CN113876826B - 一种铜锤玉带草提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明特别涉及一种铜锤玉带草提取物及其制备方法和应用,属于药物制备技术领域,应用包括将所述铜锤玉带草提取物用于治疗乳腺癌;扩大了铜锤玉带草的药用范围,提高了铜锤玉带草的药用价值,另外,具有治疗乳腺癌作用的铜锤玉带草提取物的制备方法简单易操作,为铜锤玉带草提取物在治疗乳腺癌的药物和制备辅助治疗乳腺癌的功能性食品的应用上奠定了基础。
Description
技术领域
本发明属于药物制备技术领域,特别涉及一种铜锤玉带草提取物及其制备方法和应用。
背景技术
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一(31%),对妇女具有较大的威胁性。在美国,每年 约有15万人被诊断为乳腺癌,约4.3万人死于此病。在我国乳腺癌占全身各种肿瘤的7%~10%, 在妇女中的发病率逐渐超过子宫颈癌。近年来,传统中医药作为乳腺癌手术及放化疗的辅 助治疗手段,在提高生活质量、延长生存期等方面显示出了一定的效果。如今越来越多的 学者把目光投向中药草研究方面,以期发现新型的治疗BCa的药物。
铜锤玉带草(Pratia begonifolia(Wall.)Lindl.),属桔梗科(Campanulaceae),又 称地茄子草、小铜锤,生于阴湿田坎边,或山林阴处。全草药用,用以祛风除湿、活血解毒,良好的抗炎、镇痛作用。
发明内容
本申请的目的在于提供一种铜锤玉带草提取物及其制备方法和应用,以扩大铜锤玉带 草的药用范围,进而提高铜锤玉带草的药用价值。
本发明实施例提供了一种铜锤玉带草提取物的应用,所述应用包括将所述铜锤玉带草 提取物用于治疗乳腺癌。
可选的,所述应用包括将所述铜锤玉带草提取物用于制备治疗乳腺癌的药物或制备辅 助治疗乳腺癌的功能性食品。
可选的,所述应用包括将所述铜锤玉带草提取物用于制备治疗乳腺癌的组合物,所述 组合物包括所述铜锤玉带草提取物和载体。
基于同一发明构思,本发明实施例还提供了一种铜锤玉带草提取物的制备方法,所述 方法包括:
将铜锤玉带草粉末和溶剂混合,获得料液混合物;
将所述料液混合物进行提取,后过滤,获得含提取物溶液;
将所述含提取物溶液进行浓缩,获得含提取物浓缩液;
将所述含提取物浓缩液进行萃取,获得提取物,所述萃取的有机溶剂包括石油醚、二 氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇中的至少一种,所述有机溶剂按极性由小到大逐一进行萃取。
可选的,各所述有机溶剂的体积为待萃取的所述含提取物浓缩液体积的2-4倍。
可选的,以质量计,所述铜锤玉带草粉末的含水量为5%-45%,所述铜锤玉带草粉末的 颗粒大小为5-100目。
可选的,所述料液混合物中,每1g所述铜锤玉带草粉末混合有3mL-8mL溶剂。
可选的,所述溶剂为乙醇,所述乙醇的体积浓度为70%-95%。
可选的,所述提取中采用超声波进行辅助,所述超声波的频率为15kHz-25kHz,所述超 声波的功率为700W-800W,所述超声波的时间为50min-70min。
基于同一发明构思,本发明实施例还提供一种铜锤玉带草提取物,所述铜锤玉带草提 取物采用如上所述的铜锤玉带草提取物的制备方法制得。
本发明实施例中的一个或多个技术方案,至少具有如下技术效果或优点:
本发明实施例提供的铜锤玉带草提取物的应用,所述应用包括将所述铜锤玉带草提取 物用于治疗乳腺癌;扩大了铜锤玉带草的药用范围,提高了铜锤玉带草的药用价值,另外, 具有治疗乳腺癌作用的铜锤玉带草提取物的制备方法简单易操作,为铜锤玉带草提取物在 治疗乳腺癌的药物和制备辅助治疗乳腺癌的功能性食品的应用上奠定了基础。
上述说明仅是本发明技术方案的概述,为了能够更清楚了解本发明的技术手段,而可 依照说明书的内容予以实施,并且为了让本发明的上述和其它目的、特征和优点能够更明 显易懂,以下特举本发明的具体实施方式。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案,下面将对实施例描述中所需要使用的 附图作一简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图是本发明的一些实施例,对于本领 域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其它的附图。
图1是本发明实施例提供的方法的流程图;
图2是本发明实验例1提供的铜锤玉带草乙醇提取物对MCF-7细胞的增殖抑制作用效 果图,*P<0.05,**P<0.01;
图3是本发明实验例1提供的铜锤玉带草乙醇提取物对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作 用效果图,*P<0.05,**P<0.01;
图4是本发明实验例2提供的铜锤玉带草乙醇提取物对DTX的IC50值的影响效果图;
图5是本发明实验例2提供的铜锤玉带草乙醇提取物乙酸乙酯级分对DTX的IC50值的影响效果图。
具体实施方式
下文将结合具体实施方式和实施例,具体阐述本发明,本发明的优点和各种效果将由 此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解,这些具体实施方式和实施例是用于说明本发 明,而非限制本发明。
在整个说明书中,除非另有特别说明,本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使 用的含义。因此,除非另有定义,本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域 技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾,本说明书优先。
除非另有特别说明,本发明中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等,均可通过市 场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
本申请实施例的技术方案为解决上述技术问题,总体思路如下:
根据本发明一种典型的实施方式,提供了一种具有治疗乳腺癌作用的铜锤玉带草提取 物的制备方法,包括以下步骤:
(1)前处理:将铜锤玉带草进行干燥(水分为5%-45%)并粉碎成粗粉(颗粒大小为5-100 目)。
(2)粗提:用体积浓度70%-95%的乙醇溶液(料液比1:3~8g/mL)超声波辅助提取, 优选的,料液比为1∶5g/mL,然后过滤,超声波的频率为15kHz-25kHz,所述超声波的功率为700W-800W,所述超声波的时间为50min-70min,优选的,超声波频率20kHz,功率为750W,时间为60min;
料液比会影响提取体系的黏度和浓度,控制料液比为1:3~8g/mL在保证药物有效成 分充分溶出的情况下尽量缩小提取体积,利于后续超声及分离工艺,料液比的过大,提取 不彻底;料液比过小,则降低了提取液的固形物含量,不利于以后的分离,且加重了工业生产中后续工艺。
(3)浓缩:所得溶液用滤纸过滤,将滤液进行旋转蒸发,减压浓缩;
(4)萃取:用浓缩液3倍体积的有机溶剂进行萃取,将萃取液减压浓缩,所述有机溶剂 为石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯或正丁醇中的一种以上;将浓缩液进行溶剂回收后冷冻干 燥,得到铜锤玉带草提取物。萃取步骤为用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯或正丁醇之中的若干种依次进行萃取。需要说明的是,有机溶剂为浓缩液的三倍的意思是,各有机溶剂为待萃取的浓缩液的三倍,例如,最初的浓缩液为100mL,则石油醚的用量为300mL,萃取后浓 缩液还有50mL,则二氯甲烷的使用量为150mL,以此类推。
所述铜锤玉带草提取物为乙醇部位提取物、石油醚部位提取物、二氯甲烷部位提取物、乙酸乙酯部位提取物或正丁醇部位提取物。
根据本发明另一种典型的实施方式,提供了一种具有治疗乳腺癌作用的铜锤玉带草提 取物在治疗乳腺癌的药物方面的应用或者在制备辅助治疗乳腺癌的功能性食品方面的应用。
作为一种可选的实施方式,药物为片剂、颗粒剂、散剂、丸剂、茶剂、煎膏剂、胶囊或者溶液剂。
根据本发明另一种典型的实施方式,提供了一种组合物,包含所述铜锤玉带草提取物 以及药学上可接受的载体。具体而言,载体可以为缓释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、吸附载体、表面活性剂或润滑剂。
本发明实施例提供的铜锤玉带草提取物可与常见的乳腺癌治疗药物进行复配,常见的 乳腺癌治疗药物包括阿霉素、紫杉醇、多西紫杉醇、卡培他宾、去甲长春花碱,铜锤玉带 草提取物与常见的乳腺癌治疗药物可产生协同增效,能够有效地降低耐药性等作用。
下面将结合实施例、对照例及实验数据对本申请的铜锤玉带草提取物及其制备方法和 应用进行详细说明。
实施例1
一种具有治疗乳腺癌作用的铜锤玉带草提取物的制备方法,包括以下步骤:
(1)前处理:将铜锤玉带草进行干燥并粉碎成粗粉。
(2)粗提:用体积浓度95%的乙醇溶液(料液比1:3g/mL)超声波辅助提取,然后过滤,超声波的频率为15kHz,所述超声波的功率为700W,所述超声波的时间为50min;
(3)浓缩:所得溶液用滤纸过滤,将滤液进行旋转蒸发,减压浓缩;
(4)萃取:用浓缩液3倍体积的有机溶剂进行萃取,将萃取液减压浓缩,所述有机溶剂 为石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇;将浓缩液进行溶剂回收后冷冻干燥,得到铜锤玉带草提取物。
实施例2
一种具有治疗乳腺癌作用的铜锤玉带草提取物的制备方法,包括以下步骤:
(1)前处理:将铜锤玉带草进行干燥并粉碎成粗粉。
(2)粗提:用体积浓度95%的乙醇溶液(料液比1:8g/mL)超声波辅助提取,然后过滤,超声波的频率为25kHz,所述超声波的功率为800W,所述超声波的时间为70min;
(3)浓缩:所得溶液用滤纸过滤,将滤液进行旋转蒸发,减压浓缩;
(4)萃取:用浓缩液3倍体积的有机溶剂进行萃取,将萃取液减压浓缩所述有机溶剂为 石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇;将浓缩液进行溶剂回收后冷冻干燥,得到铜锤玉 带草提取物。
实施例3
一种具有治疗乳腺癌作用的铜锤玉带草提取物的制备方法,包括以下步骤:
(1)前处理:将铜锤玉带草进行干燥并粉碎成粗粉。
(2)粗提:用体积浓度95%的乙醇溶液(料液比1:5g/mL)超声波辅助提取,然后过滤,超声波频率为20kHz,功率为750W,时间为60min;
(3)浓缩:所得溶液用滤纸过滤,将滤液进行旋转蒸发,减压浓缩;
(4)萃取:用浓缩液3倍体积的有机溶剂进行萃取,将萃取液减压浓缩所述有机溶剂为 石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇;将浓缩液进行溶剂回收后冷冻干燥,得到铜锤玉 带草提取物。
对比例1
一种具有治疗乳腺癌作用的铜锤玉带草提取物的制备方法,包括以下步骤:
(1)前处理:将铜锤玉带草进行干燥并粉碎成粗粉。
(2)粗提:用体积浓度95%的乙醇溶液(料液比1:2g/mL)超声波辅助提取,然后过滤,超声波频率为20kHz,功率为750W,时间为60min;
(3)浓缩:所得溶液用滤纸过滤,将滤液进行旋转蒸发,减压浓缩;
(4)萃取:用浓缩液3倍体积的有机溶剂进行萃取,将萃取液减压浓缩所述有机溶剂为 石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇;将浓缩液进行溶剂回收后冷冻干燥,得到铜锤玉 带草提取物。
对比例2
一种具有治疗乳腺癌作用的铜锤玉带草提取物的制备方法,包括以下步骤:
(1)前处理:将铜锤玉带草进行干燥并粉碎成粗粉。
(2)粗提:用体积浓度95%的乙醇溶液(料液比1:10g/mL)超声波辅助提取,然后过滤,超声波频率为20kHz,功率为750W,时间为60min;
(3)浓缩:所得溶液用滤纸过滤,将滤液进行旋转蒸发,减压浓缩;
(4)萃取:用浓缩液3倍体积的有机溶剂进行萃取,将萃取液减压浓缩所述有机溶剂为 石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇;将浓缩液进行溶剂回收后冷冻干燥,得到铜锤玉 带草提取物。
对比例3
取铜锤玉带草,加水煎煮提取4次,每次8倍量水,过滤,合并水提液,浓缩成相对密度为1.5-1.25的清膏,加90%的乙醇调至含醇量65%,搅拌,静置24小时,过滤,滤 液减压回收乙醇,并浓缩为相对密度为1.2-1.35的清膏(60℃)。
对比例4
取铜锤玉带草,粉碎成粗粉,加水煎煮提取2次,每次8倍量水,过滤,合并水提液,浓缩成相对密度为1.2-1.35的清膏,加95%的乙醇调至含醇量65%,搅拌,静置80小时, 过滤,滤液减压回收乙醇,并浓缩为相对密度为1.2-1.35的清膏(60℃)。
对比例5
取铜锤玉带草,取铜锤玉带草,加水煎煮提取2次,每次8倍量水,过滤,合并水提液,浓缩成相对密度为1.05-1.15的清膏,加90%的乙醇调至含醇量65%,搅拌,静置48 小时,过滤,滤液减压回收乙醇,并浓缩为相对密度为1.2-1.35的清膏(60℃)。
实验例1
以MCF-7和MDA-MB-231为受试细胞,将其在DMEM培养基中培养。细胞培养基补 充有10%FBS、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素。细胞在37℃下在含有5%CO2的 湿润环境中培养。为了检测活力和细胞凋亡,将细胞接种在96孔中。使用cck-8测定法评 估不同铜锤玉带草提取物的细胞毒性作用。细胞在96孔板中暴露于浓度为5-1000μg/ml的 乙醇提取物24小时。其他级分在5-300μg/ml的浓度下进行评估。浓度为0.5%(v/v)的二 甲基亚砜作为溶剂对照。处理结束后,次吸出各孔含药培养基,加入含CCK-8的新鲜培养 基,CCK-8溶液占细胞培养基体积的1/10。放入孵箱培养0.5-4小时,待颜色变为橙色,将 96孔板取出,放入酶标仪检测吸光度,波长设为450nm。
与浓度为0.5至125μg/mL的铜锤玉带草乙醇提取物一起孵育的MCF-7、MDA-MB-231细胞的活力显着低于对照(p<0.001),如图2和3所示。计算出对铜锤玉带草乙醇提取物对MCF-7和MDA-MB-231细胞诱导50%细胞生长抑制(IC50)的浓度分别为24.9μg/mL和 37.5μg/mL。
在150-500μg/ml的浓度下对比分析其他溶剂级分的对两种乳腺癌细胞毒性作用的 IC50值,如下表所示:
结果表明,各级分提取物对MCF-7细胞的IC50介于21.0~32.1μg/mL,对 MDA-MB-231细胞的IC50介于32.9~42.6μg/mL,其中乙酸乙酯级分对两种乳腺癌细胞的 IC50均最低。
实验例2
以MDA-MB-231细胞为受试细胞,对比铜锤玉带草乙醇提取物及其乙酸乙酯级分单独或 与乳腺癌一线化疗药多西他赛(DTX)联合用药的细胞毒性作用。前期实验已确定多西他赛对 MDA-MB-231细胞作用48h的IC50为1.2μmol/L,分别以2.5、6.5、12.5、25.0、37.5、50、62.5μg/mL的乙醇提取物及乙酸乙酯级分与1.2μmol/L的多西他赛联合作用于 MDA-MB-231细胞48h,cck-8法测定细胞活力。通过在CompuSyn软件中输入剂量及其抑制 率来计算联合用药指数(CDI)。发现铜锤玉带草提取物与DTX组合的CDI<1,表明两者 具有协同作用。不同浓度铜锤玉带草提取物和多西他赛单独应用对MDA-MB-231细胞均有生 长抑制作用,两者合用时生长抑制作用更明显(P<0.05),且抑制作用具有浓度依赖性。结 果表明铜锤玉带草提取物能增强多西他赛的抑制作用。
本发明实施例中的一个或多个技术方案,至少还具有如下技术效果或优点:
(1)本发明实施例提供的应用中,铜锤玉带草提取物在对正常乳腺上皮细胞无明显毒 副作用浓度下,具有治疗乳腺癌作用的铜锤玉带草提取物具有明显的抑制乳腺癌细胞生长 和转移的作用,促使乳腺癌细胞凋亡,能够应用于治疗乳腺癌的药物和制备辅助治疗乳腺 癌的功能性食品,应用于乳腺癌的治疗或辅助治疗,从而扩大了铜锤玉带草的药用范围, 提高了铜锤玉带草的药用价值;
(2)本发明实施例提供的方法具有治疗乳腺癌作用的铜锤玉带草提取物的制备方法简 单易操作,为铜锤玉带草提取物在治疗乳腺癌的药物和制备辅助治疗乳腺癌的功能性食品 的应用上奠定了基础。
最后,还需要说明的是,术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含,从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素,而 且还包括没有明确列出的其他要素,或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固 有的要素。
尽管已描述了本发明的优选实施例,但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概 念,则可对这些实施例作出另外的变更和修改。所以,所附权利要求意欲解释为包括优选 实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。
显然,本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和 范围。这样,倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内, 则本发明也意图包含这些改动和变型在内。
Claims (3)
1.一种铜锤玉带草提取物的应用,其特征在于,所述铜锤玉带草提取物乙酸乙酯级分与多西他赛联合用于制备治疗乳腺癌的药物;
所述铜锤玉带草提取物乙酸乙酯级分的制备方法包括:
将铜锤玉带草粉末和溶剂混合,获得料液混合物;所述溶剂为乙醇,所述乙醇的体积浓度为95%;
将所述料液混合物进行提取,后过滤,获得含提取物溶液;
将所述含提取物溶液进行浓缩,获得含提取物浓缩液;
将所述含提取物的浓缩液用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯依次进行萃取,取乙酸乙酯萃取部位为乙酸乙酯级分;
各有机溶剂的体积为待萃取的所述含提取物浓缩液体积的3倍;
所述料液混合物中,每1g所述铜锤玉带草粉末混合有3mL-8mL溶剂。
2.根据权利要求1所述的铜锤玉带草提取物的应用,其特征在于,以质量计,所述铜锤玉带草粉末的含水量为5%-45%,所述铜锤玉带草粉末的颗粒大小为5-100目。
3.根据权利要求1所述的铜锤玉带草提取物的应用,其特征在于,所述提取中采用超声波进行辅助,所述超声波的频率为15kHz-25kHz,所述超声波的功率为700W-800W,所述超声波的时间为50min-70min。
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