CN103585118A - 一种重组猪干扰素α1产品的冻干方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种重组猪干扰素α1（RecombinantPorcineInterferonα1，rPoIFNα1）产品的冻干方法，包括rPoIFNα1原液预冻、重结晶、一次干燥、二次干燥和升华等工艺组成。采用本发明工艺，rPoIFNα1产品一次性冻干外观合格率达到99.9%以上，尤其适用于rPoIFNα1产品规模化生产时使用。
Description
技术领域
本发明属于治疗性兽用生物制品生产工艺技术领域，具体涉及一种重组猪干扰素α1（Recombinant Porcine Interferon α1，rPoIFNα1）产品的冻干工艺。背景技术
真空冷冻干燥(简称“冻干”)是指将含水物质预先冻结成固态，然后在真空状态下使其中的水从固态升华成气态，以除去水分而保存物质的方法。冻干后的固体物质呈多孔结构，保持冻结时的体积，加水极易溶解复原。冻干过程是在低温真空条件下进行.因此对于许多热敏性、易氧化的物质特别适用。冻干能除去95％-99％的水分，使干燥后的产品能长期保存。
干扰素是一种广谱抗病毒，可通过与细胞表面受体作用使细胞产生抗病毒蛋白，从而抑制病毒的复制；同时还可增强自然杀伤细胞（NK细胞）、巨噬细胞和T淋巴细胞的活力，从而起到免疫调节作用，并增强抗病毒能力。该制品应用于畜牧兽医生产实践中存在液体剂型热稳定性差、不易长期保存等问题。较理想的解决办法是进行制品的冻干保存，这样不仅可以延长保存期，而且有利于运输。
发明内容
本发明的目的正是为了解决现有技术存在上述不足而提供的一种重组猪干扰素α1产品的冻干工艺。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种重组猪干扰素α1产品的冻干方法，包括以下步骤：
（1）预冻：在-45～-30℃的条件下进行，将rPoIFNα1原液冷冻2h；
（2)冻结间隙：降温到-10～-15℃左右时，观察到rPoIFNα1原液已经有冻结出现，这时开启冷阱降温进入冻结间隙，冷阱降温35～45min，至温度为-18～-13℃时，再次开启冷冻装置进行冻干25～35min；
（3）重结晶：再次开启冷阱降温25～35min；
（4）将上述步骤反复操作2～3次；
（5）完全结晶后，再次开启冷冻程序冻干1～2h，降低干燥箱内的空气温度降为-15～-30℃，开启冷阱降温和抽真空，进行一次干燥；
（6）一次干燥：固体表面有0.1cm干燥或者观察到有白色干燥物时，开启隔板加热，设置隔板温度为-18～-20℃，温度显示器显示温度范围为-18～-20℃，维持18～20min；
（7）二次干燥：调节隔板温度为-13～-15℃，维持50～60min，干燥到0.2～0.4cm，调节温度为-8～-10℃，当温控显示范围为-8～-10℃，维持3.8～4h，干燥至1.6～1.9cm时将隔板温度设定为0℃，直至干燥面到达瓶底，维持25～35min；
（8）升华：将隔板温度设定为+5℃，维持2h，将隔板温度控制设定为+20℃，直至隔板温度达到+20℃，开始观察真空度的显示，真空度为3Pa时，维持50～60min，冻干结束，得到rPoIFNα1冻干产品。
本发明的优点是：
采用本发明工艺，rPoIFNα1产品一次性冻干外观合格率达到99.9%以上，尤其适用于rPoIFNα1产品规模化生产时使用。
附图说明
图1rPoIFNα1冻干成品外观图。
具体实施方式
实施例1
1.rPoIFNα1原液冻干
（1）在-45～-30℃的条件下进行预冻rPoIFNα1原液2h。
（2)降温到-10～-15℃左右时，观察到rPoIFNα1原液已经有冻结出现，这时开启冷阱降温进行冻结间隙。
（3）使冻干箱内的温度维持稳定一段时间，冷阱降温40min左右。
（4）冷阱大概降温至-18～-13℃时，再次开启冷冻装置进行冻干大约30min。
（5）再次开启冷阱降温30min左右。
（6）反复两次，以使冷冻效果更好。
（7）再次开启冷冻程序冻干1.5h，这时干燥箱内的空气温度降至-15～-30℃，开启冷阱降温和抽真空，进行一次干燥。
（8）固体表面有0.1cm干燥或者观察到有白色干燥物时，开启隔板加热，设置隔板温度为-20℃。
（9）温度显示器显示温度为-20℃，维持20min。
（10）调节隔板温度为-15℃，维持1h左右，干燥到0.3cm左右，调节温度为-10℃。
（11）当温控显示-10℃维持4h左右，干燥大约1.8cm时将隔板温度设定为0℃，直至干燥面到达瓶底，维持30min。
（12）将隔板温度设定为+5℃，维持2h。
（13）将隔板温度控制设定为+20℃，直至隔板温度达到+20℃，开始观察真空度的显示。
（14）真空度为3Pa时。
（15）维持1h，冻干结束。
（16）使用压盖装置内部压盖。
（17）放掉真空，取出rPoIFNα1冻干成品。
2.rPoIFNα1冻干成品检测
随机抽取不同批次rPoIFNα1冻干品分别按照以下方案检测，结果表明采用本冻干工艺冻干后的rPoIFNα1成品外观合格率达到99.9%以上，含水量1.47%，无菌检验、安全性实验均合格，效价达到1.1×106IU/ml，蛋白含量为1mg/ml，比活性为1.1×106IU/mg，蛋白纯度检测≥95%（如表1所示）。
真空度检测：采用真空度测试仪检测。
含水量检测：是利用费休氏法测定，低于3%判为合格。
外观检测：观察rPoIFNα1冻干品是否有塌缩、凹陷、缺损等现象，如无则判为合格。
无菌检验：按《中国生物制品规程》通则《生物制品无菌试验规程》A项进行。
安全性实验：用体重18～20g小白鼠5只，每只腹腔注射0.5ml（rPoIFNα1冻干品溶于2ml生理盐水），观察7天，动物应健存，每只体重增加判为合格。
效价检测：采用WISH细胞VSV检测系统，以微量细胞病变抑制法测定样品的效价。
蛋白含量检测：Lowry法。
比活性：效价与蛋白质含量之比。
纯度检测：SDS-PAGE电泳检测。
表1rPoIFNα1冻干成品检测
Claims (1)
1.一种重组猪干扰素α1产品的冻干方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）预冻：在-45~ -30℃的条件下进行，将rPoIFNα1原液冷冻2h；
（2) 冻结间隙：降温到-10~ -15℃左右时，观察到rPoIFNα1原液已经有冻结出现，这时开启冷阱降温进入冻结间隙，冷阱降温35~45min，至温度为-18- -13℃时，再次开启冷冻装置进行冻干25~35min；
（3）重结晶：再次开启冷阱降温25~35min；
（4）将上述步骤反复操作2-3次；
（5）完全结晶后，再次开启冷冻程序冻干1-2h，降低干燥箱内的空气温度降为-15~ -30℃，开启冷阱降温和抽真空，进行一次干燥；
（6）一次干燥：固体表面有0.1cm干燥或者观察到有白色干燥物时，开启隔板加热，设置隔板温度为-18~ -20℃，温度显示器显示温度范围为-18- -20℃，维持18~20min；
（7）二次干燥：调节隔板温度为-13~ -15℃，维持50~60min，干燥到0.2~0.4cm，调节温度为-8~ -10℃，当温控显示范围为-8~ -10℃，维持3.8~4h，干燥至1.6~1.9cm时将隔板温度设定为0℃，直至干燥面到达瓶底，维持25~35min；
（8）升华：将隔板温度设定为+5℃，维持2h，将隔板温度控制设定为+20℃，直至隔板温度达到+20℃，开始观察真空度的显示，真空度为3Pa时，维持50~60min，冻干结束，得到rPoIFNα1冻干产品。
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