CN103598093A - 一种蓝莓胚状体的诱导方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种蓝莓胚状体的诱导方法，该方法包括外植体消毒、配置培养基、接种和培养步骤，其中培养基以WPM为基础培养基，1L培养基中添加吲哚乙酸IAA0.5-1mg、吲哚丁酸IBA0.5～1mg、玉米素ZT0.1～0.5mg、蔗糖30g和琼脂7g，pH为5.2～5.4；本发明的有益效果是可以诱导蓝莓茎尖形成胚状体，诱导率高达1200%。
Description
技术领域
本发明涉及一种蓝莓胚状体的诱导方法，属于植物组织培养技术领域。
背景技术
蓝莓是一种营养价值非常高的水果，果肉富含丰富的维生素、蛋白质和钙、铁、磷、钾、锌等微量矿物元素，是一种高营养的水果。蓝莓富含花色苷，花色苷具有很强的抗氧化性，可抗自由基、延缓衰老、防止细胞的退行性改变，对于抑制血小板聚集，预防大脑病变、动脉硬化等病症具有一定的效果，同时还可以强化毛细血管、改善血液循环、减弱血小板的黏滞性、防止血凝块产生、增强心脑功能；因此，蓝莓不单纯地作为一种水果被大家食用，它被开发成果酱、饮料等多种形式被人们所食用。
目前市场对蓝莓的需求量不断增长，但是我国蓝莓的种植业刚刚起步，各地在建立种植园时急需大量优良品种苗木。采用常规的实生苗嫁接、枝条扦插等传统繁殖方法，成活率低，速度慢、新苗质量差，无法满足市场对蓝莓苗木数量日益增长的需要。而组织培养技可在短期内快速繁殖种苗，不仅可以保持原繁殖母株的优良性状，而且具有繁殖率高的优点，组培微繁生产的苗木质量好，均匀一致，容易脱去病毒，根系发达，将为后期树体生长结果奠定良好的基础，利用组织培养技术快速繁殖育种是植物繁殖最有效的一条途径。
但现有文献中报道的蓝莓组织培养过程中，愈伤组织诱导生根阶段，具有生根率低、生根周期长、生根程序复杂及移苗成活率低等问题，使其无法大规模工厂化生产，严重阻碍了蓝莓在我国的进一步发展。
发明内容
针对现有技术存在的缺陷，本发明提供一种蓝莓胚状体的诱导方法，以蓝莓茎尖为外植体直接诱导出胚状体，通过胚状体诱导植株再生的途径克服了传统组织培养过程中诱导生根困难的难题。
本发明的技术方案如下：一种蓝莓胚状体的诱导方法：包括如下步骤：
（1）外植体消毒：以蓝莓茎尖为外植体，无菌水清洗干净后置于75%的乙醇溶液中浸泡15s，取出置于体积分数为3%的次氯酸钠溶液中消毒5min，最后用无菌水清洗干净后放于无菌操作台内；
（2）配置诱导培养基：以WPM培养基为基本培养基，每升WPM培养基中添加蔗糖30g和琼脂7g，培养基高压灭菌后添加过滤灭菌的吲哚乙酸IAA0.5～1mg、吲哚丁酸IBA0.5～1mg、玉米素ZT 0.1～0.5mg，并将培养基的pH调为5.2～5.4；
（3）接种：在无菌操作台内，将消毒后的蓝莓茎尖接种于培养基上，每个培养皿接种一个茎尖；
（4）诱导胚状体：将接种好的茎尖在无菌、温度18～22℃、光强2000～3000 Lx、每天光照8小时的条件下培养3～4周至胚状体形成。
进一步的，步骤2中所述的培养基中，1L WPM培养基中添加IAA 0.5mg、IBA 0.5mg、ZT 0.1mg。
进一步的，步骤2中所述的培养基中，1L WPM培养基中添加IAA 1mg、IBA 1mg、ZT 0.5mg。
进一步的，步骤2中所述的培养基中，1L WPM培养基中添加IAA 0.5mg、IBA 0.5mg、ZT 0.5mg。
进一步的，步骤2中所述的培养基中，1L WPM培养基中添加IAA 1mg、IBA 1mg、ZT 0.1mg。
进一步的，步骤2中所述的培养基中，1L WPM培养基中添加IAA 0.5mg、IBA 1mg、ZT 0.2mg。
本发明所述的蓝莓胚状体的诱导方法，以蓝莓茎尖为外植体，以吲哚乙酸、吲哚丁酸和玉米素为植物生长调节剂，三者配合使用，可以诱导蓝莓茎尖直接形成胚状体，诱导率高达1200%，本发明选用的激素种类和浓度配比，可以将蓝莓的茎尖直接诱导形成胚状体而不是愈伤组织或芽，从而避免了愈伤组织诱导生芽、芽诱导生根的生根率低的困扰。
具体实施方式
以下通过实施例进一步阐述本发明的有益效果：
实施例1：
（1）外植体消毒：以蓝莓茎尖为外植体，无菌水清洗干净后置于75%的乙醇溶液中浸泡15s，取出置于体积分数为3%的次氯酸钠溶液中消毒5min，最后用无菌水清洗干净后放于无菌操作台内；
（2）配置诱导培养基：以WPM培养基为基本培养基，每升WPM培养基中添加蔗糖30g和琼脂7g，高压灭菌后添加过滤灭菌的IAA0.5mg、IBA0.5mg、ZT 0.1mg，pH调为5.2～5.4；
（3）接种：在无菌操作台内，将消毒后的蓝莓茎尖接种于培养基上，每个培养皿接种一个茎尖，共接种30个培养皿；
（4）诱导：将接种好的茎尖在无菌、温度18～22℃、光强2000～3000 Lx、每天光照8小时的条件下培养3～4周至胚状体形成，30个培养皿共形成胚状体308个，胚状体的诱导率为1027%。
实施例2：
与实施例1基本相同，所不同的，1升WPM培养基中添加IAA1mg、IBA1mg、ZT 0.5mg，30个培养皿共形成胚状体270个，胚状体的诱导率为900%。
实施例3：
与实施例1基本相同，所不同的，1升WPM培养基中添加IAA0.5mg、IBA0.5mg、ZT 0.5mg，30个培养皿共形成胚状体300个，胚状体的诱导率为1000%。
实施例4：
与实施例1基本相同，所不同的，1升WPM培养基中添加IAA1mg、IBA1mg、ZT 0.1mg，30个培养皿共形成胚状体285个，胚状体的诱导率为950%。
实施例5：
与实施例1基本相同，所不同的，1升WPM培养基中添加IAA0.5mg、IBA1mg、ZT 0.2mg，30个培养皿共形成胚状体360个，胚状体的诱导率为1200%。
上述实例只是为说明本发明的技术构思以及技术特点，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明的实质所做的等效变换或修饰，都应该涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种蓝莓胚状体的诱导方法：其特征在于，包括如下步骤：
（1）外植体消毒：以蓝莓茎尖为外植体，无菌水清洗干净后置于75%的乙醇溶液中浸泡15s，取出置于体积分数为3%的次氯酸钠溶液中消毒5min，最后用无菌水清洗干净后放于无菌操作台内；
（2）配置诱导培养基：以WPM培养基为基本培养基，每升WPM培养基中添加蔗糖30g和琼脂7g，培养基高压灭菌后添加过滤灭菌的吲哚乙酸IAA0.5～1mg、吲哚丁酸IBA0.5～1mg和玉米素ZT 0.1～0.5mg，并将培养基的pH调为5.2～5.4；
（3）接种：在无菌操作台内，将消毒后的蓝莓茎尖接种于培养基上，每个培养皿接种一个茎尖；
（4）诱导胚状体：将接种好的茎尖在无菌、温度18～22℃、光强2000～3000 Lx、每天光照8小时的条件下培养3～4周至胚状体形成。
2.根据权利要求1所述的蓝莓胚状体的诱导方法，其特征在于，步骤2中所述的1L WPM培养基中，添加IAA 0.5mg、IBA 0.5mg、ZT 0.1mg。
3.根据权利要求1所述的蓝莓胚状体的诱导方法，其特征在于，步骤2中所述的1L WPM培养基中添加IAA 1mg、IBA 1mg、ZT 0.5mg。
4.根据权利要求1所述的蓝莓胚状体的诱导方法，其特征在于，步骤2中所述的1L WPM培养基中添加IAA 0.5mg、IBA 0.5mg、ZT 0.5mg。
5.根据权利要求1所述的蓝莓胚状体的诱导方法，其特征在于，步骤2中所述的1L WPM培养基中添加IAA 1mg、IBA 1mg、ZT 0.1mg。
6.根据权利要求1所述的蓝莓胚状体的诱导方法，其特征在于，步骤2中所述的1L WPM培养基中添加IAA 0.5mg、IBA 1mg、ZT 0.2mg。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: QINGDAO WINCHANCE TECHNOLOGY CO., LTD. Free format text: FORMER OWNER: LI BENMING Effective date: 20150805 |
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| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| C53 | Correction of patent of invention or patent application | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Su Jianli Inventor before: Li Benming |
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| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: LI BENMING TO: SU JIANLI |
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Effective date of registration: 20150805 Address after: 266061 Shandong, Laoshan, Hongkong East Road, No. Pioneering Park, biological park, room 248, No. 239 Applicant after: Qingdao Wenchuang Science & Technology Co., Ltd. Address before: Four, unit 303, building 16, No. 266071, Gutian Road, Qingdao, Shandong Applicant before: Li Benming |
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| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Yang Shufang Inventor before: Su Jianli |
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| CB03 | Change of inventor or designer information | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20171229 Address after: 311800 context village of Zhuji city of Zhejiang Patentee after: Zhejiang Lanmei Agriculture Co., Ltd. Address before: 266061 Shandong, Laoshan, Hongkong East Road, No. Pioneering Park, biological park, room 248, No. 239 Patentee before: Qingdao Wenchuang Science & Technology Co., Ltd. |
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| TR01 | Transfer of patent right | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder | ||
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 311800 context village of Zhuji city of Zhejiang Patentee after: Zhejiang LanMei Technology Co.,Ltd. Address before: 311800 context village of Zhuji city of Zhejiang Patentee before: ZHEJIANG LANMEI AGRICULTURE Co.,Ltd. |