CN103585245B

CN103585245B - 铜锤玉带草提取物的制备方法、提取物及其应用

Info

Publication number: CN103585245B
Application number: CN201310549026.7A
Authority: CN
Inventors: 赵立春
Original assignee: RUIKANG HOSPITAL AFFILIATED TO GUANGXI UNIVERSITY OF CHINESE MEDICINE
Current assignee: RUIKANG HOSPITAL AFFILIATED TO GUANGXI UNIVERSITY OF CHINESE MEDICINE
Priority date: 2013-11-06
Filing date: 2013-11-06
Publication date: 2019-09-20
Anticipated expiration: 2033-11-06
Also published as: CN103585245A

Abstract

本发明涉及药用植物铜锤玉带草[Pratia begonafolia(Wall)Lindl.or P.nummularia(Lam.)A.Br.et Aschers]，具体涉及铜锤玉带草提取物的制备方法、利用该方法制备得到的提取物，以及该提取物的应用。本发明在铜锤玉带草原有化学成分和传统功效的研究基础上，同时制备其活性提取物，和现有技术相比，提出了铜锤玉带草提取物可以显著降低CCl4/酒精致肝损伤模型小鼠血清中的ALT、AST活性及肝组织MDA含量，增强肝脏SOD活性，表明该活性提取物对化学性肝损伤和酒精性肝损伤具有明显的肝脏保护作用。

Description

铜锤玉带草提取物的制备方法、提取物及其应用

技术领域

本发明涉及药用植物铜锤玉带草[Pratia begonafolia(Wall)Lindl.orP.nummularia(Lam.)A.Br.et Aschers]，具体涉及铜锤玉带草提取物的制备方法、利用该方法制备得到的提取物，以及该提取物的应用。

背景技术

肝病一直是困扰人类健康的疾病之一，肝损伤就是肝脏受到外界因素的入侵，从而引起的肝脏受损。目前，根据不同原因造成的肝脏损伤，可将肝炎分为以下几种类型：药物性肝炎、酒精性肝炎和病毒性肝炎等。各种有害因素所致的肝损伤可表现为肝坏死、脂肪肝、胆汁郁积、肝纤维化、肝硬化等，最终发展成肝癌。

众所周知，诸多中草药的急性肝损伤具有一定的保护作用，减少外源性物质对肝脏的损害。铜锤玉带草又名小铜锤、地扣子、铜锤草、地石榴等，基源植物为桔梗科草本植物铜锤玉带草[Pratia begonafolia(Wall)Lindl.or P.nummularia(Lam.)A.Br.etAschers]的干燥全草，可作为野菜食用。具有祛风除湿，活血，解毒之功效，可用于治疗风湿疼痛，跌打损伤，乳痈，无名肿毒等作用。

具报道其含有黄酮、聚乙炔、三萜酯等成分，现代药理学对其药理活性研究鲜有报道。到目前为止，未见以铜锤玉带草为原料制备活性提取物的技术，也未见以铜锤玉带草为主要组成组分应用防治肝损伤的药品或保健品的报道。

发明内容

本发明的一个目的在于以铜锤玉带草为原料制备有活性的提取物的制备方法。

铜锤玉带草提取物的制备方法，包括以下步骤：将干燥的铜锤玉带草粉碎至细粉，1～99%浓度的乙醇提取3次，滤过，所得药渣待用，合并提取液，浓缩提取液至得浸膏A；药渣用水提取3次，滤过，合并水提取液得浸膏B；合并浸膏A和浸膏B，真空干燥后粉碎，即得铜锤玉带草提取物。

优选地，所述细粉为过200筛，所述乙醇的浓度为50%～90%，所述乙醇用量为铜锤玉带草质量的10～15倍；所述水的用量为铜锤玉带草质量的10～15倍。

优选地，所述药渣用水提取为药渣用水加热回流提取。

优选地，所述乙醇的浓度为50%、70%或90%，所述乙醇用量为铜锤玉带草质量的10倍或15倍；所述水的用量为铜锤玉带草质量的10倍或15倍。

本发明的另一个目的在于提供利用上述方法制备得到的锤玉带草提取物。

本发明的又一个目的在于所述的铜锤玉带草提取物在制备防治肝损伤的药物或保健品中的应用。

所述肝损伤包括但不限于：化学性肝损伤和酒精性肝损伤。

试验结果表明铜锤玉带草提取物能够有效降低肝损伤模型动物血清ALT、AST活性及肝组织MDA含量，增强肝脏SOD活性。

所述药物或保健品为片剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、薇丸、滴丸剂、汤剂、糖浆剂、合剂、煎膏剂或浸膏剂或其他药学上可接受的载体。

铜锤玉带草提取物制成胶囊剂时把铜锤玉带草提取物和载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。

铜锤玉带草制成片剂时，把铜锤玉带草提取物和载体乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，然后压片制成片剂。

铜锤玉带草提取物制成颗粒剂时，把铜锤玉带草提取物和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。

铜锤玉带草提取物制成其他剂型时，可按药学常规方法制备得到，这里不一一赘述。

本发明的有益效果，本发明在铜锤玉带草原有化学成分和传统功效的研究基础上，同时制备其活性提取物，和现有技术相比，提出了铜锤玉带草提取物可以显著降低CCl4/酒精致肝损伤模型小鼠血清中的ALT、AST活性及肝组织MDA含量，增强肝脏SOD活性，表明该活性提取物对化学性肝损伤和酒精性肝损伤具有明显的肝脏保护作用。因此，铜锤玉带草提取物有望开发成为新一代安全有效，用于防治多种类型肝保护的药物或保健品。

具体实施方式

以下结合具体实施例对发明做出进一步说明，应理解这些实施例仅用于说明本发明而不限制本发明的范围，在阅读本发明后，本领域技术人员对本发明的各种等价形式的修改均落于本发明所附权利要求限定的范围。

实施例1

铜锤玉带草防治肝损伤活性提取，其通过以下方法制备得到：

（1）取干燥后的铜锤玉带草，粉碎至细粉，200目，放入提取罐，加15倍量的50%的乙醇提取3次，过滤，合并提取液，浓缩至无醇味，得浸膏A，备用。

（2）取步骤（1）所过滤后的原料渣，用10倍量的水加热回流提取3次，滤过，合并提取液并浓缩至浸膏B，备用。

（3）取步骤（1）和（2）的浸膏A和浸膏B，合并，真空干燥，粉碎至细粉，即得铜锤玉带草提取物。

实施例2

（1）取干燥后的铜锤玉带草，粉碎至细粉，180目，放入提取罐，加15倍量的90%的乙醇提取3次，过滤，合并提取液，浓缩至无醇味，得浸膏A，备用。

实施例3

（1）取干燥后的铜锤玉带草，粉碎至细粉，200目，放入提取罐，加15倍量的1%的乙醇提取3次，过滤，合并提取液，浓缩至无醇味，得浸膏A，备用。

实施例4

（1）取干燥后的铜锤玉带草，粉碎至细粉，250目，放入提取罐，加10倍量的99%的乙醇提取3次，过滤，合并提取液，浓缩至无醇味，得浸膏A，备用。

实施例5

（1）取干燥后的铜锤玉带草，粉碎至细粉，150目，放入提取罐，加15倍量的99%的乙醇提取3次，过滤，合并提取液，浓缩至无醇味，得浸膏A，备用。

（2）取步骤（1）所过滤后的原料渣，用15倍量的水加热回流提取3次，滤过，合并提取液并浓缩至浸膏B，备用。

实施例6

铜锤玉带草提取物抗肝损伤的实验研究

一、实验材料、仪器和试剂

1、实验材料

铜锤玉带草提取物采自广西，经赵立春博士鉴定为桔梗科植物铜锤玉带草的干燥全草按实施1-5方法制备得到铜锤玉带草提取物。

2、实验仪器

HC-2517高速离心机，安徽中科中佳科学仪器有限公司；DK-98-1型电热恒温水浴锅，天津泰斯特仪器有限公司；连续光谱扫描式酶标仪SpectraMaxPlus384美国分子生物仪器公司(由吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心提供)。

3、实验试剂

CCl4，北京化工厂；食用豆油；丙氨酸转氨酶（ALT）试剂盒和天冬氨酸转氨酶（AST）试剂盒以及SOD试剂盒、MDA试剂盒，考马斯亮蓝试剂盒，南京建成生物工程研究所。

4、实验动物

清洁级雄性ICR小鼠，体重(20±2)

二、实验方法

1、对CCl4致小鼠急性肝损伤的影响

小鼠适应性喂养一周，期间自由进食饮水。一周之后，按照体重随机分为6组，每组10只，分别为：正常对照组，CCl4模型组，实施例1-5制备的铜锤玉带草提取物低剂量组（100mg/kg/d），中剂量组（200mg/kg/d），高剂量组（400mg/kg/d），联苯双酯组（阳性对照组，150mg/kg/d），所有药物均用生理盐水溶解，超声助溶。除空白对照组和模型组按体重灌胃等量的生理盐水外，其他各给药组均按体重灌胃给予相应药物。每天灌胃1次，连续给药7天。于给药第6天晚上禁食不禁水12h，次日正常给药1h后，除空白对照组外，其余各组腹腔注射10%的CCl4豆油溶液，造成急性CCl4肝损伤。6h后眼球取血，血清于4200rpm离心10min，取上清液于4℃冰箱中保存。取血后，立即劲椎脱臼处死小鼠，解剖取肝脏和脾，称重后，用生理盐水清洗掉肝脏表面血迹，拭去表面生理盐水后，部分肝脏用10%的福尔马林浸泡固定，另一部分用锡纸包好后，立即放入-80℃冰箱中保存。

血清学及肝脏指标检测：离心完的血清分别按照ALT，AST试剂盒的说明书于96孔板中加样，酶标仪测定OD值，计算出小鼠血清中ALT，AST的活性。

称取一定重量的冻存肝脏，按照重量体积比1:9加冷生理盐水进行匀浆，于冷冻离心机中4200rpm离心10min，取上清液得10%的肝匀浆，制备肝匀浆均在低温条件下操作。取少量10%的肝匀浆，用冷生理盐水稀释成1%的肝匀浆。

按照考马斯亮蓝试剂盒和SOD，MDA试剂盒的说明分别于96孔板中加样，酶标仪测定各自的OD值，分别计算出1%肝匀浆中肝蛋白浓度和肝脏中SOD的活性以及10%肝匀浆中MDA的浓度。

2、对酒精致小鼠急性肝损伤的影响

小鼠适应性喂养一周，期间自由进食饮水。一周之后，按照体重随机分为6组，每组10只，分别为：正常对照组，CCl4模型组，实施例1制备的铜锤玉带草提取物低剂量组（100mg/kg/d），中剂量组（200mg/kg/d），高剂量组（400mg/kg/d），联苯双酯组（阳性对照组，150mg/kg/d），所有药物均用生理盐水溶解，超声助溶。除空白对照组和模型组按体重灌胃等量的生理盐水外，其他各给药组均按体重灌胃给予相应药物。每天灌胃1次，连续给药7天。于给药第6天晚上禁食不禁水12h，次日正常给药1h后，除空白对照组外，其余各组按按12ml/kg剂量灌胃50%乙醇造成急性酒精肝损伤。12h后，眼球取血，血清于4200rpm离心10min，取上清液于4℃冰箱中保存。取血后，立即劲椎脱臼处死小鼠，解剖取肝脏和脾，称重后，用生理盐水清洗掉肝脏表面血迹，拭去表面生理盐水后，部分肝脏用10%的福尔马林浸泡固定，另一部分用锡纸包好后，立即放入-80℃冰箱中保存。

三、实验结果

1、对CCl4致小鼠急性肝损伤的影响

本实验结果显示，经CCl4注射后，模型组小鼠ALT和AST明显升高，高于正常对照组，提示造模成功（p<0.05），高剂量和中剂量给药组与模型组比较，均能降低血清中增加的ALT和AST活性，具有显著性差异（p<0.05）；同时，铜锤玉带草提取物高、中剂量组可以有效降低肝组织MDA水平，升高肝组织SOD水平，具有显著性差异（p<0.05），低剂量组具有降低趋势，无统计学意义（p>0.05）。具体结果见表1。

表1.铜锤玉带草提取物对CCl4致急性肝损伤小鼠血清ALT、AST及肝脏SOD、MDA的影响。

p<0.05；﹡，给药组vs模型组，p<0.05

2、对酒精致小鼠急性肝损伤的影响

本实验结果显示，经50%酒精灌胃后，模型组小鼠ALT和AST明显升高，高于正常对照组，提示造模成功（p<0.05），铜锤玉带草提取物高剂量和中剂量给药组与模型组比较，均能降低血清中增加的ALT和AST活性，具有显著性差异（p<0.05）；同时，铜锤玉带草提取物高、中剂量组可以有效降低肝组织MDA水平，升高肝组织SOD水平，具有显著性差异（p<0.05），低剂量组具有降低趋势，无统计学意义（p>0.05）。具体结果见表2。

表2.铜锤玉带草提取物对CCl4致急性肝损伤小鼠血清ALT、AST及肝脏SOD、MDA的影响。

p<0.05；﹡，给药组vs模型组，p<0.05

实施例7

实施例8

实施例9

实施例10

Claims

1.一种用于防治肝损伤的铜锤玉带草提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：将干燥的铜锤玉带草粉碎至细粉，50％～90％浓度的乙醇提取3次，滤过，所得药渣待用，合并提取液，浓缩提取液至得浸膏A；药渣用水提取3次，滤过，合并水提取液得浸膏B；合并浸膏A和浸膏B，真空干燥后粉碎，即得铜锤玉带草提取物,其中所述细粉为过200目筛，所述乙醇用量为铜锤玉带草质量的10～15倍；所述水的用量为铜锤玉带草质量的10～15倍。

2.如权利要求1所述的用于防治肝损伤的铜锤玉带草提取物的制备方法，其特征在于：所述药渣用水提取为药渣用水加热回流提取。

3.如权利要求1所述的用于防治肝损伤的铜锤玉带草提取物的制备方法，其特征在于：所述乙醇的浓度为50％、70％或90％，所述乙醇用量为铜锤玉带草质量的10倍或15倍；所述水的用量为铜锤玉带草质量的10倍或15倍。

4.如权利要求1-3中任一项所述的方法制备得到的铜锤玉带草提取物。

5.如权利要求4所述的铜锤玉带草提取物在制备防治肝损伤的药物中的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述肝损伤为化学性肝损伤。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，将药物制备成片剂、注射剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、汤剂、糖浆剂、合剂。