CN103610716B - 牛膝提取物的制备方法及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种牛膝提取物的制备方法及其应用,所述牛膝提取物在TLC硅胶薄层板上与10%的硫酸乙醇反应呈浅蓝色,其HRMS给出的准分子离子峰m/z?204.5126[M+Na]+。本发明通过药效实验验证:本发明方法制备得到的牛膝提取物具有显著的降尿酸效果,其对小鼠的灌胃最大耐受量大于相当于生药240g/kg,具有极大的安全性。
Description
技术领域
本发明属于中药制剂领域,具体涉及一种牛膝提取物的制备方法及其在制备降尿酸药物中的应用。
背景技术
随着人们物质生活不断丰富,生活节奏日益加快,高尿酸血症和痛风的发病率不断上升。当人体的血清尿酸值≥416μmol/L(710mg/d1),称为高尿酸血症。痛风则是由于嘌呤类物质代谢紊乱,产生尿酸过多和(或)尿酸排泄减少,血尿酸浓度持续增高导致尿酸盐结晶沉积软组织所致的一组代谢性疾病。痛风的临床特征是高尿酸血症、反复发作的急性关节炎,以及痛风石形成并沉积于关节、结缔组织和肾脏,导致关节活动障碍或畸形,肾尿酸结石或痛风性肾病。高尿酸血症是痛风的前提与重要生化基础,痛风患者在其病程中的某一阶段必将有高尿酸血症的存在。
由高尿酸血症引发的痛风性关节炎发作时关节的红肿热痛,及高尿酸血症与其他各种疾病的潜在关系,严重影响着高尿酸血症和痛风患者的日常生活和工作。因此,当前对于降尿酸的药物研究尤为重要。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种牛膝提取物的制备方法。
本发明的另一个目的在于提供牛膝或其提取物在制备降尿酸药物或保健品中的应用。
本发明的另一个目的在于提供一种降尿酸药物。
本发明所采取的技术方案是:
一种牛膝提取物的制备方法,包括如下步骤:
1)取牛膝粉碎后,用90~95%(V/V)的乙醇水溶液浸提,将浸提液减压浓缩得浸膏;
2)将浸膏溶解于50~70℃的温水中,冷却后用氯仿萃取,减压浓缩得到氯仿部分浸膏;
3)氯仿部分浸膏经硅胶柱层析,石油醚(60~90℃)-丙酮(石油醚,50:1,20:1,10:1,5:1,2:1,丙酮)梯度洗脱,TLC检测,相同部分合并到一起,共分成10个部分;
4)部分5经硅胶制备薄层,展开剂为石油醚:乙酸乙酯(5:1,V/V),分离提纯得到牛膝提取物,该物质在TLC硅胶薄层板上与10%的硫酸乙醇反应呈浅蓝色,该化合物的HRMS给出的准分子离子峰m/z204.5126[M+Na]+。
作为优选的,步骤1)是用93%(V/V)的乙醇水溶液提取2~4次。
牛膝或其提取物在制备降尿酸药物或保健品中应用。
所述牛膝提取物采用上述的方法制备得到。
一种降尿酸药物,其主要成分为牛膝或其提取物。
所述牛膝提取物采用上述的方法制备得到。
所述药物还含有药学上可以接受的载体和/或辅料。
所述药物为口服制剂或注射液。
本发明的有益效果是:本发明通过药效实验验证:本发明方法制备得到的牛膝提取物具有显著的降尿酸效果,其对小鼠的灌胃最大耐受量大于相当于生药240g/kg,具有极大的安全性。
附图说明
图1为高尿酸血症小鼠造模结果;
图2为牛膝对小鼠高尿酸血症的药效试验的结果。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明,但并不局限于此。
实施例1牛膝提取物的制备方法
(1)取牛膝50kg用中药粉碎机粉碎至粗粉,粉碎后用93%乙醇浸提(80L×3次),减压浓缩得总浸膏3800g;
(2)总浸膏溶解在10.0L约60℃的温热水,冷却后用氯仿萃取(3.0L×10次),减压浓缩得氯仿部分浸膏1500g;
(3)氯仿部分浸膏经硅胶柱层析,石油醚(60~90℃)-丙酮(石油醚,50:1,20:1,10:1,5:1,2:1,丙酮)梯度洗脱,TLC检测,相同部分合并到一起,共分成10个部分;
(4)部分5经硅胶制备薄层,展开剂为石油醚:乙酸乙酯(5:1,V/V),分离提纯得到牛膝提取物12750mg,该物质在TLC硅胶薄层板上与10%的硫酸乙醇反应呈浅蓝色,其HRMS给出的准分子离子峰m/z204.5126[M+Na]+。
(5)往牛膝提取物中加入8g/L羧甲基纤维素钠水溶液,制备成牛膝提取物浓度为1mg/ml的溶液备用,进行后面的动物灌胃做药理学实验。
实施例2牛膝提取物对小鼠的急性毒性试验
分组:将正常小鼠随机均等分为四组:空白组(生理盐水)、60mg/kg、120mg/kg、240mg/kg牛膝提取物组,每组小鼠10只,体重20±2g,均为雄性。
灌胃试验:各组小鼠均禁食>12h,分别为每组小鼠称量体重,一次性为各组每只小鼠按体重灌胃以相应药品,观察14天内小鼠的状态、行为活动及死亡情况,并进行记录。
空白组小鼠以生理盐水灌胃后无一死亡,试验结束,小鼠精神和饮食欲均未见异常;60mg/kg牛膝提取物组小鼠灌胃后无一死亡,试验结束,小鼠精神和饮食欲均未见异常;120mg/kg牛膝提取物组小鼠中1号在灌药后四肢无力,第2天死亡,2号小鼠第1天出现尾巴偶然僵直并抖动,精神紧张,随后行为无异常,疑为个体现象,其余小鼠行为正常;240mg/kg牛膝提取物组小鼠灌胃后无一死亡,试验结束时,小鼠精神和饮食欲均未见异常。
实施例3牛膝对小鼠高尿酸血症的药效试验
1、羧甲基纤维素钠助悬剂的制备
电子称量仪准确称取羧甲基纤维素钠粉末,用生理盐水配制浓度为8g/L助悬剂。
2、造模剂的制备
氧嗪酸钾造模剂的制备:称取氧嗪酸钾1.5g,加50ml羧甲基纤维素钠助悬剂,超声波助悬15min,得0.03g/ml氧嗪酸钾造模剂;次黄嘌呤造模剂的制备:称取次黄嘌呤0.3g,加50ml羧甲基纤维素钠助悬剂,超声波助悬15min,得0.006g/ml次黄嘌呤造模剂。
3、高尿酸血症小鼠模型制造
分组:将正常小鼠随机均等分为三组:空白组、单用氧嗪酸钾(300mg/kg)模型组、氧嗪酸钾(300mg/kg)和次黄嘌呤(60mg/kg)联用模型组,每组小鼠10只,体重20±2g,均为雄性。
造模试验:各组小鼠禁食>12h,分别为每组小鼠称量体重,依体重确定小鼠实际给药量,为各组每只小鼠腹腔注射,注射相应药品(空白组:生理盐水、单用氧嗪酸钾模型组:氧嗪酸钾300mg/kg、氧嗪酸钾和次黄嘌呤联用模型组:氧嗪酸钾300mg/kg和次黄嘌呤60mg/kg)。2h之后,对各组小鼠眼球采血,3500r离心分离血清,取血清测试三组小鼠的血尿酸浓度。
统计学方法:采用SPSS10.0统计软件,数据x±s表示,采用单因素方差分析,组间比较用检验,P<0.05被认为有显著性差异。
本实验以氧嗪酸钾(300mg/kg)和次黄嘌呤(60mg/kg)联用制备高尿酸模型,经过2h后,检测血尿酸水平,发现明显高于空白对照组,表明造模成功,见表1、图1。
表1.小鼠高尿酸血症造模试验血尿酸水平
注1:与空白组比较,*P<0.05,有显著性差异
4、牛膝对小鼠高尿酸血症的药效试验
分组:将正常小鼠随机均等分为四组:空白组(生理盐水)、模型组、60mg/kg牛膝提取物组、80mg/kg牛膝提取物组和阳性对照组(别嘌醇组,20mg/kg),每组小鼠10只,体重20±2g,均为雄性。
阳性对照药水溶液的制取:称取有效成分为0.001g的别嘌醇片,加50ml羧甲基纤维素钠助悬剂,超声波助悬15min,得0.02mg/ml的阳性对照剂。
药效试验:每组每天称量体重,每天为各组每只小鼠按体重灌胃药品,连续灌胃5天。末日末次给药前1h联用氧嗪酸钾(300mg/kg)和次黄嘌呤(60mg/kg)对模型组、60mg/kg牛膝提取物组、80mg/kg牛膝提取物组和阳性对照组(别嘌醇组)的小鼠腹腔注射进行造模(高血尿酸模型:氧嗪酸钾(300mg/kg)和次黄嘌呤(60mg/kg)联用,空白组不造模,依体重确定药量,造模2h后眼球采血,离心分离检测血尿酸浓度.
统计学方法:采用SPSS10.0统计软件,数据x±s表示,采用单因素方差分析,组间比较用检验,P<0.05被认为有显著性差异。
本实验以氧嗪酸钾(300mg/kg)和次黄嘌呤(60mg/kg)联用制备高尿酸模型,利用自行制备的牛膝粗提液,给予各组灌胃后,检测血尿酸水平,发现两种剂量的牛膝提取液均有明显的降尿酸作用,与空白对照组和模型组比较,差异有显著性,见表2、图2。
表2.药效试验小鼠血尿酸水平
注1:与空白组比较,*P<0.05,有显著性差异。
注2:与模型组比较,**P<0.05,有显著性差异。
以上实验结果表明:本发明方法制备得到的牛膝提取物具有显著的降尿酸效果,其对小鼠的灌胃最大耐受量大于相当于生药240g/kg,具有极大的安全性。
以上实施例仅为介绍本发明的优选案例,对于本领域技术人员来说,在不背离本发明精神的范围内所进行的任何显而易见的变化和改进,都应被视为本发明的一部分。
Claims (1)
1.一种牛膝提取物的制备方法,包括如下步骤:
1)取牛膝粉碎后,用93%(V/V)的乙醇水溶液浸提2~4次,将浸提液减压浓缩得浸膏;
2)将浸膏溶解于50~70℃的温水中,冷却后用氯仿萃取,减压浓缩得到氯仿部分浸膏;
3)氯仿部分浸膏经硅胶柱层析,用60~90℃的石油醚和丙酮分别配置体积比为50:1,20:1,10:1,5:1,2:1的石油醚-丙酮混合液进行梯度洗脱,TLC检测,相同部分合并到一起,共分成10个部分;
4)部分5经硅胶制备薄层,展开剂为石油醚:乙酸乙酯,体积比为5:1,分离提纯得到牛膝提取物,该物质在TLC硅胶薄层板上与10%的硫酸乙醇反应呈浅蓝色,其HRMS给出的准分子离子峰m/z204.5126[M+Na]+。
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