CN103585178A - 一种人干细胞组合物在制备用于治疗艾滋病的药物中的用途 - Google Patents
一种人干细胞组合物在制备用于治疗艾滋病的药物中的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103585178A CN103585178A CN201310549262.9A CN201310549262A CN103585178A CN 103585178 A CN103585178 A CN 103585178A CN 201310549262 A CN201310549262 A CN 201310549262A CN 103585178 A CN103585178 A CN 103585178A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- stem cell
- gram
- aids
- cell suspension
- medicine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明为一种人干细胞组合物在制备用于治疗艾滋病的药物中的用途。由包含离体的人干细胞和生理盐水组成的所述干细胞组合物配置成的体积为10~80ml的干细胞悬液,每份所述干细胞悬液中含有的人干细胞的数量为1~8×108个。本发明可通过静脉注射进行艾滋病的治疗。静脉输入安全可靠,操作性强,副作用小,干细胞可以通过血液循环到达细胞受损部位。
Description
技术领域
本发明涉及一种人干细胞组合物在制备用于治疗疾病的药物中的用途,进一步地说,是涉及制备用于抗逆转录病毒药物中的用途,特别是涉及人干细胞组合物在制备用于艾滋病药物中的用途。
背景技术
艾滋病,即获得性免疫缺陷综合症。是人类因为感染人类免疫缺陷病毒(HIV)后导致免疫缺陷,并发一系列机会性感染及肿瘤,严重者可导致死亡的综合征。
据世界卫生组织报告:2010年全世界存活HIV(人类免疫缺陷病毒)携带者及艾滋病患者共3400万,新感染270万,全年死亡180万人。每天有超过7000人新发感染,全世界各地区均有流行,但97%以上在中、低收入国家,尤以非洲为重。中国疾病预防控制中心估计,截止至2011年底,中国存活HIV携带者及艾滋病患者约78万人,全年新发感染者4.8万人,死亡2.8万人。疫情已覆盖全国所有省、自治区、直辖市,目前我国面临艾滋病发病和死亡的高峰期,且已由吸毒、暗娼等高危人群开始向一般人群扩散。
艾滋病的传染源:HIV感染者和艾滋病病人是本病的唯一传染源。
艾滋病的传播途径:HIV主要存在于感染者和病人的血液、精液、阴道分泌物、乳汁中。①性行为:与已感染的伴侣发生无保护的性行为,包括同性、异性和双性性接触。②静脉注射吸毒:与他人共用被感染者使用过的、未经消毒的注射工具,是一种非常重要的HIV传播途径。③母婴传播:在怀孕、生产和母乳喂养过程中,感染HIV的母亲可能会传播给胎儿及婴儿。④血液及血制品(包括人工受精、皮肤移植和器官移植)也是传播途径之一。
易感人群:人群普遍易感。高危人群包括:男性同性恋者、静脉吸毒者、与HIV携带者经常有性接触者、经常输血及血制品者和HIV感染母亲所生婴儿。
HIV感染分为急性期、无症状期和艾滋病期。
(一)急性期:通常发生在初次感染HIV后2-4周左右。临床主要表现为发热、咽痛、盗汗、恶心、呕吐、腹泻、皮疹、关节痛、淋巴结肿大及神经系统症状。多数患者临床症状轻微,持续1-3周后缓解。
此期在血液中可检出HIV-RNA(艾滋病病毒核酸)和P24抗原,而HIV抗体则在感染后数周才出现。CD4+T淋巴细胞计数一过性减少,CD4/CD8比例可倒置。
(二)无症状期
可从急性期进入此期,或无明显的急性期症状而直接进入此期。
此期持续时间一般为6-8年。但也有快速进展和长期不进展者。此期的长短与感染病毒的数量、型别,感染途径,机体免疫状况等多种因素有关。
(三)艾滋病期
为感染HIV后的最终阶段。病人CD4+T淋巴细胞计数明显下降,多<200/mm3,HIV血浆病毒载量明显升高。此期主要临床表现为HIV相关症状、各种机会性感染及肿瘤。
HIV相关症状:主要表现为持续一个月以上的发热、盗汗、腹泻;体重减轻10%以上。部分病人表现为神经精神症状,如记忆力减退、精神淡漠、性格改变、头痛、癫痫及痴呆等。另外还可出现持续性全身性淋巴结肿大,其特点为①.除腹股沟以外有两个或两个以上部位的淋巴结肿大;②.淋巴结直径≥1cm,无压痛,无粘连;③持续时间3个月以上。
HIV相关机会性感染及肿瘤的常见症状:发热、盗汗、淋巴结肿大、咳嗽咳痰咯血、呼吸困难、头痛、呕吐、腹痛腹泻、消化道出血、吞咽困难、食欲下降、口腔白斑及溃疡、各种皮疹、视力下降、失明、痴呆、癫痫、肢体瘫痪、消瘦、贫血、二便失禁、尿储留、肠梗阻等。
毫无疑义,艾滋病给患者带来了极大大的痛苦,现有技术的治疗方法主要包括抗HIV治疗。
高效抗逆转录病毒治疗是目前艾滋病的最主要的治疗方法。这种治疗需要终生服药。期治疗目标是最大限度地抑制病毒的复制,保存和恢复免疫功能,降低病死率和HIV相关性疾病的发病率,提高患者的生活质量,减少艾滋病的传播。
但是,在抗逆转录病毒药物治疗艾滋病的过程中,存在如下缺陷:
其一,需要把握好治疗的指征和时机,且某些特殊人群的抗病毒治疗均有其特殊性,应具体问题具体分析,不能照搬固有方案;
其二,依从性很也是治疗过程的一个重要因素,在实施抗病毒治疗前,医生应与患者有充分的交流,让他们了解治疗的必要性、治疗后可能出现的不适、依从性的重要性、服药后必须进行定期的检测,以及在发生任何不适时应及时与医务人员联系。同时要得到其家属或朋友的支持,以提高患者的依从性。抗病毒治疗过程中,应监测CD4 +T淋巴细胞、HIV-RNA及常规血液检测,以评价疗效及副作用。
本世纪,艾滋病已成为严重威胁世界人民健康的公共卫生问题。因此,如何把艾滋病从一种致死性疾病逐渐变为一种可控的疾病,再进一步彻底治愈,是一个亟待解决的世界性难题,也是摆在全世界医务工作者面前的伟大事业。
发明内容
本发明的目的,就是为了弥补现有技术的不足,提供一种人干细胞组合物在制备用于艾滋病药物中的用途,进而提供一种通过中西医结合及干细胞组合物用于治疗艾滋病的综合疗法。
关于本文中有关干细胞的相关术语定义如下:
1.干细胞组合物:为本申请人的专利申请(201210017987.9)中提到的2-4mm厚的油状干细胞层(详见其说明书中干细胞制备过程);
2.干细胞悬液:为该油状干细胞层经生理盐水清洗及稀释后得到的悬液,定容为10-80ml;
3.干细胞悬液的稀释液:由于悬液中的干细胞数量多,易吸附成团,为了防止静滴时不能通过滤网,因此静滴前需再用100ml的生理盐水进一步稀释,即得到干细胞悬液的稀释液,此时的总容量为110-180ml。
注:自始至终,干细胞的数量并未发生变化,即溶质为定量,只是增加了生理盐水的量,即溶剂为变量,因此溶液的量也随之变化,即有了三种不同的称呼。若不同,也只是溶液的密度不同,由于起效成分为干细胞,因此生理盐水的多少并不会影响治疗的效果。
本发明的人干细胞组合物在制备用于治疗艾滋病的药物中的用途,是这样实现的:
所述的人干细胞选自人类骨髓、脐带血或外周血干细胞;
所述的干细胞组合物为按照本申请人的申请号为201210017987.9、名称为“一种人类骨髓、脐带血或外周血干细胞样本密度分离液及干细胞分离方法”中的干细胞分离方法步骤(3)得到的“存在于整个离心管中间位置的约(2-4)mm厚的油状干细胞层”;
每份所述干细胞组合物经(10-80)ml生理盐水清洗及定容后,得到含有的人干细胞的数量为(1~8)×108个的干细胞悬液;
每份所述的干细胞悬液在使用前再用100ml的生理盐水进一步稀释,得到干细胞悬液中的个数密度为(0.125~8)×107个/ml、总容量为110-180ml的干细胞悬液的稀释液。
在具体实施中,所述的用途采用以下方法实现:
所述的干细胞悬液的稀释液通过体表浅静脉进行静脉点滴法注射到人体。
所述的静脉点滴法的步骤为:
(1)先用0.9%的氯化钠溶液20-30ml冲管;
(2)接着开始静脉点滴注射输入干细胞悬液的稀释液,保持20-30滴/分钟,半小时后无不良反应可增加到30-50滴/分钟,细胞输入过程中每15分钟轻轻晃动装有所述干细胞悬液的稀释液的细胞保存袋一次;
(3)细胞输入完毕后用0.9%的氯化钠溶液20ml冲入细胞保存袋中轻轻晃动,再用0.9%的氯化钠溶液20-30ml冲净即可将输液器中细胞冲净,得到的冲洗液也同样注入患者体内,以保证细胞输入的数量;
静滴时将细胞液摇匀,避免细胞贴壁。
所述的人干细胞优选为人类脐带血干细胞。
另外本发明所述的用途还可以结合包括以下两种药物的配合实现:
1、抗逆转录病毒药物治疗
所述的抗逆转录病毒药物包括以下药物的至少一种:核苷类反转录酶抑制剂、非核苷类反转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、整合酶抑制剂、融合酶抑制剂及CCR5抑制剂、立妥威DDI,拉米夫定3TC,齐多夫定AZT,赛瑞特D4T,替诺福韦酯TDF,维乐命NVP,依非韦伦EFV,克立芝,达鲁那韦,拉替拉伟;
2、中医中药治疗
所述的中药基础组方如下:
黄芪10-15克 党参6-15克 白术6-12克 茯苓6-18克
甘草6-10克 黄连3-6克 紫花地丁10-15克 蒲公英10-15克
银花15-20克 板蓝根20克 白花蛇舌草20-25克 虎杖9-15克
七叶一枝花10-15克 淫羊藿20-25克。
本发明的干细胞组合物在制备用于治疗艾滋病的药物中的用途具体实施过程进一步详述如下:
1、抗逆转录病毒药物治疗
高效抗逆转录病毒治疗(Highly Active Antiretroviral Therapy,HAART)是艾滋病的最根本的治疗方法。而且需要终生服药。治疗目标:最大限度地抑制病毒的复制,保存和恢复免疫功能,降低病死率和HIV相关性疾病的发病率,提高患者的生活质量,减少艾滋病的传播。
开始抗逆转录病毒治疗的指征和时机:
①成人及青少年开始抗逆转录病毒治疗的指征和时机
下列情况之一建议治疗:艾滋病期患者;急性期;无症状期CD4 +T淋巴细胞<350/mm3;CD4 +T淋巴细胞每年降低大于100/mm3;HIV-RNA>105cp/ml;心血管疾病高风险;合并活动性HBV/HCV感染;HIV相关肾病;妊娠。开始HAART前,如果存在严重的机会性感染或既往慢性疾病急性发作,应控制病情稳定后再治疗。
②婴幼儿和儿童开始抗逆转录病毒治疗的指征和时机
以下情况之一建议治疗:小于12个月的婴儿;12至35个月的婴儿,CD4 +T淋巴细胞比例<20%,或总数<750/mm3;36个月以上的儿童,CD4 +T淋巴细胞比例<15%,或总数<350/mm3。
抗反转录病毒(ARV)药物:
①国际现有药物:六大类30多种。核苷类反转录酶抑制剂(NRTIs)、非核苷类反转录酶抑制剂(NNRTIs)、蛋白酶抑制剂(PIs)、整合酶抑制剂(raltegravir)、融合酶抑制剂(FIs)及CCR5抑制剂(maraviroc)。
②国内ARV药物:有前4类,12种。
抗艾滋病病毒药物有:立妥威DDI,拉米夫定3TC,齐多夫定AZT,赛瑞特D4T,替诺福韦酯TDF,维乐命NVP,依非韦伦EFV,克立芝,达鲁那韦,拉替拉伟。
推荐我国成人及青少年的一线抗病毒方案:齐多夫定/替诺福韦+拉米夫定+依非韦伦/奈韦拉平
某些特殊人群(如儿童、孕妇、合并结核、肝炎及静脉吸毒者)的抗病毒治疗均有其特殊性,应具体问题具体分析,不能照搬以上方案。
2、中医中药治疗
中医中药治疗艾滋病,又如下五个方面的优势:
(1)中医的辨证论治和个体化治疗可应付艾滋病复杂多变的临床特点,缓解和减轻症状,提高生存质量。
(2)早期发现,早期治疗。由于西药抗病毒治疗需要等到符合合适的治疗条件时才能使用,因此,中医药对于无症状期HIV感染者的治疗具有一定的潜力和优势。
(3)能阶段性的稳定或改善患者的免疫功能,延缓发病,使患者带毒生存。
(4)中药可以减轻抗病毒药物的某些毒副作用,增加患者的依从性。
(5)中医药资源丰富,历史悠久,能够被广大患者接受,有较好的药物可及性和覆盖面;此外,在辨证准确的前提下,毒副作用相对较少。
相关研究表明,中药对改善艾滋病的症状体征疗效确切;可以明显改善患者的生存质量,对HAART(鸡尾酒疗法)引起的部分不良反应具有较好的治疗作用,对提高和稳定患者的免疫功能具有一定的作用,有些中药与HAART合用可以提高抗病毒药的疗效。中药治疗虽然起效慢,但作用持久,且不易产生耐药性,在临床治疗中具有广泛的应用前景。
中医治以扶正祛邪,清热解毒。在具体实施中,其基础组方如下:
黄芪10-15克 党参6-15克 白术6-12克 茯苓6-18克
甘草6-10克 黄连3-6克 紫花地丁10-15克 蒲公英10-15克
银花15-20克 板蓝根20克 白花蛇舌草20-25克 虎杖9-15克
七叶一枝花10-15克 淫羊藿20-25克
上方为基础方,按症状不同可临证加减其方药及剂量。
3、生物治疗
干细胞是一类具有自我更新,高度增殖和多向分化潜能的细胞群体,即这些细胞可以通过细胞分裂维持自身细胞群的大小,同时又可以进一步分化成为各种不同的组织细胞,被医学界称为“万用细胞”。
本发明就是基于干细胞具有的细胞替代作用,将干细胞植入体内后,能自动识别并移行至细胞损伤部位,然后分裂增殖成新的细胞,替代受损或病变细胞行使其功能。
艾滋病是人类因为感染人类免疫缺陷病毒后导致免疫缺陷,并发一系列机会性感染及肿瘤,严重者可导致死亡的综合征。免疫病理主要表现为CD4 +T淋巴细胞数量减少及功能障碍,异常免疫激活及免疫重建。而干细胞具有细胞替代作用,干细胞植入体内后,能自动识别并移行至细胞损伤部位,然后分裂增殖成新的细胞,替代坏死的免疫细胞行使其功能。艾滋病是累及全身多器官系统的疾病,如皮肤粘膜、淋巴结、眼部、呼吸系统、消化系统、神经系统、泌尿系统等。干细胞可移行至上述病变部位,定向分化为所需的功能细胞,继而替代失去功能的病变细胞。
另外,由于干细胞具有增殖和定向分化的能力,当干细胞被趋化至器官损伤局部后,其中部分细胞分泌大量小分子物质,趋化受体干细胞,可促进细胞增殖并定向分化,完成各器官功能的修复。而且干细胞能释放多种生物活性物质,如可以释放膜微粒,趋化并调节周围细胞的功能活性,唤醒处于休眠期的组织细胞,促进其发挥其生物学特性;另由于其具有的免疫调节作用,可增强人体的免疫机能和修复受损的免疫系统,降低机体炎症反应,从而预防各种免疫因素及感染所致的相关疾病。
当用所述干细胞组合物用于治疗艾滋病选择静脉输入治疗时,由于干细胞具有增殖和定向分化的能力,当干细胞被趋化至细胞损伤局部后,其中部分细胞分泌大量小分子物质,趋化受体干细胞,可促进细胞增殖并定向分化,完成内膜结构和功能的修复。而且干细胞能释放多种生物活性物质,如可以释放膜微粒,趋化并调节周围细胞的功能活性,唤醒处于休眠期的组织细胞,促进其发挥其生物学特性;另由于其具有的免疫调节作用,可增强人体的免疫机能和修复受损的免疫系统,降低机体炎症反应,从而预防各种免疫因素及感染所致的相关疾病。同时静脉输入安全可靠,操作性强,副作用小,干细胞可以通过血液循环到达细胞受损部位。
综上所述,本发明的优点在于:
1.临床使用安全,内毒素﹤1EU,符合国家药典规定的注射用标准。
2.获取的细胞悬液体积小,可按医生的需求配成临床治疗所需剂量。
3.静脉输入安全可靠,操作性强,治疗损伤小,副作用小,干细胞可以通过血液循环到达细胞受损部位。
4.另外使用本申请人的申请号为201210017987.9、名称为“一种人类骨髓、脐带血或外周血干细胞样本密度分离液及干细胞分离方法”的方法制得的人造血干细胞,还具备以下优势
(1)含有多种细胞因子,能够使干细胞快速准确的到达受损部位,并辅助其发挥生物学活性;
(2)细胞数量大,特别是由人脐带血分离提取的纯化干细胞,每份脐带血(80ml左右)分离出的干细胞数量皆可达到108以上;
(3)细胞种类全,分离全部的红细胞,血小板,血浆物质,去除部分成熟白细胞,淋巴细胞,纯化有核细胞,保留所有干细胞;
(4)细胞活性强,采自人体新鲜活细胞,经分离纯化后获取干细胞。细胞活性达96%以上。
具体实施方式
下面结合实施例,进一步说明本发明。
实施例1
用于治疗艾滋病的干细胞悬液的制备。
无菌纱布蘸75%的酒精,擦拭所有操作过程中所需物品及操作台。(本操作中所涉及消毒步骤皆用75%酒精的无菌纱布擦拭,以下简称消毒)
1,将50mL含有枸橼酸钠的脐带血血袋消毒,导入50mL1号液瓶中。将50mL2号液全部倒入1号液瓶中,盖紧瓶盖,充分摇匀。将1号液瓶置于超净台,松动瓶盖后静置20-30min,待分层。12支离心管拆封,备用。
2,取3号液,消毒外壁,开盖,用新移液管取25mL3号液置于50mL新离心管中,一共移取3次,得到3支有试剂3号液的离心管,备用。
3,取步骤1静置20-30min后的试剂1号液瓶中的上层液,用移液管移取分别置于离心管中每只45mL,盖紧盖置于离心机中设置速度为2500转时间为5分钟温度为5℃。从离心机中取出离心管,消毒,开盖,弃上清液。
4,取新移液管,移取0.9%NaCl分别加入到离心管中至10mL处,摇匀,得细胞混合液备用。取步骤2下装有3号液的离心管,缓慢加入刚刚制备的细胞混合液,保持细胞混合液悬浮于3号液表面,加至45ml,轻放至试管架,即得到3支具有分层液的离心管,置于离心机中,设置速度为1800转,时间为30分钟,温度为5℃。
5,从离心机中轻取出离心管,保持液面平稳,消毒,开盖,用一次性胶头滴管吸取离心管中间的絮状液体,收集置三支新离心管中,用移液管加入0.9%NaCl至45ml处,摇匀,配平,离心,设置速度为2000转时间为5分钟温度为5℃(注:第一次清洗)。
6,取出具有细胞液的离心管,消毒,开盖,弃上清液后,用注射器先加入少量0.9%NaCl,摇匀后吸取至一支试管内,加入0.9%NaCl至45ml处,再摇匀,配平,离心,速度为1800转,时间为5分钟温度为5℃(注:第二次清洗)。
7,取出具有细胞液的离心管,消毒,开盖,弃上清液,用注射器先加入少量0.9%NaCl,摇匀后加入0.9%NaCl至45ml处,再摇匀,配平,离心,设置速度为1600转时间为5分钟温度为5℃(第三次清洗)。
8,取出具有细胞液的离心管,消毒,开盖,弃上清液后加入0.9%NaCl至所需要稀释刻度处摇匀,用微量定量移液器取10ul用于细胞计数,其余细胞液密封,置于冰桶内待用。
实施例2
药理实验,脐带血干细胞悬液的一般药理学实验
1材料
1.1动物:KM小鼠体质量18~22g,雌雄各半。健康杂种家犬,体重12~18kg,雌雄皆用。动物饲养于SPF级实验动物实验室条件下,室内温度19~22℃,相对湿度40%~50%,给予全价颗粒饲料,自由摄食、饮水。
1.2药物:人类脐带血干细胞悬液,其中干细胞含量为8×107个/ml。
1.3上海欣曼公司SYS-G型小鼠自主活动测频仪,美国BIOPAC公司RM-6000型多导生理记录仪。
2试验方法
2.1对精神神经系统的影响
2.1.1对小鼠一般外观行为的影响:取小鼠80只,随机分为四组,每组20只,雌雄各半,给药组分设0.5、1.0、2.0ul/kg三个剂量组,对照组给予5%葡萄糖注射液,均按0.1ml/10g体重尾静脉注射给药,给药后10min,观察小鼠的一般行为表现,步态、姿势、肌肉紧张度、瞳孔变化、流涎、二便、皮毛等,同对照组比较,了解受试药对动物的影响。
2.1.2对小鼠协调运动的影响:分组及给药同前,采用倾斜板法,于给药前及给药后10min、30min及60min各进行一次测定,计算各组小鼠从木板上跌落的百分率,按简化直接法统计。
2.1.3对小鼠自主活动的影响:小鼠80只,分组及给药同前,于尾静脉注射给药后10min,置小鼠于自发活动测定仪中,稳定5min后,测定10min内自主活动次数,用组间t检验进行统计处理。
2.2对呼吸系统及心血管系统的影响
家犬6只,雌雄各半,用戊巴比妥钠30mg/kg,静脉注射麻醉后,背位固定,分离右颈总动脉,插管连接TP—101型压力转换能以多导生理记录仪记录收缩压,舒张压及平均动脉压;以针形电极刺入四肢皮下记录Ⅱ导联心电图,以立位转换能器连接胸骨记录呼吸频率及幅度。实验设0.5、1.0、2.0ul/kg三个剂量组,对照组用5%葡萄糖注射液,给药容积为1ml/kg,由股静脉插管给药,注射速度为30s,分别在静脉注射给药后1、2、5、10、15、20及30min时记录上述各项指标,观察脐带血干细胞悬液对呼吸,心电及血压的作用,用t检验法进行用药前后显著性检验分析。
3结论
3.1对小鼠一般行为表现的影响:实验各组动物在用药后60min内的一般行为,步态、肌紧张度、活动、饮食、皮毛及二便,均无显著变化,未见有瞳孔大小改变,竖毛、倦伏、流涎等异常症状,同对照组相比,差异无统计学意义。
3.2对协调运动的影响:各组动物于给药前及给药后各观测点的跌落率均为0,表明在实验所用0.5、1.0、2.0ul/kg剂量下对小鼠协调运动无明显影响。
3.3对小鼠自主活动的影响:脐带血干细胞悬液各剂量组对小鼠自主活动的影响见表1。
表1对小鼠自主活动的影响
注:与对照组比较P>0.05。
从表1结果可见:实验组1.0、2.0ul/kg剂量时,活动次数略有减少,但同对照组比较,差异并无统计学意义,表明脐带血干细胞悬液对小鼠自主活动无明显影响。
3.4对呼吸系统的影响:静脉注射各剂量后,分别在不同时间点描记呼吸频率及幅度的变化,结果见表2。
表2对麻醉犬呼吸频率及幅度的影响
注:对照组和实验组与用药前比较P均>0.05。
从表2结果可见:用药组在0.5、1.0ul/kg剂量时静脉注射对麻醉犬各时间点的呼吸频率及幅度均无明显作用,在2.0ul/kg剂量时,频率及幅度均略有增加,但同对照组相比,差异无统计学意义。表明脐带血干细胞悬液对犬的呼吸系统无显著影响。
3.5对心血管系统的影响:结果见表3、4。
表3对麻醉犬平均动脉压的影响(KPa)
注:与用药前比较P>0.05。
表4对麻醉犬心率的影响(次/min)
注:与用药前比较P>0.05。
表3、4结果表明:脐带血干细胞悬液静脉注射1.0、2.0ul/kg时,对麻醉犬的心率计平均动脉压无明显作用,同对照组及用药前相比,差异均无统计学意义(P>0.05),表明脐带血干细胞悬液在本剂量时无心血管刺激作用。
表5对麻醉犬Ⅱ导联心电图(ECG)的影响
从表5结果可见:静脉注射脐带血干细胞悬液0.5、1.0、2.0ul/kg计量时,对麻醉犬心电图无明显作用,其各波间隔时间及电压振幅均在正常范围内波动,用药前后及用药组同对照组相比,均未发现差异有统计学意义,表明脐带血干细胞悬液在本实验所用剂量下,对麻醉犬的心电图无影响。
4结论
脐带血干细胞悬液的临床用药途径多为静脉滴注。故在本实验研究中,采用了与临床用药途径相同的静脉给药方式。当剂量分别为0.5、1.0、2.0ul/kg时,对小鼠的一般行为、协调运动及自主活动均无明显作用,表明本品对神经系统无明显影响。0.5、1.0及2.0ul/kg剂量时,对麻醉犬的呼吸次数和呼吸幅度无影响,对麻醉犬的血压亦无明显影响。在0.5、1.0及2.0ul/kg剂量时,对麻醉犬的心率、收缩压、舒张压及平均动脉压皆无明显影响。表明脐带血干细胞悬液静脉滴注的安全性较高。
实施例3
脐带血干细胞悬液的急性毒性实验
一、材料
A.啮齿类动物组:SD大鼠,周龄6~9周,体重180~240g
1、实验组:大鼠60只(雌雄比例1:1)
2、空白对照组:大鼠20只(雌雄比例1:1)
B.非啮齿类动物组:Beagle犬,月龄6~10个月,体重8~15kg。
1、实验组:犬30只(雌雄比例1:1)
2、空白对照组:犬10只(雌雄比例1:1)
C.药物:人类脐带血干细胞悬液,其中干细胞的含量为8×107个/ml。
二、方法
1、给药途径:静脉注射
2、给药剂量(起始剂量,中间剂量,最大剂量):
A组:a、大鼠2.5ml/kg b、大鼠5.0ml/kg c、大鼠10.0ml/kg
B组:a、犬1.25ml/kg b、犬2.5ml/kg c、犬5.0ml/kg
三、观察方法
给药后2h同时观察各组观察动物反应,以后每天上、下午各观察一次,连续观察15天。
指标:观察一般指标(见下表6),动物死亡情况,体重变化。
表6急性毒性实验结果
注:1.实验组大鼠偶发呼吸急促(1/20),给药后30min出现,持续2min。
2.实验组大鼠自发活动增多(3/20),表现为神经系统兴奋状态,给药后3~15天间歇性出现。
3.实验组Beagle犬自发活动增多(2/20),表现为神经系统兴奋状态,给药后7~14天间歇性出现。
4.空白对照组大鼠出现困倦(2/20),表现为偶尔昏睡,正常饲养第8~13天间歇性出现。
5.空白对照组Beagle犬出现困倦(1/20),表现为偶尔昏睡,正常饲养第9~11天间歇性出现。
6.实验组Beagle犬出现小微血管扩张(1/20),表现为舌、耳、结膜、阴囊发红,体热等。给药后5~13天出现。
四、实验结果
参与实验的大鼠及Beagle犬在实验周期内皆未出现死亡,体重稍有增加,大鼠平均增加10~15g,犬平均增加400~900g,实验组与空白对照组相比无明显差别。除最大剂量组及空白对照组出现阳性表现外,其余各组均为出现有意义的阳性体征,现以表格形式记录如下,症状阳性表现用“+”表示,阴性表现用“—”表示,并记录了阳性表现的出现比例及起始时间(详见下表及注释)。实验结束后对全部实验动物进行大体解剖,其组织器官的体积,颜色,质地均未见异常。
五、结论
1、最高剂量下,A组实验组大鼠偶发的呼吸急促,且持续时间很短,考虑可能与该大鼠心肺功能不全有关。A组实验组3只大鼠及B组实验组2只犬在给药后分别出现了间歇性的自发活动增加,探究,梳理毛发,运动增加,考虑是由于干细胞增殖,增加了神经细胞的数量,刺激中枢神经系统使其表现为兴奋状态。另有A组空白对照组2只大鼠及B组空白对照组1只犬出现昏睡状态,但易警醒而恢复正常活动,睡眠中枢短暂受到抑制,考虑可能与饲养环境较封闭,运动减少,通风不良有关。B组实验组1只犬出现体表微血管扩张,微循环加快,考虑为心输出量增加,或局部环境温度过高所致。
2、由起始剂量到中间剂量均未出现有意义的阳性表现,说明脐带血干细胞悬液作用于动物的安全性高,最高剂量下偶发中枢神经兴奋,说明其不良反应少,受试物安全范围为大鼠0~5.0ml/kg,犬0~2.5ml/kg,毒性反应小,对心脑肺等重要器官基本无不良影响,并且短时间内可恢复正常。
实施例4
脐带血干细胞悬液长期毒性实验
1材料
1.1动物:采用SPF级SD大鼠,雌雄各半,体质量80~90g。动物饲养于SPF级实验动物实验室条件下,室内温度19~22℃,相对湿度40%~50%,每笼6只动物,给予鼠全价颗粒饲料,自由摄食、饮水。
1.2药物:人类脐带血干细胞悬液,其中干细胞的含量为8×107个/ml。
2方法
2.1分组与给药
将脐带血干细胞悬液每日上午以最大剂量2.0ul/kg尾静脉注射给药1次,对照组注射等剂量的蒸馏水,每周称1次体重并记录摄食量,根据体重的变化重新计算给药量。根据急性毒性试验、药效学试验结果确定脐带血干细胞悬液高剂量组2.0ul/kg、中剂量组1.0ul/kg、低剂量组0.5ul/kg。
2.2观察指标
2.2.1一般观察给药期间,观察动物的外观,行为活动,饮食、粪便及被毛的情况,并记录体质量(每周称重1次)、进食量、进水量。
2.2.2血液学检查采用美国雅培CD-1200型全自动血球记数仪,测定红细胞(RBC)、白细胞(WBC)、血小板(PLT)、红细胞压积容量(HCT)、红细胞平均体积(MCV)、平均血红蛋白含量(MCH)、平均血红蛋白浓度(MCHC)、淋巴细胞数目(LYM)、单核细胞数目(MID)、粒细胞数目(GRA)、红细胞分布宽度(RDW)、血红蛋白(HGB)。
2.2.3血液生化检测采用日本日立7610型自动仪,测定丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(UREA)、肌酐(CREA)、总胆红素(TB)等。
2.2.4系统尸解及脏器系数全面细致观察每只动物的脏器,并称量每只动物的心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、脑等,并计算脏器系数。
3结果
3.1脐带血干细胞悬液对大鼠血液学指标的影响结果见表7~8。
3.2脐带血干细胞悬液对大鼠血液生化学指标的影响结果见表9~10。
3.3脐带血干细胞悬液对大鼠脏器系数的影响结果见表11。
表7脐带血干细胞悬液对给药180d末期大鼠血液学指标的影响
表8脐带血干细胞悬液对停药15d后大鼠血液学指标的影响
表9脐带血干细胞悬液对给药180d末期大鼠血液生化学指标的影响
表10脐带血干细胞悬液对停药15d后大鼠血液生化学指标的影响
表11脐带血干细胞悬液对给药180d末期大鼠脏器系数的影响
4结论
大鼠长期毒性实验以3个剂量(即2.0,1.0,0.5ul/kg)连续给药6个月及停药2周后,对大鼠一般状况、体质量增长无明显影响;血液学指标及血液生化学指标均在正常范围内,对大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑等重要脏器重量,脏器系数与对照组比较均无显著差异,并对大鼠心、肝、脾、肺、肾、脑、睾丸、子宫等重要脏器进行组织检查也未见明显病理改变。故本实验结果提示脐带血干细胞悬液在大鼠6个月长期毒性实验中,未发现明显的毒性反应及延迟性毒性反应,可以安全地应用于临床。
实施例5
脐带血干细胞悬液静脉注射对血管刺激性、溶血、过敏性实验
1材料
1.1人类脐带血干细胞悬液,其中干细胞的含量为8×107个/ml。
;5%葡萄糖注射液;甲醛;白蛋白;牛血清白蛋白;白百破三联疫苗;伊文思兰。
1.2受试动物日本大耳白家兔,体重2~3kg,雌雄兼用;荷兰豚鼠,体重200~250g,雄性。SD大鼠,体重180~220g,雄性。
2方法
2.1血管刺激性实验
实验开始前,动物预先饲养1周以观察其活动表现,动物室温度22~24℃,湿度40%~60%,取家兔3只,右侧耳缘静脉以无菌操作方法注射量为8.3ml/kg(注:由于该系列实验涉及到受试物的耐受性,因此选用干细胞悬液范围中的最大浓度进行试验。)的脐带血干细胞悬液,左侧耳缘静脉注射等体积5%葡萄糖注射液,1次/d,连续给药5d。上述两组均分别于末次给药后96h,肉眼观察注射部位有无红肿、充血等刺激现象,处死动物,以耳缘静脉注射点至向心方向,连续取3段血管连同周围组织,每段1cm,用10%甲醛溶液固定,常规脱水,石蜡包埋,切5μm薄片,HE染色,光镜下做组织学检查,另一侧对照血管也同法处理。
2.2溶血实验
2.2.12%兔红细胞混悬液制备取健康家兔1只,自心脏取血约20ml,置于三角瓶中,用玻璃棒搅拌,除去纤维蛋白,然后将血移入刻度离心管内,加入生理盐水10ml,混匀后离心5min(2 000~2 500r/min),去除上清液,再加生理盐水混匀离心,反复洗涤3~4次,至上清液无色透明,将所得红细胞按其容积用生理盐水稀释成2%的混悬液。
2.2.2方法取干净试管7支,编号排列于试管架上,按配比量依次加入2%兔红细胞混悬液和生理盐水,混匀后,置于37℃恒温箱中30min,然后于1-5管中加入不同量的干细胞悬液,分别为1ml,2ml,3ml,4ml,5ml,6号管中加入1ml生理盐水,7号管中加入1ml溶血素。(第6管为阴性对照管,第7管为阳性对照管),摇匀,置37℃恒温箱中进行温育,观察15,30,45min,1,2,3,24h有无溶血及凝集情况。
结果判定:
全溶血:溶液澄明红色,管底无细胞残留。
部分溶血:溶液澄明红色或棕色,管底有少量红细胞残留。
无溶血:红细胞全部下沉,上层液体无色澄明。
凝集:虽不溶血,但出现红细胞凝集,振摇后不能分散。
2.3全身主动过敏实验
实验开始前,动物预先饲养1周以观察其活动表现,动物室温度22~24℃,湿度40%~60%,取48只健康雄性豚鼠,随机分成5%葡萄糖注射液组、阳性药物组(白蛋白组)、脐带血干细胞悬液大剂量组、小剂量组,每组12只。分别给各组豚鼠隔日腹腔注射5%葡萄糖注射液、白蛋白25mg/kg,脐带血干细胞悬液4,16ul/kg,体积为0.5ml,共注射3次,然后每组内分成两批,于第1次给药后14d及21d分别静脉注射5%葡萄糖注射液、白蛋白50mg/kg,脐带血干细胞悬液16,64ul/kg,体积为1ml,观察豚鼠在静脉注射后30min内有无表12中的躁动、搔鼻、竖毛、呼吸困难、痉挛、甚至死亡等过敏反应症状。
表12过敏反应症状
2.4被动皮肤过敏实验
2.4.1大鼠含IgE的抗血清制备取4只健康雄性SD大鼠,按注射剂大鼠同种被动皮肤过敏试验的要求,分别腹腔注射5%葡萄糖注射液、牛血清白蛋白25mg/kg,脐带血干细胞悬液4,16ul/kg,同时腹腔注射白百破三联疫苗1ml/只,隔日1次、共3次。11d后眼眶取血,分离血清,-20℃保存,备用。
2.4.2大鼠同种被动皮肤过敏反应实验开始前,动物预先饲养1周以观察其活动表现,动物室温度22~24℃,湿度40%~60%,取16只健康雄性SD大鼠,随机分为5%葡萄糖组、阳性组(牛血清白蛋白组)、脐带血干细胞悬液大剂量组和小剂量组。分别在各组大鼠背中线两侧距脊柱约1.5cm处备皮,4cm×4cm。
取上述含IgE的抗血清,用5%葡萄糖注射液按1∶2,1∶4,1∶8,1∶16比例分别稀释成4个稀释度,将稀释的抗血清按逆时针方向(左上-左下-右下-右上)皮内注射于大鼠背部预先备皮部位,每一稀释度注射一个点,每点注射0.1ml。致敏24h后,各组静脉注射与致敏剂量相同的激发抗原加等量的0.8%伊文思兰染料共1ml,进行激发。30min后处死各组大鼠,测量皮肤内层的蓝色反应斑直径,直径大于5mm者判定为阳性。不规则斑点的直径为长径与短径之和。
3结果
3.1血管刺激性实验:给药组3只家兔耳缘静脉注射部位均未见红肿、充血等刺激现象。光镜病理组织学检查:脐带血干细胞悬液给药组和5%葡萄糖对照组家兔耳缘静脉注射部位血管结构完整,血管内皮细胞无肿胀、变性、坏死,管壁无炎细胞浸润,管腔内无血栓形成。
3.2溶血性实验:在0.25~3h及24h内除第7管(阳性对照管)溶液呈现澄明红色,其余6管均末见澄明红色,且红细胞全部下沉,上层液体无色澄明,经振摇后红细胞能均匀分散。表明脐带血干细胞悬液无溶血及无凝集作用。
3.3全身主动过敏实验:5%葡萄糖注射液组、脐带血干细胞悬液大、小剂量组在静脉给药30min后,豚鼠活动正常,未出现1~20级反应症状,判定为过敏反应阴性。而阳性药组豚鼠出现痉挛、抽搐、休克死亡,判定为过敏反应极强阳性。
3.4被动皮肤过敏实验:脐带血干细胞悬液大、小剂量组、5%葡萄糖注射液组大鼠背部皮肤均未见蓝色反应斑点。阳性组注射部位皮肤均不同程度的出现蓝色斑点反应,其中1∶16处有3例出现蓝斑,1∶8处有4例出现蓝斑,1∶4与1∶2处6例均出现蓝斑,蓝斑直径均大于5mm,判定为阳性反应。结果表明:脐带血干细胞悬液无同种被动皮肤致敏作用。
4结论
本实验采用的方法简便、准确、可靠,4项指标检测脐带血干细胞悬液均未出现阳性结果,说明脐带血干细胞悬液对血管无刺激性,无溶血作用,全身主动过敏反应阴性,无同种被动皮肤致敏作用。表明脐带血干细胞悬液安全性好,可供临床应用。
实施例6
效果实施例,治疗模式动物的效果
说明:由于抗逆转录病毒药物及中医药在治疗艾滋病方面已有确切有效证明,因此该实施例主要对脐带血干细胞的有效性加以证明。
脐带血干细胞治疗猴诱发性免疫缺陷的实验研究
实验目的:
观察脐带血干细胞移植对猴诱发性免疫缺陷动物模型的影响。
实验材料:
1、药品:脐带血干细胞悬液,其中干细胞的含量为3×107个/ml,戊巴比妥钠,生理盐水。
2、器材:动物实验台,手术器械,血细胞分析仪。
3、动物:健康成年恒河猴30只。
1)实验组:成年恒河猴10只(建模,予脐带血干细胞注射)。
2)模型对照组:成年恒河猴10只(建模,予生理盐水注射)。
实验方法:
1、实验动物麻醉:所有试验用恒河猴称重,腹腔注射戊巴比妥钠40mg/kg麻醉。
2、建模:建立诱发性免疫缺陷动物模型,具体操作方式如下:选取健康成年恒河猴30只,经体检及血清检查无SIV,SRV和STLV-1感染。将麻醉后实验动物固定,静脉注射毒株SIVmac251,以3个100%猴感染剂量感染动物。相同环境下正常喂养,给予标准光照,全价颗粒饲料喂养,自由摄食,室温20℃~25℃,相对湿度45%~55%。如上喂养2周,观察实验动物临床表现,静脉取血,检测实验动物是否感染SIV。
评价:实验动物注射毒株后2周,感染初期有26只动物出现明显的病毒血症表现,如发热、皮疹、腹泻和外周浅表淋巴结肿大等。8只感染猴因缺乏有效的免疫应答于数日内死亡。余实验动物分离全血全清,20只实验动物显示SIV病毒阳性。
3、分组:选取以上建模成功的20只恒河猴,随机分为实验组(10只)和模型对照组(10只)。
4、干细胞悬液注射:
建模完成后,分别将实验组的10只恒河猴自静脉注射脐带血干细胞悬液0.5ml/100g。模型对照组的10只恒河猴注射生理盐水0.5ml/100g。
观察方法:以上大鼠在相同环境下正常饲养1-2周,观察实验动物临床表现,再次检测血清SIV病毒及淋巴细胞计数。
实验结果:
一、实验动物临床表现
1、模型对照组:发热减退,全部感染猴浅表淋巴结持续肿大,8只感染猴腹泻减轻,2只继续加重,间歇性或偶发性,继而死亡。全部对照组恒河猴均出现体重减轻,睡眠减少,精神淡漠。
2、实验组:该组恒河猴发热症状明显减退,80%实验猴无淋巴结肿大,腹泻次数逐渐减少,直至正常,体重逐渐恢复,精神状态良好,睡眠正常。
二、血清SIV病毒检测
1、模型对照组:该组感染猴的SIV病毒全部为阳性。
2、实验组:该组感染猴的SIV病毒全部为阳性。
三、淋巴细胞计数
1、模型对照组:对该组剩余8只恒河猴进行检测,淋巴细胞总量均持续下降,较建模前下降约65%。
2、实验组:该组10只恒河猴的淋巴细胞数均有不同程度的升高,升高幅度为14%-59%不等。
结论:
猴免疫缺陷病毒(SIV)与HIV的生物学特性及形态学特征相似,对T细胞均有特殊嗜性,该病毒会引起宿主出现与人类艾滋病相似的免疫缺陷病。我们虽不能掌握这些病毒精确的基因组成,但通过临床动物实验及生物学检测可以发现,脐带血干细胞对以上病毒引起的临床症状有较好的抑制作用。
艾滋病是人类因为感染人类免疫缺陷病毒后导致免疫缺陷,并发一系列机会性感染及肿瘤,严重者可导致死亡的综合征。与猴免疫缺陷病毒的表现极其相似。免疫病理主要表现为CD4 +T淋巴细胞数量减少及功能障碍,异常免疫激活及免疫重建。而干细胞具有细胞替代作用,干细胞植入体内后,能自动识别并移行至细胞损伤部位,然后分裂增殖成新的细胞,替代坏死的免疫细胞行使其功能。艾滋病是累及全身多器官系统的疾病,如皮肤粘膜、淋巴结、眼部、呼吸系统、消化系统、神经系统、泌尿系统等。干细胞可移行至上述病变部位,定向分化为所需的功能细胞,继而替代失去功能的病变细胞。
另外,由于干细胞具有增殖和定向分化的能力,当干细胞被趋化至器官损伤局部后,其中部分细胞分泌大量小分子物质,趋化受体干细胞,可促进细胞增殖并定向分化,完成各器官功能的修复。而且干细胞能释放多种生物活性物质,如可以释放膜微粒,趋化并调节周围细胞的功能活性,唤醒处于休眠期的组织细胞,促进其发挥其生物学特性;另由于其具有的免疫调节作用,可增强人体的免疫机能和修复受损的免疫系统,降低机体炎症反应,从而预防各种免疫因素及感染所致的相关疾病。
该实验表明脐带血干细胞移植对艾滋病的相关症状具有显著的治疗效果。
实施例7-10用于治疗人类患者的过程及获得效果
实施例7
在实施7方案中,所述疾病、障碍或病状是艾滋病晚期,患者为38岁女性,对多种抗病毒药耐药,轻度意识障碍,体重25公斤,四肢消瘦,卧床不起,大小便失禁,进食少,精神状态差,生活不能自理。化验艾滋病相关指标:最严重时CD4+T淋巴细胞8个/ul,病毒载量380000cp/ml。
经静脉注射移植脐带血干细胞悬液的稀释液1次,用量为:55ml的干细胞浓度为6.0×105个/ml干细胞悬液,同时口服中药汤剂治疗,第二天,患者可以起床,想喝粥和甜食和自己洗澡,体力和精力快速恢复,同时口服清热解毒中药及抗艾滋病病毒药,包括克力芝、拉替拉韦、达芦那韦,随后病情越来越好,复查CD4由38个逐渐上升到129个--221--355个/ul,最近一次查CD4已经快速恢复到513个/ul,病情从危重状态到恢复基本健康,整个病程仅15个月,可见干细胞在恢复神经系统和免疫系统方面的作用很大。
实施例8
在实施8方案中,所述疾病、障碍或病状是艾滋病无症状期,患者为54岁男性,于2年前查出艾滋病病毒感染,但无明显急性症状,查CD4+T淋巴细胞为486个/ul,静脉注射脐带血干细胞悬液的稀释液一次,用量为55ml的干细胞浓度为5.8×105个/ml干细胞悬液,同时坚持口服扶正祛邪组方中药汤剂,治疗一个月后复查为615个/ul,患者食欲良好,精神状态较好,睡眠佳。
实施例9
实施方案9为感染HIV的艾滋病期,患者为61岁女性,记忆力减退明显,体重持续降低,并伴有全身淋巴结肿大,食欲不佳,精神状态差。查CD4+T淋巴细胞为196个/ul,经口服抗逆转录病毒药物齐多夫定+拉米夫定+依非韦伦及中药汤剂,并配合静脉滴注脐带血干细胞悬液的稀释液一次,用量为65ml的干细胞浓度为6.3×105个/ml干细胞悬液,1个月后复查CD4+T淋巴细胞为257个/ul。患者睡眠状况得到改善,精神良好,食欲好,体力较前增加明显。以上实施例证明该综合疗法在艾滋病的治疗上具有明显疗效。
Claims (5)
1.一种人干细胞组合物在制备用于治疗艾滋病的药物中的用途,其特征在于:
所述的人干细胞选自人类骨髓、脐带血或外周血干细胞;
所述的干细胞组合物为按照本申请人的申请号为201210017987.9、名称为“一种人类骨髓、脐带血或外周血干细胞样本密度分离液及干细胞分离方法”中的干细胞分离方法步骤(3)得到的“存在于整个离心管中间位置的约(2-4)mm厚的油状干细胞层”;
每份干细胞组合物经(10-80)ml生理盐水清洗及定容后,得到含有的人干细胞的数量为(1~8)×108个的干细胞悬液;
每份所述的干细胞悬液在使用前再用100ml的生理盐水进一步稀释,得到干细胞悬液中的个数密度为(0.125~8)×107个/ml、总容量为110-180ml的干细胞悬液的稀释液。
2.根据权利要求1所述的在制备用于治疗艾滋病的药物中的用途,其特征在于,所述的用途采用以下方法实现:
所述的干细胞悬液的稀释液通过体表浅静脉进行静脉点滴法注射到人体。
3.根据权利要求2所述的在制备用于治疗艾滋病的药物中的用途,其特征在于,所述的静脉输入法的步骤为:
(1)先用0.9%的氯化钠溶液20-30ml冲管;
(2)接着开始静脉点滴注射输入干细胞悬液的稀释液,保持20-30滴/分钟,半小时后无不良反应可增加到30-50滴/分钟,细胞输入过程中每15分钟轻轻晃动装有所述干细胞悬液的稀释液的细胞保存袋一次;
(3)细胞输入完毕后用0.9%的氯化钠溶液20ml冲入细胞保存袋中轻轻晃动,输入完毕后再用0.9%的氯化钠溶液将输液器中细胞冲净,得到的冲洗液也同样注入患者体内,以保证细胞输入数量;
静滴时将细胞液摇匀,避免细胞贴壁。
4.根据权利要求1~3的人干细胞组合物在制备用于治疗艾滋病的药物中的用途,其特征在于:
所述的人干细胞为脐带血干细胞。
5.根据权利要求4所述的人干细胞组合物在制备用于治疗艾滋病的药物中的用途,其特征在于,所述的用途结合包括以下两种药物的配合实现:
1)、抗逆转录病毒药物治疗
所述的抗逆转录病毒药物包括以下药物的至少一种:核苷类反转录酶抑制剂、非核苷类反转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、整合酶抑制剂、融合酶抑制剂及CCR5抑制剂、立妥威DDI,拉米夫定3TC,齐多夫定AZT,赛瑞特D4T,替诺福韦酯TDF,维乐命NVP,依非韦伦EFV,克立芝,达鲁那韦,拉替拉伟;
2)、中医中药治疗
所述的中药基础组方如下:
黄芪10-15克 党参6-15克 白术6-12克 茯苓6-18克
甘草6-10克 黄连3-6克 紫花地丁10-15克 蒲公英10-15克
银花15-20克 板蓝根20克 白花蛇舌草20-25克 虎杖9-15克
七叶一枝花10-15克 淫羊藿20-25克。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310549262.9A CN103585178A (zh) | 2013-11-07 | 2013-11-07 | 一种人干细胞组合物在制备用于治疗艾滋病的药物中的用途 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310549262.9A CN103585178A (zh) | 2013-11-07 | 2013-11-07 | 一种人干细胞组合物在制备用于治疗艾滋病的药物中的用途 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103585178A true CN103585178A (zh) | 2014-02-19 |
Family
ID=50075632
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201310549262.9A Pending CN103585178A (zh) | 2013-11-07 | 2013-11-07 | 一种人干细胞组合物在制备用于治疗艾滋病的药物中的用途 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN103585178A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109576335A (zh) * | 2018-12-10 | 2019-04-05 | 天津长和生物技术有限公司 | 间充质干细胞制剂溶血性的评价方法和应用 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1872997A (zh) * | 2005-06-01 | 2006-12-06 | 上海二医新生基因科技有限公司 | 人异体间质干细胞(携带治疗基因)的大规模培养新工艺 |
CN1948475A (zh) * | 2004-10-13 | 2007-04-18 | 厦门大学 | 可用于治疗艾滋病的重组表达载体、经改造的造血干细胞和方法 |
CN101760446A (zh) * | 2009-12-31 | 2010-06-30 | 浙江中赢控股集团有限公司 | 制备单核细胞型干细胞的方法及应用 |
CN102604892A (zh) * | 2011-01-21 | 2012-07-25 | 唐明淇 | 一种人类骨髓、脐带血或外周血干细胞样本密度分离液及干细胞分离方法 |
CN102719397A (zh) * | 2012-07-16 | 2012-10-10 | 天津和泽干细胞科技有限公司 | 间充质干细胞及其在抗hiv-1中的应用 |
-
2013
- 2013-11-07 CN CN201310549262.9A patent/CN103585178A/zh active Pending
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1948475A (zh) * | 2004-10-13 | 2007-04-18 | 厦门大学 | 可用于治疗艾滋病的重组表达载体、经改造的造血干细胞和方法 |
CN1872997A (zh) * | 2005-06-01 | 2006-12-06 | 上海二医新生基因科技有限公司 | 人异体间质干细胞(携带治疗基因)的大规模培养新工艺 |
CN101760446A (zh) * | 2009-12-31 | 2010-06-30 | 浙江中赢控股集团有限公司 | 制备单核细胞型干细胞的方法及应用 |
CN102604892A (zh) * | 2011-01-21 | 2012-07-25 | 唐明淇 | 一种人类骨髓、脐带血或外周血干细胞样本密度分离液及干细胞分离方法 |
CN102719397A (zh) * | 2012-07-16 | 2012-10-10 | 天津和泽干细胞科技有限公司 | 间充质干细胞及其在抗hiv-1中的应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
金磊等: "脐带间充质干细胞治疗HIV感染的安全性评价", 《传染病信息》, vol. 23, no. 06, 30 December 2010 (2010-12-30), pages 363 - 365 * |
龚梁等: "应用脐血造血干细胞治疗艾滋病的研究进展", 《国外医学.流行病学.传染病学分册》, vol. 32, no. 02, 25 April 2005 (2005-04-25) * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109576335A (zh) * | 2018-12-10 | 2019-04-05 | 天津长和生物技术有限公司 | 间充质干细胞制剂溶血性的评价方法和应用 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104958319A (zh) | 具有卵巢早衰及围绝经期综合征治疗作用的间充质干细胞及其细胞因子制剂及其制备方法 | |
JP2008534529A (ja) | 自家造血幹細胞の調製物、その製造方法、低温保存方法、および中枢神経系の外傷性疾患の治療のための使用 | |
CN103781486A (zh) | 多能干细胞和刺激并从哺乳动物血液提取非胚胎多能干细胞和使用复原多能干细胞治疗包括慢性阻塞性肺病的疾病的方法 | |
CN100360178C (zh) | 一种抗衰老的药物 | |
Utz et al. | Coxsackie B virus infection: Presence of virus in blood, urine, and cerebrospinal fluid | |
CN109045282A (zh) | 一种采用脐血干细胞输注联合自体外周血干细胞延缓卵巢早衰和治疗骨质疏松的方法 | |
CN101313953B (zh) | 治疗特发性血小板减少性紫癜的药物组合物及其制备方法 | |
CN100381165C (zh) | 一种改善睡眠的药物 | |
CN103585178A (zh) | 一种人干细胞组合物在制备用于治疗艾滋病的药物中的用途 | |
Casale et al. | Cytokine-induced sequential migration of neutrophils through endothelium and epithelium | |
CN100381164C (zh) | 一种治疗化疗、放疗、放射病的药物 | |
CN105362736A (zh) | 一种治疗鸡球虫病的药物及其制备方法 | |
CN102274234A (zh) | 灵芝酸y在制备治疗或预防肠道病毒71型感染药物中的应用 | |
Black | Cutaneous Schistosomiasis | |
CN103655615A (zh) | 一种人干细胞组合物在制备用于治疗卵巢早衰或子宫疾病的药物中的用途 | |
Gupta et al. | Serum Sickness-Like Reaction Associated With Acute Hepatitis B in a Previously Vaccinated Adult Male | |
CN105381024A (zh) | 一种用于治疗鸡球虫病的药物组合物及其制备方法 | |
CN103099841B (zh) | 一种治疗肝炎的中药组合物 | |
Chaudhury | A Clinical Protocol for the Study of Traditional Medicine and Human Immunodeficiency Virus–Related Illness | |
CN100406058C (zh) | 一种胎盘因子及其制备方法与应用 | |
CN103599129A (zh) | 一种人干细胞组合物在制备用于治疗阿尔茨海默症的药物中的用途 | |
CN102614467A (zh) | 用于治疗艾滋病的中药组合物、其制备方法及应用 | |
PHILLIPS | Hypoglycemia associated with hypertrophy of islands of Langerhans | |
CN106924329A (zh) | 一种艾迪制剂在制备治疗恶性滋养细胞肿瘤药物中的应用 | |
Wang et al. | Treatment of AECHB and Severe Hepatitis (Liver Failure) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20140219 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |