闭塞、视网膜分支静脉闭塞、欧文-加斯综合征(白内障后的和外科手术后的)、色素性视网膜炎、睫状体扁平部炎、鸟枪弹样视网膜脉络膜病(birdshot retinochoroidopathy)、视网膜外膜、黄斑囊样水肿、中央凹周围的毛细管扩张、牵引性黄斑病变、玻璃体黄斑牵引综合征、视网膜脱离、视神经视网膜炎、特发性黄斑水肿、视网膜炎、干眼(干燥性角膜结膜炎)、春季角膜结膜炎、特应性角膜结膜炎、前葡萄膜炎、全葡萄膜炎、后葡萄膜炎、葡萄膜炎-相关的黄斑水肿、巩膜炎、糖尿病视网膜病变、糖尿病黄斑水肿、年龄相关的黄斑营养不良、肝炎、胰腺炎、原发性胆汁性肝硬化、硬化性胆管炎、阿狄森氏病、下垂体炎、甲状腺炎、I型糖尿病和移植器官的急性排斥反应。
溴区结构域抑制剂可用于治疗多种急性炎性病症，例如急性痛风、巨细胞动脉炎、肾炎（包括狼疮肾炎）、具有器官牵涉的血管炎（例如肾小球肾炎）、血管炎（包括巨细胞动脉炎）、韦格纳氏肉芽肿病、结节性多动脉炎、白塞病、川崎病、多发性大动脉炎、坏疽性脓皮病、具有器官牵涉的血管炎和移植器官的急性排斥反应。
溴区结构域抑制剂可用于预防或治疗涉及对细菌、病毒、真菌、寄生虫或其毒素感染的炎性反应的疾病或病症，例如脓毒症、脓毒症综合征、脓毒性休克、内毒素血症、全身性炎症反应综合征(SIRS)、多器官功能障碍综合征、中毒性休克综合征、急性肺损伤、ARDS (成人呼吸窘迫综合征)、急性肾衰竭、暴发性肝炎、烧伤、急性胰腺炎、手术后综合征、结节病、赫克斯海默反应、脑炎、脊髓炎、脑膜炎、疟疾和与病毒感染（例如流感、带状疱疹、单纯疱疹和冠状病毒）相关的SIRS反应。
溴区结构域抑制剂可用于预防或治疗与缺血-再灌注损伤相关的病症，例如心肌梗死、脑血管缺血(中风)、急性冠状动脉综合征、肾脏再灌注损伤、器官移植、冠状动脉旁路移植术、心肺旁路术、肺，肾，肝，胃肠或外周肢体栓塞。
溴区结构域抑制剂可通过调节APO-A1用于治疗脂质代谢障碍，例如高胆固醇血症、动脉粥样硬化症和阿尔茨海默氏病。
溴区结构域抑制剂可用于治疗纤维化病症，例如特发性肺纤维化、肾纤维化、手术后狭窄、瘢痕疙瘩形成、硬皮病(包括硬斑病)和心肌纤维化。
溴区结构域抑制剂可用于预防和治疗病毒感染，例如疱疹病毒、人乳头瘤病毒、腺病毒和痘病毒及其它DNA病毒。
溴区结构域抑制剂可用于治疗癌症，包括血液癌(例如白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤)、上皮癌（包括肺癌、乳腺癌和结肠癌）、中线癌、间质癌、肝癌、肾癌和神经系统肿瘤。
溴区结构域抑制剂可用于治疗皮肤病变，例如非恶性黑素瘤(光化性角化病和基细胞)、原位黑素瘤、鳞状细胞癌和皮肤T-细胞淋巴瘤。
在一个实施方案中，适用于溴区结构域抑制剂的疾病或病症选自与全身性炎症反应综合征相关的疾病，例如脓毒症、烧伤、胰腺炎、重大创伤、出血和局部缺血。在该实施方案中，所述溴区结构域抑制剂应在诊断点给药以降低以下状况的发生率：SIRS、休克发作、多器官功能障碍综合征，其包括急性肺损伤发作、ARDS、急性肾脏，肝脏，心脏和胃肠损伤和死亡。在另一个实施方案中，所述溴区结构域抑制剂应在与脓毒症、出血、广泛组织损伤、SIRS或MODS (多器官功能障碍综合征)的高度风险相关的外科手术或其它手术之前给药。在一个特定实施方案中，适用于溴区结构域抑制剂的所述疾病或病症为脓毒症、脓毒症综合征、脓毒性休克或内毒素血症。在另一个实施方案中，所述溴区结构域抑制剂需用于治疗急性或慢性胰腺炎。在另一个实施方案中，所述溴区结构域是治疗烧伤所需要的。
在一个实施方案中，适用于溴区结构域抑制剂的所述疾病或病症选自单纯疱疹感染和复发、唇疱疹、带状疱疹感染和复发、水痘、带状疱疹、人乳头瘤病毒、人免疫缺陷病毒(HIV)、宫颈肿瘤、腺病毒感染（包括急性呼吸道疾病）、痘病毒感染（例如牛痘和天花）、和非洲猪瘟病毒。在一个特定实施方案中，溴区结构域抑制剂需用于治疗皮肤或宫颈上皮的人乳头瘤病毒感染。
术语“适用于溴区结构域抑制剂的疾病或病症”旨在包括任何或所有上述疾病状态。
在一个实施方案中，提供了一种用于抑制溴区结构域的方法，其包括：使所述溴区结构域与式(I)化合物或其药学上可接受的盐接触。
当有可能用于治疗时，式(I)化合物及其药学上可接受的盐可以以原始化学物质的形式给药，常见的是，将活性成分呈现为药物组合物。
因此，在另一个方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含式(I)化合物或药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。式(I)化合物和药学上可接受的盐如上所述。所述载体、稀释剂或赋形剂就与组合物的其它成分相容且对其接受者无害而言必须是可接受的。根据本发明的另一个方面，还提供了一种制备药物组合物的方法，其包括：使式(I)化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂混合。所述药物组合物可用于治疗本文所述的任何病症。
因为式(I)化合物及其药学上可接受的盐旨在用于药物组合物，应当容易地理解，它们各自优选以基本纯的形式、例如至少60％纯、更合适的至少75％纯和优选至少85％纯、尤其是至少98％纯(以重量计的重量％)的形式提供。
药物组合物可以以每单位剂量含有预定量的活性成分的单位剂型存在。优选的单位剂量组合物为含有日剂量或亚剂量、或其适当分数的活性成分的那些。因此，这种单位剂量可以一天给药一次以上。优选的单位剂量组合物为含有本文如上所述的日剂量或亚剂量(一天给药一次以上)、或其适当分数的活性成分的那些。
药物组合物可适合于通过任何适当的途径给药，例如通过口服(包括含服或舌下)、直肠、吸入、鼻内、局部(包括含服、舌下或透皮)、经眼(包括局部、眼内、结膜下、巩膜上或眼球筋膜下)、阴道或胃肠外(包括皮下、肌肉内、静脉内或皮肤内)途径。这种组合物可通过制药领域已知的任何方法，例如通过使活性成分与一种或多种载体或赋形剂结合来制备。
在一个实施方案中，所述药物组合物适合于胃肠外给药，特别是静脉内给药。
在一个实施方案中，所述药物组合物适合于口服给药。
在一个实施方案中，所述药物组合物适合于局部给药。
导致皮肤透过的阻塞和变化以增加或减小溴区结构域化合物的全身性暴露的一种优选剂型包括但不限于羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮的药学上可接受的形式。
适合于胃肠外给药的药物组合物包括水性和非水性无菌注射溶液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使所述组合物与预期接受者的血液等渗的溶质；以及水性和非水性无菌混悬液，其可包括悬浮剂和增稠剂。所述组合物可以在单位剂量或多剂量容器，例如密封安瓿和小瓶中存在，并可在冷冻干燥(冻干)条件下储存，其仅需在使用前不久添加无菌液体载体，例如注射用水。即时注射溶液和混悬液可由无菌粉末、颗粒和片剂制备。
适合于口服给药的药物组合物可以以离散单元例如胶囊或片剂；粉末或颗粒；水性或非水性液体中的溶液或混悬液；可食用的泡沫或搅打泡沫(whips)；或水包油液体乳剂或油包水液体乳剂的形式存在。
例如，对于片剂或胶囊形式的口服给药而言，活性药物成分可与口服、无毒的药学上可接受的惰性载体例如乙醇、甘油、水等结合。适合于加入片剂或胶囊中的粉末可通过将所述化合物减小至合适的细小尺寸(例如通过微粉化)并与类似制备的药用载体例如可食用碳水化合物例如淀粉或甘露醇混合而制备。也可存在调味剂、防腐剂、分散剂和着色剂。
可通过如上所述制备粉末混合物并填充形成的凝胶外壳而制备胶囊。可在填充操作之前将助流剂和润滑剂例如胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇添加至粉末混合物中。也可添加崩解剂或增溶剂例如琼脂、碳酸钙或碳酸钠以改善摄入胶囊时药物的利用度。
此外，当希望或需要时，也可将合适的粘合剂、助流剂、润滑剂、甜味剂、香料、崩解剂和着色剂加入该混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖例如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜味剂、天然和合成树胶例如阿拉伯树胶、黄芪胶或海藻酸钠、羧甲基纤维素、聚乙二醇、蜡等。用于这些剂型的润滑剂包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。崩解剂包括，但不限于，淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。片剂通过例如制备粉末混合物、制粒或击压(slugging)、加入润滑剂和崩解剂并压制成片而配制。粉末混合物通过使适当粉碎的化合物与如上所述的稀释剂或基质，并任选与粘合剂例如羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶或聚乙烯吡咯烷酮，缓溶剂(solution retardant)例如石蜡，吸收促进剂例如季盐和/或吸收剂例如膨润土、高岭土或磷酸二钙混合而制备。所述粉末混合物可通过用粘合剂例如糖浆、淀粉糊、阿卡迪亚粘液(acadia mucilage)或者纤维素或聚合材料的溶液润湿并迫使过筛来制粒。作为制粒的替代方案，可使所述粉末混合物通过压片机，结果是不完全成形的破碎成颗粒的片。可通过加入硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油的方式润滑颗粒以防止粘在片剂形成模具上。然后将润滑的混合物压制成片。式(I)化合物及其药学上可接受的盐也可与自由流动的惰性载体混合并直接压制成片剂而无需通过制粒或击压步骤。可提供透明或不透明的由虫胶密封包衣、糖或聚合材料包衣和蜡的抛光包衣组成的保护包衣。可将染料加入至这些包衣中以区分不同的单位剂量。
可将口服液体例如溶液、糖浆和酏剂制成剂量单位形式以使给定的数量含有预定量的所述化合物。可通过将化合物溶解在适当调味的水溶液中制备糖浆，而通过使用无毒醇类媒介物制备酏剂。可通过将化合物分散在无毒媒介物中配制混悬液。也可加入增溶剂和乳化剂例如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚、防腐剂、调味添加剂例如薄荷油或天然甜味剂或糖精或其它人造甜味剂等。
如果需要，可微包封用于口服给药的剂量单位组合物。也可制备延长或减缓释放的制剂，例如通过包衣或将微粒材料嵌入聚合物、蜡等中。
也可以以脂质体递送系统（例如小单层脂质体（vesicles）、大单层脂质体和多层脂质体）的形式给药式(I)化合物及其药学上可接受的盐。可由多种磷脂，例如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰胆碱形成脂质体。
适合于局部给药的药物组合物可配制成软膏、乳膏、混悬液、乳剂、洗剂、粉剂、溶液、糊剂、凝胶、喷雾剂、泡沫、气雾剂或油。这样的药物组合物可以包括常规添加剂，所述添加剂包括但不限于：防腐剂、辅助药物穿透的溶剂、助溶剂、软化剂(emollients)、推进剂、粘度调节剂(胶凝剂)、表面活性剂和载体。在一个实施方案中，提供了一种适合于局部给药的药物组合物，按该组合物的重量计，其包含0.01-10%或0.01-1% 的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
为了治疗眼睛或其它外部组织，例如口腔和皮肤，所述组合物优选以局部溶液、混悬液、乳剂、软膏、乳膏、凝胶、喷雾剂或泡沫的形式来施用。当配制成软膏时，活性成分可与石蜡或水可混溶的软膏基质一起使用。或者，活性成分可与水包油乳膏基质或油包水基质一起配制成乳膏。当配制成泡沫时，活性剂可以与推进剂、表面活性剂、溶剂、助溶剂和粘度调节剂一起配制。
适合于局部给药于眼睛的药物组合物包括滴眼剂，其中将活性成分溶解或悬浮于合适的载体、尤其是水性溶剂中。要给药于眼睛的组合物具有眼科学上相容的pH和渗透压。可以在本发明的组合物中包括一种或多种眼科学上可接受的pH调节剂和/或缓冲剂，包括：酸例如乙酸、硼酸、柠檬酸、乳酸、磷酸和盐酸；碱例如氢氧化钠、磷酸钠、硼酸钠、柠檬酸钠、醋酸钠和乳酸钠；和缓冲剂例如柠檬酸盐/葡萄糖、碳酸氢钠和氯化铵。可以以将组合物的pH维持在眼科学上可接受的范围内所需的量，包括这样的酸、碱和缓冲剂。可以以足以使所述组合物的渗透压达到眼科学上可接受的范围内的量，在所述组合物中包括一种或多种眼科学上可接受的盐。这样的盐包括具有钠、钾或铵阳离子和氯离子、柠檬酸根、抗坏血酸根、硼酸根、磷酸根、碳酸氢根、硫酸根、硫代硫酸根或亚硫酸氢根阴离子的那些盐。
眼部递送装置可设计用来在多种限定的释放速率和维持剂量动力学和渗透性下控制释放一种或多种治疗剂。控制释放可通过设计聚合物基质的聚合物分子量、聚合物结晶性、共聚物比、加工条件、表面光洁度、几何形状、赋形剂添加和增强药物扩散、侵蚀、溶出和渗透的聚合物包衣来获得，其中所述聚合物基质掺有不同选择和性质的可生物降解/可生物侵蚀的聚合物（例如聚(乙烯乙烯基乙酸酯)(EVA)、超水解PVA）、羟烷基纤维素(HPC)、甲基纤维素(MC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、聚己内酯、聚(乙醇酸)、聚(乳酸)、聚酸酐。
用于眼部递送的药物组合物还包括可原位胶凝的水性组合物。这种组合物包含在与眼睛或泪液接触后有效促进胶凝的浓度的胶凝剂。合适的胶凝剂包括但不限于热固性聚合物。本文使用的术语“可原位胶凝的”不仅包括在与眼睛或泪液接触后形成凝胶的低粘度液体，而且包括在给药于眼睛后表现出明显增加的粘度和凝胶刚度的更粘稠的液体（例如半流体和触变凝胶）。参见，例如，Ludwig (2005) Adv. Drug Deliv. Rev. 3;57:1595-639，该文献通过引用并入本文中，用于教导眼部药物递送所用的聚合物的例子。
用于经鼻或吸入给药的剂型可方便地配制成气雾剂、溶液、混悬液、凝胶或干粉。
对于合适的和/或适应于吸入给药的组合物，优选所述式(I)化合物及其药学上可接受的盐为例如通过微粉化获得的粒径减小的形式。尺寸减小的(例如微粉化的)化合物或盐的优选粒径通过约0.5-约10微米的D50值定义(例如利用激光衍射测定)。
例如用于吸入给药的气雾剂制剂可包含活性物质在药学上可接受的水性或非水性溶剂中的溶液或细混悬液。气雾剂制剂可以以单剂量或多剂量以无菌形式存在于密封容器中，所述容器可采用药筒的形式或再填充以用于与喷雾装置或吸入器一起使用。或者，该密封容器可为整体分配装置例如单剂量鼻用吸入器或配备有计量阀的气雾剂分配器(计量吸入器)，其在容器中的内容物被耗尽后可被丢弃。
当所述剂型包含气雾剂分配器时，其优选含有合适的压力下的推进剂，例如压缩空气、二氧化碳或有机推进剂例如氢氟烃(HFC)。合适的HFC推进剂包括1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷和1,1,1,2-四氟乙烷。气雾剂剂型也可采用泵喷雾器的形式。加压气雾剂可包含活性化合物的溶液或混悬液。这可能需要加入额外的赋形剂，例如助溶剂和/或表面活性剂以改善混悬液制剂的分散特性和均质性。溶液制剂也可能需要添加助溶剂，例如乙醇。
对于合适的和/或适应于吸入给药的药物组合物，所述药物组合物可为干粉可吸入组合物。这种组合物可包含粉末基质，例如乳糖、葡萄糖、海藻糖、甘露醇或淀粉，式(I)化合物或其药学上可接受的盐(优选以粒径减小的形式，例如以微粉化形式)，和任选的性能改性剂例如L-亮氨酸或另一氨基酸和/或硬脂酸的金属盐例如硬脂酸镁或硬脂酸钙。优选地，所述干粉可吸入组合物包含乳糖例如乳糖一水合物和式(I)化合物或其盐的干粉混合物。可使用合适的设备例如GB2242134 A中描述的GlaxoSmithKline销售的DISKUS®设备将这种组合物给药于患者。
可将式(I)化合物及其药学上可接受的盐配制成从流体分配器，例如具有分配喷嘴或分配口的流体分配器递送的流体制剂，在使用者对所述流体分配器的泵机构施力时经由所述分配喷嘴或分配口递送计量剂量的所述流体制剂。这种流体分配器通常提供有流体制剂的多个计量剂量的储库，顺序泵驱动后可分配所述剂量。可将所述分配喷嘴或分配口设置为插入使用者的鼻孔内，以将流体制剂喷雾分配至鼻腔内。上述类型的流体分配器在WO-A-2005/044354中描述并阐明。
式(I)化合物或其药学上可接受的盐的治疗有效量将取决于许多因素，例如包括，动物的年龄和重量、需要治疗的准确病症及其严重程度、制剂性质和给药途径，并最终由主治医生或兽医决定。在所述药物组合物中，用于口服或胃肠外给药的各剂量单位优选含有0.01-3000 mg、更优选0.5-1000 mg的以游离碱计算的本发明的化合物。用于经鼻或吸入给药的各剂量单位优选含有0.001-50 mg、更优选0.01-5 mg的以游离碱计算的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
药学上可接受的式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以以日剂量(对于成年患者)给药，所述日剂量是例如，以游离碱计算，0.01 mg-3000 mg/天或0.5-1000 mg/天的口服或胃肠外剂量，或0.001-50 mg/天或0.01-5 mg/天的经鼻或吸入剂量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。该量可每天以单剂量给予，或更通常每天以多个(例如二、三、四、五或六个)亚剂量给予以使总日剂量相同。其盐的有效量可根据式(I)化合物本身的有效量的比例来确定。
式(I)化合物及其药学上可接受的盐可单独使用或与其它治疗剂联合使用。因此，本发明的联合疗法包括：给予至少一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐，并使用至少一种其它的药学活性剂。优选地，本发明的联合疗法包括：给予至少一种式(I)化合物或其药学上可接受的盐，和至少一种其它的药学活性剂。一种或多种式(I)化合物及其药学上可接受的盐以及一种或多种其它的药学活性剂可以在单一药物组合物中一起给药或单独给药，且当单独给药时，给药可同时发生或以任何顺序相继发生。可选择一种或多种式(I)化合物及其药学上可接受的盐以及一种或多种其它的药学活性剂的量和给药的相对时机以实现期望的联合治疗效果。因此，在另一个方面，提供了包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和至少一种其它的药学活性剂的组合药物产品。
因此，在一个方面，式(I)化合物或其药学上可接受的盐和包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物可以与一种或多种其它的治疗剂联合使用，或者包括一种或多种其它的治疗剂，所述其它的治疗剂例如选自抗生素、抗病毒剂、糖皮质类固醇、毒蕈碱拮抗剂、β-2激动剂和维生素D3类似物。在另一个方面，根据本发明的式(I)化合物或其药学上可接受的盐可以与适合于治疗癌症的其它治疗剂联合使用。
应当理解，当式(I)化合物或其药学上可接受的盐与通常通过吸入、静脉内、口服或鼻内途径给药的其它治疗剂联合给药时，所得到的药物组合物可通过相同途径给药。或者，所述组合物的各个组分可通过不同途径给药。
本发明的一个实施方案包括了包含一种或两种其它治疗剂的组合物。
本领域技术人员应当清楚，如果需要，其它一种或多种治疗成分可以以盐(例如碱金属盐或胺盐的形式或酸加成盐的形式)、或前药、或酯(例如低级烷基酯)、或溶剂合物(例如水合物)的形式使用，以优化所述治疗成分的活性和/或稳定性和/或物理特性，例如溶解性。还应当清楚的是，如果需要，所述治疗成分可以以光学纯的形式使用。
以上所述的组合可为了使用而方便地以药物组合物的形式存在，并因此包含如上所述的组合和药学上可接受的稀释剂或载体的药物组合物代表本发明的另一个方面。
可通过如下所述的方法或通过类似方法制备式(I)化合物及其药学上可接受的盐。因此，以下中间体和实施例用以阐明式(I)化合物及其药学上可接受的盐的制备，且不应被视作以任何方式限制本发明的范围。
一般实验细节
涉及的所有温度均以℃为单位。
使用化合物命名程序“ACD Name Pro 6.02”或Chem Draw Ultra 12.0，得到下述化合物的名称。
缩写
AcOH表示乙酸
BINAP表示2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘
BOC表示叔-丁氧基羰基
CV表示柱体积
DCM表示二氯甲烷
1,2-DCE表示1,2-二氯乙烷
DCC表示二环己基碳二亚胺
DIPEA表示二异丙基乙胺
DMAP表示4-二甲基氨基吡啶
DMSO表示二甲基亚砜
DMF表示N,N-二甲基甲酰胺
Ether表示乙醚
Et2O表示乙醚
EtOAc表示乙酸乙酯
FMOC表示9-芴基甲氧基羰基
HATU表示O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸盐
HPLC表示高效液相色谱法
IPA表示丙-2-醇
i-Pr2O表示二异丙基醚
LiAlH4表示氢化铝锂
MDAP表示质量导向的autoprep，表示制备型质量导向的HPLC
MeCN表示乙腈
MeOH表示甲醇
MgSO4表示硫酸镁
Mp表示熔点
r.t. 表示室温
Rt表示保留时间
Na2SO4表示硫酸钠
TMEDA表示四甲基乙二胺
TFA表示三氟乙酸
THF表示四氢呋喃
TLC表示薄层色谱法。
LC/MS 方法学 ( 用于某些中间体和参考化合物 )
在本文中提及的LC-MS方法A–F的实验细节如下：
LC/MS (方法A)如下进行：在Acquity UPLC BEH C18柱(50mm x 2.1mm内径，1.7µm填充直径)上，在40摄氏度，用10 mM碳酸氢铵水溶液（用氨溶液调至pH 10）(溶剂A)和乙腈(溶剂B)洗脱，使用下述洗脱梯度：0-1.5min 1 - 97% B，1.5-1.9min 97% B，1.9 - 2.0min 100% B，流速为1ml/min。紫外检测为210nm至350nm的波长的累加信号。使用交替扫描正和负电喷雾，在Waters ZQ质谱仪上记录质谱图。将电离数据四舍五入至最接近的整数。
LC/MS (方法B)如下进行：在Acquity UPLC BEH C18柱(50mm x 2.1mm内径，1.7µm填充直径)上，在40摄氏度，用0.1% v/v的甲酸水溶液(溶剂A)和0.1% v/v的甲酸在乙腈中的溶液(溶剂B)洗脱，使用下述洗脱梯度：0-1.5min 3 - 100% B，1.5-1.9min 100% B，1.9 - 2.0min 3% B，流速为1ml/min。紫外检测为210nm至350nm的波长的累加信号。使用交替扫描正和负电喷雾，在Waters ZQ质谱仪上记录质谱图。将电离数据四舍五入至最接近的整数。
LC/MS (方法C)如下进行：在Acquity UPLC BEH C18柱(50mm x 2.1mm内径，1.7µm填充直径)上，在40摄氏度，用0.1% v/v的三氟乙酸水溶液(溶剂A)和0.1% v/v的三氟乙酸在乙腈中的溶液(溶剂B)洗脱，使用下述洗脱梯度：0-1.5min 3 - 100% B，1.5-1.9min 100% B，1.9 - 2.0min 3% B，流速为1ml/min。紫外检测为210nm至350nm的波长的累加信号。使用正电喷雾，在Waters ZQ质谱仪上记录质谱图。将电离数据四舍五入至最接近的整数。
LC/MS (方法D)如下进行：在Supelcosil LCABZ+PLUS柱(3 μm, 3.3cm x 4.6mm ID) 上，用0.1% HCO2H和0.01 M的乙酸铵水溶液(溶剂A)、和95% 乙腈和0.05% 的HCO2H在水中的溶液(溶剂B)洗脱，使用下述洗脱梯度：0-0.7分钟0%B，0.7-4.2分钟0→100%B，4.2-5.3分钟100%B，5.3-5.5分钟100→0%B，流速为3 mL/分钟。在Fisons VG Platform质谱仪上，使用电喷雾正电离[(ES+ve以给出[M+H]+和[M+NH4]+ 分子离子]或电喷雾负电离[(ES-ve以给出[M-H]-分子离子]模式，记录质谱图(MS)。得自该仪器的分析数据以下述格式给出：[M+H]+或[M-H]-。
LC/MS (方法E)如下进行：在Chromolith Performance RP 18柱(100 x 4.6 mm内径)上，用0.01M的乙酸铵水溶液(溶剂A)和100% 乙腈(溶剂B)洗脱，使用下述洗脱梯度：0-4分钟0 - 100% B，4-5分钟100% B，流速为5 ml/分钟。在微质量Platform-LC质谱仪上，使用大气压化学正电离[AP+ve以给出MH+分子离子]或大气压化学负电离[AP-ve以给出(M-H)-分子离子]模式，记录质谱图(MS)。得自该仪器的分析数据以下述格式给出：[M+H]+或[M-H]-。
LC/MS (方法F)如下进行：在Sunfire C18柱(30mm x 4.6mm内径，3.5 μm填充直径) 上，在30摄氏度，用0.1% v/v的三氟乙酸水溶液(溶剂A)和0.1% v/v的三氟乙酸在乙腈中的溶液(溶剂B)洗脱，使用下述洗脱梯度：0-0.1min 3%B，0.1- 4.2min 3 - 100% B，4.2-4.8min 100% B，4.8-4.9min 100-3%B，4.9 - 5.0min 3% B，流速为3ml/min。紫外检测为210nm至350nm的波长的平均信号，并使用正电喷雾电离在质谱仪上记录质谱图。将电离数据四舍五入至最接近的整数。
LC/MS (方法G)如下进行：在Acquity UPLC BEH C18柱(50mm x 2.1mm内径，1.7µm填充直径)上，在40摄氏度，用0.1% v/v的甲酸水溶液(溶剂A)和0.1% v/v的甲酸在乙腈中的溶液(溶剂B)洗脱，使用下述洗脱梯度：0-1.5min 1 - 97% B，1.5-1.9min 97% B，1.9 - 2.0min 97 - 100% B，流速为1ml/min。紫外检测为210nm至350nm的波长的累加信号。使用交替扫描正和负电喷雾，在Waters ZQ质谱仪上记录质谱图。将电离数据四舍五入至最接近的整数。
LC/HRMS：在Uptisphere-hsc柱(3µm 33 x 3 mm内径)上进行分析型HPLC，用0.01M的乙酸铵水溶液(溶剂A)和100% 乙腈(溶剂B)洗脱，使用下述洗脱梯度：0-0.5分钟5% B，0.5-3.75分钟5→100% B，3.75-4.5 100% B，4.5-5 100→5% B，5-5.5 5% B，流速为1.3 mL/分钟。在微质量LCT质谱仪上，使用电喷雾正电离[ES+ve以给出MH+分子离子]或电喷雾负电离[ES-ve以给出(M-H)-分子离子]模式，记录质谱图(MS)。
TLC (薄层色谱法) 是指使用Merck销售的涂覆有硅胶60 F254的TLC板。
“质量导向的autoprep”/“制备型质量导向的HPLC”在诸如下述系统上进行：Waters FractionLynx系统，其包括Waters 600 Gradient泵、Waters 2767注射/收集器、Waters Reagent管理器、Gilson Aspec–废物收集器、Gilson 115 馏分后(post-fraction)紫外检测器和计算机系统。使用的柱通常是Supelco LCABZ++柱，其尺寸为20mm内径x 100mm长度。固定相粒度为5µm。使用20mL/min的流速，使用0.1% 的甲酸或三氟乙酸在水中的溶液(溶剂A)和0.1% 的甲酸或三氟乙酸在乙腈中的溶液(溶剂B)执行适当的洗脱梯度。使用电喷雾正和负模式交替扫描，在Micromass ZQ质谱仪上记录质谱图。使用的软件是MassLynx 4.0，或者使用等效的替代系统。
LCMS 方法学
方法甲酸盐 ( 甲酸调节剂 )
LC 条件
在Acquity UPLC BEH C18柱(50mm x 2.1mm内径，1.7µm填充直径) 上在40℃进行UPLC分析。
采用的溶剂是：
A = 0.1% v/v的甲酸水溶液
B = 0.1% v/v的甲酸在乙腈中的溶液
采用的梯度是：
时间(min) 流速(ml/min) %A %B
0 1 99 1
1.5 1 3 97
1.9 1 3 97
2.0 1 0 100
紫外检测为210nm至350nm的波长的累加信号。
MS 条件
MS：Waters ZQ
电离模式：交替扫描正和负电喷雾
扫描范围：100 - 1000 AMU
扫描时间：0.27秒
扫描间延迟：0.10秒。
方法 HpH ( 碳酸氢铵调节剂 )
LC 条件
在Acquity UPLC BEH C18柱(50mm x 2.1mm内径，1.7µm填充直径)上在40℃进行UPLC分析。
采用的溶剂是：
A = 10mM碳酸氢铵水溶液，用氨溶液调至pH10
B = 乙腈
采用的梯度是：
时间(min) 流速(ml/min) %A %B
0 1 99 1
1.5 1 3 97
1.9 1 3 97
2.0 1 0 100
紫外检测为210nm至350nm的波长的累加信号。
MS 条件
MS：Waters ZQ
电离模式：交替扫描正和负电喷雾
扫描范围：100 - 1000 AMU
扫描时间：0.27秒
扫描间延迟：0.10秒。
MDAP 方法学
方法甲酸盐 ( 甲酸调节剂 )
LC 条件
在Sunfire C18柱(100mm x 19mm内径，5µm填充直径)或Sunfire C18柱(150mm x 30mm内径，5µm填充直径) 上在环境温度进行HPLC分析。
采用的溶剂是：
A = 0.1% v/v的甲酸水溶液
B = 0.1% v/v的甲酸在乙腈中的溶液
以20ml/min (100mm x 19mm内径，5µm填充直径)或40ml/min (150mm x 30mm内径，5µm填充直径)的流速，以历时15或25 min (扩展运行) 的梯度运行。
紫外检测为210nm至350nm的波长的累加信号。
MS 条件
MS：Waters ZQ
电离模式：交替扫描正和负电喷雾
扫描范围：100 - 1000 AMU
扫描时间：0.50秒
扫描间延迟：0.20秒。
方法 HpH ( 碳酸氢铵调节剂 )
LC 条件
在Xbridge C18柱(100mm x 19mm内径，5µm填充直径)或Xbridge C18柱(100mm x 30mm内径，5µm填充直径)上在环境温度进行HPLC分析。
采用的溶剂是：
A = 10mM碳酸氢铵水溶液，用氨溶液调至pH10
B = 乙腈
以20ml/min (100mm x 19mm内径，5µm填充直径)或40ml/min (100mm x 30mm内径，5µm填充直径)的流速，以历时15或25 min (扩展运行) 的梯度运行。
紫外检测为210nm至350nm的波长的累加信号。
MS 条件
MS：Waters ZQ
电离模式：交替扫描正和负电喷雾
扫描范围：100 - 1000 AMU
扫描时间：0.50秒
扫描间延迟：0.20秒。
中间体 1
1-((2S,4R)-4-氨基-6-溴-2-甲基-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)乙酮
在0℃在氮气下，经由插管用((2S,4R)-1-乙酰基-6-溴-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氨基甲酸异丙酯(30 g, 81 mmol)在DCM (80 ml) 中的溶液处理氯化铝(41.2 g, 309 mmol)在DCM (480 mL)中的混悬液，并将得到的混合物在该温度下搅拌30分钟。然后经由插管用三乙胺(136 mL, 975 mmol)和甲醇(48 mL)的混合物缓慢地处理反应混合物。将所得到的形成的饼在乙酸乙酯(800 mL)中搅拌，通过过滤进行分离，并随后在DCM (800 mL)和饱和的NaHCO3水溶液(800 mL)之间分配。加入酒石酸钾钠(300 g)，并将得到的混合物剧烈搅拌2 h。分离各层，并通过烧结漏斗过滤DCM层。将滤液干燥(MgSO4)并在真空中浓缩，得到第一批1-((2S,4R)-4-氨基-6-溴-2-甲基-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)乙酮(19.6 g, 69.2 mmol, 85%收率)，为黄色泡沫。用DCM (800 mL)进一步处理水相，并将两相混合物搅拌过夜。然后分离各层，并将有机层干燥(MgSO4)和在真空中浓缩，得到第二批1-((2S,4R)-4-氨基-6-溴-2-甲基-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)乙酮(3.4 g, 12.01 mmol, 14.78%收率)。LCMS (HpH, 2min), Rt=0.77min, MH+ = 283 (1 Br)。
中间体 2
6-(((2S,4R)-1-乙酰基-6-溴-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氨基)烟腈
向1-((2S,4R)-4-氨基-6-溴-2-甲基-3,4-二氢喹啉-1(2H)-基)乙酮(关于制备，参见中间体1)(2.28 g, 8.05 mmol)和6-氯烟腈(2.231 g, 16.10 mmol) 的混合物中加入NMP (20 mL)，并用DIPEA (4.22 mL, 24.16 mmol)处理该混合物。将混合物分入2个烧瓶中，并将每个烧瓶用氮气冲洗、密封和在微波辐射下在200℃搅拌2 h。将反应混合物合并，并在水和EtOAc之间分配。用EtOAc (x4)萃取水层，并将合并的有机层用水(x3)洗涤，然后用盐水洗涤，并干燥(MgSO4)、过滤和在真空中浓缩。通过色谱法(EtOAc/己烷梯度)纯化褐色固体残余物，得到6-(((2S,4R)-1-乙酰基-6-溴-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氨基)烟腈(1.940 g, 5.04 mmol, 62.5%收率)，为淡黄色泡沫。LCMS (HpH, 2min), Rt=1.02min, MH+ = 386 (1 Br)。
中间体 3
4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸甲酯
向装有6-(((2S,4R)-1-乙酰基-6-溴-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氨基)烟腈(关于制备，参见中间体2)(1000 mg, 2.60 mmol)、(4-(甲氧基羰基)苯基)硼酸(561 mg, 3.11 mmol)、四(三苯基膦)钯(0) (300 mg, 0.260 mmol)和碳酸钾(1076 mg, 7.79 mmol) 的烧瓶中，加入DME (20 mL)和水(4.0 mL)。将得到的混合物在100℃在氮气下搅拌1 h，然后冷却至室温，并在真空中浓缩。将残余物在EtOAc和水之间分配，并分离各层。将有机相干燥(MgSO4)，在真空中浓缩，并通过色谱法(10 g柱，MeOH/DCM梯度)纯化残余物，得到4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸甲酯(1002 mg, 2.275 mmol, 88%收率)，为橙色泡沫。LCMS (HpH, 2min), Rt=1.09min, MH+ = 441。
中间体 4
4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸
在室温，用氢氧化钠水溶液(2N, 2.27 mL, 4.54 mmol)处理4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸甲酯(关于制备，参见中间体3) (1.0 g, 2.270 mmol)在甲醇(15 mL) 中的溶液，并将得到的混合物在该温度下搅拌24 h。在真空中蒸发大部分MeOH，并用乙酸(0.39 mL, 6.81 mmol)处理水性残余物，得到沉淀物，将其过滤分离，并在真空下在40℃干燥，得到4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸(820 mg, 1.923 mmol, 85%收率)，为黄色固体。LCMS (HpH, 2min), Rt=0.64min, MH+ = 427。
中间体 5
6-(((2S,4R)-1-乙酰基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氨基)烟腈
向装有6-(((2S,4R)-1-乙酰基-6-溴-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氨基)烟腈(关于制备，参见中间体2) (847 mg, 2.199 mmol)、联硼酸频哪醇酯(1228 mg, 4.84 mmol)、PdCl2(dppf) (161 mg, 0.220 mmol)和乙酸钾(324 mg, 3.30 mmol)的烧瓶中加入DMSO (7 mL)，将混合物在氮气下脱气，并在氮气下在80℃搅拌1 h。加入额外部分的联硼酸频哪醇酯(1 g)、PdCl2(dppf) (100 mg)和乙酸钾(150 mg)，并将混合物搅拌45 min。加入额外部分的联硼酸频哪醇酯(1 g)、PdCl2(dppf) (100 mg)和乙酸钾(150 mg)，并将混合物搅拌45 min。将反应混合物冷却至室温，并用EtOAc和水处理。将两相混合物通过Celite™垫(10 g)进行过滤，并分离各层。用EtOAc (x2)萃取水层，并将合并的有机层用水(x4)洗涤，然后用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并在真空中浓缩。通过色谱法[50 g柱，EtOAc/己烷梯度]纯化残余物，得到6-(((2S,4R)-1-乙酰基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氨基)烟腈(800 mg, 1.850 mmol, 84%收率)，为红色胶。LCMS (甲酸盐, 2min), Rt=1.08min, MH+ = 433。
中间体 6
6-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)烟酸甲酯
向装有6-(((2S,4R)-1-乙酰基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氨基)烟腈(关于制备，参见中间体5) (800 mg, 1.850 mmol)、6-溴烟酸甲酯(440 mg, 2.036 mmol)、碳酸钾(767 mg, 5.55 mmol)和四(三苯基膦)钯(0) (214 mg, 0.185 mmol)的烧瓶中加入甲苯(8 mL)和乙醇(8 mL)。将得到的混合物在90℃在氮气下搅拌3 h，在此时，加入部分的碳酸钾(384 mg)、四(三苯基膦)钯(0) (107 mg)和6-溴烟酸甲酯(220 mg)，并将反应混合物继续搅拌5 h。然后将混合物冷却至室温，并在真空中浓缩。将残余物在EtOAc和水之间分配。分离各相，并用EtOAc萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤、干燥(MgSO4)并在真空中浓缩。通过色谱法[25 g柱，EtOAc/己烷梯度]纯化残余物，得到6-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)烟酸乙酯(600 mg, 1.317 mmol, 71.2%收率)，为白色泡沫。LCMS (HpH, 2min), Rt=1.07min, MH+ = 456。
中间体 7
6-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)烟酸
用氢氧化锂水溶液(1N, 2.55 mL, 2.55 mmol)处理6-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)烟酸甲酯(关于制备，参见中间体6) (580 mg, 1.273 mmol)在乙醇(10 mL)中的溶液，并将得到的混合物搅拌2 h。在真空中蒸发大部分乙醇，并用水(约5 mL)稀释残余物。用乙酸(0.146 mL, 2.55 mmol)处理混浊的混合物，并将形成的沉淀物过滤分离，用Et2O洗涤，并在60℃干燥16 h，得到6-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)烟酸(410 mg, 0.959 mmol, 75%收率)，为淡黄色固体，将其不经进一步纯化用于下一步。LCMS (HpH, 2min), Rt=0.63min, MH+ = 428。
中间体 8
2-(4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯基)乙酸乙酯
在氮气下，向6-(((2S,4R)-1-乙酰基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氨基)烟腈(关于制备，参见中间体5) (1.67 g, 3.86 mmol)、2-(4-溴苯基)乙酸乙酯(1.127 g, 4.64 mmol)和碳酸钾(1.602 g, 11.59 mmol)在甲苯(10 mL)和乙醇(10.0 mL)中的溶液中加入四(三苯基膦)钯(0) (0.446 g, 0.386 mmol)。将反应混合物在100℃加热1 h，然后在EtOAc和水之间分配。分离各层，并用EtOAc (x3)萃取水相。将合并的有机层用盐水洗涤、干燥(MgSO4)、过滤并在真空中浓缩。通过在硅胶(25g)上的快速色谱法纯化残余物，用EtOAc/环己烷梯度(10-80%)洗脱。将适当的级分合并，并在真空中浓缩，得到2-(4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯基)乙酸乙酯(752 mg, 42%)，为粘稠的无色油。LCMS (甲酸盐, 2min), Rt=1.10min, MH+ = 469。
中间体 9
2-(4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯基)乙酸, 锂盐
向2-(4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯基)乙酸乙酯(关于制备，参见中间体8) (300 mg, 0.640 mmol)在甲醇(5 mL)中的溶液中加入氢氧化锂溶液(0.768 mL, 0.768 mmol)。将得到的混合物在40℃搅拌2 h，随后将其在真空下浓缩，得到粗制的2-(4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯基)乙酸的羧酸锂(286 mg, 100%)，为白色固体，将其不经进一步纯化用于下一步。LCMS (甲酸盐, 2min), Rt=1.10min, MH+ = 433。
中间体 10
3-(4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯基)丙酸
向6-(((2S,4R)-1-乙酰基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氨基)烟腈(关于制备，参见中间体5) (382 mg, 0.884 mmol)和3-(4-溴苯基)丙酸(243 mg, 1.060 mmol)在甲苯(6 mL)和乙醇(6 mL) 中的溶液中，接连地加入四(三苯基膦)钯(0) (102 mg, 0.088 mmol)和碳酸钾(366 mg, 2.65 mmol)。将得到的混合物在80℃搅拌2 h，然后在水和EtOAc之间分配。分离各层，并用EtOAc (x3)萃取水相。将合并的有机层用盐水洗涤、干燥(MgSO4)、过滤并在真空中浓缩。通过在硅胶(25g)上的快速色谱法纯化粗残余物，用EtOAc/环己烷(10-70%)洗脱。将适当的级分合并，并在减压下浓缩，得到3-(4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯基)丙酸(209 mg, 52%)，为白色固体。LCMS (甲酸盐, 2min), Rt=0.91min, MH+ = 455。
中间体 11
(2E)-2-丁烯酰基氨基甲酸 1-甲基乙酯
将氨基甲酸异丙酯(30 g, 291 mmol，可得自TCI)装入3L Lara容器中，并加入无水四氢呋喃(THF) (150 ml)。在氮气下加入(2E)-2-丁烯酰基氯(31.2 ml, 326 mmol，可得自Aldrich)，并将夹套冷却至-30℃。当溶液温度达到-17℃时，通过蠕动泵历时2 h加入叔丁醇锂(1M, 655 mL, 655 mmol)，保持反应温度在-10℃和-18℃之间。一旦加入结束，将混合物搅拌30 min，并调至0℃。加入乙醚(450ml)和盐酸(1M, 375 mL)，并在剧烈搅拌下将混合物调至20℃。停止搅拌，使各层分离，并使水层流出。加入盐水(375 mL)，并剧烈地搅拌混合物。停止搅拌，使各层分离，并使水层流出。将有机层干燥(MgSO4)、过滤并蒸发为褐色油(60g)。施用于二氧化硅柱(40+M Biotage)，并用DCM/乙酸乙酯(1:1至0:1, 10柱体积)洗脱。将含有产物的级分蒸发至干燥，并装载在Redisep Isco二氧化硅柱(1500g)上，并用乙酸乙酯在环己烷中的梯度(0-40%)洗脱。将澄清的含有产物的级分蒸发为灰白色固体(15.41g)。LCMS (方法C): Rt = 0.68, MH+ = 172。
中间体 12
{(3S)-3-[(4-溴苯基)氨基]丁酰基}氨基甲酸 1-甲基乙酯
在氮气下在甲苯(281 mL) 中搅拌(2E)-2-丁烯酰基氨基甲酸 1-甲基乙酯(关于制备，参见中间体11)(9.38 g, 54.8 mmol)，并加入(R-BINAP)双三氟甲基磺酸双(乙腈)钯(II) (中间体24, 3.35 g, 3.01 mmol)。催化剂形成树胶状球，溶液变成不透明的黄色混合物，将其搅拌20 min。加入4-溴苯胺(14.14 g, 82 mmol)，溶液变成澄清的浅褐色，树胶状催化剂进一步溶解。将混合物搅拌16 h。类似地，将第二批(2E)-2-丁烯酰基氨基甲酸 1-甲基乙酯(中间体11, 8.51 g, 49.7 mmol) 在氮气下在甲苯(255 mL) 中搅拌，并加入(R-BINAP)双三氟甲基磺酸双(乙腈)钯(II) (3.04 g, 2.73 mmol)。催化剂形成树胶状球，溶液变成不透明的黄色混合物，将其搅拌20 min。加入4-溴苯胺(12.83 g, 74.6 mmol)，溶液变成澄清的浅褐色，树胶状催化剂进一步溶解。将混合物搅拌16 h。
将两份反应混合物合并，并装载在1.5 kg Isco二氧化硅Redisep柱上。用DCM/MeOH (0%->0.5%, 19柱体积)洗脱柱。将澄清的含有产物的级分蒸发为淡褐色油。将混合物在真空烘箱中在40℃干燥过夜，得到白色固体(24.2 g, 总计67%)。
LCMS (方法C): Rt = 0.91, MH+ = 343。ee = 92%。
中间体 13
[(2S,4R)-6-溴-2-甲基-1,2,3,4-四氢-4-喹啉基]氨基甲酸 1-甲基乙酯
将{(3S)-3-[(4-溴苯基)氨基]丁酰基}氨基甲酸 1-甲基乙酯(关于制备，参见中间体12) (17.9 g, 52.2 mmol) 溶解于乙醇(150 mL)中，并在CO2/丙酮浴中冷却至低于-10℃(内部温度)。加入NaBH4 (1.381 g, 36.5 mmol)，随后加入六水合氯化镁(11.35 g, 55.8 mmol)在水(25 mL)中的溶液，保持温度低于-5℃。将混合物在低于0℃下搅拌1h，然后温热至室温并搅拌1 h。将得到的浓混悬液倒入柠檬酸(25.05 g, 130 mmol)、HCl (1M的水溶液，205 mL, 205 mmol)和DCM (205 mL)的混合物中。将两相混合物在室温搅拌1 h。分离各层，并将有机层用Na2SO4干燥、过滤和浓缩，得到为浅褐色固体的产物(14.1 g)。LCMS (方法B): Rt = 1.13, MH+ = 327。
中间体 14
[(2S,4R)-1-乙酰基-6-溴-2-甲基-1,2,3,4-四氢-4-喹啉基]氨基甲酸 1-甲基乙酯
在氮气下在室温，将[(2S,4R)-6-溴-2-甲基-1,2,3,4-四氢-4-喹啉基]氨基甲酸 1-甲基乙酯(关于制备，参见中间体13) (14.1 g, 43.1 mmol) 溶解于DCM (400 mL) 中。加入吡啶(10.46 mL, 129 mmol)，然后加入乙酰氯(4.60 mL, 64.6 mmol)，并将反应物在室温搅拌16 h，然后在EtOAc (2000 mL)和饱和NaHCO3水溶液(800 mL)之间分配。分离各层，并将有机相用水、然后用盐水(各1500 mL) 洗涤，然后用Na2SO4干燥，并在真空中浓缩，得到紫色固体。将粗产物溶解于最小量的DCM中，并施用于330g Companion XL柱，用12-63%乙酸乙酯/环己烷的梯度洗脱，得到为灰白色固体的产物(12.37 g)。
LCMS (方法B): Rt = 1.03, MH+ = 369
[α]D = +281.1025º(T = 20.7℃, 10mm晶胞, c=0.508g/100ml, 乙醇)。
中间体 15
4-[(2S,4R)-1-乙酰基-2-甲基-4-({[(1-甲基乙基)氧基]羰基}氨基)-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基]苯甲酸乙酯
将[(2S,4R)-1-乙酰基-6-溴-2-甲基-1,2,3,4-四氢-4-喹啉基]氨基甲酸 1-甲基乙酯(关于制备，参见中间体14) (39.0 g, 106 mmol)、{4-[(乙基氧基)羰基]苯基}硼酸(22.5 g, 116 mmol)和四(三苯基膦)钯(0) (1.83 g, 1.58 mmol) 在DME (430 mL)中混合，并将得到的混合物用Na2CO3水溶液(2N, 210 mL, 420 mmol)处理。将混合物在低真空(house vacuum)下脱气，用氮气淬灭几次，然后在105℃在氮气下搅拌大约6 h，然后将其冷却至室温。在EtOAc和水之间分配该混合物，并分离各层。用EtOAc萃取水相，并用盐水洗涤合并的有机相。然后将有机相穿过70 g二氧化硅筒过滤，用EtOAc洗涤该筒。将合并的滤液和洗液液在真空中浓缩。将残余物与Et2O一起研磨，然后滤出。将得到的固体风干，得到4-[(2S,4R)-1-乙酰基-2-甲基-4-({[(1-甲基乙基)氧基]羰基}氨基)-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基]苯甲酸乙酯(35.2 g, 80.2 mmol, 76%)，为灰色固体。在真空中浓缩滤液，并将得到的残余物与Et2O (大约30 mL)一起研磨。将形成的固体过滤分离并风干，得到为灰色固体的4-[(2S,4R)-1-乙酰基-2-甲基-4-({[(1-甲基乙基)氧基]羰基}氨基)-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基]苯甲酸乙酯(5.96 g, 13.5 mmol, 13%)。LCMS (甲酸盐, 2min), 保留时间1.16 min, MH+ = 439。
中间体 16
4-[(2S,4R)-1-乙酰基-4-氨基-2-甲基-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基]苯甲酸乙酯
将4-[(2S,4R)-1-乙酰基-2-甲基-4-({[(1-甲基乙基)氧基]羰基}氨基)-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基]苯甲酸乙酯(关于制备，参见中间体15) (8.90 g, 20.30 mmol) 加入用冰/水浴冷却的氯化铝(10.3 g, 77 mmol)在DCM (160 mL) 中的混悬液中。加入以后，温度从0℃升高至大约6℃。将得到的混合物在大约0℃搅拌20 min，然后用甲醇(18 mL)和三乙胺(34 mL, 245 mmol) 的溶液处理历时约30秒。将得到的混合物在0℃搅拌约30 min，然后在EtOAc和饱和NaHCO3水溶液之间分配。
使用4-[(2S,4R)-1-乙酰基-2-甲基-4-({[(1-甲基乙基)氧基]羰基}氨基)-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基]苯甲酸乙酯(关于制备，参见中间体15) (0.89 g 2.030 mmol)、氯化铝(1.03 g, 7.72 mmol)、三乙胺(3.4 mL, 24.53 mmol)、DCM (16 mL)和MeOH (1.3mL)，平行地进行相同的反应。在该阶段合并两次反应的产物，并将得到的混合物在室温搅拌大约10 min (总体积: 大约1 L)。将混合物穿过Celite™进行过滤，将不溶性的残余物用EtOAc和饱和NaHCO3水溶液洗涤，并分离各层。用EtOAc萃取水相，并将合并的有机相用盐水洗涤、干燥(疏水的玻璃料)和在真空中浓缩，得到4-[(2S,4R)-1-乙酰基-4-氨基-2-甲基-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基]苯甲酸乙酯(6.6 g, 84% - 允许添加平行实验)，为米色固体。LCMS (甲酸盐, 2min), 保留时间0.73 min, [M-NH2]+ = 336。
中间体 17
4-{(2S,4R)-1-乙酰基-4-[(4-氯苯基)氨基]-2-甲基-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基}苯甲酸乙酯
将4-[(2S,4R)-1-乙酰基-4-氨基-2-甲基-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基]苯甲酸乙酯(关于制备，参见中间体16) (6.6 g, 18.73 mmol)、1-溴-4-氯苯(3.94 g, 20.60 mmol)、双(二亚苄基丙酮)钯(0) (690 mg, 1.2 mmol)和[2'-(二环己基膦基)-2-联苯基]二甲胺(Dave-phos) (590 mg, 1.499 mmol))在甲苯(120 mL)中混合，并将得到的混合物用叔丁醇钠(2.52 g, 26.2 mmol)处理。将反应在低真空下脱气，用氮气淬灭几次，然后在70℃在氮气下加热16 h，然后将其冷却至室温，并过滤。将不溶性的残余物用甲苯洗涤，然后用Et2O洗涤。将合并的滤液和洗涤液用水(x2)洗涤，然后用盐酸(2N, x2)萃取，得到橙色油沉淀，将其用酸性水相进行收集。将酸性萃取物用Et2O洗涤，并将合并的有机相用盐水洗涤、干燥(疏水的玻璃料)和在真空中浓缩。通过在硅胶筒(330 g)上的色谱法纯化残余物，用EtOAc/环己烷梯度(5-45%)洗脱。将适当的级分合并，并在真空中减少至干燥，得到淡黄色泡沫。将该泡沫溶解在EtOAc (50 mL)中，并用功能性硫脲二氧化硅(0.56 g, 钯清除剂)处理。将混合物在室温下搅拌(空气气氛) 约20 min，然后在室温放置16 h。将混合物过滤，并将不溶性的残余物用EtOAc洗涤。将合并的滤液和洗涤液在真空中浓缩，得到4-{(2S,4R)-1-乙酰基-4-[(4-氯苯基)氨基]-2-甲基-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基}苯甲酸乙酯(3.7 g, 8.0 mmol, 32%)，为黄色油。
中间体 18
4-{(2S,4R)-1-乙酰基-4-[(4-氯苯基)氨基]-2-甲基-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基}苯甲酸
将4-{(2S,4R)-1-乙酰基-4-[(4-氯苯基)氨基]-2-甲基-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基}苯甲酸乙酯(关于制备，参见中间体17) (5.41 g, 11.69 mmol)溶解在乙醇(100 mL)中，并用NaOH水溶液(2M, 50 mL, 100 mmol)处理溶液。将得到的混合物在室温搅拌(空气气氛) 大约2 h，然后在真空中除去大部分乙醇。将得到的黄色溶液用水稀释(导致油状黄色沉淀物形成)。将水相用DCM (其不会溶解先前形成的沉淀物)洗涤2次，然后用盐酸(2N) 酸化至pH 1，并用EtOAc (x2)萃取。将合并的EtOAc相用盐水洗涤、干燥(疏水的玻璃料)和在真空中浓缩。将残余的黄色泡沫与Et2O一起研磨历时大约1 h。将得到的固体过滤分离，用Et2O洗涤和风干，得到4-{(2S,4R)-1-乙酰基-4-[(4-氯苯基)氨基]-2-甲基-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基}苯甲酸(4.41 g, 10.1 mmol, 87%)，为米色固体。LCMS (HpH), 保留时间1.08 min, [M-H]- = 433。
中间体 19
4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸甲酯
向((2S,4R)-1-乙酰基-6-溴-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-4-基)氨基甲酸异丙酯(5 g, 13.54 mmol)和4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)苯甲酸甲酯(3.90 g, 14.89 mmol)在DME (50 mL)和水(10.0 mL)中的溶液中，接连地加入四(三苯基膦)钯(1.565 g, 1.354 mmol)和碳酸钾(5.61 g, 40.6 mmol)。将得到的混合物在100℃搅拌1 h，随后将其冷却至室温，并穿过Celite™过滤。将滤液在真空中浓缩，并将残余物在EtOAc和水之间分配。用EtOAc (x3)萃取水相，并将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥、过滤并在真空中浓缩。通过在硅胶柱(50g) 上的快速色谱法纯化粗制的化合物，用EtOAc/环己烷(5-60%)洗脱。将适当的级分合并，并在减压下浓缩，得到4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸甲酯(4.64 g, 81%)，为白色胶质。LCMS (甲酸盐, 2min), Rt=1.09min, MH+ = 425。
中间体 20
4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸锂
向4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸甲酯(关于制备，参见中间体19)(1.63 g, 3.84 mmol)在甲醇(20 mL)中的溶液中，加入氢氧化锂(4.61 mL, 4.61 mmol)。将得到的混合物在40℃搅拌6 h，随后将其在减压下浓缩，得到4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸锂(1.65 g, 100%)，将其不经过纯化直接用于后续步骤。LCMS (甲酸盐, 2min), Rt=0.87, MH+ = 411。
中间体 21
4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸
将4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸锂(1.05 g, 2.52 mmol) (关于制备，参见中间体20) 在EtOAc和盐酸(2M)之间分配。分离各相，并用EtOAc (x3)萃取水相。将合并的有机层用盐水洗涤、经MgSO4干燥、过滤并在真空中浓缩，得到4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸(898 mg, 87%)，为白色固体。LCMS (甲酸盐, 2min), Rt=0.87, MH+ = 411。
中间体 22
2-(4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯基)乙酸乙酯
向装有(4-溴苯基)乙酸乙酯(0.174 mL, 1.000 mmol)、[(2S,4R)-1-乙酰基-2-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)-1,2,3,4-四氢-4-喹啉基]氨基甲酸 1-甲基乙酯(416 mg, 1 mmol)、碳酸钾(415 mg, 3.00 mmol)和PdCl2(dppf) (73.2 mg, 0.100 mmol) 的烧瓶中，加入1,4-二噁烷(6 mL)和水(2.0 mL)，并用氮气冲洗烧瓶。将得到的混合物在微波辐射下在120℃搅拌30 min，然后冷却至室温。在真空中除去大部分二噁烷，并将残余物在EtOAc和水之间分配。分离各层，并用EtOAc萃取水相。将合并的有机层用盐水洗涤、经MgSO4干燥和在真空中浓缩。通过色谱法[(25g柱，MeOH/DCM)]纯化残余物，得到2-(4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯基)乙酸乙酯(270 mg, 59.7%收率)。该化合物不经进一步纯化用于下一步。LCMS (HpH, 2min), Rt=1.16, MH+ = 453。
中间体 23
2-(4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯基)乙酸
在室温，向{4-[(2S,4R)-1-乙酰基-2-甲基-4-({[(1-甲基乙基)氧基]羰基}氨基)-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基]苯基}乙酸乙酯(关于制备，参见中间体22)(270 mg, 0.597 mmol)在甲醇(6 mL)和水(2.0 mL) 中的溶液中，加入氢氧化钠水溶液(2N, 0.597 mL, 1.193 mmol)，并将得到的混合物搅拌6 h。加入氢氧化钠水溶液(2N, 0.5 mL)，并将混合物静置过夜。在真空中除去大部分甲醇，并将得到的残余物在水和Et2O之间分配，并分离各层。将水层用盐酸(2N, 2 mL)酸化，并用EtOAc萃取2次。合并的有机相经MgSO4干燥和在真空中浓缩，得到{4-[(2S,4R)-1-乙酰基-2-甲基-4-({[(1-甲基乙基)氧基]羰基}氨基)-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基]苯基}乙酸(200 mg, 0.471 mmol, 79%收率)，为褐色泡沫。该化合物不经进一步纯化用于下一步。LCMS (HpH, 2min), Rt=0.65, MH+ = 425。
中间体 24
(R-BINAP)双三氟甲基磺酸双(乙腈)钯(II)
将R-(+)-BINAP (6.08 g, 9.76 mmol，可得自Avocado)在DCM (626 ml)中搅拌，并加入二氯双(乙腈)钯(II) (2.5g, 9.64 mmol，可得自Aldrich)。将混合物在氮气下搅拌30min，混悬液还未变成溶液，加入更多的DCM (100ml)。将混合物搅拌另外30 min，并加入溶解在乙腈(250 ml)中的三氟甲基磺酸银(5.00 g, 19.47 mmol，可得自Aldrich)。混合物从橙色混浊混悬液变成黄色混悬液。将混合物搅拌1 h，穿过Celite™过滤，并蒸发为橙色固体。将残余物在真空下(在大约14毫巴)在室温干燥度过周末，得到期望的产物(10.69g)。
实施例 1
4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((4-氯苯基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸 2-(二甲基氨基)乙酯盐酸盐
将4-{(2S,4R)-1-乙酰基-4-[(4-氯苯基)氨基]-2-甲基-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基}苯甲酸(关于制备，参见中间体18((100 mg, 0.230 mmol) 悬浮于DCM (1 mL)中。加入DMAP (33.7 mg, 0.276 mmol)和DCC (52.2 mg, 0.253 mmol)，并将混合物搅拌5 min，产生澄清的黄色溶液。随后加入在DCM (0.5 mL) 中的2-(二甲基氨基)乙醇(20.5 mg, 0.230 mmol)，并将反应在室温搅拌过夜。将反应用DCM (8.5ml)稀释，并用NaOH (2N)、水和盐水(各10ml)洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩，得到灰白色半固体。将粗产物溶解在最小体积的DCM (含有几滴MeOH以辅助溶解)中，并施用于25g滤筒。将滤筒在真空下在40℃干燥1 h，然后用1% 2M的NH3/甲醇/DCM洗脱2柱体积，然后用1-5% 2M的NH3/甲醇/DCM洗脱10柱体积，然后在5%保持5柱体积。将适当的级分在真空中浓缩，得到游离胺产物(18.8 mg)，为澄清的油。将该油溶解于最小量的DCM中，并加入HCl/Et2O (1N, 0.19 mL, 0.190 mmol)，在氮气流下蒸发溶剂。加入少量Et2O (约1mL)，并在氮气下蒸发，得到4-{(2S,4R)-1-乙酰基-4-[(4-氯苯基)氨基]-2-甲基-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基}苯甲酸 2-(二甲基氨基)乙酯盐酸盐(76.7 mg, 0.135 mmol, 58.6%收率)，为白色固体。LCMS (甲酸盐, 2min), Rt=0.91min, MH+ = 506。
实施例 2
2-((4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((4-氯苯基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酰基)氧基)-N,N,N-三甲基乙铵, 甲酸盐
向4-{(2S,4R)-1-乙酰基-4-[(4-氯苯基)氨基]-2-甲基-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基}苯甲酸(关于制备，参见中间体18) (200 mg, 0.460 mmol)在DMF (5 mL)中的溶液中，接连地加入K2CO3 (95 mg, 0.690 mmol)和(2-溴乙基)三甲基溴化铵(170 mg, 0.690 mmol)。将得到的混合物在室温搅拌过夜，随后将其在减压下浓缩。将残余物溶解在1:1 MeOH/DMSO混合物中，并通过MDAP (甲酸盐)进行纯化。将适当的级分合并，并在真空中浓缩，得到2-((4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((4-氯苯基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酰基)氧基)-N,N,N-三甲基乙铵, 甲酸盐(133 mg, 51%)，为灰白色固体。LCMS (甲酸盐, 2min), Rt=0.89min, MH+ = 520。
实施例 3
3-((4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((4-氯苯基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酰基)氧基)-N,N,N-三甲基丙-1-铵, 甲酸盐
将4-{(2S,4R)-1-乙酰基-4-[(4-氯苯基)氨基]-2-甲基-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基}苯甲酸(关于制备，参见中间体18)(150 mg, 0.345 mmol)溶解在DMF (3 mL)中，并加入K2CO3 (47.7 mg, 0.345 mmol)，然后加入3-溴-N,N,N-三甲基-1-丙铵溴化物(90 mg, 0.345 mmol)。将得到的混合物在室温搅拌过夜，随后将反应混合物在真空中浓缩，并通过MDAP (甲酸盐)纯化，得到3-{[(4-{(2S,4R)-1-乙酰基-4-[(4-氯苯基)氨基]-2-甲基-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基}苯基)羰基]氧基}-N,N,N-三甲基-1-丙铵, 甲酸盐(41 mg, 0.064 mmol, 19%收率)，为黄色油。LCMS (甲酸盐, 2min), Rt=0.86min, MH+ = 534。
实施例 4
4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((4-氯苯基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸 3-(二甲基氨基)丙酯
向4-{(2S,4R)-1-乙酰基-4-[(4-氯苯基)氨基]-2-甲基-1,2,3,4-四氢-6-喹啉基}苯甲酸(关于制备，参见中间体18)(250 mg, 0.575 mmol)在DMF (10 mL)中的溶液中，接连地加入3-(二甲基氨基)-1-丙醇(71.2 mg, 0.690 mmol)、EDC(220 mg, 1.150 mmol)和DMAP (7.0 mg, 0.057 mmol)。将得到的混合物在室温搅拌过夜，然后在真空中浓缩，溶解在1:1 MeOH/DMSO混合物中，并通过MDAP (HpH)纯化。将适当的级分合并，并在减压下浓缩，得到4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((4-氯苯基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸 3-(二甲基氨基)丙酯(41 mg, 17%)，为粘稠的无色油。LCMS (甲酸盐, 2min), Rt=0.94min, MH+ = 520。
实施例 5
6-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)烟酸 3-(二甲基氨基)丙酯
向6-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)烟酸(关于制备，参见中间体7)(100 mg, 0.234 mmol)在DMF (5 mL)中的溶液中，加入3-(二甲基氨基)-1-丙醇(121 mg, 1.170 mmol)、EDC (90 mg, 0.468 mmol)和DMAP (2.86 mg, 0.023 mmol)。将得到的混合物在室温搅拌过夜，将反应混合物在真空中浓缩，溶解在1:1 MeOH/DMSO混合物中，并通过MDAP (HpH)纯化。将适当的级分合并，并在减压下浓缩，得到6-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)烟酸 3-(二甲基氨基)丙酯(23 mg, 19%)，为无色油。LCMS (甲酸盐, 2min), Rt=0.70min, MH+ = 513。
实施例 6
6-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)烟酸 2-(二甲基氨基)乙酯
向6-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)烟酸(关于制备，参见中间体7)(54 mg, 0.126 mmol)在DMF (5 mL)中的溶液中，加入K2CO3 (26.2 mg, 0.189 mmol)和2-溴-N,N-二甲基乙胺(28.8 mg, 0.189 mmol)。将得到的混合物在室温搅拌3 h，将反应混合物在减压下浓缩，并将残余物溶解在1:1 MeOH/DMSO混合物中，并通过MDAP (甲酸盐)纯化。将适当的级分合并，并在真空中浓缩，得到6-((2R,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)烟酸 2-(二甲基氨基)乙酯(16.5 mg, 24%)，为粘稠的无色油。LCMS (甲酸盐, 2min), Rt=0.69min, MH+ = 499。
实施例 7
4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸 3-(二甲基氨基)丙酯
向4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸(关于制备，参见中间体21)(164 mg, 0.400 mmol)和3-(二甲基氨基)丙-1-醇(206 mg, 1.998 mmol)在DMF (3 mL)中的溶液中，加入N1-((乙基亚氨基)亚甲基)-N3,N3-二甲基丙烷-1,3-二胺盐酸盐(153 mg, 0.799 mmol)和N,N-二甲基吡啶-4-胺(4.88 mg, 0.040 mmol)。将得到的混合物在室温搅拌2 h，用水稀释反应混合物，并加入EtOAc。分离各层，并用EtOAc (x3)萃取水相。将合并的有机层用盐水洗涤、经MgSO4干燥、过滤并在真空中浓缩。将残余物溶解在1:1 MeOH/DMSO混合物中，并通过MDAP (HpH)纯化。将适当的级分合并，并在减压下浓缩，得到4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸 3-(二甲基氨基)丙酯(29.3 mg,15%)，为粘稠的无色油。LCMS (甲酸盐, 2min), Rt=0.75min, MH+ = 476。
实施例 8
4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸 2-(二甲基氨基)乙酯
向4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸锂(关于制备，参见中间体20)(246 mg, 0.591 mmol)和2-溴-N,N-二甲基乙胺(135 mg, 0.886 mmol)在DMF (5 mL) 中的溶液中，加入碳酸钾(122 mg, 0.886 mmol)。将得到的混合物在室温搅拌2 h，将反应混合物在减压下浓缩。将残余物溶解在1:1 MeOH/DMSO混合物中，并通过MDAP (甲酸盐)纯化。将适当的级分合并，并在真空中浓缩，得到4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸 2-(二甲基氨基)乙酯(14.5 mg, 5%)，为粘稠的无色油。LCMS (甲酸盐, 2min), Rt=0.72min, MH+ = 482。
参考化合物
参考化合物 A ： 2- 甲基 -6-( 甲基氧基 )-4H-3,1- 苯并噁嗪 -4- 酮
将5-甲氧基邻氨基苯甲酸(Lancaster) (41.8 g, 0.25 mol) 的溶液在乙酸酐(230 mL) 中回流3.5 h，然后在减压下浓缩。然后在甲苯存在下将粗制的化合物浓缩2次，再过滤，并用乙醚洗涤2次，得到标题化合物(33.7 g, 71%收率)，为褐色固体。LC/MS (方法D): m/z 192 [M+H]+, Rt 1.69 min。
参考化合物 B: [2- 氨基 -5-( 甲基氧基 ) 苯基 ](4- 氯苯基 ) 甲酮
在0℃，向2-甲基-6-(甲基氧基)-4H-3,1-苯并噁嗪-4-酮(关于制备，参见参考化合物A) (40.0 g, 0.21 mol)在甲苯/乙醚(2/1)混合物(760 mL)中的溶液中，逐滴加入4-氯苯基溴化镁溶液(170 mL, 1M在Et2O中, 0.17 mol)。将反应混合物温热至室温，并搅拌1h，然后用1N HCl (200 mL) 淬灭。用EtOAc (3 x 150 mL)萃取水层，并将合并的有机物用盐水(100 mL)洗涤、经Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩。然后将粗制的化合物溶解在EtOH (400 mL)中，并加入6N HCl (160 mL)。将反应混合物回流2 h，然后浓缩至1/3体积。将得到的固体过滤，并用乙醚洗涤2次，然后悬浮于EtOAc中，并用1N NaOH中和。用EtOAc(3 x 150 mL)萃取水层，并将合并的有机物用盐水(150 mL)洗涤、经Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩。得到为黄色固体的标题化合物(39 g, 88%收率)；
LC/MS (方法D): m/z 262 [M+H]+, Rt 2.57 min。
参考化合物 C: N 1-[2-[(4- 氯苯基 ) 羰基 ]-4-( 甲基氧基 ) 苯基 ]-N 2-{[(9H- 芴 -9- 基甲基 ) 氧基 ] 羰基 }-L- α - 天冬氨酸甲酯
将甲基N-{[(9H-芴-9-基甲基)氧基]羰基}-L-α-天冬氨酰氯(Int. J. Peptide Protein Res. 1992, 40, 13-18) (93 g, 0.24 mol) 溶解在CHCl3 (270 mL)中，并加入[2-氨基-5-(甲基氧基)苯基](4-氯苯基)甲酮(关于制备，参见参考化合物B) (53 g, 0.2 mol)。将得到的混合物在60℃搅拌1h，然后冷却，并浓缩至60%体积。在0℃加入乙醚，并将得到的沉淀物过滤和抛弃。将滤液在减压下浓缩，并不经进一步纯化而使用。
参考化合物 D: [(3S)-5-(4- 氯苯基 )-7-( 甲基氧基 )-2- 氧代 -2,3- 二氢 -1H-1,4- 苯并二氮杂 䓬 -3- 基 ] 乙酸甲酯
向N1-[2-[(4-氯苯基)羰基]-4-(甲基氧基)苯基]-N2-{[(9H-芴-9-基甲基)氧基]羰基}-L-α-天冬氨酸甲酯(关于制备，参见参考化合物C) (假定0.2 mol)在DCM (500 mL)中的溶液中，加入Et3N (500 mL, 3.65 mol)，并将得到的混合物回流24h，然后浓缩。将得到的粗制胺溶解在1,2-DCE (1.5 L)中，并小心地加入AcOH (104 mL, 1.8 mol)。然后将反应混合物在60℃搅拌2h，再在真空中浓缩，并溶解于DCM中。将有机层用1N HCl洗涤，并用DCM (x3)萃取水层。将合并的有机层用水和盐水洗涤2次，经Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩。将粗制的固体在MeCN中重结晶，得到标题化合物(51 g)，为淡黄色固体。将滤液浓缩，并在MeCN中重结晶，得到另外10 g期望的产物Rf = 0.34 (DCM/MeOH: 95/5)。
C19H18 35ClN2O4的HRMS (M+H)+计算值：373.0955；实测值：373.0957。
参考化合物 E: [(3S)-5-(4- 氯苯基 )-7-( 甲基氧基 )-2- 硫代 -2,3- 二氢 -1H-1,4- 苯并二氮杂 䓬 -3- 基 ] 乙酸甲酯
将P4S10 (36.1 g, 81.1 mmol)和Na2CO3 (8.6 g, 81.1 mmol)在1,2-DCE (700 mL) 中的混悬液在室温搅拌2 h，然后加入[(3S)-5-(4-氯苯基)-7-(甲基氧基)-2-氧代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂䓬-3-基]乙酸甲酯(关于制备，参见参考化合物D) (16.8 g, 45.1 mmol)。将得到的混合物在70℃搅拌2 h，然后冷却并过滤。将固体用DCM洗涤2次，并将滤液用饱和NaHCO3和盐水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩。通过在硅胶上的快速色谱法(DCM/MeOH: 99/1)纯化粗产物，得到标题化合物(17.2 g, 98%收率)，为微黄色固体。LC/MS (方法D): m/z 389 [M(35Cl)+H]+, Rt 2.64 min
C19H18 35ClN2O3S的HRMS (M+H)+计算值：389.0727；实测值：389.0714。
参考化合物 F: [(3S)-2-[(1Z)-2- 乙酰基肼基 ]-5-(4- 氯苯基 )-7-( 甲基氧基 )-3H-1,4- 苯并二氮杂 䓬 -3- 基 ] 乙酸甲酯
在0℃，向[(3S)-5-(4-氯苯基)-7-(甲基氧基)-2-硫代-2,3-二氢-1H-1,4-苯并二氮杂䓬-3-基]乙酸甲酯(关于制备，参见参考化合物E (9.0 g, 23.2 mmol)在THF (300 mL)中的混悬液中，逐滴加入肼一水合物(3.4 mL, 69.6 mmol)。将反应混合物在5℃和15℃之间搅拌5h，然后在0℃冷却。然后缓慢地加入Et3N (9.7 mL, 69.6 mmol)，并逐滴加入乙酰氯(7.95 mL, 69.6 mmol)。然后将混合物温热至室温保持16h，再在减压下浓缩。将粗产物溶解在DCM中，并用水洗涤。将有机层经Na2SO4干燥、过滤并在真空中浓缩，得到粗制的标题化合物(9.7 g, 98%收率)，将其不经进一步纯化而使用。Rf = 0.49 (DCM/MeOH: 90/10)。
参考化合物 G: [(4S)-6-(4- 氯苯基 )-1- 甲基 -8-( 甲基氧基 )-4H-[1,2,4] 三唑并 [4,3-a][1,4] 苯并二氮杂 䓬 -4- 基 ] 乙酸甲酯
在室温，将粗制的[(3S)-2-[(1Z)-2-乙酰基肼基]-5-(4-氯苯基)-7-(甲基氧基)-3H-1,4-苯并二氮杂䓬-3-基]乙酸甲酯(关于制备，参见参考化合物F) (假定9.7 g) 悬浮于THF (100 ml)中，并加入AcOH (60 mL)。将反应混合物在该温度下搅拌2天，然后在减压下浓缩。将粗制的固体在i-Pr2O中研磨，并过滤，得到标题化合物(8.7 g，经3步91%)，为灰白色固体。
C21H20ClN4O3的HRMS (M+H)+计算值：411.1229；实测值：411.1245。
参考化合物 H: [(4S)-6-(4- 氯苯基 )-1- 甲基 -8-( 甲基氧基 )-4H-[1,2,4] 三唑并 [4,3-a][1,4] 苯并二氮杂 䓬 -4- 基 ] 乙酸
在室温，向[(4S)-6-(4-氯苯基)-1-甲基-8-(甲基氧基)-4H-[1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]苯并二氮杂䓬-4-基]乙酸甲酯(关于制备，参见参考化合物G)(7.4 g, 18.1 mmol)在THF (130 mL)中的溶液中，加入1N NaOH (36.2 mL, 36.2 mmol)。将反应混合物在该温度下搅拌5h，然后用1N HCl (36.2 mL)淬灭，并在真空中浓缩。然后加入水，并用DCM (x3)萃取水层，将合并的有机层经Na2SO4干燥、过滤并在减压下浓缩，得到标题化合物(7 g, 98%收率)，为淡黄色固体。
LC/MS (方法D): m/z 397 [M+H]+。
参考化合物 I: [5-({[(4S)-6-(4- 氯苯基 )-1- 甲基 -8-( 甲基氧基 )-4H-[1,2,4] 三唑并 [4,3-a][1,4] 苯并二氮杂 䓬 -4- 基 ] 乙酰基 } 氨基 ) 戊基 ] 氨基甲酸 1,1- 二甲基乙酯
将[(4S)-6-(4-氯苯基)-1-甲基-8-(甲基氧基)-4H-[1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]苯并二氮杂䓬-4-基]乙酸(关于制备，参见参考化合物H) (1.0g, 2.5mmol)、HATU (1.9g, 5mmol)和DIPEA (0.88ml, 5mmol) 的混合物在室温搅拌80分钟，向其中加入(4-氨基丁基)氨基甲酸 1,1-二甲基乙酯(1.05ml, 5.0mmol，可得自Aldrich)。将反应混合物在室温搅拌2h，然后将其浓缩。将残余物溶解于二氯甲烷中，并用1N HCl洗涤。用二氯甲烷萃取水层2次。将有机层用1N氢氧化钠洗涤，随后用饱和氯化钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩。使用二氯甲烷/甲醇95/5，通过在二氧化硅上的快速色谱法纯化残余物，得到为黄色固体的标题化合物(1.2g)。LC/MS (方法D): rt = 3.04 min。
参考化合物 J: N-(5- 氨基戊基 )-2-[(4S)-6-(4- 氯苯基 )-1- 甲基 -8-( 甲基氧基 )-4H-[1,2,4] 三唑并 [4,3-a][1,4] 苯并二氮杂 䓬 -4- 基 ] 乙酰胺三氟乙酸盐
在0℃，向[5-({[(4S)-6-(4-氯苯基)-1-甲基-8-(甲基氧基)-4H-[1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]苯并二氮杂䓬-4-基]乙酰基}氨基)戊基]氨基甲酸 1,1-二甲基乙酯(关于制备，参见参考化合物I) (0.2 g, 0.34 mmol)在二氯甲烷(3 ml)中的溶液中，逐滴加入三氟乙酸(0.053 ml, 0.68 mmol)。将反应混合物从0℃至室温搅拌3h。将反应混合物浓缩至干燥，得到为吸湿性黄色油的标题化合物(200mg)。
LC/MS (方法D): rt = 2.33min。
C25H29ClN6O2的HRMS (M+H)+计算值：481.2119；实测值：481.2162。
参考化合物 K ： Alexa Fluor 488-N-(5- 氨基戊基 )-2-[(4S)-6-(4- 氯苯基 )-1- 甲基 -8-( 甲基氧基 )-4H-[1,2,4] 三唑并 [4,3-a][1,4] 苯并二氮杂 䓬 -4- 基 ] 乙酰胺的 5- 和 6- 异构体的混合物
将N-(5-氨基戊基)-2-[(4S)-6-(4-氯苯基)-1-甲基-8-(甲基氧基)-4H-[1,2,4]三唑并[4,3-a][1,4]苯并二氮杂䓬-4-基]乙酰胺三氟乙酸盐(关于制备，参见参考化合物J) (7.65 mg, 0.013 mmol) 溶解在N,N-二甲基甲酰胺(DMF) (300µl)中，并加入到在Eppendorf离心管内的Alexa Fluor 488羧酸琥珀酰亚胺酯(5 mg，7.77 µmol，5和6异构体的混合物，可得自Invitrogen, 产品编号A-20100)中。加入Hunig氏碱(7.0µl, 0.040 mmol)，并将混合物涡旋混合过夜。18h后，将反应混合物蒸发至干燥，并将残余物再溶解在DMSO/水(50%, 总计<1ml)中，施用于制备型Phenomenex Jupiter C18柱，并用95% A: 5% B至100% B梯度(A = 0.1%的三氟乙酸水溶液，B= 0.1% TFA/90% 乙腈/10% 水)洗脱，流速为10ml/min，历时150分钟。将不纯级分合并，并使用相同系统重新纯化。将级分合并，并蒸发，得到标题产物(2.8mg)，为显示的2种位置异构体的混合物。LC/MS (方法F)：MH+ = 999, rt = 1.88min。
生物学试验方法
荧光各向异性结合测定
使用荧光各向异性结合测定，可以评估式(I)化合物与溴区结构域BRD2、BRD3和BRD4的结合。
将溴区结构域蛋白、荧光配体(参见上述参考化合物K)和可变浓度的测试化合物在以下条件下一起温育以达到热力学平衡：在无测试化合物存在时，使得荧光配体显著(＞50％)结合；以及在足够浓度的有效抑制剂存在时，测定的未结合荧光配体的各向异性不同于结合的值。
将所有数据相对于每个板上的16个高对照孔和16个低对照孔的平均值标准化。然后应用以下形式的四参数曲线拟合：
y = a + ((b - a)/(1 + (10 ^ x/10 ^ c) ^ d)
其中‘a’为最小值，‘b’为Hill斜率，‘c’为pIC50，且‘d’为最大值。
在大肠杆菌细胞中(在pET15b载体中)表达具有位于N-端处的6-His标记的重组人溴区结构域(BRD2 (1-473)、BRD3 (1-435)和BRD4 (1-477))。使用0.1mg/ml溶菌酶和声处理，从大肠杆菌细胞提取该His-标记的溴区结构域。然后通过亲和色谱法纯化该溴区结构域，所述亲和色谱法在HisTRAP HP柱上进行，以线性10-500mM咪唑梯度洗脱，使用20柱体积。通过Superdex 200制备级尺寸排阻柱完成进一步纯化。将纯化的蛋白质于-80C储存在20mM HEPES pH 7.5和100mM NaCl中。
溴区结构域 BRD2 的方案：将所有组分溶解在50 mM HEPES pH7.4、150mm NaCl和0.5mM CHAPS的缓冲组合物中，其中BRD2的终浓度为75nM、荧光配体的终浓度为5nM。使用微分液器（micro multidrop）将10 μl该反应混合物添加至Greiner 384孔黑色低容量微量滴定板中的含100nl不同浓度的测试化合物或DMSO媒介物(最终1％)的孔中，并于黑暗中在室温平衡60分钟。于Envision中读取荧光各向异性(λex= 485nm，λEM = 530nm；Dichroic -505nM)。
溴区结构域 BRD3 的方案：将所有组分溶解在50 mM HEPES pH7.4、150mm NaCl和0.5mM CHAPS的缓冲组合物中，其中BRD3的终浓度为75nM、荧光配体的终浓度为5nM。使用微分液器（micro multidrop）将10 μl该反应混合物添加至Greiner 384孔黑色低容量微量滴定板中的含100nl不同浓度的测试化合物或DMSO媒介物(最终1％)的孔中，并于黑暗中在室温平衡60分钟。于Envision中读取荧光各向异性(λex= 485nm，λEM = 530nm；Dichroic -505nM)。
溴区结构域 BRD4 的方案：将所有组分溶解在50 mM HEPES pH7.4、150mm NaCl和0.5mM CHAPS的缓冲组合物中，其中BRD4的终浓度为75nM、荧光配体的终浓度为5nM。使用微分液器（micro multidrop）将10 μl该反应混合物添加至Greiner 384孔黑色低容量微量滴定板中的含100nl不同浓度的测试化合物或DMSO媒介物(最终1％)的孔中，并于黑暗中在室温平衡60分钟。于Envision中读取荧光各向异性(λex= 485nm，λEM = 530nm；Dichroic -505nM)。
时间分辨荧光共振能量转移 (TR-FRET) 测定
利用时间分辨荧光共振能量转移结合测定(测定乙酰化的组蛋白肽与溴区结构域蛋白的结合)，评估式(I)化合物与溴区结构域BRD2、BRD3和BRD4的结合。
将溴区结构域蛋白、组蛋白肽和可变浓度的测试化合物一起温育以达到热力学平衡。设置该测定，使得在没有测试化合物存在下，所述溴区结构域和肽显著结合(约30%)，且在有足够浓度的有效抑制剂存在下，该相互作用被破坏，从而导致荧光共振能量转移的可测定的下降。
组蛋白肽：
H-Ser-Gly-Arg-Gly-Lys(Ac)-Gly-Gly-Lys(Ac)-Gly-Leu-Gly-Lys(Ac)-Gly-Gly-Ala-Lys(Ac)-Arg-His-Gly-Ser-Gly-Ser-Lys(生物素)-OH. 3TFA
使用预装载的Wang树脂和利用标准的Fmoc合成方案，在固相合成仪上组装受保护的肽。用对酸高敏感的基团保护C-端赖氨酸，从而允许在组装结束时选择性地除去它和连接生物素。在用三氟乙酸(TFA)、三异丙基硅烷和水(95:2.5:2.5)的混合物在室温处理3h从树脂切割以后，得到粗制的肽，然后使用C18反相柱利用0.1%TFA缓冲的水/乙腈梯度进行纯化。分析得到的级分，将具有>95%纯度（通过分析型HPLC）且产生正确分子量(通过MALDiTOF质谱法)的级分合并，并冷冻干燥。通过HPLC分析最终的物质以确认纯度。
蛋白生产：在大肠杆菌细胞中(在pET15b载体中)表达具有位于N-端处的6-His标记的重组人溴区结构域(BRD2 (1-473)、BRD3 (1-435)和BRD4 (1-477))。使用声处理，从大肠杆菌细胞提取该His-标记的溴区结构域，并使用镍琼脂糖凝胶6FF柱进行纯化，将蛋白洗涤，然后用50mM Tris-Hcl pH8.0、300mM NaCl、1mMβ-巯基乙醇和20mM咪唑洗脱。通过在HisTRAP HP柱上的亲和色谱法进行进一步纯化，用线性0-500mM氯化钠梯度洗脱，使用20柱体积。通过Superdex 200制备级尺寸排阻柱完成最终的纯化。将纯化的蛋白质于-80℃储存在20mM HEPES pH 7.5和100mM NaCl中。通过肽质量指纹图谱确认蛋白身份，并通过质谱法确认预测的分子量。
溴区结构域 BRD2 、 3 和 4 测定的方案：将所有测定组分溶解在50 mM HEPES pH7.4、50mM NaCl和0.5mM CHAPS的缓冲组合物中。溴区结构域蛋白的终浓度为100nM，组蛋白肽为300nM，将这些组分预混合，并允许在暗处平衡1小时。将8 μl该反应混合物添加到Greiner 384孔黑色低容量微量滴定板中的含50nl不同浓度的测试化合物或DMSO媒介物(最终0.5%)的所有孔中，并于黑暗中在室温温育60分钟。将2 μl含有抗-6his XL665标记的抗体和铕穴状化合物标记的抗生蛋白链菌素的检测混合物加入所有孔中，并进行至少30min的进一步黑暗温育。然后在Envision平板读数器上读出平板(λex= 317nm，供体λEM = 615nm；受体λEM = 665nm；Dichroic LANCE dual)。在两种发射波长进行时间分辨荧光强度测定，并计算受体/供体之比和用于数据分析。将所有数据相对于每个板上的16个高对照孔和16个低对照孔的平均值标准化。然后应用以下形式的四参数曲线拟合：
y = a + ((b - a)/(1 + (10 ^ x/10 ^ c) ^ d)
其中‘a’为最小值，‘b’为Hill斜率，‘c’为pIC50，且‘d’为最大值。
在各上述测定中测试了实施例1 - 8，并发现具有在6.3 - 7.2范围内的pIC50。
LPS诱导的全血IL-6分泌的测定
通过toll-样受体的激动剂例如细菌脂多糖(LPS)对单核细胞的活化会导致包括IL-6在内的关键炎性介质的产生。广泛认为，这种途径对许多自身免疫和炎性障碍的病理生理学而言是主要的。
稀释待测试化合物以得到一系列合适浓度，并将1μl稀释原液加入96孔板中。加入全血(130µl) 之后，将该板于37度(5％CO2) 温育30分钟，然后加入10µl 2.8ug/ml LPS (在完全RPMI 1640中稀释(终浓度=200ng/ml))，以得到140ul/孔的总体积。在37度进一步温育24小时之后，向各孔中加入140µl PBS。密封该板，振摇10分钟，然后离心(2500rpm x 10 min)。取出100µl上清液，立即或在-20度储存之后通过免疫测定(通常通过MesoScale Discovery技术)来测定IL-6水平。由数据产生每种化合物的浓度响应曲线，并计算IC50值。
在上述测定中测试了实施例1、2、3、5、6、7和8，并发现具有在5.5 - 6.7范围内的pIC50。
这些数据证实，在上述全血测定中测试的溴区结构域抑制剂会抑制关键炎性介质IL-6的产生。
体内小鼠内毒素血症模型
给予动物的高剂量的内毒素(细菌脂多糖)会产生深度休克综合征包括强炎性应答、心血管功能失调、器官衰竭和最终死亡。这种应答方式与人类脓毒症和脓毒性休克(其中身体对大量细菌感染的应答可类似地危及生命)非常相似。
为了测试用于本发明的化合物，通过腹膜内注射向8只Balb/c雄性小鼠的组给予致死剂量的15 mg/kg LPS。90分钟后，向动物静脉内给药媒介物(20％环糊精1％乙醇于无热原水中)或化合物(10 mg/kg)。监测动物的存活4天。
肿瘤学细胞生长测定
在含有10% 胎牛血清的RPMI-1640中，培养人细胞系(n = 33，包括15个血红素细胞系、14个乳房细胞系和4个其它细胞系)，在384-孔黑色平底聚苯乙烯平板(Greiner #781086)内在48µl培养基中接种1000个活细胞/孔。将所有平板在5% CO2、37℃放置过夜。次日，用CellTiter-Glo (CTG, Promega #G7573) 收获一个平板用于时间0 (T0) 测定，并将化合物(从14.7 uM至7 pM的20点滴定)加入剩余的平板中。所有孔中的DMSO的终浓度为0.15%。将细胞温育72小时或指定的时间，并利用与孔中的细胞培养物体积相等体积的CellTiter-Glo试剂将每个平板显影。将平板振摇大约2分钟，并在Analyst GT (Molecular Devices)或EnVision Plate Reader (Perkin Elmer)上读出化学发光信号。
将结果表示为T0的百分比，并相对于化合物浓度绘图。将T0值标准化为100%并代表在化合物加入时的细胞数目，使用XLfit软件(205型)，将浓度应答数据用4参数曲线拟合进行拟合。使细胞生长抑制50%的浓度(gIC50)是‘生长窗’(在T0和DMSO对照之间)的中点。通过从Ymin值(%)减去T0值(100%)来确定Ymin - T0值，所述Ymin值从浓度响应曲线的拟合确定。从所有样品减去不含细胞的孔的值，进行背景校正。
在本说明书中引用的所有出版物（包括但不限于专利和专利申请）通过引用并入本文，如同明确且单独地指出每篇单独的出版物如同充分阐述的那样通过引用并入本文。

Claims (17)

1.式(I)化合物或其盐
其中
X是CH且Y是CH或N；
R1是基团C(O)OR4，其中R4是C1-4烷基；或者
R1是苯基或吡啶基，所述基团任选被一个或两个选自卤素和CN的取代基取代；
R2是C1-4烷基；
R3是C1-4烷基；
R5和R6独立地是C1-4烷基；
R7不存在或者是C1-4烷基；
m是0；
n是1或2。
2.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y是CH。
3.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中Y是N。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物或其盐，其中R1是基团C(O)OR4，其中R4是异丙基。
5.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中R1是4-氯苯基或5-氰基吡啶-2-基。
6.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物或其盐，其中R2是甲基。
7.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物或其盐，其中R3是甲基。
8.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物或其盐，其中R5和R6均是甲基。
9.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物或其盐，其中R7不存在。
10.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物或其盐，其中所述式(I)化合物是(2S,4R) 构型。
11.化合物，所述化合物选自：
4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((4-氯苯基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸 2-(二甲基氨基)乙酯；
4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((4-氯苯基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸 3-(二甲基氨基)丙酯；
6-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)烟酸 3-(二甲基氨基)丙酯；
6-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((5-氰基吡啶-2-基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)烟酸 2-(二甲基氨基)乙酯；
4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸 3-(二甲基氨基)丙酯；和
4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((异丙氧基羰基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酸 2-(二甲基氨基)乙酯；
或其盐。
12.化合物，所述化合物是选自以下的阳离子的盐：
2-((4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((4-氯苯基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酰基)氧基)-N,N,N-三甲基乙铵；和
3-((4-((2S,4R)-1-乙酰基-4-((4-氯苯基)氨基)-2-甲基-1,2,3,4-四氢喹啉-6-基)苯甲酰基)氧基)-N,N,N-三甲基丙-1-铵。
13.药物组合物，其包含如权利要求1-12中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
14.组合药物产品，其包含如权利要求1-12中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种其它的治疗活性剂。
15.根据权利要求1-12中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗适用于溴区结构域抑制剂的疾病或病症的药物中的用途。
16.根据权利要求15所述的用途，其中所述疾病或病症是慢性自身免疫病症和/或炎性病症。
17.根据权利要求15所述的用途，其中所述疾病或病症是癌症。
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