CN103601635B

CN103601635B - 一种降解衣康酸发酵液残糖的方法

Info

Publication number: CN103601635B
Application number: CN201310561683.3A
Authority: CN
Inventors: 李悦明; 张希铭; 徐建春; 李霞; 王道会
Original assignee: QINGDAO LANGYATAI (GROUP) CO Ltd
Current assignee: QINGDAO LANGYATAI (GROUP) CO Ltd
Priority date: 2013-11-12
Filing date: 2013-11-12
Publication date: 2015-12-09
Anticipated expiration: 2033-11-12
Also published as: CN103601635A

Abstract

本发明公开了一种降解衣康酸发酵液中残糖的方法，属于衣康酸发酵液中残糖的降解领域，其解决了在衣康酸发酵后的发酵液中存在着各种糖类，使得衣康酸发酵料液粘度过大，提取衣康酸困难的问题。本发明方法包括：将菌株接种到衣康酸发酵液中进行培养，控制发酵培养基的pH值为4～6、发酵温度为30℃、压力为0.05Mpa，发酵周期为40～50h，培养完成后测定残糖的含量。本发明方法可使残糖质量百分数降低0.48～0.93％，既提高了残糖降解能力、缩短了发酵周期、同时降解残糖后的衣康酸发酵液不但衣康酸浓度不变，而且更有利于过滤、浓缩等提取过程。

Description

一种降解衣康酸发酵液残糖的方法

技术领域

本发明属于衣康酸发酵液中残糖的降解领域，具体涉及一种用于降解衣康酸发酵液残糖的方法。

背景技术

目前衣康酸发酵所用的糖类原料多为淀粉经淀粉酶液化糖化酶糖化之后所制成。因上述各种酶及菌株所产酶能力的限制，在衣康酸发酵后的发酵液中仍然存在着各种糖类，使得衣康酸发酵料液粘度过大，提取衣康酸困难，因此在提取之前，将衣康酸发酵液中的残糖降解，对衣康酸生产成本的降低、废液COD的控制有着很好的意义。

发明内容

为了解决上述现有技术中存在的问题，本发明提出了一种降解衣康酸发酵液中残糖的方法，该方法提高了残糖降解能力、缩短了发酵周期。

本发明技术方案包括：

一种降解衣康酸发酵液中残糖的方法，所述方法包括：将菌株接种到衣康酸发酵液中进行培养，控制发酵培养基的pH值为4～6、发酵温度为30℃、压力为0.05Mpa，发酵周期为40～50h，培养完成后测定残糖的含量。

进一步的，上述残糖质量百分数降低0.48～0.93%。

更进一步的，上述菌株的制备方法包括：

a选取酵母菌，利用一定浓度的化学诱变剂处理一段时间；

b将步骤a处理后的酵母菌涂布于高酸浓度梯度平板，挑取平板高酸侧的菌落，经斜面培养后进行多次摇床筛选，选育得到菌株。

上述化学诱变剂为甲基磺酸乙酯，所述甲基磺酸乙酯的浓度为0.15～0.25mol/L，处理时间为20～40min。

上述高酸浓度梯度平板为含11%的衣康酸浓度梯度平板，高酸浓度梯度平板与斜面的培养温度为28～32℃、培养时间为3～5天，平板高酸侧菌落的培养温度为30～32℃、培养时间为4天。

上述残糖质量百分数降低0.56～0.93%。

本发明所带来的有益技术效果：

本发明提出了一种降解衣康酸发酵液中残糖的方法，该方法将该菌株加入到衣康酸发酵液中，在发酵温度为30℃、压力为0.05Mpa、发酵时间为40～50h的发酵罐中，可使残糖质量百分数降低0.48～0.93%；该方法提高了残糖降解能力、缩短了发酵周期、同时降解残糖后的衣康酸发酵液不但衣康酸浓度未有变化，而且更有利于过滤、浓缩等提取过程。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明做进一步说明：

本发明降解衣康酸发酵液中残糖所选用的菌株，可以为本发明制备得到的菌株，也可以为商业渠道购买得到的菌株。

本发明所选化学诱变剂为烷化剂，例如甲基磺酸乙酯、硫酸二乙酯。

实施例1：

下述菌株是通过本发明制备得到的，其是以购买的酵母菌作为原料、然后对其进行培养得到的菌株。

步骤1：将酵母菌放置于液体培养基活化至对数期，离心收集酵母至盛有玻璃珠的三角瓶中，充分震荡以使酵母分散，并用脱脂棉过滤，用血球计数板计数并调整酵母浓度至10⁷mol/mL，在250ml碘量瓶中加入20mLpH为7的磷酸缓冲液和5mL浓度为10⁷mol/mL的酵母悬液，加入甲基磺酸乙酯（EMS）并使其最终浓度为0.15mol/L，温度为30℃处理40min，处理完毕后吸取2mL上述诱变液，即甲基磺酸乙酯与酵母悬液的混合液，再加入1mL的硫代硫酸钠终止反应；

步骤2：称取1mL处理后的培养液经适当稀释后涂布高酸浓度梯度平板，在28℃下培养6天后挑取平板高酸侧菌落传代斜面，首先在温度为30℃时培养3天，然后在温度为30℃，转速210r/min，湿度70-80%的相同条件下进行初次筛选、复筛选、二次复筛选、三次复筛选，最终得到一株降糖能力及速度高的菌株。

将上述制备得到的菌株接种到衣康酸发酵液中进行培养，在5L发酵罐上，在衣康酸含量为93.8g/L、残糖含量为1.35%，K₂HPO₄含量为0.005%，玉米浆含量为0.02%，蛋白胨含量为0.02%，初始pH为4的发酵培养基中，控制发酵温度30℃，压力0.05Mpa，发酵周期50h后，经HPLC法测定，衣康酸含量为93.8g/L、残糖含量为0.42%。

实施例2：

该实施例所选菌株是通过商业渠道得到的，其保藏号为CCTCCNo:M207174，将该菌株接种到衣康酸发酵液中进行培养，在5L发酵罐上，在衣康酸含量为93.8g/L、残糖含量为1.35%，K₂HPO₄含量为0.005%，玉米浆含量为0.02%，蛋白胨含量为0.02%，初始pH为4的发酵培养基中，控制发酵温度30℃，压力0.05Mpa，发酵周期50h后，经HPLC法测定，衣康酸含量为93.8g/L、残糖含量为0.85%。

实施例3：

步骤1：将酵母菌放置于液体培养基活化至对数期，离心收集酵母至盛有玻璃珠的三角瓶中，充分震荡以使酵母分散，并用脱脂棉过滤，用血球计数板计数并调整酵母浓度至10⁷mol/mL，在250ml碘量瓶中加入20mLpH为7的磷酸缓冲液和5mL浓度为10⁷mol/mL的酵母悬液，加入甲基磺酸乙酯（EMS）并使其最终浓度为0.20mol/L，温度为30℃处理30min，处理完毕后吸取2mL上述诱变液，即甲基磺酸乙酯与酵母悬液的混合液，再加入1mL的硫代硫酸钠终止反应；

步骤2：称取1mL处理后的培养液经适当稀释后涂布高酸浓度梯度平板，在30℃下培养5天后挑取平板高酸侧菌落传代斜面，首先在温度为30℃时培养3天，然后在温度为30℃，转速210r/min，湿度70-80%的相同条件下进行初次筛选、复筛选、二次复筛选、三次复筛选，最终得到一株降糖能力及速度高的菌株。

将上述制备得到的菌株接种到衣康酸发酵液中进行培养，在5L发酵罐上，在衣康酸含量为93.8g/L、残糖含量为1.35%，K₂HPO₄含量为0.005%，玉米浆含量为0.02%，蛋白胨含量为0.02%，初始pH为4的发酵培养基中，控制发酵温度30℃，压力0.05Mpa，发酵周期50h后，经HPLC法测定，衣康酸含量为93.8g/L、残糖含量为0.78%。

实施例4：

与实施例3不同之处在于：选用的菌株为商业渠道购买得到，其保藏号为CCTCCNo:M207174，经HPLC法测定，衣康酸含量为93.8g/L、残糖含量为0.87%。

实施例5：

与实施例1不同之处在于：化学诱变剂选用的是硫酸二乙酯，经HPLC法测定，衣康酸含量为93.8g/L、残糖含量为0.58%。

实施例6：

该实施例所选菌株是通过商业渠道得到的，其保藏号为CGMCCNo3218，将该菌株接种到衣康酸发酵液中进行培养，在5L发酵罐上，在衣康酸含量为93.8g/L、残糖含量为1.35%，K₂HPO₄含量为0.005%，玉米浆含量为0.02%，蛋白胨含量为0.02%，初始pH为4的发酵培养基中，控制发酵温度30℃，压力0.05Mpa，发酵周期50h后，经HPLC法测定，衣康酸含量为93.8g/L、残糖含量为0.85%。

上述方式中未述及的部分采取或借鉴已有技术即可实现。

需要说明的是，在本说明书的教导下本领域技术人员所做出的任何等同方式，或明显变型方式均应在本发明的保护范围内。

Claims

1.一种降解衣康酸发酵液中残糖的方法，其特征在于：所述方法包括：将菌株接种到衣康酸发酵液中进行培养，控制发酵培养基的pH值为4～6、发酵温度为30℃、压力为0.05Mpa，发酵周期为40～50h，培养完成后测定残糖的含量；所述残糖质量百分数降低至0.48～0.93％；

所述菌株的制备方法包括：

a选取酵母菌，利用浓度为0.15～0.25mol/L的甲基磺酸乙酯处理20～40min；

b将步骤a处理后的酵母菌涂布于高酸浓度梯度平板，挑取平板高酸侧的菌落，经斜面培养后进行多次摇床筛选，选育得到菌株；所述高酸浓度梯度平板为含11％的衣康酸浓度梯度平板，高酸浓度梯度平板与斜面的培养温度为28～32℃、培养时间为3～5天，平板高酸侧菌落的培养温度为30～32℃、培养时间为4天。